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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS CURSO : FISIOLOGIA Y GENETICA MICROBIANA UNIDAD :

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS CURSO : FISIOLOGIA Y GENETICA MICROBIANA UNIDAD : PRIMERA

CURSO : FISIOLOGIA Y GENETICA MICROBIANA UNIDAD : PRIMERA TEMA : RESPIRACION Y CADENA RESPIRATORIA

PROFESOR :

DR. PEDRO MERCADO MARTINEZ

Y CADENA RESPIRATORIA PROFESOR : DR. PEDRO MERCADO MARTINEZ FOSFORILACIÓN OXIDATIVA RESPIRACIONES Respiración es la

FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

RESPIRACIONES

Respiración es la obtención de energía por oxidación de sustratos reducidos DH 2 (orgánicos en quimiorganotrofas, e inorgánicos en quimiolitotrofas), pero los coenzimas reducidos (ej., NADH) transfieren los electrones a un aceptor final oxidado, no directamente (como en la fermentación), sino a través de una cadena transportadora de electrones al final de la cual existe un aceptor exógeno oxidado (A), que se reduce.

Si el aceptor final es el O 2 , hablamos de respiración aerobia ; 2 , hablamos de respiración aerobia;

Si el aceptor final es distinto del O 2 (nitrato, sulfato, etc.), respiración anaerobia. En ambos casos, la transferencia se da ordenadamente, en 2 (nitrato, sulfato, etc.), respiración anaerobia. En ambos casos, la transferencia se da ordenadamente, en la dirección de mayor potencial redox positivo, con la consiguiente liberación de energía libre. Como veremos enseguida, esta energía libre se va a traducir en un potencial electroquímico de protones, cuya disipación a través de ATP-asas de membrana origina ATP, conociéndose este proceso como fosforilación oxidativa.

CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES Y FUERZA MOTRIZ DE PROTONES

El mecanismo de la fosforilación oxidativa se suele explicar en base a la teoría quimiosmótica de Mitchell (1961 y años siguientes). Recordemos que la c.t.e. está formada por una serie ordenada de moléculas transportadoras situadas (en bacterias) en la membrana citoplásmica (y en sus invaginaciones), moléculas que sufren oxidaciones y reducciones reversibles.

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NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Fig. 1 Diversidad energética Los donadores de electrones

Fig. 1 Diversidad energética

Los donadores de electrones inmediatos para las c.t.e son el FADH 2 y el NADH+H + , que se generan, p.ej., en la glucolisis o en el ciclo de Krebs (ciclo de los ácidos tricarboxílicos o del ácido cítrico):

NADH deshidrogenasas, unidas a la cara interna de la membrana. Aceptan átomos de H a partir , unidas a la cara interna de la membrana. Aceptan átomos de H a partir del NADH, y se los ceden a las flavoproteínas

Flavoproteínas (Fp, un tipo de riboflainas), dotadas de grupos FAD o FMN. Pueden acepar átomos de (Fp, un tipo de riboflainas), dotadas de grupos FAD o FMN. Pueden acepar átomos de H, pero a su vez ceden electrones.

Proteínas no hémicas de Fe-S (Fe/S proteínas). Algunas poseen agrupamientos de Fe 2 S 2 (como la ferredoxina) y otras Fe . Algunas poseen agrupamientos de Fe 2 S 2 (como la ferredoxina) y otras Fe 4 S 4 . Transportan solamente electrones.

Quinonas. Son moléculas muy hidrofóbicas, inmersas en la membrana, capaces de moverse dentro de ella. . Son moléculas muy hidrofóbicas, inmersas en la membrana, capaces de moverse dentro de ella. Sirven como aceptores de átomos de H, pero sólo ceden electrones. En bacterias podemos encontrar dos principales tipos de quinonas:

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o

ubiquinona (UQ)

o

menaquinona (MQ), más frecuente en bacterias Gram-positivas.

(MQ), más frecuente en bacterias Gram-positivas. Citocromos (proteínas hémicas con Fe quelado). Sufren

Citocromos (proteínas hémicas con Fe quelado). Sufren oxidación y reducción por pérdida y ganancia de un electrón cada vez, a través del Fe del centro de la molécula. Los citocromos son de varias clases, según el tipo de grupo hemo (ej. tipo a, b, c, etc), y a veces forman complejos fuertes con otros citocromos (ej., cit bc1) o con Fe/S-proteínas.

con otros citocromos (ej., cit bc1) o con Fe/S-proteínas. Fig. 2 Cadena de electrones Los electrones

Fig. 2 Cadena de electrones

Los electrones fluyen desde los transportadores con potencial de reducción más negativo hacia los de potencial más positivo, hasta que finalmente reducen un aceptor final de electrones obtenido del ambiente. Observar que algunos de estos transportadores transportan átomos de H (o sea, protones y electrones), mientras que otros transportan únicamente electrones. Como resultado de todo ello, tenemos que existen determinados puntos de la c.t.e. (llamados bucles o lazos translocadores de protones) en los que el efecto neto es la salida de protones al exterior de la membrana citoplásmica

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(concretamente, en los puntos donde confluyen un transportador de H + y otro de electrones). Es decir, existe una translocación de protones hacia el exterior ligada a las reacciones redox que ocurren en la c.t.e.

Por otro lado, la membrana es impermeable a los protones, por lo que los protones translocados a resultas del funcionamiento de las c.t.e. no pueden entrar directamente. Por lo tanto, se crea un gradiente electroquímico de protones, compuesto de gradiente osmótico de esos iones H + ( pH) y un gradiente de carga eléctrica ( ). Este gradiente o fuerza protón motriz es una forma de energía potencial que puede realizar trabajo.

una forma de energía potencial que puede realizar trabajo. Fig. 3 Potencial redox en la cadena
una forma de energía potencial que puede realizar trabajo. Fig. 3 Potencial redox en la cadena
una forma de energía potencial que puede realizar trabajo. Fig. 3 Potencial redox en la cadena

Fig. 3 Potencial redox en la cadena de electrones

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NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Fig. 4 Cadena de electrones en bacterias Fig. 5

Fig. 4 Cadena de electrones en bacterias

CIENCIAS BIOLOGICAS Fig. 4 Cadena de electrones en bacterias Fig. 5 Cadena de electrones en mitocondrias

Fig. 5 Cadena de electrones en mitocondrias

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MECANISMO DE LA ATP-SINTASA DEPENDIENTE DE PROTONES

La conversión de la fuerza protón-motriz en ATP se realiza por medio de una ATP-asa. Este complejo proteico consta de dos partes funcionales, un canal integral de membrana (F 0 ) y una estructura globular en el lado citoplásmico de la membrana (F 1 ). La ATP-asa funciona de modo reversible, como ATP-sintasa y como ATP-hidrolasa. La disipación de la fuerza protón motriz supone el funcionamiento como ATP-sintasa, según el siguiente modelo:

F 0 es un complejo integral de membrana, que trasloca los protones. Está compuesto de {a, 0 es un complejo integral de membrana, que trasloca los protones. Está compuesto de {a, b 2 , c 12 }. La subunidad a es la encargada de canalizar los protones a través de la membrana, mientras que las dos subunidades b sobresalen hacia el lado citoplásmico, interaccionando con la F 1 . Las 12 subunidades de c se disponen formando una especie de cilindro transmembranoso, capaz de rotar en ambos sentidos.

F 1 constituye la porción intracitoplasmática, dotada de los sitios catalíticos. La parte más saliente de 1 constituye la porción intracitoplasmática, dotada de los sitios catalíticos. La parte más saliente de F 1 consta de 3 subunidades alternando con 3 subunidades .

1 consta de 3 subunidades alternando con 3 subunidades . Al parecer, la traslocación de unos
1 consta de 3 subunidades alternando con 3 subunidades . Al parecer, la traslocación de unos

Al parecer, la traslocación de unos 3 o 4 protones ( o dos) a través de F 0 está acoplada, por medio de grandes cambios conformacionales, a la síntesis de una molécula de ATP en las subunidades de la F 1 , por un notable mecanismo de catálisis rotacional:

El que los 3-4 protones entren por F 0 (probablemente a través de la proteína a) provoca la rotación del cilindro de c 0 (probablemente a través de la proteína a) provoca la rotación del cilindro de c 12 , lo que supone una torsión que se transmite a la F 1 a través de las proteínas . lo que a su vez provoca un cambio conformacional en las subunidades .

vez provoca un cambio conformacional en las subunidades . El cambio conformacional en las subunidades permite

El cambio conformacional en las subunidades permite que a ellas se una ADP y P i . El trabajo realizado por el sistema se usa para una ADP y P i . El trabajo realizado por el sistema se usa para producir entonces el ATP, volviendo las a su configuración original, preparadas para un nuevo ciclo de síntesis de ATP.

preparadas para un nuevo ciclo de síntesis de ATP. La función de b 2 es equivalente
preparadas para un nuevo ciclo de síntesis de ATP. La función de b 2 es equivalente

La función de b 2 es equivalente a la del estator del motor : sirven para evitar que b 2 es equivalente a la del estator del motor: sirven para evitar que las y se muevan cuando se produce la torsión de .

que las y se muevan cuando se produce la torsión de . CURSO: FISIOLOGIA Y GENETICA
que las y se muevan cuando se produce la torsión de . CURSO: FISIOLOGIA Y GENETICA

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NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Fig. 6. Estructura de ATPasa en bacterias Fig. 7.

Fig. 6. Estructura de ATPasa en bacterias

BIOLOGICAS Fig. 6. Estructura de ATPasa en bacterias Fig. 7. Ubicación de ATPasa en mitocondrias CURSO:

Fig. 7. Ubicación de ATPasa en mitocondrias

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NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Fig. 8. Ubicación de ATPasa en cloroplastos Las

Fig. 8. Ubicación de ATPasa en cloroplastos

Las ATP-sintasas son los motores rotatorios más pequeños del mundo vivo (más pequeños que el motor del flagelo bacteriano). Las ATP-asas de membrana pueden funcionar también en sentido inverso al de síntesis, es decir, como ATP-hidrolasas: se produce hidrólisis de ATP y extrusión de protones al exterior. Por lo tanto, en este sentido de funcionamiento, se genera un gradiente de protones a expensas de gasto de ATP intracelular. Esto muestra una vez más que el ATP y el gradiente de protones se pueden considerar como formas diferentes e interconvertibles de energía celular.

Las ATP-asas productoras de gradientes de protones existen en bacterias no respiratorias, que carecen de c.t.e., como por ejemplo, las bacterias anaerobias del ácido láctico. Estas bacterias obtienen su ATP por fosforilación a nivel de sustrato, en sus procesos de fermentación. Pero al igual que otras bacterias, necesitan realizar procesos de transporte activo ligado a simporte de protones y pueden moverse por flagelos, por lo que necesitan también crear un gradiente de protones para estos fines. En estas bacterias las

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ATPasas funcionan siempre como ATP-hidrolasas, conviertiendo parte del ATP obtenido por fermentación en una fuerza protón-motriz que se usa para transporte de nutrientes y para alimentar al motor flagelar.

DIVERSIDAD DE CADENAS TRANSPORTADORAS

En bacterias existe una gran diversidad de tipos de cadenas transportadoras de electrones, si bien en todos los casos aparecen los elementos que citamos más arriba (flavoproteínas, Fe/S-proteínas, quinonas, citocromos). La cadena sigue el orden derivado de la torre de electrones (desde los componentes más electronegativos a los menos electronegativos o más electropositivos) y se da una alternancia entre transportadores de átomos de hidrógeno (protones y electrones) y de sólo electrones (es decir, aparecen bucles translocadores de protones hacia fuera, lo que genera la fuerza protón-motriz).

La cadena transportadora de electrones de Paracoccus cuando usa oxígeno como aceptor final es similar a la de las mitocondrias (Fp - FeS proteína - quinona (coenzima Q) - cit bc 1 - cit c - cit aa 3 - O 2 ), y en ella se observan tres sitios donde termodinámicamente la variación de energía libre es suficiente para apoyar la síntesis de una molécula de ATP.

Muchas cadenas respiradoras aerobias muestran ramificaciones alternativas, sobre todo a nivel de los citocromos terminales. El papel principal de estas ramificaciones es lograr flexibilidad en la ruta de transferencia de electrones, de manera que se obtengan rendimientos máximos en ciertos sustratos y condiciones de crecimiento, y para minimizar los efectos nocivos de otros.

P. ej., si E. coli dispone de oxígeno lo usará como aceptor final de electrones, pero dependiendo de E. coli dispone de oxígeno lo usará como aceptor final de electrones, pero dependiendo de su concentración recurrirá a una u otra rama. (A su vez, esto puede estar relacionado con la fase de crecimiento:

en la fase exponencial, cuando hay todavía suficiente nivel de O 2 , se usa una rama, mientras que en fase estacionaria, cuando el nivel de O 2 ha bajado, se usa la otra).

El mismo E. coli y otras bacterias anaerobias facultativas, en un ambiente sin oxígeno pero con presencia E. coli y otras bacterias anaerobias facultativas, en un ambiente sin oxígeno pero con presencia de nitratos puede usar estos aceptores alternativos con las correspondientes variantes en los citocromos terminales.

Cuando Azotobacter (fijador aerobio de N 2 ) crece fijando nitrógeno molecular, usa una ramificación que Azotobacter (fijador aerobio de N 2 ) crece fijando nitrógeno molecular, usa una ramificación que gasta muchísimo oxígeno como aceptor final (aunque el rendimiento en ATP es menor); con ello logra evitar que el oxígeno pase al citoplasma, con lo que protege a la nitrogenasa de la inactivación por oxígeno.

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NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Fig. 9 Respiración aerobia y anaerobia en E. coli

Fig. 9 Respiración aerobia y anaerobia en E. coli

En los quimiolitotrofos, cuando el donador de electrones es diferente al hidrógeno molecular, la cadena transportadora de electrones funciona en los dos sentidos:

en su sentido “normal”, ya estudiado. Un donador inorgánico de electrones cede electrones, que llegan a la cadena transportadora de electrones, que crea un gradiente de cede electrones, que llegan a la cadena transportadora de electrones, que crea un gradiente de protones, cuya disipación a través de ATP-asa genera ATP; Sin embargo, salvo en caso de usar H 2 , los donadores exógenos no sirven para generar poder reductor (coenzimas reducidas);

pero estas bacterias necesitan equivalentes de reducción (NADPH) para reducir el CO 2 (su fuente exclusiva de C) hasta material orgánico celular [CH 2 O]. Este NADPH 2 (su fuente exclusiva de C) hasta material orgánico celular [CH 2 O]. Este NADPH lo logran merced a un flujo invertido de electrones a través de la cadena transportadora de electrones, usando para ello como energía parte del potencial de protones (f.p.m.) generado por el flujo normal.

potencial de protones (f.p.m.) generado por el flujo normal. Enlaces:

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http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/10energia.htmde protones (f.p.m.) generado por el flujo normal. Enlaces: CURSO: FISIOLOGIA Y GENETICA MICROBIANA MICROBIANA 10