UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

CURSO : UNIDAD : TEMA : PROFESOR :

FISIOLOGIA Y GENETICA MICROBIANA PRIMERA RESPIRACION Y CADENA RESPIRATORIA DR. PEDRO MERCADO MARTINEZ

FOSFORILACIN OXIDATIVA
RESPIRACIONES Respiracin es la obtencin de energa por oxidacin de sustratos reducidos DH2 (orgnicos en quimiorganotrofas, e inorgnicos en quimiolitotrofas), pero los coenzimas reducidos (ej., NADH) transfieren los electrones a un aceptor final oxidado, no directamente (como en la fermentacin), sino a travs de una cadena transportadora de electrones al final de la cual existe un aceptor exgeno oxidado (A), que se reduce. Si el aceptor final es el O2, hablamos de respiracin aerobia; Si el aceptor final es distinto del O2 (nitrato, sulfato, etc.), respiracin anaerobia. En ambos casos, la transferencia se da ordenadamente, en la direccin de mayor potencial redox positivo, con la consiguiente liberacin de energa libre. Como veremos enseguida, esta energa libre se va a traducir en un potencial electroqumico de protones, cuya disipacin a travs de ATP-asas de membrana origina ATP, conocindose este proceso como fosforilacin oxidativa.

CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES Y FUERZA MOTRIZ DE PROTONES El mecanismo de la fosforilacin oxidativa se suele explicar en base a la teora quimiosmtica de Mitchell (1961 y aos siguientes). Recordemos que la c.t.e. est formada por una serie ordenada de molculas transportadoras situadas (en bacterias) en la membrana citoplsmica (y en sus invaginaciones), molculas que sufren oxidaciones y reducciones reversibles.

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Fig. 1 Diversidad energtica

Los donadores de electrones inmediatos para las c.t.e son el FADH 2 y el NADH+H+, que se generan, p.ej., en la glucolisis o en el ciclo de Krebs (ciclo de los cidos tricarboxlicos o del cido ctrico): NADH deshidrogenasas, unidas a la cara interna de la membrana. Aceptan tomos de H a partir del NADH, y se los ceden a las flavoprotenas Flavoprotenas (Fp, un tipo de riboflainas), dotadas de grupos FAD o FMN. Pueden acepar tomos de H, pero a su vez ceden electrones. Protenas no hmicas de Fe-S (Fe/S protenas). Algunas poseen agrupamientos de Fe2S2 (como la ferredoxina) y otras Fe4S4. Transportan solamente electrones. Quinonas. Son molculas muy hidrofbicas, inmersas en la membrana, capaces de moverse dentro de ella. Sirven como aceptores de tomos de H, pero slo ceden electrones. En bacterias podemos encontrar dos principales tipos de quinonas:
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o ubiquinona (UQ) o menaquinona (MQ), ms frecuente en bacterias Gram-positivas. Citocromos (protenas hmicas con Fe quelado). Sufren oxidacin y reduccin por prdida y ganancia de un electrn cada vez, a travs del Fe del centro de la molcula. Los citocromos son de varias clases, segn el tipo de grupo hemo (ej. tipo a, b, c, etc), y a veces forman complejos fuertes con otros citocromos (ej., cit bc1) o con Fe/S-protenas.

Fig. 2 Cadena de electrones

Los electrones fluyen desde los transportadores con potencial de reduccin ms negativo hacia los de potencial ms positivo, hasta que finalmente reducen un aceptor final de electrones obtenido del ambiente. Observar que algunos de estos transportadores transportan tomos de H (o sea, protones y electrones), mientras que otros transportan nicamente electrones. Como resultado de todo ello, tenemos que existen determinados puntos de la c.t.e. (llamados bucles o lazos translocadores de protones) en los que el efecto neto es la salida de protones al exterior de la membrana citoplsmica
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(concretamente, en los puntos donde confluyen un transportador de H + y otro de electrones). Es decir, existe una translocacin de protones hacia el exterior ligada a las reacciones redox que ocurren en la c.t.e. Por otro lado, la membrana es impermeable a los protones, por lo que los protones translocados a resultas del funcionamiento de las c.t.e. no pueden entrar directamente. Por lo tanto, se crea un gradiente electroqumico de protones, compuesto de gradiente osmtico de esos iones H+ ( pH) y un gradiente de carga elctrica ( ). Este gradiente o fuerza protn motriz es una forma de energa potencial que puede realizar trabajo.

Fig. 3 Potencial redox en la cadena de electrones

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Fig. 4 Cadena de electrones en bacterias

Fig. 5 Cadena de electrones en mitocondrias

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MECANISMO DE LA ATP-SINTASA DEPENDIENTE DE PROTONES La conversin de la fuerza protn-motriz en ATP se realiza por medio de una ATP-asa. Este complejo proteico consta de dos partes funcionales, un canal integral de membrana (F0) y una estructura globular en el lado citoplsmico de la membrana (F1). La ATP-asa funciona de modo reversible, como ATP-sintasa y como ATP-hidrolasa. La disipacin de la fuerza protn motriz supone el funcionamiento como ATP-sintasa, segn el siguiente modelo: F0 es un complejo integral de membrana, que trasloca los protones. Est compuesto de {a, b2, c12}. La subunidad a es la encargada de canalizar los protones a travs de la membrana, mientras que las dos subunidades b sobresalen hacia el lado citoplsmico, interaccionando con la F 1. Las 12 subunidades de c se disponen formando una especie de cilindro transmembranoso, capaz de rotar en ambos sentidos. F1 constituye la porcin intracitoplasmtica, dotada de los sitios catalticos. La parte ms saliente de F1 consta de 3 subunidades alternando con 3 subunidades .

Al parecer, la traslocacin de unos 3 o 4 protones ( o dos) a travs de F0 est acoplada, por medio de grandes cambios conformacionales, a la sntesis de una molcula de ATP en las subunidades de la F1, por un notable mecanismo de catlisis rotacional: El que los 3-4 protones entren por F0 (probablemente a travs de la protena a) provoca la rotacin del cilindro de c12, lo que supone una torsin que se transmite a la F1 a travs de las protenas . lo que a su vez provoca un cambio conformacional en las subunidades . El cambio conformacional en las subunidades permite que a ellas se una ADP y Pi. El trabajo realizado por el sistema se usa para producir entonces el ATP, volviendo las a su configuracin original, preparadas para un nuevo ciclo de sntesis de ATP. La funcin de b2 es equivalente a la del estator del motor: sirven para evitar que las y se muevan cuando se produce la torsin de .

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Fig. 6. Estructura de ATPasa en bacterias

Fig. 7. Ubicacin de ATPasa en mitocondrias

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Fig. 8. Ubicacin de ATPasa en cloroplastos

Las ATP-sintasas son los motores rotatorios ms pequeos del mundo vivo (ms pequeos que el motor del flagelo bacteriano). Las ATP-asas de membrana pueden funcionar tambin en sentido inverso al de sntesis, es decir, como ATP-hidrolasas: se produce hidrlisis de ATP y extrusin de protones al exterior. Por lo tanto, en este sentido de funcionamiento, se genera un gradiente de protones a expensas de gasto de ATP intracelular. Esto muestra una vez ms que el ATP y el gradiente de protones se pueden considerar como formas diferentes e interconvertibles de energa celular. Las ATP-asas productoras de gradientes de protones existen en bacterias no respiratorias, que carecen de c.t.e., como por ejemplo, las bacterias anaerobias del cido lctico. Estas bacterias obtienen su ATP por fosforilacin a nivel de sustrato, en sus procesos de fermentacin. Pero al igual que otras bacterias, necesitan realizar procesos de transporte activo ligado a simporte de protones y pueden moverse por flagelos, por lo que necesitan tambin crear un gradiente de protones para estos fines. En estas bacterias las
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ATPasas funcionan siempre como ATP-hidrolasas, conviertiendo parte del ATP obtenido por fermentacin en una fuerza protn-motriz que se usa para transporte de nutrientes y para alimentar al motor flagelar. DIVERSIDAD DE CADENAS TRANSPORTADORAS En bacterias existe una gran diversidad de tipos de cadenas transportadoras de electrones, si bien en todos los casos aparecen los elementos que citamos ms arriba (flavoprotenas, Fe/S-protenas, quinonas, citocromos). La cadena sigue el orden derivado de la torre de electrones (desde los componentes ms electronegativos a los menos electronegativos o ms electropositivos) y se da una alternancia entre transportadores de tomos de hidrgeno (protones y electrones) y de slo electrones (es decir, aparecen bucles translocadores de protones hacia fuera, lo que genera la fuerza protn-motriz). La cadena transportadora de electrones de Paracoccus cuando usa oxgeno como aceptor final es similar a la de las mitocondrias (Fp - FeS protena - quinona (coenzima Q) - cit bc1 - cit c - cit aa3 - O2), y en ella se observan tres sitios donde termodinmicamente la variacin de energa libre es suficiente para apoyar la sntesis de una molcula de ATP. Muchas cadenas respiradoras aerobias muestran ramificaciones alternativas, sobre todo a nivel de los citocromos terminales. El papel principal de estas ramificaciones es lograr flexibilidad en la ruta de transferencia de electrones, de manera que se obtengan rendimientos mximos en ciertos sustratos y condiciones de crecimiento, y para minimizar los efectos nocivos de otros. P. ej., si E. coli dispone de oxgeno lo usar como aceptor final de electrones, pero dependiendo de su concentracin recurrir a una u otra rama. (A su vez, esto puede estar relacionado con la fase de crecimiento: en la fase exponencial, cuando hay todava suficiente nivel de O2, se usa una rama, mientras que en fase estacionaria, cuando el nivel de O 2 ha bajado, se usa la otra). El mismo E. coli y otras bacterias anaerobias facultativas, en un ambiente sin oxgeno pero con presencia de nitratos puede usar estos aceptores alternativos con las correspondientes variantes en los citocromos terminales. Cuando Azotobacter (fijador aerobio de N2) crece fijando nitrgeno molecular, usa una ramificacin que gasta muchsimo oxgeno como aceptor final (aunque el rendimiento en ATP es menor); con ello logra evitar que el oxgeno pase al citoplasma, con lo que protege a la nitrogenasa de la inactivacin por oxgeno.

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Fig. 9 Respiracin aerobia y anaerobia en E. coli

En los quimiolitotrofos, cuando el donador de electrones es diferente al hidrgeno molecular, la cadena transportadora de electrones funciona en los dos sentidos: en su sentido normal, ya estudiado. Un donador inorgnico de electrones cede electrones, que llegan a la cadena transportadora de electrones, que crea un gradiente de protones, cuya disipacin a travs de ATP-asa genera ATP; Sin embargo, salvo en caso de usar H 2, los donadores exgenos no sirven para generar poder reductor (coenzimas reducidas); pero estas bacterias necesitan equivalentes de reduccin (NADPH) para reducir el CO2 (su fuente exclusiva de C) hasta material orgnico celular [CH2O]. Este NADPH lo logran merced a un flujo invertido de electrones a travs de la cadena transportadora de electrones, usando para ello como energa parte del potencial de protones (f.p.m.) generado por el flujo normal.

Enlaces: http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/10energia.htm
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