Par te I

Bactrias

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TAXONOMIA BACTERIANA
Todos os organismos tm um nome composto por duas partes: o gnero seguido pelo epteto especfico (i.e, Homo sapiens). As bactrias foram inicialmente agrupadas e nomeadas com base em suas diferenas morfolgicas e bioqumicas/metablicas. Contudo, as bactrias so tambm classificadas agora de acordo com suas caractersticas genticas e imunolgicas. Este captulo tem como foco a colorao de Gram, a morfologia bacteriana e as caractersticas metablicas, que permitem ao clnico determinar com rapidez o organismo que est causando a infeco no paciente.
Dissacardeo

O O c aa aa aa aa CH3

COLORAO DE GRAM
Como as bactrias so incolores e normalmente invisveis microscopia ptica, foram desenvolvidas coloraes de forma a auxiliar sua visualizao. A mais til delas a colorao de Gram, que separa os organismos em dois grupos: micro-organismos gram-positivos e micro-organismos gramnegativos. Essa colorao tambm permite ao clnico determinar se o organismo tem forma redonda ou de bastonete. Para qualquer colorao, deve-se inicialmente espalhar a amostra a ser corada (escarro, pus, etc.) em uma lmina e aquec-la para nela fixar as bactrias. Existem quatro etapas a serem seguidas na colorao de Gram: 1. Verta o corante cristal de violeta (um corante azulado) e aguarde 60 segundos. 2. Lave com gua e cubra com uma soluo de iodo. Aguarde 60 segundos. 3. Lave com gua e ento descore com lcool 95%. 4. Finalmente, faa a contracolorao com safranina (um corante vermelho). Aguarde 30 segundos e lave com gua. Quando a lmina estudada microscopicamente, as clulas que absorvem o cristal de violeta e o mantm iro aparecer azuis. Esses organismos so denominados gram-positivos. Porm, se o cristal de violeta lavado com o lcool, essas clulas iro absorver a safranina e aparecero vermelhas. Esses organismos so denominados gram-negativos. Gram-positivo = AZUL O cu est positivamente AZUL hoje!! Gram-negativo = VERMELHO No (negativo) aos comunistas VERMELHOS!!

Aminocidos

FIGURA 11

As diferentes coloraes so resultado de diferenas nas paredes celulares das bactrias gram-positivas e gram-negativas. Tanto os organismos gram-positivos quanto os gram-negativos tm mais de uma camada protegendo o citoplasma e o ncleo* do ambiente extracelular, ao contrrio das clulas animais, que possuem apenas uma nica membrana citoplasmtica composta de uma bicamada fosfolipdica. A camada logo aps a membrana citoplasmtica a camada de peptidoglicano ou parede celular. Ela est presente tanto nos organismos gram-positivos quanto nos gram-negativos.
Fig. 1-1

A camada de peptidoglicano ou parede celular composta de dissacardeos repetidos com quatro aminocidos em uma cadeia lateral que se estende de cada dissacardeo.

* As bactrias no tm um ncleo verdadeiro, circundado por membrana nuclear. O material gentico fica localizado em uma regio do citoplasma denominada nucleoide ou rea nuclear.

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Mark Gladwin & Bill Trattler

Dissacardeos

Ligao das cadeias de aminocidos

FIGURA 12

va muito fina, com um padro bastante simples de ligaes cruzadas.

Fig. 1-4

FIGURA 13

Fig. 1-2 As cadeias de aminocidos do peptidoglicano ligam-se covalentemente a outros aminocidos de cadeias vizinhas. Isso resulta em uma estrutura estvel, ligada de forma cruzada. A enzima que catalisa a formao dessa ligao denominada transpeptidase e est localizada na membrana citoplasmtica interna. O antibitico penicilina liga-se a essa enzima e a inibe. Por essa razo, a enzima tambm denominada protena de ligao penicilina (ver pgina 154). Fig. 1-3

O envelope celular gram-positivo tem uma parede celular externa complexa composta de peptidoglicano com ligaes cruzadas, cidos teicoicos, polissacardeos e outras protenas. A face interna da parede celular toca a membrana citoplasmtica. A membrana citoplasmtica contm protenas que atravessam a bicamada lipdica. A membrana citoplasmtica bacteriana (ao contrrio da membrana dos animais) no tem colesterol ou outros esteris. Um polissacardeo importante presente na parede gram-positiva o cido teicoico. Ele age como um determinante antignico, portanto, importante para a identificao sorolgica de muitas espcies gram-positivas. O envelope celular gram-negativo tem trs camadas, sem incluir o espao periplasmtico. Assim como nas bactrias gram-positivas, ele tem 1) uma membrana citoplasmtica circundada por 2) uma camada de peptidoglicano. 3) Adicionalmente, a clula gram-negativa tem uma membrana celular externa com caractersticas especiais.

Fig. 1-5

A parede celular gram-positiva bastante espessa e tem muitas ligaes cruzadas das cadeias laterais de aminocidos. Em contraste, a parede celular gram-negati-

Envelope celular gram-positivo

Camada de peptidoglicano (parede celular)

Membrana citoplasmtica

Protenas embebidas

FIGURA 14

Microbiologia clnica ridiculamente fcil

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Envelope celular gram-negativo

LPS

Porina

Membrana externa Murena lipoprotena Camada de peptidoglicano (parede celular) Espao periplasmtico

Membrana citoplasmtica

Protenas embebidas
FIGURA 15

A membrana citoplasmtica interna (assim como nas bactrias gram-positivas) contm uma bicamada fosfolipdica com protenas embebidas. Bactrias gram-negativas tm um espao periplasmtico entre a membrana

Cadeia lateral o-especca Polissacardeo central Lipdio A (endotoxina)

citoplasmtica e a camada extremamente fina de peptidoglicano. Esse espao periplasmtico preenchido com um gel que contm protenas e enzimas. A fina camada de peptidoglicano no contm cidos teicoicos, apesar de conter uma lipoprotena helicoidal denominada lipoprotena da murena. Essa lipoprotena importante porque origina-se da camada de peptidoglicano e estende-se para fora para se ligar membrana externa. Essa ltima membrana similar s outras membranas celulares no sentido de que composta de duas camadas de fosfolipdeos (bicamada) com as caudas hidrofbicas no centro. O que a torna especial que a poro mais externa da bicamada contm lipopolissacardeos (LPS).
Fig. 1-6 O lipopolissacardeo (LPS) composto de trs componentes ligados covalentemente:

FIGURA 16

1. Cadeias de carboidratos externas de 1-50 unidades de oligossacardeos que se estendem para fora. Elas diferem de um organismo para o outro e so determinantes antignicos. Essa parte denominada cadeia la-

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CLULAS GRAMPOSITIVAS
2 camadas: 1. Membrana citoplasmtica interna 2. Camada externa espessa de peptidoglicano (60-100% de peptidoglicano)

CLULAS GRAMNEGATIVAS
3 camadas: 1. Membrana citoplasmtica interna 2. Camada fina de peptidoglicano (5-10% de peptidoglicano) 3. Membrana externa com lipopolissacardeos (LPS) Alto contedo de lipdeos Endotoxina (LPS) lipdeo A Espao periplasmtico Canais de porinas Resistente ao ataque pela lisozima e penicilina

Baixo contedo de lipdeos SEM endotoxinas SEM espao periplasmtico SEM canais de porinas Vulnervel ao ataque pela lisozima e penicilina

FIGURA 17

Diferenas entre organismos gram-positivos e gram-negativos.

teral O-especfica ou antgeno O. Pense em O como Objeto Externo para ajudar a lembrar disso. 2. A segunda parte um polissacardeo central solvel em gua. 3. Mais internamente ao polissacardeo central est o terceiro componente, lipdeo A, um dissacardeo com mltiplas caudas de cidos graxos atingindo a membrana. O lipdeo A txico para humanos e conhecido como endotoxina gram-negativa. Quando as clulas bacterianas so lisadas pelo nosso sistema imunolgico funcional, fragmentos da membrana contendo o lipdeo A so liberados na circulao, causando febre, diarreia e possvel choque endotxico (tambm conhecido por choque sptico). Imersas na membrana externa gram-negativa esto as protenas porinas, que permitem a passagem de nutrientes. Elas tambm so exclusivas de organismos gramnegativos. O que isso significa clinicamente? As diferenas entre os organismos gram-positivos e gram-negativos resultam em interaes variadas com o ambiente. A camada espessa de peptidoglicano das gram-positivas no bloqueia a difuso de compostos de baixo peso molecular; assim, substncias que danificam a membrana citoplasmtica (como antibiticos, corantes e detergentes) podem passar. Porm, a membrana externa das gram-negativas, que contm os lipopolissacardeos, bloqueia a passagem dessas substncias para a camada de peptidoglicano e para a sensvel membrana citoplasmtica interna. Portanto, os antibiticos e produtos qumicos que tentam atacar a parede celular de peptidoglicano (como as penicilinas e a lisozima) no conseguem atravessar essa membrana externa. Curiosamente, o corante cristal de violeta usado na colorao de Gram um complexo corante grande capturado

na espessa parede gram-positiva rica em ligaes cruzadas, resultando na colorao azul das bactrias gram-positivas. A membrana externa dos organismos gram-negativos, rica em lipdeos, parcialmente dissolvida pelo lcool, lavando, portanto, o cristal de violeta e permitindo que o contracorante safranina penetre.
Fig. 1-7

Resumo das diferenas entre bactrias gram-positivas e gram-negativas.

MORFOLOGIA BACTERIANA
As bactrias possuem quatro formas principais: 1. Cocos: Esfricos. 2. Bacilos: Bastonetes. Bacilos curtos so denominados cocobacilos. 3. Formas espiraladas: Forma de vrgula, de S ou de espiral. 4. Pleomrficas: Sem forma distinta (como gelatina). As criaturas com diferentes formas se organizam juntas em padres mais complexos, como em pares (diplococos), grumos, fitas e bactrias isoladas com flagelos.
Fig. 1-8

Morfologia bacteriana. ENTO, O QUE SO OS NOMES?!!!!

Gram-positivos
Comece lembrando que existem seis micro-organismos gram-positivos clssicos que causam doenas em seres humanos e basicamente qualquer outro organismo gram-negativo. Dos gram-positivos, dois so cocos e os outros quatro possuem a forma de bastonetes (bacilos).

Microbiologia clnica ridiculamente fcil

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Os ltimos dois bacilos gram-positivos no formam esporos:

Cocos

5. Corynebacterium 6. Listeria

Bacilos ou bastonetes Espirais Forma de vrgula Forma de S

Gram-negativos
Dos organismos gram-negativos, existe apenas um grupo de cocos gram-negativos. Na verdade, um diplococo (parece dois gros de caf beijando um ao outro): Neisseria. Existe tambm apenas um grupo de organismos espiralados: os espiroquetas. Esse grupo inclui a bactria Treponema pallidum, causadora da sfilis. O resto so bacilos gram-negativos ou pleomrficos.

Excees
1. Micobactrias so fracamente gram-positivas, mas so mais bem coradas com uma colorao especial denominada colorao de resistncia ao lcool-cido (ver Captulo 14). Esse grupo inclui organismos que causam tuberculose e lepra. 2. Espiroquetas possuem parede celular gram-negativa, mas so muito pequenas para serem vistas com a microscopia ptica, portanto devem ser visualizadas com um microscpio especial de campo escuro. As espiroquetas so tambm muito finas e com espirais apertadas. De dentro para fora, elas tm um citoplasma circundado por uma membrana citoplasmtica interna. Como todas as bactrias gram-negativas, possuem uma fina camada de peptidoglicano (parede celular) circundada pela membrana lipoproteica externa contendo LPS. Contudo, so circundadas por uma membrana externa adicional rica em fosfolipdeos e pobre em protenas expostas (bainha externa); acredita-se que isso proteja as espiroquetas do reconhecimento pelo sistema imune (organismos furtivos). Flagelos axiais surgem da extremidade da parede celular das espiroquetas, mas em vez de atravessar a membrana externa (como nas outras bactrias mostradas na Figura 2-1), os flagelos permanecem circundando a espiroqueta sob a membrana da bainha externa. Esses flagelos especializados so denominados flagelos periplasmticos.* Sua rotao gira a espiroqueta e gera um impulso, movendo-a para frente. 3. Micoplasmas no possuem parede celular. Eles tm apenas uma membrana celular simples, portanto no so gram-positivos nem gram-negativos.
Fig. 1-9

Pleomrcos

Grumos Correntes Diplococos

Com agelos

FIGURA 18

Os dois cocos gram-positivos possuem a palavra coccus em seus nomes: 1. Streptococcus forma correntes de cocos. 2. Staphylococcus forma grumos de cocos. Dois dos quatro bacilos gram-positivos produzem esporos (esferas que protegem uma bactria dormente do ambiente adverso). So eles: 3. Bacillus 4. Clostridium

Resumo das diferenas morfolgicas entre as

bactrias.

* Os flagelos periplasmticos so tambm conhecidos como filamentos axiais.

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MORFOLOGIA
Circular (coco)

GRAMPOSITIVOS
Streptococcus Staphylococcus Corynebacterium Listeria Bacillus Clostridium Mycobacterium (lcool-acidorresistentes)

GRAMNEGATIVOS
Neisseria

Bastonete (bacilo)

Entricos (vivem no trato GI) Escherichia coli Shigella Salmonella Yersinia Klebsiella Proteus Enterobacter Serratia Vibrio Campylobacter Helicobacter Pseudomonas Bacteroides (anaerbio) Haemophilus Bordetella Legionella Yersinia Francisella Brucella Pasteurella Gardnerella Espiroquetas: Treponema Borrelia Leptospira

Espiral

Crescimento filamentoso ramificado (como os fungos) Pleomrfico

Actinomyces (anaerbio) Nocardia (parcialmente lcool-acidorresistentes) Chlamydia Rickettsiae Mycoplasma

Sem parede celular

FIGURA 19

Diferenas morfolgicas entre as bactrias.

ESTRUTURAS CITOPLASMTICAS
O DNA bacteriano normalmente consiste em uma nica molcula circular de DNA fita dupla. Molculas circulares menores de DNA fita dupla so denominadas plasmdeos; elas com frequncia contm genes de resistncia a antibiticos. Os ribossomos so compostos de protenas e RNA e esto envolvidos no processo de traduo durante a sntese de protenas. As bactrias, procariontes, tm ribossomos menores (70S) que os animais (80S), eucariontes. Os ribossomos bacterianos consistem em duas subunidades, uma subunidade maior (50S) e uma menor (30S). Esses nmeros so relacionados taxa de sedimentao. Antibiticos, como a eritromicina e a tetraciclina, foram desenvolvidos para atacar como projteis mgicos. Eles

inibem a sntese proteica preferencialmente nas subunidades do ribossomo bacteriano, deixando os ribossomos animais em paz. A eritromicina trabalha na subunidade 50S, enquanto a tetraciclina bloqueia a sntese de protenas na subunidade 30S.

CARACTERSTICAS METABLICAS
As bactrias podem ser divididas em grupos com base nas suas propriedades metablicas. Duas importantes propriedades incluem: 1) como o organismo lida com o oxignio e 2) o que o organismo usa como fonte de carbono e energia. Outras propriedades incluem os diferentes produtos finais do metabolismo que as bactrias produzem, como cido e gs.

Microbiologia clnica ridiculamente fcil

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AERBIOS OBRIGATRIOS
Gram-positivas Nocardia (fracamente lcool-acidorresistente) Bacillus cereus

ANAERBIOS FACULTATIVOS
Staphylococcus Bacillus anthracis Corynebacterium Listeria Actinomyces Maioria dos outros bacilos gram-negativos

MICROAERFILOS
Streptococcus Algumas espcies de Streptococcus so anaerbios facultativos

ANAERBIOS OBRIGATRIOS
Clostridium

Gram-negativas

Neisseria Pseudomonas Bordetella Legionella Brucella Mycobacterium Nocardia

Espiroquetas Treponema Borrelia Leptospira Campylobacter

Bacteroides

lcool-cido resistentes Sem parede celular

Mycoplasma

* Chlamydia e Rickettsia no tm a maquinaria metablica para utilizar o oxignio. Eles so parasitas energticos e roubam o ATP dos seus hospedeiros.

FIGURA 110

Espectro de oxignio.

Oxignio
A maneira como as bactrias lidam com o oxignio o fator principal na sua classificao. O oxignio molecular muito reativo e, quando ele captura eltrons, pode formar perxido de hidrognio (H2O2), radicais superxidos (O2) e radical hidroxila (OH). Todos eles so txicos, a menos que sejam quebrados. Na verdade, nossos prprios macrfagos produzem esses radicais de oxignio para derramar sobre as bactrias. Existem trs enzimas que algumas bactrias possuem para quebrar esses produtos do oxignio: 1. Catalase quebra o perxido de hidrognio conforme a seguinte reao: 2H2O2 2H2O + O2 2. Peroxidase tambm quebra o perxido de hidrognio. 3. Superxido dismutase quebra o radical superxido segundo a seguinte reao: O2 + O2 + 2H+ H2O2 + O2 Bactrias so classificadas em uma faixa contnua. De um lado existem as que amam o oxignio, possuem todas as enzimas protetoras citadas e no podem viver sem ele. No lado oposto, esto as bactrias sem enzimas que, muito provavelmente, batem as botas na presena de oxignio: 1. Aerbios obrigatrios: Essas criaturas so como ns, no sentido de que usam a gliclise, o ciclo TCA de Krebs e a cadeia de transporte de eltrons com o oxignio como aceptor final. Esses caras possuem todas as enzimas citadas anteriormente.

2. Anaerbios facultativos: No deixe esse nome enganar voc! Essas bactrias so aerbias. Elas usam oxignio como aceptor de eltrons na cadeia de transporte de eltrons e possuem catalase e superxido dismutase. A nica diferena que elas podem crescer na ausncia de oxignio usando a fermentao para obter energia. Portanto, elas tm a capacidade de serem anaerbias, mas preferem condies aerbias. Isso similar mudana para a gliclise anaerbia que as clulas musculares humanas sofrem durante a corrida de curta distncia. 3. Bactrias microaerfilas (tambm denominadas anaerbias aerotolerantes): Essas bactrias usam a fermentao e no tm sistemas de transporte de eltrons. Elas podem tolerar pequenas quantidades de oxignio porque possuem superxido dismutase (mas no possuem catalase). 4. Anaerbios obrigatrios: Esses caras odeiam o oxignio e no possuem enzimas para defender-se dele. Quando voc estiver trabalhando na enfermaria do hospital, com frequncia coletar sangue para cultura. Voc armazenar o sangue em duas garrafas para crescimento. Uma delas um meio de cultura anaerbio, sem oxignio!
Fig. 1-10 O espectro de oxignio dos principais grupos bacterianos.

Fonte de carbono e de energia

Alguns organismos usam a luz como fonte de energia (fototrficos) e outros usam compostos qumicos (quimiotrficos). Dos organismos que usam fontes qumicas, aqueles que usam fontes inorgnicas, como amnia e sulfetos, so

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denominados autotrficos.* Outros usam fontes de carbono orgnicas e so denominados heterotrficos. Todas as bactrias clinicamente importantes so quimio-heterotrficas, j que usam compostos qumicos orgnicos como a glicose como fonte de energia. A fermentao** (gliclise) usada por muitas bactrias para o metabolismo do oxignio. Na fermentao, a glicose degradada at cido pirvico, gerando ATP diretamente. Existem vias diferentes para a quebra da glicose at piruvato, mas a mais comum a via de Embden-Meyerhof. Essa a via de gliclise que todos ns estudamos na bioqumica. Aps a fermentao, o piruvato deve ser quebrado ainda mais e os diferentes produtos finais formados nesse processo podem ser usados para classificar as bactrias. cido ltico, etanol, cido propinico, cido butrico, acetona e outros cidos mistos podem ser formados.

A respirao usada pelos organismos aerbios e anaerbios facultativos. A respirao inclui a gliclise, o ciclo do cido tricarboxlico de Krebs e a cadeia de transporte de eltrons acoplada com a fosforilao oxidativa. Essas vias combinam-se para produzir ATP. Organismos intracelulares obrigatrios no possuem as vias metablicas para sntese de ATP e, portanto, devem retirar o ATP dos seus hospedeiros. Essas bactrias vivem na sua clula hospedeira e no podem sobreviver sem ele. Exemplos de organismos intracelulares obrigatrios so Chlamydia e Rickettsia. Eles so parasitas energticos porque precisam do ATP dos seus hospedeiros como fonte de energia. Possuem um sistema de transporte de membrana celular especial para roubar o ATP. Diferenas metablicas adicionais (como fonte de acar, produtos finais e necessidade especfica por certos nutrientes) so usadas na classificao das bactrias e sero discutidas nos captulos referentes aos organismos especficos.

* Organismos autotrficos so aqueles capazes de utilizar fontes de carbono inorgnicas para a sntese de compostos orgnicos. Um exemplo a fixao de CO2 atmosfrico em compostos orgnicos carbonados, realizada pelas plantas e por algumas bactrias. ** As vias glicolticas so realizadas tanto na fermentao quanto na respirao. Aps a formao do cido pirvico na via glicoltica, o metabolismo direcionado para a fermentao ou para a respirao, dependendo das condies ambientais e da capacidade gentica do micro-organismo. A fermentao a transformao do cido pirvico em um ou mais produtos finais sem a utilizao de um aceptor externo de eltrons, como, por exemplo, o oxignio.