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Captulo 4
Tcnicas citolgicas
Luzia Ftima Gonalves Caputo Ester Maria Mota Lycia de Brito Gitirana

A tcnica citolgica tambm faz parte da histotecnologia e possui grande importncia no diagnstico de algumas doenas que acometem os seres humanos e os animais. Essa uma ferramenta fundamental no diagnstico de tumores, funo hormonal e infeces parasitrias. O exame colpocitolgico, conhecido como Papanicolaou, utilizado para detectar, nas mulheres, tumores de colo de tero. Seu idealizador, dr. George N. Papanicolaou, estabeleceu em 1942 os conceitos bsicos de interpretao citolgica e criou um mtodo de colorao citolgica que utilizado, universalmente, at hoje. A citopatologia analisa as clulas individualizadas, descamadas, expelidas ou retiradas da superfcie de rgos de diferentes partes do organismo. Como os materiais biolgicos apresentam diferentes caractersticas, devido s distintas formas de organizao e composio, a coleta do material destinado anlise citolgica constitui uma etapa fundamental nesse processo. H mtodos especficos para coleta de materiais distintos. Alm disso, nessa fase, so definidos os tipos de procedimentos mais adequados anlise dos preparados citolgicos.

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Algumas etapas da tcnica citolgica so semelhantes s da tcnica histolgica, mas com peculiaridades prprias, podendo tambm haver considerveis interferncias na qualidade final do diagnstico, como coleta do material, fixao, processamento, colorao e leitura das lminas citolgicas.
1. Coleta de material

A origem das amostras dos preparados histolgicos vem de fragmentos de tecidos oriundos de necrpsias e bipsias. Nos preparados citolgicos, essa origem um pouco mais diversificada, proveniente de lquidos orgnicos (urina, lquor, lquido asctico, pericrdico, sinovial), punes aspirativas por agulha fina (pulmo, mama, tireoide, linfonodos, dentre outros), secrees (escarro, abscesso e fstula), lavados cavitrios (brnquicos e broncoalveolares, vesiculares) e raspados (cervicovaginal, ocular). Segundo suas caractersticas, as amostras so divididas em trs grupos, e chegam ao laboratrio para anlise da seguinte forma: Classificao da amostra Disteno celular (esfregao) Mtodo de coleta Raspagem swab (Figura 11) Origem da amostra Colpocitologia Olhos Lavado brnquico Leses cutneas Bipsias Peas cirrgicas Puno aspirativa Sangue Lavado brnquico Lquor espinhal

Imprint ou decalque

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Amostras pastosas

Expectorao Puno ou drenagem

Escarro (Figura 6) Abscessos Massas necrticas Urina Lquido sinovial Lquido peritoneal ou asctico Lquido pleural Lquido peritoneal ou asctico Lquido pericrdico

Amostras lquidas

Espontnea ou por cateter Escovao Escovao ou lavado

Puno

Lavado brnquico alveolar Lavado vesical Lquido estomacal Lavado brnquico Lquido sinovial

A natureza da amostra (lquida, pastosa ou slida) ir definir a forma de coleta e preparo do material segundo as etapas da tcnica citolgica escolhida. Distenso celular (esfregao),(Figuras 1, 3, 8, 9, 10 e 11): feita ao se distender sobre uma lmina de vidro uma leve camada de fluidos corpreos para o exame ao microscpio. Lavado: o material colhido com o auxlio de um cateter de instilao para lavagem, contendo soluo salina, de uma cavidade do organismo. Exemplos: lavado broncoalveolar (LBA), brnquico (LB), peritoneal, entre outros. Geralmente os lavados se apresentam pouco celulares.

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Escovados (Figuras 1, 2, 3 e 4): o material colhido por esfoliao da superfcie de mucosas, utilizando-se uma escova. O material obtido pode ser distendido sobre a superfcie de uma lmina de vidro, ou cortando-se a cabea da escova e imergindo-a em soluo salina ou em lquido conservante apropriado, procedendo-se em seguida citologia de lquidos. Impresses teciduais (imprint) (Figura 5): denomina-se impresses teciduais o procedimento em que se coloca a rea lesionada do tecido em contato com a superfcie de uma lmina de vidro lisa, de forma semelhante ao procedimento para se obter impresso digital. As clulas superficiais da leso passam para a superfcie da lmina de vidro e podem ser observadas ao microscpio. Esse procedimento tambm denominado citologia de decalque. Figura 1. Coletores para citologia esfoliativa. Figura 2. Escovado cervicovaginal.

Figura 3. Disteno citolgica pela esptula de Ayre.

Figura 4. Fixao de escovado citolgico.

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Figura 5. Impresso tecidual em lminas (imprint).

Figura 6. Escarro espontneo ou induzido para coleta de material.

2. Fixao das amostras

O principal objetivo da fixao preservar a morfologia celular e a composio qumica das clulas aps a sua retirada do organismo.
Tipos de fixao

A. Fixao seca Esse tipo de fixao utilizado quando se realiza a colorao de MayGrnwald-Giemsa, pois o metanol presente na soluo corante age como fixador. o tipo de fixao utilizada para distenso de clulas sanguneas, imprint de bao, gnglios linfticos, entre outros. B. Fixao por revestimento usada na obteno dos esfregaos citolgicos. Os fixadores so constitudos de polietilenoglicol (Carbowax) e lcool, comercialmente vendidos na forma lquida ou em spray. As amostras so fixadas pelo gotejamento do fixador ou pela pulverizao do aerossol das embalagens em spray (Figura 7), sendo secas temperatura ambiente, pois o lcool fixa e evapora, enquanto o polietilenoglicol forma uma pelcula que protege e preserva a amostra. Existem vrios protocolos para este tipo de fixador; citaremos um dentre os vrios que existem na literatura.

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Carbowax em etanol 95% Etanol 95%.............................................................95 mL Polietilenoglicol 4000......................................................5g Lembrar: antes de corar as amostras fixadas em Carbowax, banh-las em etanol 95% por 10 minutos para remover a pelcula de polietilenoglicol. Figura 7. Fixao por revestimento.

C. Fixao por lquidos fixadores O fixador citolgico universal o etanol 95%, um agente coagulante, que penetra na clula desidratando-a e intensificando a diferenciao nuclear e citoplasmtica aps a colorao. Outros fixadores, como o Carnoy, metanol, lcool isoproplico 80%, etanol 50%, lquido de Bouin, dentre outros, tambm podem ser utilizados como fixadores celulares, variando a escolha e o tempo de fixao de acordo com natureza da amostra.
Processamento 3. Processamento das amostras

O acondicionamento do material essencial para evitar a perda de contedo. A identificao da amostra e o preenchimento correto da ficha de solicitao mdica (contendo o nome do paciente, idade, data da coleta, natureza da amostra e sua localizao, tipo de exame requerido, dados clni-

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cos, nome do mdico requisitante e telefone) so informaes relevantes para evitar o extravio do material. O processamento da amostra requer procedimentos especficos de acordo com a natureza do material a ser analisado. Descreveremos aqui alguns desses procedimentos. A. Distenso celular (Figuras 1, 3, 8, 9, 10 e 11): geralmente, a distenso chega ao laboratrio pronta, tendo sido manipulada pelo clnico ou cirurgio e fixada em etanol 95%. Na maioria das vezes, quando a distenso chega seca, o material destinado colorao pelo mtodo de May-GrnwaldGiemsa e, dependendo da amostra, pode-se ou no fixar pelo metanol durante cinco minutos. Deve-se preparar esse tipo de amostra de modo a formar uma fina camada de clulas, permitindo assim melhor diferenciao celular. Distenses espessas produzem artefatos e hipercoram as clulas dificultando sua anlise. Figura 8. Distenso celular. Figura 9. Distenso aps bipsia por agulha.

Figura 10. Formas de distenso celular. Figura 11. Distenso celular por swab.
Forma espiral Forma ondulada

Forma em distenso

Forma de espalhamento

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B. Amostras pastosas: devem ser analisadas antes de processadas para a anlise. Coloca-se o material em uma placa de Petri com fundo escuro e selecionam-se as regies mais densas, escuras e/ou sanguinolentas. Essas reas so colocadas sobre lminas de vidro para distender, obtendo-se uma camada de clulas (distenso celular) e fixando o material imediatamente em etanol 95% (Figura 8). C. Amostras lquidas: so as amostras que possuem maior diversidade de procedimentos, dependendo do tipo de amostra. Citaremos aqui os mais utilizados: Lquidos, como urina, lavados, derrames de cavidades e lquido sinovial podem ser pr-fixados em etanol 50%, ou enviados imediatamente ao laboratrio aps a coleta, podendo ser tambm conservados a 4C at o envio. O uso de anticoagulantes deve ser avaliado de acordo com o tipo de material coletado. As amostras lquidas subdividem-se em dois grupos:
Transudatos: so pouco celulares e de cor clara. Exsudatos: so ricos celularmente, escuros, de natureza neoplsica ou

inflamatria. Estas amostras podem ser processadas de acordo com sua riqueza celular, por meio da centrifugao (Figura12) ou citocentrifugao (Figuras 13 e 14). Centrifugao preferida quando o material se apresenta hipercelular. Procedimento: 1- Colocar o lquido em tubos Falcon com tampa. 2- Centrifugar a 1.500 rpm por 10 minutos. 3- Descartar o sobrenadante. 4- Aspirar o sedimento com pipeta Pasteur. 5- Colocar o sedimento em lminas limpas e desengorduradas e proceder distenso celular.

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6- Deixar secar ao ar e /ou fixar em lcool 95% imediatamente; a secagem ao ar necessria se o mtodo de colorao for o May-Grnwald-Giemsa. Observao: As amostras podero vir em tubos com anticoagulante ou no. Figura 12. Procedimento para centrifugao

Citocentrifugao Possibilita a anlise citolgica de lquidos com baixssima densidade celular (hipocelulares). Esse mtodo necessrio para concentrar as clulas em suspenso, que com a centrifugao se depositam diretamente sobre uma regio das lminas de vidro, perfazendo um dimetro de 5 mm, enquanto o meio de suspenso absorvido por papel absorvente prprio.

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Figura 13. Utenslios para citocentrifugao.

Vantagens: Requer pouco volume (0,1 a 0,5 mL por lmina). Alta confiabilidade do resultado: as clulas da amostra sero depositadas numa regio pequena da lmina medindo 5 mm de dimetro. Procedimento:
1- Pipetar 0,5 mL da amostra no citofunil, previamente

acoplado ao citoclipe, lmina e ao papel absorvente.

2- Centrifugar a 1.200 rpm por 10 minutos. 3- Retirar o conjunto e desacoplar a lmina. 4- Deixar secar ao ar e/ou fixar em lcool 95% imediatamen-

te. Se o mtodo de colorao for o May-Grnwald-Giemsa, deixar secar ao ar.

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Figura 14. Procedimento para citocentrifugao.

D. Bloco celular ou cell block (Figura 14) um procedimento que rene as tcnicas citopatolgicas e histopatolgicas e utilizado quando se deseja obter uma alta concentrao celular, complementando o diagnstico, com a vantagem de aproveitar todo o sedimento da amostra, alm de permitir a armazenagem desse sedimento para futuras anlises, se necessrio. Essa tcnica empregada em citodiagnstico de amostra lquida ou pastosa, quando h dificuldade para fechar diagnstico de tumores pouco diferenciados.

Fixao vrios so os fixadores utilizados para o cell-block, alguns inclusive adicionam corantes para facilitar a visualizao da amostra durante e aps o processamento. Destacamos alguns fixadores a seguir:

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Formalina 10%:

Formaldedo comercial..........................................100 mL gua destilada ..................................................900mL

Formol-Salina:

Formaldedo comercial.........................................100 mL gua destilada..................................................900 mL Cloreto de sdio (NaCl).........................................9 g

AFA ou FAA lcool - formalina - cido actico (muito

utilizado para cell-block): Etanol (95 - 100%)..........................................85 mL Formaldedo comercial .........................................10 mL cido actico glacial.............................................5 mL
Carnoy:

lcool etlico absoluto.........................................60 mL Clorofrmio.......................................................30 mL cido actico glacial............................................10 mL

Lquido de Bouin:

Soluo saturada de cido pcrico (aquosa).................75 mL Formaldedo comercial...........................................25 mL cido actico glacial.............. ...............................5 mL Tempo de fixao: 4-24 horas. (para linfoma deve-se deixar de 48-72 horas).

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Tratamento prvio dos cortes para a remoo do cido pcrico: 1- Desparafinizar e hidratar at o lcool 95%. 2- Colocar as lminas em uma soluo de lcool 70% saturado com carbonato de ltio durante 5 minutos. 3- Lavar em gua corrente durante 3 minutos. 4- Lavar em gua destilada durante 5 minutos. E. B-5 ou formalina tamponada sublimada: Muito utilizada para amostras contendo sangue. Soluo estoque: Cloreto de mercrio (HgCl2).........................................12 g Acetato de sdio (CH3COONa) .................................2,5 g gua destilada........................................................200 mL Soluo de uso (preparar somente antes do uso): Soluo estoque de B-5..............................................20 mL Formaldedo comercial...................................................2 mL Tratamento prvio dos cortes para remoo de pigmento de mercrio: 1- Desparafinizar e hidratar os cortes 2- Imergir durante 5 minutos na soluo de lugol sob agitao. 3- Lavar em gua. 4- Colocar as lminas em tiossulfato de sdio 5% por 1 minuto ou at a completa remoo da cor amarela do Iodo. 5- Lavar em gua corrente durante 5 minutos.

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Soluo de lugol: Iodo (I2)...........................................................2,5 g lcool 70%....................................................500 mL Procedimento para cell-block:

1- Centrifugar as amostras por 10 minutos a 1.000 rpm. 2- Desprezar o sobrenadante, retirar o sedimento e fixar as amos-

tras de 5 minutos a 1 hora o tempo de fixao pode variar de acordo com o fixador e a quantidade da amostra. Proceder fixao colocando o sedimento no lquido fixador que se encontra em frasco apropriado para sedimentao.
3- Centrifugar novamente por 2 minutos na mesma rotao, reti-

rar o fixador e manter o sedimento formando um pellet.

4- Iniciar a desidratao com etanol 80% e seguir com um banho

de etanol 95% e dois banhos de etanol 100%. O tempo de desidratao tambm varia de acordo com a quantidade da amostra, podendo variar de 5 minutos at 1 hora em cada banho. Centrifugar durante poucos minutos em cada banho. Obs. Esta etapa e as seguintes podem ser realizadas no processador automtico de tecidos, desde que o pellet da amostra se encontre envolto em papel de filtro, evitando a perda do material durante o processamento.
5- Clarificar em dois banhos de xilol, variando de 5 a 15 minu-

tos. Centrifugar ao final por poucos minutos para formar o pellet. Obs. Para retirar o xilol, deve-se descartar o sobrenadante e secar o pellet com papel absorvente.
6- Fazer dois banhos, de 15 minutos a 1 hora, em parafina

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fundida na estufa; o tempo varia de acordo com o tamanho do pellet formado.

7- Esfriar e retirar o pellet impregnado pela parafina. 8- Montar um bloco de parafina. 9- Seccionar o bloco em micrtomo e corar pelo mtodo desejado.

Figura 15. Processamento manual para cell-block (esquema adaptado do original do Dr. N. Fukushima, Doai Memorial Hospital, Tquio).

4. Coloraes citolgicas

A qualidade da colorao citolgica est diretamente relacionada s caractersticas tintoriais dos corantes, ao processamento da amostra (espessura dos esfregaos) e fixao. Esses cuidados devem ser observados para se evitar artefatos e dificuldade de anlise do material. Muitas coloraes histolgicas podem ser empregadas na citologia, algumas das quais com pequenas modificaes. Os mtodos mais empregados

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so o mucicarmin de Mayer, May-Gruenwald-Giemsa, hematoxilina e eosina, cido peridico Schiff (PAS), Grocott, Shorr, entre outros. Porm, o mtodo de Papanicolaou (Pap) o mais difundido e empregado, pela grande demanda diagnstica, e por ser a colorao comumente aplicada s amostras colpocitolgicas para diagnstico de cncer ginecolgico. O mtodo de Papanicolaou utiliza um conjunto de corantes e tem como objetivo a evidenciao das variaes na morfologia e dos graus de maturidade e de atividade metablica celular. Esse mtodo se baseia nas aes de um corante bsico (com afinidade pelo ncleo das clulas: a hematoxilina), um corante cido (que se combina com o citoplasma das clulas queratinizadas: orange G) e um corante policromtico (que oferece tonalidades de cores diferentes no citoplasma das clulas: EA-65). Este mtodo abrange cinco etapas:
Hidratao: esta etapa requer a reposio gradual da gua das clulas

por meio de banhos alcolicos de concentraes decrescentes at a gua destilada.

Colorao nuclear: as clulas hidratadas podem agora receber um

corante aquoso para corar os ncleos (hematoxilina de Harris).

Desidratao: para receber corantes alcolicos citoplasmticos, deve-

mos agora retirar a gua das clulas com banhos alcolicos de concentraes crescentes.
Colorao citoplasmtica: nesta etapa, o citoplasma das clulas cora-

do pelos corantes orange G e EA-65, de modo a diferenciar com diversas tonalidades o citoplasma das clulas de acordo com a sua maturidade e metabolismo.
Desidratao, clarificao e selagem: a gua agora deve ser retirada com

concentraes alcolicas crescentes, clarificadas e seladas com meios permanentes hidrofbicos.

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Descreveremos a seguir os mtodos mais empregados. Outros mtodos esto descritos na literatura recomendada.
A. Mtodo de Papanicolaou (Papanicolaou, 1942)

Solues:
Hematoxilina de Harris (Harris, 1900)

Hematoxilina.......................................................5,0 g Etanol 100%.................................................50,0 mL Almen de potssio [KAl(SO4)2]................100 g gua destilada...............................................1.000 mL xido de mercrio (HgO p vermelho)..................2,5 g Dissolva o almen em gua destilada com o auxlio de uma placa aquecedora e um agitador magntico em um recipiente com capacidade para 2.000 mL, para evitar que derrame quando a soluo entrar em ebulio. Misture a hematoxilina no lcool temperatura ambiente em outro recipiente separado. Lentamente, combine as duas solues aquecendo em placa aquecedora, at entrar em ebulio. Retire da fonte de calor e acrescente lentamente o xido mercrio, com cuidado, pois o xido reage com a soluo fazendo-a entrar rapidamente em ebulio, podendo sair, inclusive, do recipiente. Retorne a soluo para a fonte de calor at que tome a tonalidade prpuro-escura. Esfrie, e a soluo estar pronta. Para uso: Acrescente 20 mL de cido actico glacial para intensificar a colorao dos ncleos. Filtre sempre antes de cada uso.

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cido-lcool a 1%:

cido clordrico (HCl)..........................................1 mL Etanol 70%.................................................... 99 mL

gua amoniacal:

Hidrxido de amnio (NH OH)........................2 a 4 mL gua destilada.....................................800 a 1.000 mL

Corante orange G:

Soluo estoque de orange G 10%: Orange G..........................................................10 g gua destilada.................................................100 mL Soluo de uso do orange G : Soluo estoque................................................20 mL cido fosfotngstico[H3P(W3O10)4]......................0,15 g Etanol 95%...................................................980 mL
Corante EA-65:

Solues estoque eosina Y a 20%: Eosina Y............................................................20 g gua destilada................................................100 mL Soluo estoque light-green SF a 3%:

Light-green SF.....................3 g
gua destilada................................................100 mL

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Soluo de uso do EA-65: Soluo estoque de eosina Y.................................20 mL Soluo estoque de light-green SF...........................10 mL cido fosfotngstico [H3P(W3O10)4].........................2 g Etanol 95%...................................................700 mL Metanol absoluto.............................................250 mL cido actico glacial...........................................20 mL Mtodo 1- Etanol 80%......................................5-10 mergulhos 2- Etanol 70%.......................................5-10 mergulhos 3- Etanol 50%.......................................5-10 mergulhos 4- gua destilada I..................................5-10 mergulhos 5- gua destilada II.................................5-10 mergulhos 6- Hematoxilina de Harris ...............................1-5minutos 7- gua destilada....................................5-10 mergulhos 8- Diferenciar em lcool-cido..........................3 mergulhos 9- gua destilada.....................................5-10 mergulhos 10- Banho de gua amoniacal..........................5 mergulhos 11- gua destilada...................................5-10 mergulhos 12- Etanol 50%.....................................5-10 mergulhos 13- Etanol 70% ....................................5-10 mergulhos 14- Etanol 95%...................................5 a 10 mergulhos 15- Orange G, soluo de trabalho.......................1 minuto 16- Etanol 95%..... ...............................5-10 mergulhos

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17- Etanol 95%....................................5-10 mergulhos 18- Etanol 95%.....................................5-10 mergulhos 19- Eosina-EA65, soluo de trabalho..................5 minutos 20- Etanol 95%.....................................5-10 mergulhos 21- Etanol 95%......................................5-10 mergulhos 22- Etanol 95%.....................................5-10 mergulhos 23- Etanol 100% I ................................5-10 mergulhos 24- Etanol 100% II ...............................5-10 mergulhos 25- Etanol 100% III ...............................5-10 mergulhos 26- Xilol I............................................5-10 mergulhos 27- Xilol II............................................5-10 mergulhos 28- Xilol III...........................................5-10 mergulhos 29- Selar em meio hidrfobo. Resultado: Clulas escamosas maduras...............................rseo-avermelhada Nuclolo..................................................vermelho-arroxeado Clulas metabolicamente ativas............................... verde-azulado Citoplasma queratinizado................................ laranja ou amarelo

B. Mtodo de May-Grnwald-Giemsa

Esse mtodo de colorao aplicado em distenses para a anlise de elementos figurados do sangue perifrico, medula ssea, ou elementos celulares colhidos por puno, esfoliao, imprint de tecidos ou concentrado de lquidos celulares, por meio de dois corantes.

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Solues:
Soluo estoque de May-Grnwald (vendida comercialmente arti-

go Merck 1524).
Soluo estoque de Giemsa (vendida comercialmente artigo Merck

9204).
Tampo Sorensen pH 6,8. Soluo A - fosfato de sdio monobsico (NaH2PO4) 0,2 M:

NaH2PO4...............................................27,8 g gua destilada.......................................1.000 mL

Soluo B - fosfato de sdio dibsico (Na2HPO-4. H2O ) 0,2 M:

Na2HPO-4. H2O....................................28,39 g gua destilada ......................................1.000 mL

Soluo de uso:

Soluo A Soluo B pH final 6,8 51 mL 49 mL 100 mL

Soluo de uso de May-Grnwald:

Soluo estoque de May-Grnwald.........................25 mL Tampo Sorensen pH 6,8...................................190 mL

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Soluo de uso de Giemsa:

Soluo estoque de Giemsa...................................25 mL Tampo Sorensen pH 6,8...................................190 mL Nota: As concentraes finais das solues de uso de May-Grnwald e Giemsa podem ser ajustadas se necessrio. Elas sempre devem ser preparadas antes de usar e desprezadas aps o uso. Mtodo: 1- Fixar em metanol por 15 minutos. 2- Corar pela soluo de uso de May-Grnwald por 5 minutos. 3- Escorrer o corante da lmina. 4- Corar pela soluo de trabalho de Giemsa por 10 minutos. 5- Lavar em tampo Sorensen pH 6,8. 6- Deixar secar temperatura ambiente. 7- Clarificar com xilol. 8- Selar com meio hidrofbico. Resultados: Ncleos dos leuccitos...........................................azul-plido Citoplasma........................................azul muito claro ou incolor Granulaes neutrfilas........................................vermelho-claro Granulaes basfilas..............................................azul-escuro Eosinfilos e eritrcitos..................................vermelho-alaranjado.

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Mtodo de Shorr

Este mtodo de colorao possui resultados semelhantes ao mtodo de Papanicolaou, sendo aplicado como seu substituto em vrios laboratrios de citopatologia. Solues: Soluo corante de Shorr Biebrich Scarlet ..................................................5,0 g Orange G ou II..................................................2,5 g

Fast Green........................................................1,0 g
cido fosfomolbdico H3P(Mo3O10)4.......................5,0 g cido fosfotngstico [H3P(W3O10)4].......................5,0 g cido Actico Glacial.........................................10 mL Etanol 50 %...............................................1.000 mL Mtodo: 1- Etanol 80%......................................5-10 mergulhos 2- Etanol 70%......................................5-10 mergulhos 3- Etanol 50%.......................................5-10 mergulhos 4- gua destilada.....................................5-10 mergulhos 5- gua destilada....................................5-10 mergulhos 6- Hematoxilina de Harris...............................1-5 minutos 7- gua destilada....................................5-10 mergulhos 8- Diferenciar em lcool-cido..........................3 mergulhos. 9- gua destilada.....................................5-10 mergulhos 10- Banho de gua amoniacal..........................5 mergulhos

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11- gua destilada..................................5-10 mergulhos 12- Etanol 50%.....................................5-10 mergulhos 13- Etanol 60%.....................................5-10 mergulhos 14- Corante de Shorr......................................6 minutos 15- Etanol 95% I...................................5-10 mergulhos 16- Etanol 95% II..................................5-10 mergulhos 17- Etanol 95% III..................................5-10 mergulhos 18- Etanol 100%...................................5-10 mergulhos 19- Etanol 100%...................................5-10 mergulhos 20- Etanol 100%...................................5-10 mergulhos 21- Xilol I.............................................5-10 mergulhos 22- Xilol II............................................5-10 mergulhos 23- Xilol III...........................................5-10 mergulhos Resultados Clulas eosinoflicas...........................citoplasma vermelho / laranja Clulas basoflicas.............................citoplasma azul / esverdeado Ncleos.......................................azul / violeta escuro / marrom
Referncias Bibliogrficas
CAPUTO, L. F. G. Manual da disciplina de histotecnologia do curso tcnico de Pesquisa em Biologia Parasitria do Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro: Fiocruz, 2008. 112 p. COPETTI, N. Manual de tcnicas citolgicas da Faculdade de Medicina da UFRGS. Porto Alegre: UFRGS, 2004. 31 p. HARRIS , H. F. On the Rapid Conversion of Haematoxylin into Haematein in Staining Reactions. J. Appl. Microsc, v. 3, p. 777-780, 1900. PAPANICOLAOU, G. N. A New Procedure for Staining Vaginal Smear. Science, n. 95, p. 438-439, 1942.

Tcnicas Citolgicas | 213

Para saber mais:

JUNQUEIRA , C. U.; JUNQUEIRA , L. M. M. S. Tcnicas bsicas de citologia e histologia. So Paulo: Santos, 1983. 123 p. LOWE, J. Histotechnology Technical Methods: Stain for Air Dried Cytology Preparations. Disponvel em : http://www.nottingham.ac.uk/pathology/protocols/mgg.html. Acesso em: 20 jul. 2009. MICHALANY, J. Tcnica histolgica em anatomia patolgica. 3. ed. So Paulo: EPU, 1981. 295 p. OLIVEIRA, M. L. C. S.; MOTA, A. R. C.; VIERO, R. M. Citotecnologia manual de normas tcnicas. So Paulo: Faculdade de Medicina de Botucatu (Unesp), Laboratrio de Citologia, Departamento de Patologia, 2000. 24 p. PROPHET, E. B. et al. Laboratory Methods in Histotechnology. Washington, D.C.: Armed Forces Institute of Pathology, 1992 . 279 p. WOODS, A. E.; ELLIS, R. C. Laboratory Histopathology A Complete Reference. Nova York: Churchill Livingstone, 1994. v. 2.

214 | Conceitos e Mtodos para a Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade