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Estructura de Inmunoglobulinas

- Los dominios que conforman los segmentos CH y CL estn codificados en el DNA de todas las clulas. - Los dominios VH y VL se forman por eventos de reordenamiento entre distintos genes (V, D, J) que estn codificados en el DNA. Estos eventos ocurren durante la ontogenia de linfocitos B.

Diversidad de repertorio para el reconocimiento de antgenos

Exclusin allica: expresin de un nico BCR en cada linfocito B

Anticuerpos Policlonales

Caractersticas de los Anticuerpos Policlonales


Son qumicamente heterogneos

HETEROGENEIDAD

Mezcla de diferentes especificidades

Mezcla de Ac. de diferente tipo (isotipos, alotipos)


VARAN DE ANIMAL A ANIMAL CAMBIAN CON EL TIEMPO (maduracin de la afinidad) NO PUEDEN PRODUCIRSE INDEFINIDAMENTE BAJO COSTO DE PRODUCCIN

Anticuerpos Policlonales vs Monoclonales

Obtencin de Anticuerpos Monoclonales


Hibridizacin de clulas somticas

HGPRT- Ig-

Obtencin de Anticuerpos Monoclonales


Hibridizacin de clulas somticas

- Clulas de mieloma: capacidad de crecer indefinidamente in vitro no expresin de inmunoglobulinas marcador de seleccin (deficiencia de la enzima HGPRT)

- Cepa de ratn singeneica con la lnea de mieloma (BALB/c)

Obtencin de Anticuerpos Monoclonales


Hibridizacin de clulas somticas
Clulas de bazo HGPRT+ TK+ Medio no selectivo (RPMI) Medio selectivo Sntesis de novo Vas de rescate

Lnea mieloma HGPRT- TK+ Sntesis de novo Vas de rescate

Sntesis de novo Vas de rescate Hipoxantina

Sntesis de novo Vas de rescate

RPMI-HAT

Timidina Aminopterina (antagonista del cido flico)

Obtencin de Anticuerpos Monoclonales


Hibridizacin de clulas somticas

Clulas de bazo
Sntesis de novo Vas de rescate PEG

Lnea mieloma
Sntesis de novo Vas de rescate

HAT
HIBRIDOMAS Sntesis de novo Vas de rescate

Obtencin de Anticuerpos Monoclonales


Hibridizacin de clulas somticas

ELISA

Caractersticas de los Anticuerpos Monoclonales

- MONOESPECIFICOS
- UNICO ISOTIPO

- NO CAMBIAN CON EL TIEMPO


- PUEDEN PRODUCIRSE INDEFINIDAMENTE

Obtencin de Anticuerpos Monoclonales


Hibridizacin de clulas somticas

Obtencin de Anticuerpos Monoclonales


Hibridizacin de clulas somticas

Anticuerpos Monoclonales - Produccin

Alto costo No problemas ticos

Alto rendimiento Bajo costo

Anticuerpos Monoclonales - Aplicaciones


In vitro
Identificacin y caracterizacin de poblaciones celulares Deteccin de antgenos en tejidos Serotipificacin de complejo mayor de histocompatibilidad

Determinacin de drogas, compuestos txicos hormonas y otros factores sricos


Purificacin de molculas de distinta naturaleza (inmunoafinidad)

Diagnstico y seguimiento de enfermedades infecciosas, tumores y desrdenes del sistema inmune

Anticuerpos Monoclonales - Aplicaciones


In vivo
Tratamiento de enfermedades infecciosas Tratamiento de enfermedades tumorales Tratamiento de desrdenes del sistema inmune Inconvenientes

No desarrollo de funciones efectoras adecuadas Inmunogenicidad Problemas farmacocinticos y de biodisponibilidad