TEMA 15: Fecundacin: Importancia de la sincronizacin. Maduracin del ovocito Regulacin de la traduccin.

Regulacin del transporte del ovocito hacia la ampolla y sus alteraciones. Transporte del espermatozoide. Capacitacin espermtica. Termotaxis. Quimiotaxis. Reaccin acrosoma. Interaccin espermatozoide- zona pelcida. Bloqueo de la poliespermia. Reprogramacin del material gentico, Huella gentica (imprinting). Marcadores genticos de viabilidad embrionaria.

INTRODUCCIN La fecundacin supone la unin de dos clulas haploides para la formacin de una clula diploide. Este proceso puede ser interno (en mamferos, en ampolla del oviducto) o externo (ej en animales acuticos). El ovocito, para que sea fecundado, se somete debe madrurar en su viaje a la ampolla del oviducto. El espermatozoide madura en el epiddimo y se capacita en el extremo distal del cuerno uterino (cerca del oviducto). A la regin de la ampolla del oviducto llegan pocos espermatozoides, es decir, que sufren un proceso de seleccin por el camino.

MADURACIN DEL OVOCITO Membrana vitelina. Zona pelcida espermatozoides y funciones protectoras. Regula la comunicacin entre el ovocito y las clulas del cumulus oophorus. Clulas de cumulus oophorus GAP y vellosidades para transportar vesculas. Adems tiene protenas (factor srico A medida que el ovocito madura, se produce la expansin de las clulas del cumulus (factor de expansin de las clulas del cumulus oophorus).

Prostaglandinas (regulan desplazamiento) Oxitocina: algunas especies. Regulacin de la maduracin del ovocito: Factor de crecimiento (algunas especies), ligando KIT, estrgenos/prostaglandinas.

Las clulas del cumulus liberan estrgenos, prog del oviducto, regulando el movimiento de sus cilios. Tambin generan factores de crecimiento que regulan la maduracin (como el ligando kit) del ovocito. El ovocito libera una serie de seales orientadas a atraer los espermatozoides por quimiotaxis, como el factor natriurtico atrial, la ANT ( Para favorecer el movimiento: ( se produzca de forma anticipada). Seales que atraen a los espermatozoides: como las prostaglandinas, factor nartiurtico atrial
1

Los espermatozoides tienen unos receptores similares a los olfativos que activan este proceso de atraccin. Las clulas del cumulus oophorus estn unidas entre s por madejas de cido hialurnico que, a su vez, se unen covalentemente a un factor que le da estabilidad (el factor srico inhibidor de la ca del espermatozoide se desarrolle antes de tiempo. Denominamos ovocito a la clula sin fecundar, en cambio el vulo es el ovocito fecundado durante 48 horas postfecundacin. Tras estas 48 horas se denomina embrin hasta los 30-40 das de fecundacin y, tras este periodo, feto (vara segn la especie). La maduracin del ovocito comprende un proceso de divisin (mitosis) y uno de diferenciacin (meiosis).

PROCESO DE MADURACIN DEL OVOCITO Durante la maduracin del ovocito se produce: maduracin citoplasmtica de la clula + maduracin nuclear celular + maduracin epigentica + expansin de las clulas del cumulus oophorus. Las clulas de cumulus oophorus se expanden, porque disminuye la protena estabilizante y aumentan las protenas de expansin. Tambin aumenta la LH y disminuye la formacin de conexinas (uniones GAP). 1. Maduracin Citoplasmtica: en el momento de la ovulacin se liberan seales del cumulus oophorus Se caracteriza porque aumenta el tamao del ovocito, grnulos corticales hacia la periferia y las mitocondrias pasan a una posicin central, cerca del ncleo (generan mucho ATP para la meiosis). Ncleo central Grnulos en periferia Mitocondrias centrales Otros: REL cerca del ncleo (acumula Ca2+), acmulo de glutatin en citoplasma,..

2. Maduracin nuclear Se produce la meiosis o mecanismo de alteracin del nmero de cromosomas de la clula. Alteraciones en la meiosis dan lugar a distintas patologas, como el Sndrome de Turner (alteracin en el nmero de cromosomas sexuales). 3. (=reprogramacin del material gentico)

Las clulas germinales no se encuentran en el feto, sino en la placenta, de donde viajan al feto liberando proteasas (capacidad migratoria) y dividindose hasta llegar a los conductos mesonfricos (esbozos gonadales), donde se dividen de nuevo un nmero determinado de veces (alrededor de 20, acortndose los telmeros). Una vez aqu se denominan ovogonias, en caso de hembra. En esta divisin, se corrigen alteraciones en el ADN por las protenas P53, P63 y P73.

Durante el viaje se dividen y programan estas clulas y una vez que llegan a los conductos mesonfricos, estos liberan inhibidores de las proteasas que detienen la migracin. Si la migracin no se realiza de forma correcta y las clulas germinales viajan a otras localidades, no se produce este efecto de inhibicin y existe riesgo de tumor. Durante la migracin se van dividiendo y programando y finalmente se convierten en espermiogonia o gametogonia. Lo hacen por la programacin gentica, es decir que hay genes que se expresan o no segn su grado de metilacin. En la reprogramacin: S otros. ocurre dos veces. embrin Esta reprogra fecundacin (cuando las clulas germinales viajan al ( (

Estas clulas se dividen un determinado nmero de veces, sobre todo en la hembra. Sufren un proceso de meiosis, nico en las clulas germinales. Es un mecanismo para transformar una clula diploide en haploide:

Meiosis en macho (izq) y en hembra (dcha). En la hembra, se liberan dos corpsculos polares correspondientes a la primera y segunda divisin respectivamente. La meiosis en el macho ocurre de forma continua, mientras que en la hembra es estacionada, es decir, hay paradas y reinicios. Estas paradas favorecen las alteraciones en el material gentico. Tanto en hembras como en machos hay meiosis I y II. Fases: Duplicacin del material gentico (mitosis, en el desarrollo embrionario) Meiosis I. Meiosis II.

En la hembra son dos fases asimtricas, se forman los corpsculos polares (formados por material gentico y escaso citoplasma) orientados a formar una clula con un gran citoplasma, por lo que tiene ms nutrientes para vivir mucho tiempo y generar el embrin. Un fallo en la liberacin de uno o de los dos corpsculos polares puede dar lugar a clulas triploides o tetraploides (con tres o cuatro dotaciones cromosmicas) el ovocito entra en apoptosis. Tetrapoide seria si no se liberan los dos corpsculos polares y es fecundado.

Si el corpsculo polar demasiado grande: Corpusculo polar que acapara demasiado citoplasma puede dejar al ovocito desprovisto del citoplasma necesario para sobrevivir.

Meiosis I a la izquierda y meiosis II a la derecha. La meiosis en la hembra es muy distinta a la meiosis en el macho. Diferencias en la meiosis en las hembras y los machos: 1. Inicio de la meiosis: en el desarrollo fetal en la hembra y en la pubertad en el macho (en la pubertad se inicia la sntesis de espermatozoides) Acido retinoico (Vit A activa): seal de inicio de la meiosis, generada por las clulas del mesonefros en la hembra fetal. Esta seal tambin es importante en el macho Clulas de Sertoli en el macho: producen proteasas que rompen el cido retinoico hasta llegar la pubertad. En la pubertad la FSH inhibe entonces estas proteasas inhibidoras (regulado por el reloj interno). 2. Caractersticas. En la hembra la meiosis es escalonada, es decir, que se frena y dura aos. Es LENTA. En los machos la meiosis es rpida y no se frena. 3. Las divisiones de la meiosis no son simtricas en la hembra mientras que s lo son en el macho. En el macho da lugar a 4 clulas haploides iguales, mientras que en la hembra solo se da una clula haploide y 2 corpsculos polares con los restos nucleares de la divisin. Hembra Inicio meiosis (ambos: importancia del cido retinoico) Caractersticas meiosis Divisiones Lenta, escalonada Rpida, escalonada no Desarrollo fetal Macho Pubertad

Asimtricas (1 + 2 corpsculos Simtricas (4) polares)

En la hembra las clulas germinales se dividen hasta 20 veces, acortando sus telmeros, antes de iniciar la meiosis: Se frena en profase I (meiosis I). Aqu se encuentra en el momento del nacimiento. Hasta la pubertad: se encuentra en periodo quiescente hasta el pico de LH (aumenta el AMPc y el Ca). Esta es la seal para la reanudacin de la meiosis hasta la fase de metafase II (meiosis II), donde se frena de nuevo. En la metafase II el ovocito es maduro, es decir, fecundable. La liberacin del primer corpsculo polar se produce en la ovulacin. En la fecundacin, la entrada del espermatozoide en la clula provoca un aumento intracelular de Ca2+, reiniciando de nuevo la meiosis y liberndose el segundo corpsculo polar.

Si no se libera el primer y segundo corpsculo polar, la clula resultara ser tetraploide y el ovocito entrara en apoptosis. poco avanzado de la meiosis y necesita ms maduracin.

INTERRUPTOR DE LA MEIOSIS La regulacin del inicio de la meiosis se debe a la actividad de fosfatasas y a los niveles de ciclina B. A de las hembras. ciclina B. A ( mientras que el calcio activa el sistema porque activa fosfatasas (Cdc 25). E La disponibilidad de ciclina B se encuentra regulada por: T NA Destruccin de ciclina B (separasa y otras proteasas...) A ( (

Localizacin: la ciclina B tiene que ser transportada al ncleo. Las protenas kinasas fosforilan, las fosfatasas defosforilan de forma que las kinasas permiten inactivar el sistema y las fosfatasas lo activan. El AMPc activa la PK-A, por lo que inhibe la meiosis. Este AMPc puede generarse dentro del ovocito o puede generarse en las clulas del cumulus oophorus, entrando en el ovocito por las uniones GAP. Algunas hormonas, como la LH, inducen la meiosis. A A ( que eliminan el AMPc), formando un metabolito inocuo y esteroles (que secuestran el AMPc). La LH, por tanto, provoca un aumento del calcio intracelular, activa fosfatasas que defosforilan y reactivan la meiosis.

A receptor (GPR3). La LH acta sobre las clulas del cumulus oophorus que liberan factores de crecimiento.

Si los niveles de calcio son muy elevados, se activa una ubiquitina que destruye la securina, se forma el complejo anafase-profase o Ciclosoma. Si sigue aumentando el calcio, se generan ubiquitinas y destruye la ciclina B y, por tanto, frena la meiosis.

Una vez que la clula inicia la meiosis, esta se completa o la clula muere por apoptosis, es un proceso irreversible. Al contrario que la mitosis (que tiene muchos puntos de control), la meiosis no los tiene, por lo que se producen muchas alteraciones (sobretodo en el proceso de entrecruzamiento. Una vez completa la meiosis, se recombina el pronucleo femenino (con la informacin gentica)

NOTA: los niveles bajos de LH provocan un aumento en AMPc y los niveles preovulatorios de LH producen un aumento de calcio. El calcio activa fosfatasas, disminuye y cierra las uniones GAP El calcio activa el complejo anafase profase ciclosoma APC/C P

Se reinicia la meiosis pero pronto se vuelve a parar po hermanas en la (meioisis II).

con el pronucleo masculino.

RECOMBINACION GENTICA En la meiosis se produce una replicacin del material gentico (se duplica) y luego se da el entrecruzamiento, intercambiando la informacin gentica del extremo distal de los cromosomas (regin pseudoautosmica). Proceso de recombinacin: Emparejamiento de homlogos: se comprueba la unin al huso acromtico, la tensin adecuada del mismo y la correcta orientacin de los cromosomas. Este paso falla en 1% de los individuos (en peditricos, en mujeres > 33 aos,..) Cohesinas: unen ambos cromosomas por la regin pseudoautosmica. Estn muy desprotegidas en determinadas zonas y protegidas en otras. La
6

separasa rompe las cohesinas y favorece el proceso de la meiosis. Existe en gran concentracin en la regin de los centrmeros (regin central). Las separasas estn inhibidas por la securina, pero si la separasa est muy activa, podra afectar a las cohesinas cercanas al centrmero y propiciar el entrecruzamiento de genes que no deben entrecruzarse, dando lugar a alteraciones (ej trisomas). Se produce un aumento en los niveles de calcio. Se activa el complejo anafase profase ciclosoma (A A destruccin de la securina (que a su vez inhibe ( ( segurina) se activa ( ( detecta alteraciones.

Alteraciones debidas a disfuncin de la separasa: debido a la no actuacin de la separasa. No se separan las cromtidas homlogas actuacin antes de tiempo. No se lleva a cabo separaciones adecuadas de los cromosomas.

En ambos casos, se trata de alteraciones significativas de la meiosis. Alteraciones frecuentes de la meiosis: 1. Reversin del sexo. Ej XX que se desarrolla como macho. - Uno de los X tiene el gen SRY que determina el sexo masculino. Normalmente se encuentra en el gen Y, cerca del centrmero (no se realiza el entrecruzamiento habitualmente). - Si pasa al cromosoma X, es porque se ha producido el entrecruzamiento en regiones no pseudoautosmicas - Es relativamente frecuente en humanos. Sin embargo, es poco frecuente en animales. 2. Aneuploida: variacin en el nmero de cromosomas de un individuo. - Si es el cromosoma sexual: el individuo sobrevive, con alteraciones. Se puede producir monosoma del cromosoma sexual. Ej Sndrome de Turner en humanos (X-), imagen derecha arriba. - Trisomas. Ej XXY o Sndrome de Klinefelter. Se trata de hombres con ginecomastia, testculos pequeos, sin barba, vello pubiano disminuido o siguiendo un claro patrn femenino, problemas reproductivos, reducida Otro ejemplo es el sndrome de down

(trisoma en cromosoma 21) - Nulisoma: falta de un par de cromosomas. Incompatible con la vida. 3. Traslocacin Robertsoniana: variaciones en el nmero de cromosomas que surgen por unin de dos cromosomas. Ej Vaca tiene 60 cromosomas. A veces se ven vacas con aparentemente 59 cromosomas. Esto es debido a la unin de los centrmeros de los cromosomas 1 y 29 (alteraciones en securina o separasa). 10% de abortos.

CARACTERSTICAS DEL OVOCITO MADURO La clula aumenta de tamao y se produce un proceso de expansin de las clulas del cumulus oophorus porque en la ovulacin aumenta la LH y disminuyen las uniones GAP entre las clulas del cumulus. expansin del cumulus oophorus y disminuye la secrecin del cido hialurnico, lo que tambin favorece la expansin. El ncleo pasa de una posicin perifrica en la clula a una central. Las mitocondrias que estn en la periferia se desplazan hacia el centro, donde est el ncleo, a travs de los microtbulos. Esto se debe a que las mitocondrias generan mucho ATP y Ca necesarios para desensamblar el ncleo de la clula, importante para la fecundacin. Los grnulos corticales distribuidos por toda la clula, se desplazan a la periferia. El ovocito est maduro al entrar en metafase II. La maduracin citoplasmtica hace referencia a los cambios de las mitocondrias y los grnulos corticales. El ovocito durante su maduracin, necesita unas protenas determinadas en un momento determinado de manera rpida. Se necesitan de un modo tan rpido que el propio ovocito es incapaz de sintetizarlas y, para ello, sintetiza mucho RNAm que almacena mucho tiempo, de forma que al necesitar una protena determinada, traduce el RNAm (no necesita transcribirlo) y obtiene esas protenas de forma rpida.

El ovocito envejecido: Se deterioran receptores ZP. (no conviene que el ovocito envejecido sea fecundado) Disminuyen seales de supervivencia como la Bcl-2. Se reduce el contenido de ATP ya que se daa la membrana mitocondrial. No funcionan bombas que dependen del ATP, los nivel (

Disminuyen los niveles de MPF (Maturation-promoting factor) El huso de meiosis presenta alteraciones. Pero como el calcio es tan elevado se activa el APC/C (Anaphase-promoting complex) gentico (cromosomas o cromtidas que no se han separado adecuadamente migran hacia uno de los polos y acaban en una de las clulas hijas, mientras que la otra clula se queda sin ese material gentico).

REGULACIN DE LA TRADUCCIN EN EL OVOCITO va a depender de la traduccin del mRNA que tiene almacenado. El factor de inicio de la traduccin eIF4E ( N otros factores de inicio de la traduccin eIF4G etc en un orden determinado y se unen a la protena de unin a la cola poli A (Poli A Binding Protein, PABP). NA ( La longitud de la cola poli A se encuentra directamente relacionada con la vida media NA ( A Regulacin de la traduccin La protena de unin (4E-BP) cuando Esta poco fosforilada se une al factor de inicio de la traduccin eIF4E e impide la unin de otros factores de inicio de la traduccin y esta no se produce. Sin embargo cuando esta muy fosforilada no se une al factor de inicio de la traduccin y esta se desarrolla sin problemas. La protena FRAP/mTOR es mantenida inactiva por la Rapamicina. La Rapamicina se emplea de forma experimental en procesos oncolgicos ya que inhibe la traduccin, bloquea el ciclo en la fase G1 y lo que podra provocar la muerte de las clulas tumorales, inhibe la angiognesis.... NA ( ( A (CPE). A esta secuencia se une la p ( fsicamente al mRNA ( de tal forma que no es reconocido por los factores de inicio de la traduccin). La primera en estudiarse fue Maskin ( en ovocitos de xenopus); c-Mos, tPA ms frecuentes en mamferos. Cuando CPEB se activa (fosforilado por una protena, quinasa Aurora A). Recluta y activa una poli A polimerasa que Alarga la cola poliA, luego se une la protena de unin a la cola poli A y esta retira a maskin y facilita la unin de factores de inicio de la traduccin. Se produce la traduccin. La presencia o ausencia de CPE determina su mRNA se almacena o se traduce.
9

NA A

TRANSPORTE DE LOS GAMETOS A LA AMPOLLA DUCTAL En esta ampolla se da la fecundacin y es importante que est sincronizada la llegada de ovocitos y espermatozoides.

EL OVOCITO El ovocito slo es fecundable 12 horas, despus se da el proceso de endurecimiento de la zona pelcida, en el que los receptores para los espermatozoides se daan (receptores ZP), se altera la funcin de las mitocondrias y disminuyen los niveles de ATP, disminuyen los niveles de protenas de supervivencia (bcl-2) aumentan los niveles de radicales libres, aumenta el Ca intracelular, disminuye el factor promotor de la meiosis (MPF y ciclina B), se sintetizan las protenas de muerte celular y comienza la apoptosis. adrenrgicos, receptores para la oxitocina (que se libera en el coito), y receptores para la LH, ya que el ovocito no tiene flagelo. El pico de la LH dilata el infundbulo (aumenta la irrigacin) de manera que se disminuye el riesgo de cada a cavidad peritoneal. Los roedores tienen un abolsa periovarica. El transporte del ovocito depende de varios factores: Vasodilatacin vasos del infundbulo abrazan el ovario para que el ovocito entre directamente en el oviducto. . El oviducto tiene receptores para: o LH. o Oxitocina: aumentan en el coito. o o Receptores adrenrgicos la oxitocina. Movimiento de clulas ciliadas del oviducto: el ovocito dirige el movimiento de los cilios mediante la liberacin de: o o Progesterona: movimiento hacia el ovario

maduracin del ovocito se liberan diferentes hormonas (estrgenos/progesterona) para llegar a la ampolla en el momento adecuado. Ej si est inmaduro, se libera ms progesterona y si est maduro, ms estrgenos. El ovocito se debe adherir a los cilios durante un milisegundo. En aquellos ovocitos con alteracio ms tarde a la ampolla. De forma que llegan cuando empiezan a degenerarse. Para movilizar el ovocito las clulas del cumulus se adhieren a los cilios del ovocito unos segundos. La nicotina (mujeres fumadoras) o el sndrome de los cilios inmviles (animales o personas mayores) producen una disminucin del movimiento de los cilios y se dificulta la sincronizacin. Como el ovocito no llega a la ampolla a tiempo, se dificulta la fecundacin pero si es fecundado, hay un mayor riesgo de alteraciones en la separacin de cromosomas (provocando una alteracin en el nmero de cromosomas del feto).

10

LOS ESPERMATOZOIDES El desplazamiento del espermatozoide depende de muchos factores (volumen de eyaculado, lugar donde se deposita el eyaculado que suele ser vagina en RU y roedores, o cerca del conducto cervical en cerdos y caballos). Los espermatozoides suelen avanzar unos 100 cm/h y, segn la longitud del tracto genital, tardarn ms o menos en llegar. Muchos espermatozoides se pierden por reflujo por la vagina. En la vagina el pH es muy cido (proteccin frente bacterias), el plasma seminal por el contrario tiene un pH bsico, de esa forma los espermatozoides adquieren ms movilidad. En la mayora de especies, la ltima fraccin del eyaculado se coagula formando un tapn vaginal, que luego se licua. Esto es debido a la seminogelina. En casos especiales, forma un tapn que evita la prdida de espermatozoides, por reflujo de la vagina, interfiere en la monta de un segundo macho... Este fenmeno se da mucho en roedores o en serpientes, primates, verracos... Por lo tanto, dos formas de proteccin del semen frente al reflujo vaginal son: Formacin del tapn seminal, tpico de roedores. Interfiere con una posible monta de un segundo macho. Coagulacin del eyaculado por altos niveles de seminogelina. Al cabo de 30 minutos, se lica de nuevo.

Existe un fenmeno llamado guerra espermtica, que se da en especies donde la hembra es cubierta por varios machos (especies promiscuas). Los espermatozoides de estos machos compiten entre s. As, en un mismo eyaculado hay varias poblaciones de espermatozoides: Espermatozoides kamicaze. Son espermatozoides rezagados del resto. Forman una red impenetrable para evitar la entrada de espermatozoides de un segundo macho. Esta accin la realizan creando una red fsica en el conducto cervical (ej roedores) y liberando enzimas que destruyen los espermatozoides del segundo macho. Adems en su acrosoma tienen ms de 20 enzimas que se liberan al paso de otros espermatozoides para daarlos. Llevan el ligando Fas, actuando sobre los que tienen el receptor Fas (que tambin estn alterados). Espermatozoides frtiles

Cooperativita espermtica: entre los espermatozoides de un mismo macho, por ejemplo mediante uni de sus cabezas que permite la natacin ms rpida. Posteriormente, se liberan uno o dos que se dirigen a fecundar al ovocito. En los roedores se produce este fenmenos. Las cabezas de los espermatozoides se Imagen de la derecha: tipos de espermatozoides. Espermatozoides con receptor fas, espermatozoides con ligando fas, espermatozoides con ambos y espermatozoides con ninguno.

En el macho alfa hay una gran concentracin de espermatozoides kamikaze y gran cantidad de espermatozoides frtiles (sin ligando fas o receptor fas, el ltimo de la imagen). Estrategias, en especies polgamas (modificaciones en forma y nmero de espermatozoides,y modificaciones en plasma seminal)

11

Producir muchos espermatozoides: aumenta la probabilidad de fecundar. : en rumiantes. Retira el tapn cervical del macho de la anterior monta. Roedores: el macho detecta por el olfato si previamente la evita la llegada de otros machos. Feromonas impregnadas sobre la hembra repelen a otros machos. Secuestro de la hembra en periodos cercanos a la ovulacin. ovulacin. No hay guerra espermtica. La perra tiene celos muy largos y es montada por muchos machos. Tiene cachorros de distintos padres en una misma camada. Otras estrategias: alto contenido de detergente (disuelve el tapn cervical), modificaciones en el plasma seminal o Aumento de elementos antioxidantes: aumenta la viabilidad del espermatozoide (ej superxido dismutasa) o Aumento del volumen del plasma seminal Rumiantes: aumento del tamao del testculo. Relacionado con nmero de espermatozoides. Peleas entre machos: el macho dominante (macho alfa), provoca estrs en los subordinados. Especies promiscuas: espermatozoides muy veloces (con cola de gran longitud y la cabeza ms pequea) Especies mongamas: cabeza de mayor tamao y cola ms pequea. No se producen los fenmenos de guerra espermtica.

alelo (alelo 334), de forma que el receptor de la vasopresina se expresa menos. El conducto cervical tiene muchas funciones, como la de filtro y la de seleccin de espermatozoides. En este conducto hay muchas clulas del SI que destruyen los espermatozoides (especialmente los que tienen anticuerpos adheridos). En el plasma seminal, hay sustancias inmunosupresoras que favorecen la supervivencia de los espermatozoides frente al SI de la hembra. En plasma seminal congelado se quitan parte de los elementos inmunosupresores y por eso hay ms metritis, ya que el sistema inmune est ms activo.

CONDUCTO CERVICAL Cuando la eyaculacin se realiza en vagina, los espermatozoides deben ascender por el conducto cervical. El pH de la vagina es muy cido para protegerlo frente a bacterias. No obstante, el plasma seminal es muy bsico y protege a los espermatozoides en su ascenso. Los espermatozoides tambin pueden ser eliminados por el ligando fas, presente en el conducto cervical (los espermatozoides tienen muchos receptores fas). El conducto cervical se dilata por estrgenos y se contrae por la progesterona (si est gestante, as se produce la proteccin del feto). Funciones del conducto cervical: 1. Funcin de filtro. Deja pasar espermatozoides perno el plasma seminal. 2. Funcin de reservorio de los espermatozoides. 3. El conducto cervical tiene un papel en la seleccin de espermatozoides.

12

FUNCIN DE FILTRO

Bajo la influencia de los estrgenos, el moco cervical forma haces paralelos, como pasillos que ayudan al paso de los espermatozoides. El pH es ms cido, lo que provoca que los grupos carboxiterminal se repelan. Con la progesterona, el pH es ms bsico, y los grupos carboxi-terminal del muchos pierden su carga negativa. De esta forma no se repelen y los filamentos de mucus forman un entramado impenetrable, de forma que se produce el cierre del crvix.
NOTA: en la mujer se produce el Sndrome del Crvix Impenetrable.

Cambios en la disposicin de las fibras del mucus cervical: Fase lutenica: madeja impenetrable para espermatozoides y moco ms denso. El COOH no pierde al H, queda neutro y las fibras del mucus no se repelen Fase de celo: fibras paralelas. El grupo COOH de las fibras del mucus pierde un H y queda como COO-, de forma que las fibras se repelen y quedan paralelas.

FUNCION DE RESERVORIO La forma ms segura de que el ovocito y los espermatozoides se encuentren en la ampolla en el momento adecuado, es a travs de un flujo constante de espermatozoides. Los espermatozoides que nadan ms rpido no son los que fecundan al ovocito ya que cuando llegan a la ampolla el ovocito puede no estar preparado (llegan muy pronto). Por lo tanto, el crvix hace una funcin de reservorio, de manera que los espermatozoides pueden permanecer mucho tiempo en las criptas del crvix. Algunas especies han desarrollado este mecanismo, como los pequeos rumiantes. En estos animales hay muchas criptas en el conducto cervical, donde se acumulan los espermatozoides que despus se liberan poco a poco hacia la cavidad uterina. En las criptas tienen mucho K+ y glicina. La garanta de un flujo constante de espermatozoides durante varios das aumenta las probabilidades de fecundacin. Para que esto ocurra, el conducto cervical ha desarrollado la capacidad de secrecin de dos tipos de mucus: Uno ms denso y viscoso en la zona central formado por sulfomicinas. Uno menos denso en la periferia formado por sialomicinas.

Esto posibilita que los espermatozoides naden por la periferia, menos densa, facilitando su entrada en las criptas del crvix.

13

Los espermatozoides se desplazan a lo largo del tero y, segn su movimiento y las contracciones uterinas, llegan al extremo distal del cuerno uterino, donde se capacitan. PAPEL EN LA SELECCIN DE ESPERMATOZOIDES El conducto cervical libera mucho ligando fas. Si existen anomalas en el material gentico de los espermatozoides, presentan receptores fas en su superficie y esto posibilita su eliminacin. Por lo tanto, esto supone una seleccin de anomalas genticas (activacin de la apoptosis). Adems, muchos espermatozoides son tambin eliminados por el sistema inmunolgico.

NOTA: las tcnicas de reproduccin asistida no tienen este filtro. Se piensa en hacer columnas con ligando fas y hacer pasar a los espermatozoides por estas columnas de manera que se realiza una seleccin similar a la que se produce de forma natural en el crvix.

CAPACITACIN ESPERMTICA En el epiddimo se produce la maduracin espermtica. La capacitacin se produce sobre todo en el extremo distal de los cuernos uterinos, si bien se produce en todo el ascenso del tracto genital femenino, inicindose en el conducto cervical con la retirada del plasma seminal. La capacitacin es un proceso que dura alrededor de 6 horas. Caractersticas de este proceso: Es un proceso de seleccin espermtica. No depende de la especie (los espermatozoides de todas las especies deben capacitarse de igual manera) Es reversible No todos los espermatozoides se pueden capacitar: necesidad de interaccin entre espermatozoides (con lecitinas) y cuerpo uterino. Si los espermatozoides no tienen lecitina, no se pueden capacitar (los que estn entrando en apoptosis, los que tienen malformaciones,..).

NOTA. En tcnicas de reproduccin asistida (fecundacin in vitro) los espermatozoides no se capacitan correctamente y, por eso, hay muchas muertes embrionarias.

El resultado: aumento del AMPc en el espermatozoide, lo que les lleva a la hiperactividad.

El espermatozoide no capacitado est rodeado de muchas protenas que, generalmente, proceden del plasma seminal (prstata, glndulas anejas...) que, al capacitarse, desaparecen. Estas protenas protegen el acrosoma y se unen al flagelo para que no se mueva y el espermatozoide pierda energa.

Estas protenas se sitan sobre los receptores frente al ovocito protegindolos sin activarlos. Muchos receptores estn en la cola o en la regin posterior de la cabeza. Al capacitarse, los
14

receptores se desplazan a la regin apical de la cabeza del espermatozoide para interactuar con el ovocito, ya que, al capacitarse, aumenta la fluidez de la membrana y los receptores se desplazan. Los espermatozoides llevan calmodulina adherida que secuestra parte del Ca. Las protenas adheridas se desprenden porque en la ovulacin el pH del oviducto se acidifica ligeramente y esto facilita su desprendimiento. En la capacitacin, se liberan del oviducto compuestos similares al colesterol (lipoprotenas de alta densidad), de forma que el colesterol de la membrana espermtica se libera y se une a ellos, permitiendo el desplazamiento de los receptores (mayor fluidez de membrana). Tambin aumentan los fosfolpidos insaturados de la membrana, que aumentan la fluidez de la membrana, ya que se pierde Zn. El Zn inhiba la fosfolipasa A2 de membrana, que rompe los fosfolpidos y aumenta la fluidez de la membrana, por lo que al disminuir el Zn se activa la fosfolipasa y aumenta la fluidez, permitiendo el movimiento de los receptores. Cuando la membrana es rgida: fosfolpidos saturados y mucho colesterol. A 20C el colesterol es muy rgido, es decir, que hay una prdida de fluidez. (NOTA: en congelacin el colesterol fluidifica la membrana). Con la membrana fluida: fosfolpidos insaturados y prdida de colesterol. Se produce la prdida de Zn que activa la fosfolipasa y la prdida de colesterol.

Procesos de la capacitacin: 1. Prdida de Zn activacin de FLA2 aumento de fosfolpidos insaturados de membrana mayor fluidez de membrana 2. Desprendimiento de protenas A protenas que interfieren con el flagelo e impiden que se mueva (ahorro de energa), protege el acrosoma y los receptores, adems dificulta que el espermatozoide incorpore material gentico exgeno. El desprendimiento se produce por cambios de pH en cuerno uterino. 3. Aceptores de colesterol en el cuerno uterino. Se retira el colesterol de la membrana de los espermatozoides, aumentando su fluidez 4. Receptores espermticos se movilizan hacia la zona apical gracias a la fluidez de membrana. Van a permitir la interaccin con el ovocito. 5. Aumento de la motilidad espermtica. El espermatozoide adquiere as un movimiento rectilneo. Debido a: a. Aumento de AMPc intracelular b. Aumento del Ca2+ intracelular. Tras la capacitacin, los espermatozoides tienen ms movilidad al no tener estas protenas adheridas. En la capacitacin aumentan los niveles intracelulares de Ca porque se activan bombas de Ca, que introducen Ca, y se inhiben las bombas de salida de Ca. Tambin se sintetizan muchos inositoles. ro. Cuando se capacita, es sensible a las seales del ovocito, por lo que los que no se capacitan no las reciben.

15

Seales responsables de la capacitacin: HCO3Progesterona Factores de crecimiento. Ej EGF

En este momento, el espermatozoide est preparado para la reaccin acrosmica.

PROCESOS QUE ATRAEN LOS ESPERMATOZOIDES AL OVOCITO Una vez capacitados los espermatozoides son atrados por: : se producen diferencias de temperatura entre el extremo distal del cuerno uterino (tiene ms agua) y el proximal. Cerca de la ovulacin aumenta 1C en el ovario. Los espermatozoides tienen tendencia a dirigirse a las zonas con mayor temperatura. 2. Seales del ovocito. Proceso de quimiotaxis. - El espermatozoide tiene receptores para progesterona. Esta hormona es importante tanto en la capacitacin como en la atraccin espermtica. Es producida por clulas del cumulus oophorus y acta a largas distancias. - Factor natriurtico atrial (ANF) - Protena RANTES. 1. Estas seales van actuando a distin secuencial de seales, que acta sobre los espermatozoides capacitados, y que dura unas 4 horas tras la ovulacin. Despus, el ovocito deja de liberar estas seales. Estos factores actan a diferentes distancias (la progesterona atrae al espermatozoide de lejos, posteriormente acta el ANF y cuando est ms cerca acta el RANTES). El espermatozoide debera ir sintetizando los receptores por orden, pero como no tiene espacio, lleva todos los receptores incorporados al mismo tiempo. Los espermatozoides tambin tiene receptores similares a los olfativos, que podran estar implicados en la quimiotaxis
raciones en el

NOT : desarrollo embrionario.

FECUNDACIN El espermatozoide tiene que atravesar el cido hialurnico que une las clulas del cmulos oophorus. Para ello, tiene receptores y ms de 20 enzimas en la regin apical: Receptores con actividad hialuronidasa. El espermatozoide libera pequeas cantidades de hialuronidasa (contenida en el acrosoma, junto con otras como la acrosina, hay hasta 20). El espermatozoide capacitado es sensible a las seales del ovocito y su membrana es fluida, lo que permite liberacin de pequeas cantidades de hialuronidasa. El espermatozoide presenta enzimas secuestradas en su pared, que tambin tienen actividad hialuronidasa. Estos son receptores con actividad hialuronidasa. Para tener esta actividad, tienen que estar capacitados, porque si no, los receptores estn recubiertos por protenas. El espermatozoide tambin tiene , que producen un aumento en la motilidad del espermatozoide. Se crea un feed back+ (> hialuronidasa, > acido hia

16

Una vez el espermatozoide llega al ovocito, interacta con sus receptores. Los receptores de la zona pelcida son el ZP2, el ZP3 (unidos por el ZP1: 1. UNION PRIMARIA (unin con ZP3). Primero interacta el ZP3, que es especfico de especie (un ovocito slo puede ser fecundado por espermatozoides de la misma especie, por lo que esta unin es muy especfica). El ZP3 evoluciona rpidamente en la escala evolutiva (por lo q diferentes). El espermatozoides tienen muchos receptores para interaccionar con el ZP3 ((este hecho sugiere que esta unin es muy importante). La interaccin con este receptor aumenta el Ca2+ intracelular (ruta IP y DAG), lo que provoca la reaccin acrosmica: a. Rotura de Mb externa del acrosoma b. Cambio en el pH en el interior de la clula, provocando la activacin de ciertas enzimas c. Activacin y sntesis de enzimas fusognicas d. Liberacin de enzimas. La ms importante es la acrosina, encargada de digerir la zona pelcida. Es un proceso muy bien regulado. 2. Unin con el receptor ZP2. Despus de la reaccin receptores ocultos por el acrosoma, enton El espermatozoide atraviesa la zona pelcida e interacciona con la membrana vitelina. El e a interaccionar con la membrana vitelina, para que ocurra tiene que producirse la reaccin de la cola, porque el espermatozoide pierde la movilidad. ADHESION: Adhesin del espermatozoides a la membrana vitelina. fertilina que acta sobre la integrina del ovocito.

FUSION: A oscilina , que activa el oocito produciendo la liberacin pulstil de Ca 2+ en el interior del ovocito. Estos pulsos tienen una duracin variable (2-30 minutos), en funcin de la especie. Produce la liberacin de los grnulos corticales de la periferia del ovocito, que contienen ZP3 proteasas, bloqueando la posible entrada de un nuevo espermatozoide (bloqueo de la poliespermia). Estas ondas de Ca++ inducen tmb la activacin del ovocito (va activacin de PLC) que termina con la formacin

17

CaMK: calmodulina kinasa; CaM: calmodulina; MPF: factor promotor de la maduracin; Src-k: kinasa de la familia Src En caso de producirse la poliespermia, el excesivo acmulo de material gentico hace entrar en apoptosis al ovocito. Se inicia la descondensacin del material gentico del espermatozoide (en este proceso es importante el glutatin del ovocito que rompe los puentes disulfuro de la condensacin), se libera de las protaminas y se condensa de nuevo en histonas (formacin de puentes disulfuro, importancia tmb del glutatin del ovocito). El proceso de la descondensacin del DNA se produce en 30 minutos aproximadamente. Si no es as, se produce la muerte embrionaria precoz (descompensacin del proceso). Se produce la ubiquitinizacin (=destruccin) de las mitocondrias del espermatozoide. Tienen muchas alteraciones ya que han trabajado mucho. A El espermatozoide puede penetrar entero o slo la cabeza, pero las mitocondrias siempre son destruidas por la ubiquitina.

REPROGRAMACIN DEL MATERIAL GENTICO ro queda silenciado (metilado). ( la especie. Es un mecanismo de interaccin entre el material gentico de la madre y del padre.

El ovocito intenta metilar el gen que codifica para el IGF2 pa Sin embargo, el esp A N (A N procede de virus, bacterias y tracto genital de la hembra. La zona pelcida puede actuar como filtro pero parte sigue quedando adherido al espermatozoide. Este material gentico inter NA NA NA ( A N T A N ito, formando dos cadenas y entonces no se traduce. El ovocito tiene varios mecanismos:
18

Protena DICER: rompe al ARN interferente, que aun puede seguir actuando. Es una ribonucleasa que se encuentra en el citoplasma celular. Clulas germinales se reprograman en su viaje en espermatogonias (XY) u ovogonias (XX) Perturbadores endocrinos: interfieren en la reprogramacin y desmetilacin Fetos de gran tamao: debido a la hipometilacin. Muchos genes de crecimiento se ( T En pacientes oligoespermicos el material gentico suele estar hipometilado.

Repaso:

Causas del aborto: 1. Alteraciones en la migracin de clulas germinales. Si no llegan al rion, se producen ( 2. Exceso de informacin gentica. Ej no liberacin del corpsculo polar, alteracin en el bloqueo de la poliespermia 3. Liberacin del corpsculo polar con mucho citoplasma. No se produce la supervivencia del ovocito. 4. Alteraciones en el entrecruzamiento o en el nmero de cromosomas. 5. Alteraciones en la descondensacin del material gentico 6. Se debe producir la traduccin en el momento determinado (cadena de poli A). 7. Sincronizacin no vlida de la fecundacin (tanto del ovocito como del espermatozoide). 8. Procesos de seleccin cervical no adecuados. 9. Alteracin de la reprogramacin gentica (metilacin/desmetilacin)

19