TRANSFERENCIA DE EMBRIONES EN BRAHMAN

Aldemar Chvez Rodriguez M.V.Z.U.T.

IETS ao 2007
EMBRIONES BOVINOS (IN VIVO+IN VITRO) TRASFERIDOS EN SURAMERICA EL 35% DE LA ACTIVIDAD GLOBAL 823.160 285.387

ThibIER 2008

ANIMALES BRAHMAN EN COLOMBIA REGISTRADOS ASOCEBU 2009.

TOTAL FIV T.E. I.A. M.N. 55.011 4.990 5.566 20.626 23.829

9,07% 10,11% 37,5% 43,32%

INCREMENTO DEL 2008 AL 2009 EN BIOTECNOLOGIA DEL 12%. EN EL 2009 SE REPORTARON 5.282 COLECTAS CON 13 .161 PREECES CON UN INCREMENTO DEL 2,9% 3.358 EMBRIONES FIV 134 EMBRIONES CONGELADOS. GOMEZ 2010

1- PROPOSITOS.
COMERCIAL. GENETICO. ANIMALES EXPOSICION. CREAR REBAO PURO A PARTIR DE 2 HEMBRAS PURAS. CREAR REPRODUCTORES. MULTIPLICAR LAS HEMBRAS ELITE.

2- USOS T.E.
-COMERCIO DE GENETICA SUPERIOR. -MULTIPLICAR ANIMALES FISICAMENTE IMPEDIDOS. -PRUEBAS DE PROGENIE. - SEMEN DE ALTO COSTO. -TRANSPORTE DE MATERIAL GENETICO. - 2 O MAS ANIMALES IDENTICOS(BIPARTICION) -CONSERVAR MATERIAL GENETICO -

3 - LIMITACIONES T.E.
-COSTOS. -TIEMPO. -RECEPTORAS DISPONIBLES. -EL 20% DE LA RECEPTORAS NO SE PREA X T.E. -NO TODAS LAS VACAS SON BUENAS DONADORAS. -PERSONAL DE FINCA CAPACITADO Y MOTIVADO. -INSTALACIONES BASICAS. - PROGRAMA NUTRICIONAL ADECUADO.

HISTORIA REPRODUCTIVA PROGRAMA SANITARIO CICLOS REGULARES >A 60 DIAS POST PARTO INTERVALO ENTRE PARTOS CONDICION CORPORAL BALANCE ENERGETICO POSITIVO EDAD MAX 13-15 AOS NOVILLAS CICLANDO

EVALUACION REPRODUCTIVA PERMEABILIDAD CERVICAL ULTRASONIDO CUERNOS UTERINOS ESTROMA OVARICO (FOLL) VAGINA NOVILLAS CTR > 3 OVIDUCTOS

Fisiologa Reproductiva
BOS INDICUS
1-DINAMICA FOLICULAR DOS y TRES ONDAS el 60% 2-FOLICULO DOMINANTE Y CUERPO LUTEO DE MENOR TAMAO 3-CUERPOS LUTEOS INTRAESTROMALES SE PRESENTAN EN UN 50%. 4 NIVELES DE E 2 Y P 4 CIRCULANTES BAJOS 5-FOLICULOS A 5 mm MAYOR CANTIDAD 6-FOLICULOS A 5 mm MENOR CANTIDAD 7-RESPUESTA A GONADOTROPINAS EX. CON DOSIS BAJAS MEJOR RESPUESTA 8-DURACION ESTRO ENTRE 4 Y 10 HORAS 9-PRESENTACION ESTRO NOCTURNO SE PRESENTAN EN UN 56% 10- REINICIO ACTIVIDAD OVARICA POST PARTO ENTRE 45 - 70

BOS TAUROS
1-DINAM ICA FOLICULAR DOS A TRES ONDAS 2-FOLICULO DOMINANTE Y CUERPO LUTEO DE MAYOR TAMAO 3-CUERPOS LUTEOS INTRAESTROMALES SE PRESENTAN EN UN 10%. 4 NIVELES DE E 2 Y P 4 CIRCULANTES ALTOS 5-FOLICULOS A 5 mm MENOR CANTIDAD 6-FOLICULOS A 5 mm MAYOR CANTIDAD 7-RESPUESTA A GONADOTROPINAS EX. CON DOSIS ALTAS MEJOR RESPUESTA 8-DURACION ESTRO ENTRE 10 Y 18 HORAS 9-PRESENTACION ESTRO NOCTURNO SE PRESENTAN EN UN 36% 10- REINICIO ACTIVIDAD OVARICA POST PARTO ENTRE 35-45

DONADORAS

madre de campen nacional 2005-2006-2009

Campeona nacional brahmn 2009

HORMONAS PARA SUPEROVULAR BOVINOS

FSHP - siux - folltropin pluset FSHO - ovagen FSHB - bovina recombinante sper ova FSHE - equina recombinante PMSG - ecg- folligon novormn - anti pmsg HMG humana pergovet. Mezcla FSH-P Y ECG

RESPUESTA DE LAS VACAS BRAHMAN EN LA CALIDAD DE EMBRIONES DE ACUERDO A LA HORMONA UTILIZADA. Tratamiento N de Vacas Estructuras Colectadas Embriones Calidad 1 Embriones Calidad 2 Embriones Calidad 3 -4 UFOs

Pluset ( 500 UI ) Folltropin ( 200 mg ) Ovagen ( 8.8mg ) total

2.480

24.930 (10/vaca) 10.350 (8/vaca)

12.400 (5/vaca) 5.175 (4,14/ vaca) 1.485 (5,5 vaca) 19.060 (4,76 vaca)

4.960 (2 / vaca) 3.105 (2,5 vaca) 661 (2,45/vaca) 8.726 (2,18 vaca)

4.320 (1,7/ vaca) 1.242 (1/ vaca) 204 (0,76 vaca) 5.766 (1,44 vaca)

3.250 (1,35/vaca) 828 (0,7/ vaca) 80 (0,3 vaca) 7.408 (1,85vaca)

1.250

270

2.430 (9 /vaca)

4.000

37. 710 (9,42/vaca)

Fuente: Chavez, A. 2000 - 2009

Ondas Folic Foliculares

Ovulacin

LH

FSH Celo 5 10

Prog. 21

Superovulacin donadoras
CONCLUSIONES:
-

Existen vacas de 2 , 3, y 4 ondas foliculares.

- La respuesta no depende de la hormona utilizada.

-

El xito de la respuesta depende de iniciar la SOV. En el momento justo.

Superovulacin de donadoras
SINCRONIZACION DE LA ONDA FOLICULAR: - Progestgenos y estrgenos - P4 + 17 estradiol 50-100mg p4 + 2,5 - 5mg 17 estradiol Nueva onda 4,3 das despus - P4+EB (benzoato estradiol) 50-100mg p4 + 2,5 - 5 mg estradiol Nueva onda 4-5 das despus Iniciar 4 das despus con FSH
BO ET AL 1995-2006- A PARTIR DEL 2002

DIA 0

HORA 8:00 am

DOSIS

HORMONA Implante crestar sin inyeccin +

2 ,5ml 4 6:00 am 6:00 pm 5 6:00 am 6:00 pm 6 6:00 am 2 ml 2 ml 1,5 ml 1,5 ml 1 ml 7 ml 6:00 pm 1 ml 3 ml 7 6:00 am 6:00 pm 8 6:00 am 6:00 pm 9 15 6:00 am 6:00 am 0,5 ml 0,5 ml 3000 UI

Benzoato de estradiol ( 2,5 mg )

Pluset Pluset Pluset Pluset Pluset Lutalyse Pluset Lutalyse + retirar implante Pluset Pluset HCG ( Chorulon ) + I.A. I.A. I.A. Colecta de Embriones

Superovulacin donadoras
- Progestgenos y estrgenos - P4+ EV ( Valerato de Estradiol ) Crestar ( 3mg norgestomet +5mg EV) Nueva onda 4 a 6 das Iniciar FSH 5-6 das despus - P4 + ECP( Cipionato de Estradio l) 50-100mg p4 + 2-4 mg ECP muy variable ( No recomendable)

DIA 0 8 9 -10 15 20 21 22

HORA 8:00 am 8:00 am 8:00 am Celo detectado Palpar C. L. 6:00 am 6:00 pm 6:00 am 6:00 pm 6:00 am 6:00 pm

DOSIS

HORMONA Implante crestar completo Retirar implante

2 ml 2.5 ml 2 ml 2 ml 1,5 ml 1,5 ml 1 ml 7 ml 1 ml 3 ml 0,5 ml 0,5 ml 3000 UI

Preloban Conceptal Implante crestar ( V.E.) completo Pluset Pluset Pluset Pluset Pluset lutalyse Pluset Lutalyse + retirar implante Pluset Pluset HCG ( Chorulon) + I.A. I.A. I.A. Colecta de Embriones

23 24 25 31

6:00 am 6:00 pm 6:00 am 6:00 pm 6:00 am 6:00 am

Superovulacin donadoras
Alternativas independientes al uso de estrgenos: Prohibicin de esteroides en la cadena alimenticia. - Inicio de SOV en la primera onda folicular. - Ablacin folicular.

Superovulacin donadoras dona

GnRh o pLH - GnRh. 100 g
DEL FOLICULO DOMINANTE. MACMILLAN Y THATCHER 1991 .PRODUCE OVULACION

NUEVA ONDA FOLICULAR APARECE 1 A 2 DIAS DESPUES RESPUESTA VARIABLE. PURSLEY et al, 1995.

pLH 25 mg - P4 + GnRh
- GnRh 2009

en ganado de carne ovulacion 60% Small et al, 2009

y SOV 2 das despus no tubo diferencias con P4 y E2 y SVO 4 das despus en ganado de leche .Wock et al, 2008

SOV 60 horas despus resultados comparables a E2. Hasler

- Iniciar SOV. en la primera onda folicular.

Nasser 1993 - Gabriel A. B,E, Daniel Carballo Guerrero, Andrs Trbulo,Humberto Trbulo, Ricardo Trbulo, Dragan Rogan y Reuben J. Mapletoft, proponen : ( P4 + PGF2 ) + GnRh e iniciar SOV. En la primera onda folicular . 2010

DIA 0 7 8 9

HORA 8:00 am

DOSIS 2 ml

HORMONA Aplicar dispositivo ( P4 ) + Cloprostenol Conceptal ( GnRh ) Folltropin 36 h. Folltropin Folltropin Folltropin Folltropin Folltropin Folltropin lutalyse Folltropin Lutalyse + retiro dispositivo Lutropin I.A.12h. I.A.24 h. Colecta de Embriones

6:00 am 6:00 pm 6:00 am 6:00 pm

2 ml 2 ml 2 ml 1,5 ml 1,5 ml 1 ml 1 ml 0,5 ml 7 ml

10

6:00 am 6:00 pm

11

6:00 am 6:00 pm

12

6:00 am

0,5 ml 3 ml

13

6:00 am 6:00 pm

12,5 mg

14 20

6:00 am 6:00 am
Reuben J. Mapletoft, et al, 2010

Superovulacin donadoras
SINCRONIZACIN DE LA ONDA FOLICULAR: - Ablacin folicular, Bungartz y Niemann et al 1997. Aspiracin de foliculos mayores a 5 mm. Inicia onda 1,5 dias Si no hay C.L. aplicar progestageno. Iniciar 2 Dias despus con FSH - Limitante : Equipo de aspiracion folicular

Ablacion folicular

DIA 0 1

HORA 8:00 am 6:00 am 6:00 pm

DOSIS

HORMONA Ablacion folicular ( Foliculos >5 mm )

2 ml 2 ml 1,5 ml 1,5 ml 1 ml 7 ml

Pluset dispositivo p4 Pluset Pluset Pluset Pluset lutalyse Pluset Lutalyse Pluset+ retirar dispositivo p4 Pluset HCG ( Chorulon) + I.A. I.A. I.A. Colecta de Embriones

6:00 am 6:00 pm

6:00 am

6:00 pm

1 ml 3 ml

6:00 am 6:00 pm

0,5 ml 0,5 ml 3000 UI

6:00 am 6:00 pm

6 12

6:00 am 6:00 am
Chvez, et al, 2008

RESULTADOS PROTOCOLO ABLACION Vs P4 - B.E. - HCG EN BRAHMAN

n: 20

P4-B.E.-HCG -IATF

ABLACION P24-HCG IATF 12.2

EMBRIONES VIABLES EMBRIONES TIPO 1

8,38

4,76

6,5

%VIABILIDAD

72%

89.7%

TOTAL EMBRIONES VIABLES

167

244

CHAVEZ, et al, 2010

Sincronizacin de la ovulacin en vacas superovuladas

Con el fin de realizar IATF :
- P-12: Retiro del implante 12 horas despus de PGF2 + HCG 48h. 3 i.a. Chvez et al 2000

- P-24 y - P-36: barros y nogueira 2001 y 2005. >desarrollo

del folliculo y > de receptores LH. Y L.H. 48h PF2 2 i.a. Modificaciones : -LH 60 horas despues de PF2 en tauros- mejora pero no en b. indicus. Baruselli et al.2006 - En el 2007 nelore P36 LH 48- ecg.2 i.a. Barcelos et el

DIA 0 5

HORA 7:00 am

DOSIS 2 ,5ml

HORMONA Implante crestar sin inyeccin +

Benzoato de estradiol ( 2,5 mg )

7:00 am 7:00 pm

2 ml 2 ml 1,5 ml 1,5 ml 1 ml 7-10 ml

Pluset Pluset Pluset Pluset Pluset lutalyse Pluset eCG eCG y retirar implante Lutropin I.A. I.A. Colecta de Embriones

7:00 am 7:00 pm

7:00 am

7:00 pm 8 7:00 am 7:00 pm 9 7:00 am 7:00 pm 10 16-17 7:00 am 7:00 am

1 ml 200 u.i. 200 u.i. 12,5 mg

BARCELOS, 2007

RESULTADOS PROTOCOLO P36 Y P36/ECG EN BOS INDICUS

N=20

P-36-LH

P36/ECG-LH

TOTAL ESTRUCTURAS EMBRIONES VIABLES %VIABILIDAD

6,65

10

5,1

7,3

76,7%

73%

TOTAL EMBRIONES VIABLES

102

146

BARCELOS, et al, 2007

Desarrollo embrionario
Ovocito 150-190m Da 1 ovulacin fimbrias infundibulum Da 2 2 clulas oviducto Da 3 4 clulas oviducto Da 4 8 clulas oviducto Da 5 16 clulas cuerno uterino Da 6 32-64 clulas mrula compacta Da 7 100-200 clulas blastocisto temprano Da 8 100-200 clulas blastocisto Da 8 100-200 clulas blastocisto expandido mayor dimetro Da 9 200-800 clulas blastocisto protruido

Clasificacion segn IETS

Estado Calidad
1-UFO 1- excelente 2-2-12 clulas 2-regular 3-mrula temprana 3-malo 4-mrula 4-muerto o degenerado 5-blastocisto temprano 6-blastocisto 7-blastocisto expandido 8-blastocisto eclosionado 9-blastocisto elongado (eclosionado expandido)

Grados de calidad embrionaria

Calidad tipo 1 excelente
Desarrollo acorde a la colecta. blastmeros visibles, color y estructura uniformes, esferoide, buena compactacin y zona pelucida intacta.

Calidad tipo 2 bueno

Pocos blastmeros desprendidos de la masa celular, detritus celulares Forma irregular, poca compactacin.

Calidad tipo 3 regular

Color obscuro o muy claro, forma irregular, detritus celulares desarrollo retardado. Zona pelucida agrietada.

Calidad tipo 4 malo

Degenerado, vacuolizacin de blastmeros, aspecto granuloso estados de 8 clulas.

Factores que Afectan los Indices de Preez

Sincronizacin de las Receptoras. Condicion Corporal de las Receptoras. Calidad y Estado de los Embriones. TIPO Bos Indicus vs Bos Taurus. Categora de las Receptoras (vaq. vs
vacas y vacas secas vs vacas en lactancia).

Cuerpo Lteo (CL). Instalaciones y Condiciones de Manejo. Condiciones climticas y estacin del ao.

PORCENTAJE DE PREEZ DE EMBRIONES BRAHMAN FRESCOS DE ACUERDO A LA CALIDAD DEL EMBRION .CHAVEZ 2009

Clasificacin del embrin

4-1 4-2 5-1 5-2 6-1 Totales

Embriones transferidos
1.800 3.420 5.400 4.580 1.800 17.000

Receptoras preadas
990 2.017 1.890 2.748 756 8.401

Receptoras vacas
810 1.403 3510 1832 1044 8.599

% efectividad

55% 58,97% 35% 60% 42% 49,41%

.
NOVILLAS PESO > 320 KG CICLANDO IDEAL CRUCE LECHERO BALANCE E + PELVIS AMPLIA TEMPERAMENTO SANIDAD,VACUNAS
PRUEBAS SANITARIAS

VACAS. CERVIZ. > 60 DIAS PARTO. C.C. CICLANDO IDEAL. BALANCE E+. SANIDAD. HABILIDAD MATERNA.

Condicin corporal y preez

CC n PP (%)
* P<0,05
Mapletoft et al., 1986

1 230 44

2 460 53 *

3 633 55 *

4 175 47

RECEPTORAS

RECEPTORAS CEBUINAS

SINCRONIZACION DE RECEPTORAS CON PROSTAGLANDINAS

DIA 0

PF2,UN DIA
ANTES DE LA APLICA CION DE PF2 A LA DONADORA

PF2 2 DOSIS

Da 2-3-4 Da 14 Da 16 Da 23

celo PF2 celo T.E.

SINCRONIZACION DE RECEPTORAS METODO OVSYNCH

DIA 0

GnRh

GnRh+ P4

Dia 7 Dia 9 Dia 16

PF2 GnRh Celo t.e.

PF2 +retiro P4+ecp 1mg Celo t.e.

SINCRONIZACION DE RECEPTORAS Ciclando y no ciclando.

DIA 0

P4+ B.E.

GnRh+ P4

Da 6

Retiro P4+ecp 1 mg

RetiroP4+ecg 300 u.i + ecp 1mg

Dia 8 Dia 15

celo t.e.

celo t.e.

REQUISITOS DE RECEPTORAS APTAS PARA T.E.

1- Haber presentado celo 6-8 dias antes
2- Palpacin de un C.L. claro y definido 3- Ultrasonido C.L. mayor a 12 mm 4- Aplicar 5 cc lidocana al 2% epidural 4- Limpieza y desinfeccin de vulva 5- Transferir embrin de acuerdo a su desarrollo 6- Opcional aplicar 500 mg de flunixin neglumine 7- Dispositivo de progesterona - o GnRh 2,5 ml (conceptal), hcg 1500 U.I. 8- Llenar formato de lavado y transferencia de embrin

Cuerpo lteo receptoras

Conclusiones
-

La sanidad, nutricin y manejo son fundamentales para obtener buenos resultados. Realizar evaluacin ovrica y tracto reproductivo con ultrasonido a donadoras y receptoras para evitar los animales problema , la condicin corporal exagerada es un indicativo. En cuanto a la SOV. es fundamental que su inicio concuerde con al arranque de la onda folicular, en la primera si es posible. o con p4 + E2 . La hormona utilizada no es tan importante , se deben ajustar los protocolos a las vacas no al contrario. Personalizar tratamientos de vacas de alto merito y costo.

Evaluar los resultados de los trabajos por preez obtenidas de acuerdo al numero donadoras el mnimo deben ser de 3/donadora para justificar la T.E. frescos - Existen normas, formatos, reglas internacionales propuestos por la IETS. Utilizar inductores de la ovulacin ya sea con hcg-o Lh y realizar IATF

Criopreservacin

Congelacin de embriones.

Vitrificacin.

Caractersticas del Crioprotector

Alta Solubilidad Baja Toxicidad Bajo Peso Molecular

CRIOPROTECTORES COMUNMENTE UTILIZADOS

1) Crioprotectores permeables de bajo peso molecular (PM): metanol , etilenglicol, 1,2 propanediol, DMSO, 2,3 butanediol, glicerol y otros alcoholes. 2) Crioprotectores no permeables de bajo PM: galactosa, glucosa, sacarosa, tetralosa, y otros azcares. 3) Crioprotectores no permeables de alto PM (>50.000 Daltons): polivinilpirrolidona, alcohol polivinlico, almidn hidroxietlico, hialuronidato de sodio y otros polmeros.

Protocolo congelacin glicerol

1- lavado en holging 10X 2- 5 minutos sln 50 % holding 50% glicerol10% 3- 15 minutos en sln 100% glicerol al 10% 4- empaque segn grafica 5 - seeding con copitos en las columnas adyacentes al
embrin

6 - colocar en la maquina para congelar y correr el

programa

7- nitrgeno y empacar en goblets blancos 8- llenar formato de congelacion

Congelacin embrin en glicerol

Protocolo congelacin Ethyleneglycol

1- Lavar en holding 10x 2- Enjuagar la pajilla con holding 3- Pasar embrin al Ethyleneglycol 5-8 minutos 4- Empacar el embrin segn grafica 5- Seeding segn grafica 6- Colocar en maquina congeladora y arrancar programa 7- Pasar a nitrgeno liquido 8 - Empacar en globest amarillos. 9- Llenar formato de congelacin.

Congelacin embrion ethylene glycol

EQUIPO PARA CONGELACION

Programa congelacin de embriones

Programa N 2
Rata enfriamiento T hold time holdT

-7 c (10 min. )
0,5 C/minuto

-35c

Nitrgeno liquido

PROTOCOLO DESCONGELAR EMBRIONES EN GLICEROL

DESCONGELANDO 3 PASOS
PAJILLA AL AIRE 6 A 8 SEGUNDOS SUMERGIR EN AGUA A 25 C POR 30 SEGUNDOS PASAR A SLN 1 ( 0,5 M DE SUCROSA + 5% GLICEROL) 5 MINUTOS PASAR A SLN 2 (0,5 M DE SUCROSA + 2,5% GLICEROL) 5 MINUTOS PASAR A SLN 3 (0,6 M SUCROSA + 0 % GLICEROL) 5 MINUTOS PASAR EL EMBRION A MEDIO HOLDING MONTAR EN PISTOLA PARA T.E. REALIZAR LA TRANSFERENCIA MAXIMO 10 MINUTOS DESPUES LLENAR EL FORMATO DE TRANSFERENCIA DE EMBRION

PROTOCOLO DESCONGELAR EMBRIONES EN GLICEROL

DESCONGELANDO 1 PASO
PAJILLA AL AIRE 6 A 8 SEGUNDOS SUMERGIR EN AGUA A 25 C POR 30 SEGUNDOS PASAR A SLN 1 ( 1 M DE SUCROSA) 15 MINUTOS PASAR EL EMBRION A MEDIO HOLDING MONTAR EN PISTOLA PARA T.E. REALIZAR LA TRANSFERENCIA MAXIMO 10 MINUTOS DESPUES LLENAR EL FORMATO DE TRANSFERENCIA DE EMBRION

PROTOCOLO TRANSFERENCIA DIRECTA DE EMBRION

EMBRIONES CONGELADOS EN ETHYLENE GLYCOL
PAJILLA 6-8 SEGUNDOS AL AIRE (DESHELAR) PASAR A AGUA A 30 C POR 30 SEGUNDOS SECAR LA PAJILLA CORTAR EL TAPON CARGAR LA PAJILLA EN LA PISTOLA T.E. REALIZAR LA TRANSFERENCIA EN 10 MINUTOS LLENAR EL FORMATO DE TRANSFERENCIA

Respuesta del embrin a la congelacin Stroud y Leibo 1995

Estado Descripcin 3 Mrula temprana 4 Grado 1 2y3 Mrula compacta 1 2 3 Blastocisto temprano 1 2 3 Blastocisto 1 2 3 Blastocisto 1 Expandido 2 Respuesta posible variable mala muy buena buena - regular variable - mala muy buena buena - regular variable - mala muy buena buena - regular mala muy buena pero variable buena pero variable

TASA DE PREEZ EN NOVILLAS TRATADAS CON GNRH, HCG, LH Y CIDR AL TRASFERIR EMBRIONES CONGELADOOS EN ETHYLEN-GLYCOL MARQUES 2002

CONTROL

GNRH 10g

HCG 1.500 u.i

LH 25mg

P4 Cidr 1,9g

TASA PREEZ N H.
TRANSFERIDAS

28,6% 98

53,5% 99

51% 96

45,4% 41,1% 97 95

Vitrificacin

Protocolo Vitrificacin mtodo Bioniche

1- Lavar en holding 10 x 2- Sln VS1 5 minutos 3- Sln VS2 60 segundos 4- Llenar pajilla azul con diluyente 5- Aspirar embrin del VS2 mx. 10l 6- Llenar la pajilla con diluyente 7- Pasar a 1 minuto a vapor de nitrgeno liquido 8- Sumergir a nitrgeno liquido 9- Marcar escalerilla y usar globets azules

VITRIFICACION METODO BIONICHE

DESVITRIFICACION DE EMBRIONES
EMBRIONES VITRIFICADOS (BIONICHE)
PAJILLA 5-10 SEGUNDOS AL AIRE (DESHELAR) PASAR A AGUA A 35 C POR 20 SEGUNDOS AGITAR LA PAJILLA COMO BAJANDO UN TERMOMETRO SUMERGIR LA PAJILLA HORIZONTALMENTE POR 3 A 5 MINUTOS EN AGUA 20-25 C. CARGARLA LA PAJILLA EN LA PISTOLA DE TRANSFERENCIA REALIZAR LA TRANSFERENCIA EN 5 MINUTOS LLENAR EL FORMATO DE TRANSFERENCIA

Conclusiones de la criopreservacin
Es mejor la congelacin de embriones jvenes mrulas y blastocitos jvenes independientemente del mtodo utilizado. Colecta el da 6. La calidad del embrin es fundamental solo debemos congelar embriones tipo 1 Los embriones no deben permanecer ms de dos horas post colecta e iniciar su congelacin. La conservacin de los embriones en los termos es fundamental por ningn motivo deben ser expuestos a la boca del termo salvo si se va a realizar la descongelacin. El equipo de congelacin debe ser chequeado y calibrado anualmente. Los porcentajes de prees con embriones brahmn congelados oscilan entre 20 y 50% no crear falsas expectativas

BIPARTICION DE EMBRIONES
til para aumentar el nmero de cras , o para producir animales genticamente idnticos y realizar pruebas de comportamiento. Morulas o blastocistos de excelente calidad pueden ser utilizados Es mas fcil partir embriones en estado blastocisto ,dejando la mitad de la masa celular interna a cada mitad, se utiliza una cuchilla adaptada a un microscopio de fase invertida, y el embrin puede ser trasferido sin zona pelucida. Hay dos mtodos Micromanipuladores de un brazo o de dos brazos Micromanipulador de un brazo , el embrin se fija a la caja de petri con una solucin especial que forma una carga elctrica entre la zona pelucida y la caja de petri.

Equipo Biparticion de Embriones

BIPARTICION DE EMBRION

Biparticin de embriones

Sexaje de embriones
Biopsia Mrula 28-38 clulas muestra 4 clulas Es el 15% embrin PREFERIBLEMENTE BLASTOCISTOS Tiene 45 a 100 clulas (- 10 % embrin) LEJOS DE LA MASA CELULAR

Embrin toma de Biopsia

Alineamiento del embrion y cuchilla

Corte con cuchilla

Separacin de biopsia del embrion

Prueba de sexaje
Reaccin en cadena con polimerasa PCR
AMPLIFICACION IN VITRO DE SECUENCIAS ESPECIFICAS DE DNA PRIMERS ,NUCLEOTIDOS, SLN TAMPON Y POLIMERASA TERMOESTABLE ( DNA taq) EL DNA DEL CROMOSOMA ES AMPLIFICADO - LA PRUEBA ES MUY SENSIBLE SE HA PODIDO SEXAR UN ESPERMATOZOIDE. SIEMPRE SE HACEN CONTROLES PARA EVITAR POSIBLES CONTAMINACIONES EN LAS MUESTRAS. EL EQUIPO SE LLAMA UN TERMOCICLADOR Y LUEGO SE REALIZA UNA ELECTROFORESIS PARA INTERPRETAR LA PRUEBA . DURACION PRUEBA 2-3 HORAS. Y SE TOMA UNA FOTOGRAFIA

EQUIPOS SEXAJE DE EMBRION

ELECTROFORESIS

INTERPRETACION DE LA FOTOGRAFIA

PRUEBA DE SEXAJE NO PCR LABORATORIO MINI TUBE.

The SEX-Y Kit SEX-Y Probe labeled Y chromosomes in embryo blastomeres Biopsy Medium Buffer 1 Buffer 2 Mounting Medium SEX-Y Probe Fixative Vessel Product No. 19982/5010 Bright red fluorescent signal indicates Y chromosome within nuclear DNA Simple, rapid detection allows for immediate visual identification of Y chomosomes Kit contains materials for up to ten tests

Muchas gracias por su atencin