Dr. Sanda M.

Creoiu Curs biologie celular

ORGANITE CELULARE DELIMITATE DE MEMBRANE Organitele celulare sunt structuri permanente, cu durat de via mai mic dect a celulei i care se rennoiesc permanent. O parte din organite sunt observabile la microscopul optic i pot fi numite structurale. Ele au dimensiuni de ordinal micrometrilor: mitocondria, aparatul Golgi, centrul celular, ergastoplasma. Alte organite pot fi observate numai la microscopul electronic, avnd dimensiuni de ordinul nanometrilor i sunt numite ultrastructurale: reticulul endoplasmic neted i rugos, lizozomii, peroxizomii, ribozomii, microtubulii, microfilamentele. Organitele celulare se pot clasifica n organite delimitate de membrane i organite nedelimitate de membrane. Delimitate de membrane Reticulul endoplasmic Complexul Golgi Lizozomii Peroxizomii Mitocondria Vacuole Nucleul Nedelimitate de membrane Ribozomii Citoscheletul Centrozomul Flagelul Cilii Incluziunile Proteazomii

Reticulul endoplasmatic Este un organit delimitat de endomembrane, organizat sub forma unei reele de cisterne i/sau tubuli, care pot prezenta sau nu pe suprafaa citoplasmatic ribozomi ataai. Se clasific n 2 categorii: neted (fr rugoziti) i rugos (cu ribozomi ataai). Reticulul endoplasmatic (RE) este implicat n biogeneza i traficul intracelular al membranelor alturi de complexul Golgi, lizozomi i sistemul endozomal, fiind organitul care iniiaz aceste procese celulare. Prezena acestui organit n celule a fost pus n eviden de Porter, n 1948, cnd a observat o structur nou pe culturile celulare de embrion de pui, pe care a denumit-o reticulul endoplasmatic (n latin 1

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

reticulum nseamna reea, iar pentru faptul c aceasta este localizat preferenial n profunzimea citoplasmei a primit denumirea de endoplasmatic). Detaliile ultrastructurale au fost ns obinute n urma examinrii preparatelor de microscopie electronic i confirmate prin microscopie de scanning pe seciuni seriate realizate prin tehnica nghearefracturare-sublimare. n urma acestor examinri s-a observat c organitul este structurat sub form de tubuli sau cisterne delimitate de endomembrane, cu numeroase anastomoze, care formeaz un lumen cu diametru de 30-60 nm (pot exista variaii ale diametrului n funcie de starea de activitate a organitului). Lumenul RE este continuu ntre cisterne i tubuli, realiznd anastomoze i cu lumenul anvelopei nucleare. Zonele organizate sub form de cisterne prezint, de regul, ribozomi ataai pe membrana citoplasmatic a organitului i formeaz reticulul endoplasmic rugos - RER (membrana nuclear extern prezint de asemenea ribozomi ataai), iar zonele structurate sub form de tubuli, ce continu cisternele RER au fost denumite reticulul endoplasmic neted - REN. Trebuie s precizm c RER i REN nu sunt dou organite distincte, ci sunt regiuni organizate ultrastructural diferit ale aceluiai organit. Raportul dintre cele dou forme de RE difer n funcie de tipul celular i de starea de activitate a celulei. Prin omogenizare i centrifugare diferenial RE, aparatul Golgi i membrana celular se fragmenteaz n vezicule membranare formnd fracia microzomal. n urma proceselor de centrifugare diferenial se pot obine separat microzomii rugoi i netezi, care ulterior pot fi separai prin centrifugare n gradient de densitate. Cele doua tipuri de RE ndeplinesc n celul funcii diferite, astfel RER: sinteza de proteine, prelucrarea, sortarea i transportul lor spre aparatul Golgi; iar REN: metabolizarea lipidelor, stocarea ionilor de calciu, detoxifierea celular. Reticulul endoplasmic rugos Biosinteza proteinelor la nivelul RER implic formarea proteinelor membranare, a celor rezidente n RE, complexul Golgi sau lizozomi, precum i proteine destinate exportului. Acest proces ncepe n citoplasm la nivelul ribozomilor liberi, transferul lanului polipepetidic n RE fiind iniiat de prezena unei secvene semnal. Peptidul semnal este localizat la captul N-terminal i conine mai muli aminoacizi cu sarcin pozitiv, urmai de o regiune cu resturi hidrofobe. n interaciunea dintre polipeptid i membrana RE intervin doua componente: particula de recunoatere a semnalului (signal recognition particle - SRP) i receptorul corespunztor. SRP este o particul citoplasmatic ce structureaz situsuri de legare pentru peptidul semnal din lanul proteic n curs de sintetizare i un domeniu pentru situl A ribozomal. n urma interaciunii cu molecula semnal i ribozom, SRP expune un al treilea sit de legare la receptorul specific de pe membrana RE. Totodat, SRP blocheaz sinteza proteinei n absena membranelor RER. Complexul astfel format transfer sistemul de sintez ribozom i lan n formare unui alt ansamblu proteic, ce poart denumirea de translocon. Transloconul este astfel structurat nct delimiteaz un canal hidrofil prin care are loc elongaia polipeptidului direct de pe ribozom n lumenul RE. n momentul prelurii ribozomului de ctre translocon are loc i disocierea SRP de receptor, elibernd astfel situl A ribozomal i permind astfel reluarea sintezei proteice. Proteinele destinate exportului, proteinele necesare funciei RE, aparatului Golgi i lizozomului conin o secven semnal ctre captul carboxi-terminal, ce este recunoscut de o hidrolaz (peptidhidrolaz) i astfel lanul proteic este eliberat n lumenul RE. 2

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

Lumenul reticulului endoplasmic conine urmtorii compui unici i caracteristici: a) Disulfid izomeraza bogat reprezentat n RE al celulelor care sintetizeaz proteine bogate n puni disulfurice. Aceast proteina supravegheaz formarea corect a punilor disulfurice. b) Calciu - concentraia de calciu este de 5 mmol n lumenul RE acesta fiind necesar pentru diferite procese metabolice c) Chaperoni molecule care au rolul de a suraveghea plierea corect a proteinelor. Acetia sunt membrii ai familiilor hsp70 i hsp90, Grp-94 i peptidilprolil izomeraze. d) Calnexina proteina integral transmembranar din membrana RE care prezint un domeniu catalitic spre lumenul RE. Acest domeniu are rolul de lega proteinele incorect pliate i de a le reine n lumenul RE. Este numita i molecula CTC. e) Calreticulina identificat iniial n lumenul RS din celulele musculare este o protein ubiquitara a lumenului RE. Are mare afinitate pentru calciu, dar are si rolul de a lega proteine la captul carboxil, proteine ce urmeaz a fi rezidente n RE. In plus moduleaz legarea receptorilor steroizi la situsul de pe ADN. Odat eliberat n lumen, lanul polipeptidic continu s fie prelucrat, acest proces implicnd modificri co- i posttraducere. nainte de a fi livrate ctre destinaiile finale proteinele sufer o serie de transformri: formarea de legturi disulfidice, pliere, clivajul proteolitic, asamblarea n proteine multimerice, toate aceste procese asigurnd adoptarea unei conformaii corespunztoare funciei noului lan polipeptidic. n timpul procesului de sintez proteinele pot suferi mutaii, ce mpiedic plierea corect i astfel blocheaz transportul ctre aparatul Golgi. Proteinele mpachetate greit formeaz legturi ireversibile cu nite proteine speciale cu rol n asistarea procesului de sintez, ce poart denumirea de chaperone. Complexul astfel format este transferat n citosol, prin retrotranslocon, unde primete o etichet poliubiquitina i intr n proces de degradare proteolitic la nivelul proteazomului. Reticulul endoplasmic neted REN este implicat ntr-o varietate de funcii speciale n celul: metabolizarea lipidelor, detoxifierea celular, depozit dinamic de ioni de calciu. Hormonii steroizi, de exemplu steroizii sexuali la vertebrate i steroizii secretai de glandele adrenale sunt produi de celule care secret aceste substane i sunt bogate n REN i mitocondrii. Celulele din ficat sunt i ele bogate n RE neted. Aceste celule depoziteaz carbohidraii sub forma glicogenului. Hidroliza glicogenului produce fosfatul glucozei, o form ionic de zahar care nu poate iei din celul. O enzim glucozo-6-fosfataza din REN al acestor celule ndeprteaz fosfatul i transform glucozo-6 fosfatul n glucoz, astfel nct glucoza poate iei din celul. Astfel, ea ptrunde n circuitul sanguin prin care poate ajunge oriunde este nevoie. Procesele de detoxifiere celular se realizeaz preponderent la nivelul hepatocitelor i implic eliminarea din celul a diverilor compui (fiziologici, patologici sau farmacologici), ce ar putea afecta fluiditatea bistratului lipidic. Acest rol poate fi sugerat de prezena unei cantiti considerabile de REN, ce apare la scurt timp dup administrarea de barbiturice, n hepatocitele pacienilor crora li s-a prescris acest tip de medicamente. Hiperplazia indus acest tip de medicaie este reversibil, cantitatea de REN, revenind la normal dup ncetarea agresiunii. Fenomenul este uor de evideniat, deoarece la nivelul celulelor hepatice cantitatea de RER i REN este aproximativ egal.

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

Enzimele din REN ajut la detoxifierea drogurilor i otrvurilor prin adugarea unei grupri de hidroxil la substane, astfel nct ele devin mai solubile i mai uor de eliminat din corp. Reticulul sarcoplasmic n celulele musculare, veziculele i tubulii REN sunt cunoscute sub denumirea de reticulul sarcoplasmic. Acesta este adaptat pentru depozitarea i eliberarea ionilor de calciu. Procesul este realizat de pompele de calciu i necesit energie furnizat de ATP (adenozintrifosfat). Pompele de calciu sunt proteine membranare adaptate pentru transportul activ al ionilor de calciu n mediul extraceleular (interiorul reticulului sarcoplasmic este de asemenea mediu extracelular). n fibra muscular striat scheletic pompele de calciu sunt reglate de calmodulin, iar n cele miocardice de fosfolamban. Calciul este necesar pentru contracia fibrei, fiind eliberat din reticulul sarcoplasmic n momentul n care fibra respectiv este excitat, prin deschiderea canalelor de calciu dependente de voltaj. n perioadele dintre contracii, pompele l concentreaz n lumenul reticulului sarcoplasmic. Un rol important n realizarea acestei funcii l are calsechestrina, protein cu mare afinitate pentru ionii de calciu i care se gsete n cantitate crescut n lumenul REN. Aparatul Golgi Aparatul Golgi a fost printre primele organite descrise la microscopul optic datorita dimensiunilor sale relativ mari fa de restul organitelor. Aceast descriere aparine lui Camillo Golgi, n 1898, i a fost fcut n celulele nervoase studiate prin impregnare argentic. El a observat o reea n jurul nucleului, care a primit inial denumirea de aparat reticular intern. Pe preparatele de microscopie optic, n celulele care secret i exociteaz proteine, dar i n cele care sintetizeaz fosfolipide i proteine membranare, aparatul Golgi apare ca o zon clar perinuclear. Utilizarea microscopului electronic a permis descrierea cu acuratee a organitului. Complexul Golgi este un organit delimitat de endomembrane, ce se prezint sub forma unei stive de 3-7 cisterne curbate, localizat n general perinuclear. Numrul complexelor Golgi difer de la o celul la alta, putnd ajunge pn la 50 n hepatocite. Fiecare stiv are dou fee: o fa cis (de intrare) i o fa trans (de ieire). Astfel, complexul Golgi este un organit cu polaritate att morfologic, ct i biochimic, cruia i se descriu o fa cis, convex, o fa trans sau concav, o reea de microvezicule pe faa cis (ce realizeaz comunicarea cu RER) i o reea de macrovezicule pe faa trans (vezicule ce se desprind spre destinaiile finale). Faa cis este orientat spre RE i nucleu i mai poart denumirea de fa imatur, iar cea trans ctre membrana plasmatic i se mai numete fa matur. La nivelul acestor cisterne exist o distribuie specific a echipamentului enzimatic: reeaua i cisternele cis au capacitatea de a reduce ioni metalici, cisternele mediene au activitate manozidazic, cisternele trans prezint nucleozid-difosfataze, iar reeaua trans are n alctuire fosfataza acid, enzim specific pentru lizozomi. Modalitatea prin care aparatul Golgi i menine polaritatea a fost explicat prin elaborarea a dou modele: 1) modelul transportului vezicular (modelul suveic) i 2) modelul maturrii cisternelor. Modelul transportului vezicular presupune transportul materialului de la RE la cisternele cis i n final trans prin vezicule, ce se desprind din cisternele donatoare i care apoi fuzioneaz cu membrana cisternei acceptoare. Moleculele ce iau parte la acest proces, dar i cele care n mod obiniut nu apar n aceast regiune sunt returnate printr-un transport retrograd.

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

Modelul maturrii cisternelor se face prin transportul anterograd al ntregii cisterne, iar moleculele implicate n diversele procese biochimice sunt, de asemenea, returnate prin transport vezicular retrograd. Existena transportului retrograd a fost demonstrat n urma unor experimente tiiifice, ce au pus n eviden prezena enzimelor golgiene la nivelul RE i anvelopei nucleare, ca urmare a inhibrii transportului anterograd prin tratarea celulelor cu brefalin A. Transportul RE-Golgi se face n ambele direcii cu implicarea unor structuri intermediare: ERGIC/VTG (endoplasmic reticulum Golgi intermediate compartment/ vesicular tubular compartment). Organitul reprezint principalul sediu al prelucrrii sfingolipidelor, al glicozilrii proteinelor, al producerii GAG, al sulfatrii glucidelor, al etichetrii enzimelor lizozomale, dar i determinarea destinaiei finale a proteinelor venite de la nivelul RE, toate aceste procese succedndu-se n etape bine controlate. Proteinele din lumenul complexului Golgi sunt dirijate ctre vezicule secretorii, membrana celular i lizozomi. n unele celule, cum sunt cele epiteliale, care prezint polaritate, compoziia membranelor apicale i latero-bazale difer din punct de vedere chimic, deci moleculele ce se desprind de pe faa trans a aparatului Golgi trebuie s aib destinaii diferite, pe baza unor semnale specifice. Modalitatea prin care are loc aceast sortare nu este pe deplin cunoscut. Transportul veziculelor ctre destinaiile finale se face cu ajutorul elementelor de citoschelet: filamentele de actin i microtubuli, fenomen demonstrat prin inhibarea polimerizrii microtubulilor cu noconazol sau colchicin. Fuzionarea dintre moleculele sintetizate i structurile int se produce n urma interaciunii specifice v-SNARE/t-SNARE. Acest proces se realizeaz prin intermediul unor proteine adaptoare, ce fac parte din categoria proteinelor G monomerice. Veziculele secretorii constituite la nivelul aparatului Golgi pot fi exocitate prin dou ci: constitutiv i mediat de receptori. Calea constitutiv este modalitatea prin care are loc procesul de exocitoz n toate tipurile de celule i se desfoar concomitent cu nlocuirea membranei celulare, att n condiii normale, ct i patologice. Calea de secreie semnalizat se realizeaz doar n celulele specializate n sinteza de proteine i implic stocarea produilor finali sub form de vezicule pn la primirea unor semnale specifice. Molecula semnal se leag la receptor i determin o cascad de evenimente, care vor duce n final la fuzionarea vacuolelor cu membrana plasmatic i exocitarea moleculelor sintetizate. Pa baza unor studii chinetice, s-a stabilit c transportul veziculelor de la RE la Golgi dureaz aproximativ 10 minute, n timp ce tranzitul organitului i transportul pn la membrana plasmatic variaz ntre 30 i 60 minute. Deoarece mecanismele intime ale proceselor ce au loc la nivelul complexului Golgi nu sunt pe deplin cunoscute, numeroase studii ce se desfoar n momentul de fa vor aduce probabil informaii suplimentare menite s elucideze funciile organitului i implicaiile acestuia n patologie. Lizozomii Etimologic: din grecescul: lysis a liza i soma corp, adic corpi litici Sinonime: sistem vacuolar, sistem lizozomal Filogenetic origine in vacuolele protozoarelor (Amoeba) 5

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

Definiie Lizozomii sunt organitele digestiei intracelulare descoperite de Christian deDuve, delimitate de o membran, prezente n toate celulele, cu excepia hematiei adulte. Se gsesc n numr foarte mare n hepatocite i macrofage conin enzime hidrolitice (peste 50) implicate in degradarea tuturor tipurilor de polimeri biologici: proteine - proteaze, lipide - lipaze, carbohidrai-glicozidaze i acizi nucleici- nucleaze, toate active n mediu acid , dar au i funcia de a ndeprta de pe anumite molecule gruprile fosfat, sulfat i glicozil principala caracteristic este lumenul cu pH acid asigurat de o pomp protonic membranar ATPdependent care schimb Na cu H asigurnd astfel un mediu optim pentru aciunea hidrolazelor pH 5 (pH-ul citoplasmei este 7,2) Ultrastructura lizozomilor Morfologia lizozomilor este heterogen. Aspectul ultrastructural clasic este al unui organit de 0,5 um n diametru, adesea avnd un miez electronodens. Deoarece lizozomii sunt greu de caracterizat doar pe baza criteriilor morfologice este necesar existena unor criterii suplimentare: identificarea produilor unor reacii histochimice pentru fosfataza acid localizai n lizozomi imunoelectromicroscopia arat prezena hidrolazelor specifice i absena receptorilor pentru manoz 6-fosfat ntr-o singur celul pot exista cteva sute de lizozomi, ocupnd aproximativ 0,5 5% din volumul celular. Cea mai mare parte a lizozomilor este dispus n regiunea juxtanuclear n strns vecintate cu aparatul Golgi, centrul organizator al microtubulilor i endozomii secundari faza avansata de evolutie. Membrana lizozomilor componenii acesteia sunt unici asigurnd rezistena la aciunea hidrolazelor proteinele membranare au greuti moleculare variate ntre 20 i 150 kDa, mai importante fiind 2 proteine unipass integrale tip I : lgp A i lgp B (100 120 kDa) , cu cea mai mare parte a domeniului orientat ctre lumen i extensiv glicozilate ( cu ct este mai mare procentul de carbohidrai al unei proteine, cu att este mai greu digerat). De aceea, cele mai multe proteine lizozomale membranare implicate n asigurarea funciei lizozomilor (transportul moleculelor digerate n afara lizozomilor) sunt nalt glicozilate proteinele membranei lizozomale sunt sintetizate n RE i transportate apoi la aparatul Golgi pentru o glicozilare extensiv Originea i formarea lizozomilor formarea lizozomilor reprezint o intersecie ntre calea secretorie i endocitoz Lizozomii se formeaz n aparatul Golgi. Complexul Golgi sorteaz n regiunea trans enzimele primite de la reticulul endoplasmic rugos prin regiunea cis. n aceast regiune precursorului hidrolazelor lizozomale i se ataeaz un radical fosfat la reziduul de manoz. Gruparea manozo-6 fosfat formez semnalul de sortare, enzima fiind transportat prin cisternele aparatului Golgi spre regiunea trans unde se leag de un receptor specific. Dup legare incepe formarea unei vezicule care se acoper cu clatrin, se desprinde i va fuziona cu lizozomul n formare. Lizozomul are pe suprafa o pomp protonic cu rol de acidifiere a 6

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

interiorului, ducnd la ndeprtarea gruprii fosfat i la disocierea hidrolazei de pe receptor. Receptorul va fi reciclat napoi n complexul Golgi. Biogeneza lizozomilor Enzimele intralizozomale sunt sintetizate i ajung n lizozomi n urma unor procese elucidate de curnd. Proteina pe cale de a fi sintetizat este co-translatat i transportat vectorial prin membrana RE, peptidul semnal terminal captul-N este clivat i apare N-glicozilarea n lumenul RE. Dup aceast etap urmeaz transpotul prin intermediul compartimentului vezicular ctre complexul Golgi unde oligozaharidele legate covalent sunt modificate enzimatic de ctre glicotransferaze prin adgarea unor reziduuri terminale de manozo-6.fosfat. Acest fapt permite legarea la unul sau doi receptori de manozo 6-fosfat distinci care direcioneaz enzimele spre lizozomi. Studii recente sugereaz existena a 2 tipuri de lizozomi: secretori i convenionali. Lizozomii secretori sunt gsii , dei nu singuri, n diferite celule ale sistemului imun derivate din linia hematopoietic, ex. Limfocitele T Lizozomii secretori sunt o combinaie ntre lizozomii convenionali i granulele secretorii. Ei difer de lizozomii convenionali deoarece conin produsul de secreie specific tipului celular n care se afl. Spre exemplu limfocitele T conin produi de secreie cum ar fi perforina i granzimele care atac att celulele tumorale ct i celulele infectate viral. Lizozomii secretori conin i hidrolaze, proteine membranare, i au aceleai faciliti n meninerea pH-ului ca i lizozomii convenionali. n acest mediu acid produii de secreie sunt meninui ntr-o form inactiv. Lizozomii secretori maturi se deplaseaz pn n vecintatea membranei plasmatice unde rmn n stand by cu secreiile pregtite i gata de atac. Cnd limfocitul T este perfect orientat ctre celula int secreiile sunt eliberate, iar factorii de mediu, modificarile chimice locale, inclusiv cele de pH activeaz secreiile nainte ca acestea sa actioneze. Totul se face cu o precizie maxim n ceea ce privete locaia i timpul pentru a avea un efect maxim asupra intei i minim asupra celulelor nconjurtoare nepatologice. Lizozomii convenionali - Sosiri, ntlniri, 'kiss and run', fuziuni i modele de maturare. Sosiri i ntlniri Lizozomii sunt considerai ca organite refolosibile i cnd celula se divide fiecare celul fiic primete un numr de lizozomi. Mecanismul prin care numrul acestora crete intracelular nu este elucidat. Se crede c, coninutul lizozomilor este depit prin aport de la ap. Golgi. Componentele lizozomale sunt produse n reticulul endoplasmic, modificate n aparatul Golgi i transporatate ctre lizozomi sub form de vezicule sigilate. Modificrile din aparatul Golgi includ marcarea destinaiei la nivel molecular penru a fi siguri c veziculele ajung la lizozomi i nu la membrana plasmatic sau n alt parte. Marcajul sau eticheta este apoi returnat la aparatul Golgi pentru a fi refolosit. Materialele cu care intr n contact lizozomii necesit procese de dezasamblare i reciclare i provin din 3 surse : 2 extracelulare i 1 intracelular. Sursele extracelulare. Includ procesele de endocitoz, inclusiv pinocitoza, prin care sun introduse lichide i mici particule datorit formrii unor mici invaginri membranare acoperite de proteine. Acestea 7

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

vor forma in final vezicule acoperite de proteine (clatrin, coatomer i caveolin). Fiecare vezicul se dezvolt formnd un endozom primar 'early endosome' i apoi un endozom secundar 'late endosome'. Tot din surse extracelulare , prin fagocitoza se introduc particule mari , n general >250 nm inclusiv bacterii i detritusuri celulare. Fagocituza poate avea loc n orice celul, dar este specific macrofagelor care conin peste 1000 de lizozomi. Structura rezultat n urma fagocitozei se numete fagozom. Surse intracelulare sunt reprezentate de autofagozomi responsabili de ndeprtarea unor organite degradate cum ar fi mitocondrii sau ribozomi. Fiecare organit a carui via a expirat este nconjurat de o structura membranar formnd un autofagozom care fuzioneaz cu lizozomul pentru a forma un organit hibrid. Sistemul endolizozomal : srut i fugi, activiti de fuziune complet i modele de maturare n ultimii ani cercettorii au emis ipoteze noi privitoare la modul de interaciune i aciune al lizozomilor urmrind traseul substanelor endocitate i eventual i degradarea acestora. Cea mai mare parte a activitii acestora a fost centrat pe studiul endozomilor primari i secundari. Cu anumite rezerve, se pot considera fagozomii, autofagozomii i endozomii secundari ca fiind toi endozomi secundari n scopul de a nelege noiunea de sistem endolizozomal. Exist dovezi care arat c: sediul proteolizei nu este n lizozomi ci ntr-un organit care seamn mai degrab cu un endozom secundar i conine 20% din hidrolaze. lizozomii conin aproximativ 80% din enzimele necesare digestiei intracelulare. lizozomii sunt probabil organite care stocheaz hidrolaze pe care le in ntr-o form inactiv la un pH aprox. 5.0. lizozomii nu acioneaz ca organite de sine stttoare ci se intlnesc cu endozomii secundari i acioneaz ca un sistem endolizozomal.

Aceste dovezi au condus la dezvoltarea unor modele bazate pe tipurile de interaciuni dintre endozomi i lizozomi. Unul din aceste modele se numete srut i fugi 'kiss and run' iar cellalt fuziune 'fusion'. Srut i fugi Kiss and Run Acest model dup cum sugereaz i numele este bazat pe un scurt contact ntre endozomul secundar i lizozom, pentru a schimba ntre ei coninutul chimic. Dup separate lizozomul este disponibil pentru a sruta un alt endozom secundar. Fuziunea Este ipoteza bazat pe fuziunea complet dintre un endozom secundar i un lizozom n urma creia rezult un organit hibrid. n tipul fuziunii are loc dezasamblarea molecular a coninutului endocitat. Aminoacizii i alte molecule rezultate sun preluati de transportori i trec din organitul hibrid n citoplasm. Dup aceste procese de dezasamblare i reciclare, coninutul organitului hibrid se condenseaz, lizozomul se reformeaz i este disponibil pentru o nou fuziune cu alt endozom secundar. Uneori rmne un mic reziduu care este eliminat din celul prin exocitoz sau este sigilat intr-o granul pigmentar pe toat durata vieii organismlui. 8

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

Modele ale sistemelor de maturare Modelele bazate pe principiul unor strucuri care se matureaz pentru a formal lizozomi nu sunt populare n prezent, dar dou ar tebui menionate. Modelul maturrii un endozom primar este format din vezicule cu originea n membrana plasmatic care fuzioneaz ntre ele. Alte vezicule aduc i preiau substane chimice pn cnd se transform n endozom secundar i apoi atinge stadiul de lizozom. Modelul transportului vesicular endozomii primari i secundari sunt organite separate i stabile legate prin vezicule care transport substane de la endozomii primari spre cei secundari care se maturez pentru a deveni lizozomi.

Aciunea digestiv a lizozomilor poate fi sistematizat n urmtoarele direcii: 1. Autofagia materialul are origine intracelular. a. Macroautofagia este procesul normal de turn over al organitelor. Organitul este nconjurat de o membran REN formnd o vacuol autofagic ce va fuziona cu lizozomul primar pentru a forma autofagozomul n care are loc digestia. b. Microautofagia este procesul care implic pinocitoza unor proteine citoplasmatice. 2. Autoliza este distrugerea intern a ntegii celule. a. este o parte a apoptozei (moarte celular programat). b. celulele bolnave pot fi ndeprtate prin acest proces. Este prevalent n esuturile care necesit resorbie (viaa embrionar). 3. Heterofagia implic endocitoza (fagocitoza i pinocitoza) de materiale extracelulare. a. Fagocitoza este procesul prin care sunt ncorporate particule strine formndu-se fagozomi ce vor fuziona cu lizozomii primari dnd natere lizozomilor secundari. b. Pinocitoza este procesul prin care sunt nglobate macromolecule n soluie formndu-se pinozomi.Acetia vor fuziona i ei cu lizozomii primari. c. Dup digestie lizozomii ajung ntr-un stadiu n care materialul coninut nu mai poate fi degradat n continuare datorit epuizrii echipamentului enzimatic. Astfel apar corpii reziduali sau lizozomii teriari. 4. Crinofagia digestia produilor de secreie n celulele secretorii glandulare, prin care celula i controleaz calitatea i cantitatea substanelor secretate.

INCLUZIUNILE CELULARE

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

Incluziunile celulare sunt depozite de molecule organice i anorganice care apar n citoplasma celulelor, avnd caracter tranzitoriu sau definitiv, ireversibil, normal sau patologic. Incluziunile fiziologice sunt cele mai mobilizabile, modificndu-se permanent n raport cu starea celulei sau n funcie de necesitile organismului. Spre deosebire de organite, incluziunile nu au funcii specifice. n funcie de proveniena lor incluziunile se pot clasifica n: exogene i endogene. Incluziunile celulare exogene pot apare n celule n condiii fiziologice (spre exemplu carotenul din morcovi) sau n condiii patologice (incluziuni de metale grele sau particule de de azbest, siliciu, carbon, praf). Incluziunile celulare endogene sunt de cele mai multe ori depozite intracelulare de lipide , glucide, proteine, pigmeni, ioni, etc. Incluziunile de natur glucidic Depozitele de glucide din celulele animale sunt sub form de glicogen, iar cele din celulele vegetale sub form de amidon. Celulele animale bogate n depozite glucidice sunt hepatocitele i celulele musculare la nivelul crora se gsesc cantiti mari de incluziuni de glicogen. Depozitele de glicogen sunt utilizate n situaia n care celula este supus unor activiti mecanice intense (ex. contracia muscular), sau n condiii de activitate intens de sintez. Aceste depozite se formeaz prin glicogenogenez i sunt utilizate de celul n urma procesului de glicogenoliz. Glicogenul poate fi pus n eviden la MO prin coloraia carmine amoniacal Best, evideniindu-se sub form de plaje mai mult sau mai puin ntinse, dar nu ocup niciodat ntreaga citoplasm. La ME pot fi vazute sub form de bastonae particule alfa sau de rozet particule beta. In MET rozete de material electronodens. n patologie se observ depozite mari de glicogen n boala Pompe caracterizat prin hepatomegalie. Incluziunile de natur lipidic Incluziunile lipidice pot fi ntlnite n celul n urmtoarele circumstane: tranzitoriu celula hepatic postprandial, sub form de picturi lipidice izolate, proporionale ca numr

cu cantitatea de lipide ingerate, sunt repede metabolizate i dispar din citoplasm la cateva ore dup ingestie temporar, pe o durata de timp variabil n celulele secretorii din glanda mamar n lactaie, dispar din

celul dup terminarea perioadei de lactaie 10

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

permanent n celule specializate ale esutului conjunctiv numite adipocite, celule grase sau lipocite.

Aceste celule sunt de 2 tipuri : adipocite albe i adipocite brune. Adipocitele albe formeaz esutul adipos alb, alctuind paniculul adipos. Au form rotunjit cnd sunt izolate sau poligonal cand sunt grupate. Incluziunea lipidic este unic - unilocular i ocup ntreaga citoplasm care este mpins spre periferia celulei, predominant n jurul nucleului. Celula capt aanumitul aspect de inel cu pecete. Aceste celule au rol n metabolismul lipidic, de protecie a principalelor organe i n termogenez la nivelul tegumentului (n hipoderm). Adipocitele brune formeaz esutul adipos brun, bine dezvoltat la nou-nscut i n copilrie i care apoi involueaz. La adult persist n regiunea interscapular i inghinal. Celulele adipoase brune au form rotunjit, conin n citoplasm numeroase incluziuni lipidice adipocit multilocular. Nucleul este sferic, eucromatic, situat central. n patologie se pot observa numeroase incluziuni lipidice n hepatocite la alcoolici. Incluziuni de natur proteic Apar n celule secretorii exo- i endocrine n momente de supraproducie cnd nu pot fi exocitate n acelai ritm cu cel n care se produc i rmn stocate in citoplasm sau atunci cnd exocitoza este mediat de receptori, necesitnd un semnal extracelular. Frecvent, n celulele glandelor salivare, ale stomacului sau n celulele pancreasului exocrin se pot observa vezicule secretorii, delimitate de membrane, care conin precursori enzimatici (zimogeni). Aceste vezicule sunt stocate la polul apical al celulelor i se elibereaz prin exocitoz. Aceti precursori sunt tripsinogenul n pancreas, pepsinogenul n celulele principale ale stomacului i precursorul amilazei n glande salivare. Incluziuni de natur glicoproteic Aceste incluziuni apar la polul apical al celulelor epiteliale care secret mucus stocat n vezicule delimitate de membrane sub form de precursor denumit mucinogen. Mucinogenii sunt eliberai din celul prin exocitoz, se hidrateaz i formeaz mucusul. Prototipul celular secretor de mucus este singura gland unicelular celula caliciform, gsit n epiteliul din tractul digestiv i respirator. Rolul mucusului este acela de a proteja mucoasele. Iritaiile locale duc uneori la eliberarea ntregului coninut celular. Incluziunile pigmentare Pot apare n condiii fiziologice i patologice. Incluziuni fiziologice

11

Dr. Sanda M. Creoiu Curs biologie celular

Melanina pigment negru evident n epidermul pielii, n SNC substana neagr i locue caeruleus. n celulele pielii, pigmentul este sintetizat n melanocite, celule stelate, cu aspect la MO de fulg de nea i este depozitat apoi n cheratinocite, n cantiti variabile n funcie de ras. Lipofuscina sau pigmentul de uzur se observ pe msura naintrii n vrst a organismului, n special la nivelul miocardocitelor i al celulelor nervoase, dar i n macrofage. Lipofuscina este de fapt produsul nedigerat al unor reacii litice la nivel subcelular. Pe msur ce organitele mbtrnesc sunt degradate i ceea ce nu poate fi reutilizat din structura lor rmne sub forma lipofuscinei. Deoarece neuronii nu se divid de-a lungul anilor se acumuleaz pigment de aceea numit de uzur. Lipofuscina se acumuleaz i n celulele adipoase, fiind responsabil de culoarea galben a adipocitelor. Macrofagele pot conine lipofuscin provenit din cele mai variate surse: celule moarte, organite proprii, bacterii moarte etc. Hemosiderina - este reziduul nedigerabil rezultat n urma distrugerii hematiilor, cuvntul hemo provenind de la hemoglobin. Gruparea hem conine n centru un atom de Fe. Macrofage bogate n hemosiderin se pot observa n cantiti mari n splin i ficat, locurile de elecie pentru distrugerea hematiilor mbtrnite. In coloraia HE poate fi confundat cu lipofuscina sau melanina, dar se evideniaz specific prin coloraia cu albastru de Prusia pentru fier. Incluziuni patologice Pigmenii biliari pot apare n anumite condiii patologice sub form de bilirubin n celulele Kupfer sau chiar n hepatocite.

12