Plantas y Cultivos Trans

Plantas y cultivos transgnicos

Cristina Rivas Wagner
INDICE Introduccin .... Qu son las plantas transgnicas Ejemplos de tecnologa MG que podran beneficiar a la agricultura Resistencia a las plagas . Mejora del rendimiento .. Tolerancia al estrs bitico y abitico . Uso de tierras marginales .. Beneficios en cuanto a nutricin Menor impacto ambiental Otros beneficios de las plantas transgnicas Frmacos y vacunas procedentes de plantas transgnicas .. Obtencin de vectores para transformacin directa .. Mtodos de transformacin Electroporacin de protoplastos Biobalstica Transformacin mediante infeccin con Agrobacterium Plantas resistentes a los insectos: La toxina de Bacilus Thuringiensis Plantas resistentes a herbicidas . 21 24 14 09 11 11 12 13 05 06 07 07 08 08 09 09 04 05
Plantas resistentes a Virus: Estrategias para la proteccin de plantas mediante ingeniera .. 26 Expresin de protenas de la cubierta y resistencia en plantas transgnicas 27 Uso de RNAs satlites 28 Uso de RNA antisentido 29 Produccin de vacunas y compuestos farmacuticos en plantas transgnicas 31 Anticuerpos en plantas transgnicas 32 Vacunas comestibles . 33 Productos transgnicos del futuro .. 36 Conclusin . 42 Anexos . 43 Bibliografa 47
INTRODUCCIN | 1 Es imprescindible que mejoremos la produccin y distribucin de los alimentos, si es que queremos alimentar y librar del hambre a la creciente poblacin mundial, al mismo tiempo que reducimos los impactos ambientales y generamos empleos productivos en las regiones de bajos ingresos. Para lograrlo, ser necesario hacer un uso adecuado y responsable de los descubrimientos cientficos y las nuevas tecnologas. Los creadores y supervisores de la tecnologa MG aplicada a las plantas y los microorganismos, debieran cerciorarse de que sus esfuerzos atiendan esas necesidades. Mediante el uso de la tecnologa MG es factible producir alimentos ms nutritivos, estables en almacenamiento y, en principio, promotores de la salud (trayendo beneficios por igual a los consumidores de los pases industrializados y en vas de desarrollo). Se requieren nuevos esfuerzos, por parte del sector pblico, para crear cultivos transgnicos que beneficien a los agricultores de escasos recursos de los pases en vas de desarrollo y faciliten el acceso de stos a los alimentos mediante la produccin, con mano de obra intensiva, de cultivos bsicos como maz, arroz, trigo, yuca (mandioca), camote (ame), sorgo, pltano macho (cambur) y batata (boniato). Se necesita el esfuerzo cooperativo de los sectores pblico y privado para desarrollar nuevos cultivos transgnicos que beneficien a los consumidores, sobre todo a los del mundo en vas de desarrollo. Deben hacerse esfuerzos concertados y organizados para investigar los posibles efectos ambientales (tanto positivos como negativos) de las tecnologas MG en cada una de sus aplicaciones especficas. Dicho efectos deben ser evaluados comparndolos con los causados por las tecnologas agrcolas ordinarias en uso actual. Es necesario implantar sistemas reguladores de salud pblica en cada pas, para identificar y hacer un seguimiento de cualquier efecto potencial adverso de las plantas transgnicas contra la salud humana, como se hace para cualquier otra nueva variedad vegetal. Las corporaciones privadas e instituciones de investigacin deberan establecer acuerdos para compartir la tecnologa MG (que est controlada actualmente por medio de patentes y acuerdos de licencia sumamente estrictos) con cientficos responsables, que la utilicen para aliviar el hambre y promover la seguridad alimenticia de los pases en vas de desarrollo. Adems, conviene que los agricultores de escasos recursos del mundo entero cuenten con exenciones especiales para protegerlos de las restricciones inadecuadas en cuanto a la propagacin de sus cultivos.
QU SON LAS PLANTAS TRANSGNICAS? | 2 La planta transgnica contiene uno o ms genes que han sido insertados en forma artificial en lugar de que la planta los adquiera mediante la polinizacin. La secuencia gnica insertada (llamada el transgen) puede provenir de otra planta no emparentada o de una especie por completo diferente: por ejemplo, el maz Bt, que produce su propio insecticida, contiene un gen de una bacteria. Las plantas que tienen transgenes a menudo son llamadas genticamente modificadas o cultivos GM, si bien en realidad todos los cultivos han sido genticamente modificados con respecto a su estado silvestre original mediante la domesticacin, la seleccin y el mejoramiento controlado a travs de perodos prolongados.
EJEMPLOS DE TECNOLOGA MG QUE PODRAN BENEFICIAR A LA AGRICULTURA | 3 Hasta la fecha, la tecnologa MG ha servido, ms que nada, para producir varios cultivos agrcolas con caractersticas "dictadas por el mercado", algunas de las cuales han alcanzado el xito comercial. El desarrollo de variedades producidas comercialmente en pases como Estados Unidos y Canad, se ha enfocado en aumentar la vida en anaquel de las frutas y verduras, conferir resistencia contra virus o insectos y conferir tolerancia a herbicidas especficos. Aunque estas caractersticas han resultado benficas para los agricultores, ha sido difcil lograr que los consumidores vean algn beneficio como no sea, en casos limitados, un mejor precio debido al abatimiento de los costos y la mayor facilidad de produccin (Nelson y cols. 1999; Falck-Zepeda y cols. 1999). Una posible excepcin es el desarrollo de tecnologa MG para retrasar la maduracin de las frutas y verduras, lo que permite tenerlas almacenadas por ms tiempo. Los agricultores se beneficiaran con este avance al disponer de mayor flexibilidad en cuanto a produccin y cosecha. Los consumidores tambin se beneficiaran al poder adquirir frutas y verduras, como los jitomates transgnicos modificados para que se ablanden ms
lentamente que las variedades tradicionales, lo que significa mayor duracin en almacenamiento, menor costo de produccin, ms calidad y menos precio. Existe la posibilidad de que los agricultores de los pases en vas de desarrollo se beneficien considerablemente con los cultivos que maduran o se ablandan lentamente, pues eso podra darles mayor flexibilidad para la distribucin de la que disponen actualmente. En muchos casos, los agricultores en pequeo sufren graves prdidas debido a la maduracin o reblandecimiento excesivos o descontrolados de sus frutas o verduras. El verdadero potencial de la tecnologa MG para ayudar a resolver algunos de los problemas ms graves de la agricultura mundial acaba de empezar a ser explorado. Los siguientes ejemplos nos mostrarn cmo puede aplicarse la tecnologa MG en algunos problemas agrcolas especficos en los que indicamos los beneficios potenciales.
Resistencia a las plagas | 3.1 Obviamente, los agricultores se beneficiaran si se desarrollan plantas transgnicas resistentes a plagas especficas. Por ejemplo, en Hawai se han estado vendiendo y plantando, desde 1996, papayos resistentes a la mancha anular viral de la papaya (Gonsalves 1998). Por otra parte, el ambiente tambin se beneficiara al aminorar el uso de plaguicidas. Los cultivos transgnicos que contienen genes de resistencia a los insectos, procedentes de Bacillus thuringiensis, han hecho posible reducir considerablemente la cantidad de insecticida que se le aplica al algodn en Estados Unidos. En un anlisis, por ejemplo, se demostr que hubo una reduccin de dos millones de hectreas tratadas en 1999, es decir, un milln de kilogramos de insecticidas qumicos, en comparacin con 1998 (U.S. National Research Council 2000). Sin embargo, las poblaciones de plagas y organismos fitopatgenos se adaptan rpidamente y se vuelven resistentes a los plaguicidas, y no existen razones para suponer que no ocurrir lo mismo, y con la misma rapidez, en el caso de las plantas transgnicas. Adems, los biotipos de las plagas varan de una regin a otra. Por ejemplo, es probable que los cultivos resistentes a insectos diseados para Estados Unidos y Canad tengan resistencia a plagas que no ocasionan problemas en los pases en vas de desarrollo, y esto ocurre por igual en las plantas transgnicas y en las desarrolladas por medio de tcnicas de cruzamiento ordinarias. Incluso en el caso de que los mismos genes de resistencia a los insectos o los herbicidas sean tiles en varias regiones, normalmente es necesario introducirlos en cultivares adaptados a las condiciones locales. Por lo tanto, se requieren ms investigaciones sobre las plantas transgnicas que se han vuelto resistentes a plagas locales, a fin de evaluar su sustentabilidad frente a un aumento en las presiones de seleccin para plagas cada vez ms virulentas.

Mejora del rendimiento | 3.2
Una de las principales tecnologas que desembocaron en la "Revolucin verde", fue la creacin de variedades de trigo semienanas de alto rendimiento. Los genes responsables de esa reduccin de altura fueron los genes japoneses NORIN 10 introducidos en los trigos occidentales durante la dcada de 1950 (genes del enanismo insensibles a la giberelina). Estos genes tenan dos ventajas: producan una planta ms corta y fuerte, que responda bien a la aplicacin de ms fertilizante sin colapsarse; y aumentaban directamente el rendimiento al reducir la elongacin celular de las partes vegetativas de la planta, de modo que sta inverta ms energa en las partes reproductivas comestibles. Estos genes fueron aislados en fechas recientes, y se demostr que actan exactamente de la misma manera cuando se les utiliza para transformar otras especies de plantas agrcolas (Peng y cols. 1999). Hoy por hoy, esta tcnica de enanismo puede utilizarse para aumentar la productividad de cualquier planta agrcola cuyo rendimiento econmico se encuentre en las partes reproductivas, en vez de en las vegetativas.
Tolerancia al estrs bitico y abitico | 3.3 La creacin de cultivos con resistencia intrnseca al estrs bitico y abitico, ayudara a estabilizar la produccin anual. Por ejemplo, el virus de la mancha amarilla del arroz (RYMV) devasta los arrozales africanos al destruir directamente la mayor parte del cultivo, con un efecto secundario en las plantas sobrevivientes, a las que vuelve ms vulnerables a las infecciones micticas. Como resultado, este virus ha puesto en serio peligro la produccin arrocera de frica. Los mtodos ordinarios de control del RYMV, que se basan en las tcnicas tradicionales de cruzamiento, no han logrado introducir la resistencia de las especies silvestres en el arroz cultivado. Los investigadores han recurrido a una nueva tcnica, que imita la "inmunizacin gentica", al crear plantas de arroz transgnicas que son resistentes al RYMV (Pinto y cols. 1999). Actualmente, las variedades transgnicas resistentes estn a punto de ser sometidas a pruebas de campo con el fin de evaluar la eficacia de su resistencia al RYMV. Esta podra ser la solucin del riesgo de colapso total de las regiones arroceras del sub-Sahara africano. Podramos dar muchos otros ejemplos para ilustrar la gama de las investigaciones cientficas actuales, como las plantas transgnicas modificadas para combatir el virus de la mancha anular de la papaya (Souza 1999), las papas resistentes al tizn (Torres y cols. 1999) y arroz resistente al tizn bacteriano de la hoja (Zhai y cols 2000), o como ejemplo de un factor abitico, plantas modificadas para producir un exceso de cido ctrico en las races que, de ese modo, toleran mejor el aluminio presente en los suelos cidos (de la Fuente y cols. 1997). Estos ejemplos tienen un claro potencial comercial, pero ser imprescindible, si es que queremos obtener los mximos beneficios, que la investigacin de tecnologa MG siga financiada con recursos pblicos. Por ejemplo, pese a que la tecnologa MG nos da acceso a nuevas pozas genticas donde se encuentran fuentes de
resistencia, ser necesario demostrar que dichas fuentes sern ms estables que las fuentes de resistencia intraespecficas usadas de manera ordinaria.
Uso de tierras marginales | 3.4 Una inmensa extensin de la superficie terrestre del planeta, tanto en las costas como en el interior de los continentes, se considera marginal porque es excesivamente salina o alcalina. Ya se logr identificar, clonar y transferir a otras plantas un gen de tolerancia a la sal presente en el mangle negro (Avicennia marina). Segn se ha visto, las plantas transgnicas toleran mayores concentraciones de sal. Asimismo, el gen gutD, de Escherichia coli, ha servido para generar plantas de maz transgnicas que toleran la sal (Liu y cols 1999). Estos genes representan una fuente potencial para el desarrollo de sistemas agrcolas que permitan el uso de las tierras marginales (M.S. Swaminathan, com. pers. 2000).
Beneficios en cuanto a nutricin | 3.5 La deficiencia de vitamina A es causa de que medio milln de nios queden parcial o totalmente ciegos cada ao (Conway y Toennissen 1999). Los mtodos tradicionales de mejora de plantas no han logrado producir cultivos que contengan altas concentraciones de vitamina A, de modo que la mayora de los gobiernos dependen de costosos y complejos programas de complementacin para atender este problema. Los investigadores han introducido tres nuevos genes en el arroz: dos de ellos proceden del narciso y uno de cierto microorganismo. El arroz transgnico exhibe mayor produccin de beta-caroteno, el precursor de la vitamina A, y la semilla es de color amarillo (Ye y cols. 2000). Este arroz amarillo o dorado, puede ayudar a resolver el problema de la deficiencia de vitamina A entre los nios de las regiones tropicales. La fortificacin con hierro es necesaria porque los cereales son deficientes en micronutrientes esenciales como este metal. La deficiencia de hierro provoca anemia en las mujeres embarazadas y los nios pequeos. Por consiguiente, cerca de 400 millones de mujeres en edad reproductiva sufren de esta afeccin y tienen mayores riesgos de muerte fetal o de parir nios con muy bajo peso, as como una mayor probabilidad de muerte por parto. La anemia ha sido identificada como un factor de riesgo en ms de 20% de los casos de muerte posparto en Asia y frica (Conway 1999a, b). Mediante el uso de genes relacionados con la sntesis de una protena fijadora de hierro y con la produccin de una enzima que facilita la absorcin del hierro presente en los alimentos humanos, se produjo un arroz transgnico con altas concentraciones de hierro (Goto y cols. 1999; Lucca 1999). Estas plantas contienen de dos a cuatro veces ms hierro que el arroz no transgnico, pero queda pendiente investigar su asimilacin biolgica.
Menor impacto ambiental | 3.6 La disponibilidad y el uso eficiente del agua se han convertido en temas de importancia mundial. Los suelos sometidos a labores de labranza intensa (arado) para el control de las malezas y la preparacin del suelo, son propensos a la erosin y sufren una grave prdida de agua. Las comunidades tradicionales han recurrido por muchos aos a sistemas de labranza mnima. Existe la necesidad de crear cultivos que prosperen en tales condiciones, incluyendo la introduccin de resistencia a enfermedades de las races que se controlan actualmente por medio de la labranza, as como de herbicidas que puedan ser utilizados en vez de la labranza (Cook 2000). Segn se ha visto en los pases ms desarrollados, la tecnologa MG es una herramienta til para introducir resistencia a las enfermedades radiculares en condiciones de labranza mnima. Sin embargo, ser necesario un cuidadoso anlisis de tipo costo-beneficio, a fin de asegurar el logro del mximo provecho. Asimismo, ser necesario evaluar minuciosamente las diferencias regionales en cuanto a tcnicas agrcolas, as como el impacto potencial de la sustitucin de un cultivo tradicional por uno nuevo de tipo transgnico.
Otros beneficios de las plantas transgnicas | 3.7 Las variedades transgnicas de primera generacin han beneficiado a muchos agricultores en forma de menores costos de produccin, mayores rendimientos o ambas cosas. En muchos casos, tambin han beneficiado al ambiente porque reducen el uso de plaguicidas o permiten la siembra de cultivos con menos actividades de labranza. Los insectos ocasionan enormes prdidas agrcolas en el campo y en los productos cosechados que se encuentran en trnsito o almacenamiento, pero las preocupaciones en cuanto a la salud de los consumidores y el impacto ambiental, han limitado el registro de muchos plaguicidas qumicos prometedores. Los genes de resistencia a las plagas, cuando son introducidos cuidadosamente en los cultivos para evitar la seleccin futura de resistencia a las plagas, constituyen alternativas con las que puede reducirse el uso de plaguicidas qumicos en muchos cultivos importantes. Adems, reducir la contaminacin de nuestros alimentos por parte de patgenos que constituyen riesgos de salud por la va alimenticia (p.ej., las micotoxinas), sera benfico para los agricultores y consumidores por igual.
Frmacos y vacunas procedentes de plantas transgnicas | 3.8 Existen vacunas contra muchas de las enfermedades que le provocan grandes sufrimientos e incluso la muerte a numerosas personas en los pases en vas de desarrollo, pero su produccin y aplicacin son normalmente muy costosas. Casi todas las vacunas deben ser almacenadas
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en condiciones de refrigeracin, y para su aplicacin se depende de especialistas debidamente capacitados, lo que se suma a los gastos. En algunos pases, incluso el costo de las agujas para inyectar las vacunas puede ser prohibitivo. Por consiguiente, suele suceder que las vacunas no llegan a quienes ms las necesitan. Actualmente, los investigadores estn estudiando el potencial de la tecnologa MG para la produccin de vacunas y frmacos por medio de plantas. Esto significara un acceso ms fcil, una produccin ms econmica y una manera alternativa de generar ingresos. Ya se han producido vacunas contra enfermedades infecciosas del aparato digestivo en plantas como la papa y el pltano (banano) (Thanavala y cols. 1995). Otro objetivo adecuado seran los cereales. Recientemente se logr expresar, en semillas de arroz y trigo, un anticuerpo contra el cncer que reconoce clulas cancerosas de pulmn, mama y colon y que, por lo tanto, puede ser til para el diagnstico y la terapia en lo futuro (Stoger y cols. 2000). Estas tecnologas se encuentran en una fase an muy temprana de su desarrollo, y ser necesario investigar las preocupaciones obvias en cuanto a la salud humana y la seguridad ambiental durante su produccin, antes de que dichas plantas sean aprobadas como cultivos especiales. No obstante, la creacin de plantas transgnicas para la produccin de sustancias teraputicas tiene un enorme potencial como una manera de ayudar a resolver los problemas de enfermedad en los pases en vas de desarrollo. Casi una tercera parte de las medicinas que se utilizan actualmente se derivan de las plantas, uno de los ejemplos ms famosos es el de la aspirina (la forma acetilada de un producto natural de las plantas, el cido saliclico) Se cree que menos de 10% de las plantas medicinales han sido identificadas y caracterizadas, y existe la posibilidad de utilizar la tecnologa MG de tal manera que aumente los rendimientos de las sustancias medicinales una vez identificadas. Por ejemplo, las valiosas sustancias contra el cncer vinblastina y vincristina son los nicos medicamentos aprobados para el tratamiento del linfoma de Hodgkin. Ambas se derivan de la vincapervinca (hierba doncella) de Madagascar, que las produce en muy pequeas concentraciones junto con 80 a 100 compuestos qumicos muy similares. Por consiguiente, la produccin de estos compuestos teraputicos es sumamente costosa. En la actualidad se estn llevando a cabo investigaciones intensivas con el fin de descubrir el potencial de la tecnologa MG en cuanto se refiere a incrementar las concentraciones de compuestos activos o permitir su produccin en plantas ms fciles de cultivar que la vincapervinca (Leech y cols. 1998). Es nuestra recomendacin que la investigacin y desarrollo de cultivos transgnicos debiera enfocarse en plantas que: (i) aumenten la estabilidad de la produccin; (ii) le aporten beneficios nutritivos al consumidor; (iii) reduzcan el impacto ambiental de la agricultura intensiva y extensiva; y (iv) faciliten la produccin de frmacos y vacunas; al mismo tiempo que (v) se desarrollen protocolos y reglamentos que aseguren que los cultivos transgnicos diseados para satisfacer necesidades no alimenticias, como la produccin de compuestos farmacuticos, sustancias qumicas industriales, etc., no se difundan o mezclen con otros cultivos alimenticios transgnicos o no transgnicos.
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OBTENCIN DE VECTORES PARA TRANSFORMACIN DIRECTA | 4 Los vectores utilizados en la transformacin de plantas mediante mtodos directos, son plsmidos bacterianos en los que han sido clonados los genes a ser introducidos en el genoma vegetal. Estos vectores son de tamao variable (2 a 50 kb). Una vez identificados los genes y las respectivas secuencias reguladoras, ellos son agrupados, formando una construccin que consta de un promotor, una secuencia codificadora, y una seal de terminacin. Esas construcciones son luego introducidas en un vector adecuado, o sea en un plsmido bacteriano. Un vector contiene bsicamente, los genes de inters a ser introducidos, los genes marcadores para transformacin y seleccin, un origen de replicacin, y un gen que confiere a las bacterias resistencia a un antibitico. Uno de los genes marcadores ms utilizados es el gus (uidA), debido a que su expresin puede ser fcilmente detectada mediante mtodos enzimticos, colorimtricos y de fluorescencia. Como se mencion, para la seleccin de las clulas transformadas se utilizan genes que confieren resistencia a antibiticos. Los ms utilizados son el gen neo (npt II), que confiere resistencia a la canamicina, geneticina o paromomicina y el gen hpt, que confiere resistencia a la higromicina. Tambin se puede recurrir a genes que confieren resistencia a herbicidas, como el bar, que codifica a la enzima fosfinotricina acetiltransferasa (PAT), confiriendo resistencia a la fosfinotricina. Existen diferentes mtodos de aislamiento de plsmidos bacterianos. Todos ellos siguen tres etapas bsicas: crecimiento de la bacteria y amplificacin del plsmido, concentracin y lisis de las clulas bacterianas, y purificacin del plsmido. El mtodo de aislamiento del plsmido por lisis alcalina ha sido empleado exitosamente en diferentes linajes de bacterias. Se basa en la naturaleza circular de los plsmidos y en el alto peso molecular del ADN cromosmico. Cuando un extracto celular se expone a un pH alcalino (cercano a 12), el ADN linear (cromosmico) se desnaturaliza mientras que el ADN circular (plsmido) permanece intacto. Luego el extracto es neutralizado con una solucin de acetato de sodio, en presencia de una alta concentracin salina, lo que hace que el ADN cromosmico precipite, junto con las protenas.
MTODOS DE TRANSFORMACIN | 5 Los bilogos pueden recurrir a tres mtodos, para introducir los genes de inters en la clula vegetal. Ellos son: electroporacin de protoplastos, biobalstica e infeccin con Agrobacterium.
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- Electroporacin de protoplastos: Se trata de un mtodo utilizado para introducir macromolculas en clulas vegetales. Llamamos protoplastos a las clulas vegetales desprovistas de su pared celular (Figuras 1 y 2). Cuando estos protoplastos son cultivados in vitro, pueden reconstituir su pared, dividirse por mitosis y regenerar una planta entera. La obtencin de protoplastos requiere de la incubacin del tejido vegetal en un medio de digestin compuesto de enzimas pectocelulolticas, como las que digieren la celulosa, las hemicelulosas, y las pectinas, que son los principales constituyentes de las paredes celulares. Es importante que el pH de las soluciones empleadas favorezca la actividad de las enzimas empleadas, sin comprometer la viabilidad de las clulas. Luego de la digestin de la pared celular, se procede a la purificacin y determinacin del nmero de protoplastos intactos. La electroporacin consiste en la induccin de poros reversibles en las membranas celulares, que permiten el pasaje de iones y molculas. La electroporacin de protoplastos se realiza inmediatamente despus de su purificacin. Para ello, una suspensin de protoplastos se incuba con los plsmidos en los que estn clonados los genes de inters, y los genes marcadores, que posibilitan la identificacin de las clulas transformadas. La mayora de los aparatos de electroporacin (electroporadores) utilizan descargas de capacitores, para producir descargas de alto voltaje. La intensidad del pulso est determinada por el voltaje aplicado y la conductividad del medio. El grado de permeabilidad de la membrana, por su parte, depende del campo elctrico aplicado y del tipo celular. Altos niveles de permeabilidad facilitan la entrada del ADN, pero disminuye la viabilidad de las clulas. La eficiencia de la transformacin puede estimarse mediante dos parmetros: Frecuencia absoluta de transformacin: n de colonias transformadas n inicial de protoplastos
Frecuencia relativa de transformacin: n de colonias transformadas . 100 n inicial de colonias obtenidas
La eficiencia de la transformacin vara considerablemente entre especies, y entre cultivares de la misma especie. Se han reportado frecuencias absolutas de transformacin en el rango de 10-6 a 10-3.
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Figura 1: Protoplastos de (derecha).
Oryza sativa (izquierda) y Dahlia pinnata
Figura 2: A, pelos radicales de Medicago sativa; B, protoplastos obtenidos a partir de esos pelos radicales luego de 3 minutos de incubacin con enzimas para digerir la pared celular. La barra blanca, en ambas fotos corresponde a 10 m.
- Biobalstica Esta tcnica fue propuesta por Sanford en 1987, para introducir material gentico en el genoma nuclear de plantas superiores. En los ltimos aos se ha usado para transformar bacterias, protozoos, hongos, algas, insectos y
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tejidos animales. La biobalstica, utiliza microproyectiles a alta velocidad, para introducir cidos nucleicos y otras molculas en clulas y tejidos. Este proceso tambin se conoce con los nombres de bombardeo con microproyectiles, gen gun (pistola gnica), aceleracin de partculas, etc. Se utilizan micropartculas de 0,2 a 4 m de dimetro, cubiertas con secuencias de cidos nucleicos, aceleradas a velocidades superiores a los 1500 km/h. Estas partculas (de oro tungsteno) penetran la pared y la membrana plasmtica, alojndose aleatoriamente en los organoides celulares. Posteriormente, el ADN se libera de las partculas y se integra en el genoma nuclear del organismo receptor. Se han desarrollado varios mecanismos para lograr la aceleracin de las micropartculas, entre los que se destaca uno que funciona mediante la descarga de helio de alta presin. En la Figura 3 se aprecia un esquema de una pistola gnica.
Figura 3: Fotografa mostrando una pistola gnica. - Transformacin mediante infeccin con Agrobacterium. Este mtodo se basa en el uso de una bacteria del gnero Agrobacterium como herramienta para introducir el gen de inters en el genoma de la planta. Antes de describir la tcnica propiamente dicha, veamos algunas caractersticas de la especie bacteriana. I) Caractersticas del gnero Agrobacterium Se trata de bacterias aerbicas y Gram positivas, comnmente encontradas en el suelo. No forman esporas, poseen forma de bacilo (Figura 4 A) y se mueven por medio de 1 a 6 flagelos. En particular, Agrobacterium tumefaciens, es el agente etiolgico de la agalla de la corona y A. rhizogenes el de la raz en cabellera, ambas diseminadas en
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casi todos los tipos de suelos, cultivados o no. La infeccin de una planta con Agrobacterium, comienza con la penetracin de la bacteria en el tejido vegetal, a travs de una lesin producida por insectos, tratamientos culturales, heladas, etc. Las bacterias son atradas por sustancias liberadas por las clulas lesionadas, tales como aminocidos, azcares y fenoles. Una vez en contacto con las clulas vegetales, las bacterias sintetizan microfibrillas de celulosa, propiciando una mejor fijacin. Las molculas liberadas a travs de las heridas tambin son responsables por la activacin de genes localizados en la regin de virulencia (regin vir) del plsmido Ti de la bacteria (Ti: inductor de tumores) que es un plsmido de alto peso molecular, presente en todos los linajes patognicos de Agrobacterium (Figura 5). La regin vir contiene aproximadamente 25 genes, que codifican protenas que promueven la transferencia de otra regin del plsmido Ti de la bacteria, hacia la clula infectada. Esa regin se denomina T -ADN, y se integra en forma estable, al genoma vegetal. Una vez en el genoma vegetal, los genes de T-ADN (tambin conocidos como oncogenes) son transcriptos, codificando enzimas involucradas en la sntesis de hormonas vegetales, tales como las auxinas y citocininas. Como consecuencia de ese desbalance hormonal, las clulas transformadas proliferan desordenadamente, produciendo un tumor que se conoce vulgarmente con el nombre de agalla de la corona (Figura 4 B). En el caso de A. rhizogenes, la expresin de los oncogenes conduce a la produccin de races en la regin donde se produjo la herida, sntoma denominado races en cabellera. Ntese que en la naturaleza se producen plantas transgnicas, sin la intervencin del hombre, cuando el T-ADN bacteriano es inyectado a la clula vegetal, para luego integrarse y expresarse en el genoma hospedante. El T -ADN tambin posee genes que codifican enzimas responsables por la sntesis de opinas, que son aminocidos y carbohidratos modificados. Las opinas producidas por las clulas transformadas son utilizadas exclusivamente por la bacteria como fuente de energa. Los linajes salvajes, en general no son utilizados para la obtencin de plantas transgnicas, debido a las alteraciones fisiolgicas que ellos producen.
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Figura 4. A: Microfotografa de barrido mostrando A. tumefaciens sobre una clula vegetal, B: Agalla de la corona en girasol.
Figura 5: Plsmido Ti de Agrobacterium tumefaciens
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II) Transformacin de clulas de Agrobacterium con el / los genes de inters. Veamos ahora como podemos introducir los plsmidos que contienen los genes de inters, en las clulas de Agrobacterium (transformacin). Pese a que los oncogenes son los responsables de la produccin de tumores, las nicas regiones del T- ADN esenciales para su transferencia son las secuencias de aproximadamente 25 pb localizadas en sus extremidades. De este modo, los genes presentes en el T - ADN pueden ser eliminados y sustituidos, sin alterar el proceso de transferencia. Adems de las extremidades del T - ADN, la regin vir tambin es esencial para la transferencia. La preparacin de un linaje de Agrobacterium para ser utilizado como vector para la transformacin de plantas transgnicas, incluye dos etapas: En la primera etapa, se debe obtener un linaje desarmado, en el cual el T-ADN original, con sus oncogenes fue eliminado por un proceso de doble recombinacin. Actualmente disponemos de linajes desarmados, obtenidos a partir de linajes salvajes de diferentes orgenes. La segunda etapa, implica la preparacin de un vector conteniendo el TADN con los genes de inters. Debido a su gran tamao (aproximadamente 200 kb), el plsmido Ti no puede ser manipulado directamente, por lo que se emplean plsmidos ms pequeos (vectores), que resultan fciles de manipular. Estos vectores contienen las extremidades del T-ADN, entre las cuales se clonan los genes de inters. Una vez obtenido el vector, este debe ser transferido al Agrobacterium mediante un proceso que se conoce con el nombre de transformacin. Se han desarrollado tres mtodos de transformacin: conjugacin, electroporacin y shock trmico: a) Conjugacin: se trata de un mtodo simple y eficiente que no requiere de equipamiento especfico y prescinde de la preparacin de ADN plasmidial de E. coli. En el protocolo ms comn, se realiza un cocultivo de dos l inajes de E. coli (helper y donante) y un linaje de Agrobacterium (receptora), segn puede apreciarse en la Figura 6. El linaje helper suministra las funciones de movilizacin (mob) y transferencia ( tra) de plsmidos, entre bacterias compatibles, mientras que el linaje donante, contiene el vector que ser transferido. Durante la conjugacin, el plsmido helper es transferido al linaje donante, promoviendo posteriormente su movilizacin hacia Agrobacterium, junto con el vector. El plsmido helper no se replica en Agrobacterium, y por lo tanto es eliminado. Luego de la transferencia, se seleccionan los linajes recombinates de Agrobacterium mediante el uso de antibiticos apropiados. La principal desventaja de la conjugacin es la posibilidad de que ocurran alteraciones en el plsmido introducido, debido a la recombinacin con el plsmido helper.
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T - ADN
a)
binari o
A. tumefacien
s recep tor a Vir
b)
T- ADN
T- ADN
Vir
c)
T- ADN
Vi r
d)
T - ADN
Vir
Figura 6: Transferencia de un vector hacia Agrobacterium mediante conjugacin. El plsmido helper pasa a E. coli donante (a y b), y luego a Agrobacterium, promoviendo la transferencia del vector binario (c). El plsmido helper no se replica en bacterias y es eliminado (d). El vector binario se mantiene independientemente del plsmido Ti desarmado. b) Electroporacin: Consiste en someter a las clulas del linaje receptor de Agrobacterium a un pulso de alto voltaje, generado por un capacitor, en
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presencia del vector. Como consecuencia del campo elctrico generado, la membrana plasmtica se desestabiliza, produciendo poros por los que se produce el pasaje de macromolculas. Se trata de un mtodo muy eficiente y relativamente simple, que se utiliza con mucha frecuencia. Su principal limitante es la necesidad de contar con el equipamiento de laboratorio: electroporador y una fuente de alta tensin. c) Shock trmico (freeze thaw): este mtodo se basa en la permeabilizacin de la membrana en condiciones extremas de temperatura (de 186 a 37C), permitiendo el pasaje del vector hacia el Agrobacterium receptor. En los mtodos directos de transformacin (electroporacin y shock trmico), en los cuales el vector es transferido directamente hacia la clula receptora, la probabilidad de que el ADN se altere es mnima, en comparacin con el mtodo de conjugacin.
III) Obtencin de plantas transgnicas mediante Agrobacterium. El conocimiento de las bases moleculares del mecanismo de infeccin por Agrobacterium, y el desarrollo de tcnicas de biologa molecular, permitieron desarrollar protocolos para introducir en las plantas genes exgenos, utilizando aquella bacteria como vector. Como se ha mencionado en los tems anteriores, esto fue posible gracias a la obtencin de vectores derivados del plsmido Ti Ri, y su introduccin en linajes de Agrobacterium desarmados, en los cuales los oncogenes fueron eliminados. Desde entonces, este sistema de transformacin fue ampliamente utilizado, en un gran nmero de especies. Algunas de las razones que justifican su universalidad, son la alta eficiencia de transformacin, el bajo costo operacional y la simplicidad de las tcnicas. La mayora de los protocolos desarrollados, son una modificacin del propuesto por Horsch en 1985 para transformar discos foliares de tabaco (Nicotina tabacum) y consta de las siguientes etapas (Figura 7): - Infeccin: Consiste en el cultivo del explanto vegetal en un medio lquido slido, junto con el linaje desarmado de Agrobacterium que contiene el los genes a ser introducido/s en la planta. El tiempo de cultivo puede variar desde algunas horas, hasta varios das. En la eleccin del explanto debe tenerse en cuenta la facilidad de reproduccin in vitro. De este modo, dependiendo de las especie y del cultivar, se han utilizado como explantos discos foliares, segmentos de tallos o races, tubrculos, cotiledones, protoplastos, embriones somticos, etc. Generalmente se realiza una herida en el explanto, antes o durante el contacto con la bacteria, ya que a travs de ella se liberan las sustancias que inducen a los genes de virulencia del Agrobacterium. Durante esta etapa, se produce la unin de la bacteria a la regin donde se encuentra la herida, la induccin de los genes de la regin vir, y la transferencia del T-ADN hacia el genoma vegetal. - Seleccin: En una segunda etapa el explanto es transferido a un medio de regeneracin apropiado conteniendo uno ms antibiticos descontaminantes, que permiten eliminar a las clulas de Agrobacterium, que a partir de ese momento ya no son requeridas.
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Normalmente se adiciona al medio de cultivo un agente de seleccin, que es responsable de la inhibicin del crecimiento de las clulas no transformadas. El efecto nocivo de este agente, en las clulas transformadas, es anulado por el producto de expresin del gen marcador de seleccin (generalmente una enzima). De este modo, slo las clulas transformadas sern capaces de desarrollarse en este medio de cultivo selectivo. Debemos tener en cuenta que ningn sistema de seleccin es totalmente eficiente, de modo que pueden producirse algunos escapes (plantas no transformadas, que a pesar de no expresar el gen marcador, consiguen regenerarse en presencia del agente de seleccin). - Enraizamiento: Durante las semanas siguientes, los brotes resistentes al agente de seleccin son aislados a medida que regeneran, y transferidos a un medio de enraizamiento, rico en auxinas (hormonas vegetales, como el cido 3-indol actico, 3- indol butrico, etc, que se caracterizan por inducir la diferenciacin de races). - Rustificacin: Una vez enraizados, los brotes transformados son aclimatados y llevados a invernculo. potencialmente
- Anlisis molecular: Para comprobar la integracin y expresin del gen forneo en el genoma de la planta, es necesario un exhaustivo anlisis molecular, mediante tcnicas como Northern Blot, Southern Blot, Western Blot, etc, que sern descriptas ms adelante. Posteriormente, tambin deben realizarse estudios genticos de segregacin, para demostrar la estabilidad de la integracin.
Figura 7: Etapas de la transformacin con Agrobacterium.
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PLANTAS RESISTENTES A LOS INSECTOS: LA TOXINA DE BACILUS THURINGIENSIS | 6
Las plantas transgnicas resistentes a insectos que se comercializan poseen genes derivados de bacterias (Bacillus thuringensis) que codifican para cristales de protenas txicos para los insectos. Estas toxinas son producidas por las bacterias como protoxinas, y se activan en el tracto digestivo de los insectos. Las toxinas activadas se ligan a receptores especficos del tracto del insecto susceptible. Desde hace ms de 30 aos se vienen utilizando para la proteccin de cultivos insecticidas de aplicacin foliar producidos mediante la fermentacin de la bacteria Bacillus thuringensis (Feldman, 1999). Existen productos foliares Bt para el control de insectos lepidpteros y colepteros. Estos insecticidas, sin embargo, no han tenido una amplia adopcin debido a dificultades en lograr un buen control. Las clulas de las plantas transformadas con el gen Bt presentan el gen y los parmetros (promotores, procesamiento del ARN mensajero, traduccin, localizacin subcelular) involucrados en la expresin del mismo. Las plantas se transforman as en productoras de insecticida, lo que las hace altamente resistentes a un amplio rango de lepidpteros y colepteros. Desde 1995 se han aprobado varios genes Bt para el uso comercial en los cultivos de algodn, maz y papa. La papa tiene un gen que genera una protena especfica contra el coleptero Colorado potato beatle (Leptinotarsa decemlineata). Para el cultivo de algodn la toxina especfica acta sobre lepidpteros: cotton bollworm (Helicoverpa zea) y pink bollworm (Pectinophora gosypiella). En cuanto al cultivo de maz tambin existe una protena con accin especfica contra lepidptero European y southwestern corn borers (Diatraea grandiosella) y corn earworm (Helicoverpa zea). Las plantas transgnicas Bt fueron creadas para reducir la dependencia de los insecticidas convencionales de amplio espectro y reducir de esta forma el impacto que stos tienen en el ambiente por ser no especficos y en algunos casos de gran toxicidad. Otra ventaja que presentaran es que se reduciran los costos de aplicacin de agroqumicos, lo que ira ligado a un aumento en la produccin. Existen reportes de posibles riesgos sobre insectos benficos (parasitoides y predatores de insectos plaga) e insectos no blanco. Dentro de los posibles riesgos se citan efectos sobre las larvas de parasitoides, al afectarse la calidad del husped. Por otro lado las larvas podran verse directamente expuestas a la protena al alimentarse de tejidos contaminados. Otro efecto negativo podra ser que las mismas no pudieran completar su ciclo debido a la muerte del organismo husped. Existen posiciones encontradas con respecto a este punto, ya que se ha afirmado que el
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consumo de dosis subletales de la toxina por parte del husped podra mejorar el nivel de parasitismo, debido a que podra ver afectada su capacidad de defenderse del parasitoide. Los parasitoides adultos tambin pueden verse afectados directamente al consumir flores y savia de plantas que producen toxinas, aunque es muy poco probable que estas protenas se expresen en el nctar. Adems las toxinas Bt ejercen sus efectos letales solamente sobre insectos que poseen los receptores apropiados y las protenas Bt que se expresan en las plantas transgnicas son altamente especficas para Lepidptera y Coleptera. La ubicacin del husped por parte del parasitoide depende de seales olfativas, visuales y tctiles que involucran tanto al husped como a la planta. Se ha postulado que la introduccin de un gen forneo podra llevar a cambios en el perfil de compuestos voltiles por un efecto pleiotrpico o cambios en la mutagnesis insercional. Otro efecto posible sera que la disminucin en el dao a las plantas Bt podra disminuir el atractivo de las mismas al parasitoide. Algo similar sucedera con los predatores en los que se han obtenido resultados contradictorios. Los mecanismos no estn claros. A la preocupacin sobre los posibles efectos en los insectos benficos se suma la posibilidad de aparicin de resistencia por las fuertes presiones de seleccin ejercidas sobre este carcter monognico. Con la introduccin al mercado de numerosos cultivos conteniendo genes Bt, el tema del manejo de la resistencia a insectos (IRM) ha adquirido importancia. Han surgido programas para controlar la aparicin de posibles resistencias. Entre las medidas propuestas para lograr este objetivo se cita: a) el uso de cultivos Bt en un programa de manejo integrado, b) una estrategia que combina una exposicin a altas dosis de la toxina asociado con plantacin de refugios de cutivos no-Bt anexos a los Bt, c) supervisin y deteccin de posibles insectos resistentes en campos de productores. Sin embargo, estas medidas no son fciles de implementar, ya que se introducen nuevos costos al sistema productivo. Adems, hay un gran debate cientfico con respecto a las superficies recomendables para las reas refugio. Ejemplo de cultivos genticamente modificados para la resistencia a insectos Maz Algodn Tomate Papa
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El barrenador europeo del maz (izquierda) y el gusano del copo de algodn (derecha) son dos plagas controladas por el maz Bt y el algodn Bt, respectivamente.
Hbridos de maz resistentes al gusano de la raz del maz El gusano de la raz del maz (Diabrotica spp.) es una grave plaga en muchas zonas de cultivo del cereal en los Estados Unidos. Daa las races de las plntulas jvenes de maz y provoca una reduccin del desarrollo y el deficiente establecimiento de las plantas. Este insecto es el responsable de la aplicacin de la mayor cantidad de insecticida en los campos de maz estadounidenses. Para combatir esta plaga, se debe aplicar el insecticida directamente al suelo, donde puede dejar residuos o provocar la infiltracin hacia el agua subterrnea. Al sustituir estos insecticidas qumicos, los hbridos resistentes al gusano de la raz del maz pueden proporcionar importantes beneficios en cuanto a la calidad
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Larva del gusano de la raz del maz alimentndose de una raz joven.
Escala del dao que causan las larvas al alimentarse de la raz, desde un dao severo (izquierda) a ningn dao (derecha)
PLANTAS RESISTENTES A HERBICIDAS | 7
El control de la maleza es uno de los mayores retos que afronta el agricultor al producir sus cultivos porque la maleza no controlada reduce drsticamente el rendimiento y la calidad de los cultivos. Muchos de los herbicidas que estn en el mercado combaten slo ciertos tipos de maleza y estn aprobados para ser usados nicamente en determinados cultivos y en etapas especficas del desarrollo de las plantas. Los residuos de algunos herbicidas permanecen en el suelo un ao o ms y los agricultores deben prestar mucha atencin a los antecedentes de aplicaciones de herbicidas en un campo cuando planean lo que sembrarn all. Los cultivos tolerantes a los herbicidas pueden resolver muchos de estos problemas porque incluyen transgenes que proporcionan tolerancia a los herbicidas Roundup (nombre qumico: glifosato) o Liberty (glufosinato). Estos herbicidas son de amplio espectro, lo cual implica que matan a casi todos los tipos de plantas excepto aquellas que tienen el gen de la tolerancia. Por consiguiente, el agricultor puede aplicar un solo herbicida en sus campos sembrados con cultivos tolerantes al herbicida y puede usar Roundup y Liberty eficazmente en la mayora de las etapas de desarrollo de los cultivos, segn se requiera. Otro beneficio importante es que esta clase de herbicida se descompone con rapidez en el suelo, lo cual elimina el
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problema de los residuos remanentes del ciclo anterior y reduce los efectos ambientales. Las variedades tolerantes a los herbicidas son populares entre los agricultores porque permiten un control de la maleza menos complicado y ms flexible. Estas variedades comnmente se comercializan como variedades Roundup Ready o Liberty Link.
Ejemplos de cultivos genticamente modificados para tolerar herbicidas: Remolacha azucarera Arroz Maz Algodn Achicoria Colza (Canola) Colza argentina Lino Tabaco Soya
Parcela de soya infestada por malezas (izquierda) y soya Roundup Ready despus del tratamiento con Roundup.
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PLANTAS RESISTENTES A VIRUS: ESTRATEGIAS PARA LA PROTECCIN DE PLANTAS MEDIANTE INGENIERA GENTICA | 8 Los virus pueden ser eliminados de las plantas por cultivo de meristemos. Sin embargo, es mucho ms rentable prevenir la infeccin. No se debe olvidar que una planta curada puede volver a ser infectada por el mismo virus. Por lo general los agricultores siembran un mismo tipo de plantas en una misma zona, por lo tanto la enfermedad podra que dar residente en el suelo durante largo tiempo. Adems, es inviable curar de virus a las plantas para cada siembra. El mecanismo de resistencia a los virus sobre todo el de reconocimiento del blanco no es totalmente conocido. Para limitar la infeccin de un virus puede provocarse una especie de vacunacin utilizando un virus parcialmente daado, cuyos efectos son ms suaves. Las infecciones siguientes, realizadas por unidades ms virulentas, tienen problemas para desarrollarse, tanto si las provoca el mismo virus como especies relacionadas. A este fenmeno se le denomina resistencia cruzada. La proteccin cruzada es una respuesta compleja causada por la replicacin y expresin de un genoma viral completo. La proteccin cruzada debida a ingeniera gentica no utiliza genomas completos. La acumulacin de protenas de la cubierta de un virus (CP) en una clula vegetal confiere resistencia frente al virus de procedencia y a la familia de virus relacionados con l. La expresin de estas protenas en plantas se denomina resistencia mediada por protenas de la cubierta Actualmente proponen 3 estrategias para proteger a las plantas de los virus usando la ingeniera gentica:

Proteccin cruzada modificada. Uso de cidos nucleicos satlites. Uso de RNAs antisentido.
Ejemplos de cultivos genticamente modificados con la caracterstica de resistencia a virus: Papaya Calabaza Papa
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Expresin de protenas de la cubierta y resistencia en plantas transgnicas.
Plsmidos derivados del Ti. Muestran sus regiones comunes
Se han clonado genes de la cubierta de varios virus en vectores de expresin de plantas usando el sistema de transformacin mediado por Agrobacterium tumefaciens el anlisis de RNA se lleva acabo por transferencia de Northern y las protenas de la cubierta se detectan inmunolgicamente por Western. El promotor ms usado es el del rRNA 35S del CaMV. Tambin ha sido demostrado que las plantas de tabaco transgnicas que expresan protenas de la cubierta del TMV(virus del mosaico del tabaco) muestren un descenso significativo de los sntomas desarrollados tras la infeccin. Este fenmeno se ha observado con en otras plantas y con otros virus. En muchos casos la resistencia a los virus se entiende como un descenso en la acumulacin de virus en plantas y la reduccin de las lesiones locales.
Protena de la cubierta del TMV
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Cuando el investigador pretende optimizar la proteccin cruzada sigue el planteamiento de identificar la funcin de cada protena. De esta manera discierne entre los genes responsables del fenmeno de proteccin de aquellos que codifican las protenas causantes de los sntomas de la enfermedad. En las plantas transgnicas se insertan los genes responsables de la proteccin. Deben ser capaces de revertir la infeccin con virus nativos. Existen algunos ejemplos donde esta tcnica ha tenido xito. Veamos algunos: Protenas de la cubierta del TMV fueron introducidas en plantas de tabaco bajo el control del promotor 35S del CaMV. Los sntomas de una infeccin posterior fueron ms dbiles que en las plantas normales. Adems del 1060% de las plantas recombinantes no desarrollaron la infeccin. Plantas protegidas con protenas de la cubierta del AMV (virus del mosaico de la alfalfa) son igualmente resistentes contra las enfermedades. Cuando inoculamos los RNAs de los virus AMV y TMV son tan infecciosos en las platas que expresan protenas de la cubierta como en aquellas que no lo hacen. Uso de RNAs satlites. Se ha observado que algunas secuencias de RNA pueden mejorar los sntomas de la enfermedad causadas por virus de RNA. Son secuencias de pequeo tamao que se replican y encapsulan normalmente, que no tienen homologa con el genoma principal y que no se requieren para la propagacin ni replicacin del virus. Son los denominados RNAs satlites. Su replicacin y transmisin dependen de factores codificados en el genoma vrico. Pueden conferir algn tipo de ventaja selectiva porque no se pierden ni durante la proliferacin ni por seccin natural. La estrategia de proteccin gentica consiste en introducir copias en DNA del vector RNA satlite. Parecen ser capaces de inhibir la formacin de sntomas. En uno de los experimentos que demuestran lo anteriormente dicho transformaron plantas de tabaco con RNA satlite de CMV (virus del mosaico del pepino) bajo el control del promotor 35S rRNA del CaMV, usando el sistema de Agrobacterium. Tanto las plantas transgnicas como las de control desarrollaron lesiones clorticas en las hojas en las que se produjo la infeccin. Sin embargo, las plantas control desarrollaron sntomas de mosaico en todas las hojas invadidas sistemticamente, mientras que las transgnicas muestran los sntomas en las 2 o 3 hojas invadidas sistemticamente. En las posteriores no se producen sntomas. Existen 3 tipos de pruebas para diagnosticar la infectividad de un virus: Transferencia de Northern: Se usan sondas tanto par el RNA viral como para el del RNA satlite. se pretende averiguar el efecto del satlite sobre el genoma viral. Inmunoensayo: para medir la abundancia de protenas de la cubierta.
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Test de infectividad en Chenopodium amanticolor: Esta es una planta que hospeda al CMV. En ella la formacin de lesiones locales es proporcional a la concentracin de partcula biolgicamente activas del virus. Como resultado de estas pruebas se ha concluido que hay correlacin entre la reduccin de los sntomas de infeccin y el descenso en la replicacin del virus. Para determinar el espectro de proteccin de este sistema se inoculan diferentes especies de virus en las plantas transgnicas. Solamente el TAV(tomato aspermy virus) indujo la sntesis del RNA satlite del CMV y redujo los sntomas. El CMV y el AMV son virus estrechamente relacionados filogenticamente. Sin embargo, la atenuacin de los sntomas no est relacionada ni con la reduccin de la replicacin del RNA genmico ni con la reduccin de la infectividad de los extractos de los tejidos. De manera similar se ha investigado el efecto del RNA satlite del TabRV (tobacco rinespot virus) en plantas transgnicas. Cuando el virus infecta la clula produce un incremento drstico en la transcripcin del cDNA satlite. Cuando se encuentra con trmeros de este cDNA (por ejemplo: tres copias del monmero situadas en tandem) se produce la reduccin de sntomas. Los trmeros son escindidos por la clula a unidades monomricas. Sin embargo, la introduccin de monmeros no reduce los sntomas significativamente. Esto indica que hay un efecto del nmero de copias de cDNA. La proteccin se relaciona con el descenso en el nivel de replicacin de las partculas vricas infectivas. Con todo esto es difcil de explicar que los sntomas del TAV pueden ser reducidos sin la inhibicin completa de la replicacin del virus. La explicacin que se ha intentado dar dice que el RNA satlite interacta con los estados tempranos de la replicacin del virus y los formacin de los sntomas no depende tanto de la concentracin final del virus sino de su oportuna acumulacin con relacin al estado de desarrollo de la clula. Puede ser que el DNA satlite, o posibles protenas codificadas por l, interacten con el RNA en el proceso de produccin de los sntomas. El RNA satlite se introduce bajo el promotor del RNA 35S del CaMV. Es un promotor constitutivo que, sin embargo, se induce en gran manera cuando es infectado por el virus. En la proteccin mediada por protenas de la cubierta un exceso de inculo puede saturarla. Aqu, a ms inculo ms se induce. El problema que puede presentar esta estrategia es que la secuencia del gen que protege en un tipo de plantas puede ser virulenta en otras. Incluso puede producirse una mutacin que la revierta al estado virulento original en la especie protegida. Uso de RNA antisentido. El RNA antisentido es aquel que puede hibridar con otra cadena de RNA porque es complementario a ella y de sentido opuesto. Esta tcnica se usa para prevenir la traduccin y consiguientemente la replicacin, empaquetamiento y transmisin sistmica del virus. Los RNAs antisentido de varios virus han sido incorporados y expresados en plantas. Los resultados no han sido todo lo espectaculares que cabra esperar:
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algunos proporcionan una proteccin dbil frente a la infeccin vrica, otros no producen proteccin. Sin embargo, existe una gran cantidad de RNA antisentido de virus que no ha sido investigado totalmente. En ellos estn puestas las esperanzas de aplicacin prctica de la tcnica. Hay plantas de tabaco transgnicas ha han sido protegidas de la infeccin con el virus X de la patata (CVX) mediante la expresin de RNA antisentido contra protenas de la cubierta. El grado de proteccin es comparable con el que se obtiene cuando a estas plantas expresan la propia protena de la cubierta. Con ambas tcnicas se redujo el nmero de lesiones en la hojas inoculadas, se retras o desaparicin la manifestacin de sntomas sistmicos y disminuy la acumulacin de virus. Se ha demostrado que algunos tipos de RNA, incluyendo el RNA satlite del TabRV son capaces de escindirse espontnea y especficamente. Parece que esta reaccin autocataltica est relacionada con la presencia de ribozimas: unas secuencias cortas de RNA particulares; Su estructura secundaria adopta forma de cabeza de martillo. Se han podido sintetizar ribozimas artificialmente que son capaces de eliminar las secuencias blanco que deseemos y, por tanto, prevenir la expresin del producto codificado por ese gen. Las ribozimas tiene dos regiones de 8 nucletidos que son complementarias a las secuencias que flanquean al punto de ruptura de la secuencia blanco. El potencial de esta tcnica parece ser enorme, tanto en virologa como en el estudio de otros aspectos relacionados con la regulacin gentica del metabolismo y el desarrollo.
Virus X de la patata.

PRODUCCIN DE VACUNAS Y COMPUESTOS FARMACUTICOS EN PLANTAS TRANSGNICAS | 9
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Aunque las plantas se han utilizado por miles de aos con fines medicinales, ha sido recientemente que por medio de la ingeniera gentica se han utilizado como biofbricas o biorreactores para producir diversos compuestos de inters farmacutico. Dado que la demanda por estos compuestos va en aumento en todo el mundo,el uso de esta tecnologa tambin est cada vez ms extendido. Actualmente, el alto costo de muchos compuestos farmacuticos limita su disponibilidad y aplicacin. Los producidos en plantas transgnicas son, por el contrario, baratos para producir y almacenar, de fcil escalamiento para produccin en masa y ms seguros que los derivados de otros sistemas. En este artculo seanaliza el avance en este campo. El uso de reactores o biorreactores para la produccin a nivel industrial de determinadas sustancias no es nuevo. Gran cantidad de compuestos de diversos tipos (incluyendo farmacuticos) se ha estado produciendo por muchos aos en diversos sistemas. Esto fue posible debido a que la mayora de los genes de cualquier origen se puede expresar en sistemas heterlogos. El sistema de expresin ideal sera el que produce el material en mayor cantidad, ms seguro y biolgicamente ms activo con el costo ms bajo. El uso de clulas de mamferos modificadas con tcnicas de DNA recombinante tiene la ventaja de producir compuestos idnticos a los naturales; sin embargo, cultivar estas clulas es muy costoso y se puede realizar solamente en escala limitada. El uso de microorganismos, tales como bacterias, permite la produccin a escala mucho mayor, pero tiene la desventaja de originar productos que no son exactamente iguales a los de origen natural. Por ejemplo, las protenas que generalmente son glucosiladas (diversos azcares unidos a la molcula) en seres humanos no son glucosiladas por bacterias. Adems, las protenas humanas que se expresan en altos niveles en Escherichia coli adquieren con frecuencia una conformacin artificial y son ms propensas a precipitar en forma intracelular debido principalmente a la carencia de puentes disulfuro y a un plegamiento inadecuado. La produccin de protenas recombinantes en plantas tiene muchas ventajas potenciales para generar compuestos farmacuticos de importancia en medicina clnica. En primer lugar, los sistemas vegetales son ms econmicos que la infraestructura industrial utilizada en sistemas de fermentacin o en biorreactores. En segundo lugar, ya est disponible la tecnologa para cosechar y procesar plantas y sus productos a escala industrial. En tercer lugar, el requisito de la purificacin del compuesto puede ser eliminado cuando el tejido de la planta que contiene la protena recombinante se utiliza como alimento (como en el caso de las vacunas comestibles, vese ms adelante). En cuarto lugar, se puede dirigir a las protenas recombinantes a determinados compartimientos intracelulares, o
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expresarlos directamente en esos compartimientos (como por ejemplo el cloroplasto). En quinto lugar, se puede producir la protena recombinante en plantas a escala industrial. Finalmente, los riesgos a la salud que se presentan por posible contaminacin del producto recombinante con patgenos humanos son mnimos. Hay dos reas en donde esta tecnologa est teniendo un impacto importante: en la produccin de anticuerpos y sus receptores y en la produccin de vacunas comestibles.
Anticuerpos en plantas transgnicas Desde hace ms de diez aos, las plantas han demostrado ser sistemas verstiles de produccin para muchas formas de anticuerpos como IgG e IgA, IgG/IgA quimricos y otros. Las plantas tienen un gran potencial como fuente virtualmente ilimitada de anticuerpos monoclonales baratos (llamados planticuerpos) para terapia humana y animal. La mayora de los anticuerpos expresados hasta la fecha han sido en tabaco, aunque tambin se han utilizado papa, soya, alfalfa, arroz y trigo. La ventaja principal de usar hojas (como en tabaco y alfalfa) para producir el anticuerpo es su rendimiento. Tanto la alfalfa como el tabaco pueden ser cosechados varias veces al ao, con una produccin potencial de biomasa por ao de 17 toneladas/ha y mayor que 50 toneladas/ha, respectivamente. En contraste, la produccin mxima de trigo, arroz o maz difcilmente rebasa las 6 toneladas/ha. Otras ventajas del tabaco incluyen su facilidad para la manipulacin gentica, la produccin de un gran nmero de semillas (hasta un milln por planta) y la imperiosa necesidad de explorar otros usos para este cultivo. Los anticuerpos producidos en plantas son bastante estables tanto a temperatura ambiente como a 4C. El material vegetal que contiene al anticuerpo se puede almacenar y la purificacin se puede realizar en una planta de procesamiento que no necesita estar cerca del lugar en donde estn las plantas y se puede utilizar todo el ao. Hay muchos ejemplos de anticuerpos y sus receptores producidos exitosamente en plantas, aunque slo uno de stos se ha probado en seres humanos: un anticuerpo secretor quimrico de IgG/IgA contra un antgeno superficial de Streptococcus mutans, el agente causal de la caries dental. Este anticuerpo producido en tabaco fue aplicado tpicamente a los dientes de varios voluntarios y se encontr que era tan eficaz como un IgG producido en un hibridoma de ratn para prevenir la recolonizacin de las encas por S. mutans. Para dar otro ejemplo, un anticuerpo contra el virus del herpes (HSV) fue producido en soya y fue muy eficaz en la prevencin de la infeccin vaginal por HSV en ratn. Un aspecto importante que se ha destacado de la produccin de anticuerpos en plantas es el potencial bajo costo de produccin. Hay pocos estudios de costos y por eso las estimaciones disponibles implican muchas suposiciones. El costo de producir IgG en alfalfa crecida en un invernadero de 250 m2 se estim en 500-600 dlares/g, comparados con 5000 dlares/g para el
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mismo anticuerpo pero producido por hibridomas (clulas cancerosas en cultivo in vitro). Es indudable que los niveles de expresin tendrn un impacto significativo en los costos, por ello en el nivel de expresin ms alto registrado para un anticuerpo (500 g/g de hoja para una IgA secretada), el costo final se estim muy por debajo de 50 dlares/g. Esto contrasta ostensiblemente con los costos de anticuerpo purificado obtenido por cultivo de clulas (1000 dlares/g) o a partir de animales transgnicos (100 dlares/g). El componente ms importante del costo de los planticuerpos ser la purificacin. La expresin en grnenes de arroz y trigo abre la posibilidad de administracin oral de algunos anticuerpos teraputicos sin necesidad de purificacin. Sin embargo, a pesar de todas estas ventajas, an no se produce ningn anticuerpo en plantas en forma comercial. Muchos anticuerpos son sujetos a un proceso post-traduccional de glucosilacin, que es crtico para su actividad. Slo hay un estudio publicado en donde se analiza la glucosilacin de un anticuerpo producido en plantas con el producido en hibridomas de ratn. Se encontr que los azcares en el anticuerpo derivado de plantas eran estructuralmente ms diversos, siendo el 40% del tipo manosa. El otro 60% tena enlaces tipo -xilosa y -fucosa. Estos enlaces son tpicos de plantas pero no se encuentran en mamferos. El cido silico, que representaba el ~10% del contenido de azcar del anticuerpo monoclonal de ratn, no se encontr en el anticuerpo de plantas. Sin embargo, estas diferencias en estructura parecen no tener ningn efecto sobre la unin al antgeno o sobre la afinidad in vitro y pudieran, igualmente, no ser importantes in vivo. Un IgG producido en alfalfa tuvo una vida media en suero en ratones Balb/c similar a la de un anticuerpo producido en hibridomas. Aunque existe una cierta preocupacin por la inmunogenicidad potencial y la capacidad alergnica de los planticuerpos, es probable que stos no presenten problemas para la mayora de la gente porque las glucoprotenas de plantas son ubicuas en la dieta humana. En este sentido, no hubo evidencia de reaccin alrgica a un anticuerpo humano antiratn (HAMA) en 60 pacientes que recibieron la aplicacin oral tpica de IgA secretora especfica para S. mutans.
Vacunas comestibles La produccin de diversos antgenos en plantas transgnicas es un hecho demostrado desde hace aos. El inters para hacer estos experimentos fue que determinadas protenas inmunognicas clave del patgeno se podran sintetizar en plantas y despus usar el tejido vegetal como vacunas comestibles en seres humanos
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o en animales. Se ha demostrado que esta idea es totalmente viable usando diversas protenas bacterianas y virales. Actualmente, la vacunacin en gran escala enfrenta una serie de dificultades: por un lado los altos costos de las vacunas y por el otro el riesgo de que la distribucin en lugares remotos y de difcil acceso no sea adecuada. La mayora de las vacunas disponibles se aplican por va parenteral (inyecciones). La Organizacin Mundial de la Salud ha recomendado en diversas ocasiones buscar alternativas para sustituir a las inyecciones, debido a que se ha encontrado en algunos pases que hasta un 30% de las inyecciones se realizan con jeringas no estriles. Considerando el grave problema del SIDA, este hecho es de gran relevancia. La aplicacin de vacunas va oral es una muy buena alternativa para las vacunas va parenteral, en gran parte por razones de bajo costo y fcil administracin. Asimismo, con las vacunas orales se incrementa la probabilidad de adquirir inmunidad en mucosas contra los agentes infecciosos que entran al cuerpo a travs de una superficie mucosal. Una preocupacin importante con las vacunas orales es la degradacin de los antgenos en el estmago e intestino antes de que puedan inducir una respuesta inmune. Para protegerlos de la degradacin se han desarrollado varios mtodos. Entre stos se encuentran el uso de cepas recombinantes de microorganismos atenuados (v. gr. Salmonella), de vehculos de bioencapsulacin, tales como liposomas, y finalmente las plantas transgnicas. En los primeros trabajos con vacunas derivadas de plantas se utilizaron el tabaco y la papa. En teora, la especie ideal para expresar los antgenos debera consumirse en fresco y tener altos niveles de protena soluble; en este sentido, frutos como el pltano y el jitomate o, alternativamente, los cereales, son sistemas convenientes para este fin. Algunos ejemplos que ilustran la variedad de antgenos expresados en plantas transgnicas se dan en la tabla . Los antgenos derivados de plantas han inducido respuestas inmunes a nivel de mucosas y de suero cuando han sido administrados tanto con inyecciones como por va oral en animales de laboratorio y, en varios experimentos, los han protegido contra el patgeno. De la misma manera, se han realizado exitosamente varias pruebas clnicas con voluntarios humanos en las cuales los antgenos consumidos por va oral en tejido vegetal fueron capaces de inducir una respuesta inmune significativa. Por esta razn se considera que las vacunas preparadas en plantas tienen un gran potencial. La bioencapsulacin de la subunidad B de la toxina lbil de Escherichia coli en maz transgnico indujo una fuerte respuesta inmune
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en ratones, en comparacin con la alcanzada con el antgeno desnudo que fue ms dbil. Probablemente, esto se debi a que el antgeno estaba protegido contra la degradacin en el intestino. La cantidad de tejido vegetal que constituya una dosis de vacuna debe ser pequea. Por ello, es muy importante alcanzar altos niveles de expresin del antgeno en el tejido vegetal. Se han utilizado diferentes estrategias para aumentar los niveles de expresin de los transgenes; por ejemplo, utilizando diversas seales de regulacin de la expresin gentica, as como optimizando el uso del codones. Los niveles de expresin se podran tambin elevar a travs de cruzas de lneas transformadas con lneas establecidas y bien caracterizadas, estrategia que se ha aplicado con xito para aumentar la produccin de protena total en maz. Es tambin importante que cualquier antgeno est presente en su forma nativa en el tejido vegetal. Esto normalmente se evala examinando el tamao de la protena sintetizada, su capacidad de formar las estructuras adecuadas (por ejemplo, partculas tipo virus) y, cuando sea relevante, su actividad enzimtica o de unin a un receptor. La estabilidad de las protenas heterlogas y el ensamblaje de estructuras multimricas dependen en buena medida de la localizacin subcelular. Hasta ahora, los principales lugares en donde se han expresado antgenos son la superficie celular, el retculo endoplsmico y el aparato de Golgi. Estos sitios han permitido la produccin de antgenos funcionales; sin embargo, hay sugerencias para probar otros compartimientos celulares, como por ejemplo el cloroplasto. Una estrategia relacionada con la de vacunas comestibles utiliza a plantas transgnicas que expresan autoantgenos, por lo que una dosis oral de un auto-antgeno puede inhibir el desarrollo de una enfermedad autoinmune a travs del mecanismo de tolerancia. Este enfoque ha sido utilizado exitosamente en un modelo de diabetes en ratn. Actualmente en la Unidad Irapuato se trabaja en la produccin de plantas transgnicas, principalmente de pltano y jitomate, que contengan diversos antgenos con la idea de generar vacunas comestibles. Los antgenos con los que se trabaja van desde diversos eptopos de Plasmodium falciparum, hasta antgenos de rotavirus, hepatitis B, HIV-SIDA y algunos antgenos de cncer. Sin embargo, a diferencia de otros grupos que tambin trabajan en esta rea, en el laboratorio se intenta inducir una respuesta inmune de tipo celular; especficamente, se utilizan como coadyuvantes molculas de citocinas y quimiocinas que induzcan de preferencia interfern . Esta estrategia ya ha sido utilizada anteriormente, aunque no con plantas ni por va oral, sino por va parenteral. De esta manera, se espera no solamente inducir una respuesta inmune, sino influir en el tipo de respuesta. En los trabajos publicados, por lo regular se ha inducido una respuesta inmune de tipo hormonal, que no siempre es la ms efectiva contra infecciones parasitarias o virales.
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PRODUCTOS TRANSGNICOS DEL FUTURO | 10 El tomate Como el tomate es una de las hortalizas ms populares en el mundo, se ha visto beneficiado por una larga historia de mejoramiento gentico, que contina en la era transgnica. El licopeno, un componente natural del tomate, es un factor nutricional relacionado con la vitamina A. Se estn investigando tcnicas transgnicas para producir variedades de tomate con un mayor contenido de licopeno. Otra caracterstica de inters es la maduracin tarda. Los tomates que maduran con ms lentitud pueden permanecer en la mata por ms tiempo y adquirir mejor sabor, en comparacin con las variedades comerciales que se cosechan cuando estn verdes. El tomate Flavr-Savr, una de las primeras variedades de cultivos transgnicos aprobadas, era una variedad de maduracin tarda. Como la caracterstica haba sido incorporada en una variedad cuyo desempeo era deficiente en otros aspectos, no fue un xito comercial. Los suelos salinos son un problema creciente en muchas partes del mundo. Muchas plantas de cultivo, incluidos los tomates, mueren a causa del contenido elevado de sales en el suelo y en el agua de riego. El desarrollo de un tomate tolerante a la sal ofrece la posibilidad de cultivar esas hortalizas en tierras anteriormente no aptas para la agricultura. Cientficos de la Universidad de California y la Universidad de Toronto han desarrollado una planta de tomate que puede tolerar concentraciones elevadas de sal y que retiene la sal en sus hojas, de tal modo que el fruto no tiene un sabor salado. Se estima que pasarn tres aos antes de que estn disponibles en el mercado los tomates tolerantes a la sal.
El mejor contenido nutricional y la maduracin tarda son caractersticas transgnicas de inters en los tomates.
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Dos plantas de tomates inoculadas artificialmente con la enfermedad del moteado bacteriano. La planta de la izquierda ha sido manipulada genticamente con un gen para la resistencia a la enfermedad y la planta de la derecha es una variedad sensible, no manipulada. El arroz dorado Millones de personas en el mundo sufren carencia de vitamina A, que conduce a deterioro de la visin y una mayor sensibilidad a la diarrea, las enfermedades respiratorias y el sarampin. El arroz es un alimento bsico en muchos pases, en particular en Asia, pero no contiene vitamina A o sus precursores inmediatos. Mediante la insercin de dos genes del narciso y un gen de una especie bacteriana en plantas de arroz, investigadores suizos han producido arroz capaz de sintetizar betacaroteno, el precursos de la vitamina A. Esta variedad de arroz est siendo cruzada ahora con variedades adaptadas y posiblemente se harn ensayos sobre el terreno en uno o dos aos
Desarrollo de granos de arroz. La canola La canola es un importante cultivo oleaginoso. La investigacin transgnica se ha concentrado en mejorar la calidad del aceite de canola aumentando el contenido de vitamina E o modificando el balance de cidos grasos.
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La meta de la investigacin transgnica en el caso de la canola son los aceites mejorados desde el punto de vista nutricional.
Mejor csped para los jardines y las reas de recreacin Existe una serie de problemas ambientales asociados con el uso actual del csped, que incluyen:

la cantidad de sustancias qumicas aplicadas (fertilizantes, herbicidas, fungicidas y hasta tinturas); la gran cantidad de agua necesaria para mantener saludables los prados, en particular en el oeste; la energa requerida para cortar el csped.
Las nuevas variedades transgnicas de csped resolvern algunos de estos problemas al incorporar genes para la tolerancia a los herbicidas, resistencia a las enfermedades y los insectos, menores tasas de crecimiento (que implican menos necesidad de cortar el csped) y tolerancia a la sequa, el calor y el fro. Los primeros de esos productos que llegarn al mercado probablemente sern las variedades Roundup Ready de pasto azul de Kentucky, de la gramnea Agrestis palustris y de la hierba de bfalos. El control de la maleza en los prados sembrados con estas variedades se puede lograr con el herbicida Roundup, que es ms benigno para el medio ambiente que los herbicidas actualmente usados, como el 2,4-D. El girasol Se estn investigando una caracterstica de resistencia a las enfermedades, otra de resistencia a las plagas y una ms de resistencia a los herbicidas, pero no hay actualmente en el mercado ninguna variedad comercial con esas caractersticas. El moho blanco (Sclerotinia) es un problema grave para los productores de girasol en ciertas zonas. La resistencia a esta enfermedad permitira expandir la superficie en la que se puede cultivar el girasol y mejorar el rendimiento en las zonas actualmente cultivadas. No se espera contar con una variedad comercial antes del 2005. Tambin se investiga la resistencia a la oruga de Argentina, un insecto que come las hojas de la planta de girasol. Se han efectuado algunas investigaciones sobre el desarrollo de girasol que pueda tolerar el rociamiento con el herbicida Roundup. Esta caracterstica permitira a los agricultores rociar sus campos para combatir las malezas sin matar el cultivo.
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Campo de girasoles.
El caf y el t Ahora se elabora caf descafeinado tratando los granos de caf para eliminar la cafena. Uno de los mtodos emplea solventes orgnicos para extraer la cafena, lo cual genera en algunos consumidores la preocupacin de que quedarn residuos de los solventes en el caf que beben. Otros mtodos son criticados por eliminar algunos componentes apreciados que producen sabor junto con la indeseable cafena. Un cientfico en Hawai y otro en Escocia han identificado distintos genes que conducen a la produccin de cafena en los granos de caf y las hojas de t. Si se pudieran "anular" esos genes en algunas plantas, se podran obtener plantas de caf y de t que generaran productos descafeinados en forma natural, con todo su sabor y aroma. La cosecha de los granos de caf exige actualmente muchos recorridos a travs de las plantaciones porque los granos maduran en momentos diferentes. Un cientfico en Hawai est desarrollando un mtodo para lograr que todos los granos maduren al mismo tiempo, de tal modo que los recolectores puedan cosechar todos los granos en un slo recorrido por la plantacin.
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Bayas del cafeto, llamadas "granos", madurando en el rbol. Las uvas y el vino La vid (Vitis vinifera) es sensible a varias enfermedades que reducen la cantidad y la calidad de las uvas para vino y de mesa o, incluso, matan la via. Los genes que confieren resistencia a determinadas enfermedades reduciran el costo de combatir esas enfermedades en los viedos. Investigadores de la Universidad de Florida han patentado un mtodo para producir vides portadoras de un gen del gusano de seda que proporciona proteccin contra la enfermedad de Pierce, una enfermedad bacteriana letal que afecta las vides y varias otras plantas.
Uvas en maduracin.

El tabaco
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Se cultiva en la actualidad tabaco exento de nicotina para la proyectada introduccin de cigarrillos sin nicotina. Los intentos anteriores para obtener productos con un bajo contenido de nicotina eliminaron parte del sabor junto con la nicotina. El tabaco genticamente manipulado exento de nicotina no sintetiza la nicotina en la hoja.
Tabaco Los rboles Se han transformado rboles como el lamo, el lamo tembln y el abeto con diversos genes para obtener resistencia a los insectos, tolerancia a los herbicidas y cantidades ms altas del producto comercial. Por ejemplo, la reduccin del contenido de lignina del rbol puede facilitar la recuperacin de la pulpa de la madera. Entre las especies de rboles transgnicos que se estn ensayando actualmente se incluyen: lamo: tolerancia a los herbicidas resistencia a los insectos. Eucalipto: tolerancia a los herbicidas. lamo tembln: menos lignina. Liquidmbar: tolerancia a los herbicidas. Abeto blanco: resistencia a los insectos.
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CONCLUSIN | 11 Si durante la ltima dcada del siglo pasado las grandes fortunas se crearon en la informtica, las telecomunicaciones y en internet, durante las primeras dcadas del presente siglo, el conocimiento y los medios para el control del cdigo gentico ser un factor decisivo de la economa mundial y una fuente de conocimientos para la conservacin o la destruccin de la vida en nuestro planeta. En general, habr cambios importantes en la agricultura de los pases desarrollados, un progreso relativo en aquellos en vas de desarrollo, que sean capaces de asimilar racionalmente las nuevas tecnologas y un desarrollo paulatino de la conciencia social, producto de un proceso muy contradictorio a lo largo del cual los cientficos ocuparn un lugar decisivo en la funcin social de su trabajo. Al constituir el conocimiento biolgico un centro de la economa y ser centro de la vida, se modificar la frontera actual en la responsabilidad tcnica y la responsabilidad social del trabajo de los cientficos. En correspondencia con estas necesidades, el derecho internacional tendr que evolucionar en materia de propiedad intelectual y de conservacin ambiental. Slo as los conocimientos y las nuevas tecnologas que surjan en este campo podrn constituir un factor de progreso para la Humanidad.

ANEXOS | 12 Ventajas y desventajas de las plantas transgnicas
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Cronologa de las plantas transgnicas 1970 Se plante la hiptesis de que la enfermedad de las plantas denominada agalla del cuello podra ser producida por la transferencia de material gentico entre una bacteria, Agrobacterium tumefaciens y clulas vegetales. 1973 Schell anunci el descubrimiento en cepas de Agrobacterium tumefasciens de un plsmido de un tamao jams observado hasta entonces y que el plsmido llamado Ti (del ingls Tumour inducing) es portador del carcter patgeno. 1981 E. Schnepf y H. Whiteley aislaron el primer gen que codifica una protena insecticida. 1983 M.D. Chilton introdujo en la planta del tabaco un gen bacteriano que confera resistencia al antibitico cloramfenicol, obteniendo las primeras plantas transgnicas. 1987 Se aplica el mtodo del microcan o can de partculas ideado por Sanford y Wolf 1988 Mediante la tcnica de los protoplastos se consigui por primera vez cereales transgnicos. 1996 Las investigaciones culminaron con la entrada en el mercado de plantas transgnicas (algodn, patata y maz) resistentes a insectos. 1997 Hasta este ao se haban realizado unos 3650 experimentos de campo con cultivos transgnicos y con resultados positivos.

Agrobacterium tumefaciens y transferencia del TI
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Artculo: Apoyo para la investigacin con plantas transgnicas.
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BIBLIOGRAFA | 13 Documento elaborado por J.F.Carrasco, extraido de: Butllet Centre dEstudis de la Natura del Barcelons Nord., IV (3): Sta. Coloma de Gramenet, 1999. http://www.xtec.es/~jcarrasc/transgenicas.htm Agro-Bio. Asociacin sin nimo de lucro, fundada en noviembre de 2000, con la funcin primordial de respaldar, promover y difundir el desarrollo de la biotecnologa agrcola y sus aplicaciones prcticas bajo principios legales ticos y cientficos que se traduzcan en beneficios para la sociedad colombiana. http://www.agrobio.org/index.php Cultivos transgnicos: una introduccin y gua a recursos. Presenta informacin ecunime y vnculos con otros recursos relacionados con la tecnologa y las cuestiones concernientes a los cultivos transgnicos (tambin llamados cultivos genticamente modificados o GM). Los autores del sitio se dedican a la investigacin y la enseanza sobre fitogentica en la Universidad Estatal de Colorado. http://cls.casa.colostate.edu/CultivosTransgenicos/index.html Eibe (European Iniciative for Biotechnology Education): Plantas transgnicas, unidad 9. http://www.ipn.uni-kiel.de/eibe/UNIT09ES.PDF ASEBIO. Asociacin Espaola de Bioempresas. ASEBIO acta como plataforma de encuentro del sector biotecnolgico y representa los intereses de sus asociados ante las administraciones regionales, nacionales y europeas. http://www.asebio.com/ Las plantas transgnicas y la agricultura mundial. Informe elaborado bajo los auspicios de la Royal Society of London, la Academia de Ciencias de Brasil, la Academia de Ciencias de China, la Academia de Ciencias del Tercer Mundo, la Academia Mexicana de Ciencias, la Academia Nacional de Ciencias de la India y la U.S. National Academy of Sciences. http://www.amc.unam.mx/Noticias/contenido_doctrans.html
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Madigan; Martinko; Parker. (1997). Brock Biologa de los microorganismos. 8 edicin. Editorial Pentice-Hall. Alberts, Bruce; Bray, Dennis; Lewis, Julian; Raff, Martin; roberts, Keith & Watson, James D. (1992). Biloga molecular de la clula. 2 edicin. Editorial Omega. Feldman Riebe, J. The development and implementation strategies to prevent resistance to Bt-expressing crops: and industry perspective. Can. J. Plant Path. 21(2): 101-105. 1999. Miguel A.Gmez Lim. Avance y perspectiva, vol.20. Produccin de vacunas y compuestos farmacuticos en plantas transgnicas. Alberts, B; Jonson, A; Lewis, J; Raff, M; Roberts, K; Walter, P. 2002. Molecular Biology of the Cell. Garland Science. Hartl, D; Jones, E.2001. Genetics. Analysis of genes and Genomes. 5 th. edition. Jones and Bartlett Publishers.

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