Cromatografa

Cap. 2

Cromatografa
Definicin: Reparto de los los componentes de una mezcla entre dos fases, una fase mvil y una fase estacionaria.
Fases mviles
Aumento de polaridad

Polaridad de compuestos orgnicos

Aumento de polaridad

Alcanos (hexano, ciclohexano,

ter de petrleo)

Alcanos Alquenos Dienos conjugados Hidrocarburos aromticos teres, hidrocarburos Aldehdos, cetonas, steres Aminas Alcoholes cidos carboxlicos

Tetracloruro de carbono Tolueno Diclorometano Cloroformo Acetato de etilo Isopropanol Acetona Etanol Agua

Fase estacionaria: Es una de las fases del sistema cromatogrfico responsable de la retencin de los analitos que son transportados por la fase mvil. Puede ser slida, gel o lquida.
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Cap. 2

Extraccin en fase slida

1. Acondicionamiento de la fase estacionaria. Elimina impurezas de la fase estacionaria y ayuda a humedecer los grupos funcionales de la fase estacionaria para asegurar un optimo contacto entre las fases slidas y liquidas. Carga de la muestra. Para ello se emplea un disolvente dbil para la fase estacionaria empleada ya que si la fase mvil es demasiado fuerte la muestra no ser retenida. En fase normal la carga de la muestra se lleva a cabo en hexano, tolueno o diclorometano. Agua o bufferes se suelen usar en el caso de cartuchos de fase reversa. Enjuagado de la fase estacionaria. Elimina componentes no deseables mientras ejerce un efecto de lavado de la muestra en la fase estacionaria. En el disolvente de enjuagado no debe eluir la muestra y suele ser el mismo que el disolvente empleado en la carga de la muestra. Elucin del analito. Es el paso final de la extraccin en fase slida y se basas en una adecuada eleccin de disolventes.

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Extraccin en fase slida

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Cap. 2

Cromatografa de gases
Se basa en el paso del analito a travs de tres partes del instrumento: inyector, columna y detector. Columnas: poliesteres (polares) siliconas (no polares). Detectores: - FID - de captura electrnica - espectrmetro de masas

Column: Carbowax phase (Alltech), 30 m x 0.25 mm ID, 0.25 m film thickness. Temperature programming: 100C for 2 min, 195C for 33 min and 220C up to the end. Temperature rate changes: 40C/min. Injector: 200C, detector: 250C, helium is the carrier gas.

Cap. 2

1. Filtro 2. Fase mvil 3. Tubo flexible de tefln 4. Desgasificador 5. Bomba (isocratica, gradiente) 6. Tubo de 1 mm de dimetro interno 7. Inyector automtico 8. Vlvula 9. Tubo de 0.7 mm 10. Columna 11. Detector (R.I o UV/Vis, ELSD, etc) 12. Residuos 13. Sistema de adquisicin de datos
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Cap. 2

Columna cromatogrfica

Cromatografa de absorcin Cromatografa de fase normal Cromatografa de fase reversa

Cromatografa de intercambio inico Cromatografa de exclusin molecular

Cap. 2

Cromatografa en capa fina

La fase estacionaria se encuentra fija a un soporte o placa y dispuesta en forma de una capa fina. La muestra se aplica como una pequea gota a 1.5 o 2 cm de la base de la placa. la placa se sita en un recipiente que contiene la fase mvil y se alinea con un papel adsorbente. La fase mvil desplaza a los distintos componentes de la muestra a diferentes velocidades, dependiendo de su afinidad por la fase estacionaria. Revelado: la placa se roca con un reactivo que permite visualizar los distintos lpidos presentes en la muestra.
HC: hidrocarburos CE: steres de colesterol TG: triglicridos FFA: cidos grasos libres 1,3-DAG: 1,3-diglicridos 1,2-DAG: 1,2-diglicridos Chol: colesterol MG: monoglicridos

Los lpidos separados pueden ser recuperados siempre que hayan sido detectados por un mtodo no destructivo, mediante el raspado de la banda absorbente y su elucin con cloroformo/metanol 99/1 v/v.