ECLTICA

qumica

www.scielo.br/eq Volume 35, nmero 3, 2010

Artigo/Article

BIORREMEDIAO DE SOLOS CONTAMINADOS POR PETRLEO E SEUS DERIVADOS

Juliano de Almeida Andrade1, Fabio Augusto2 & Isabel Cristina Sales Fontes Jardim3
Laboratrio de Pesquisas em Cromatograa Lquida (LABCROM), Departamento de Qumica Analtica (DQA), Instituto de Qumica (IQ), Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), Caixa Postal 6154, CEP 13084-971, Campinas, SP, Brasil. E-mail: jaa1000@ gmail.com. 2 Laboratrio de Cromatograa Gasosa (LCG), DQA, IQ, UNICAMP. 3 LABCROM, DQA, IQ, UNICAMP.
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Resumo: Em vista da eficincia comprovada da biorremediao na degradao de compostos txicos ao ser humano, como o benzeno, tolueno, etilbenzeno e xilenos (BTEX), diversas empresas, principalmente as relacionadas com consultorias e remediao ambiental, tm despertado grandes interesses pela implantao da biorremediao como opo para a reabilitao de reas contaminadas. Em pases desenvolvidos, como os Estados Unidos, Canad e vrios pases da Europa, a tcnica bioqumica de remediao vem sendo amplamente utilizada em trabalhos que se baseiam, por exemplo, no tratamento de solos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo. Porm, ao contrrio do que se tem notado nesses pases, no Brasil, os projetos de biorremediao ainda esto no campo da teoria, com poucos casos prticos, embora exista uma probabilidade real de expanso. A esse despeito, uma das maiores pertinncias dessa reviso elucidar as vantagens que essa tcnica pode oferecer quando utilizada para a degradao de compostos, como os BTEX, em solos tipicamente brasileiros, cujas caractersticas fsico-qumicas contribuem, em muito, para a degradao desses contaminantes. Nessa conjuntura, pesquisas revelam que os fatores ambientais (como teores de umidade e oxignio) e a disponibilidade de nutrientes nos solos, alm das condies climticas do Brasil, so bastante adequadas para o emprego dessa tcnica. Isso pode trazer como vantagens, tima relao custo-benefcio e maior eficincia na degradao de compostos txicos e recalcitrantes frente maioria das tcnicas convencionais de remediao. Em sntese, a presente reviso busca enfocar o estado da arte das tcnicas de biorremediao de contaminantes em solos, apresentando as mais atuais e recentes aplicaes e inovaes, tanto no mbito nacional quanto no internacional. Termos de indexao: biorremediao; degradao; contaminantes; hidrocarbonetos de petrleo BTEX; solos; tratamento de reas contaminadas. CONTAMINAO DE SOLOS POR PETRLEO E SEUS DERIVADOS O mundo atual est cada vez mais dependente do petrleo e de seus derivados para a manuteno de sua atividade industrial. Durante a explorao, o reno, o transporte e as operaes de armazenamento do petrleo e/ou de seus deriEcl. Qum., So Paulo, 35 - 3: 17 - 43, 2010

vados podem vir a ocorrer derramamentos acidentais ocasionando a contaminao de solos, rios, etc. Tais ocorrncias vm motivando, principalmente, a realizao de pesquisas relacionadas com a remediao de stios contaminados (Aislabie et al., 2004; Marn et al., 2006). O que se tem notado, nas duas ltimas dcadas, que a poluio causada por petrleo e

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seus derivados tem sido um dos principais problemas ao meio ambiente. Quando ocorre o derramamento de gasolina em solos, por exemplo, uma das principais preocupaes a contaminao das guas subterrneas, que tambm podem contaminar, especialmente, os aquferos que so usados como fontes de abastecimento de gua para o consumo humano (Custance et al., 1992). Os frequentes derramamentos de petrleo e seus derivados registrados em solos brasileiros vm motivando o desenvolvimento de novas tcnicas que visam, principalmente, a descontaminao dessas matrizes. Diante disso, diversas tcnicas, fsicas, qumicas e biolgicas, vm sendo desenvolvidas para a remoo ou a degradao in-situ ou ex-situ de petrleo derramado e para a reduo de seus efeitos sobre o ecossistema, especialmente os txicos. Dentre as tcnicas desenvolvidas, a biorremediao vem se destacando como uma alternativa vivel e promissora para o tratamento de solos contaminados por petrleo e seus derivados (Bento et al., 2003; Dua et al., 2002; Rahman et al., 2002). De modo geral, a biorremediao baseia-se na degradao bioqumica dos contaminantes por meio da atividade de microorganismos presentes ou adicionados no local de contaminao (Bernoth et al., 2000). Neste caso, os tratamentos so basicamente de dois tipos: 1) ex-situ (ou off-site), realizado fora do local onde ocorreu a contaminao e, por isso, um tratamento que requer a escavao e a remoo do solo contaminado para outro local. A adoo deste procedimento pode resultar em um aumento considervel do custo do processo, porm, no obstante a essa desvantagem, possvel controlar, com maior facilidade, as condicionantes do meio (vide o item Fatores que inuenciam a biodegradabilidade dos contaminantes), que so consideradas os fatores-chave utilizados no tratamento dos solos; 2) in-situ (ou on-site), tratamento feito no prprio local da contaminao. Normalmente, essa opo de biorremediao torna o processo mais atrativo e economicamente vivel, quando comparado ao tratamento citado anteriormente. Alm disso, o tratamento in-situ, normalmente, acarreta em menores impactos ambientais advindos da remediao da rea contaminada (Nano et al., 2003).

Principais contaminantes de petrleo e seus derivados em solos O petrleo uma mistura complexa que contm vrios compostos, sendo que os hidrocarbonetos representam a frao majoritria. De acordo com a sua origem, as suas composies qumicas e as suas propriedades fsicas variam de um campo petrolfero para outro. Devido, principalmente, complexidade dessa mistura, normalmente o tratamento de reas contaminadas por essas substncias bastante difcil e problemtico. Em solos contaminados por petrleo e seus derivados, alguns contaminantes se destacam frente aos demais. Neste caso, de forma geral, os compostos de interesse que exigem maior preocupao ambiental e que, normalmente, so os principais a serem identicados e quanticados antes e durante um processo de remediao, so: benzeno, tolueno, etilbenzeno e xilenos (ismeros: orto-, meta- e para-xileno). Esses compostos, conhecidos tambm como BTEX, so denidos como hidrocarbonetos monoaromticos, cujas estruturas moleculares possuem como caracterstica principal a presena do anel benznico. So usados, principalmente, em solventes e em combustveis e so os constituintes mais solveis na frao da gasolina. Compostos como os BTEX, constituem em um grande problema, no somente no Brasil, mas em todo o mundo. Esses compostos aromticos so txicos tanto ao meio ambiente como ao ser humano, nos quais atuam como depressores do sistema nervoso central e apresentam toxicidade crnica mais signicativa que os hidrocarbonetos alifticos (tambm presentes no petrleo e derivados), mesmo em concentraes da ordem de g L-1 (Watts et al., 2000). O benzeno reconhecidamente o composto mais txico dentre os BTEX e, por isso, pode ser apontado como o agente mais preocupante no tocante sade pblica. Segundo a Agncia Internacional de Pesquisa de Cncer (International Agency for Research on Cncer IARC), rgo da Organizao Mundial da Sade, o benzeno se classica no Grupo I, ou seja, uma substncia comprovadamente cancergena e que tambm pode causar leucemia em seres humanos. Assim como a IARC, nos Estados

Unidos, a Agncia de Sade e Segurana Ocupacional (National Institute for Occupational Safety and Health NIOSH), bem como a Agncia de Proteo Ambiental (Environmental Protection Agency EPA) tambm incluem o benzeno em suas listas de produtos cancergenos (EPA, 2003a; IARC, 2006; NIOSH, 2006). Da, a importncia considervel em monitorar esses contaminantes em episdios de contaminaes. Em solos contaminados por petrleo e seus derivados, alm dos BTEX, geralmente, outras classes de compostos tambm so alvos de ateno, como os hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA), os compostos orgnicos volteis (COV) totais e os hidrocarbonetos totais de petrleo (HTP). Os compostos BTEX, HPA e HTP so escolhidos, principalmente, pela toxicidade, mobilidade e persistncia no meio ambiente; os COV totais, por representarem o total de emisses gasosas, como perdas por volatilizao provenientes do derramamento. Assim, qualquer contaminao oriunda dessas fontes merece ateno, no apenas pelo contato direto (como a inalao de vapores) desses compostos indevidamente dispostos no solo, mas tambm quanto sua presena em guas utilizadas para o consumo humano.

de tratamento existe uma correlao direta entre o tempo requerido para a remediao da rea e o custo total, como pode ser visto na Figura 1, que mostra a faixa de valor cobrado para a descontaminao de um metro cbico (m3) de solo, usando diferentes tcnicas de remediao.

TIPOS DE TRATAMENTO DE SOLOS O objetivo desse tpico introduzir as tcnicas de remediao mais empregadas atualmente no tratamento de solos contaminados por petrleo e seus derivados, que sero descritas brevemente, a seguir. Para isto, ser exemplicada cada tcnica de remediao: qumica (oxidao qumica in-situ), biolgica (atenuao natural e biorremediao) e fsica (extrao de vapores no solo). Assim, dentre as formas de tratamento existentes, com base no objeto principal do presente artigo, somente a biorremediao ser descrita em detalhes. De modo geral, deve-se salientar que cada tcnica de tratamento dependente de vrios fatores, a saber: 1) condies fsicas, qumicas e biolgicas do local contaminado; 2) concentrao do contaminante e; 3) tempo requerido para a degradao ou a remoo do composto alvo, conforme a tcnica empregada. Em todos os processos
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Incinerao Aterro Lavagem Biorremediao in-situ

820 1640 2460 Custo do tratamento por m3 de solo (dlar)

Oxidao qumica in-situ A oxidao qumica in-situ, consiste na injeo de produtos qumicos reativos diretamente no local contaminado, com o objetivo de degradar rapidamente os contaminantes por meio de reaes qumicas que promovem a oxidao ou a reduo das espcies de interesse presentes em uma determinada rea. Tambm conhecido como ISCO (In-Situ Chemical Oxidation), segundo Brown (2003), esse processo mais frequentemente empregado em locais contendo concentraes elevadas do contaminante, geralmente, presentes na fonte e na pluma de contaminao. A pluma denida como o local onde esto distribudos os contaminantes, normalmente lanados a partir de uma fonte pontual. A extenso e a expanso da pluma, normalmente, prevista com o auxlio de modelos tericos e clculos matemticos, cujos dados so obtidos aps a caracterizao do solo (como a permeabilidade), da gua subterr-

Figura 1. Comparao entre os custos do tratamento de solos empregando diferentes tcnicas de remediao (modicado de EPA) A anlise da Figura 1 permite observar que a biorremediao a tcnica que apresenta o custo de tratamento mais baixo quando comparado s demais. A incinerao caracteriza-se por apresentar custos maiores relacionados ao tratamento de solos e, consequentemente, inviabilidade do processo, dependendo do volume de solo a ser tratado. Utilizando a incinerao como opo de tratamento, dependendo do tipo de composto a ser destrudo, o custo total do processo pode chegar, aproximadamente, em 2.665 dlares para cada m3 de solo tratado. Salienta-se, porm, que aqui o objetivo no desprezar e nem desmerecer uma tcnica ou outra e, sim, elucidar algumas vantagens apresentadas na utilizao da biorremediao. Sendo que esta, assim como qualquer outra tcnica, traz diversas vantagens e limitaes. Por isso, sugere-se que cada caso seja analisado criteriosa e individualmente, principalmente, quando tratar da tomada de deciso para a escolha da tcnica de remediao a ser empregada.

nea (como o gradiente hidrulico, a velocidade e o tipo de recarga) e dos contaminantes que esto sendo despejados. Em reas altamente contaminadas a oxidao qumica pode ser uma etapa de pr-tratamento que promove melhores condies para o emprego de outras tcnicas, como os tratamentos biolgicos. Destes, fazem parte a biorremediao e a atenuao natural monitorada ou acelerada, que geralmente so tcnicas menos onerosas que as qumicas (EPA, 2001a e 2004a). Dentre os processos qumicos emergentes para o tratamento de solos, os processos oxidativos avanados (POA) destacam-se como uma alternativa promissora, pois, envolvem a gerao de espcies qumicas radicalares e altamente oxidantes, como o radical hidroxila (OH). Esses radicais so capazes de destrurem ou hidrolisarem, em curto perodo de tempo, contaminantes considerados de difcil degradao, como os hidrocarbonetos de petrleo. Os POA, em funo de suas ecincias comprovadas na degradao de contaminantes de petrleo e seus derivados, representam, atualmente, uma alternativa importante para a mitigao de problemas ambientais (Andrade, 2005). Dentre as tcnicas qumicas relacionadas com os POA, as mais utilizadas so: reagente de Fenton (H2O2/Fe2+/H+), persulfato (S2O82-), permanganato (MnO4-), oznio (O3/UV; O3/H2O2/UV; O3/-OH; O3/H2O2), H2O2/UV e fotocatlise heterognea (TiO2/UV). O regente de Fenton destaca-se frente aos demais POA, por ser capaz de gerar o radical OH mesmo na ausncia de luz, ao contrrio dos processos que utilizam a radiao ultravioleta para catalisar a reao. Alm dessa vantagem, esse processo, em funo da sua natureza homognea, de fcil implementao, mesmo para a remediao de matrizes complexas, como os solos e as guas subterrneas (Andrade, 2005). No caso particular da remediao de solos, a presena de espcies de ferro de origem natural, encontradas na maioria desses compartimentos ambientais, permite a utilizao do reagente de Fenton apenas por adio do agente oxidante no sistema (Peralta-Zamora & Tiburtius, 2004). Neste caso, dentre os oxidantes disponveis (oznio, perxidos de hidrognio e de clcio, persulfato de sdio, permanganatos de sdio e de potssio), o mais empregado o perxido de hidrognio, que apresenta alguns benefcios em
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relao aos demais oxidantes, como reatividade elevada, custos baixos e facilidades no manuseio e na aplicao. Adicionalmente, em pesquisas voltadas para a otimizao do reagente de Fenton na remediao de matrizes contaminadas por hidrocarbonetos de petrleo, Andrade (2005) demonstra que possvel aumentar a ecincia desse reagente na degradao de BTEX utilizando agentes complexantes no meio reacional. Este processo foi denominado pelo autor de reagente de Fenton modicado (RFM). A partir desses estudos, desenvolveu-se um reagente registrado como FENTOX (patente de inveno PI-0501652-5), que apresenta cintica de reao bastante elevada na degradao de contaminantes orgnicos, como os BTEX. Segundo o autor, a adio de complexantes permite que a degradao de compostos recalcitrantes, mediada pelo RFM, seja facilitada e acelerada. Alm disso, o processo traz como principal vantagem frente ao reagente de Fenton convencional, a possibilidade de trabalhar em matrizes ambientais sem que seja necessrio o condicionamento adequado do local, previamente aplicao dos reagentes. Ressalta-se que, para que o reagente de Fenton convencional tenha ecincia mxima necessrio ajustar o valor de pH para valores prximos a 3,0 (Andrade, 2005).

Tipo de tratamento de solo

Atenuao natural O termo atenuao natural tem sido empregado para descrever a remediao passiva de solo que envolve a ocorrncia de diversos processos, de origens naturais, como a biodegradao, a volatilizao, a disperso, a diluio e a adsoro, promovidos na subsuperfcie. Dentre estes, somente a biodegradao, facilitada por microorganismos, destri sicamente os contaminantes de interesse. Os demais processos citados envolvem, basicamente, a transferncia dos contaminantes de um local para outro ou a reteno do contaminante, no caso do processo de soro. A principal vantagem do processo de atenuao natural que, mesmo sem o acrscimo de nutrientes no solo ou a adequao de qualquer condio ambiental, a reduo do contaminante pode acontecer de maneira
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eciente e contnua. Isso ocorre devido, principalmente, ao processo de adaptao natural da microbiota nativa existente no solo impactado. Neste caso, esses microorganismos passam a utilizar em seus metabolismos os compostos orgnicos poluentes como fontes de carbono, provocando, ento, a reduo das concentraes dessas substncias ao longo do tempo (Robb & Moyer, 2001). Alm disso, o solo contaminado est sujeito aos processos intempricos de origem natural, nos quais, no somente os processos biolgicos (como o processo descrito anteriormente), mas tambm os fsicos e qumicos, como a lixiviao (processo atravs do qual ocorre o arraste vertical, pela inltrao da gua, de partculas, dissolvidas ou em suspenso, da superfcie do solo para as camadas mais profundas) e a volatilizao, podem estar envolvidos na reduo da concentrao do poluente no solo. A utilizao desse processo, como opo principal de remediao, requer algumas ressalvas, haja vista que as condies do meio, inclusive o tipo e a concentrao dos contaminantes, podem no contribuir para a reduo de substncias txicas e recalcitrantes e, consequentemente, aumentam os riscos de contaminao de pessoas e animais. Por esses motivos, o emprego da atenuao natural permitido e at recomendado, desde que sejam respeitados os resultados obtidos em estudos preliminares sobre a avaliao de risco da exposio da populao, elaborada dentro de um cenrio real para o uso futuro da rea. Normalmente, processos de atenuao natural costumam durar de meses a anos. Por isso, o tempo e a porcentagem de degradao dos contaminantes podem ser muito lentos e at imprevisveis. justamente por essa considerao, que, na maioria dos casos, necessrio que esse processo de tratamento seja monitorado rigorosa e periodicamente. Este processo, denominado de atenuao natural monitorada (ANM), um dos mais utilizados nos EUA para a reduo do impacto ambiental causado por contaminaes de solos com compostos orgnicos. Devido aos custos elevados envolvidos na remediao de reas contaminadas, a atenuao natural com monitoramento tem sido adotada como uma possibilidade de interveno em locais contaminados por substncias orgnicas biode22

gradveis, nas condies naturais do meio. Esta alternativa baseia-se na capacidade de atenuao natural de contaminantes, no solo e nas guas subterrneas, a qual, em geral, ocorre durante um longo perodo de tempo, no qual no devem ocorrer riscos sade pblica, ao meio ambiente e aos demais bens a proteger. A adoo da tcnica deve ser precedida de um estudo criterioso que inclua a previso da evoluo das plumas de contaminao, a metodologia de avaliao de risco e o monitoramento durante o perodo necessrio para que se atinjam as metas de remediao desejveis. Apesar disso, considerando principalmente o tempo necessrio para a reabilitao da rea, a ANM pode ser onerosa, gerando custos signicativos, caso a atenuao se estenda por um longo perodo de tempo. Casos como este, comumente, exigem o tratamento in-situ ou ex-situ do solo impactado (EPA, 2004b).

Extrao de vapores no solo (SVE) A extrao de vapores no solo, tambm conhecida como SVE (Soil Vapor Extraction), uma tcnica de remediao comumente empregada no tratamento de solos contaminados, porm, deve-se ressaltar que essa tcnica aplicada somente zona no-saturada (zona que se situa imediatamente abaixo da superfcie topogrca e acima do nvel fretico, onde os espaos entre as partculas esto parcialmente preenchidos por gases, essencialmente ar atmosfrico e vapor de gua, e por gua. A gua contida nessa zona encontra-se presso atmosfrica, podendo ser utilizada pelas razes das plantas ou contribuir para o aumento das reservas de gua subterrnea). De modo geral, a SVE baseia-se na aplicao de vcuo em pontos estratgicos do solo, a m de induzir o uxo controlado de ar e, ento, remover os contaminantes presentes no solo, sobretudo, nas regies da subsuperfcie. Nessa tcnica, os gases extrados devem, obrigatoriamente, passar por etapas de tratamento de vapores, antes de serem lanados para a atmosfera. H duas condies-chave requeridas para o emprego de SVE. A primeira, que o solo deve conter uma fase gasosa, atravs da qual o ar contaEcl. Qum., So Paulo, 35 - 3: 17 - 43, 2010

minado ir passar. Esta condio geralmente limita o emprego da SVE na zona vadosa (o mesmo que zona no-saturada). Em alguns casos, para melhorar a ecincia dessa tcnica, a gua subterrnea bombeada para abaixar o nvel dgua (N.A.) e, consequentemente, aumentar a rea da zona no-saturada, permitindo a aplicao da SVE em reas classicadas anteriormente como zona saturada (zona que pode ser constituda por diferentes nveis ou camadas de solo ou formaes rochosas, onde todos os espaos porosos ou faturas existentes esto completamente preenchidos por gua. O limite superior dessa zona designado como o nvel fretico). A segunda condio, que os contaminantes devem ser capazes de se transferirem de outras fases (slida, aquosa ou orgnica) para a fase gasosa, sob a aplicao de vcuo. Este requerimento limita a SVE ao tratamento de compostos volteis ou semivolteis, que constituem a maior parte dos contaminantes orgnicos de interesse, como os BTEX. Em suma, no tocante s extraes dos contaminantes por SVE, duas tcnicas so utilizadas: uma denominada vertical e outra horizontal. No primeiro caso, os gases so extrados a partir de pontos especcos construdos (perfurados) sobre a pluma de contaminao. Normalmente, o processo eciente em profundidades maiores que um metro abaixo da superfcie do solo. A segunda tcnica, extrao horizontal, na maioria das vezes, dependendo da geometria da pluma de contaminao, na maioria das vezes, instalada em conjunto com a vertical, cuja nalidade melhorar a ecincia da extrao e evitar que os gases contaminantes sejam lanados na atmosfera, antes de tratamento adequado. Os poos de extrao de vapor devem ser dispostos de forma que as suas zonas de inuncia (geralmente determinadas em teste piloto) se interceptem e devem ser adequadamente projetados e instalados, para evitar zonas potenciais de estagnao (reas impactadas onde o ar no removido pelos poos de extrao). A tcnica SVE aplicada somente para os compostos orgnicos volteis que apresentam o valor da constante de Henry maior que 0,01 ou a presso de vapor maior que 0,5 mm de Hg. Outros fatores, como a umidade e a quantidade de matria orgnica, afetam consideravelmente a permeabilidade do solo e, por consequncia, diEcl. Qum., So Paulo, 35 - 3: 17 - 43, 2010

minuem a ecincia do sistema de extrao. O fato de o processo envolver uxo contnuo de ar no solo ocasiona, como vantagem, a possibilidade de promover e estimular a biodegradao in-situ dos compostos de baixa volatilidade, que possam estar presentes no local. A limitao do sistema de SVE que ele se baseia fundamentalmente na aplicao de uxos de ar, o que o condiciona em trs fatores especcos: volatilidade do contaminante; ausncia de ar em ambientes saturados com gua e permeabilidade do solo. Normalmente, a SVE no ir funcionar bem em solos de baixa permeabilidade, como aqueles siltosos e argilosos com baixa porosidade, ou em camadas muito saturadas, como a franja capilar ou logo abaixo do nvel dgua. Entretanto, a ampliao das taxas de vcuo aplicado com bombas especiais mostrou-se efetiva em alguns solos de baixa permeabilidade (CETESB, 2004). Mesmo assim, a maior desvantagem dos tratamentos fsicos que estes processos no so de carter destrutivo e, sim, de transferncia de massa, que apenas promovem a transferncia dos contaminantes de um local para outro, sem que haja a destruio dos mesmos (DiGiulio & Varadhan, 2001; EPA, 2004c).

BIORREMEDIAO DE SOLOS A biorremediao envolve a utilizao de microorganismos, de ocorrncia natural (nativos) ou cultivados, para degradar ou imobilizar contaminantes em guas subterrneas e em solos. Neste caso, geralmente, os microorganismos utilizados so bactrias, fungos lamentosos e leveduras. Destes, as bactrias so as mais empregadas e, por conseguinte, so consideradas como o elemento principal em trabalhos que envolvem a biodegradao de contaminantes. So denidas como qualquer classe de microorganismos unicelulares, geralmente agregados em colnias, que vivem em compartimentos ambientais diversos. So importantes, em funo de seus efeitos bioqumicos e por destrurem ou transformarem os contaminantes potencialmente perigosos em compostos menos danosos ao ser humano e ao meio ambiente (NRC, 1993).

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No que diz respeito aos tipos de utilizao da tcnica, quanto ao local de tratamento, a biorremediao in-situ a mais empregada no mundo. Porm, independente do local de aplicao, a biorremediao, assim como as demais tcnicas qumicas de degradao, tem como objetivo principal a mineralizao completa dos contaminantes, ou seja, transform-los em produtos com pouca ou nenhuma toxicidade (incuos), como CO2 e gua. Em suma, os microorganismos metabolizam as substncias orgnicas, das quais se obtm nutrientes e energia. Sendo que, para que isso ocorra, os microorganismos devem estar ativos para desempenharem a sua tarefa de biodegradao. Um esquema geral e simplicado da ao de microorganismos em processos de biorremediao mostrado na Figura 2 (EPA, 2001b).
Legenda: 1- Microorganismo 2- Contaminante (como petrleo ou outro composto orgnico) 1 2 1 2 1 2 1 2 1

Microorganismo metaboliza o contaminante orgnico

Microorganismo digere o contaminante e o converte em gases incuos (CO2) e em gua (H2O)

Microorganismo libera CO2 e H2O no local de tratamento

Modificado de EPA

Figura 2. Esquema simplicado da ao de microorganismos em processos de biorremediao (EPA, 2001b) Genericamente, os microorganismos nativos da subsuperfcie podem desenvolver a capacidade de degradar contaminantes aps longo perodo de exposio. Normalmente, estes seres microscpicos se adaptam em baixas concentraes de contaminantes e se localizam nas regies externas pluma de contaminao e, muito dicilmente, estaro presentes na fase livre (fase orgnica concentrada). Os compostos orgnicos so metabolizados por fermentao, respirao ou co-metabolismo (CETESB, 2004). Portanto, o processo de biorremediao pode ser aerbico ou anaerbico, requerendo oxignio ou hidrognio, respectivamente. Na maioria dos locais, a subsuperfcie carente dessas espcies (oxignio ou hidrognio), o que impede os microorganismos de se reproduzirem e degradarem completamente
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o contaminante alvo. Alm desse dois processos, a biorremediao tambm pode ocorrer de forma co-metablica (Vidali, 2001). Na biorremediao aerbica, que requer um meio oxidante, o oxignio atua como receptor de eltrons e os contaminantes so utilizados pelos microorganismos como fontes de carbono (doador de eltrons), necessrias para manter as suas funes metablicas, incluindo o crescimento e a reproduo. Por exemplo, os compostos BTEX cumprem essa funo como doadores de eltrons, caso haja receptores sucientes (oxignio dissolvido) para que a reao ocorra. Quando o oxignio totalmente consumido, os microorganismos passam a utilizar outros receptores naturais de eltrons disponveis no solo, sendo que esse consumo ocorre na seguinte ordem de preferncia: nitrato
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(reao de desnitricao), mangans, ferro, sulfato e dixido de carbono, sendo este, convertido em cidos orgnicos para gerar o metano (Aelion & Bradley, 1991). A biorremediao anaerbica, que requer um meio redutor, ocorre pela ao de espcies doadoras de eltrons, responsveis pela degradao, principalmente, dos poluentes halognicos. Trata-se do fenmeno pelo qual os microorganismos, ao metabolizarem fontes alternativas de carbono (que no sejam os contaminantes de interesse), liberam compostos inorgnicos hidrogenados, hidretos (H-), que reagem com as molculas do contaminante e substituem um tomo de cloro (hidrogenlise) ou removem simultaneamente dois tomos de cloro adjacentes originando uma ligao dupla entre os tomos de carbono. A biorremediao anaerbica in-situ ideal para ser utilizada em locais contaminados por compostos organoclorados, como o percloroetileno (PCE), uma vez que a fonte de carbono estimula nas bactrias a reao denominada halorespirao ou haloeliminao. Embora esse princpio, tambm denominado de desclorao redutiva, seja aparentemente simples, a diculdade da tcnica est em criar um modelo ideal de fonte de carbono para um determinado microorganismo. Esta fonte de carbono deve conter compostos que sejam preferencialmente e facilmente metabolizados pelos microorganismos na presena dos contaminantes (Acton & Barker, 1992). Apesar do tratamento anaerbico ser menos comum que o aerbico, existe atualmente uma tendncia de se promover a biorremediao anaerbica, utilizando como fontes de carbono, melao de cana, cido ltico, protenas do leite e metanol. Considerando o melao de cana (caso incipiente brasileiro, subproduto da indstria sucroalcooleira), importante ressaltar a necessidade de estudos mais avanados e detalhados, envolvendo, principalmente, a ocorrncia de diferentes tipos de fermentaes. Normalmente, tm-se observado que determinados processos de fermentaes podem aumentar consideravelmente os riscos operacionais. Isto ocorre, especialmente, em virtude da metanognese (etapa nal no processo global da degradao anaerbica de compostos orgnicos, efetuada pelas Archaebacterias metanognicas, tendo como subprodutos o metano e o dixido de carbono), que pode resultar
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em alguns inconvenientes, como alteraes do potencial redox (Eh) da matriz estudada, o que pode provocar a solubilizao indesejvel de metais e, consequentemente, a contaminao do local por estas espcies (Nakagawa & Andra, 2006). A biorremediao co-metablica aquela na qual a degradao ocorre pela ao de enzimas produzidas por microorganismos para outros ns. uma tcnica praticamente idntica s anteriores, sendo que, do ponto de vista bioqumico, rege o princpio das reaes de xido-reduo. No caso especco do co-metabolismo, caso no haja o substrato principal, ou seja, fontes preferenciais de carbono, a degradao mediada pelos microorganismos no ocorre para um dado componente, denido como contaminante co-metabolizado. Por outro lado, neste caso especco, na presena de uma fonte de carbono, a metabolizao do substrato primrio poder gerar enzimas capazes de atuar na degradao do contaminante de interesse (Garnier et al., 2000). No obstante, em poucos casos as condies naturais do local contaminado fornecem todas as substncias essenciais, em quantidades sucientes, para que a biorremediao possa ocorrer sem a interveno humana. Esse processo natural tambm conhecido como biorremediao intrnseca e utilizada, com sucesso, em alguns trabalhos (Borole et al. 1997; Chen et al., 2006; Troquest et al., 2003). Todavia, mesmo quando o meio totalmente acondicionado ao cultivo dos microorganismos, a biodegradao pode ser afetada, principalmente, devido capacidade intrnseca de cada microorganismo de metabolizar uma substncia qualquer. Por exemplo, de acordo com Embar et al. (2006), alguns microorganismos sobrevivem em condies ambientais extremamente adversas. Adicionalmente, pesquisas comprovam que diferentes microorganismos podem degradar diferentes substncias, dentre estas, substncias recalcitrantes, como os hidrocarbonetos de petrleo. Em alguns casos, certos microorganismos so mais especializados em degradarem contaminantes especcos. Por exemplo, para uma mesma classe de substncias, como os compostos organoclorados, alguns microorganismos podem degradar contaminantes como o dicloroetano e o cloreto de vinila, porm, no mesmo local no conseguem degradar o tricloroetano. Contudo, pes25

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quisas sugerem que devido elevada diversidade de compostos em solos contaminados por petrleo e derivados, estudos preliminares biorremediao so de suma importncia para o tratamento dessas matrizes ambientais (Embar et al., 2006). Salienta-se que, a princpio, o fator crtico para denir se a biorremediao a tcnica mais apropriada para o tratamento do local contaminado a biodegradabilidade do contaminante. Por isso, o estudo detalhado de cada parmetro que afeta a biodegradao deve ser feito cautelosamente pelos responsveis do projeto de remediao. O item a seguir descreve a inuncia desses fatores na biorremediao.

Fatores que inuenciam a biodegradabilidade dos contaminantes e a problemtica da contaminao de solos por petrleo Embora vrios contaminantes podem ser metabolizados por microorganismos, alguns so mais facilmente biodegradados do que outros. No caso dos hidrocarbonetos de petrleo, por exemplo, muitas reas contaminadas possuem uma mistura complexa de compostos orgnicos, sendo que a maioria destas substncias, certamente, no metabolizada na mesma velocidade. Em vez disso, as taxas de degradao dos diversos compostos que so metabolizados so diferentes e dependentes de vrios fatores. Em especial, a velocidade de degradao comumente depende da concentrao do contaminante e da quantidade de espcies catalisadoras, como as enzimas geradas on-site pelos microorganismos. Nesse contexto, a quantidade de catalisador presente, de certa forma, representa o nmero de microorganismos hbeis em metabolizar o contaminante, bem como a quantidade de enzimas produzidas por cada clula. Ento, qualquer fator que afeta a concentrao do contaminante, o nmero de microorganismos presentes ou a quantidade de enzimas especcas, pode aumentar ou diminuir a velocidade da biodegradao do contaminante. Em suma, as medidas corretivas a serem adotadas em quaisquer projetos que envolvam a biorremediao dependem de vrios fatores, dentre eles, pode-se citar: A) os tipos e as quantidades
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dos microorganismos e B) as condies fsicas e qumicas do stio contaminado (como pH, umidade, temperatura, salinidade, teor de oxignio e quantidade de nutrientes). Os nutrientes, que geralmente so representados por nitrognio, fsforo e potssio (NPK), durante a biorremediao, normalmente so utilizados na forma de nitrato de amnio (NH4NO3), di-hidrogeno fosfato de potssio (KH2PO4) e nitrato de potssio (KNO3), respectivamente (Betancur-Galvis et al., 2006). Alm das condies citadas, de extrema importncia o conhecimento prvio do teor de matria orgnica, o qual pode ser expresso pela quantidade de carbono orgnico total no meio. Adicionalmente, Hutchinson et al. (2003) constataram que o fator principal que inuencia na biorremediao de solos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo a atividade microbiolgica. Neste caso, Alexander (1977) discutiu, em detalhes, os efeitos desses fatores sobre os microorganismos. Para estes pesquisadores, a atividade e a populao microbial esto fortemente associadas com os contedos de gua e de nutriente nos solos, com as espcies de plantas e com os tipos de contaminantes. Alm disso, a atividade microbiolgica afetada, sobretudo, pelo valor do pH (Figura 3) e pela temperatura (Figura 4) dos solos (Tate, 1995).

Figura 3. Variao da atividade biolgica com a mudana do pH dos solos (modicado de Tate, 1995) No tocante ao valor do pH, como mostra a Figura 3, observa-se que a faixa ideal de pH para que os microorganismos tenham atividade mxima entre 6,5 e 8,5. De modo similar, Vidali (2001) tambm sugere que o valor do pH do meio reacional deva ser mantido prximo da neutralidade, no qual h o predomnio de bactrias e de fungos no local contaminado. Por outro lado, quando h diminuio do valor do pH, por exemplo, em funo dos subprodutos cidos gerados durante a biorremediao, sugere-se que se faa imediatamente a correo do pH do solo, caso contrrio, a ecincia do processo poder ser diminuda consideravelmente. Normalmente, essa correo feita por meio de calagem, processo atravs do qual se aplica calcrio ao solo, objetivando neutralizar a acidez e, ento, propiciar condies para o desenvolvimento de plantas e de microorganismos. Salienta-se, porm, que nos solos cidos o desenvolvimento dos microorganismos bastante reduzido, principalmente das bactrias xadoras do nitrognio atmosfrico, alm de tornar o fsforo de difcil aproveitamento pelos vegetais. Nesta situao, embora a biodegradao de hidrocarbonetos de petrleo seja, na maioria das vezes, realizada por bactrias, pesquisas mostram que a utilizao de fungos uma opo considerada bastante vivel. Esses microorganismos tm sido mais ecientes que as bactrias para agirem em condies ambientais adversas, como em valores extremos de pH (menor que 5 e maior que 10), em concentraes limitadas de nutrientes e em solos com teores reduzidos de umidade (Vidali, 2001).

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Figura 4. Resposta tpica de uma populao de bactrias mesoflicas em funo da variao da temperatura dos solos (modicado de Tate, 1995) A anlise da Figura 4 mostra que a faixa de temperatura ideal para os microorganismos metabolizarem os contaminantes com ecincia tima est entre 25 e 30 oC, na qual se encontra a temperatura mdia da maior parte dos solos do Brasil contendo reas degradadas por contaminao de hidrocarbonetos do petrleo (Tate, 1995). Analogamente, estudos realizados pela EPA (1995) constatam que a atividade microbiana bastante comprometida em temperaturas abaixo de 10 C e acima de 45 C. Esta uma excelente caracterstica para a utilizao de biorremediao em solos tipicamente brasileiros e, portanto, refora a probabilidade da implantao dessa tcnica em nmeros maiores de locais contaminados. Alm disso, verica-se que a temperatura do solo varia diariamente nas proximidades da superfcie, em solos com baixa densidade de cobertura vegetal. Abaixo de 50 cm, a variao da temperatura dos solos pouco signicativa. Por outro lado, a presena da vegetao sobre a rea contaminada tambm afeta muitos atributos fsicos dos solos, incluindo estrutura, porosidade, condutividade hidrulica e taxa de inltrao. Esses atributos, em geral, inuenciam positivamente a atividade microbiolgica por regular o transporte requerido de gua e de nutrientes atravs do perl dos solos e por controlar a aerao da zona vadosa. Alm do mais, a biorremediao de hidrocarbonetos de petrleo assistida por microorganismos, que, em geral, dependem fortemente das quantidades de umidade e de oxignio adequadas. As propriedades fsicas dos solos inuenciam o transporte de ambas espcies, oxignio e gua. Nesse caso, para a biorremediao de solos, os contedos de gua entre 50 e 80 % da capacidade e o teor de O2 dissolvido maior que
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1 mg L-1, geralmente, so timos para a atividade microbiolgica (Morgan & Watkinson 1989). Portanto, conforme aventado na presente reviso, observa-se que os solos possuem, naturalmente, diversos microorganismos com atividades metablicas variadas e que so capazes de degradar ecientemente diferentes contaminantes, como o petrleo e seus derivados. Contudo, em alguns casos, a contaminao de solos por estas substncias tem se tornado uma problemtica mundial, principalmente, devido diculdade de reabilitar a rea contaminada. Estes problemas tm ocorrido, pois uma das principais diculdades envolvendo a descontaminao dessas matrizes est relacionada, entre outros fatores, presena de materiais argilominerais. Estes argilominerais, quando presentes em quantidades elevadas no solo contaminado, podem reduzir consideravelmente a ecincia do processo de biorremediao. Sabe-se que os solos argilosos, de modo geral, apresentam baixa permeabilidade, o que pode comprometer signicativamente tanto a difuso de oxignio, que o elemento fundamental ao processo aerbico de degradao, bem como a incorporao de nutrientes. evidente que a estrutura dos solos tambm exerce inuncias signicativas sobre as caractersticas fsico-qumicas. Dependendo da estrutura, mesmo que os solos sejam argilosos, eles podem ter permeabilidades elevadas. Os latossolos argilosos, por exemplo, que ocupam extensas reas no Brasil, apresentam comumente estrutura granular e, desta forma, elevada permeabilidade. Alm da presena de argilominerais, muitos compostos orgnicos apresentam como caractersticas fsico-qumicas, baixa solubilidade em gua, elevada anidade pela matria orgnica do solo, como os cidos hmico e flvico e, consequentemente, baixa taxa de transferncia de poluentes da fase slida para a aquosa. Sendo assim, devido principalmente s caractersticas hidrofbicas, esses contaminantes tendem a se adsorverem nos colides do solo dicultando a ao de microorganismos e, por conseguinte, inviabilizando a tcnica de biorremediao. Portanto, outra limitao da biorremediao surge devido baixa disponibilidade de contaminantes orgnicos, como os HPA e outros hidrocarbonetos de petrleos. Schwarzenbach et al. (1993) presenciaram e

relataram sobre estas e outras propriedades para os HPA estudados. Nesse contexto, a utilizao de um agente tensoativo pode minimizar essas diculdades e aumentar a ecincia da biorremediao, haja vista que os problemas relativos baixa solubilidade em gua, elevada adsoro e baixa transferncia dos hidrocarbonetos para a fase aquosa, so minimizados. De acordo com Ou (2000), de fato, a maior ecincia na biorremediao de solos contaminados com hidrocarbonetos de petrleo pode ser alcanada empregando-se surfactantes. Estes compostos diminuem a tenso supercial entre a fase aquosa (na qual normalmente ocorre a degradao do contaminante) e a fase orgnica (na qual o contaminante se encontra inicialmente presente), favorecem a dessoro e, consequentemente, aumentam a solubilidade dos contaminantes. Os surfactantes, como o dodecil sulfato de sdio, so capazes de emulsicar e aumentar a solubilidade dos contaminantes hidrofbicos, tornando-os mais acessveis aos microorganismos (CLU-IN, 2006). Contudo, conclui-se que a degradao biolgica de compostos orgnicos alcanada com ecincia somente em condies naturais favorveis, que proporcionem interaes otimizadas entre o microorganismo e o solo, entre o microorganismo e o contaminante, assim como a relao mtua dos microorganismos entre si. Por exemplo, Coulon & Delille (2006) e Hawrot & Nowak (2006) investigaram que as propriedades fsicas, qumicas e microbiolgicas do solo e as condies climticas, podem alterar a taxa de biodegradao de poluentes em solos contaminados, por exemplo, com leo diesel. Neste caso, podem ser empregados nutrientes, como o nitrognio, o fsforo e o potssio, alm de procedimentos para a correo de umidade e o controle da aerao para acelerar os processos de biorremediao. A Figura 5 mostra o esquema tpico de um projeto envolvendo a aplicao in-situ da biorremediao (EPA, 2003b).

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Bo mba gua Nutrie ntes Aerao Tanque de mistura Tra tamento de gua Descar te

Tanque de combus tvel co m vaz amento ( fonte pontual de cont amina o ) Poo de injeo de nutrientes e pa ra o co ntrole d e aera o

ZONA VADOSA

ganismos indgenos apresentarem a capacidade de descontaminar o poluente alvo. A ANA, quando utilizada de forma controlada, capaz de acelerar o processo natural e diminuir o tempo de biorremediao do local, sendo que para isto, normalmente adiciona-se um ou mais dos seguintes compostos: oxignio, hidrognio e nutrientes. A adio de nutrientes e a otimizao das condies ambientais permitem aumentar a taxa de crescimento e as atividades metablicas de microorganismos, com o consequente aumento da velocidade e da porcentagem de biodegradao. Neste contexto, a bioestimulao pode oferecer custo mais baixo em relao s demais tcnicas de biorremediao (EPA, 2004d).

Poo de monitoramento

ZONA SATURADA

Bioaumentao
A bioaumentao, apesar de ser uma tcnica relativamente recente e ainda em fase de desenvolvimento, encontra-se bem documentada na literatura. Resumidamente, ela caracterizada pelo aumento da microbiota nativa atravs da inoculao de microorganismos exgenos (alctones). Estes microorganismos so pertencentes espcie no nativa de determinada regio biogeogrca, introduzidos em um ecossistema, podendo persistir e at reproduzir-se por um tempo, participando ou no de interaes e de transformaes ecolgicas (EPA, 2004d). A utilizao da bioaumentao em solos, basicamente, justicada pela necessidade 1) de uma biodegradao rpida do composto poluente e 2) da reduo do perodo de adaptao que normalmente antecede o processo de degradao pelos microorganismos autctones. O emprego desta tcnica depende, primeiramente, da concordncia e da autorizao de rgos governamentais e de agncias de scalizao ambiental, como a Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (CETESB). A aprovao da bioaumentao como estratgia de biorremediao depende de vrios fatores, dentre os quais, os tipos de microorganismos utilizados e a rea de aplicao. Nessa conjuntura, um ressalva deve ser feita no que diz respeito utilizao da bioaumentao em solos tipicamente brasileiros. At junho de 2007, no Brasil, era proibida a utilizao desta tcnica em quaisquer condies e locaEcl. Qum., So Paulo, 35 - 3: 17 - 43, 2010

Sentid o do fluxo da gua s ubterr nea

Po o de extrao de g ua subterrnea

Modific ado de EPA

Figura 5. Esquema tpico do tratamento de solos e de guas subterrneas por biorremediao (EPA, 2003b) Tcnicas de utilizao da biorremediao Desde os meados dos anos 80 do sculo XX, as estratgias de biorremediao tm sido adotadas como uma maneira ecaz e de custo baixo para o tratamento de solos contaminados com petrleo (Delno & Miles, 1985; Tsao et al., 1998; van der Hoek et al., 1989). As diferentes estratgias de biorremediao, em geral, visam aumentar a populao microbiana criando condies ambientais favorveis ao seu desenvolvimento (Silva et al., 2004). A seguir, sero apresentadas duas das tcnicas principais de biorremediao in-situ, a primeira a atenuao natural acelerada, tambm conhecida por bioestimulao e, a segunda, trata-se da bioaumentao. Em seguida, ser descrita uma das tcnicas mais utilizadas para o tratamento ex-situ de solos contaminados, que a biorremediao por biopilhas.

o)
A tcnica denominada de atenuao natural acelerada (ANA), diferente da ANM (tcnica descrita anteriormente), uma opo de biorremediao in-situ na qual se busca, especialmente, instigar o crescimento da populao microbiana nativa. Isto ocorre, fundamentalmente, pelo condicionamento do hbitat natural desses microorganismos. Portanto, na ANA, a idia fundamental condicionar o local contaminado, de modo a acelerar o processo de atenuao natural, estimulando, sobretudo, o desenvolvimento dos microorganismos autctones (indgenos). Ressalta-se aqui, que esses microorganismos, para serem denidos com tal, devem ser nativos da regio biogeogrca, em que se pretende a sua aplicao, participando de funes reprodutivas, de ciclo de nutrientes e de uxos de energia (EPA, 2004d). Para que esta tcnica de biorremediao seja utilizada de forma eciente, o primeiro requisito a ser atendido a necessidade dos microorEcl. Qum., So Paulo, 35 - 3: 17 - 43, 2010

Atenuao natural acelerada (bioestimula30

lizaes. No entanto, em 22 de junho de 2007, a CETESB, atravs da Deciso de Diretoria (DD) no 103/2007/C/E (essa DD possui carter normativo), publicou a seguinte informao: ... A utilizao de microorganismos alctones nos sistemas de remediao dever seguir as normas tcnicas CETESB e as legais pertinentes... (CETESB, 2007a). Assim sendo, aps essa data, a utilizao da bioaumentao passou a ser permitida no Brasil, mais especicamente no Estado de So Paulo, porm, desde que sejam seguidas as normas pertinentes, explicitadas no referido documento. Dentre as normas a serem seguidas, destaca-se a norma tcnica da CETESB no L1.022, de junho de 2007, que trata sobre o uso de produtos biotecnolgicos, constitudos de microorganismos, destinados ao tratamento de euentes lquidos, de resduos slidos e remediao de solos e de guas (CETESB, 2007b). Atualmente, muitos produtos tm sido lanados no mercado mundial com o intuito de auxiliar no tratamento de solos contaminados por petrleo. Alguns produtos comerciais apresentam, em sua composio, microorganismos exgenos que so utilizados com o objetivo de induzir a bioaumentao do solo a ser tratado. A m de melhorar as condies de biodegradao do contaminante, ou seja, de favorecer a bioestimulao, determinados produtos tambm apresentam em sua formulao, micronutrientes, enzimas de ao externa e surfactantes que facilitam e estimulam a ao microbiana sobre os poluentes. Neste caso, as enzimas de ao externa atuam favorecendo a oxidao dos compostos de difcil degradao em compostos de fcil assimilao pelos microorganismos. Existem, porm, dois tipos bsicos de enzimas que na presena de O2 atuam na oxidao de hidrocarbonetos: as monoxigenases, que atuam sobre os n-alcanos; e as dioxigenases, que atuam sobre os compostos aromticos e cclicos. Por outro lado, os surfactantes agem de maneira a disponibilizar o petrleo para que este seja mais facilmente degradado pela microbiota (Shuhong et al., 2006). Inversamente s vantagens apresentadas, em casos nos quais a bioaumentao de solos se mostra ineciente, o insucesso da introduo de microorganismos poder estar relacionado com alguns fatores, como a limitao de nutrientes, a
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eliminao por predatismo de microorganismos introduzidos, a concentrao de poluente orgnico muito baixa para suportar o desenvolvimento e, at mesmo, aos fatores ambientais desfavorveis ao crescimento desses microorganismos (Alexander, 1999; Sims et al., 1992). Alm disso, o lanamento de microorganismos alctones pode acarretar em riscos considerveis ao meio ambiente. Desta maneira, em funo dos riscos ambientais associados, por exemplo, ao emprego de produtos biotecnolgicos, de suma importncia que tais produtos sejam devidamente avaliados antes de sua aplicao para, ento, promover a degradao de poluentes em sistemas de tratamento de resduos ou em locais contaminados. Este procedimento deve ser realizado cuidadosamente, visando a sua utilizao como prtica segura e ecaz dos pontos de vista ambiental e sanitrio. Segundo a CETESB, os produtos biotecnolgicos podem ser constitudos de microorganismos viveis, metablitos (como as enzimas) ou, ainda, misturas de microorganismos e metablitos contendo produtos orgnicos e inorgnicos, atuando como conservantes, estabilizantes, nutrientes, ativadores e outros. A grande preocupao, portanto, que os microorganismos viveis presentes no produto acabado podem reproduzir-se, disseminar-se por novos locais e at transferir material gentico para os microorganismos naturalmente presentes no ambiente. Do mesmo modo, as enzimas podem catalisar reaes que interram no metabolismo normal de organismos originariamente existentes e, alm disso, a introduo de nutrientes e de outros compostos podem provocar o desequilbrio do ecossistema (CETESB, 2007b). Apesar de toda essa discusso, a respeito da insero de microorganismos no-indgenos no solo, Top & Springael (2003) defendem que o uso de microorganismos no modicados normalmente no constitui problema, contrariamente ao que se verica com os microorganismos geneticamente modicados, cuja utilizao requer uma avaliao mais criteriosa. Assim sendo, as tcnicas biolgicas que envolvem o uso da bioaumentao, isto , que empregam a adio de microorganismos exgenos, devem ser analisadas criteriosamente devido, principalmente, aos riscos ambientais que a insero de um microorganismo no nativo ao solo pode gerar. Por esse motivo,
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as tcnicas de biorremediao que aplicam apenas o uso da microbiota nativa podem vir a produzir resultados ecazes e de menor impacto ao meio ambiente (Silva et al., 2004).

Ponto de monitoramen to de vapores

Ponto de entrada e sada de ar

Coleta e tratamento de lixiviado Adio de nutrientes e de umidade

Biopilhas
O tratamento por biopilhas controlado por processos biolgicos ex-situ sob condies aerbicas. Essa tcnica de biorremediao envolve basicamente a disposio do material contaminado em montes denominados de biopilhas. Para o emprego desta tcnica, inicialmente o solo escavado e, em seguida, preparado e colocado em biopilhas, onde feita a estimulao da atividade microbiana atravs de aerao, da adio de nutrientes e do aumento da umidade do solo, com o propsito de promover a biodegradao dos contaminantes de interesse. O esquema caracterstico do sistema de um tratamento por biopilhas mostrado na Figura 6 (EPA, 2004e).

Injeo de Ar

Solo contaminado (tratamento ex-situ )

Modificado de EPA

Figura 6. Esquema ilustrativo de um tratamento por biopilha (EPA, 2004e) As biopilhas so construdas sobre uma base impermevel para reduzir o potencial de migrao do lixiviado da camada supercial para a subsuperfcie do solo. Alm disso, elas so cobertas por uma membrana, tambm impermevel, para prevenir a liberao de contaminantes volteis e semivolteis do solo para a atmosfera, bem como para proteger o solo de intempries naturais, como ventos e chuvas (USAEC, 2003a). Os materiais a serem tratados devem ser submetidos a um estudo prvio, para a comprovao da tratabilidade, mediante a realizao de testes fsico-qumicos e de ensaios biolgicos e posterior otimizao das condicionantes em laboratrio. O propsito destes estudos avaliar o tipo e a concentrao dos poluentes, a presena de possveis inibidores da biodegradao, a estrutura do material, os teores timos de umidade, de nutrientes e de oxignio, a temperatura e os demais fatores que inuenciam no processo (EPA, 2004e). Esta tcnica de biorremediao apresenta como principal vantagem a possibilidade de maior controle das condies fsicas, biolgicas e qumicas da matriz contaminada e, consequentemente, a obteno de cinticas de reao mais rpidas e a reduo do tempo de degradao do contaminante quando comparado ao processo de atenuao natural. Particularmente, quando as condicionantes do meio so bem controladas, as biopilhas tm sido bastante ecientes na reduo da concentrao de compostos derivados de petrleo presentes em solos. A maior limitao desta tcnica est relacionada remoo do solo contaminado, tendo em vista que o processo de tratamento ocorre no modo ex-situ. Neste caso, apesar de possibilitar a eliminao dos principais focos de contaminao na zona no-saturada, essa prtica deve ser realizada com cautela, pois pode propiciar a intensicao do risco s vias de exposio humana, como a inalao de vapores e de materiais particulados contaminados, cuja causa advinda da transferncia do passivo de um compartimento ambiental para outro (durante a escavao, o armazenamento, o transporte e a redisposio dos solos contaminados). O passivo ambiental dessa rea composto no apenas do material que est sobre o solo e pode ser contabilizado facilmente, mas tambm de todo o contaminante que possivelmente foi lixiviado da superfcie do solo e pode estar no aqufero ou em bolses localizados na subsuperfcie. Alm disso, a remoo e a redisposio de solos, dependendo da quantidade do material removido,

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podem se tornar a alternativa mais onerosa dentre as tcnicas de remediao, pois, alm dos custos relacionados com a remoo propriamente, devem ser considerados os custos do transporte, do tratamento e da disposio nal do solo tratado, alm de outras exigncias, como o treinamento de pessoal. Essa prtica tambm apresenta a desvantagem de que a remoo do solo deve ser realizada com todos os cuidados para que no ocorra a propagao da contaminao para outros meios, inicialmente os no afetados, como o ar e as guas, ao exemplo do que ocorreria durante a remoo de solos contaminados com substncias volteis (EPA, 2004e). Assim sendo, o transporte e o tratamento off-site dos solos por biopilhas possibilitam a transferncia do problema para outros locais que

tambm podero se tornar contaminados. Por essas razes a adoo da tcnica de remoo de solos se justica somente nos casos os quais h a presena de resduos perigosos, de solos altamente contaminados ou em que uma anlise mais criteriosa demonstre a impossibilidade de aplicao de outras tcnicas, de maneira a se atingir as metas de remediao requeridas, no intervalo de tempo desejado (EPA, 2004e). Entretanto, no obstante s limitaes apresentadas, de modo geral, a aplicao da biorremediao vem sendo muito estudada em diversos pases e destaca-se como uma alternativa promissora para o tratamento de stios contaminados por petrleo e seus derivados. A Tabela 1 apresenta as principais vantagens e limitaes inerentes biorremediao de solos.

anos, a biorremediao de solos tem se tornado tema recorrente de muitos estudos acadmicos, gerando literatura tcnico-cientca abundante.

LEGISLAO AMBIENTAL Conforme foi discutido, considerando as contaminaes de solos por petrleo e seus derivados, caso os compostos orgnicos oriundos dessa contaminao fossem distribudos em ordem de toxicidade, persistncia no meio ambiente e efeitos carcinognicos e mutagnicos, os BTEX, HPA e HTP representariam as trs classes de compostos mais importantes a serem estudadas. Sendo que, especialmente por esse motivo, estes compostos tm sido frequentemente objetos de discusses nos rgos governamentais de scalizao ambiental (VROM, 1994). De acordo com as legislaes ambientais mais avanadas, como a da Holanda (Dutch Reference Framework STI Values), a biorremediao s reconhecida como tal se recuperar o solo integralmente, com base no padro agrcola de fertilidade. O Ministrio da Habitao, Planejamento e Meio Ambiente Holands (VROM) publicou, em atendimento Lei de Proteo de Solo (Soil Protection Act), os valores das concentraes permi-

Tabela 1. Vantagens e limitaes da biorremediao de solos VANTAGENS LIMITAES

Podem ser requeridos monitoramento contnuo por A aplicao envolve o uso de equipamentos de fcil tempos longos e/ou manuteno do stio submetido obteno, instalao e operao. biorremediao. Em atividades in-situ, a biorremediao gera distrbios mnimos ao meio ambiente. Em condies timas de operao, apresenta custos menores em comparao s tcnicas alternativas de remediao. Pode ser combinada com outras tcnicas, como a SVE, para acelerar o processo de descontaminao. A tcnica ineciente para compostos orgnicos que cam adsorvidos no solo, tornando-os indisponveis biodegradao. menos eciente em perodos menores de tempo em comparao s outras tcnicas de remediao, como os POA. Contaminantes de baixa solubilidade em concentraes elevadas, como os HTP, podem ser txicos aos microorganismos e/ou no biodegradveis, inviabilizando a utilizao da tcnica. As propriedades fsicas, qumicas e microbiolgicas do solo e as condies climticas, podem alterar a taxa de biodegradao. Diculdade de utilizao em solos argilosos ou com baixa permeabilidade.

tidas de compostos potencialmente poluidores ao meio ambiente. Para a determinao das concentraes mximas permitidas de cada composto, vrios fatores foram considerados, dentre estes, a modelagem de avaliao de risco e a variao das porcentagens de matria orgnica e de argila em solos. Com base nas caractersticas fsico-qumicas das matrizes estudadas, os novos valores das concentraes foram divididos em trs nveis distintos, denominados de valores STI. (onde S: Streefwaarde, representa os valores de referncia; T: Toetsingswaarde, os valores de alerta; e I: Interventiewaarde, os valores de interveno) (VROM, 1994). Os valores para BTEX, HPA e HTP, estabelecidos pelo governo federal holands so mostrados na Tabela 2 (CETESB, 2001; VROM, 1994). Para efeito comparativo entre as concentraes estabelecidas pelos rgos de scalizao ambiental, nesta Tabela so mostrados somente os valores de referncia, alerta e interveno para solos, desconsiderando os teores de argila e de matria orgnica. Esta medida foi adotada, pois, os demais rgos ambientais no consideram porcentagens de matria orgnica e de argila em solos para os clculos das concentraes.

Tabela 2. Valores de referncia (S), de alerta (T) e de interveno (I) para solos, segundo a legislao holandesa, considerando-se os teores de argila e de matria orgnica de 0 % (CETESB, 2001; VROM, 1994) CONCENTRAO EM PESO SECO (mg kg-1) S 0,01 0,01 0,01 0,01 0,2 10 T 0,11 13,0 5,0 2,5 4,1 505 I 0,20 26,0 10,0 5,0 8,0 1000

COMPOSTO Benzeno Tolueno Etilbenzeno Xilenos HPA HTP

Na maioria dos casos, essa tcnica no produz compostos txicos, que devem ser dispostos e tratados em outro local. muito eciente na biodegradao de petrleo e seus derivados em solos permeveis.

Ressalta-se que no Brasil, at o momento, apenas alguns estudos foram realizados abordando a temtica de biorremediao de solos. Ao contrrio, em outros pases, como nos Estados Unidos, essa questo estudada com frequncia, tanto no meio acadmico como no industrial. Por isso, nos ltimos

No Brasil, mais especicamente no Estado de So Paulo, os valores orientadores para solos so mostrados na Tabela 3. Neste, os valores descritos para os HPA correspondem soma das concentraes de dez compostos prioritrios selecionados pela CETESB (ver a lista dos compostos no rodap da Tabela 3). Vale ressaltar que, no Brasil, no existe uma legislao especica para HPA total, bem como para HTP (CETESB, 2005).

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Tabela 3. Valores orientadores para solos no Brasil (CETESB, 2005)

CONCENTRAO EM PESO SECO (mg kg-1) COMPOSTO Valores de preveno Benzeno Tolueno Etilbenzeno Xilenos HPA* HTP 0,03 0,14 6,2 0,13 12,7 --agrcola 0,06 30 35 25 56,6 --Valores de interveno

concentraes controladas durante um perodo de at 12 meses (Bastiaens et al., 2003; Colvin, 2005; Fukada & Takagi, 2003; Koennigsberg & Willett, 2005; Reed, 2004; Wynm, 2003). A equao qumica dessa reao : (1)

e .

CONSIDERAES GERAIS E CONCLUSES Qualquer prtica de biorremediao que se baseia em processos de degradao de contaminantes orgnicos, deve ser iniciada com um extenso e cauteloso levantamento hidrogeolgico, geoqumico e microbiolgico da rea contaminada. Dependendo das condies da regio, a cintica de biodegradao dos compostos ser mais rpida ou mais lenta. As condicionantes do meio, devidamente estudadas, vo nortear no apenas a melhor tcnica de extrao ou eliminao de contaminantes, como tambm a possibilidade de biodegradao dos poluentes, o que normalmente pode ocorrer como um polimento ou um incremento da remediao, com ou sem estmulo da microbiota local. Alm da importncia de se denir a tcnica a ser empregada, uma etapa preliminar de diagnstico da rea contaminada tambm se faz necessria, pois permite que os prossionais responsveis pela remediao decidam, por exemplo, pelo uso de processos adicionais para acelerar a biorremediao ou, em alguns casos, para promover a atenuao natural monitorada. Neste ltimo mtodo, a ANM pode ser utilizada, principalmente, nos casos em que uma anlise exploratria permite denir que a contaminao no representa riscos sociedade, em curto, mdio ou longo prazo. Dessa maneira, de grande importncia realizar uma anlise de risco do local e, em seguida, determinar a taxa de degradao como forma de prever at onde a pluma de contaminao ir se deslocar. Como mostra a Figura 7, quando a taxa de biodegradao for igual ou maior que a taxa de deslocamento dos contaminantes, a pluma deixar de se deslocar e diminuir de tamanho. Neste caso, se a fonte receptora no for atingida, no existe a necessidade de implantao de mtodos mais drsticos e, ento, a ANM seria uma opo economicamente vivel de recuperao da rea contaminada. No entanto, se o processo de ANM

residencial 0,08 30 40 30 147,1 ---

industrial 0,15 75 95 70 384,8 ---

* Soma das concentraes de dez compostos selecionados pela CETESB: antraceno, benzo(a)antraceno, benzo(k)uoranteno, benzo(g,h,i)perileno, benzo(a)pireno, criseno, dibenzo(a,h)antraceno, fenantreno, indeno(1,2,3-c,d)pireno e naftaleno. APLICAES E INOVAES DA BIORREMEDIAO DE SOLOS Baseados na descoberta de que os microorganismos endgenos, presentes em areias de praias ou em solos, podem degradar hidrocarbonetos de petrleo nesses locais, desde ento, muitas pesquisas vm sendo realizadas envolvendo a biorremediao. Os baixos custos envolvidos nas transformaes bioqumicas in-situ, alm da possibilidade de reduo ou at mesmo de eliminao total dos contaminantes, so condies que favorecem a atratividade das tcnicas de biorremediao. Esses fatores atualmente tm sido considerados como os principais responsveis pelas vastas aplicaes e inovaes surgidas na rea de remediao de solos mediada por microorganismos. A maioria das inovaes envolvendo a biorremediao de solos, ao contrrio de diversas tcnicas ligadas degradao de compostos orgnicos, no est relacionada com o desenvolvimento de novas tcnicas analticas e de novos equipamentos empregados para o monitoramento ambiental e para a identicao desses compostos. O estado da arte est focado no desenvolvimento de novos reagentes, que tm sido produzidos com o objetivo de serem utilizados in-situ para acelerar e melhorar a ecincia da biorremediao. Alm
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disso, as inovaes nessa rea tambm esto direcionadas ao estudo biotecnolgico envolvendo a gerao de organismos geneticamente modicados, desenvolvidos com o intuito de degradarem contaminantes especcos em diferentes nichos ecolgicos (Saul et al., 2005; Snchez et al., 2006). No tocante ao desenvolvimento de novos reagentes, cujas utilizaes esto voltadas para a acelerao de processos bioqumicos de degradao in-situ, podem-se citar os trabalhos atuais de uma empresa localizada na Califrnia (EUA), denominada Regenesis. Esta empresa realiza, entre outras atividades, servios de consultoria e de remediao ambiental, alm de desenvolver e comercializar produtos que aceleram a degradao natural de contaminantes. Um dos produtos desta empresa o Oxygen Release Compound (ORC), que vem sendo amplamente empregado em inmeros casos reais, sendo que existe um histrico da aplicao deste produto em mais de 11.000 locais de contaminao. Neste caso, a degradao aerbica de hidrocarbonetos de petrleo, utilizando-se o ORC, consiste, basicamente, na adio de perxido de magnsio e de fosfato. Pesquisas mostram que estes reagentes, dependendo das condies do local, quando hidratados, podem liberar oxignio molecular de maneira lenta e em
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Ressalta-se que, no Brasil, a CETESB j aprovou a utilizao dos reagentes produzidos pela Regenesis, em casos de biorremediao de solos. O mtodo mais recente e recomendado pela EPA para a quanticao dos compostos do petrleo e derivados o Mtodo 8260C. Assim como neste mtodo, a maioria das determinaes de BTEX, HPA e HTP, descrita por outros mtodos, realizada empregando tcnicas analticas baseadas em cromatograa gasosa. Para a quanticao destes compostos, os detectores mais utilizados so o por ionizao em chama e o espectrmetro de massas. Equipamentos de campo, como medidores de gases, tambm so comumente utilizados para o monitoramento destes compostos. Geralmente, esses equipamentos operam com detectores de infravermelho (EPA, 2006). De acordo com Maila & Cloete (2005), as atividades biolgicas dos solos so vitais para a restaurao de solos contaminados com hidrocarbonetos de petrleo. Muitas espcies de microorganismos dos solos conseguem metabolizar derivados do petrleo reduzindo-os em CO2 e H2O (produtos de sua completa mineralizao). Neste caso, cerca de 50 % da matria orgnica incorporada biomassa e os outros 50 % so transformados em dixido de carbono. Dessa forma, o total do contaminante consumido pode ser quanticado atravs da gerao de CO2. Assim, o processo de biodegradao pode ser acompanhado por cromatograa gasosa, mediante a dosagem deste composto, utilizando detectores por condutividade trmica ou de infravermelho no-dispersivo. Portanto, o percentual de biodegradao (PB) do petrleo aderido ao solo calculado pela Equao 2 (Jaramillo, 1996). , onde: (2)

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no evitar o deslocamento da pluma at as regies de risco, so necessrios mtodos que acelerem a degradao dos contaminantes (EPA, 2004b; USAEC, 2003b).

Figura 7. Exemplo da atenuao natural monitorada de uma pluma de hidrocarbonetos de petrleo Portanto, trabalhos de diagnstico correto e a implantao de um programa de ANM podem reduzir consideravelmente o custo da remediao e evitar uma nova interveno humana no local contaminado. Com base nessa informao, no por acaso que nos Estados Unidos, onde o mercado ambiental se encontra mais bem desenvolvido que no Brasil, a maior parte dos programas para a remediao de contaminaes causadas por vazamento de tanques de combustveis subterrneos feita por atenuao natural monitorada, como mostram os dados da Figura 8 (EPA, 2004b).

Modificado de Atenuao natural monitorada Bombeamento e tratamento Air sparging Biorremediao in-situ Biosparging 0 2.971 1.941 5.000 10.000 15.000 20.000 5.577 8.879 15.776

Figura . Nmero de locais contaminados por combustveis procedentes do vazamento de tangues subterrneos versus as diferentes tcnicas de remediao empregadas para o tratamento desses tanques instalados nos EUA (EPA, 2004b)

Segundo a EPA (2004b), como apresentado na Figura 8, nos EUA h quase 16 mil casos de ANM utilizados em contaminaes por tanques de combustveis subterrneos contra, aproximadamente, trs mil prticas de biorremediao in-situ usadas com a mesma nalidade. Portanto, se no h risco que justique pressa para a remediao da rea contaminada por poluentes solveis (alvo maior da bioestimulao) ou insolveis, recomenda-se deixar a natureza se autodepurar, ou seja, optar pela atenuao natural. Ressalta-se, no entanto, que nos casos de adoo da tcnica da atenuao natural, os custos envolvidos na fase de estudos podem ser bastante elevados, face grande quantidade de informaes necessrias para subsidiar a tomada de deciso. claro que todas essas informaes relacionadas aos custos e ecincia da tcnica devem ser ponderadas e estudadas em laboratrios, antes de qualquer aplicao em grande escala. Uma outra possibilidade plausvel de interveno, conforme recomendada pela CETESB (2004), seria a alterao do uso e da ocupao do solo. Esta alternativa envolve os mesmos princpios da atenuao natural com monitoramento, com a diferena que, para garantir a ausncia de riscos sade pblica, ao ambiente e aos demais bens a proteger, faz-se necessria uma redenio ou restrio do uso do solo na rea afetada. Esta restrio deve ser vlida durante o perodo no qual o programa de monitoramento seja mantido. Segundo a CETESB (2006), os trabalhos envolvendo a biorremediao de solos, ocorrem em maior nmero no Estado de So Paulo, onde a maior parte das reas contaminadas, catalogadas por esta agncia ambiental, so provenientes de vazamentos de tanques subterrneos de postos de servios. Em contaminaes deste tipo, tem prevalecido a utilizao da biorremediao aerbica in-situ. Entretanto, segundo Aislabie et al. (2006), vale considerar que vrios fatores podem afetar a ecincia das tcnicas de biorremediao in-situ. Dentre eles, o oxignio tem se revelado o fator limitante para microorganismos capazes de degradar aerobicamente contaminantes como o petrleo e seus derivados. Na ausncia da concentrao adequada de oxignio, a degradao dos contaminantes ir cessar ou poder proceder de forma mais lenta por processos anaerbicos. Tambm foi
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constatado por alguns pesquisadores que o tratamento de solos utilizando as tcnicas de biorremediao in-situ tipicamente mais barato que os tratamentos ex-situ. Nos processos in-situ, h um mnimo de distrbio do local, alm de no ser necessria a utilizao de grandes equipamentos. Por outro lado, nos processo ex-situ, os trabalhos que envolvem a remoo e o transporte das zonas contaminadas, na maioria das vezes, economicamente dispendioso, aumenta a exposio dos trabalhadores aos contaminantes e nem sempre conduz destruio ou reduo da toxicidade dos compostos. De modo geral, a biorremediao de solos apresenta-se como uma tcnica bastante eciente na degradao de petrleo e seus derivados, mesmo em condies ambientais extremas (Margesin & Schinner, 2001). Isso pode ser comprovado facilmente pelo grande nmero de trabalhos publicados recentemente em peridicos de grande relevncia para a comunidade cientca. No obstante existncia de alguns interferentes, como as condies ambientais (principalmente os teores de umidade e de aerao dos solos) e a disponibilidade de nutrientes, as vantagens como a relao custo-benefcio e a ecincia de degradao de compostos txicos e recalcitrantes, tm feito com que essa tcnica de remediao seja utilizada com frequncia em vrios pases desenvolvidos. Porm, ao contrrio do que tem acontecido nos Estados Unidos, no Brasil os projetos de biorremediao e de atenuao natural monitorada ainda esto no campo da teoria, com poucos casos prticos, embora exista uma real probabilidade de expanso. No caso do Brasil, a biorremediao in-situ favorecida pelas condies necessrias para a implementao de tcnica, sobretudo, pelas condies climticas tpicas da maioria das regies geogrcas nacionais. Portanto, frente ao exposto, imperativo que o prossional responsvel pela reabilitao da rea apresente uma caracterizao completa do local contaminado, identicando os tipos de contaminantes presentes, a delimitao da pluma de contaminao e uma avaliao correta do passivo ambiental existente no apenas na rea visvel, mas tambm, no subsolo. Essas informaes de-

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talhadas so fundamentais para que se possa avaliar corretamente o risco de se utilizar essa rea para qualquer que seja o m.

AGRADECIMENTOS Os autores agradecem ao CNPq pela concesso do auxlio nanceiro.

Summary: In view of the proven efficiency of bioremediation in the degradation of compounds toxic to humans, such as benzene, toluene, ethylbenzene and xylenes (BTEX), several companies, especially those related to remediation and environmental monitoring, have shown enormous interest in the deployment of bioremediation as an option for the rehabilitation of contaminated areas. In developed countries such as the United States, Canada and several European countries, these biochemical remediation techniques have been widely used in work that is based, for example, on the treatment of soil contaminated by petroleum hydrocarbons. However, contrary to what has been done in these countries, in Brazil, bioremediation projects are still mainly theoretical, with few practical cases, but there is a real likelihood of expansion. The more important aim of this review is to indicate the advantages that this technique can offer when it is used for the degradation of compounds such as BTEX in typical Brazilian soils, whose physico-chemical characteristics contribute to the degradation of contaminants. Research shows that environmental factors (such as moisture and oxygen levels) and the availability of soil nutrients, in addition to the climatic conditions in Brazil, are quite suitable for the employment of this technique. They may pose, as an advantage, a favorable cost/benefit ratio and the opportunity for greater efficiency in the degradation of toxic and recalcitrant compounds compared to the majority of conventional remediation techniques. In summary, this review focuses on the state of the art of bioremediation techniques of contaminants in soils, presenting the most current and recent applications and innovations, as reported in the national and international media. Index terms: bioremediation, degradation, contaminants, petroleum hydrocarbons BTEX, soil. REFERNCIAS
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