Mtodos para generar y analizar diversidad:

Polinizacin y fertilizacin in vitro

Ejm: Nicotiana tabacum

1 flor: 5 anteras: 30 000 microesporas 8%: 7200 plntulas

 Doble fecundacin Interacciones (seales entre polen y tejido del pistilo) Polen debe adherirse, hidratarse y germinar (tubo polnico).

Polen: clula generativa (origina 2 clulas espermticas 1 formar embrin (2n) el otro el endospermo (3n)

Saco embrionario- megaespora

Fusin

Dificultades
Limitaciones fisiolgicas o genticas Barreras de prefertilizacin o precigticas- superadas por la polinizacin in vitro. Problemas de fertilizacinfertilizacin in vitro Barreras pos fertilizacin o pos-cigticas rescate de embriones

 Fertilizacin: unin de gametas

Fin: lograr el proceso completo de desarrollo del embrin semillas completa- plantas frtiles. Conocimiento de proceso de reconocimiento gamtico , fusin y activacin de seales intracelulares.

Polinizacin in vitro
Barreras pre-fertilizacin Incapacidad de germinacin de polen propio o extrao (incompatibilidad):
1.Tubo se deshace. 2.Tubo no alcanza el ovulo (lento o largo estilo). Aborto de ovario.

Incompatibilidad
Esporoftica: genotipo de la planta de donde proviene el polen. (exina allica con receptor). Produce bloqueo.
Gametoftica: seales que desencadenan la muerte del polen, degradacin de ARN del polen.

 Tcnicas in vitro: para desarrollo completo por distintos mtodos Polinizacin o fertilizacin in vitro: P. de vulos, P. placental, P. estigmtica. P. estilo

 P. estigmtica: cultivar pistilo, poner polen en estigma

P. placental: contacto del vulos con polen, por corte en el ovario.

P. vulos aislados: se cultivan solos en medio

P. estilo: grano de polen sobre un estilo compatible y luego se pone en planta deseada

 Fin: fertilizacin de la gameta femenina (medios con sacarosa y cido brico). Conocer: periodo florar, estigma receptivo, tiempo de polinizacin, recoleccin de polen.

Polen mentor: mezcla con polen inviable (sustancias proteicas).

Fertilizacin in vitro

In vivo: doble fecundacin In vitro: aislarse gametas, e inducir la fusin. Formacin de embrin y endospermo individuales Se obtiene una planta completa y frtil

 In vitro: la fusin del ncleo espermtico puede ser los polares o secundarios
1.Aislamiento y seleccin a)Conocer morfologa floral b)Aislar gametas masculinas (choque osmtico, pH) c) Gametas femeninas por microdiseccin, maceracin enzimtica

2. Fertilizacin in vitro:
Microinyeccin de C. espermticas en C. aisladas Colocadas en pares Medio con CaCl2 y manitol 48 horas se dividen las clulas

Electrofusin: clulas en contacto en cmara.

3.Fusin de gametas:

Granos de polen por shock de pH (osmtico) Ovoclulas: por enzimas y microdiseccin manual.

xito del proceso

Polen fisiolgicamente desarrollado Conocer estadios de desarrollo de gametas.
Antesis, dehiscencia, polinizacin Estigma receptivo Momento para polinizacin Polen maduro

Cultivo de vulos y embriones

Ovulo pequeo, hidratado, difcil manipulacin Cruzamientos inter-especficos.
Rescate de embriones Aislar embriones cultivarlos en medios, para concluir desarrollo Mas maduros mayor sobrevivencia

Aplicaciones

Superar barreras auto-compatibilidad y precigticas. Rescate de vulos fecundados. Plantas resistentes a estreses ambientales. Produccin de plantas hapolides.

 Cultivo de embriones: plantas con abortos (inconpatibilidad de endospermo) y falta desarrollo de endospermo.

Intercambio de material

 Callo embriognicos a partir de nucelas Cigotos transgnicos Estudios de estadios embriognicos