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CREATININA

K016 INSTRUES DE USO

FINALIDADE Mtodo para a determinao da creatinina. Teste colorimtrico, somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO DE AO Metodologia: Jaffe modificado. Colorimtrica de Ponto Final: a creatinina reage com cido pcrico, formando um complexo de cor amarelo-avermelhado. Nesse pH ocorre a mxima formao do complexo corado creatinina-picrato, e, tambm com outros elementos plasmticos. Com a adio do reagente cido, o pH diminuido e a cor devida creatinina desfeita, permanecendo a cor devida aos cromognios. Por diferena entre as leituras obtidas no pH cido, obtm-se o valor real da creatinina. Cintica de Tempo Fixo: a variao na velocidade de formao do picrato alcalino, sem acidificao do produto formado, obtida atravs de duas leituras espectrofotomtricas nos primeiros minutos. As leituras assim obtidas so livres da reao do picrato com os cromognios, permitindo, assim, a determinao da creatinina. REAGENTES Nmero 1 - Reagente Alcalino - Conservar entre 15 e 30C. O reagente em baixas temperaturas pode apresentar turvao; para elimin-la aquec-lo a 37C. Homogeneizar antes de usar. Contm: Hidrxido de sdio 110 mmol/L, Carbonato de sdio 75 mmol/L e surfactante. Nmero 2 - cido pcrico - Conservar entre 15 e 30C. Contm: cido pcrico 60 mmol/L. Nmero 3 - Reagente cido - Conservar entre 15 e 30C. Contm: cido actico 12,25 mol/L. Nmero 4 - Padro - Conservar entre 15 e 30C. Aps o manuseio, conservar na geladeira entre 2 e 8C para evitar evaporao. Contm: Creatinina 3 mg/dL APRESENTAO
Reagentes N 1 N 2 N 3 N 4 K 016 - 1 200 mL 50 mL 10 mL 10 mL K 016 - 2 1000 mL 250 mL 50 mL 30 mL

3- A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. 4- Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados. 5- O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao nivel dos reagentes nos tubos de ensaio. 6- O Reagente N 1 custico; evitar contato com a pele. O Reagente N 3 deve ser manipulado com cuidado pois irritante para pele e mucosas, podendo causar queimadura leve. 7- Recomendamos aplicar as normas locais, estaduais e federais de proteo ambiental para que o descarte dos reagentes e do material biolgico seja feito de acordo com a legislao vigente. 8- Para obteno de informaes relacionadas biossegurana ou em caso de acidentes com o produto, consultar as FISPQ (Ficha de Informaes de Segurana de Produtos Qumicos) disponibilizadas no site www.bioclin.com.br ou atravs de solicitao pelo SAC (Servio de Assessoria ao Cliente) da Quibasa. AMOSTRAS Soro ou plasma colhido com heparina, oxalato, fluoreto, citrato ou EDTA- Bioclin. O analito estvel 07 dias entre 2 e 8C. A urina deve ser colhida por um periodo de 24 horas e conservada em geladeira at o momento da dosagem. DESCRIO DO PROCESSO A Bioclin recomenda, para uso do kit, utilizar como soro controle os kits Biocontrol N e P Bioclin. TCNICA I - PONTO FINAL Marcar 3 tubos de ensaio: B (Branco), P (Padro) e A (Amostra), e proceder como a seguir:
Branco Reagente N 1 gua destilada Amostra Reagente N 4 Reagente N 2 2,0 mL 250 mL ----500 mL Padro 2,0 mL ----250 mL 500 mL Amostra 2,0 mL --250 mL --500 mL

seguida, fazer a dosagem como na tcnica descrita acima, omitindo a segunda etapa (acidificao). Multiplicar o resultado obtido por 25. CLCULOS Creatinina (mg/dL) = A1 - A2 x3 Absorbncia do padro

Como a reao segue a lei de Lambert-Beer, o Fator de calibrao pode ser usado. Fator de Calibrao = Concentrao do padro (3 mg/dL) Absorbncia do padro Creatinina (mg/dL) = (A1 - A2) x Fator de Calibrao Creatinina na Urina (mg/24h) = mg/dL x Volume de 24h (mL) 100 TCNICA II- MTODO CINTICO DE TEMPO FIXO PREPARAO DO REAGENTE DE TRABALHO Mistura uma parte do Reagente N 2 (cido pcrico) com quatro partes do Reagente N 1 (reagente alcalino). Armazena em frasco mbar. Estvel 24 horas entre 15 e 30C. Homogeneizar o Reagente de Trabalho antes de iniciar a tcnica. REAO Adicionar 0,1 mL de Padro ou Amostra (soro, plasma ou urina) a 1 mL de Reagente de Trabalho (previamente homogeneizado), homogeneizar e transferir imediatamente para uma cubeta termostatizada a 37C. Medir as absorbncias do Padro e da Amostra em 510 nm (500-540) aos 30 e 90 segundos. CLCULOS Absorbncia do Padro = Abs. 90 segundos - Abs. 30 segundos ou da Amostra Fator de calibrao = Concentrao do padro (3 mg/dL) Abs. do Padro Creatinina (mg/dL) = Abs. da Amostra x Fator de calibrao DEPURAO Hidratar o paciente com mnimo, 600 mL de gua e, em seguida, orient-lo para esvaziar a bexiga. A depurao da creatinina dever ser realizada ultilizando o volume total de urina colhida em 4,12 ou 24 horas, de acordo com o procedimento padro do laboratrio. Em qualquer momento do intervalo de tempo escolhido, colher uma amostra de sangue. Medir o volume total de urina e calcular o volume por minuto. VM = Volume urinrio do tempo determinado (mL) Tempo determinado (em minutos) Dosar a creatinina srica e urinria seguindo as metodologias propostas. Fazer o clculo da Depurao de Creatinina:

Homogeneizar e incubar em banho-maria 37C por 10 minutos. Ler as absorbncia da Amostra e do Padro em 510 nm (500 a 540 nm), acertando o zero com o Branco. A absorbncia da Amostra ser A1, e a do Padro P. Em seguida adicionar:
Branco Reagente N 3 100 mL Padro --Amostra 100 mL

EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS Espectrofotmetro ou colormetro, banho-maria 37C, relgio ou cronmetro, pipetas, tubos de ensaio, Biocontro N e Biocontrol P Bioclin. Encontram-se no mercado especializado de artigos para Laboratrios de Anlises Clnicas. CONDIES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE A temperatura de armazenamento dever ser de 15 a 30C. O transporte, em temperaturas entre 15 e 30C. Manter ao abrigo da luz e evitar umidade. CUIDADOS ESPECIAIS 1- Somente para uso diagnstico in vitro. 2- Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos.

Homogeneizar e aguardar 5 minutos entre 15 e 30C. Ler a absorbncia A2 da Amostra em 510 nm (500 - 540), acertando o zero com Branco. A reao de cor estvel por 30 minutos. DOSAGEM NA URINA Anotar o volume colhido em mL, centrifugar uma alquota da amostra de urina a ser dosada e proceder uma diluio de 1:25 (0,1 mL de urina e 2,4 mL de gua destilada ou deionizada). Em

U = Creatinina urinria (mg/dL) S = Creatinina srica (mg/dL) VM = Volume/minuto A = Valor da superfcie corporal do paciente em m Depurao da Creatinina = U x VM (mL/min) S Obs.: Este valor dever ser corrigido para a superficie corporal do paciente. Usar o nomograma de correlao peso-altura. Multiplicar o valor da depurao por 1,73 e dividir pela superficie corporal do paciente. Depurao da Creatinina = U x VM x 1,73 (mL/min./1,73 m) S A LIMITAES DO PROCESSO O processo cintico s poder ser realizado em espectrofotmetro com cubeta termostatizada 37C, devido ao pequeno intervalo de tempo de reao. As metodologias descritas no devero ser utilizadas para amostras extremamente lipmicas. CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE O Laboratrio Clnico deve possuir um programa interno de controle da qualidade, onde procedimentos, normas, limites e tolerncia para variaes sejam claramente estabelecidos. importante ressaltar que todos os sistemas de medio apresentam uma variabilidade analtica caracterstica, que deve ser monitorada pelos prprios laboratrios. Para tanto, recomendvel a utilizao de controles, que permitem avaliar a preciso e a exatido das dosagens. RASTREABILIDADE O padro do kit rastrevel ao material de referncia SRM 914 do NIST (National Institute of Standards and Technology), tornando-o equivalente ao mtodo IDMS (Espectrometria de Massa com Diluio Isotpica), segundo recomendao do NKDEP (National Kidney Disease Education Program). VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia em mg/dL, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao de creatinina em populaes sadias do sexo masculino e feminino.
Soro ou Plasma Urina - Homem Urina - Mulher Depurao - Homem Depurao - Mulher Depurao - Criana 0,4 a 1,4 mg/dL 21 a 26 mg/kg/24h 16 a 22 mg/kg/24h 97 a 137 mL/min/1,73m 88 a 128 mL/min/1,73m 70 a 140 mL/min/1,73m

Preciso REPETIBILIDADE Foram realizadas 20 dosagens sucessivas com trs amostras com concentraes diferentes, encontrando-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio Padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) 0,679 0,008 1,198 Amostra 2 1,128 0,008 0,697 Amostra 3 1,441 0,008 0,573

4 - TODD, SANFORD, DAVIDSOHN: Diagnsticos Clnicos, 16 Ed., Editora Manole, 1983. 5 - CARL, A. B. and EDWARD, R.A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2 nd ed., 1994, 1531 - 1539. GARANTIA DE QUALIDADE Antes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes Bioclin so testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes assegurada at a data de validade mencionada na embalagem de apresentao, desde que armazenados e transportados nas condies adequadas. DADOS DO FABRICANTE QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: ( 31 ) 3439.5454 - Fax: ( 31 ) 3439.5455 E-mail: bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR Servio de Assessoria ao Cliente Tel.: 0800 031 5454. E-mail: sac@bioclin.com.br Nmero de registro do Kit de Creatinina na ANVISA: 10269360089 Reviso: Fevereiro/12

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REPRODUTIBILIDADE Foram realizadas 20 dosagens, durante trs dias consecutivos, com trs amostras de concentraes diferentes, encontrando-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio Padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) 0,679 0,001 0,085 Amostra 2 1,129 0,001 0,089 Amostra 3 1,440 0,001 0,080

Sensibilidade A sensibilidade foi calculada a partir de 20 determinaes de uma amostra isenta da presena de creatinina. A mdia encontrada foi 0,0377 mg/dL, com desvio padro de 0,0006 mg/dL. A sensibilidade, que indica o limite de deteco do mtodo, corresponde a mdia mais 3 vezes o desvio padro, sendo igual a 0,0395 mg/dL. Linearidade A reao de cor linear at a concentrao de 10 mg/dL. Para valores maiores, diluir a amostra com cloreto de sdio 0,85% e repetir a determinao. Multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio. SIGNIFICADO DIAGNSTICO A creatinina, sintetizada principalmente no figado e nos rins, produzida e excretada em um ritmo constante independente da dieta, grau de hidratao e metabolismo protico. Com a falncia da funo renal, os dados laboratoriais proporcionam ndices seguros quanto a capacidade renal de excretar, reabsorver e secretar. A creatinina est elevada na insuficincia renal aguda e crnica, na obstruo do trato urinrio, na insusficincia cardiaca congestiva, na desidratao, no choque, no diabetes melitus. Niveis diminuidos podem ser observados: nas distrofias musculares, desnutrio diminuio da massa muscular, doena renal severa. NMERO DE TESTES K016-1....100 Testes/250 mL de amostra/2 mL de Reagente 200 Testes/ 125 mL de amostra/1 mL de Reagente K016-2....500 Testes/250 mL de amostra/2 mL de Reagente 1000 Testes/ 125 mL de amostra/1 mL de Reagente REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - JAFFE, M.: J. Phisiol. Chem. 10:381, 1886. 2 - SLOT, C.: Sand. J. Clin. Lab. Invest. 17:381, 1965. 3 - HENRY, R. J .: Clinical Chemistry - Principles and Technics, Ed., Harper and Row. New York, 1964.

mg/ Kg peso = mg/24h dividido pelo peso corporal Para converter os valores de mg/dL em mmol/L (SI), multiplicar por 0,0884. DESEMPENHO DO PRODUTO CONTROLE DE QUALIDADE Exatido COMPARAO DE MTODOS E ESPECIFICIDADE METODOLGICA O kit de Creatinina foi comparado com outro mtodo para dosagem de creatinina, comercialmente disponvel. Foram realizadas 07 anlises e os resultados foram avaliados. A equao linear obtida foi Y = 1,072X - 0,056, com coeficiente de correlao linear igual a 0,999. Com estes resultados, pode-se concluir que o kit apresenta boa especificidade metodolgica.

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CREATININA

K016 INSTRUCCIONES DE USO

FINALIDAD Mtodo para la determinacin de la Creatinina. Test colorimtrico, solamente para uso diagnstico in vitro. PRINCIPIO DE ACCIN Metodologa: Jaff modificado. Colorimtrica de Punto Final: la Creatinina reacciona con el Acido pcrico, formando un complejo de color amarillo-enrojecido. A este pH ocurre la mxima formacin del complejo coloreado Creatinina-picrato asi como con otros elementos plasmticos. Con la adicin del Reactivo cido, el pH disminuye y el color permanece debido a sus cromgenos. Por diferencia entre las lecturas obtenidas en el pH alcalino y pH acido se obtiene el valor real de la Creatinina. Cintica de Tiempo Fijo: la variacin en la velocidad de formacin del Picrato alcalino, sin acidificacin del producto formado, es obtenida con 2 (dos) lecturas espectrofotomtricas en los primeros minutos. Las lecturas son libres de la reaccin del Picrato con cromgenos, permitiendo as la determinacin de la Creatinina. REACTIVOS Nmero 1 - Reactivo Alcalino - Almacenar entre 15 y 30C. El reactivo, en bajas temperaturas puede presentar turbiedad; para eliminarla, calentar a 37C. Homogenizar antes de usar. Contiene: Hidrxido de sodio 110 mmol/L, Carbonato de sodio 75 mmol/L y surfactante. Nmero 2 - cido Pcrico - Almacenar entre 15 y 30C. Contiene: cido pcrico 60 mmol/L. Nmero 3 - Reactivo cido - Almacenar entre15 y 30C. Contiene: cido actico 12,25 mol/L. Nmero 4 - Patrn - Almacenar entre 15 y 30C. Despus de la manipulacin, almacenar en la refrigeradora entre 2 y 8C para evitar evaporacin. Contiene: Creatinina 3 mg/dL. PRESENTACIN
Reactivos N 1 N 2 N 3 N 4 K 016 - 1 200 mL 50 mL 10 mL 10 mL K 016 - 2 1000 mL 250 mL 50 mL 30 mL

3- El agua utilizada en la limpieza del material debe ser reciente y exenta de agentes contaminantes. 4- Columnas deionizadoras saturadas liberan agua alcalina, iones diversos y agentes oxidantes y reductores, que pueden alterar de forma significativa los resultados. 5- El nivel de agua en el bao maria debe ser superior nivel de los reactivos en los tubos de ensayo. 6- El Reactivo N 1 es custico; evitar contacto con la piel. El Reactivo N 3 debe ser manipulado con cuidado, pues es irritante para la piel y mucosas, pudiendo causar quemaduras leves. 7- Se recomienda la aplicacin de la ley local, estatal y federal de proteccin ambiental para la eliminacin de reactivos y material biolgico se hace de acuerdo con la legislacin vigente. 8- Para obtener informacin relacionada con la seguridad biolgica o en caso de accidentes con el producto, consultar la FISPQ (Ficha de Informaciones de la Seguridad de Productos Qumicos) disponibles en el site www.bioclin.com.br o solicitando a travs del SAC (Servicio de Asesora al Cliente) de Quibasa. MUESTRAS Suero o plasma obtenido con heparina, oxalato, fluoruro, citrato o EDTA-Bioclin. El analito es estable por 07 das a temperaturas entre 2 y 8C. La orina debe ser obtenida por un periodo de 24 horas y conservada refrigerada hasta el momento de la dosificacin. DESCRIPCIN DEL PROCEDIMIENTO La Bioclin recomienda, para uso del kit, utilizar como suero control los kits Biocontrol N y P Bioclin. TCNICA I - PUNTO FINAL Marcar 3 tubos B (Blanco), P (Patrn) M (Muestra) y proceder como sigue:
Blanco Reactivo N 1 gua destilada Muestra Reactivo N 4 Reactivo N 2 2,0 mL 250 mL ----500 mL Patrn 2,0 mL ----250 mL 500 mL Muestra 2,0 mL --250 mL --500 mL

y 2,4 mL de agua destilada o deionizada). En seguida hacer la dosificacin como en la tecnica descripta antes, omitiendo la segunda etapa (acidificacin). Multiplicar el resultado obtenido por 25. CALCULOS Creatinina (mg/dL) = A1 - A2 Absorbancia del patrn x3

Como la reaccin sigue la ley de Lambert-Beer, el Factor de calibracin puede ser usado. Factor de Calibracin = Concentracin del patrn (3 mg/dL) Absorbancia del patrn Creatinina (mg/dL) = (A1 - A2) x Factor de Calibracin Creatinina en Orina(mg/24h) = mg/dLxVolumen de 24h(mL) 100 TCNICA II- MTODO CINTICO DE TIEMPO FIJO PREPARACIN DEL REACTIVO DE TRABAJO Mezclar una parte del Reactivo N 2 (Acido picrico) con cuatro partes del Reactivo N 1 (Reactivo alcalino). Guardar en frasco mbar. Estable por 24 horas a temperaturas entre 15 y 30C. Homogenizar el Reactivo de Trabajo antes de iniciar la tcnica. REACCIN Agregar 0,1 mL del Patrn o Muestra (suero, plasma o orina) a 1 mL del Reactivo de Trabajo (previamente homogenizado), homogenizar y transferir inmediatamente a una cubeta termostatizada a 37C. Medir las absorbancias del Patrn y de la Muestra en 510 nm (500-540) a los 30 y 90 segundos. CALCULOS Absorbancia del Patrn = Abs. 90 segundos - Abs. 30 segundos o de la Muestra Factor de calibracin = Concentracin del patrn (3 mg/dL) Abs. del Patrn Creatinina (mg/dL) = Abs. de la Muestra x Factor de calibracin DEPURACIN Hidratar al paciente al menos con 600 mL de agua y en seguida orientarlo para vaciar la vejiga. La depuracin de la Creatinina deber ser realizada con el volumen total de orina colectada con 4, 12 o 24 horas. de acuerdo con el procendimento patrn de laboratorio. En cualquier momento de ese intervalo de tiempo, tomar una muestra de sangre. Medir el volumen total de orina y calcular el volumen minuto (VM). VM = Volumen urinario de tiempo determinado (mL) Tiempo determinado (min) Dosificar la Creatinina srica y urinaria siguiendo las metodologas propuestas. Hacer el clculo de la Depuracin de Creatinina:

EQUIPAMIENTO E INSUMOS OPERACIONALES Espectrofotmetro o colormetro, bao maria a 37C, reloj o cronmetro, pipetas, tubos de ensayo, Biocontrol N y Biocontrol P Bioclin. Materiales encontrados en el mercado especializado de artculos para Laboratorios de Anlisis Clnicos. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE La temperatura del almacenamiento y transporte deber ser de 15 a 30C. Mantener cubierto de la luz y evitar humedad. CUIDADOS ESPECIALES 1- Solamente para uso diagnstico in vitro. 2- Seguir con rigor la metodologa propuesta para obtencin de resultados exactos.

Homogenizar e incubar en bao maria a 37C por 10 minutos. Leer las absorbancias de la Muestra y del Patrn en 510 nm (500 - 540), ajustando el cero con el Blanco. La absorbancia de la Muestra ser A1 y del Patrn P. En seguida adicionar:
Blanco Reactivo N 3 100 mL Patrn --Muestra 100 mL

Homogenizar y aguardar 5 minutos a temperaturas entre 15 e 30 C. Leer las absorbancias A2 de la Muestra en 510 nm (500540), ajustando el cero con el Blanco. La reaccin de color es estable por 30 minutos. DOSIFICACIN EN LA ORINA Anotar el volumen obtenido en mL, centrifugar una alicuota de la muestra de orina a ser dosificada y diluirla 1:25 (0,1 mL de orina

U= Creatinina Urinaria (mg/dL) S = Creatinina srica (mg/dL) VM = Volumen/minuto A = Valor de la superficie corporal del paciente en m Depuracin de la Creatinina = (mL/min) U x VM S

Precisin REPETIBILIDAD Fueron realizadas 20 dosificaciones sucesivas con tres muestras, encontrndose los siguientes resultados:
Muestra 1 Concentracin Promedio (mg/dL) Desvo Patrn (mg/dL) Coeficiente de Variacin (%) 0,679 0,008 1,198 Muestra 2 1,128 0,008 0,697 Muestra 3 1,441 0,008 0,573

5 - CARL, A. B. and EDWARD, R. A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed., 1994, 1531-1539. GARANTA DE CALIDAD Antes de ser liberados para el consumo, todos los reactivos Bioclin son probados por el Departamento de Control de Calidad. La calidad de los reactivos es asegurada hasta la fecha de validad mencionada en la caja de presentacin, si son almacenados y transportados en condiciones adecuadas. DATOS DEL FABRICANTE QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: +55 (31)3439.5454 - Fax: +55 (31) 3439.5455 E-mail: bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasilea ATENDIMIENTO AL CONSUMIDOR Servicio de Asesora al Cliente Tel.: 0800 0315454. E-mail: sac@bioclin.com.br Nmero de registro del kit de Creatinina en la ANVISA: 10269360089. Revisin: Febrero/12

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Obs.: Este valor deber ser corregido por la superficie corporal del paciente. Usar el nomograma de correlacin peso-altura. Multiplicar el valor de la Depuracin por 1,73 y dividir por la superfcie corporal del paciente. Depuracin de la Creatinina = U x VM x 1,73 (mL/min./1,73m) S A LIMITACIONES DEL PROCESO El proceso cintico solamente podr ser realizado en espectrofotmetro con cubeta termostatizada a 37C, debido al pequeo intervalo de tiempo de reaccin. Las metodologias descriptas no deberan ser utilizadas para muestras extremamente lipmicas. CONTROL INTERNO DE CALIDAD El Laboratorio Clnico debe poseer un programa interno de control de calidad, donde procedimientos, normas, lmites y tolerancia para variaciones sean claramente establecidos. Es importante resaltar que todos los sistemas de medicin presentan una variabilidad analtica caracterstica, que debe ser vigilada por los propios laboratorios. Por lo tanto, es recomendable la utilizacin de controles, que permiten la evaluacin, la precisin y la exactitud de las dosificaciones. TRAZABILIDAD El patrn del kit se puede rastrear a los materiales de referencia SRM 914 del NIST (National Institute of Standards and Technology), por lo que es equivalente al mtodo de IDMS (Espectrometra de Masas con Dilucin Isotpica), segn lo recomendado por el NKDEP (National Kidney Disease Education Program). VALORES DE REFERENCIA Los valores de referencia en mg/dL, para el presente mtodo, fueron obtenidos por el determinacin de Creatinina en poblaciones sanas del sexo masculino y femenino.
Suero o plasma Orina - Hombre Orina - Mujer Depuracin - Hombre Depuracin - Mujer Depuracin - Nios 0,4 a 1,4 mg/dL 21 a 26 mg/kg/24h 16 a 22 mg/kg/24h 97 a 137 mL/min/1,73m 88 a 128 mL/min/1,73m 70 a 140 mL/min/1,73m

REPRODUTIVIDAD Fueron realizadas 20 dosificaciones, durante 03 das consecutivos, con tres muestras, encontrndose los siguientes resultados:
Muestra 1 Concentracin Promedio (mg/dL) Desvo Patrn (mg/dL) Coeficiente de Variacin (%) 0,679 0,001 0,085 Muestra 2 1,129 0,001 0,089 Muestra 3 1,440 0,001 0,080

Sensibilidad La sensibilidad fue calculada a partir de 20 determinaciones de uma muestra exenta de la presencia del creatinina. El promedio encontrado fue 0,0377 mg/dL, con desvo patrn de 0,0006 mg/dL. La sensibilidad, que indica el lmite de deteccin del mtodo, corresponde el promedio mas 3 veces el desvo patrn siendo 0,0395 mg/dL. Linearidad La reaccin de color es lineal hasta la concentracin de 10 mg/dL. Para valores mayores, diluir la muestra con Cloruro de sodio 0,85% y repetir la determinacin. Multiplicar el valor obtenido por el Factor de dilucin. SIGNIFICADO DIAGNSTICO La Creatinina, sintetizada principalmente en el hgado y riones, es producida y excretada en un ritmo constante independente de la dieta, grado de hidratacin y metabolismo proteco. Con la fallas de la funcin renal, los datos de laboratorio proporcionan ndices seguros en cuanto a la capacidad renal de excretar, reabsorver y secretar. La Creatinina est elevada en la insuficiencia renal aguda y crnica, en la obstrucin del tracto urinario, en la insuficiencia cardaca congestiva, en la desidratacin, en el choque, en la diabetes mellitus. Niveles disminuidos pueden ser observados: en las distrofias musculares, desnutricin, disminuicin de la masa muscular, enfermedad renal severa. NMERO DE PRUEBAS K016-1..100 Pruebas/250 mL de muestra/2mL de Reactivo 200 Pruebas/125 mL de muestra/1mL de Reactivo K016-2..500 Pruebas/250 mL de muestra/2mL de Reactivo 1000 Pruebas/125 mL de muestra/1mL de Reactivo REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - JAFFE, M.: J. Phisiol. Chem. 10:381, 1886. 2 - SLOT, C.; Sand. J. Clin. Lab. Invest. 17:381, 1965. 3 - HENRY, R. J.: Clinical Chemistry - Principles and Technics, 4 Ed., Harper and Row. New York, 1964. 4 - TODD, SANFORD, DAVIDSOHN; Diagnsticos Clnicos, 16 Ed., Editora Manole, 1983.

mg/Kg peso = mg/24h dividido por el peso corporal Para convertir los valores de mg/dL en mmol/L (SI), multiplicar por 0,0884. DESEMPEO DEL PRODUCTO CONTROL DE CALIDAD Exatictud COMPARACIN DE METODOS E ESPECIFICIDAD METODOLGICA El kit de Creatinina fue comparado con otro mtodo para dosificacin de creatinina comercialmiente disponible. Fueron realizadas 07 anlisis y los resultados fueron evaluados. La ecuacin linear obtenida fue Y = 1,072X - 0,056, con coeficiente de correlacin igual a 0,999. Con estos resultados se puede concluir que el Kit presenta buena especificidad metodolgica.

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CREATININE

K016 USAGE INSTRUCTIONS

FUNCTION Method for determination of creatinine. Colorimetric test, for in vitro diagnostic only. PRINCIPLE OF ACTION Methodology: Jaffe modified. End point colorimetric: the creatinine reacts with the picric acid, forming a complex of reddish-yellow. This pH occurs in a maximum formation of the picric-creatinine color complex, and, also with other plasmatic elements. With the adding of the acid reagent, the pH is reduced to its correct color and the creatinine is undone, remaining the cromogens color. For difference between the readings obtained in the acid pH. Fixed time Kinetic: the variation on the alkaline picric formation speed, without obtained products acid formation, its gained through the spectrophotometers reading on the first minutes. The readings obtained that way are free of picrate with cromogens, allowing, the creatinine determination. REAGENTS Number 1 - Alkaline Reagent - Store between 15 and 30C. In low temperatures the reagent can present turbidity, to discard it heat up to 37C. Contains: Sodium hydroxide 110 mmol/L, sodium carbonate 75 mmol/L and surfactant. Number 2 - Picric acid - Store between 15 and 30C. Contains: Picric acid 60 mmol/L. Number 3 - Acid Reagent - Store between 15 and 30C. Contains: Acetic acid 12,25 mol/L. Number 4 - Standard - Store between 15 and 30C. After handling keep in refrigerated area between 2 and 8C to avoid evaporation. Contains: Creatinine 3 mg/dL PRESENTATION
Reagents N 1 N 2 N 3 N 4 K 016-1 200 mL 50 mL 10 mL 10 mL K016-2 100 0 mL 250 mL 50 mL 30 mL

5- The water level in water bath must by higher than the reagent level in test tubes. 6- The reagent N 1 is caustic, avoid akin contact. The reagent N 3 must be manipulated with care because it is irritating to skin and mucous membrane, can cause minor burns. 7- We recommend applying the local, state and federal rules for environmental protection, so that disposal of reagents and biological material can be made in accordance with current legislation. 8- To obtain information related to biosafety or in case of accidents with the product, consult the MSDS (Material Safety Data Sheet) available on the website www.bioclin.com.br or upon request by the SAC (Advisory Service Customer) of Quibasa. SAMPLE Serum or plasma collected with heparin, oxalate, fluoride, citrate or EDTA-Bioclin. The analyte is stable for 7 days between 2 and 8C. The urine must be collected in a period of 24 hours and kept in a refrigerator until the dosage time. PROCESS DESCRIPTION Bioclin recommends, as control serum, Biocontrol N and P Bioclin Kits. TECHNIQUE I - END POINT Mark 3 test tubes with the letters B (Blank), P (Standard), A (Sample) and proceed as follows:
Blank Reagent N 1 Distilled Water Sample Reagent N4 Reagent N 2 2,0 mL 250 mL ----500 mL Standard 2,0 mL ----250 mL 500 mL Sample 2,0 mL --250 mL --500 mL

According to the Lambert-Beer Law, the calibration factor can be used. Calibration Factor = Standard Concentration (3 mg/dL) Standard Absorbance Creatinine (mg/dL) = (A1 - A2) x Calibraton Factor Creatinine in Urine (mg/24h) = mg/dL x Volume in 24h (mL) 100 TECHNIQUE II FIXED POINT KINETIC METHOD WORKING REAGENT PREPARATION Mixture a share of reagent N 2 (picric acid) with four shares of reagent N 1 (alkaline reagent). Store in a amber flask. Stable for 24 hours between 15 and 30C. Homogenized the working reagent before the technique begins. REACTION Add 0,1 mL of Standard or Sample (serum, plasma or urine) in 1 mL of working reagent (homogenized previously), homogenize and transfer immediately for thermostated at 37C. Measure absorbance of sample at 510 nm (500 - 540) in 30 and 90 seconds. CALCULATIONS Absorbance from Standard = 90 seconds abs. 30 seconds abs. or Sample Calibration Factor = Standard Concentration (3 mg/dL) Standard Absorbance Creatinine (mg/dL) = Sample Absorbance x Calibraton Factor DEPURATION Hydrate the patient with minimum, 600 mL of water, and then, orientation to empty the balloon. The depuration of creatinine must be carried out. Using the total volume of collected urine 4, 12 or 24 hours, according to standard procedure in the laboratory. In any moment of the chosen interval, collect a blood sample. Measure the total volume of the urine and calculate the volume per minute. VM = determined time urinary volume (mL) Determined time (in minutes) Dose the serum creatinine and urine according to the proposed methodologies. Calculate the Creatinine depuration: U = Urine Creatinine (mg/dL) S = Serum Creatinine (mg/dL) VM = Volume/minute A = Body surface value of the patient in m2 Creatinine depuration = U x VM (mL/min) S Attention: this value can be corrected to the patients body surface. Use a chronogram of weight-height correlation. Multiply the depuration value by 1,73 and divide by the patient body surface.

Homogenize and incubate in water-bath at 37 C for 10 minutes. Read the absorbance of the sample at 510 nm (500 to 540 nm), hitting the zero with the Blank. This will be the absorbance A1, and the Standard P. And then add:
Blank Reagent N 3 100 mL Standard --Sample 100 mL

EQUIPMENTS AND OPERATIONAL INPUTS Spectrophotometers or colorimeter, water-bath at 37C, watches and stopwatches, pipettes, test tubes, Biocontrol N and Biocontrol P Bioclin. They can be found at markets specialized in laboratories of clinical analysis. TRANSPORTATION AND STORAGE CONDITIONS The storage and transport temperature should be between 15 and 30C. Protect from light and avoid moisture. SPECIAL CARE 1- For in vitro diagnostic only. 2- Strictly follow the methodology proposed to obtain exact results. 3- Water used in material cleaning must to be recent and free of contaminants. 4- Saturated deionizer columns release alkaline water, many ions, oxidizing agents and reducers that may alter the results significantly.

Homogenize and wait for 5 minutes. Read the absorbance A2 of the sample at 510 nm (500 - 540 nm), hitting the zero with the Blank. The color of the reaction is stable for 30 minutes. URINE DOSAGE Take note of the collected volume in mL, centrifuge a aliquot of the urine sample to be dosed in proceed the dilution of 1:25 (0,1 mL of urine and 2,4 mL of distilled or deionized water). Then, proceed with the technique, omitting the second part (acidification). Multiple the obtained results for 25. CALCULATIONS Creatinine (mg/dL) = A1 - A2 x3 Standard absorbance

Creatinine depuration = U x VM x 1,73 (mL/min./1,73m2) S A PROCEDURE LIMITATIONS The kinetic process can only be carried out in a spectrophotometer with thermostated cuvette at 37C, due to the small time interval of the reaction, The methodologies described shall not be used in extremely lipemic samples. INTERNAL QUALITY CONTROL The Clinical Laboratory must have an internal quality control, where all procedures, rules, limits and tolerance to variations be clearly established. It is important to mention that all measurement systems present a analytical variety, and it must be monitor by the laboratory. Therefore, it is recommendable the use of controls, allowing the precision and accuracy of the dosages. TRACEABILITY The kits standard is traceable to the reference material NIST (National Institute of Standards and Technology) SRM 914, making it equivalent to the IDMS method (Isotope Dilution Mass Spectrometry), as recommended by the NKDEP (National Kidney Disease Education Program). REFERENCE VALUES The reference values in mg/dL, for this method were obtained through the determination of creatinine in healthy populations of male and female.
Serum or Plasma Urine - men Urine - Women Depuration - men Depuration - Women Depuration - Children 0,4 a 1,4 mg/dL 21 a 26 mg/kg/24h 16 a 22 mg/kg/24h 97 a 137 mL/min/1,73m 88 a 128 mL/min/1,73m 70 a 140 mL/min/1,73m

REPRODUCIBILITY 20 determinations were performed for 3 consecutive days, with 3 different samples, obtaining the following results:
Sample 1 Average Concentration (mg/dL) Standard Deviation (mg/dL) Coefficient of Variation (%) 0,679 0,001 0,085 Sample 2 1,129 0,001 0,089 Sample 3 1,440 0,001 0,080

CUSTOMER SERVICE Customer Advisory Service Phone.: 0800 0315454. E-mail: sac@bioclin.com.br

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ANVISA registration number for creatinine kit: 10269360089 Review: February/12

Sensitivity The sensitivity indicates the detection limit of the method. It was calculated from twenty (20) determinations of creatinine, a sample absent of analytical. An average value of 0,0377 mg/dL, with standard deviation of 0,0006 mg/dL. The sensitivity corresponds to the average plus 3 times the standard deviation and is equal to 0,0395 mg/dL. Linearity The color reaction is linear up to 10 mg/dL. For higher values, dilute the sample with NaCl 0,85% and repeat the determination. Multiply the obtained value by dilution factor. DIAGNOSTIC SIGNIFICANCE The creatinine, synthesized mainly in the liver and in kidney, is produced and excrement in a constant rhythm, independently of diet, hydratation level and protein metabolism. With the kidney function failure, the laboratorial data proportionate secure indexes when the excrement, re-absorption and secrete capacity of the kidney. The creatinine is raised in the acute and chronic kidney insufficiency, in the urine tract obstruction, congestive heart insufficiency, dehydration, chock and mellitus diabetes. Lower levels can be observed on: muscle dystrophy, reduction by innutrition of the muscle mass, severe kidney disease. NUMBER OF TESTS K016-1 ... 100 Tests/ 250 mL of sample/2 mL of reagent 200 Tests/ 125 mL of sample/1 mL of reagent K016-2....500 Tests/ 250 mL os sample/2 mL of reagent 1000 Tests/ 125 mL of sample/1 mL of reagent BIBLIOGRAPHIC REFERENCES 1 - JAFFE, M.: J. Phisiol. Chem. 10:381, 1886. 2 - SLOT, C.: Sand. J. Clin. Lab. Invest. 17:381, 1965. 3 - HENRY, R. J .: Clinical Chemistry - Principles and Technics, Ed.,Harper and Row. New York, 1964. 4 - TODD, SANFORD, DAVIDSOHN: Diagnsticos Clnicos, 16 Ed.,Editora Manole, 1983. 5 - CARL, A. B. and EDWARD, R.A.: Tietz Textbook of Clinical Chem 2 nd ed., 1994, 1531 - 1539. QUALITY ASSURANCE Before being released for consumption, all Bioclin reagents are tested by the Department of Quality Control. The quality of reagents is assured until expiration date stated on the presentation packaging, when stored and transported under appropriate conditions. MANUFACTURERS DATA QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Phone.: +55 (31) 3439.5454 - Fax: +55 (31) 3439.5455 E-mail: bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira

mg/Kg weight = mg/24h divided by body surface. To convert the values of mg/dL in mmol/L (SI), multiplyby 0,0884. PRODUCT PERFORMANCE QUALITY CONTROL Accuracy COMPARISON OF METHODS AND METHODOLOGICAL SPECIFICITY The creatinine was compared with other commercially available methods for measurement of creatinine. For this test, We analyzed seven (07) clinical samples. The obtained results allow the construction of a linear equation Y = 1,072X - 0,056, with correlation coefficient equal 0,999. With these results, we can conclude that the kit presents good methodological specificity. Precision REPEATABILITY 20 successive measurements were performed, using 3 samples, obtaining the following results:
Sample 1 Average Concentration (mg/dL) Standard Deviation (mg/dL) Coefficient of Variation (%) 0,679 0,008 1,198 Sample 2 1,128 0,008 0,697 Sample 3 1,441 0,008 0,573