MTODO DA GOTA ESPESSA: Usar luvas durante todas as etapas do procedimento.

Colocar em Lmina de microscopia trs a quatro gotas de sangue fresco, colhidas por puno venosa ou da polpa digital. Com a ponta de outra lmina e com movimentos circulares, contnuos, reunir as gotas, criando uma rea de aproximadamente 2 cm de dimetro. Continuar com movimentos circulares, do centro para a periferia, durante 30 segundos para evitar a formao de fibrina, a qual poder obscurecer as preparaes coradas. Terminar os movimentos circulares no centro do crculo de sangue; por meio desse procedimento o esfregao apresenta a borda fina e o centro espesso. Deixar secar temperatura ambiente e, aps, mergulhar a preparao em gua corrente ou em soluo salina a 0,85%, para que se produza a hemlise. Secar temperatura ambiente. EXAME DIRETO A FRESCO DE SUSPENSO DE FEZES: Suspender por meio de um palito, pequena poro de fezes em gota salina previamente colocada sobre uma lmina. Pesquisar microscpio trofozotos de protozorios e ovos de helmintos. MTODO DIRETO CORADO COM LUGOL: repetir o procedimento acima, acrescentando uma gota de Lugol antes de cobrir a preparao na lamnula. Examinar. Pesquisa protozorios e ovos de helmintos. METDO DE WILLIS: misturar 1g de fezes a 1 sol saturada de NaCl, em frasco cilndrico de 3 cm di; completar o vol com a mesma sol at a borda; colocar lmina em contato com a superfcie lquida; aps 5-10 min inverter rapidamente a lmina e examinar ao microscpio com ou sem lamnula; para ovos de anciolstomdeos e T. trichiura; outros ovos e cistos de helmintos e protoz. TCNICA DE HOFFMANN: Colocar aproximadamente 2 g de fezes num copo descartvel. Acrescentar aproximadamente 20 ml de gua morna aos poucos. Homogeneizar as fezes totalmente com o auxlio de um palito. Transferir para um clice afunilado coando em filtro para fezes. Acrescentar gua da torneira at encher o clice. Deixar em repouso at a sedimentao (2 a 24 horas). Com o auxlio de uma pipeta Pasteur recolher o sedimento, gotejar sobre uma lmina e adicionar uma gota de lugol, homogeneizar o preparado com uma lamnula e cobrir com a prpria lamnula. Examinar ao microscpio. TCNICA DE FAUST: Homogeinizar aprox. 3g de fezes em 10ml de gua; filtrar mistura por gaze dobrada em 4 para 1 tb de centrifugao; centrifugar a 2500rpm 1 min.; decantar o sobrenadante e add sol. De sulfato de zinco a 33% (densidade =1180); tampar o tb e agitar; centrifugar a 2500rpm 1min.; colher o mat na camada sup. do tb e colocar em lmina; add 1 a 2 gts de Lugos e cobrir com lamnula; examinar no microscpio cistos de protozorios. Tbm pode diagnosticar ovos e larvas de helmintos. TCNICA DE KATO-KATZ MODIFICADO: Retirar 1 amostra de fezes colocando sobre papel de filtro; depositar sobre as fezes o filtro FEC (kit), comprimindo-o com o aux de 1 esptula; colocar 1 placa perfurada sobre 1 lmina; recolher com a esptula as fezes filtradas depositando-as na placa perfurada; comprimir e nivelar as fezes no orifcio; retirar a placa; cobrir o mat com 1 lamnula de papel celofane previamente embebida em verde de malaquita; inverter a preparao sobre 1 superfcie lisa e pressionar a lmina para que ocorra uniformemente o espalhamento do material sem extravasar; esperar de 30 a 60 min e examinar no microscpio composto com objetiva 10x para contar total de ovos; mutiplicar por 24. OBS: confeccionar 2 lminas por amostra. O resultado o nmero de ovos por g de fezes. Para ovos de S. mansoni, A. lumbricoides e T. trichiura. TCNICA DE LUTZ (SEDIMENTAO EXPONTNEA): Dissolver 3g de fezes em 10ml de gua agitando com basto de vidro; filtrar em gaze dobrada em 4 para clice cnico de sedimentao; completar com gua at a borda; aps 1h (min) desprezar o sobrenadante, recompletando com gua at borda; aps 1h colher 1 gt com pipeta e colocar em lmina; add 1 a 2 gts de Lugol e cobrir; microscpio. OBS 3 lminas de 3 pts diferentes. o mais polivalente dos mtodos cropolgicos, mesmo apresentando < sensibilidade. Para cistos de protozorios e ovos de S. mansoni, A. lumbricoides, T. trichiura, Taenia sp. E ancilostomideos. MTODO DE SHEATHERS (FLUTUAO EM ACAR):misturar em parte = fezes e sol de NaCl; filtrar em gaze dobrada em 2 para tb de centrfuga completando at a metade; completar o tb com sol saturada de acar; cobrir tb com pedao de plstico (lamnula) ou celofane e fix-lo; cobrir com lamnula e centrifugar por 5min ou repousar por 1h; retirar lamnula colocando-a em lmina e obs o mat em microscpio 400X. para oocistos e coccdios. TCNICA DE STOLL: uma tcnica quantitativa , na qual as fezes so ressuspensas em NaOH 0,1N que tem a finalidade de desagregar e clarificar o material. A suspenso feita em um frasco tipo Erlenmeyer , cujo gargalo traz duas marcas, uma indicando 56 cm e a outra 60 cm . TCNICA DE RITCHIE: Homogeinizar aproximadamente 3g de fezes em 10ml de gua; filtrar a mistura em gaze dobrada em 4 para o tb de centrifugao; centrifugar a 2500 rpm -1min; decantar o sobrenadante e add sol de formol a 10% e 3ml de ter; tampar o tb e agitar; centrifugar a 250 rpm 1min; decantar o sobrenadante (3 camadas superiores: ter, gordura com detritos e formol a 10%; juntar ao sedimento 1 gt de Lugol, agitar e recolher 1 parcela do mesmo examinando entre lmina e lamnula no micro. Detecta cistos de protozorios e ovos de helmintos, eventualmente larvas.

MTODO DE GRAHAN: Aderir um pedao de fita durex a extremidade de 1 lmina passando a msm para o outro lado desta at que se atinja a extremidade oposto; no momento do uso, desloca-se parte da fita, invertendo-a sobre a extremidade oposta da lmina de modo que o lado aderente se exteriorize; que deve ento ser aderida a mucosa da regio peri-anal e em seguida, coloca novamente a lmina; e examina em microscpio composto. Material deve ser colhido pela manh, antes que o pcte se levante ou realize qq tipo de higiene. Indicado para adultos e ovos de E. vermiculares e proglotes de T. saginata. MTODO DE BAERMANN-MORAES: colocar sobre 1 cestinha metlica gaze dobrada em 4, 10g de fezes; colocar gua morna (40 a 45) em 1 funil d e12 cm dia, contendo na parte inf 1 borracha fechada com pina de Mohr; encaixe a cesta no funil com as fezes parcialmente submersas na gua; aps 1h recolher 5-7ml do mat do tb de borracha em 1 vd de relgio; examinar microscpio estereoscpio. O aquecimento brando da lmina mata as larvas em distenso. Para larvas de Strongyloides stercoralis e ancilostomdeos. AMEBASE: Trofozotos de Entamoeba histolytica / E. dspar. uma infeco do homem pela Entamoeba histolytica, com ou sem manifestaes clnicas. considerado um grande problema de sade pblica, levando ao bito cerca de 100 mil pessoas por ano. A E. histolytica uma espcie patognica e invasiva, com diversos graus de virulncia e diferentes formas clnicas, incluindo a forma extra-intestinal da doena. Os trofozotos do protozorio vivem no intestino grosso, podendo ser tambm encontrados nas ulceraes intestinais, nos abscessos hepticos, pulmonares, cutneos e, mais raramente, no crebro. Manifestaes clnicas Na maioria das vezes a presena de E. histolytica na luz do intestino acontece como um simples comensal, traduzindo assim, as formas assintomticas, que representa os eliminadores de cistos. A doena amebiana caracteriza-se por: Amebase intestinal, onde se evidencia a colite no-disentrica; colite disentrica (disenteria amebiana) com dor abdominal, dez ou mais evacuaes dirias de fezes lquidas mucosanguinolentas, nuseas, vmitos, tenesmo e febre; colite fulminante e colite amebiana crnica; Amebase extraintestinal, com maior frequncia dos abscessos hepticos. Outros stios extra-intestinais de envolvimento so o pericrdio, sistema nervoso central, pulmo e pele. Complicaes: Formao de granulomas amebianos (amebomas) na parede do intestino grosso, perfurao com peritonite, apendicite e fstulas. Cistos de Entamoeba histolytica. Transmisso: Ingesto de cistos maduros do parasito em gua ou alimentos contaminados com fezes. Pode tambm ocorrer transmisso sexual devido a contato oral-anal; por meio das mos contaminadas com material fecal que podem reter os cistos, sobretudo sob as unhas e, transporte mecnico de cistos por insetos. O diagnstico laboratorial da amebase baseia-se no exame parasitolgico de fezes com pesquisa de cistos e/ou trofozotos; provas imunolgicas com pesquisa de anticorpos no soro e pesquisa de antgenos em fezes; e pela biologia molecular (Reao em Cadeia da Polimerase - PCR). A E. histolytica tambm pode ser cultivada em meio xnico, meio monoxnico e em meio axnico. A E. histolytica, entretanto, morfologicamente idntica a E. dispar, espcie no patognica. O diagnstico diferencial entre as duas espcies deve ser baseado no perfil eletrofortico de enzimas da via glicoltica, no diagnstico imunolgico com a pesquisa de coproantgenos especficos usando a tcnica de ELISA, e pela PCR. GIARDASE: a infeco ou doena causada pelo protozorio Giardia lamblia (sinonmia: G. intestinalis, G. duodenalis e Lamblia intestinalis). Este protozorio tem como habitat o intestino delgado, vivendo no duodeno e na poro inicial do leo. A giardase apresenta um quadro clinico diverso, desde as formas assintomticas, que representam a maioria dos casos, at formas muito graves em crianas ainda sem imunidade e em adultos imunodeprimidos. A infeco sintomtica tem sido associada com diarria aguda e auto-limitante, ou com um quadro severo de diarria crnica e m absoro intestinal. Outros sintomas completam o quadro clnico: nuseas, vmitos, dor abdominal, constipao intestinal, irritabilidade, anorexia, fadiga, flatulncia e perda de peso. A esteatorria crnica pode levar a desnutrio pela deficincia e perda das vitaminas lipossolveis (A, D, E, K), vitamina B12 e cido flico, cidos graxos e protenas. Trofozotos de Giardia lamblia transmitidos pela ingesto de cistos maduros do parasito em gua ou alimentos contaminados com fezes. Pode tambm ocorrer transmisso sexual devido a contato oral-anal; por meio das mos contaminadas com material fecal que podem reter os cistos, sobretudo sob as unhas e, transporte mecnico de cistos por insetos. O diagnstico laboratorial da giardase baseia-se no exame parasitolgico de fezes com pesquisa de cistos e/ou trofozotos; pesquisa de trofozotos no fluido duodenal; provas imunolgicas (ELISA) com pesquisa de antgenos em fezes; e pela biologia molecular (Reao em Cadeia da Polimerase - PCR). +++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ Parasitoses emergentes: Definio: Doenas parasitrias surgidas recentemente ou que apresentam aumento crescente de incidncia. Fatores: alterao do meio ambiente, avanos nas tcnicas de diagnstico e aumento da incidncia de AIDS. Outros fatores: uso de imunossupressores (transplantes) e quimioterapia. CICLOSPOROSE - CYCLOSPORA CAYETAMENSIS

* Oocistos: Tambm chamados de Coccdeos. So esporulados e possuem de 8 a 10 micrometros. Por serem esporulados possuem portanto esporocistos dentro, no caso cada oocisto tem 2 esporocistos e cada esporocisto possui 2 esporozotos. O habitat do Cyclosporo cayetanensis a mucosa intestinal. Portanto uma parasitose intestinal, possuindo como sintomas diarria, desidratao, perda de peso e etc. Porm quando o oocisto no est maduro ainda, ele no tem esporos. Quando amadurece ele ganha esporos com esporozotos prontos para infectar. * Ciclo no ser humano: Ingesto do oocisto, quando chega ao habitat (intestino) rompe a membrana e libera os esporocistos (esporos), logo j rompe os esporocistos tambm e libera finalmente os esporozotos. Esses esporozotos aderem a mucosa intestinal para ento se reproduzirem assexuadamente (multiplicao). Nessa fase de reproduo que comeam a aparecer os sintomas. Nas fezes saem alguns desses parasitas que se encistam formando oocistos imaturos. Nas fezes ele amadurece e evolui a oocisto maduro que a forma de infeco que dever ser ingerida pela pessoa para adquirir a parasitose. * Sintomas: Diarreia aquosa. Que leva a perda de peso, desnutrio e desidratao. Constipao (clica de gases), nauseas. No possuem muitas evacuaes por dia. Por ser uma parasitose oportunistas em imunocompetentes so comumente assintomticos, eliminando o parasita normalmente. J em imunocomprometidos, dura por volta de 7 semanas, mesmo tomando medicamento, pois o medicamento no atua sobre as formas de resistncia. Ento tem-se que esperar liberar todos os oocistos. CRIPTOSPORIDIOSE - CRYPTOSPORIDIUM PARVUM * Oocisto: Tamanho cerca de 4 micromeros. Esporulado, tendo entao 4 esporozoitos dentro. Tambm um parasita intestinal, porm possui ao osbtrutiva, podendo invadir a mucosa e penetrar assim na corrente sangunea, indo para outros rgo e se hospedar l (como fgado e pulmo). * Ciclo no ser humano: Ingesto do oocisto, vai para o intestino e desincesta, l ele poder invadir a mucosa e ir para o fgado por exemplo. Para diagnstico de Cryptosporidium parvum nesse caso, somente se poderia fazer por exame imunolgico e quantificao e identificao de anticorpos IgG para o parasita. Mas tambm pode ocorrer que os esporozotos depois do desincestamento fiquem no intestino aderidos na mucosa onde ocorrer multiplicao. Solta-se da mucosa e sai do organismo pelas fezes se transformando na forma de resistncia. * Sintomas: Como parasita intestinal tambm possui como sintoma diarreia, porm diferente do Ciclosporo cayetanensis, o Cryptosporidium parvum causa diarreia com cerca de 10 vezes mais intensidade. Causa febre por ao inflamatria que ocorre com a perfurao da mucosa, pode provocar vmito tambm. A febre mais intensa em indivduos que desenvolveram hepatomegalia. Essa fase s chega indivduos imunocomprometidos, pois em imunocompetentes esse parasita passa assintomtico. * Diagnstico: Exame de fezes e exame imunolgico. ISOSPOROSE - ISOSPORA BELLI * Oocisto: Tambm esporulado com 4 esporozotos cada. Chega a cerca de 30 micrometros, sendo o maior oocisto entre C. cayetanensis, C. parvum e I. belli. Protozorio intestinal que em imunocomprometidos causa cerca de 10 evacuaes por dia. Provoca sintomas como diarreia mesmo em pacientes imunocompetentes. Tambm possui capacidade de invaso de mucosa (ao obstrutiva). * Ciclo no ser humano: Ingesto do oocistos e desencistamento no intestino. Com a liberao dos 4 esporozotos, eles aderem a mucosa e se replicam (fase de multiplicao). Pode gerar gametas dessa multiplicao assexuada, que iro se juntar e dar origem a um novo oocisto imaturo (processo sexuado). Quando ocorre invaso de mucosa entram em contato com a corrente sanguna e contaminam outros rgo inclusive linfonodos. Essa ao ocorre somente em pacientes contaminados imunocomprometidos. * Sintomas: Nauseas, vmito, anorexia (perda de peso), desidratao, desnutrio que pode levar a casos de anemia por dificuldade de absoro. Em casos crnicos (pacientes imunocomprometidos) chega a causar hepatomegalia, problemas no bao e problemas respiratrios. * Diagnstico: Para essas trs parasitoses emergentes quando diagnosticado no exame de fezes presena do oocisto mais comum de ser encontrado o no esporulado (imaturo), at porque coleta-se as fezes logo depois que elas saem e coloca-se em um conservante onde o oocisto no amadurece. Para esse exame na tentativa de visualizao de oocisto, deve-se fazer colorao com Kinyon, que consegue colori-los. Tambm pode ser diagnosticado por exame imunolgico, inclusive a nica forma de diagnosticar na fase crnica, verificando presena de IgG para I. belli.