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MORTE CELULAR
LEIDI D. PREICHARDT LIANA MACIEL MARTA E. DOUMER VANESSA GALLI
MORTE CELULAR
Classicamente 2 processos
Necrose
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Em situaes patolgicas
Injria severa como Hipxia.
MORTE CELULAR
Sydney Brenner Prmio Nobel de Medicina e Fisiologia (2002) Estudos com Caenorhabtis elegans para entendimento do controle da morte celular
MORTE CELULAR
Apoptose
Remoo de clulas ou tecidos alterados, exercendo importante papel na manuteno da estrutura do rgo ou dos tecidos impedindo que suas funes fossem alteradas por fatores externos. Oposto de Mitose. Induo radiaes; drogas; choque trmico; metais pesados; agentes oxidantes; alcois; hipxia; jejum; inibidores metablicos; infeces vricas.
MORTE CELULAR
Apoptose
Clivagem do DNA por endonucleases
O mecanismo bioqumico fundamental da apoptose conservado ao longo da escala evolutiva, havendo genes homlogos regulando a morte celular em todos os organismos estudados, embora, nos mamferos, seja um processo mais complexo
Necrose
MORTE CELULAR
Falha nas respostas adaptativas genticas e metablicas (morte acidental). Alguns autores denominam oncose (do grego nkos: intumescimento) por considerarem o termo necrose seria melhor indicado para se referir a alteraes subsequentes morte celular propriamente dita Induo injrias severas hipertemia; privao de nutrientes; estresse oxidativo; sobrecarga intracelular de Ca2+
MORTE CELULAR
Apoptose x Necrose
MORTE CELULAR
Parapoptose
Forma ativa e regulada de morte celular; Apresenta inchamento mitocondrial e formao de vacolos citoplasmticos.
Autofagia
Morte celular ativa e regulada, caracterizada pela lenta degradao do citoplasma e organelas por autofagossomos, vacolos originrios do retculo endoplasmtico. observada em privao crnica de nutrientes e em algumas doenas neurodegenerativas
MORTE CELULAR
Distino das diferentes alteraes morfolgicas nos processos de morte celular por apoptose versus necrose. A necrose (a) caracterizada pela perda de integridade de membrana plasmtica, floculao da cromatina, inchao seguido de lise celular com extravasamento do contedo intracelular e desintegrao de organelas. O processo apopttico (b) envolve alterao de permeabilidade de membranas, condensao cromatnica, encolhimento celular, formao de corpos apoptticos sem desintegrao de organelas.
Apoptose
Formao de vacolos citoplasmticos
MORTE CELULAR
Colapso citoesqueleto
Despolarizao M. mitocondrial
MORTE CELULAR
aparentemente semelhante em todas as clulas animais Dependente de uma famlia de proteases que apresenta uma cistena no stio ativo clivando protenas-alvo em cido asprtico especfico.
CASPASES
MORTE CELULAR
As caspases so sintetizadas na clula com um precursor inativo, ou procaspases, que so ativados pela clivagem do cido asprtico por outras caspases.
Uma vez ativadas as caspases clivam e ativam outras procaspases, formando uma cascata de amplificao proteoltica.
Algumas clivam a lmina nuclear, outras uma protena que mantm a enzima degradadora do DNA ( DNAse) inativa, liberando-a para digerir o DNA.
A clula se desmancha de forma rpida e ordenada, sendo rapidamente digerida por outras clulas
MORTE CELULAR
Todas as clulas animais nucleadas contm as procaspases inativas, que ficam aguardando sinais para iniciar a destruio da clula.
A atividade das caspases especificamente regulada na clula para garantir que a morte celular esteja controlada at que seja necessria
MORTE CELULAR
Quando foradas a entrar no complexo, sua proximidade faz com que uma clive a outra.
MTUA ATIVAO
MORTE CELULAR
A caspase ativada no topo da cascata cliva a prxima procaspase para estimular o sinal de morte que estende-se para toda clula
MORTE CELULAR
Ligante Fas
Receptor da morte
Superfcie Clula-alvo
MORTE CELULAR
Apoptose
Caspase-8 ativada
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Quando as clulas esto estressadas ou danificadas podem matar a si prprias desencadeando a agregao das procaspases e a ativao dentro da clula.
Via intrnseca
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Protenas IAP
MORTE CELULAR
Famlia Bcl-2
So
protenas
intracelulares
que
regulam
ativao
das
procaspases.
Alguns membros da Bcl-2 no so inibidores da morte, mas sim ativadores das procaspases e a consequente morte celular.
MORTE CELULAR
Algumas protenas da famlia, promotoras da apoptose como a Bad funcionam por ligao e inativao dos inibidores da morte.
Se os genes que codificam Bax e Bak so inativados as clulas so resistentes a estmulos indutores da apoptose.
Bax e Bak podem ser ativadas por outros promotores da famlia Bcl2 como a Bid
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Famlia IAP
So protenas inibidoras da apoptose.
MORTE CELULAR
O programa de morte celular intracelular regulado por sinais extracelulares que podem ativar ou inibir a apoptose.
Estes sinais moleculares atuam regulando os nveis ou atividade dos membros das famlias Bcl-2 e IAP.
MORTE CELULAR
Morfologia Apoptose Mudana no aspecto morfolgico clula Perda da integridade celular: Condensao e segregao da cromatina
MORTE CELULAR
Invaginao das membranas celular e nuclear Ruptura do ncleo Corpos apoptticos_circundados por envoltrio nuclear
MORTE CELULAR
Necrose
Aumento do volume total da clula e organelas Autlise:
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Aspectos morfolgicos
Quadro esquemtico das alteraes morfolgicas com a apoptose (a) e a necrose (b) Fonte: Carvalho e Recco-Pimentel (2007)
MORTE CELULAR
Citoqumica e imunocitoqumica
Reao de Feulgen: corante reativo de Schiff
Quantificao do DNA
MORTE CELULAR
Clulas em apoptose coradas podem ser estudadas em vdeo analisador Contracoradas com Fast Green indica presena e quantificao de microncleos
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Citoqumica e imunocitoqumica
Reao de Felgen
Imagens de apoptose (A) em clulas epiteliais mamrias humanas e em culturas submetidas reao de Feulgen e contracoradas com fast green Fonte: Carvalho e ReccoPimentel (2007)
MORTE CELULAR
Citoqumica e imunocitoqumica
Reao de Felgen
Aspectos morfolgicos e citoqumicos de ncleos de clulas em apoptose (A) e necrose (N), cujo DNA identificado pela reaao de Feulgen. a) Clulas epiteliais de hemptero triatomneo em que se detectam imagens de clulas em necrose, alm de ncleos com aspecto normal usual (U); b) Clulas epiteliais mamrias humanas in vitro. Imagem de perfil absorciomtrico ao longo de um eixo traado sobre ncleo apopttico estudado em vdeoanalisador de imagem. Regies de cromatina condensada aparecem pseudcolonizadas em vermelho. Fonte: Carvalho e Recco-Pimentel (2007)
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
RNA permanece em metacromasia CEC ocorre numa concentrao superior do DNA DNA com cromatina compactada
verde intenso
MORTE CELULAR
Identificao imunocitoqumica
Kits Identificam-se:
ncleos vesculas
fragmentao do DNA internucleossomal
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Princpio
Resduos de nucleotdeos, ligados digoxigenitina, sero ligados ao DNA da clula apopttica por uma enzima, a TdT ( terminal deoxynucleotidyl transferase) Heteropolissacardeo, reconhecido pelo anticorpo anti-digoxigenina
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Concentrao crtica
Aspectos citoqumicos e imunocitoquimicos de apoptose e morte celular programada. a,b. Apoptose em clulas V79, submetidas ao mtodo CEC. (a) e a um mtodo imunocitoqumico para apoptose (b) (setas). c, d. Clulas epiteliais mamrias humanas in vitro em apoptose (setas), identificadas pelo mtodo CEC. e. Morte celular programada (setas) identificada em eritrcitos nucleados de tartaruga por mtodo imunoqumico. Fonte: Carvalho e ReccoPimentel (2007)
MORTE CELULAR
Teste TUNEL
Nucleotdeos iro se ligar as extremidades 3-OH do DNA fragmentado pela ao da TdT. Acham-se marcados com fluorescena:
Microscpio de fluorescncia
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Teste Annexin V
Identificao por fluorescncia clulas nas fases iniciais da apoptose Grupamentos de fosfatidilserina so translocados da parte interna para a parte externa da membrana plasmtica meio extracelular
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Padro tpico de bandas com segmentos de 185 pares de bases e de seus mltiplos
MORTE CELULAR
Necrose
MORTE CELULAR
Teste Cometa
Clulas em agarose e com protenas removida campo eltrico
MORTE CELULAR
Identificao em nvel
Imagens de eritrcitos de serpentes submetidos ao teste cometa. a. Controle. b. Apoptose. c. Necrose (experimental) Fonte: Carvalho Pimentel (2007) e Recco-
APOPTOSE
Estmulo externo
- Citocinas - Estresse oxidativo
MORTE CELULAR
Estmulo interno
Bcl-2 - mitocndria
- Ca - pH - leso do DNA (via gene p53)
TNF (Fas)
Antagnicos
Caspase-8, 10
Citocromo c Apaf-1
Caspase-3 1
Caspase-9
Caspases executoras
Apoptose
1- substrato especfico
MORTE CELULAR
Caspases
Caspases executoras:
clivagem de quinases protenas do citoesqueleto protenas de reparo do DNA subunidades inibidoras de endonucleases destruio das funes celulares housekeeping afetam regulao do ciclo celular e rotas de sinalizao manifestaes morfolgicas de apoptose condensao e fragmentao do DNA e rompimento de membranas
MORTE CELULAR
Phagocyte ?
PS Phosphatidylserine Receptors
Apoptotic Cell
Bridge ELMO
C1q Receptor
CRKII
MORTE CELULAR
Cncer X Apoptose
Cncer Mutaes Ciclo Celular Oncogenes Seleo Natural Apoptose Supressores de Tumor
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Pr-apoptticos
Anti-apoptticos
MORTE CELULAR
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MORTE CELULAR
CANCER X APOPTOSE
c-Myc superexpresso + p53 ou ARF ou ganho de funo de genes Bcl-2 = apoptose
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CANCER X APOPTOSE
Cncer de mama: BRCA1 e BRCA2 se ligam a Rad51 para reparar quebras na fita de DNA p53 E1B codifica dois produtos, um que ativa Bcl-2 e outro que inibe p53 Sistema Ubiquitin/Proteosome P53 ativa Bax inibio da apoptose
MORTE CELULAR
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Autofagia
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Teraputica
ABT-737 - inibe Bcl-2, Bcl-XL e Bcl-w de clulas cancergenas Estratgias antisense e com molculas antagonistas para inibir membros da Bcl-2 Adenovirus com p53 Aivadores de TNF (Fas)
MORTE CELULAR
Teraputica
MORTE CELULAR
STAT3 - Regula negativamente clulas T-helper Ativador de genes de imunossupreso Bcl-xl, p53, c-Myc
miRNA
MORTE CELULAR
Teraputica
Molculas que se ligam a protenas oncognicas
MORTE CELULAR
Teraputica
MORTE CELULAR
Teraputica
MORTE CELULAR
Infeco viral
MORTE CELULAR
MORTE CELULAR
Apoptose no desenvolvimento
MORTE CELULAR
OBRIGADO!