Sunteți pe pagina 1din 434

INTRODUCERE IN MICROBIOLOGIE

Dr. Carmen Costache

Medicina - obiective
diagnosticul tratamentul prevenirea bolilor umane =>

cunoaterea etiologiei (cauza) i patogeniei (mecanismul de producere)

MICROBIOLOGIA
studiul microorganismelor Microorganisme

invizibile cu ochiul liber

Lumea microorganismelor: divers


organisme celulare:
monocelulare: protozoare, fungi i bacterii pluricelulare: helmini

STRUCTURI acelulare: virusurile, viroizi, prioni,

PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR
1.ubiquitare 2.ageni etiologici

bolile infecioase: nu se transmit de la o persoan la alta (ex. panaritiu, furuncul). bolile infecto - contagioase: se transmit de la o persoan la alta.

3.lume model n cercetri fundamentale

PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR

4.model simplu de difereniere celular.


sporulare germinare

PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR

5.celule ancestrale

PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR

6.arm biologic

To help protect your privacy, PowerPoint has blocked automatic download of this picture.

PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR

PARTICULARITILE MICROORGANISMELOR

7.competitoare al omului pentru supremaie biologica


variola eradicata 1977-1978;

HIV: 1981-1982

Microorganisme=Microbi = Germeni

BACTERII VIRUSURI FUNGI PARAZITI TOTAL DIFERITI INTRE EI !! STRUCTURA DIAGNOSTIC TRATAMENT

Incadrare
Regn protista: alge, protozoare Regn Myceta: fungi Regn Prokariota (Monera): bacterii

Archaebacerii Cianobacterii Eubacterii = bacteriile adevarate

Bacteriile = prokariote

celula prokariota celula eukariota


Structura (morfologie) Functie
Metabolism Multiplicare

Virusurile
NU sunt celule sunt structuri acelulare

Bacteriile = prokariote Corpul uman/animal = eukariote

DIFERENIERE NTRE CELULE DE TIP EUKARIOT I PROKARIOT Nucleu

nucleu adevrat:
nucleoli, membrana nuclear.

echivalent nuclear, nucleoid nu prezint

nucleoli, mb. nuclear

Materialul genetic =genom.


Eukariote ADN Prokariote Material genetic cromozomial extracrozomial. Cz = molecul dublu catenar de ADN circular => un singur cromozom. Extra-cz

elemente transpozabile (mobile) uneori plasmide. Cz = perechi Cz = ADN + histone

cz, mitocondrial, cloroplastelor

informaie genetic neesenial pentru supravieuirea i multiplicarea bacteriilor,

plasmide bacteriofagi

ORGANIZAREA CITOPLASMEI
compartimentat. organite =>

ribozomi 80 S,
su 60 S Su 40 S

Necompartimentat, (mezozomi). Ribozomi 70 S

50 S (Large) 30 S (Small).

MEMBRANA CITOPLASMATIC

complexa

nu exist steroli, excepie

Mycoplasma

NVELIURILE CELULARE
lipsesc nveliurile celulare Exist la

levuri plante, sunt bogate n celuloz.

perete celular,
responsabil de meninerea formei

rigiditate, are peptidiglican (murein).

MULTIPLICARE
sexualitate. primete o dubl informaie genetic de la parentali care se reasociaz n meioz.

divizarea asexual Amitotic sciziparitale sau fiziune binar. Informatia = Haploid.

MORFOLOGIE BACTERIAN

Microscopia optic

evidenierea formei, Dimensiunilor

Microscopia electronic Morfologia => preparate microscopice:


Evidentierea structurii bacteriilor.

900-1000 X. 0,2 - 2m 2-20 mm

preparat nativ, frotiu efectuate din:

produse patologice cultur bacterian pur.

Frotiul - preparat microscopic colorat,


Informaii: forma dimensiunile dispoziia bacteriilor, afinitatea tinctorial, prezena structurilor facultative, numar (prod.patol.)

Frotiul - preparat microscopic colorat,


Forme fundamentale sfer - coci (1) Cilindru, bastonas - bacili (3-7); cilindru helicoidal forma spiralat

COCI
Dispoziia rezult n urma diviziunii diplo: diplococi
Pneumococi:
coci Gram pozitivi, ovoizi cu aspect de flacre de lumnare (diviziune pe vertical),

Neisserii:
coci Gram negativi cu aspect reniform, concav convex (diviziune pe orizontal),

tetrade: Micrococi: 4 coci reunii octade: Sarcina: 8 coci. lanuri: Streptococi. grmezi: Stafilococi

BACILI
Capete bacililor pot fi: rotunjite la Enterobacterii b.coli i ali bacili Gram negativi ascuite la Fusobacterium bacili Gram negativi drepte bacilii din genul Bacillus (bacili Gram pozitivi) Grosimea cilindrului poate fi diferit: deformai prin endospori, incluzii Endosporii nu se coloreaz n coloraia Gram = zone necolorate, albe, sferice, endospori cu diam. < dect diam. f. vegetative, Bacillus (bacili Gram pozitivi) endospori cu diam. > dect diam.f.vegetative, Clostridium, Gram pozitivi. terminal, Clostridium tetani subterminal-rachet de tenis: Clostridium botulinicum central-brcu sau de fus: Clostridium septicum, sporogenes

BACILI
Dispoziia n frotiu: bacili izolai:

diplobacili:

Enterobacterii: bacil colii (bacili Gram negativi) Bacilul crbunos n frotiurile efectuate din produs patologic Bacillus (bacili Gram pozitivi): Bacil subtilis, bacil cereus, bacil crbunos (n frotiurile din cultur pur). Mycobacterium tuberculosis aspect de majuscule (X, Y, W) Corynebacterium diphteriae aspect de litere chinezeti (bacili ncurbai, deformai la capete Gram pozitivi). Bacili pseudodifterici (bacili Gram pozitivi)

streptobacili:

bacili unii la capete:

bacili dispui n palisade:

COCOBACILI

bacili scuri, subiri,


1,5 - 2 lungime 0,6 - 0,8 lime

Gram negativi. Ex:

Haemophyllus, Brucella, Bordetella

FORME SPIRALATE
BACILI NCURBAI: numr mic de ture de spir Vibrion holeric
bacil ncurbat mobil, aspect de virgul, Gram negativ

Campylobacter
2 bacili ncurbai unii la capete, aspect de liter S

Helicobacter
mai muli bacili ncurbai unii la capete (2-5) produc gastrite, ulcer duodenal

FORME SPIRALATE
Spirochete: bacterii spiralate lungi 5 - 10, Subiri 0,2 - 0,3 , mobile prin aparat locomotor;

Ex. Treponema pallidum, Leptospira, Borrellia

Spirili: bacterii spiralate rigide, neimplicate n patologia uman;

Forma: meninut datorita peretelui celular. Bacterii fr perete celular : Mycoplasma culturi vechi 48-72 ore = pleomorfismul bacterian Bacterii necolorabile prin coloratia Gram =>

Bacterii spiralate

genul Mycobacteria

Treponema pallidum, Leptospira, Borrellia Necesita coloraii speciale: Fontana, Burri, Giemsa coloraia Ziehl Neelsen Rickettsia, Chlamydia coloraia Giemsa, Machiavello, Giemenez

Bacterii intracelulare:

Treponema pallidum Burri

Fontana

genul Mycobacteria coloraia Ziehl Neelsen

Giemsa,

Chlamydii, Rickettii
Gimenez

Macchiavello

clasificare, nomenclatura, identificare

Taxonomie

Clasificare Specia = unitatea de baza a clasificarii


~ Reflecta proprietate Var Tip (biotip, serotip) phyllum - clase - ordine - familii genuri/triburi specii
Diviziuni bacteriene = unitati taxonomice

Nomenclatura: latinizata (reguli internationale)


proprietati Ex. Mycobacterium tuberculosis
ordinele ales familiile - aceae Triburi/genuri eae

Identificare importanta practica a clasificarii

IDENTIFICAREA

Deosebeste
Microorganismele bune Rele = patogene

Proprietati specifice
Morfologice De cultura

izolare si identificare
agent cauzator = etiologic al unei imbolnaviri

CLASIFICAREA BACTERIILOR

Clasificarea Linn nu dup nrudirea


natural ci dup unele proprieti fenotipice:
structura peretelui celular, afinitatea morfotinctorial, proprieti metabolice, rezistena la diverse condiii de mediu

Bergeys Manual of Systematic Bacteriology


International Commission of Bacterial Systematic 1980

Adansoniana numerica
Prezenta/absenta: pigmenti, enzime Complicata statistica

Filogenetica 1980
Tehnici moleculare si genetice
hybridizarea acizilor nucleici Analiza secventelor ARN-ului ribozomal (rRNA)

inrudirea evolutiva

Peretele celular => 4 divizii editia 9-a

I. Gracillicutes Bacterii Gram negative


Grup 1: Spirochete: Grup 2: Aerobe/micro-aerofile, mobile, helicoidale Grup 3:
Cam pylobacter, Helicobacter Bacterii incurbate, imobile sau rar mobile Treponema, Borrelia, Leptospira

Group 4: Aerobe/ micro-aerofile, bacili si coci:


Bordetella Brucella, Francisella Legionella, Moraxella Neisseria, P seudom onas Bacteroides

I. Gracillicutes Bacterii Gram negative

Grup 5: bacili facultativ anaerobi


Grup 6: bacili incurbati sau helicoidali, anaerobi


Group 7: bacterii reducatoare de sulf Group 8: coci anaerobi

Escherichia, K lebsiella P roteus, P rovidencia Salm onella, Shigella Yersinia, Vibrio Haem ophilus, Pasteurella

Fusobacterium

Group 9: Rickettsiae and Chlamydiae:


Rick ettsia Chlam ydia Cox iella

Grup 10-16 - fara importanta medicala

II. Firmicutes: bacterii Gram pozitive

Grup 17:

Grup 18: bacili formatori de endospori: Grup 19: bacili nesporulati Grup 20: bacili neregulati, nesporulati : Grup 21: Mycobacteria: Mycobacterium Grup 22-29: Actinomycete:
Nocardia, Streptomyces, Rhodococcus Actinomyces Corynebacterium Listeria ClasaThallobacteria Bacillus Clostridium

Enterococcus Peptostreptococcus Staphylococcus Streptococcus

III. Tenericutes Bacterii fara perete celular

Group 30:
M ycoplasm a, Ureaplasm a

IV. Mendosicutes:
Archaebacteria

GRUPE DE HAZARD

RISC INFECIOS: 4 grupe gradul de pericol la locul de munc. Criterii


patogenitatea pentru om risc pentru personalul de laborator transmisie n colectiviti exista
profilaxie tratament corespunztor

I. Microorganisme care nu par a determina boli umane II. Microorganisme care:

pot cauza boli umane prezint risc pentru personalul de laborator nu par a se rspndi n colectivitate exist msuri de profilaxie, tratament

Eschericia coli, Stafilococ aureus, Streptococ, Treponema pallidum, Klebsiella, Mycobacterii netuberculoase, Proteus, Vibrio holeric, Shigella.

Bacterii: Bacillus cereus, Bordetella pertussis, Campylobacter, Clostridium botulinicum i alte clostridii, Bacil difteric, Enterobacter,

Virusuri: Adenovirus, Coronavirus, Herpesvirus, virusuri Coxackie, Echo, virusul hepatitei A, virusuri poliomielitice, Rhinovirus, Rotavirus, virusul rubeolei, virus gripal, Paramyxovirus

III. Microorganisme care:


determin boli severe prezint risc serios pentru personalul de laborator prezint risc de rspndire n colectiviti exist profilaxie i tratament corespunztor

Bacterii: Bacil crbunos, Brucella, Chlamydia psittaci, bacilul TBC, bacilul leprei, Rickettsii, Virusuri: CMV, Bunyavirusuri, Hepatita B,D, Enterovirus, HIV, Virusul rabic

Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A,B,C.

IV. Microorganisme care:


determin boli serioase la om prezint risc serios pentru personalul de laborator prezint risc crescut de rspndire n colectiviti nu au profilaxie i tratament eficient

Virusuri: Arenavirusuri (virusurile Lassa, Junin, Machupo), Bunyavirusuri (v. febrei de Crimeea Congo), Filoviridae (virusurile Ebola, Marburg); Poxviridae (virusul variolei)

Produsele patologice
nu se cunoate coninutul microbian trebuie prelucrate cu respectarea normelor de protecie.

Morfologie bacteriana
Dr. Carmen Costache

STRUCTURA
1.Structuri obligatorii: Nucleoid, Citoplasma, Membran citoplasmatic, Perete celular 2.Structuri facultative * neeseniale pentru multiplicare * confer proprieti de patogenitatea Capsul, Glicocalix; Pili comuni, pili de sex, Flageli (Cili), Spori

NUCLEOID

nu are
nucleoli, membrana nuclear.

Se evideniaz:
prin coloraii speciale:
coloraia Feulgen, acridin orange;

microscopia electronic (aspect fibrilar).

NUCLEOID

Un singur cromozom = o molecul dublu catenar de ADN circular


50-65 bucle supraspiralizate, pliat, rsucit, fibrilar, de arici sau ghem legat de membrana citoplasmatic prin mezozomi

Informaia genetic - haploid (gene pentru un caracter ntr-un singur exemplar). contact direct ntre ADN i ARN, important pentru transcrierea i traducerea inf.genetice
sediul de aciune al unor AB: Quinolone Nitrofurani, imidazoli Rifamicine

NUCLEOID

studii recente => Cz lineari


Borrellia burgdorferi, Streptomyces spp

Nr. copii de AND/cz la un moment dat


Depind de stadiul ciclului celular

Material genetic extracromozomial autonom sau integrat n cz bacterian Plasmidele Bacteriofagii

Material genetic extracromozomial

Plasmidele
molecule de ADN circulare. se pot transmite de la o bacterie la alta = conjugarea bacterian Codifica nr variabil de gene
virulenta.

Feuelgen pozitiv

Material genetic extracromozomial Bacteriofagii Structuri virale infecteaza bacteriile. 2 tipuri:


litici, capabili de replicare => liza bacteriei lizogeni (temperai)
se pot integra n cz. = profag => proprieti noi: ex. producerea unor toxine.

CITOPLASMA BACTERIILOR
necompartimentat, fr organite:

reticul endoplasmatic, aparat Golgi, mitocondrii,

2 zone distincte
Periferica, amorfa Interna (nucleoidul)

CITOPLASMA BACTERIILOR

1.Ribozomi: mii, 70 S

Chloramfenicol, Erithromicina (M) Clindamicin, Tetracicline Aminoglicozide

sediul sintezei proteice inta de aciune a unor antibiotice => inhiba selectiv sinteza proteica bacteriana dar nu si cea eukariota !

subunitile : 50 S (Large) i 30 S (Small)

50 S

30 S

CITOPLASMA BACTERIILOR

2.Granule/Incluzii:
mas lichid de substane nutritive, delimitate de membran Colorate specific de anumiti coloranti
Ex. Volutina = corpuscul metacromatic (albastru de metilen=> rosu)

CITOPLASMA BACTERIILOR

3. ARN n cantitate mare,


reprezentat de r ARN (9%), m ARN, t ARN.

4. Molecule: 3000 4000 molecule diferite;


ap, sruri minerale, ioni, acizi nucleici

5. Incluzii: material nutritiv de rezerv,


format n condiii nefavorabile de mediu

6. Plasmide

MEMBRANA CITOPLASMATICA
strat subire (10 -20 nm) sub peretele celular => greu de evideniat. Structura membranei citoplasmatice modelul mozaicului Singer:

mas fosfolipidic, plutesc insule de proteine,


dispuse spre interior, exterior sau n masa fosfolipidic.

model dinamic => reciclat permanent.

MEMBRANA CITOPLASMATICA
Prelungiri n citoplasm: 1. Mezozomi Rol:
diviziunea bacteriilor; replicare ADN-ului; formarea endosporilor

2. Oxizomi: prelungiri scurte Rol:


procesele bioenergetice la bacteriile capabile de respiraie:
aerobe, aerob anaerobe facultative, microaerofile.

FUNCIILE MEMBRANEI CITOPLASMATICE

1. Permeabilitate selectiv i transport de substane:


transport pasiv = difuzia simpl, substane cu GM mic transportul activ
contra gradient de concentraie, cu consum de energie

FUNCIILE MEMBRANEI CITOPLASMATICE

2. Funcie bioenergetic:
sediul transportului de electroni, a fosforilrii oxidative (Oxizomii).

3. Funcie biosintetic: precursori PC 4. Sediul enzimelor hidrolazice

hidrolizeaz polimeri organici: proteine, zaharuri, lipide n nutrieni, care pot ptrunde n bacterie.

FUNCIILE MEMBRANEI CITOPLASMATICE

5.inta de aciune pentru detergeni i antibiotice (bactericid.)

FUNCIILE MEMBRANEI CITOPLASMATICE

6. Replicarea ADN cromozomial, plasmidic:


prin mezozomii septali

7. Sediul motorului ciliar

FUNCIILE MEMBRANEI CITOPLASMATICE

8. Import de macromolecule
ex. fragment de ADN, de la bacterii donatoare = transformare

FUNCIILE MEMBRANEI CITOPLASMATICE

9. Sediul receptorilor chemotactici:


deplasarea spre substanele nutritive

PERETELE CELULAR BACTERIAN


prezent la majoritatea bacteriilor, cu excepia genului Mycoplasma. PERETELE CELULAR LA BACTERII GRAM POZITIVE gros (15- 50 nm), dar simplu structurat: straturi suprapuse de peptidoglican (40) i acizi teichoici ataai 1.Acizi teichoici sunt heteropolimeri repetitivi, Rol - aderarea bacteriilor de celulele epiteliale ale mucoaselor - antigene de suprafa - captarea unor nutrieni: ex. Mg. 2.Polizaharide de perete 3.Proteine de perete
excepie Mycobacterium,
ex. streptococ hemolitic.

Lipidele sunt n cantitate mic (<1%);

(excepional-ex proteina A a Stafilococului aureus

PERETELE CELULAR LA BACTERII GRAM NEGATIVE


subire (10 -15 nm) dar complex structurat 1. Peptidoglicanul : 2. Stratul lipoproteic Formeaz un schelet 3. Membrana extern
mas fosfolipidic fluid, n care noat proteine.
Proteinele majore (70%) i minore (30%)
Proteine majore: Porine, Nonporine NBP (nutrient binding protein), PBP (penicillin binding protein), FeBP (siderofor)

1- 2 straturi de peptidoglican, bidimensional

Proteine minore (Outer membrane proteins - OMP)

PERETELE CELULAR LA BACTERII GRAM NEGATIVE


4. Lipopolizaharidul (LPZ) Lipidul A


este endotoxina bacteriilor Gram negative responsabil de fenomenele toxice:
febr, diaree, greuri, vrsturi, scderea tensiunii arteriale, oc endotoxic i deces.

Componenta polizaharidic intern (core, smbure polizaharidic):


structur comun la bacteriile Gram negative

Lanurile oligozaharidice laterale:


proemin la suprafaa bacteriei, ca spini i sunt n numr mare este antigenul O, responsabil de specificitate

PERETELE CELULAR LA BACTERII GRAM NEGATIVE

5. Spatiul periplasmic
ntre membrana extern i membrana citoplasmatic. Deine oligozaharide i protein-enzime:
distrugerea bacteriilor btrne/moarte -autoliza scindeaz substanele nutritive cu G.M. mare, (polimeri organici) n monomeri: nutrieni care pot ptrunde n bacterie.

FUNCIILE PERETELUI CELULAR


1. Menine forma 2. delimitarea bacteriilor n 2 grupe Gram. 3. responsabil de acido - alcoolorezisten, 4. creterea i diviziunea bacteriilor - primer pentru propria sintez 6. Intervine n nutriia bacterian 7. Intervine n metabolismul bacterian,
sit molecular transportor de ioni import i export de proteine

8. Este o barier selectiv i are rol protector.

FORMATIUNI FACULTATIVE

Confer bacteriilor proprieti importante n natur

aderena, rezisten la fagocitoz ( unele fiind factori de patogenitate.)

CAPSULA strat amorf de nveli 3 structuri : Capsula microscopic :poate nconjura 1-2 bacterii.

Microcapsul: antigenul K / antigen Vi la Salmonella.


se evideniaz doar n microscopie electronic poate nconjura doar parial peretele celular.

Ex. Pneumococi, Meningococi, Hemofili, Bacilul crbunos, Klebsiella, Clostridium perfringers.

Stratul mucos produs doar n condiii naturale =>patogene

Capsula se evideniaz
1. n frotiuri prin: coloraii negative,
nu coloreaz capsula, vizibil ca un halou alb n jurul bacteriilor:
coloraia Gram (prod. patologic), Burri (culturi pure)

coloraii pozitive: coloraia Muir 2. Prin reacii antigen - anticorp: reacia de precipitare i reacia de umflare a capsulei 3. Dup aspectul coloniilor pe medii de cultur: foarte mucoase

CAPSULA

Compoziie chimic

polizaharidic,
majoritatea bacteriilor capsulate (Pneumococ, Meningococ, Hemofili).

polipeptidic:
polimer al acidului D - Glutamic, la bacilul crbunos.

proteic
Yersinia pestis,

polimer de acid hialuronic la Streptococ - hemolitic. Rol 1. antigen bacterian. 2. factor de patogenitate bacterian:
se opune fagocitrii bacteriilor.

GLICOCALIXUL
strat de suprafa sintetizat de bacterii n mediul lor natural. structurat, fibre polizaharidice lungi (dextran sau levan) se poate evidenia doar n microscopie electronic Rol 1.adezina polizaharidic 2.factor de colonizare

Ex. Mutanul ( Streptococus mutans) - ader de smalul dentar cu formarea cariei dentare. Bacteriile produc metabolii acizi, care atac smalul dentar.

PILII COMUNI (FIMBRII)


Pleac din membrana citoplasmic, strbat PC

formaiuni filamentoase, tubulare scurte numr mare (aproximativ 100 - 200 pili). natur proteic (pilein ). determinism cromozomial
mai rar determinism plasmidic.

ntlnii la bacteriile Gram negative

PILII
Rol 1. adezinele proteice ale bacteriilor:

aderarea nespecific pe suprafee inerte, aderarea specific pe mucoase, epitelii, endotelii, hematii, fagocite.

2. factor de patogenitate
Gonococii, E. coli- (ETEC),

3. antigene
posibilitatea modificarea structurii antigenice

PILII DE SEX
formaiuni tubulare lungi numr mic (1-4 ) prezeni la bacteriile G negative au determinism extracromozomial (plasmidic) Rol: conjugarea bacterian

FLAGELI (CILI)

formaiuni tubulare lungi

organite de locomoie ale bacteriilor Structur proteic = flagelin Ultrasctructura la ME: Evidentierea cililor :
corpuscul bazal cilindru proteic (filament axial). n preparate microscopice:

aprox. 20 m lungime/20 nm lime.

pe medii de cultur, prin nsmnarea bacteriilor prin nepare:


bacteriile imobile se dezvolt doar pe traiectul de nepare, cele mobile se dezvolt n tot mediul.

coloraii speciale indirect n preparate native (mobilitatea bacterian) .

Rol: 1. mobilitate, spre locurile unde exist atractani:

chimiotaxie (deplasarea spre substane chimice); fototaxie (deplasare spre locurile cu lumin); etc

2.antigen bacterian - antigenul H,


Weil - Felix a evideniat la Proteus, nsmnat ntr-un punct dintr-un mediu, se dezvolt pe tot mediul sub forma unor vluri concentrice (hauch).

SPORII
forme de rezisten - condiii nefavorabile de temperatur, nutriie, pH, oxigen, form primitiv de difereniere celular la bacterii. Sporularea:

Germinare

iniial endospori ulteior - spori liberi = exospori

Evidenierea sporilor

Revenire la forma vegetativ cnd ntlnesc condiii favorabile

Ultrastructura sporilor (ME) din interior spre exterior:


Protoplastul sporal Peretele sporal Cortexul nveliurile sporale si exosporium

coloraii negative: Gram (formaiuni ovalare, necolorate, n interiorul bacteriilor). coloraii pozitive: verde malachit i safranin

Rol: 1. identificarea bacteriilor. 2.alegerea metodelor de sterilizare i dezinfecie capabile s distrug sporii

SPORI

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN

I. Pentru unele boli infecioase, examenul microscopic = singura posibilitate diagnostic.


Ex. Sifilis - Treponema pallidum,
nu exist posibilitatea de a izola, cultiva => evidenierea i identificarea n preparat nativ sau n frotiuri prin coloraii speciale (impregnarea argentic) = forma spiralat.

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN

II. Pentru alte boli infectioase, exist posibilitatea cultivrii i izolrii agentului etiologic, dar examenul microscopic ofer informaii preioase.
gonoree - Neisseria gonnorhoeae (gonococ)
imaginea microscopic: PMN, diplococi intra i extracelulari.

tuberculoz, bacilul Koch se dezvolt lent,


frotiu din produs patologic: evidenierea de bacili acido alcoolorezisteni prin coloraia Ziehl - Neelsen,

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN


III. Pentru alte boli infecioase- informaii orientative. Frotiu din puroi, colorat Gram: coci Gram pozitivi dispui n grmezi - infecie stafilococic coci Gram pozitivi, dispui n lanuri - infecie streptococic diplobacili Gram pozitivi, capsulai - etiologie crbunoas bacili G pozitivi deformai - tetanos ( Clostridium tetani) bacili G negativi capsulai - Klebsiella Frotiu din sput: diplococi Gram pozitivi capsulai - pneumonie pneumococic bacili Gram negativi capsulai Klebsiella pn. Frotiu din LCR: diplococi G negativi - etiologie meningococic. diplococi G pozitivi capsulai - etiologie pneumococic

Morfologie bacteriana FORMATIUNI FACULTATIVE


Dr. Carmen Costache

FORMATIUNI FACULTATIVE

Confer bacteriilor proprieti importante n natur

aderena, rezisten la fagocitoz ( unele fiind factori de patogenitate.)

CAPSULA strat amorf de nveli 3 structuri : Capsula microscopic : poate nconjura 1-2 bacterii.

Microcapsul: antigenul K / antigen Vi la Salmonella.


se evideniaz doar n microscopie electronic poate nconjura doar parial peretele celular.

Ex. Pneumococi, Meningococi, Hemofili, Bacilul crbunos, Klebsiella, Clostridium perfringers.

Stratul mucos produs doar n condiii naturale =>patogene

Capsula se evideniaz
1. n frotiuri prin: coloraii negative,
nu coloreaz capsula, vizibil ca un halou alb n jurul bacteriilor:
coloraia Gram (prod. patologic), Burri (culturi pure)

coloraii pozitive: coloraia Muir 2. Prin reacii antigen - anticorp: reacia de precipitare i reacia de umflare a capsulei 3. Dup aspectul coloniilor pe medii de cultur: foarte mucoase

CAPSULA

Compoziie chimic

polizaharidic,
majoritatea bacteriilor capsulate (Pneumococ, Meningococ, Hemofili).

polipeptidic:
polimer al acidului D - Glutamic, la bacilul crbunos.

proteic
Yersinia pestis,

polimer de acid hialuronic la Streptococ - hemolitic. Rol 1. antigen bacterian. 2. factor de patogenitate bacterian:
se opune fagocitrii bacteriilor.

GLICOCALIXUL
strat de suprafa sintetizat de bacterii n mediul lor natural. structurat, fibre polizaharidice lungi (dextran sau levan) se poate evidenia doar n microscopie electronic Rol 1.adezina polizaharidic 2.factor de colonizare

Ex. Mutanul ( Streptococus mutans) - ader de smalul dentar cu formarea cariei dentare. Bacteriile produc metabolii acizi, care atac smalul dentar.

PILII COMUNI (FIMBRII)


Pleac din membrana citoplasmic, strbat PC

formaiuni filamentoase, tubulare scurte numr mare (aproximativ 100 - 200 pili). natur proteic (pilein ). determinism cromozomial
mai rar determinism plasmidic.

ntlnii la bacteriile Gram negative

PILII
Rol 1. adezinele proteice ale bacteriilor:

aderarea nespecific pe suprafee inerte, aderarea specific pe mucoase, epitelii, endotelii, hematii, fagocite.

2. factor de patogenitate
Gonococii, E. coli- (ETEC),

3. antigene
posibilitatea modificarea structurii antigenice

PILII DE SEX
formaiuni tubulare lungi numr mic (1-4 ) prezeni la bacteriile G negative au determinism extracromozomial (plasmidic) Rol: conjugarea bacterian

FLAGELI (CILI)

formaiuni tubulare lungi

organite de locomoie ale bacteriilor Structur proteic = flagelin Ultrasctructura la ME: Evidentierea cililor :
corpuscul bazal cilindru proteic (filament axial). n preparate microscopice:

aprox. 20 m lungime/20 nm lime.

pe medii de cultur, prin nsmnarea bacteriilor prin nepare:


bacteriile imobile se dezvolt doar pe traiectul de nepare, cele mobile se dezvolt n tot mediul.

coloraii speciale indirect n preparate native (mobilitatea bacterian) .

Rol: 1. mobilitate, spre locurile unde exist atractani:

chimiotaxie (deplasarea spre substane chimice); fototaxie (deplasare spre locurile cu lumin); etc

2.antigen bacterian - antigenul H,


Weil - Felix a evideniat la Proteus, nsmnat ntr-un punct dintr-un mediu, se dezvolt pe tot mediul sub forma unor vluri concentrice (hauch).

SPORII

forme de rezisten - condiii nefavorabile de temperatur, nutriie, pH, oxigen, form primitiv de difereniere celular la bacterii. Sporularea:
iniial endospori ulteior - spori liberi = exospori

Germinare
Revenire la forma vegetativ cnd ntlnesc condiii favorabile

SPORII

Evidenierea sporilor

coloraii negative: Gram (formaiuni ovalare, necolorate, n interiorul bacteriilor). coloraii pozitive: verde malachit i safranin Protoplastul sporal Peretele sporal Cortexul nveliurile sporale si exosporium

Ultrastructura sporilor (ME) din interior spre exterior:

SPORII

Rol: 1. Forma de rezisten pentru bacterii 2. identificarea bacteriilor. 3. alegerea metodelor de sterilizare i dezinfecie capabile s distrug sporii

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN


Unele boli infecioase - examenul microscopic = singura posibilitate diagnostic.

Ex. Sifilis - Treponema pallidum


NU crete pe mediile de cultur => evidenierea i identificarea n preparat nativ sau n frotiuri

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN


Unele boli infectioase - examenul microscopic ofer informaii preioase

gonoree - Neisseria

gennorhoeae
(gonococ)

imaginea microscopic: diplococi intra i extracelulari.

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN


Unele boli infectioase - examenul microscopic ofer informaii preioase

- tuberculoz, bacilul Koch se dezvolt lent

frotiu din produs patologic: bacili acido alcoolorezisteni, coloraia Ziehl - Neelsen

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN


Unele boli infecioaseinformaii orientative. Frotiu din puroi, colorat Gram: coci Gram pozitivi dispui n grmezi - infecie stafilococic

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN

Unele boli infecioaseinformaii orientative.

Frotiu din puroi, colorat Gram: coci Gram pozitivi, dispui n lanuri infecie streptococic

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN

Unele boli infecioaseinformaii orientative.

Frotiu din sput: diplococi Gram pozitivi capsulai - pneumonie pneumococic

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN

Unele boli infecioase- informaii orientative.

Frotiu din sput: bacili Gram negativi capsulai Klebsiella

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN

Unele boli infecioase- informaii orientative.

Frotiu din LCR: diplococi G negativi - etiologie meningococic.

IMPORTANA CUNOTINELOR DE MORFOLOGIE BACTERIAN

Unele boli infecioase- informaii orientative.

Frotiu din LCR: diplococi G pozitivi capsulai - etiologie pneumococic.

Metabolism bacterian
Dr. Carmen Costache

METABOLISM BACTERIAN
Planul cursului

Definiie,
Anabolism, Catabolism

Efectul unor substane chimice


O2
Clasificare

Efectul factorilor fizici asupra dezvoltrii bacteriene


Efectul Efectul Efectul Efectul Efectul temperaturii pH-ului presiunii osmotice radiaiilor deshidratrii

CO2

Nutriia bacterian Bacteriile de importan medical Metabolismul energetic bacterian Curba de multiplicare (cretere) a bacteriilor

Metabolism bacterian

Definiie:
Suma tuturor proceselor chimice

1. Anabolism: Sinteza de compui compleci, cu consum energetic. 2. Catabolism: - descompunerea compuilor compleci - producere de energie

Efectul factorilor fizici asupra dezvoltrii bacteriene Efectul temperaturii dezvoltare bacterian

izvoarele cu ap fierbinte din Yellowstone National Park 120C. Soluii apose pn la -20C, Gheari din Antarctica, Congelatoare casnice: 0 C.

Clasificarea bacteriilor n funcie de temperatura de cretere Microorganisme: limite de T, definite prin 3 valori: T min, T o, T max

T min = < NU se dezvolt T o = cretere i multiplicare optim T max= > NU se pot dezvolta, mor

Clasificarea bacteriilor=f(T)

Criofile Mezofile Termofile

Criofile (fr importan medical) T : 0 20C To: 10-15C Mri, oceane, soluri reci, frigidere Termofile (fr importan medical) T: 45-90C T o: 60-70C Soluri calde, izvoare termale Mezofile - importan medical !!! T o aproape de 37C T: 20-45C

Efectul temperaturii asupra dezvoltrii bacteriene

Inghearea =>
stoparea multiplicrii unor bacterii DAR multe din ele nu sunt omorte la temperaturile din congelatoarele casnice !

Investigarea unei epidemii de toxinfecie alimentar salmonelozic:


Ingheat contaminat cu Salmonella luni de zile inghetata nc avea bacterii vii

In laboratoare bacteriile (tulpini de referin, tulpini izolate de la pacieni)


pstrate pentru studii ulterioare n frigidere/congelatoare.

Efectul pH-ului asupra bacteriilor


pH = concentraia ionilor de hidrogen, [H+] pH optim = neutru (6,8-7) Limite: 6-8


bulion nutritiv: pH = 6,8 !

Acidofile: prefer pH acid


Helicobacter pylori

Alcalifile: prefer mediile alcaline


Vibrio cholerae: pH > 8

Efectul presiunii osmotice asupra bacteriilor


Apa srat - hiperton => ucide multe microorganisme. Majoritatea: soluii izotone NaCl exist n natur (concentraii variabile)

Clasificarea bacteriilor n funcie de concentraia de sare tolerat

7,5% NaCl (Chapman = mediu selectiv)

ex. Staphylococcus crete pe mediu cu

Halotolerante = concentraii moderate de sare

Halofile = necesit 15-30% NaCl

Efectul presiunii osmotice asupra bacteriilor

Saramura: folosit pentru conservarea alimentelor DAR Stafilococi- halotolerani=> contaminare => stricarea alimentelor Levurile i mucegaiurile tolereaz presiuni osmotice crescute => cresc pe carne, gemuri, etc.

Efectul radiaiilor asupra bacteriilor

UV, gamma bactericide

Mecanism

Bacterii din aer Suprafee, inclusiv suprafaa apei Instrumentar medical (raze gamma)

Energia radiant => nucleoproteine =>dimeri de timin lezare celular => moarte Penetrare redus => aplicaie limitat n sterilizare

Efectul desicaiei (deshidratarea, uscarea)

Desicaia = letal pentru bacterii Practic: conservarea alimentelor

Efectul desicaiei (deshidratarea, uscarea)

Revers: persistenta microorganismelor in picaturi mici de apa (aerosoli) => afectiuni cu poarta de intrare respiratorie !

Efectul unor substane chimice asupra bacteriilor


Dezinfecia: efectul substanelor chimice folosite pe suprafee Antisepsia: efectul sustanelor chimice folosite pentru decontaminarea esuturilor.

Molecule chimice folosite de bacterii pentru cretere i dezvoltare: CO2 and O2

CO2 - bacterii capneice

5-10% CO2 termostate cu atmosfer de CO2 E.g. Neisseria gonorrheae (gonococci)

Clasificarea bacteriilor n funcie de efectul oxigenului asupra lor

Obligat aerobe = strict aerobe Obligat anaerobe = strict anaerobe Aerob facultativ anaerobe Microaerofile Anaerob-aerotolerante

Clasificarea bacteriilor n funcie de efectul oxigenului asupra lor


Obligat aerobe

Oxigenul molecur (O2) indispensabil pentru cretere Acceptorul final de electroni n lanul respirator: oxigenul Respiraie => energie
Ex. Mycobacterium tuberculosis; genul Bacillus

Clasificarea bacteriilor n funcie de efectul oxigenului asupra lor


Obligat anaerobe

O2 = toxic fermentaie => energie


Ex. Clostridium spp.

Clasificarea bacteriilor n funcie de efectul oxigenului asupra lor


Aerobe facultativ anaerobe

Cresc n prezena SAU absena O2 respiratie (aerob, anaerob) sau fermentaie => energie
Ex. Enterobacteriile

Clasificarea bacteriilor n funcie de efectul oxigenului asupra lor Microaerofile


Necesit O2 conc.< conc. atmosferic O2 n concentraia atmosferic = toxic Respiraie => energie Ex. Neisseria spp. (gonococci, meningococci)

Clasificarea bacteriilor n funcie de efectul oxigenului asupra lor

Anaerob-aerotolerante

pot crete n prezena O2 DAR Fermentaie => energie Ex. Streptococcus Toate organismele care cresc n prezena O2 au superoxid dismutaz.

Clasificarea bacteriilor n funcie de efectul oxigenului asupra lor

Obligat anaerobe (Clostridium) NU au

superoxid dismutaz catalaz i/sau peroxidaz, => sunt supuse aciunii radicalilor liberi rezultai n prezena oxigenului, pe care nu au cum s i neutralizeze => efect letal asupra bacteriilor

Aciunea superoxid dismutazei, catalazei i peroxidazei neutralizeaz radicalii de oxigen care sunt generai inevitabil n prezena O2 n orice sistem viu.

Nutriia bacterian
Sursa de energie
Sursa de C:
Bacterii C autotrofe: CO2 fr importan medical.

bacterii chimioorganotrofe substane chimice organice

Bacterii C heterotrofe

Substane chimice organice Importan medical

bacteriile fototrofe - lumina bacterii chimiotrofe reacii chimice de oxidoreducere bacterii chimiolitotrofe substane chimice anorganice

Substante chimice organice:

Saruri, microelemente

Apa

Nutriia bacterian

Bacterii prototrofe: multiplicare pe un mediu sintetic minimal (slbatice) Bacterii auxotrofe


selectate n evoluie au pierdut 1-2 ci metabolice nu se multiplica pe medii sintetice minimale necesit factori de cretere ~ vitamine bacteriene (Nu pot fi sintetizai de bacterii)

ex. vitamine propriu-zise: K, B (B1, B2, B6, B12)) extract de drojdie snge pentru bacterii pretenioase nutritiv (streptococi, gonococi, meningococi) Factor X, V pentru hemofili

Bacteriile paratrofe

parazitism intracelular: Rickettsia, Chlamydia.

METABOLISMUL ENERGETIC BACTERIAN

2 modaliti principale de producere a energiei:


respiraia fermentaia

1. Respiraia (metabolism energetic respirator) lan transportor de electroni; fosforilare oxidativ = aerob lan transportor de electroni, fosforilare anoxibiotic = anaerob 2. Fermentaia (metabolism energetic fermentativ)

Dup natura produilor rezultai => diferite tipuri de fermentaie

Alcoolic Lactic acid mixt Acetoinic Propionic Butiric

Tipuri de fermentaie

Fermentaia alcoolic => alcool etilic;

la drojdii, levuri (Sacharomyces cerrevisiae) => fermentaia vinului, berii.

Tipuri de fermentaie

Fermentaia lactic => acid lactic


Ex: streptococi, lactobacili

Normal flora of the vagina = lactobacilli

Tipuri de fermentaie

Fermentaia acid mixt => acid lactic, succinic, formic


Enterobacterii evideniata prin reacia rou metil.

Fermentaia acetoinic: acumulare de acetoin i butilen-glicol


Klebsiella evideniata prin r. Voges Proskauer.

Tipuri de fermentaie

Fermentaia propionic => acid propionic


Corynebacterium, Neisserria

Fermentaia butiric => acid butiric, acid caproic, acid amilic.


Clostridium i ali anaerobi.

Aplicabilitate practic => diagnosticul de laborator (identificarea bacteriilor reacii chimice) !


Reacia Voges Proskauer

Reacia rou metil

CRETEREA I MULTIPLICAREA BACTERIILOR

temperatur i nutriie optime =>

parental => 2 celule fiice identice Creterea i diviziunea unei celule = ciclul celular Creterea i multiplicarea unei populaii bacteriene = curba de cretere.
cu parentalul identice ntre ele.

bacteriile cresc i se divid.

Curba de multiplicare (cretere) a bacteriilor

n mediu de cultur lichid.

Perioadele (fazele) curbei de cretere: Faza de laten - lag Faza de multiplicare logaritmic - log Faza staionar Faza de declin

Curba de multiplicare (cretere) a bacteriilor

Faza de laten (lag)


numrul bacteriilor = nr. Bacteriilor inoculate NU se divid cresc n volum sunt n stare de adaptare metabolic sunt induse enzimele necesare degradrii substratului

Faza de multiplicare logaritmic (log)


nr. bacteriilor crete n progresie geometric sunt tinere, active metabolic sunt sensibile la aciunea AB, factorilor fizici i chimici utilizate la prepararea de antigene bacteriene, vaccinuri.

Curba de multiplicare (cretere) a bacteriilor

Faza de ncetinire a ritmului de multiplicare


sfritul perioadei logaritmice consum substane nutritive, O2 acumulare toxice => supravieuire

Faza staionar

Numr constant reprogramat activitatea metabolic sintetizeaz proteine de supravieuire sporularea devin mai rezistente la AB.

Curba de multiplicare (cretere) a bacteriilor

Faza de declin

Bacteriile mor cu o rat ridicat modificate morfologic: btrne (perete celular gros), forme aberante, globuloase starea fiziologic de rezisten la stres rezistente la aciunea factorilor fizici, chimici, la antibiotice.

Importana cunoaterii metabolismului bacterian


Clasificarea

Utilizarea bacteriilor:

Identificarea bacteriilor

preparare vaccinuri, obinerea de antigene bacteriene, n industria alimentar (lactate, pine, alcool), n cercetarea fundamental mediu.

Multiplicarea bacteriilor pe mediul solid => o colonie. Colonie = populaie bacterian pur din punct de vedere genetic deoarece provine de la un singur parental.

GENETIC BACTERIAN I

Dr. Carmen Costache

Planul capitolului
Ereditatea = Metabolismul ADN-ului bacterian Variabilitatea Rolul materialulul genetic extracromozomial
Mutaia Transfer de material genetic

Planul cursului

EREDITATEA - Metabolismul ADN-ului


Introducere - Dogma centrala Structura ADN Codul genetic Materialul genetic la bacterii Replicarea ADN
Transcriere Traducere Gene Operoni
Genotip Fenotip

Cromozomial Extracromozomial (Plasmide, Bacteriofagi) Repararea leziunilor ADN

INTRODUCERE
Toate organismsmele
au materialul genetic reprezentat de ADN si ARN (Avery,1944, pneumococ) folosesc aceleasi nucleotide purine:

pirimidinice:

Adenina (A), Guanina (G); Citozina (C), Timina (T) Uracil (U)

Genetica= Ereditate + variabilitate


Ereditatea
Conservarea i transmiterea fidel a caracterelor unei specii la descendeni Stabilitatea f (ADN ) ~ metabolismul ADN

Genotipul = totalitatea informaiei genetice Exprimarea fenotipic:


informaie genetice-ADN => ARN => proteine

replicarea semiconservativ repararea leziunilor ADN, restricie i modificare transcrierea traducerea informaiei genetice n proteine.

reproducere asexuala:

Fiziune binara

Dogma centrala ADN-ul este depozitarul informatiei genetice transcrisa in ARN si apoi in proteine la nivelul ribozomilor
Exceptie: retrovirusurile - Reverse Transcriptaza: ARN => ADN
(Avery 1944, pneumococ)

Variabilitatea

Modificare caractere fenotipice microorganism



deosebesc
descendenii de parental descendenii ntre ei.

St la baza evoluiei Se produce prin modificri n genotip,


la nivel molecular. Verticale: Mutatie Transferului orizontal al ADN-ului:
transformare, transpozitie, transductie, conjugare

STRUCTURA ADN
(Watson &Crick 1953)
Chimic = acid nucleic
schelet zahr - fosfat,
5 -> 3 3-> 5

i modelul replicrii semiconservative

2 catene polinucleotidice => dublu-helix

baze azotate

purinice adenin, guanin pirimidinice (timin, citozin ) legturi de H, pe baza complementariti: (A=T; C=G).

Perechile de baze succesive => dublu helix ARN Zahar: riboza Uracil <= Timina

STRUCTURA ADN

ADN
Functional (unitati de informatie genetica)
codon (ex. CCA) => gene => loci => Genom Uman: perechi de baze 3.3 x 109 ~ 21.000 gene Bacterii ~
perechi de baze: mil-5 mil 1000-5000 gene

STRUCTURA ADN - Codul genetic


Ordinea bazelor azotate n molecula de ADN Codon secven de 3 baze azotate-nucleotide (ex.CCA), specific un anumit amino acid. 4 nucleotide, (4 3) = 64 codoni,
61 specific aminoacizi 3 = codoni stop TAA, TAG Degenerat Ex. Prolina (Pro) CCA, CCC, CCG, CCT

Exprimare fenotipica a informatiei genetice: ADN => ARN => AA - proteine

Genotip => Fenotip


Genotip = informatia codificata
descendentilor

stocata in ADN , mostenita, transmisa


instructiuni Limbaj codificat = codul genetic copiat diviziune celulara control Formare de macromolecule proteice, Reglarea metabolismului.

Fenotip = manifestarea fizica a acestei


informatii

STRUCTURA ADN
Molecula de ADN
continu din punct de vedere chimic. Segmentat- funcional = gen. structurale reglatoare secvene semnal.

A) Cromozomial - nucleoid B) Extra-cromozomial



Plasmide Bacteriofagi (fagi) Transpozoni

Repliconi: Nucleoid, plasmide, fagi

A. Plasmide 1. Portiuni mici de ADN dublu catenare, circulare 2. Repliconi (independent de cz) 3. 2 - 30 gene Plasmide conjugante
F factor pilul de sex R factor - multiple drug resistance (MDR plasmid); Hfr integrate in cz = recombinare frecventa => prin conjugare => raspandire

The above is from

http://www.biosci.uga.edu/almanac/bio_103/notes/may_30.html.

structura bacteriofagi

Structure of phage T4

B. Bacteriofagi 1. Xl74 primul secventializat 2. litic => bacterioliza

3. lizogenic => profag - persistenta


Trigger => bacterioliza

Fara incorporarea ADN-ului exogen

REPLICAREA ADN
diviziunea etape: iniiere, alungire, terminare. despiralizarea moleculei superhelicoidale

de ADN, realizat de ADN giraza (topoizomeraza 2). punct de origine - zona ori , 1-2 furci de replicare. direcia 5' - 3'. ter, 180, fa de punctul ori.

Replicarea ADN cromozomial i plasmidic: bidirecional semiconservativ


caten parental + caten progen

REPARAREA LEZIUNILOR ADN

erori de replicare ADN polimeraza

funcie de corectare i exonucleazic verific complementaritatea bazelor inserate i ndeprteaz bazele incorect inserate

REPARAREA LEZIUNILOR ADN


Exist sisteme de reparare:
constituitive sau inductibile (SOS) prerepliactive, replicative, postreplicative fidele, infidele (ex.SOS) directe ( act. direct pe leziune), indirecte (prin excizie)

REPARAREA LEZIUNILOR ADN Sistemul S.O.S (save our sequence) codificat de un complex de gene, normal represate. leziuni ADN necorectate => se activeaz. infidel supravieuirea bacteriilor modificate morfologic i funcional

Sistemul de modificare si restrictie

2 enzime complementare
E de moficare => metilarea nucleotidelor Endonucleaze de restrictie: taie materialul nerecunoscut

Prezervarea ADN-ului original Folosite in ingineria genetica

Gena insulinei umaneHuman insulin gene Gena hormonului de crestere Prepararea antigenelor

Sistemul de modificare si restrictie

Metilarea
Marcarea catenei parentale Gruparile metil adougate dupa replicare

Endonucleazele de restrictie
Taie ADN-ul in fragmente Actiune site-specifica fiecarei endonucleaze in
parte

Molecule santinela => distrug ADN (ex. Viral) ADN-ul metilat este rezistent la restrictie

TRANSCRIEREA INFORMAIEI GENETICE

gene structurale => mARN tradus => lan polipeptidic Etape:


aproape concomitent la nivelul ribozomilor

iniierea, alungirea mARN-ului terminarea transcrierii.

TRANSCRIEREA INFORMAIEI GENETICE Etape:


iniierea, alungirea mARN-ului terminarea transcrierii.

Iniierea transcrierii:

ARN polimeraza, recunoaterea promoterului: ataeaz, despiralizeaz ADN. Alungirea m ARN-ului: copiat o singur caten a ADN-ului: catena pozitiv sau catena sens

TRADUCEREA INFORMAIEI GENETICE = sinteza proteinelor, la nivelul ribozomilor. Etape:


Iniierea Alungirea Terminarea

TRADUCEREA INFORMAIEI GENETICE operonul = unitatea de transcriere a informaiei genetice


Structura operonului gene structurale alturate, codific protein - enzime, implicate n aceai cale metabolic. secvene semnal:
Promoterul-dispus naintea genelor structurale secvena semnal de care se prinde ARN polimeraza. gena reglatoare:
promoter, operator, activator;

la distan fa de genele structurale nu face parte din operon, dar codific proteina reglatoare

TRADUCEREA INFORMAIEI GENETICE operoni


constitutivi inductibili: operonii catabolici, pentru enzimele cilor degradative, represibili: operonii anabolici, pentru enzimele cilor anabolice

Reglai prin mecanisme de control pozitiv i negativ. Biosinteza protein - enzimelor la bacterii este reglat prin:
inducie, represie.

Operon model
Francois Jacob and Jacques Monod

Structure of a typical operon. Image from Purves et al., Life: The Science of Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com)

Operonul lactozei
Gene structurale
-Galactozidaza ( Gal => Glu + Lac -Galactozid permeaza (transport activ Lac) -Galactozid transacetilaza

Operonul lactozei
Gena reglatoare => proteina reglatoare
Allosterica Locus activ
recunoaste secvente semnal Interactioneaza cu ADN

Locus efector - leaga efectori (zaharuri, aa)


modificare allosterica Modificarea afinitatii pentru operator Se prinde pe ADN Se desprinde de pe ADN

codifica proteina represoare

Operonul lactozei (catabolic, inductibil).


Gene exprimate doar in prezenta lactozei (inductor)

Represor: legat de operator


( regiune adiacenta genelor structurale) se realizeaza transcrierea - control negativ Nu

Inductor = Lac: se leaga de repressor =>


il tine ocupat Are loc transcrierea inductie prin control negativ (inductibil)

Operonul lactozei

Operonul lactozei
Control pozitiv prin proteina CAP
Dependenta de cAMP fenomenul de diauxie Monod Glu represie catabolica operon Lac http://www.youtube.com/watch?v=T9Wszg7F hxE

Operoni Biosintetici (represibili)


Operonul Triptofanului Gene structurale: 5 => 3 enzime Secvente semnal

Gena reglatoare => represor Control


Negativ Atenuare

promoter operator

Operonul Triptofanului
Control negativ
Nu Trp => represorul nu represeaza operatorul => operatorul transcrie genele structurale => se sintetizeaza Trp Trp in mediu = co-repressor Trp legat de represor => modificare conformatie Se leaga de operator Impiedica functionarea ARN polimerazei => stop
sinteza

Operonul Triptofanului
Control prin atenuare = atenuarea
transcrierii in functie de cantitatea de Trp din mediu <iframe width="420" height="315" src="http://www.youtube.com/embed/SiO AQ-VjQQY" frameborder="0" allowfullscreen></iframe>

GENETIC BACTERIAN II

Dr. Carmen Costache

Planul capitolului
Ereditatea = Metabolismul ADN-ului bacterian Variabilitatea Rolul materialulul genetic extracromozomial
Mutaia Transfer de material genetic

Planul cursului
VARIABILITATEA
Mutatia Definitie, Proprietati Mecanism molecular Tipuri de mutatii Tipuri de mutante Soarta mutantelor in natura

Variabilitatea
= modificare caractere fenotipice
microorganisme
deosebesc descendenii de parental descendenii ntre ei. st la baza evoluiei se produce prin modificri n genotip, la nivel molecular.

MUTAIA definitie

Modificare a unui caracter fenotipic

modificri n secvena de nucleotide cromozomul bacterian, plasmide. spontan brusc transmisibil la descendeni

(fenotip diferit de parentali ) =>multiplicare => clone mutante

Rezultatul: Mutant

MUTAIA proprietati
Rata mutaiei: o celul din 1 milion - 10 milioane
Constanta: specie, caracter Probabilitatea 2 mutaii concomitente: 10-12 pana la 10-14, imposibil - ordinul de multiplicare a bacteriilor este de 109. Frecventa Proportia de mutantii din populatie F (rata, viteza mx, etapa multiplicarii)

Rata mutatiei Frecventa mutatiei

Momentul e important !

Momentul este important !


perioada logaritmica in perioada stationara
Numar mare de descendenti ai celulei mutante Numarul descendentilor mutanti mai mic DAR rata mutatiei este crescuta. Sistem SOS Proteine de supravietuire (defecte) Predispune la mutatii pentru diverse caractere

Caracterul spontan al mutatiei


Nu se datorete factorilor de mediu, Testul insamantarii replicative (Lederberg) Testul fluctuatiei (Luria Delbruck)
S- bacteriofag => R-bacteriofag S- streptomicina => R- streptomicina DAR mediu = rol de selectare

Testul insamantarii replicative (Lederberg)

Testul fluctuatiei (Luria Delbruck)



A) Daca mutatia ar aparea sub influenta factorilor de mediu, in fiecare placa ar fi aproximativ acelasi numar de celule mutante. B) Daca mutatia ar aparea spontan in timpul diviziunii celulare anterioare insamintarii pe placa, numarul de clone mutante va fi foarte variabil intre placi.

Tipuri de mutatii
Criterii de clasificare
Modificarile la nivelul genotipului mecanismele moleculare ale mutatiei Efectul asupra secventei de nucleotide Efectul asupra polipeptidului codificat Efectul asupra fenotipului

Tipuri de mutatii
Mecanismele moleculare ale mutatiei

Substitutii de baze azotate; Deletii de baze azotate Aditii de baze azotate Inversii de baze azotate Cauza:

O pereche de baze azotate (bp) substituita de alta A=T cu C=G

Cel putin 2 bp isi schimba pozitia cu 180. defecte de replicare, reparatii insuficiente/incorecte

Tipuri de mutatii
Mecanismele moleculare ale mutatiei
Substitutia tranzitie,

transversion Datorata

purinica purinica Pirimidinica pirimidinica purinica pirimidinica tautomerismului

corect : A-T, G-C gresit :T-G or A-C

replicare eronata ADN

Tipuri de mutatii
Mecanismele moleculare ale mutatiei - amplitudine
punctiforme, extinse Punctiforme predominant
Substitutie micro-deletii micro-aditii Afectata o pb,

Exinse,

macroaditie, macrodeletie inversie Mai multe pb.

TIPURI DE MUTAII

Efectul asupra polipeptidului codificat


Mutaii tcute
=> codoni cu acelai sens => neexprimat fenotipic.
=> ali codoni => ali aminoacizi.

Mutaii sens schimbat

Consecina diferit, dup localizarea aminoacidului n structura proteinei.

Mutatii cadru frameshift


Mutaii non sens => codoni stop.
pot fi letale pentru bacterie.

TIPURI DE MUTAII

Efectul asupra polipeptidului codificat


Mutatii cadru frameshift

initial : AUGUUUCAUAGUGGU
AUG N Formil Metionine UUU Fenil Alanine CAU Histidine Microdeletie: C AGU Serine GGU Glycine

modificata: AUGUUUAUAGUGGUG;
AUG N Formyl Methionine UUU Phenyl Alanine AUA Isoleucine GUG Valine

TIPURI DE MUTAII

Efectul asupra fenotipului


Comparnd fenotipul mutantului cu cel al bacteriei parentale:

1. Mutaii nainte: dobndesc proprieti noi fa de


parental

2. Mutaii napoi

Revers mutaie: revenirea la fenotipul bacteriei slbatice-rar Supresoare (intragenica, intergenica)

3. Mutaiile condiionat letale - dirijate


(ex. mutaii termo - sensibile).

TIPURI DE MUTANTE

Mutante morfologice Mutante de cultur Mutante metabolice Mutante antigenice Mutante de patogenitate: Mutante de rezisten la antibiotice Mutante de rezisten la bacteriofagi litici Mutante duble: bacterii acapsulate devin nepatogene Mutante tcute (silenioase) Mutante condiionat letale:

TIPURI DE MUTANTE
Mutante de patogenitate:
patogenitate crescut, care se rspndesc n populaie patogenitate sczut, folosite la prepararea vaccinurilor.

TIPURI DE MUTANTE
Mutante condiionat letale:
ex. mutantele termo-sensibile, ale virusurilor gripale, folosite pentru prepararea vaccinului antigripal
Proteina - AA schimbat functioneaza normal la 32C dar nu la 37C
(alterarea configuratiei la T crescuta).

vaccin experimental

37C => cannot infect the lungs and cause pneumonia, but 32C (nose) replicate and induce immunity

TIPURI DE MUTANTE
Mutante de rezisten la antibiotice prin modificarea :
proteinei de transport a antibioticului n bacterie, a intei de aciune; a afinitii enzimei de inactivare a AB: ex. modificarea lactamazelor (penicilinaze, cefalosporinaze), care inactiveaz lactaminele conduce la dobndirea rezistenei bacteriilor la lactamine (peniciline, cefalosporine); modificri cantitative: ex. lactamazele devin din inductibile, constitutive.

TIPURI DE MUTANTE
Mutante de rezisten la antibiotice

TIPURI DE MUTANTE
Mutante de rezisten la antibiotice

Soarta mutantelor in natura


tulpin, clon nou
eliminat se multiplic paralel cu tulpina parental se multiplic excesiv fa de tulpina parental (condiii de mediu favorabile clonei modificate i
nefavorabile tulpinii parentale (ex. mediu cu antibiotic).

GENETIC BACTERIAN III

Dr. Carmen Costache

Planul capitolului
Ereditatea = Metabolismul ADN-ului bacterian

Variabilitatea
Mutaia

Rolul materialulul genetic extracromozomial

Transfer de material genetic Conjugare Transformare Transductie Transpozitie (TGE)

Planul cursului
Conjugare
Plasmide

Transformarea Transductie
ADN liber Bacteriofagi Transpozoni = elemente genetice mobile (TGE)

Transpozitie

CONJUGAREA BACTERIANA

= transfer de material genetic (plasmidic,

cromozomial) ntre bacterii donatoare (D) i receptoare (R) prin: pili de sex G(-) feromoni G(+) Plasmide
minicromozomi

Plasmide
Gene de control a replicrii proprii Gene de interaciune cu alte molecule de ADN Sistem genetic de fertilitate sau de transfer
plasmide conjugante: au operonul Tra plasmide neconjugante nu au operon Tra plasmide episomale: capabile s existe autonom i/sau integrat. recombinare situs specific

Gene pentru proprieti fenotipice bacteriene:


gene structurale
rezisten la antibiotice, la sruri de metale grele (plumb, mercur, argint, arsen), la detergeni, radiaii, bacteriofagi, colicine structuri bacteriene: ex. pili la tulpini enteropatogene proprieti metabolice codific factorii de patogenitate

invazivitate toxine bacteriene ex.

Plasmide
criptice,
nu codific caracter bacterian, intervin n transfer de material genetic

Importante: plasmidele F, R, col. Plasmidele F

Episomale, criptice Recombinare omoloaga se poate integra n cromozomul bacterian rar o bacterie din 105 bacterii F+. Rezult o bacterie Hfr

CONJUGAREA BACTERIANA

Plasmidele R (de rezisten la AB)

se transmit epidemic n populaiile bacteriene. pe vertical pe orizontal - conjugare bacterian, ntre specii / genuri diferite: ex. de la bacil coli la bacil dizenteric Conjugarea R+-R mecanismul primordial de dobndire a rezistenei fa de antibiotice, la Gram negative rezistena n bloc fa de antibiotice Bacteriile multiplu rezistente la antibiotice se selecteaz - mediul spitalicesc

Plasmide
Plasmidele col Bacteriocinele
gene pentru sinteza de colicine - bacteriocine proteine de tip antibiotic B.productoare sunt imune meninerea microbiocenozelor normale ale organismului

Conjugarea la bacteriile Gram pozitive

feromoni de sex
produsi de bacterii receptoare Structura chimica - peptidic Efect afrodisiac Produsi de bacteriile donatoare

proteine de ataare

Transformarea
transfer de ADN liber natural
de la o bacterie donatoare (D)- exogenot la o bacterie receptoare (R) - endogenot autoliza bacteriilor extracie chimic

artificial

fenomen rar ntlnit n natur

Transformarea

Griffith - 1928 virulena pneumococilor

Transformarea
Proteinele rec. A
gsirea zonei de omologie ntre exo i endogenot, ruperea n anumite poziii i reunirea catenelor, endogenotul primete de la exogenot gen activ
pentru capsul

Consecin: integrarea

bacterii Gram pozitive si negative fungi

Transformarea
starea de competen
accept fragmentul de ADN, Tranzitorie 5-15 minute alterez suprafaa bacteriei receptoare

protein de competen

Etapele transformrii
Absorbia
fragmentului de ADN pe suprafaa celulei receptoare ADN-ului n bacteria receptoare Taiere, unire ADn exogenot-endogenot recombinare omoloaga, doar ntre celule ale aceleai specii sau specii strns nrudite

Penetrarea Eclips Mecanism

Rolul natural al transformrii


m odificarea structurii antigenice a
pililor gonococilor i evoluia cronic a gonoreei (uretrita gonococic)

TRANSDUCTIA

BACTERIOFAGI entiti infecioase acelulare Virusuri ale bacteriilor.

Structura:

multiplicare => doar prin

o molecul de acid nucleic, protejat de proteine - capsida.

utilizarea mainriei de sintez a celulei parazitate (bacteria)

Bacteriofagi
Form : lineari - cilindric filamentoi icosaedrici Bacteriofagii cu cap i coad ROL: Transducia

Conversia lizogen

transfer de material genetic prin bacteriofagi conferirea unor proprieti bacteriene

TRANSDUCTIA
generalizat : prin bacteriofagi litici recombinare omoloag
orice fragment al cromozomului bacterian.

localizat (specific): doar anumite gene,


alturate bf. n cz. bacterian. prin bf. temperai:

recombinare situs specific Profag


Excizia incomplet => genom fagic defectiv

ex. bacteriofagul al E. coli

TRANSDUCIA

Conversia lizogena

proprieti fenotipice prin bacteriofag temperat transmisibil la descendeni Factorii de patogenitate - tox ine bacteriene :

toxina difteric - bacteriofagul tox, la bacilul difteric eritrotoxina - toxina scarlatinoas, la streptococul hemolitic fibrinolizina stafilococic toxina Shiga-like, la bacilul coli (asemntoare toxinei
bacilului difteric shiga)

Recombinarea
Omoloaga Situs specifica Situs nespecifica (ilegitima)

Recombinarea - In timpul trasnferului de material genetic

Recombinarea
Omoloaga: noul ADN inlocuieste ADN-ul
existent
Depinde de proteina rec A Intre secvente identice sau foarte asemanatoare de ADN Mecanismul molecular: - Taiere - Replicare segmentara a ADN-ului - Unirea catenelor noi de cele vechi - Rezolvarea: reunirea capetelor prin ligaze Efect: detectabil / nedetectabil

Recombinare omoloaga
apare in transformare integrarea plasmidelor F n cromozomul
bacterian - conjugare cointegrarea plamidelor
Ex. Variatia antigenica pili gonococci

Recombinarea- Situs specifica


Intre molecule
diferite de ADN care au in comun o secventa de 10-20 nucleotide
Ex cz + plasmida ; cz + fag

Rezultatul:

Inversia => modificarea antigenului H la enterici Transpoziia


(variatia de faza) alt consecin a recombinrii situs specifice

Secvente repetitive directe (repetitii directe), Secvente repetitive inversate (repetari inversate) => inversie

Recombinarea
Situs nespecifica (nelegitima)
Insertii / deletii ambele Pl + cz; Bf + cz

TRANSPOZIIA (Vezi curs TGE)

ROLUL MATERIALULUL GENETIC EXTRACROMOZOMIAL

variabilitate a caracterelor
bacteriene, proprieti noi,
patogenitatea bacterian, modificarea structurii antigenice, dobndirea unor proprieti metabolice, rezistena la antibiotice/ali factori
antibacterieni

PATOGENITATE BACTERIAN
A. Toxine bacteriene 1. Codificate de bacteriofagii tem perai :
toxina difteric codificat de bacteriofagul tox, la bacilul difteric eritrotoxina - toxina scarlatinoas, la streptococul hemolitic fibrinolizina stafilococic enterotoxina stafilococic toxina Shiga-like, la bacilul coli toxina exfoliativ a stafilococilor toxina bacilului crbunos toxina bacilului tetanic hemolizina bacilului coli enterotoxina tulpinilor enterotoxigene de E. coli

2. Codificate de plasm ide :


PATOGENITATE BACTERIAN
B. Adezine bacteriene - plasm ide , proprietatea de aderare specific de epitelii, mucoase, prin pili de aderare,

tulpinile enteropatogene ale bacilului coli, care ader prin pili de mucoasa duodenojejunal, tulpinile uropatogene ale bacilului coli, care ader de mucoasa urinar.

C. Invazivitate bacterian- plasm ide, capacitatea de invazie i de colonizare a epiteliilor:

ex. invazia epiteliului colic de ctre bacilul dizenteric tulpini enteroinvazive de E. coli (EIEC).

REZISTENA LA ACIUNEA UNOR FACTORI DE MEDIU

Plasm idele capacitatea de rezisten n diverse condiii


de mediu: a) Rezisten la antibiotice
exist peste 60 plasmide cu gene de rezisten la lactamine; (Plumb, mercur, argint, arsen), utilizate ca antiseptice, rezultnd bacterii rezistente la antiseptice;

b) Rezisten la sruri de metale grele

c) Rezistena la detergeni; la radiaii; la bacteriofagi; la


colicine

TRANSPOZITIA
ELEMENTE GENETICE MOBILE

JUMPING GENES TRANSPOSABLE GENETIC ELEMENTS (TGE)


Dr. Carmen Costache

Planul cursului
TGE Definitie TGE clasificare Transpozitia Transpozoni

Definitie Nespecifica/Situs-specifica Clasificare, exemple

Integroni Retroni Rolul materialului extracromozomial

TGE Segmente mobile de ADN Responsabile de

transpozitie Dependente de un replicon


Lipsite de fgmori

La capete au
ITR (inverted terminal repeats) Structura de atasare 5-9 bp

TGE - clasificare
1) Transpozoni (Tn) 2) Integroni
Zone de ADN care primesc fgm de ADN, gene

3) Retropozoni (retroni)
Fragmente mobilizabile de ADN Transcrise prin ARN Au ADN reverse transcriptaza. ARN-ADN hibrid

reverse transcriptase

Transpozitia

Mutarea TGE
Pe aceasi molecula ADN in pozitii diferite Intre molecule de ADN diferite Cromozom bacterian plasmida Cromozom bacterian bacteriofag

Transpozitie Nespecifica / Site specifica ilegitima / legitima


ITR scurte ITR lungi Zona tinta de atasare: Zona tinta de atasare:
oriunde Transpozon inserat in zone diferite ale moleculei de ADN.

specifica transpozon inserat doar in zone specifice ale moleculei de ADN, Recombinare situs specifica.

Transpozoni (Tn):

3 clase

Clasa I : Cut & Paste (nereplicativa)


Tn Simpli = Secvente de insertie -IS Tn compusi

Clasa II : Copy & Paste (replicativa)


Gena transpozaza cointegrat-rezolvaza 2 IS Gene de rezistenta antibiotice Clasa III : Copy & Paste(replicativa)
Bacteriofagii mutatori

Clasa I : Secvente de insertie -IS


800-1400 bp IS = ITR + gena transpozaza + ITR
Secvente de nucleotide identice sau f.asemanatoare Implicate in integrarea in ADN receptor. Efect: mutatie

Clasa I: Transpozoni Compusi


Domenii: 1 la fiecare capat ITR 2 gena transpozaza 3 gene structurale Rezistenta la antibiotice "r" Kanamicin, Cloramfenicol, Lactamine, Sulfamide Factori de patogenitate e.g.: toxine - enterotoxin

Exemple de Transpozoni de rezistenta la antibiotice

Kanamicina = K Tn Chlormafenicol = Tn 9 -lactamine: Amp transposon: AmpR Tetraciclina: Tc transposon: TcR

Transpozoni Clasa II
Copy & Paste =
transpozitie replicativa

E: cointegrat-rezolvaza
fuziunea a 2 plasmide, una dintre
acestea deinnd un transpozon Replicare 2 plasmide separate Fiecare are transpozon Cu gene de rezistenta

Plasmidele R = colectie
de Tn cu gene r

Transpozoni Clasa III


= bacteriofag mutator (Mu)

Capacitate mare de transpozitie replicativa. ~ 100 copii => mutatii cu frecventa ridicata
Inactivarea genei Activarea genei alaturate Deletii Insertii

Integroni
Secventa de ADN stabila
Pe plasmide Pe cromozom

achizitioneaza Tn (gene r)

Integreaza in casete gene de rezistenta pentru diferite tipuri de antibiotice Prin recombinare site-specifica 3 tipuri de integraze Casetele de gene cu gene de R la AB exista autonom in citoplasma.

Casetele de gene =>


Mecanism pentru Rezistenta multipla la antibiotice,

Mechanisms of antibiotic resistance

Retronii (retropozoni)

secvente de ADN care codifica o revers transcriptaza HIV = structura de retropozon (si alte retrovirusuri) Asociate frecvent cu ADN profag Exista la multe bacterii

Efectele revers transcriptiei


Introducerea unui ADN modificat Defecte punctiforme dar potential
semnificative Responsabile pentru schimbari importante in genomul prokariot Generarea multor copii de secvente de ADN modificat Cresc frecventa mutatiilor spontane

HIV si alte retrovirusuri


Au structura de retroni. RT = revers transcriptaza LTR = long terminal repeats
(repetari terminale lungi)

ROLUL MATERIALULUL GENETIC EXTRACROMOZOMIAL

variabilitatea caracterelor bacteriene, proprieti noi:

patogenitatea bacterian, modificarea structurii antigenice, dobndirea unor proprieti metabolice, rezistena la antibiotice/ali factori antibacterieni

PATOGENITATE BACTERIAN
A. Toxine bacteriene 1. Codificate de bacteriofagii tem perai :

toxina difteric codificat de bacteriofagul tox, la bacilul difteric eritrotoxina - toxina scarlatinoas, la streptococul hemolitic fibrinolizina stafilococic enterotoxina stafilococic toxina Shiga-like, la bacilul coli toxina exfoliativ a stafilococilor toxina bacilului crbunos toxina bacilului tetanic hemolizina bacilului coli enterotoxina tulpinilor enterotoxigene de E. coli

2. Codificate de plasm ide :


PATOGENITATE BACTERIAN
B. Adezine bacteriene - plasm ide ,

aderare specific de epitelii, mucoase, prin pili de aderare:


tulpinile enteropatogene ale bacilului coli tulpinile uropatogene ale bacilului coli,

ader prin pili de mucoasa duodenojejunal, ader de mucoasa urinar.

C. Invazivitate bacterian - plasm ide, capacitatea de invazie i de colonizare a epiteliilor:

ex. invazia epiteliului colic de ctre bacilul dizenteric tulpini enteroinvazive de E. coli (EIEC).

REZISTENA LA ACIUNEA UNOR FACTORI DE MEDIU

Plasm idele capacitatea de rezisten n diverse condiii de

mediu: Rezisten la antibiotice

Rezisten la sruri de metale grele

exist peste 60 plasmide cu gene de rezisten la lactamine; Plumb, mercur, argint, arsen - utilizate ca antiseptice,

Rezistena la detergeni; la radiaii; la bacteriofagi; la


colicine

Patogenitate bacterian
Dr. Carmen Costache

Patogenitate bacterian
Planul cursului Patogenitate definitie, proprietati Virulena DL 100%, DL 50% Relaia microorganism organismul uman Postulatele lui Koch/Postulate moleculare Microorganismele i patogeneza Evitarea mecanismelor de aprare a gazdei Producerea infeciei
Exotoxine Endotoxine Flora normal (microbiocenoza) Clasificarea patogenetica a microorganismelor

PATOGENITATE BACTERIAN = capacitatea unui microorganism de a produce o boal infecioas. Relatia: gen sau specie microbian specie animal o specie bacterian mbolnvire la o anumit specie Clasificare/nomenclatura infecii la animale - zoonoze; infecii umane - antroponoze
ex. gonoree, sifilis, febra tifoid

infecii la animale transmisibile la om - antropozoonoze


ex. leptospiroze, bruceloz.

PATOGENITATE BACTERIAN

Virulena

apreciere cantitativ a patogenitii determinat n condiii de laborator efectul microorganismului sau a unui produs al acestuia
n vivo, pe animale de laborator sau n vitro, pe culturi de celule.

Se determin cantitatea cea mai mic de microorganism sau produs, care produce mbolnvire sau moarte pe sistemul de testare biologic. Doza letal (DL) 100% = cantitatea cea mai mic de microorganisme, sau de produs bacterian, capabil s cauzeze moartea tuturor animalelor inoculate.

n practic: DL 50% (diferene mari legate de nivelul rezistenei naturale a animalelor inoculate).

PATOGENITATE BACTERIAN

Virulena

Pasteur: posibilitatea de atenuare a virulenei (Pasteurrella - bacilii holerei ginilor)


ulterior atenuarea virulenei bacilului crbunos => vaccinul anticrbunos. n cadrul unei specii bacteriene exist: tulpini cu virulena crescut: produc boli cu evoluie clinic grav; tulpini cu virulena diminuat: produc forme uoare de boal; tulpini cu virulena atenuat: sunt utilizate n prepararea de vaccinuri.

PATOGENITATE BACTERIAN
Microorganismele patogene produc boal cnd ptrund n organismul uman (pathos = boal; gennan = a produce). Prezena /creterea microorganismelor NU determin ntotdeauna boal !!!!

Relaia microorganism organismul uman

Parazitism

obligatoriu facultativ

intracelular (ex. Chlamydia) in interiorul celulei, n afara celulei/ medii de cultur Origine:

Comensalism: flora normal (microbiocenoza)

mam personal medical/mediu spitalicesc mediu nconjurtor

ex. Staphylococcus, Mycobacterium tuberculosis, Salmonella

Flora normal (microbiocenoza)


Microorganisme comensale = microorganisme care fac parte din flora normal
microorganisme rezidente microorganisme tranzitorii

Microbiocenoza = asociaie bacterii/levuri echilibru Site-uri (habitate)

cavitatea oral & tractul respirator superior (Nazofaringe) intestin piele vagin uretra

PATOGENITATE BACTERIAN
Speciile microbiene patogene pot fi: 1. bacterii cu patogenitate cert (patogeni primari): produc ntotdeauna boal la ptrunderea n organismul uman.
Salmonella tiphy - febra tifoida; Yersinia pestis (pesta, ciuma); Shigella spp. (dizenteria bacilar) Treponema pallidum (sifilis);

PATOGENITATE BACTERIAN

Speciile microbiene patogene pot fi:

2. Conditionat patogeni
Staphylococcus, Candida spp.

Produc imbolnaviri doar in anumite circumstane uneori membri ai florei normale

PATOGENITATE BACTERIAN

Bacterii condiionat patogene


Conditionarea/Oportunitatea:
bacterie, organismul uman, condiiile de ntlnire dintre bacterie i organismul uman.

patogenitate. E.coli - tulpini enterotoxigene (ETEC), tulpini enteroinvazive (EIEC);

Bacterie: achiziia de material genetic, care codific factori de

Gazd:
leziuni preexistente: ex. persoane cu leziuni valvulare, la care Streptococi viridans pot ajunge n snge (ex. dup extracii dentare) i pot produce endocardit.

Circumstane de ntlnire bacterie- gazd:


cantitatea mare de bacterii, bacteriile comensale ajung n alt situs dect habitatul lor natural, prin manopere medicale

PATOGENITATE BACTERIAN

Speciile microbiene patogene pot fi:

3. Microorganisme oportuniste: la persoanele imunocompetente => infecii asimptomatice sau cu evoluie clinic uoar la imunodeprimai => infecii grave, uneori letale.

PATOGENITATE BACTERIAN

Bacterii saprofite triesc n natur ciclul natural al substanelor


Descompunerea organismelor moarte
componente organice => substane chimice anorganice

PATOGENITATE BACTERIAN

Postulatele lui Koch

1. 2. 3.

4.

Un microorganism = agent etiologic dac respect postulatele lui Koch. Agentul etiologic al unei boli infecioase trebuie s fie prezent n toate cazurile de boal. Agentul etiologic trebuie s poat fi izolat pe medii de cultur Agentul etiologic izolat i meninut n laborator n cultur pur trebuie s reproduc infecia prin inocularea la animale de experien, de la care trebuie s fie reizolat pe mediu de cultur. Trecerea printr-o infecie trebuie s conduc n organismul bolnav la instalarea unei imuniti specifice fa de agentul etiologic respectiv.

Postulate moleculare
Descriu factorii de virulen 1. Genele de virulen sau produii acestora trebuie s fie prezeni 2. Prezena genelor de virulen transform un non-patogen ntr-un patogen 3. Genele de virulen trebuie s fie exprimate n timpul infeciei 4. Anticorpii mpotriva produilor genelor de virulen sunt protectori.

Stagiile unei boli infecioase

Transmiterea:
Doza infectant 10-106 organisme

Perioada de incubaie : variabil Perioada de stare Convalescena:


vindecare laten

Microorganismele i patogeneza

Microorganismele i patogeneza
1. Modalitatea de transmitere:
fecal-oral (holera) interuman (tuberculoza) de la animale (rabia) cu ajutorul unor vectori
Insecte artropode (pureci capuse)
ciuma, boala Lyme

Microorganismele i patogeneza Clinic= Perioada de incubatie


2. Aderena
Previne ndeprtarea rapid Frecvent ader cu ajutorul pililor Specificitate
Receptor prezent => infecie NU receptor => NU infecie

Clinic = Perioada de incubatie


3. Colonizarea: multiplicarea i continuarea infeciei
Competiia cu flora normal Factori de rezisten mpotriva colonizrii:

Microorganismele i patogeneza

bila pH-ul acid din stomac peristaltismul intestinal cilii tractului respirator IgA (anticorpi de la nivelul mucoaselor)

Microorganismele i patogeneza Clinic: Perioada de stare


4. Afectarea gazdei
Invazivitate Toxicitate

Interaciunea bacteriilor cu mucoasele. (a) Asociere. (b) Adeziune. (c) Invazia.

Invazia = ruperea barierelor anatomice


1. Piele: rni insecte, vectori 2. Traversnd mucoasele (ex. epiteliul celular intestinal)

Evitarea mecanismelor de aprare a gazdei

1. Ascunderea n celulele gazdei


intracelular: evitarea expunerii la anticorpi

2. Evitarea distrugerii de ctre complement

3. Evitare fagocitozei

Evitarea anticorpilor
1.Variaia antigenic
noi pili

2.IgA proteaze
Neisseria gonorrheae

3. Asemanatoare cu Ag proprii
capsula Streptococcus pyogenes = acid hialuronic, secretat i de esuturile gazdei

Afectarea gazdei (producerea infeciei)

1. Exotoxine
necesit colonizare anterioar (holera) toxiinfecii alimentare chiar i n absena bacteriilor
Botulism toxina Staphylococcus aureus

Sunt inte pentru anticorpii neutralizani


Vaccin

Afectarea gazdei (producerea infeciei)

2. Toxine care afecteaz membranele


Hemolizine Determin liz celular: Streptolizina O Fosfolipaze cliveaz lipidele membranare: Clostridium perfringens gangrena gazoas

3. Superantigene

Superantigene
Hiperstimuleaz sistemul imun
Se leag direct de antigenele de clas II MHC Activeaz limfocitele T

Elibereaz cantiti importante de interleukine (1,2)


Determin oc => Simptome de oc toxic febr, grea, diaree, vrsturi Insuficien de organe, colaps circulator Cauz de sindrom oc toxic (TSST) Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes

Afectarea gazdei (producerea infeciei)

4. Endotoxine parte structurala a celulei bacteriane - LPS


doar la bacteriile Gram negative

ENDOTOXINE
n peretele celular al G(-) LPZ Lipid A Cromozom Toxicitate scazut (MLD~100 ) febr, oc NU vaccin Stabile la 100C pentru 1 h Sepsis

EXOTOXINE
Secretate de unele G(+) i G(-) Polipeptide Plasmide/bacteriofagi Toxicitate nalt (MLD~ 1 g) Efecte variate Anticorpi = antitoxine anatoxine => vaccin Distruse la 60C (excepie enterotoxina stafilococic) Tetanos, botulism, difteria, etc.

ENDOTOXINE
Mecanismul de aciune - nespecific activare a diverselor celule (monocitelor, macrofagelor, limfocitelor, plachetelor sanguine i celulelor endoteliale) stimuleaz producerea citokinelor proinflamatorii
febr, prin aciunea pirogenului endogen ( IL1) modificri vasculare: vasodilataie, cretera permeabilitii vasculare n doze mari, endotoxina determin oc toxic,
acioneaz identic

coagulare intravascular diseminat, semne de suferin organic

Potential: n orice infecie cu bacterii Gram negative

ENDOTOXINE

PATOGENITATE BACTERIAN
A. Toxine bacteriene 1. Toxine bacteriene codificate de bacteriofagii temperai:

toxina difteric codificat de bacteriofagul tox, la bacilul difteric eritrotoxina - toxina scarlatinoas, la streptococul hemolitic fibrinolizina stafilococic enterotoxina stafilococic toxine, la bacterii din genul Clostridium toxina Shiga-like, la bacilul coli (asemntoare toxinei b. dizenteric Shiga)

2. Toxine bacteriene codificate de plasmide:


toxina exfoliativ a stafilococilor toxina bacilului crbunos toxina bacilului tetanic hemolizina bacilului coli enterotoxina tulpinilor enterotoxigene de E. coli

Exotoxine
Toxin difteric <= Corynebacterium diphteriae
bacteriofag temperat subuniti A-B
B legare A - enzim

Aciune: inhib sinteza proteinelor


ADP- ribozilarea factorului de elongare EF-2 bacteria EF-2 uman (diphthamide)

Aciune: Pseudomonas, E.coli, Vibrio cholerae, Bordetella pertussis

Exotoxine
Toxina tetanic <= Clostridium tetani
Neurotoxin (tetanospasmina) Codat plasmidic

Aciune: previne eliberarea neurotransmitorului inhibitor glicina => spasm


rspndire: axon / snge Mduva spinrii

Exotoxine
toxina botulinic <= Clostridium botulinum
Neurotoxin Bacteriofag

Aciune: blochez eliberarea acetilcolinei la nivelul sinapselor => paralizie


Cel mai toxic compus cunoscut 2 subuniti: legare aciune

Clostridium botulinum

Exotoxine
Bacillus anthracis => 3 exotoxine
factorul edem = adenilat ciclaz (AC) factorul letal ???? antigen protector

Streptococcus pyogenes
toxina eritrogenic
Responsibil de erupia din scarlatin

Bacteriofag

Exotoxine
E.coli enterotoxina termo-labil
Codat plasmidic activitate de adenilat-ciclaz => crete cAMP => inhibarea absorbiei Na Pierderea de electrolii (Cl) Diaree apoas Aceeai aciune a toxinelor V. cholerae, B. cerreus

Exotoxine
Bordetella pertussis Toxina pertusis inactiveaza inhibitorul adenilat-ciclazei => creste AC Cresterea cAMP => celulele devin foarte sensibile la stimuli => Tuse convulsiva

Antibiotice
Dr. Carmen Costache

Antibiotice
Planul cursului Definiie
Antibiotice vs Chimioterapice Antibiotice vs Antiseptice Spectru de aciune Tipuri de efect antibacterian
Combinatii de AB

Clasificare

Farmacocinetica Familii de antibiotice

Rezistena la antibiotice

Mecanisme de aciune

Antibiotice / chimioterapice

Antibioticele (AB): substane naturale, cu efect antibacterian, produse de microorganisme. Chimioterapicele (CH) : substane chimice cu efect antibacterian.
Datorit apariiei rezistenei bacteriene: => modificarea structurii antibioticelor de baz dintr-o familie, => derivaii semisintetici ai antibioticelor. AB/CH diferite dup
proveniena, mod de producere, dar au acelai efect.

Antibiotic Penicillin Cephalosporin Griseofulvin Bacitracin Polymyxin B Amphotericin B Erythromycin Neomycin Streptomycin Tetracycline Vancomycin Gentamicin Rifamycin

Organisms Penicillium chrysogenum Cephalosporium acremonium Penicillium griseofulvum Bacillus subtilis Bacillus polymyxa Streptomyces nodosus Streptomyces erythreus Streptomyces fradiae Streptomyces griseus Streptomyces rimosus Streptomyces orientalis Micromonospora purpurea Streptomyces mediterranei

Penicillium

Cephalosporium

Streptomyces griseus

Antibioterapia
origini: antibioza i toxicitatea selectiv. Antibioza Pasteur: cultur cu 2 microorganisme
producerea unei substane de ctre una din ele => oprete multiplicarea sau omoar cea de a 2-a bacterie.

Toxicitatea selectiv:
fixarea selectiv, specific a substanelor de corpul bacterian. nu se fixeaz i nu este toxic asupra altei bacterii sau asupra celulelor umane (eukariote)

Dezinfectante\Antiseptice
substane cu efect antibacterian, active n concentraii mari NU respect principiul toxicitii selective. se utilizeaz doar extern =>
ndeprtarea microorganismelor de pe suprafee

Indicele terapeutic
IT = Doza toxica/doza efectiva. Cu cat IT mai mare, cu atat AB este mai bun !

Spectrul de aciune al unui antibiotic


totalitatea genurilor i speciilor bacteriene asupra crora acioneaz antibioticul:
coci Gram pozitivi i negativi, bacili Gram pozitivi i negativi, bacterii anaerobe, spirochete, Mycobacterii, bacteri cu patogenitate intracelular:
Richettsia, Chlamydia, Mycoplasma.

Spectrul de aciune al unui antibiotic


Spectru ngust => specie bacteriena ex. antibioticele antistafilococice, Tuberculostatice Spectru restrns => numr mic de grupe, genuri bacteriene:
Ex. Acid nalidixic - activ doar pe bacili Gram
negativi

Antibiotic Penicillin Bacitracin Vancomycin Polymyxin B Streptomycin

Spectrum Gram-positive bacteria Gram-positive bacteria Gram-positive bacteria Gram-negative bacteria Gram-negative bacteria Gram-positive negative cocci; some Gram negative bacilli Broad-spectrum Broad-spectrum Broad-spectrum Broad-spectrum Tuberculosis

Specru larg = active asupra majoritii genurilor, speciilor bacteriene: Spectru ultralarg: active asupra bacteriilor din mediul spitalicesc, multiplu rezistente la antibiotice.

Erythromycin

Neomycin Tetracycline Cephalosporin Gentamicin Rifamycin

Spectrul de aciune al unui antibiotic

Efect antibacterian
Bacteriostatic: opresc multiplicarea
ex. Cicline (ex. Tetracicline), Cloramfenicol

Bactericide: omoar bacteriile, n concentraii mici;


ex. Aminozide

Bacteristatice n concentraii mici i bactericide n concentraii mari;


ex lactamine

Combinatii de AB
Sinergism Antagonism Indiferenta

Farmacocinetica unui antibiotic


In vitro in vivo
Localizarea infectiei
Capacitatea AB de a ajunge la situsul infectiei
Influentata de cinetica AB = disponbilitatea biologica Intracelular, puroi, bariera hematoencefalica

Tipul infectiei
Inactivarea AB: pH, Tesut necrotic Rezistenta bacteriei la AB exprimata in vivo (inductie)

Farmacocinetica unui antibiotic


ptrunderea antibioticelor n organism:
calea de administrare: oral parenteral: intravenoas, intramuscular, subcutanat
Infectii severe, sistemice

Externa: crme, unguente, solutii (picaturi nazale, oftalmice)

absorbia antibioticelor: rapid, lent metabolizarea antibioticelor

Farmacocinetica unui antibiotic


distribuia n organism: n esuturi, organe, penetrarea barierei hematoencefalice, penetrarea intracelular. toxicitatea antibioticelor (hepatic, renal, medular, nervoas, etc) calea de eliminare a antibioticelor: urinar, digestiv

Farmacocinetica unui antibiotic

Condiii pentru un AB s fie activ


s ajung la bacterie s ptrund n bacterie
s fie permeabil pentru antibiotice s dispun de un transportor pentru antibioticul respectiv

s ating inta de aciune s realizeze n bacterie o concentraie optim, care s inactiveze reversibil sau ireversibil inta de aciune.

Tratamentul cu antibiotice

Familii de antibiotice
AB care au
structur chimic, int de aciune mecanism de aciune comune.

Structura/functie inactivata ireversibil/reversibil de catre AB

Tinta de actiune nivel molecular

inte ale antibioticelor


Perete celular:
Lactamine Glicopeptide: Vancomicina, Teicoplanina
Ristocetina

Fosfomicina, Cicloserina, Bacitracina,

Membrana citoplasmatic:
Polipeptide ciclice: ex. Colistin, polimixina B
Gramicidina, Tirociclina, Defensine, L - Antibiotice

inte ale antibioticelor


Acizi nucleici:
Quinolone, Imidazoli, Furani, Rifamicine

Ribozomi: AB care inhib sinteza proteic 30 S: Aminoglicozide,Tetracicline, Spectinomicine 50 S: grupul MLS , Fenicoli
Macrolide, Lincosamide, Sinergistine Acid fusidic: factorul de elongare (EF)

inte ale antibioticelor


Inhib sinteza acidului folic:
Diaminopirimidine
inhiba folat reductaza: Trimetoprim Pirimetamina

Sulfonamide
Inhiba folat sintetaza: Sulfametoxazol

Asocierea Trimetoprim + Sulfametoxazol = Co-trim-oxazol (Biseptol) Sulfone: Dapsone PAS (acid paraaminosalicilic)

Familii de Antibiotice
Lactamine, grup Monobactam i gamma () Lactamine Aminoglicozide grup MLS: Macrolide, Lincosamide, Sinergistine Tetraclicline Fenicoli Quinolone Sulfamide Polipeptide ciclice, Glicopeptide Sulfamide Imidazoli Furani Rifamicine Tuberculostatice AB nencadrate n familii:
Fosfomicina, Cicloserina, Novobiocina, Acid fusidic,

AB => peretele celular - Lactamine


inhib sinteza peptidoglicanului
n faza de polimerizare.

int de aciune: PBP-uri


inhibat funcia enzimatic : transpeptidarea, transglicozidarea, carboxipeptidarea

inelul lactam = analog structural al legturii sterice D Ala - D Ala.

Rezistena la -Lactamine
1. Modificarea permeabilitii bacteriene 2. Modificarea intei (PBP) 3. Inactivarea prin -lactamaze 1. Penicilinaze 2. Cefalosporinaze 3. BLSL 4. BLSE 4. Pompe de eflux

Familia -Lactaminelor Grup I: Derivai ai acidului 6-aminopenicilinic 1. Penami (peniciline) 2. Carbapenemi 3. Oxapenami (Clavani)

Familia -Lactamine
Grup II - Cefalosporine derivati de acid 7 aminocefalosporanic Primele izolate din tulpini de Cephalosporium (fung filamentos) Aceei aciune ca i Penicilinele Diferite generatii

Familia -Lactaminelor- Peniciline (Penami)


a) peniciline cu spectru ngust (Penicilin G i Penicilin V) coci Gram pozitivi i negativ, bacili Gram + i spirochete Penicilina G adm. parenterala Penicilina V administrare p.o. Reactii alergice ! Peniciline semiretard i retard: Propicilina; Procain Penicilin = Efitard; Benzantin Penicilin = Moldamin b) peniciline rezistente la penicilinaze - Peniciline M Meticilin Oxacilin Pentru tratamentul infeciilor cu stafilococi. MRSA = methicillin resistant Staphylococcus aureus

Familia -Lactaminelor- Peniciline (Penami)


c) peniciline cu spectru larg : Amino peniciline Ampicilin i bacili Gram negativi (NU Pseudomonas) Amoxicilin i unii bacili Gram negativi (NU Pseudomonas) Carboxy peniciline Carbenicilin, Ticarcilin i bacili Gram negativi, inclusiv Pseudomonas Ureidopeniciline Piperacilin

Familia -Lactaminelor- Peniciline (Penami) d) Inhibitori de -lactamaze penicilin sulfone

Sulbactam, Tazobactam

In combinaie cu Peniciline cu spectru larg

Sulbactam + Ampicilin = Sultacilin (Unasyn) Sulbactam + Becampicilin = Sultamicillin; Tazobactam + Piperacilina = Tazocin

Familia -Lactamine

2. Carbapenemi Imipenem, Meropenem


Spectru larg de aciune Bactericid, bacterii Gram + i , anaerobi.

3. Oxapenemi sau Clavami acid clavulanic = inhibitor


de -lactamaze
+ peniciline cu spectru larg (Amoxicilin, Ticarcilin) ex. Amoxicilin + acid clavulanic = Augmentin

Familia -Lactamine Cefalosporine

Generaia I Cefalexin, Cefalotin, Cefazolin Spectru ngust - E.coli, Klebsiella, Proteus i Gram + coci sensibili la Oxacilin.

Generaia a II-a Cefuroxim, Cefoxitin - Spectru extins bacterii Gram , unii anaerobi

Familia -Lactamine Cefalosporine


Generaia a III-a Cefotaxim, Ceftazidim spectru larg, Enterobacteriaceae i Pseudomonas aeruginosa Generaia a IV-a Cefepime, Cefpirom - Spectru extins : Pseudomonas, ali bacili Gram negativi, coci Gram pozitivi - Traverseaz bariera hemato-encefalic

Familia -Lactamine - GRUP III

Grup III Monobactami - Aztreonam - Spectru ngust - Pseudomonas aeruginosa.

Familia LACTAMINE
asemntoare lactaminelor. Reprezentani: Pirazolidinon,

Alte AB => peretelui celular bacterian


FOSFOMICINA Spectru de aciune: ngust, bacteriostatic.
coci Gram + si MRSA, unii coci Gram (-). bun difuzie n LCR.

BACITRACIN Spectru de aciune: ngust: doar pe bacteriile Gram pozitive. inta de aciune: Bactoprenolul - inhib reciclarea. Toxicitate: crescut => Administrare: local CICLOSERIN Spectru de aciune: Tuberculostatic

AB care acioneaz la nivelul peretelui celular bacterian Glicopeptide: Vancomicin (activa pe MRSA), Teicoplanin

Polimixine
AB izolate din Bacillus polymyxa Polimixin B distrug membrana citoplasmatic efect bactericid spectru ngust

Doar bacterii Gram , mai ales Pseudomonas aeruginosa

AB care acioneaz la nivelul acizilor nucleici bacterieni Quinolone Imidazoli Furani Rifamicine

Quinolone
inhib sinteza ADN bacterian bactericid Bacterii Gram + i Gram Acid nalidixic, Ciprofloxacin, Norfloxacin, Ofloxacin

Inhibarea sintezei ADN bacterian


Nitrofurani
Spectru larg Bacteriostatic/bactericida ~ doz Nitrofurantoin, Furazolidon Metronidazol

bactericid bacterii anaerobe Bacteroides fragilis Clostridium Protozoare:


Trichomonas vaginalis amebiaza, giardiaza

AB care inhib sinteza proteic bacterian Ribozomi: sediul sintezei proteice 30 S 50 S


Aminoglicozide, Tetracicline,
Acid fusidic

grupul MLS Fenicoli

Aminoglicozide
bactericide spectru larg: bacili Gram negativi inhibirea sintezei proteice: subunitatea ribozomal 30 S Streptomicin, Kanamicin, Gentamicin, Amikacin

Tetracicline spectru larg, bacteriostatic inhibirea sintezei proteice: subunitatea ribozomal 30 S coci Gram + i , bacili Gram + Chlamydia, Mycoplasma i Rickettsia

Tetraciclin, Doxiciclin, Minociclin

Cloramfenicol spectru larg inhibirea sintezei proteice: subunitatea ribozomal 50 S De elecie pentru febra tifoid (bacteriostatic pentru Salmonella) Bactericid: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae i Haemophilus influenzae Efecte adverse numeroase

Macrolide
inhibirea sintezei proteice: subunitatea ribozomal 50 S Spectru larg coci Gram (+) i (), bacili Gram (+) Mycoplasma, Legionella, Chlamydia, Campylobacter , Helicobacter pacieni alergici la Penicilin Eritromicin, Azitromicin, Claritromicin

Lincosamine

Acioneaz pe subunitatea ribozomal 50 S Clindamicin, Lincomicin bacterii Gram + i Gram anaerobe: (Clostridium perfringens, Bacteroides fragilis)

Oxazolidine
Linezolid Spectru ngust DOAR bacterii G +,
VRE, MRSA

Subunitatea ribozomal 50 S

Antibiotice antituberculoase Rifampicin Izoniazid Pirazinamid Etambutol Streptomicin

AB care inhib sinteza acidului folic

Sulfamide, Trimetoprim

Rezistena bacteriilor la antibiotice Definiie


Bacterii rezistente = bacteriile care supravieuiesc la concentraii mari de antibiotic, mult mai mari dect cele din organismul uman.

Natural Dobndit

Rezistena bacteriilor la antibiotice


Natural - caracter de specie 1. Absena intei de aciune
Ex. Mycoplasma rezistent la -lactamine
NU are perete celular.

2. Impermeabilitatea bacteriei pentru antibiotic


Ex. Mycobacterium

Dobndit: cnd o tulpin bacterian anterior sensibil la un anumit antibiotic devine rezistent Caracter de tulpin Ex. Staphylococcus aureus anterior sensibil la Penicilin, n prezent 90% dintre tulpinile de
Sa = tulpini rezistente la Penicilin

Rezistena bacteriilor la antibiotice

Mecanisme genetice

Rezistena apare indiferent de antibiotic rolul antibioticelor : selecie a tulpinilor rezistente. mecanisme cromozomiale
Mutaii => mutante rezistente => clon mutant

TIPURI DE MUTANTE
Mutante de rezisten la antibiotice

Rezistena bacteriilor la antibiotice

Mecanisme genetice

mecanisme extra-cromozomiale
Achiziia de material genetic extracromozomial Ex. plasmide R

Rezistena bacteriilor la antibiotice

Mecanisme

modificarea permeabilitii bacteriene modificarea transportului antibioticului in bacterie modificarea intei Enzime de inactivare a antibioticului Activarea pompelor de eflux Combinaii ale acestor mecanisme.

Rezistena bacteriilor la antibiotice

Rezistena bacteriilor la antibiotice

Antibiotic

Discovered

Introduced into Clinical Use

Resistance Identified

Penicillin Streptomycin Tetracycline Erythromycin Vancomycin Gentamycin

1940 1944 1948 1952 1956 1963

1943 1947 1952 1955 1972 1967

1940 1947 1956 1956 1987 1970

Testarea sensibilitii bacteriilor la antibiotice Antibiograma

Determinarea sensibilitatii/rezistentei bacteriilor la antibiotice

Efect bacteriostatic Efect bactericid

Testarea sensibilitii bacteriilor la antibiotice Antibiograma

!!! Orice infectie bacteriana va fi tratata numai dupa identificarea bacteriei si efectuarea antibiogramei Metode:
Metoda dilutiilor Metoda difuzimetrica E-test

Antibiograma Metoda dilutiilor


Medii de cultura lichide Dilutii de antibiotic intr-un mediu de cultura favorabil dezvoltarii bacteriilor Cantitati egale din cultura bacteriana testata Incubare Metoda de referin Avantaj major: determinarea valorii concentraie minime inhibitorii (CMI)

Antibiograma - Metoda diluiilor Citire si interpretare Mediu de cultura clar, limpede tulbure Se stabileste CMI (concentraia minim inhibitorie) CMI valoare diferit pentru fiecare bacterie i antibiotic

Antibiograma Metoda dilutiilor


!!!!! Reducerea timpului de citire al rezultatelor: Indicator de pH (virarea culorii mediului apare mai rapid decat tulburarea lui)

Antibiograma Metoda difuzimetric


Medii de cultura solide - Mueller Hinton AB depuse pe placa nsmnat cu tulpina bacterian difuzeaz n mediu Se msoar DIAMETRUL ZONEI DE INHIBIIE (mm) Rezultatul se compar cu tabele standard

Testarea sensibilitii la antibiotice

Antibiograma prin metoda difuzimetric Tehnica de lucru


Dup identificarea i izolarea tulpinii bacteriene Se nsmneaz cultura bacterian (se prepar n prealabil o suspensie bacterian=> trebuie sa aiba o anumita densitate) Se nsmneaz n pnz Pe suprafata placii se depun AB (rondele/ microcomprimate) Termostat (24-48h) Interpretare

Antibiograma prin metoda difuzimetric Interpretarea rezultatelor

Cu o rigla se masoara diametrul zonei de inhibitie a dezvoltarii bacteriene (exprimat in mm) Se compara cu datele din tabelele standard Rezultatele se exprima:
Sensibil (S) Intermediar sensibil (IS) Rezistent (R)

Antibiograma E-testul
Combina avantajele cele doua metode Medii de cultura solide Benzi impregnate cu AB n concentraii descresctoare !!! Citire: locul n care zona de inhibitie intersecteaz banda = CMI

Medii cu sange- pt. streptococi Lowenstein-Jensenpt. bacilul TBC Pt anaerobi

!!Se pot studia efectele asocierilor de antibiotice

REZISTENA CLINIC = MULTIFACTORIAL

PACIENT -STATUS IMUNITAR -SITUSUL INFECTIEI -DISPOZITIVE MEDICALE -CONTROL INEFICIENT

-REZISTENTA MICROBIOLOGICA -PRODUCEREA DE BIOFILM -DENSITATEA INOCULULUI

MICROORGANISM

ESEC TERAPEUTIC

- ACTIUNE - POSOLOGIE - FARMACOCINETICA - INTERACTIUNI MEDICAMENTOASE

ANTIBIOTIC/CHIMIOTERAPIC

Rezistena bacteriilor la antibiotice