Sunteți pe pagina 1din 10

NUCLEOTIDE SI ACIZI NUCLEICI Teme abordate 1. Baze azotate, nucleozide, nucleotide caracteristici structurale, funcii biologice 2.

. Acizi nucleici: tipuri, roluri biologice 3. Nucleoproteine 4. Metode moderne de studiu al aciyilor nucleici Baze azotate, nucleozide, nucleotide Izolate iniial de ctre anatomistul F. Miescher (1868) din puroiul extirpat chirurgical, nucleinele, denumite ulterior nucleoproteine, sunt heteroproteine alctuite dintr-o component proteic bazic i o grup prostetic cu coninut ridicat de acid fosforic, denumit acid nucleic. n funcie de acidul coninut, se deosebesc ribonucleoproteine, ce conin ARN (acid ribonucleic) i dezoxiribonucleoproteine ce conin ADN (acid dezoxiribonucleic). Importana deosebit a acizilor nucleici din nucleoproteine const n rolul fundamental de nmagazinare a informaiei genetice i de transcrierea acesteia n secvena de aminoacizi din structura proteinelor. Acizii nucleici sunt polinucleotide. Prin hidroliz acid, bazic sau enzimatic, acizii nucleici se degradeaz punnd n libertate urmtoarele componente comune sau diferite: a) baze azotate purinice sau pirimidinice; b) pentoze: D-riboz sau Ddezoxiriboz; c) resturi de acid fosforic. Baze azotate Bazele azotate din acizii nucleici deriv de la heterociclurile de baz ale purinei (baze purinice) i pirimidinei (baze pirimidinice).
N N N H PURINA PIRIMIDINA N N N

Au caracter bazic. Au proprietatea de a absorbi n UV la 260 nm (cea mai mare absorbie o au bazele purinice), pe baza intensitii absorbiei putnd identifica i doza spectrofotometric bazele azotate i compuii ce le conin. Bazele purinice sunt adenina i guanina (denumirea acesteia derivnd de la cuvntul guano excrementele unor psri), care se gsesc i n ADN i n ARN. Bazele pirimidinice sunt citozina, uracilul i timina. Citozina se gsete i n ADN i n ARN, uracilul n ARN, iar timina n ADN i baz minor n unele tipuri de ARN (tARN)
NH 2 O N N N H ADENINA H 2N HN N N H GUANINA N N

NH2 N O N H CITOZINA O HN

O HN N H URACIL O

O CH3 N H TIMINA

Baze minore. n afar de aceste baze azotate, considerate baze majore, n acizii nucleici se gsesc n proporie redus aproximativ 30 de baze minore, ntre care: pseudouracil, 5-metil-citozin, 5-hidroxi-uracil, 7-metil-guanin etc.
O NH2 O CH3 O HN N NH HN O N H OH O N

5-HIDROXIURACIL

N H 5-METILCITOZINA

PSEUDOURACIL

Nucleozide Nucleozidele sunt N-glicozide ale bazelor azotate cu o pentoz: D-riboza sau D-deoxiriboza, n forma . Nucleozidele din acizii nucleici sunt: adenozina, guanozina, citidina, uridina n ARN, respectiv deoxiadenozina, deoxiguanozina, deoxicitidina i deoxitimidina (timidina) n ADN.
NH2 NH2 N N HO-H2C H H OH OH ADENOZINA O H H H N HO-H2C H N N O H H N N
N CH3 N HOOC-CH-CH2-CH2-S-CH2 O + NH2 H H H OH OH S-ADENOZIL METIONNINA H N NH2

OH H DEOXIADENOZINA

Structura unor nucleozide Nucleozide libere. Pe lng nucleozidele ce intr n structura acizilor nucleici, unele ribonucleozide se gsesc i sub form liber, de exemplu S-adenozil metionina, important donor de grupe metil pentru procesele de metilare ce se desfoar n organism. Nucleotide Nucleotidele se formeaz prin legarea unui rest fosfat la grupa OH din poziia 3 sau 5 a pentozei. Datorit resturilor fosforice, nucleotidele au caracter acid. Nucleotidele din ARN sunt: acid adenilic (acid adenozin 5-monofosforic, AMP), acid guanilic (acid guanozin 5-monofosforic, GMP), acid citidilic (acid citidin 5-monofosforic, CMP), acid uridilic (acid uridin 5-monofosforic, UMP). Nucleotidele din ADN sunt: acid deoxiadenilic (acid deoxiadenozin 5-monofosforic, dAMP), acid deoxiguanilic (acid deoxiguanozin 5-monofosforic, dGMP), acid deoxicitidilic (acid deoxicitidin 5-monofosforic, dCMP), acidul timidilic (acid timidin 5monofosforic, dTMP).
NH2 N N H2O3PO-H2C O H H H OH OH H H OH H N H2O3PO-H2C H N N N O H H N NH2
N NH2 N N O H H H O OH O P O
ATP
O P O
-

NH2 N N O CH2 O H H O OH H H N N

N
-

O O

O-P-O-P-O-P-O-H2C - O- O O H

AM Pc

AMP

dAMP

Structura unor nucleotide Mononucleotidele ndeplinesc i alte roluri biologice pe lng acela de a fi componente structurale ale acizilor nucleici. a. Nucleotide ciclice. Prin legarea resturilor fosforice la dou grupe OH n poziiile 3 i 5 i deshidratarea acestora cu ciclizare rezult nucleotide ciclice libere. Cele mai importante sunt: acidul 3, 5- adenozin-monofosforic ciclic (3, 5 AMPc) i acidul 3,5 guanozinmonofosforic ciclic (3, 5 GMPc), importani mesageri secunzi ai hormonilor. 2

b. Intr n structura unor coenzime (coenzima A, FAD, NAD+), c. Funcioneaz ca i intermediari n metabolismul nucleotidelor purinice (IMPacidul inozilic, ce conine ca baz azotat hipoxantina), d. Particip la procese importante, de exemplu cele ce funcioneaz ca donori de grupe SO3H n procesele biochimice de sulfatare: de exemplu acidul 3-fosfoadenozin-5 fosfosulfuric (PAPS). e. Nucleozid polifosfaii sunt nucleotide rezultate prin ataarea a dou resturi fosfat (nucleozid difosfai), respectiv trei resturi fosfat (nucleozid trifosfai) la grupa OH din poziia 5 a pentozei. Nucleozid polifosfaii exist liberi ndeplinind n celule funcii biologice diferite: a) intermediari metabolici: inozin difosfat (IDP), inozin trifosfat (ITP); b) compui bogai n energie (compui macroergici): adenozin trifosfat (ATP), guanozin trifosfat (GTP), uridin trifosfat (UTP), citidin trifosfat (CTP); Prin legarea mononucleotidelor rezult oligonucleotide (care conin mai puin de 50 mononucleotide) sau polinucleotide. Acizii nucleici Acizii nucleici sunt polinucleotide n care mononucleotidele sunt unite prin legturi fosfodiesterice ntre grupa OH din poziia 3 a unei pentoze i grupa OH din 5 a pentozei din mononucleotidul urmtor. Legturile 3-5-3-5- nlnuie nucleotidele ntr-o secven liniar reprezentnd coloana vertebral a acizilor nucleici. Au caracter acid i sunt legai de proteine bazice i, rareori, neutre. Acizii nucleici se difereniaz prin: lungimea lanului; pentoza coninut; natura bazelor azotate i ordinea n care acestea se succed (Tabel 1). Tabel 1 Diferene ntre ADN i ARN ADN ARN Baze azotate A, G, T, C A, G, U, C Pentoza Deoxiriboza Riboza Catena Dublu catenar Monocatenar cu regiuni dublu catenare rezultate prin plierea n ac de pr sau sub form de trifoi G G C C Baze complementare
A T

Localizare Orientare Scriere convenional Hidroliz bazic

Nucleu (majoritar) 53 5pdB1pdB2pdB33 dB1dB2dB3 Nu

ARN ribozomal (ARNr) ribozomi ARN de transfer (ARNt) citoplasm ARN mesager (ARNm) citoplasm 53 5pB1pB2pB33 B1B2B3 Da

Structura acizilor nucleici Odat cu cercetrile lui O.Avery, C.Mc Leod i M.Mc Carthy (1943), care au demonstrat c ADN pur extras din pneumococii viruleni determin transformarea suei nevirulente n pneumococi viruleni, s-a stabilit c ADN este molecula ereditii, informaia genetic fiind nscris n secvena variabil a nucleotidelor din acizii nucleici. Dezvoltarea caracterelor morfologice i funcionale ale unei celule se realizeaz dup programul nscris n ADN. Acizii nucleici prezint o structur primar asemntoare (vezi figura).

Acidul dezoxiribonucleic este o biomacromolecul rezultat prin condensarea deoxiribonucleotidelor. Folosind metoda difraciei razelor X, R.Franklin i M.Wilkins au artat c ADN produce un model de difracie ce caracterizeaz o elice. Prin analiza cromatografic a ADN izolat de la mai multe specii, Chargraff a stabilit o relaie cantitativ ntre bazele azotate, concentraiile nucleotidelor cu adenin i timin, precum i cele ale nucleotidelor cu guanin i citozin, fiind egale: G = A 1 = C T Pe baza datelor existente, J. Watson i F.Crick, n 1953, au postulat structura tridimensional a ADN, modelul ADN dublu helix. Descoperirea structurii tridimensionale a ADN a fost un eveniment de rsunet n cercetarea tiinific care a deschis drumul dezvoltrii cercetrilor de biochimie, biologie celular, genetic.

Structura secundara a ADN modelul ADN dublu helix 4

Caracteristicile modelului structurii tridimensionale a ADN: Molecula de ADN are dou lanuri care se nfoar n direcii opuse, antiparalel, n jurul unui ax imaginar. Modelul poate fi comparat cu o scar n spiral n care unitile de deoxiriboz i fosfat sunt ndreptate spre exterior i reprezint balustradele, iar bazele azotate spre interior, constituind treptele, perpendiculare pe axul imaginar (vezi figura); ADN are uniti cu dimensiuni identice: diametrul helixului 20; distana ntre bazele adiacente - 3,4 ; pasul elicei (unitatea de structur helical) se repet dup aprox.10 resturi de nucleotide; bazele din cele dou catene se unesc prin legturi de hidrogen dup o anumit regul de complementaritate; Modelul propus de Watson i Crick furnizeaz elemente pentru explicarea capacitii ADN de a funciona ca molecul ce stocheaz i transmite informaia nscris n secvena de baze, prin autoreplicarea semiconservativ a ADN sintetizndu-se dou catene ce pstreaz caracteristicile ADN parental. ADN este o molecul flexibil, fiind posibil rotaia n jurul scheletului format din pentozele unite prin fosfat. Fluctuaiile termice pot determina ndoirea, ntinderea i desperecherea (melting) catenelor ceea ce permite apariia unor structuri diferite de cea propus de Watson i Crick, care mai este cunoscut i sub numele de forma ADN-B. Aceasta este forma cea mai stabil comparativ cu celelalte variante structurale descrise, formele ADN-A i ADN-Z (Tabel). Tabel Caracteristicile formelor structurale ale ADN Caracteristica Sensul elicei Diametrul elicei Perechi de baze /spir Lungimea fiecrei baze Rotaia bazelor Legtura glicozidic ADN A Spre dreapta 26 11 2,6 20o Anti ADN B Spre dreapta 20 10,5 3,4 6o Anti ADN Z Spre dreapta 18 12 3,7 7o Anti - pirimidine

(conformaie) Syn - purine Se presupune c forma Z intervine n reglarea expresiei unor gene sau n recombinarea genetic, n timp ce existena formei A n celule nu este confirmat. n structura ADN exist anumite secvene simetrice caracterizate prin ordinea invers a nucleotidelor (inverted repeats) pe cele dou catene complementare (palindroame) sau pe aceeai caten (secvene n oglind).

Secvene particulare din ADN (dup Nelson D.L. i Cox M.M., 2000)

Dimensiunea moleculei de ADN se exprim ca numr de perechi de baze coninute (de exemplu, cromozomul de la E.coli are 4,72 x 103 kpb). Catenele ADN pot fi liniare sau circulare (bacterii, bacteriofagi). Cromozomii singulari de la procariote sunt de fapt molecule de ADN circular, coninnd puine proteine. Cromozomii eucariotelor sunt reprezentai de molecule liniare de ADN care nconjoar un miez proteic format din patru tipuri diferite de histone: H1, H2A, H3, H4, asociate ntr-un octamer formnd nucleozomi.

Replicarea ADN determin pregtirea celulelor pentru diviziune. ntre dou diviziuni, celulele parcurg un ciclu celular constituit din dou faze: interfaza (cu perioadele G1, S, G2) i mitoza, diviziunea celular. Multe celule intr ntr-o perioad, G0, n care ies din G1, devin celule linitite care desfoar activitate specific. n cancer, celulele se divid haotic, ciclul celular fiind perturbat.

Transformrile neezimatice ale nucleotidelor. Mutaii. Bazele azotate din nucleotide i polinucleotide pot suferi diverse alterri structurale neezimatice: Dezaminarea bazelor azotate, n special a citozinei. Resturile de uracil rezultate din dezaminarea acesteia sunt reparate prin excizie; Hidroliza legturii N-glicozidice din nucleotidele purinice i, mai rar din cele pirimidinice, mai ales pentru ADN; Formarea dimerilor de timin sub aciunea radiaiilor UV i fragmentarea bazelor purinice sub aciunea radiaiilor ionizante (aproximativ 10% din mutaiile ADN); Dezaminarea provocat de diverse noxe industriale (nitrii, nitrai, nitrozamine, bisulfii); Alchilarea guaninei (cu dimetilnitrozamin); Degradarea ADN sub aciunea speciilor reactive ale oxigenului (radical superoxid, hidroxil, peroxid de hidrogen) este reprezentat de oxidri ale bazelor purinice, ruperea catenelor ADN (apare n stresul oxidativ, depirea capacitii organismului de a se opune aciunii acestor specii prin sistemele antioxidante enzimatice i neenzimatice de care dispune). Dei se produc cu viteze reduse, acestea au efecte nedorite asupra materialului genetic al celulei conducnd la apariia mutaiilor. Celulele sunt dotate cu diferite sisteme de a repara eventualele mutaii. Perpetuarea acestor alterri este responsabil de dezvoltarea unor celule anormale (n diferitele forme de cancer), de viteza cu care organismul mbtrnete. Acizii ribonucleici sunt biomacromolecule rezultate prin condensarea ribonucleotidelor i reprezint materialul genetic al unor virusuri mici (ribovirusuri: gripal, virusul mozaicului tutunului, HIV, hepatita C), n celelalte organisme intervin n transmiterea informaiei genetice.

Utilizarea informatiei genetice Acizii ribonucleici au un coninut n baze azotate ce nu respect relaia lui Chargraff, sunt, n general, monocatenari. La unele tipuri de ARN catena se poate plia fa de ea nsi, prezentnd regiuni dublu catenare ce expulzeaz n exterior zonele monocatenare sub forma unui ac de pr sau frunze de trifoi. 7

Cantitatea de ARN variaz de la o celul la alta i chiar n aceeai celul, n funcie de intensitatea proceselor de biosintez proteic la un anumit moment. Tipuri de ARN. Dup rolul ndeplinit n procesul de biosintez proteic, se deosebesc mai multe tipuri de ARN. ARNt (de transfer, solubil, ARNs) reprezint 515% din ARN total. Sunt molecule mici, de aproximativ 90 nucleotide, care leag specific fiecare din cei 20 de aminoacizi proteinogeni i i transport la locul sintezei proteice. Indiferent de tipul de ARNt, capetele 5 i 3 sunt identice. La captul 3 se leag aminoacizii. ARNt poate fi reprezentat asemntor unei frunze de trifoi. La captul buclei inferioare se gsete secvena anticodon, braul DHU (care conine n cantitate mare dihidrouracil) este implicat n legarea aminoacil-ARNt-sintetazei, iar prin braul TC (care are cantitate mare de timin, pseudouracil) se realizeaz legarea complexului aminoacil-ARNt la ribozomi. ARNm (mesager, informaional, ARNi) reprezint 2-4% din ARN celular. Sunt molecule monocatenare, liniare, de lungime variabil ce se sintetizeaz n nucleu pe matri ADN (prin transcriere), apoi iese n citoplasm unde va fi matria pentru sinteza unui polipeptid cu o secven specific de aminoacizi (prin translaie). Este heterogen ca mrime n funcie de lungimea polipeptidului pe care l codific. Are o via foarte scurt, la bacterii de 2-3 minute, iar la eucariote de cteva ore, fiind degradat de ribonucleaze. La procariote, ARNm conine informaia pentru sinteza unei singure proteine sau a mai multor polipeptide (frecvent trei lanuri) implicate n acelai proces metabolic.

Structura tridimensional a ARNt ARNr (ARN ribozomal) este reprezentat de molecule flexibile, heterogene ca form i mrime, ce se clasific n funcie de constanta de sedimentare. Sunt coninui n ribozomi, particule ribonucleoproteice descrise de G.E. Palade, cu constante de sedimentare diferite: 70S la procariote, 80S la eucariote. Ribozomii se pot disocia n dou subuniti de dimensiuni diferite: - la procariote: subunitatea mare 50S, subunitatea mic 30S; - la eucariote: subunitatea mare 60S, subunitatea mic 40S. Subunitile conin ARNr diferii: 18S n subunitatea mic, 28S, 5S, 8S n subunitatea mare de la eucariote. Ribozomii constituie sediul biosintezei proteice. H. Noller i colab. au dovedit prin studii recente participarea ARNr cu rol de catalizator n sinteza legturilor peptidice, reacia catalizat de peptidil transferaz necesitnd prezena unor subuniti ribozomale 50S lipsite de proteine, denumite ribozime. Acest tip de ARN satisface cteva caracteristici ale 8

enzimelor: are substrat specific, mrete viteza reaciei enzimatice i iese nemodificat din reacie. Recent a fost caracterizat un ARN nuclear de dimensiuni reduse (snARN) care se gsete mai ales n nucleul celulelor eucariote. Formeaz complexe stabile cu proteine specifice, denumite ribonucleoproteine nucleare mici. Au dimensiunea 10S, reprezint ntre 1-10% din ribozomi i au rol n prelucrarea ARN mesager matur exportat n citoplasma celulelor eucariote. Importana medical a analogilor de sintez ai bazelor azotate si nucleozidelor Unele medicamente, datorit asemnrii structurale cu bazele azotate sau nucleozidele, i bazeaz aciunea pe influenarea procesului di sintez a acizilor nucleici. Se cunosc baze de sintez folosite ca medicamente antitiroidiene (tiouracil, 5-metiltiouracil) sau ca antimetabolii n tratamentul unor neoplasme de sn, colon (5-fluor-uracil), leucemiei (6-mercapto-purina, 6-tio-guanina), gutei (alopurinol, analog structural al hipoxantinei, intermediar n metabolizarea bazelor purinice)
O SH N N N H N METILGUANINA
7

OH N N N N H ALLOPURINOL N

HN H2N

CH3

N N N H

6-MERCAPTOPURINA

Unele nucleozide de sintez au aciune antiviral sau antitumoral (azidotimidina (zidovudina), arabinozil citozina etc, fiind folosite n tratamentul infeciei cu HIV, al unor forme de cancer. Datorit caracterului acid al acizilor nucleici, acetia interacioneaz in vivo cu proteine cu caracter bazic formnd nucleoproteine. Interaciunea se realizeaz prin legturi ionice ntre grupele fosfat din acizii nucleici i grupele NH3+ ale aminoacizilor bazici din structura proteinelor. Proteinele din structura nucleoproteidelor se numesc protamine i histone. Protaminele se caracterizeaz prin urmtoarele: a) sunt proteine cu mas molecular mic ( Mr 5 kD); b) conin 3555% arginin, ceea ce le confer caracter bazic; c) nu conin aminoacizi aromatici i cu sulf; d) sunt legate de ADN din nucleu, raportul ADN/protein fiind specific pentru diferite specii; e) sunt rezistente la aciunea pepsinei, deoarece aceasta necesit aminoacizi aromatici pentru a-i exercita atacul. Histonele sunt prezente la toate animalele, absente la bacterii i au urmtoarele caracteristici: a) masa molecular cuprins ntre 8,422 kD; b) caracter bazic, datorat unui coninut crescut de lisin i arginin; c) sunt solubile n acizi, nedializabile i hidrolizeaz sub aciunea pepsinei; d) se gsesc n raport fix cu ADN nuclear (un mol histon la un segment de ADN de 25 perechi de baze azotate); n nucleoproteine, proporia acizilor nucleici este diferit.

10