Immunit antitumorale

Immunologie 4me anne

Octobre 2012 Sylvie Chollet-Martin

PLAN
I Introduction II Les antignes tumoraux 1. Mthodes de caractrisation des Ag tumoraux 2. Ag identifis chez l homme III Mcanismes de cytotoxicit antitumorale Cytotoxicit mdiation cellulaire Cytotoxicit dpendante des Ac IV - Mcanismes d chappement V Immunothrapie antitumorale

I Introduction
. Croissance incontrle dun clone de cellules associe des anomalies acquises dans le gnome : - activation doncognes normaux induisant la prolifration : kinases, f de transcription (c-myc, c-fos), R de f de croissance - rpression dantioncognes rgulateurs de la prolifration (p53) . Ag de surface des tumeurs induisent une RI de rejet - historique : rgression tumorale en priode infectieuse, rle TNF - rponse T et NK cytotoxiques essentiellement - existence d une mmoire . Nombreux mcanismes dchappement la RI qui devient inefficace . Axe prioritaire de recherche : augmenter la RI cytotoxique antitumorale . Immunothrapie . Thrapie cellulaire stimuler in vivo la RI grce des CPA injecter des cellules pr-stimules in vitro, etc

II Les antignes tumoraux

1. Mthodes de caractrisation des Ag tumoraux . Peu immunognes caractrisation fiable difficile . Mise en vidence partir des LyT cytotoxiques (CTL) : Boon 1992
Lymphocytes sang Cellules de mlanome

Co-culture avec IL-2

Prolifration et diffrentiation en CTL

Clonage

Diffrents clones de CTL anti-tumoraux + cellules tumorales du mlanome initial identification des gnes MAGE (melanoma Ag) Slection de sous-populations tumorales et comparaison des gnomes

. Approche biochimique : purification par HPLC des peptides lus partir des molcules du CMH I la surface des cellules tumorales; test des peptides sur des CTL; squenage, clonage et production sous forme synthtique. . Approche srologique : purification des Ac des srums de patients; test des Ac sur des protines issues de banques dADN provenant de nombreuses tumeurs. Plus rcente.

2 . Antignes tumoraux identifis chez lhomme Liste longue; MAGE les premiers dcrits Ag spcifiques de cellules tumorales Spcifiques ou non dun type de tumeur Prsents dans le gnome normal, non exprims . MAGE : plusieurs types, caractriss dans le mlanome, mais exprims dans de nombreuses tumeurs; prsents aussi dans testicules et placenta normaux (sans CMH) . RAGE : carcinome du rein (et rtine normale, sans CMH) . BAGE : carcinome de la vessie . GAGE : carcinome gastrique; . MUC1 : dfaut de glycosylation de la mucine; tumeur mammaire ovaire, pancras; clive en Ca15.3 circulante, marqueur du cancer du sein . HER-2/neu : proto-oncogne surexprim dans le cancer du sein et de lovaire . Mutations sur des protines ubiquitaires : ras (p21ras), p53, catnine, Cdk4, CASP8 : prolifration ou apoptose . Virus : EBV, VHB, papillomavirus; intgration dans la cel cancer

Ag associs aux cellules tumorales Surexpression dAg normaux dans les tissus cancreux . tyrosinase . Ag MART-1/MelanA mlanocytes . Ag gp100 . Ag carcinoembryonnaire : pithlium colon . Ag prostatique (PSA) . Ag rnal RU2A

Certains Ag = cibles de limmunothrapie vaccinale Prsence de CTL spcifiques : . circulation sanguine . infiltrant les tumeurs (TIL)

III Mcanismes de cytotoxicit antitumorale

. Mcanismes classiques (cf cours de 3me anne) - induction de RI : importance de CPA professionnelles (CD) - phases effectrices . Ncessit dune destruction totale de la cible Cellules cytotoxiques directes : Ly T CD8 (CTL) : exocytose des granules LyT CD4 : voie de Fas et du TNF-R NK NKT Cellules cytotoxiques via les Ac : NK Macrophages Polynuclaires

mcanismes idaux MAIS rponse inefficace

Cellule tumorale

5 . cytotoxicit T-dpendante

6. cration de LyT mmoire TCR

LyT CD8

CMH I 1 . libration dAg tumoraux

NK Cytotoxicit naturelle CPA (CD)

CMH II

3 . activation des LyT CD4 et CD8

LyB

2 . prsentation de lAg par les CPA et les LyB aux LyT

LyT CD4

BCR

INDUCTION DE LA RI

4 . coopration T / B et production dAc ADCC

Destruction de la cellule tumorale par le LyT CD8 cytotoxique

CMH I CD8

.. . .... . .
LyTCD8

.... .
formation du conjugu rorganisation du cytosquelette exocytose

ICAM
Cellule tumorale

2 intgrine

Apoptose de la cellule tumorale

.. .. . .... . . .
Recyclage du LyT cytotoxique vers une autre cellule tumorale

Voie de lexocytose des granules

Perforine Granzyme

Voie de FAS

LyT cytotoxique Polymrisation Ca2+-dpendante

FAS-Ligand FAS

Cellule tumorale

Pore de Perforine

FADD caspase initiatrice

Granzyme Activation des Caspases et Apoptose

Destruction de la cellule tumorale par les Ly T cytotoxiques CD8+ et par les LyTCD4+ : voie de Fas ( CD95) et de TNF-R
Prdominant chez CD4+ dpourvus de granules de perforine / granzyme

. Liaison des units de Fas trimrique avec le Fas-L . Liaison du TNF-R avec le TNF

Signal dactivation de lapoptose via les domaines de mort

Fas CMH II

Fas-L

TCR Cellule tumorale TNF-R TNF

CD4 Lymphocyte T

Apoptose de la cellule tumorale

Proprits effectrices des cellules NK

. Mcanisme proche des LyT cytotoxiques : . granules de perforines et granzymes . apoptose MAIS : . granules constitutives . pas de restriction au CMH . pas de cellules mmoires . la rencontre entre la cellule NK et la cellule tumorale se fait grce au CD16 Cytotoxicit mdie par les Ac : ADCC Ag CD16 = RFcIII

. . .. . . .. . . ... . .. . . ..
Cellule tumorale apoptotique

Ig
Cellule tumorale

... ..
NK

ADCC : plusieurs cellules plusieurs mdiateurs

Neutrophile Perforine/Granzyme TNF Enzymes lytiques

Cellule NK

Eosinophile

Anticorps li au rcepteur du Fc Cellule tumorale Antigne tumoral de surface

Enzymes lytiques

Enzymes lytiques TNF

Macrophage

Les cellules NKT

Caractristiques phnotypiques et fonctionnelles des NK et des LyT

Cellule tumorale
Ag glycolipidique

TCR V24 / CD3

CD1

KAR Cellule NKT KIR forte production de cytokines variable selon le stimulant : . Th2 (IL-4) . Th1 (IFN)

Contact entre les cellules dendritiques exprimant les Ag tumoraux et les LyT (synapse)

Ingestion de cellules tumorales par une cellule dendritique

Mise en vidence dune nouvelle population cellulaire implique dans la surveillance anti-tumorale : NKDC

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Rponse immunitaire anti-tumorale, Mocellin et al, Gastroenterolgy 2005

Rponse immunitaire antitumorale

Gabrilovich Nature Rev Immunol, 2004

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IV - Mcanismes d chappement
- Reconnaissance des cellules tumorales par le SI - Prsence de cellules effectrices spcifiques et non spcifiques intra-tumorales pourtant Mauvaise limination par le SI

Co-existence de nombreux mcanismes dchappement des tumeurs : 1) Mauvaise induction de la rponse immunitaire 2) Rsistance des cellules tumorales aux cellule effectrices du systme immunitaire

1) Mauvaise induction de la rponse immunitaire . LAg tumoral est ignor par le SI en raison de sa localisation (tumeur compacte, barrire de collagne) . LAg tumoral induit un faible nombre de LyT CD8 effecteurs . Induction dun tat de tolrance priphrique lAg tumoral - dfaut de maturation des cellules dendritiques (CD) - prsence de LyT rgulateurs CD4+CD25+ Foxp3+ activs par les CD . Scrtion locale (cellules tumorales et stroma) de molcules inhibitrices de la RI : - TGF - IL-10 - VEGF - PGE-2

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2) Rsistance des cellules tumorales aux cellules effectrices du systme immunitaire . Dfaut dexpression de molcules dadhrence et dfaut de gradient de chimio-attractants inhibant la migration des cellules immunitaires au sein de la tumeur . Dfaut dexpression des signaux de co-stimulation . Faible expression des molcules HLA de classe I par les cellules tumorales, aboutissant une faible prsentation des Ag tumoraux aux LyT . Libration de leurres solubles par les cellules tumorales capables de se lier FasL sur les LyT ou NKG2D sur les NK . Rsistance la cytolyse : mutations dans Fas, altrations dans la machinerie apoptotique . Stratgie de contre-attaque : expression de FasL par les cellules tumorales induisant lapoptose des LyT ou des NK

Anomalies dans la rponse immunitaire antitumorale

Gabrilovich Nature Rev Immunol, 2004

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Inhibition de lactivation de NF-KB au cours du cancer : blocage de STAT 3 ou de IKB Gabrilovich Nature Rev Immunol, 2004

V Immunothrapie antitumorale (cf cours spcifiques)

. Vise radiquer les cellules de la tumeur initiale et des mtastases . Nombreuses stratgies en complment des chimiothrapies classiques

. Thrapies passives : apport deffecteurs cytotoxiques . Thrapies actives : induction in vivo dune RI spcifique

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1) Thrapies passives
Injection de cytokines : exemple de lIL-2 et de lIFN

IL-2

molcule pionnire dans limmunothrapie anti-tumorale.

Protocole initial : injection de LyT autologues activs ex vivo en LAK anti-tumoraux + injection de fortes doses dIL-2 rsultats dcevants en 1984 : rmission ~ 10% et toxicit de lIL-2

- Cancer du rein stade IV

. IL-2 forte dose depuis 1992 . Notion de facteur prdictif de bonne rponse lIL-2: - aspect histologique particulier du rein - prsence danhydrase carbonique IX sur les biopsies IL-2 toujours associ chimiothrapie, et souvent IFN - Allogreffe de moelle osseuse dans les leucmies aiges . LIL-2 va activer les LyT du donneur pour aider liminer les cellules leucmiques du receveur restantes = complment de la chimiothrapie aplasiante = effet graft versus leukemia

Effets secondaires de lIL-2

Due la cascade IL-2 TNF IL-1 IL-6 IL-8

Signes cliniques : proches du choc septique et de linjection danti CD3 Fivre oedme Hypotension activation de la coagulation Diminution du dbit cardiaque augmentation des prot phase aigue Vasodilatation neutropnie Syndrome de fuite capillaire thrombopnie diminution de la filtration glomrulaire

Tentatives damlioration de la forme par lutilisation de liposomes : mais leffet de lIL-2 est diminu ; lassociation aux lipides diminue la fixation de lIL-2 ses rcepteurs.

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IFN

Standard Combin au PEG pour prolonger la libration

- Cancer du rein stade IV et Mlanome - Leucmie mylode chronique : utilis quand la greffe de MO impossible - Leucmie tricholeucocytes - Cancer intra-pithlial de la corne et de la conjonctive : IFN local

Injection de LyTCD8+ spcifiques de la tumeur obtenus par expansion in vitro des LyT infiltrant la tumeur Cancer du rein et mlanome

Injection dAc monoclonaux murins ou humaniss; peuvent tre coupls des toxines ou des molcules radiomarques. Sont dirigs contre des dterminants Ag tumoraux identifis

2) Thrapies actives : les vaccinations

. Mthode ancienne de rfrence pour le cancer de la vessie : injection intra-tumorale de BCG activation non spcifique de la RI . But : injecter les Ag tumoraux, assurer une prsentation par les CPA permettant une RI optimale . Exemples doutils : - transfection des cellules tumorales avec les Ag de co-stimulation (B7) ou des cytokines (IL-2) - Ag de tumeurs fusionns avec des chimiokines ou des Fc dIg - injection de cellules dendritiques charges avec des peptides de tumeur, des lysats de tumeur ou des exosomes : plein essor, plus de 100 essais en cours dans le monde, plus de 80 peptides identifis, nombreux types de tumeurs cibls - expression des Ag tumoraux dans des vecteurs viraux, associs ou non dautres Ag (B7, cytokines) : thrapie gnique

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Principe de la vaccination antitumorale

Induction dune rponse immunitaire spcifique in Vivo, contre les cellules tumorales de lindividu.

Les exosomes drivs des tumeurs sont des micro-vsicules trs immunognes capables dinduire une RI spcifique. Essais en cours avec exosomes synthtiques, spcifiques dun Ag prcis
Zitvogel et al

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