Agence universitaire de la francophonie (AUF) Bureau Moyen- Orient UNIVERSITE LIBANAISE (UL) UNIVERSITE SAINT- JOSEPH (USJ) UNIVERSITE

SAINT- ESPRIT DE KASLIK (USEK) et INSTITUT NATIONAL AGRONOMIQUE PARIS- GRIGNON (INA P- G) en partenariat avec L'INSTITUT DE RECHERCHES AGRONOMIQUES LIBANAIS (IRAL) L'INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE-France (INRA) Mmoire de Diplme d'Etudes Approfondies (DEA) CONTRLE ET GESTION DE LA QUALITE application l'agroalimentaire

Valorisation des margines par digestion anarobie

Prsent par Effectu Directeur de mmoire Membres de Jury

: Diana GHATTAS : L'IRAL : M. Ali BASSAL : M. Christian DUCAUZE Mme. Dalida CHOUBAYA DARAZY M. Grard PASCAL M. Michel AFRAM M. Rachad SALIBA Mlle. Yolla GHORRA

2004

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Ddicaces
A ceux qui m'ont tout donn sans rien en retour A ceux qui m'ont encourage et soutenue dans mes moments les plus difficiles Et ceux qui je dois tant A mes chers parents pour leur amour et leur support continu Que ce travail soit le tmoignage sincre et affectueux de ma profonde reconnaissance pour tout ce que vous avez fait pour moi

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REMERCIEMENTS
Je tiens remercier avec sincrit: Dr. Ali BASSAL, qui m'a attribu beaucoup de son temps. Je le remercie pour l'aide qu'il m'a apport pour guider ce travail. Mesdames et Messieurs, Christian DUCAUZE, Dalida CHOUBAYA

DARAZY, Grard PASCAL, Michel AFRAM, Rachad SALIBA et Yolla GHORRA, membres de jury, d'avoir accept de juger ce travail. Enfin, merci toute personne qui a pu, de prs ou de loin, contribuer l'accomplissement de ce travail.

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RESUME
Les eaux de vgtations ou margines rsultantes de lextraction dhuile dolive, constituent le problme majeur de loliculture cause de leur pouvoir polluant (riches en matires organiques et minrales) et leur pH acide. Le but de cette tude porte sur la valorisation des ces margines en prsence du fumier de bovins ou de volailles par fermentation anarobique en vue de produire un biogaz et de rduire leur effet toxique. Des essais ont t effectus en fermentant des margines avec et sans polyphnols en prsence des fumiers de volailles ou de bovins deux tempratures diffrentes (42C et 52C). Le pouvoir de ce traitement est valu par une mesure de biogaz produit et par une dtermination des diffrents paramtres physico-chimiques du milieu de fermentation (pH, DCO, N-NH3 et polyphnols). Les rsultats obtenus ont montr que le pH diminue au cours de la fermentation 42C et augmente au cours de la fermentation 52C. La rduction la plus importante de demande chimique en oxygne (DCO) (de 407,68 192,08 g/l) a t obtenue au cours du traitement des margines en prsence du fumier de volailles 42C ainsi que la dgradation la plus leve de taux de polyphnols totaux (de10,62 1,45 g/ mL) a t obtenue en prsence du fumier de bovins 52C. La production de biogaz la plus importante est de lordre de 366,8 mL, elle est obtenue au cours dune fermentation pendant une semaine en prsence du fumier de bovins 42C. Mots cls: Margines; digestion anarobie; fumier; production de gaz; polyphnols; temprature; pH.

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ABSTRACT
The olive mill waste waters (OMWW) generated from olive oil extraction process constitutes a major environmental concern since they are characterized by their role as pollutant (high organic and mineral matters) and their pH acid. The aim of this study was to valorize OMWW by anaerobic fermentation in the presence of poultry or bovine manure, in order to produce biogas and to reduce their toxic load. Many tests were carried out by fermenting OMWW with and without polyphenols in the presence of poultry or bovine manure at two different temperatures (42C and 52C). The performance of this treatment was valuated through measurements of biogas production and by the determination of different parameters of fermented media (pH, COD, N-NH3 and polyphnols). The results obtained show that the pH decreased during fermentation at 42C and increased during fermentation at 52C. The best reduction of chemical oxygen demand (COD) (from 407,68 to 192,08 g/l) was obtained after fermentation OMWW in the presence of poultry manure and the most important degradation of polyphenols (from 10,62 to 1,4 g/mL) was obtained in the presence of bovine manure at 52C. Furthermore the gas production is important, order of 366,8 mL by fermentation during one week in the presence of bovine manure at 42C. Key words: Olive mill waste waters; anaerobic digestion; manure; gas production; polyphenols; temperature, pH.

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TABLE DES MATIERES

LISTE DES FIGURES . viii LISTE DES TABLEAUX . viii INTRODUCTION CHAPITRE I: PROBLEMATIQUE ...
I.1. Composition et caractristiques physico-chimiques de la margine I.2. Effets des margines sur lenvironnement I.2.1.Pollution de lair ... I.2.2. Pollution des eaux .. I.2.3. Pollution du sol .. I.3. Valorisation des margines .. I.4. La digestion anarobie ou mthanisation des margines . I.5. Les tapes mtaboliques . I.5.1. Hydrolyse et acidognse .. I.5.2. Actognse ... I.5.3. Mthanognse .. I.6. Paramtres influenant la digestion anarobie . I.6.1. La nature du substrat I.6.2. Les polyphnols I.6.3. La temprature . I.6.4. Le pH I.6.5. La Flore bactrienne . I.6.5.1.Origine et nature de linoculum I.6.5.2.Les organismes dans linoculum ...... I.7. Atouts et contraintes du traitement anarobique . 10 3 4 4 5 6 6 6 6 7 7 7 7 8 8 9 9

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CHAPITRE II: MATERIELS ET METHODES GENERAUX .

II.1. Support exprimental .. II.1.1. Matires premires II.1.1.1. Margine . II.1.1.2. Fumier II.1.2. Produits chimiques .. II.2. Appareillage .. II.3. Extraction des polyphnols de la margine .. II.3.1. Traitement de la margine II.3.2. Extraction lactate dthyle II.4. Analyses chimiques II.4.1. Mesure de pH . II.4.2. Dtermination de la demande chimique en oxygne (DCO) .. II.4.3. Dosage de lazote par Kjeldahl II.4.4. Extraction et Dosage des polyphnols totaux .. II.4.4.1. Prparation de lchantillon .. II.4.4.2. Extraction lactate dthyle ... II.4.4.3. Dosage des polyphnols totaux par colorimtrie ...

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CHAPITRE III: RESULTATS ET DISCUSSION .. 20

III.1. Digestion anarobie des margines 20 III.2. Source de l'inoculum . 21 III.3. Fermentation de la margine en prsence du fumier ... 22 III.4. Influence des polyphnols . 23 III.5. Influence du taux de fumier .. 25 III.6. Influence de la temprature .. 26

CONCLUSION . 28 ANNEXES . 30 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 32

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LISTE DES FIGURES

Figure 1: Appareillage utilis lors de ltude 13 Figure 2: Evolution de la quantit du mthane en prsence du fumier de volailles seul et du fumier de bovins seul T=42C... Figure 3: Influence du fumier (bovins et volailles) sur la productivit en gaz T=42C . 23 Figure 4: Influence des polyphnols en prsence du fumier de volailles T=42C. 24 Figure 5: Influence des polyphnols en prsence du fumier de bovins T=42C 25 Figure 6: Influence de taux du fumier de bovins sur la production en mthane T=42C et T=52C.. 25 Figure 7: Evolution de la productivit en gaz en prsence du fumier de bovins T=42C.. Figure 8: Evolution de la productivit en gaz en prsence du fumier de bovins T=52C 27 26 22

LISTE DES TABLEAUX

Tableau 1: Caractristiques des margines utilises avant et aprs fermentation T=42C en prsence du fumier de volailles............. Tableau 2: Caractristiques des margines utilises avant et aprs fermentation T=42C en prsence du fumier de bovins.................................. 20 Tableau 3: Caractristiques des margines utilises avant et aprs fermentation T=52C en prsence du fumier de bovins...... 21 20

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INTRODUCTION
Les margines sont obtenues lors de lextraction de lhuile dolive, partir de leau de fruit et de leau ajoute au cours de broyage et de sparation. La qualit et la quantit des margines dpendent de lopration dextraction dhuile dolive, elles sont aussi influences par la varit dolive, la saison de cueillette, le taux de maturation des fruits et les conditions climatiques (Fiorentino et al., 2003). On estime gnralement quun kg dolive fournit 1 1,5 litres de margines (Lger, 1999); en fonction de systme dextraction utilis. Le volume de ces effluents est en progression continuelle. La production dhuile dolive dans le monde atteint les 2.500.000 tonnes par an (FAO, 2003) ce qui quivaut 3.750.000 litres deaux de vgtations. Au Liban, la production des margines augmente au cours des annes, cause de laugmentation progressive de la superficie cultive de lolivier qui est passe de 50 51 ha (selon le Ministre de l'agriculture, 1999). Dans le bassin mditerranen (Grce, Italie, Liban, Syrie, Portugal, Espagne, Tunisie, Turquie), les quantits des margines produites dpassent 30 millions m3 par an (Zouari et Ellouz, 1996). Les margines sont caractrises par une concentration leve en sucres, lipides, protines, acides, polyphnols et en matire organique (Camurati et al., 1984). Alors, une fois rejetes sans avoir subi des traitements pralables, ces margines auront un impact ngatif sur lenvironnement, d leur pouvoir dinhiber le dveloppement des plantes et de certains microorganismes (Filidei et al., 2003). La phytoxicit des margines est attribue la prsence des lipides et des polyphnols (Hamdi, 1993). Ainsi la fermentation anarobique est lun des principaux traitements permettant de rduire le contenu des margines en matires organiques, en substances toxiques, et de

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gnrer, en mme temps, de lnergie sous forme de biogaz, utilise pour la production de llectricit et de la chaleur (Angeldaki et al., 1997). Cette fermentation anarobique a t lobjectif de travail de plusieurs auteurs. Elle a permis une rduction de la DCO (demande chimique en oxygne) approximativement de 80% (Tsonis et Grigoropoulos, 1993). Toutefois, ce processus semble tre instable cause de leffet inhibiteur des polyphnols (Beccari et al., 1999), du dficit en ammoniaque (Ranalli et al., 1998) et de la faible alcalinit des margines (pH varie entre 4,5 et 5). Pour surmonter ces problmes, plusieurs solutions ont t suggres: - lune tait de diluer la margine par de leau et dajouter de lure comme source dazote (Boari et al., 1984a, b). Cette dmarche gnre des volumes deffluents plus grands ce qui n'est ni conomique, ni cologique. - lautre solution tait de codigester ensemble margine et fumier (Angeldaki et al., 1997). Dans ce processus lalcalinit et le contenu lev dammoniaque offert par le fumier, compense les faibles valeurs de la margine et contribue, en mme temps, la production de biogaz potentiel lev (Ghougassian, 2000). Ainsi, le prsent travail traite "la fermentation anarobique des margines en prsence du fumier" en vue dvaluer, laide des tests exprimentaux, lefficacit de ce processus rduire leffet nuisible de la margine.

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CHAPITRE I PROBLEMATIQUE

I.1. Composition et caractristiques physico-chimique de la margine (Rivas et al., 2000)

La margine est un liquide lgrement acide (pH = 4,5 5), de couleur violet fonc intense qui vire vers le noir; dodeur forte de lhuile dolive, de got amer, de degr lev de pollution organique (protines, lipides, glucides et polyphnols peu biodgradable); de demande chimique en oxygne: DCO > 220 g/L avec un rapport de DCO/DBO entre 2,5 et 5 (donc difficilement dgradable); et de concentration leve de matire solide totale (ST) 20 g/L (cf. Annexe 1).

I.2. Effets des margines sur lenvironnement (Lacomelli, 2000)

Le rejet des margines des industries productrices dhuile dolives est un problme majeur surtout pour les pays du bassin mditerranen du fait quelles renferment une fraction organique importante. I.2.1. Pollution de lair Les mauvaises odeurs posent des problmes de pollution de lair par le taux lev dammoniaque et dautres gaz produits lors du traitement des ces effluents. I.2.2. Pollution des eaux Les rsidus mtalliques et organiques, la demande biologique et chimique en oxygne constituent une source de pollution de leau qui se transmet vers les eaux souterraines et superficielles du globe terrestre (Fiorentino et al., 2003) puisque les margines sont le plus souvent rejets dans les rcepteurs naturels des cours deau, sans aucun traitement pralable, ce qui empche ces eaux de sautopurer.

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En effet les margines contiennent des concentrations leves en phosphores et en tannins, en plus, une large quantit de nutriments: - Les phosphores acclrent le dveloppement des algues et augmentent la probabilit dune eutrophisation entranant un dsquilibre cologique dans les eaux naturelles. - La prsence des tannins, provenant de lolive et se trouvant dans les margines, provoque une dcoloration de ces eaux. - Alors que, les nutriments entranent une augmentation des microorganismes qui infectent les eaux et les rendent dangereuses pour la vie aquatique. De plus, la margine contient des quantits leves de sucres et de lipides. Les sucres provoquent une augmentation de la population microbienne, par consquent une augmentation de la consommation doxygne dissout, donc une rduction de sa disponibilit pour dautres organismes vivants. Les lipides forment un film impermable, ce qui empche la pntration des rayons lumineux et de loxygne. I.2.3. Pollution du sol Les composs phnoliques, les acides organiques, le pigment catcholamlaninique et la haute salinit (conductivit leve) peuvent causer des effets phytotoxiques sur les oliviers (F.A.O, 1983); ils provoquent une diminution de la matire sche en diminuant la disponibilit de l'azote, en plus de leur toxicit pour certains micro- organismes (Filidei et al., 2003) Les acides, les lments minraux et les substances organiques aboutissent une destruction de la capacit dchange cationique du sol (CEC), par suite, une rduction de la fertilit du sol.

I.3. Valorisation des margines

Malgr les problmes poss par les margines sur l'environnement, ces dernires peuvent tre valorises en subissant des traitements pralables permettant de produire des sous produits prsentant des rles bnfiques diverses:

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- Les huileries fonctionnent gnralement dans des zones rurales et d'une manire saisonnire, alors il parat utile de dverser les margines dans des bassins pour l'limination par vaporation (Javier Bentiez, 1997a). - Les substances organiques et les polyphnols peuvent tre limins par un traitement arobique (Aggelis et al., 2001)ou par extraction (Nefzaoui, 1999). - Les polymres phnoliques colors sont dgrads en monomres par des moisissures diverses (Yesilada et al., 1998): on parle de la dcoloration. - L'ozonation permet de rduire le contenu des margines en polyphnols afin de les utiliser dans l'un des traitements de fermentation (Beltran et al., 1999). - Pour diminuer la DCO et les concentrations en polyphnols, l'adsorption- qui est une liaison entre les composs dissous (adsorbs) sur la surface d'une matire solide (adsorbant), tels que le charbon actif (Improlive, 2000), ou l'argile inactiv (Al-Malah, 2000)- est l'un des traitements utiliss. - L'un des principaux traitements, celle de "la fermentation anarobique des margines", sera dvelopp dans ce travail. Ce processus est une bioconversion transformant la matire organique des margines en biogaz (mthane 60% 75%) et anhydride de carbone (17.5%), (Mossa, 2000). De mme une perte plus importante en DCO, matires organiques et polyphnols peut tre atteinte par une combinaison d'une ozonation avec une digestion anarobique (Andreozzi et al., 1998) ou d'une digestion arobique avec une autre anarobique (Borja et al., 1994). Le but de la plupart de ces traitements, est de rduire le contenu des margines en matires organiques et en polyphnols, par suite l'obtention des effluents moins toxiques utilisables comme fertilisants.

I.4. La digestion anarobie ou mthanisation des margines

La fermentation mthanique se droule naturellement en anarobiose, dans les milieux pauvres en sulfates et nitrates et de faible potentiel redox (Couturier et Galtier,

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2004). Elle est luvre dune microflore bactrienne prsente comme un bio- film et / ou des agrgats granulaires dans le milieu de culture (Van Lier et al., 1997). La dcomposition anarobie des rsidus organiques par les microorganismes responsables de cette chane de transformation produit un mlange de biogaz (Ghougassian, 2000) (cf. Annexe2).

I.5. Les tapes mtaboliques (Speece et Parkin, 1983)

La digestion anarobique est un processus complexe qui se droule gnralement en 4 tapes; les deux premires sont souvent regroupes car effectues par les mmes populations de microorganismes (Couturier et Galtier, 2004).

I.5.1. Hydrolyse et Acidognse Cette premire tape est effectue par un ensemble vari de microorganismes, la plupart anarobies strictes. Gnralement, lhydrolyse est le fait denzymes extracellulaires (cellulases, hydrolases, amylases, etc) qui librent des produits de poids molculaire plus faible (monomres) qui vont pntrer dans la cellule o ils seront dgrads selon les voies classiques du catabolisme. Ces monomres sont transforms en acides organiques et alcools avec libration dammonium (NH4+); de dioxyde de carbone (CO2) et d'hydrogne (H2): Acidognse (Filidei et al., 2003). Cest la phase dhydrolyse qui est souvent ltape limitante dans la digestion anarobie. En effet, la nature biochimique du substrat dpend de la vitesse ractionnelle. I.5.2. Actognse Cest pendant cette phase que sont produits, partir des tapes prcdentes, les principaux substrats de la mthanognse: acide actique (CH3COOH), CO2 et H2. Lacide actique est un intermdiaire cl de la transformation de la matire organique dans lenvironnement. De nombreuses bactries sont capables de faire de lactate par fermentation et sont souvent qualifis dactognes. I.5.3. Mthanognse

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Cest ltape finale et spcifique de la fermentation mthanique. Elle conduit la rduction du carbone en mthane et elle est ralise par des microorganismes trs spcialiss, anarobies strictes, qui se subdivisent en mthanobactriales, mthanococcales et mthanomicrobiales. Il existe deux grandes voies de formation du mthane: - La voie actoclastique o lacide est transform en mthane: CH3COOH CH4 + CO2 - La voie hydrognophile o cest le mlange CO2/H2 qui est utilis: 2H2 + CO2 CH4 + O2 Dautres ractions existent partir de diffrents composs comme le mthanol, lacide formique, la mthylamine ou encore le dimthylsulfure. Ces phases sont troitement lies mais prsentent des cintiques des ractions diffrentes. Selon le substrat de dpart, la vitesse globale de transformation dpendra dune ventuelle tape limitante. Comme prsente, la voie principale de formation de mthane provident de lactate. Il existe dautres voies de formation partir dautres substrats (mthanol, formate) mais leur importance quantitative est ngligeable par rapport aux deux voies prcdentes.

I.6. Paramtres influenant la digestion anarobie

I.6.1. La nature du substrat La digestion anarobie est un procd qui sapplique des situations extrmement diverses: multiplicit des substrats concerns, varits des procds industriels, taille et stade de dveloppement (cf. Annexe 3). I.6.2. Les polyphnols La prsence des polyphnols dans les margines varient suivant la varit et le degr de maturit des olives, en plus des procds dextraction des huiles dolives. Ces polyphnols sont toxiques pour certaines bactries (Fiorentino et al., 2003), reprsentent un effet inhibiteur de la digestion anarobie (Beccari et al., 1999) do la ncessit dun prtraitement rduisant la concentration de ces composs.

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I.6.3. La temprature La fermentation anarobie peut se drouler entre 5 et 65C. On dfinit classiquement trois plages de tempratures autour dune valeur optimale relative. - La zone psychrophile de 4 25C. - La zone msophile de 35 45C. - La zone thermophile de 55 65 C. La premire englobe les fermentations dans les sdiments marins mais galement les fosses septiques. La plus largement tudie est la zone msophile. Laugmentation de la temprature entrane une augmentation des vitesses de dgradation, en particulier de la phase dhydrolyse, sans influence particulire sur la biodgradabilit ou le rendement en mthane car les voies mtaboliques restent les mmes jusqu 65C. I.6.4. Le pH La gamme des pH permettant un droulement normal de la fermentation mthanique est lie aux conditions optimales de vies des microorganismes responsables des diffrentes ractions mtaboliques. On observe des diffrences entre les populations bactriennes. Ainsi les actognes sont les plus sensibles aux variations de pH (optimum de croissance de 7,2), alors que les mthanognes peuvent accepter des variations de pH entre 6 et 8. Les bactries acidognes sadaptent facilement des pH aux alentours de 4. Gnralement, on considre que les variations doivent tre maintenues dans une fourchette situe entre 6,4 et 7,8 pour que les fermentations soient stables. La rgulation du pH est assure principalement par les bicarbonates (HCO 3-) (Morelli et Rindome, 1990) et dans une faible mesure par les ions phosphates (HPO3-) (Florencio et al., 1996). A un pH voisin de la neutralit, la formation des ions HCO3- est principalement due linteraction entre les ions NH4+ provenant de la dgradation des protines et le CO2 dissous, suivant les ractions :

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Protines NH3 + H2O NH4+ + OHCO2 + OH- HCO3Ces ions permettent de neutraliser les acides organiques, librs. I.6.5. La Flore bactrienne Pour maintenir les conditions d'anarobioses ncessaires au droulement de la digestion mthanique, la prsence des bactries anarobies strictes et mthanognes est indispensable. Puisque cette tude porte sur la digestion des margines en prsence de fumier qui, quelque soit sa nature, contient des microorganismes actifs dans les processus bio-physico-chimiques de digestion des effluents, ainsi que des germes pathognes et des parasites. La variabilit des germes pathognes et des parasites est un reflet de lorigine et de la nature de linoculum utilis. I.6.5.1. Origine et nature de linoculum Plusieurs types dinoculum de la fermentation mthanique des margines existent, parmi les plus tudis, nous pouvons citer: Des biomasses de margines dilues et neutralises (Borja et al., 1992b), des margines fermentes par Aspergillus terrus (Borja et al., 1992a), des margines traites par H3PO4 et Ca(OH)2 ou par Ca2CO3 et NH3, des substrats mthanogniques (margines concentres et des eaux industrielles issues dune digestion arobie (Filidei et al., 2003), des actates riches en Methanosarcina (Demirer et al., 1998), des boues issues dune digestion anarobie (Beccari et al., 1996) ou dune digestion arobie (Hamdi et al., 1992) et des djections dlevage comme ceux des porcins (Marques et al., 1998) ou des bovins (Angelidaki et al., 1997). Cependant, laction dun inoculum est lie sa concentration, sa richesse en microorganismes mthanogniques, ainsi quaux conditions physico-chimiques du milieu (pH, temps de sjour et temprature). I.6.5.2. Les organismes dans linoculum Vu la nature des effluents, les microorganismes dominants seront :

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- Des bactries anarobies strictes et facultatives, avec une domination des bactries Gram+ et un faible pourcentage en Clostridium, enterocoques et streptocoques (Clostridum botulinum, Clostridum coccoides, Enterococcus, Streptococci et Lactobacilli) (Michael et al., 2003) et dautres microorganismes (virus, protozoaires, ...) (Cotta et al., 2003). - Des bactries mthanogniques dont les espces prsentes sont les Methanothrix thermoacetophila, Methanosarcina thermophila, Methanobacterium thermoformicium et Methanosarcina majei. Ces espces utilisent tous les prcurseurs du mthane et jouent un rle principal lors dune fermentation anarobie (Nozhevnikova et al., 1988). Dautres facteurs influencent la fermentation anarobique mais en moindre effet: - Le potentiel redox qui doit tre infrieur -330 mV pour un dveloppement normal des mthanognes (Couturier et Galtier, 2004). - Pour un bon fonctionnement du mtabolisme des mthanognes, la pression partielle en hydrogne doit tre comprise entre 0,1 et 10 Pa (Dolfing et Tiedje, 1988). - Pour leurs activits, les micro-organismes ont besoin dun apport quilibr entre les diffrents lments (C, N, P, S) et les lments traces intervenant dans les ractions enzymatiques (minraux, vitamines) (ASTM, 1987). - La fermentation anarobique peut tre inhibe par les oxydants (oxygne, nitrate, sulfate); les acides gras volatils, les antibiotiques, lammoniac, les dtergents (Couturier et Galtier, 2004).

I.7. Atouts et contraintes du traitement anarobique

Plusieurs auteurs ont dvelopp durant les dernires 20 annes des modles de la digestion anarobique (Siergist et al., 1993) mais trs peu ont dirig l'attention sur la digestion anarobique en prsence du fumier (Angeldaki et al., 1997). La fermentation anarobique prsente plusieurs avantages, elle permet: - une rduction des germes prsents dans la margine (Filidei et al., 2003). - une rduction de la matire organique de 80% peu prs (Aveni, 1984). - une production d'nergie (Ubay et Ozturk, 1997).

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- une production d'un bio fertilisant (Georgacakis et Dalis, 1993). -une diminution de la principale source de nutriments des bactries pathognes (Ghougassian, 2000). - une diminution des mauvaises odeurs produites (Ghougassian, 2000). Ces dsavantages portent sur son processus qui: - est instable, d la prsence des polyphnols (Beccari et al. , 1999) et la faible alcalinit. - ncessite des conditions d'anarobiose prcises. - ncessite une quipe de travail bien entrane. - ncessite une prcision du couple temprature et temps de sjour pour assurer une bonne gestion des produits traits. En conclusion, le problme environnemental, driv de la production saisonnire de la margine, serait minimis par un traitement anarobique en prsence du fumier, traitement qui rduit la concentration leve des margines en matires organiques et en polyphnols.

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CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES GENERAUX

Dans ce chapitre, on dcrit le matriel et les mthodes gnraux utiliss lors des protocoles exprimentaux.

II.1. Support exprimental

Cette partie sert dcrire le matriel utilis tout au long de lexprimentation. II.1.1. Matires premires II.1.1.2. Margine La margine utilise dans notre tude a t obtenue partir des olives mi-vertes et minoires, presses dans une huilerie semi-automatique selon un processus dextraction: pression puis centrifugation. La margine est stocke dans un rfrigrateur pendant 6 mois 4 C pour des utilisations ultrieures Une partie de cette margine a subi une extraction des polyphnols; de faon obtenir deux types de margines pour ltude: - Margine avant extraction de polyphnols - Margines aprs extraction de polyphnols II.1.1.2. Fumier Il sagit davantage de sous-produits que de dchets proprement parler, qui ont une valeur intrinsque en tant quamendement organique (on parle mme dengrais de ferme). Ces produits sont composs des excrtas des animaux associs plus ou moins des lments carbons constitutifs des litires (paille, sciure, ). Les deux types de fumier utiliss lors de ce travail sont:

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- fumier des bovins - fumier des volailles Dabord, ces produits sont tamiss et rpartis en chantillon de 15 g et de 30 g, ensuite, ils sont mlangs successivement 50 mL et 100 mL deau distille dans des bouteilles tanches. Finalement, les bouteilles sont incubes 37C pour dclencher une fermentation anarobique. Linoculum est ainsi prpar pour des utilisations ultrieures. II.1.2. Produits chimiques Actate dthyle (BDH Merck); acide actique glacial 100% (BDH); acide sulfurique (BDH Analar); acide p-hydroxybenzoque (Sigma); acide borique (BDH); bicarbonates de sodium; carbonate de sodium Na2CO3 (M & B); dichromate de potassium (K2Cr2O7); eau oxygne H2O2 (Laboratory chemicals); Hexane (Fluka chemika); hydroxyde de sodium (NaOH) en pastilles (Acros organics); orthophnantroline; ractif de folin ciocaltieu (sigma Aldrich); bleu de mthylne; rouge de mthyle; sulfate de fer FeSO 4; sulfate de potassium K2SO4; sulfate de mercure HgSO4 (Acros Organics); sulfate de cuivre CuSO4; sulfate dargent Ag2SO4 (BDH); sulfate ferreux dammonium Fe(NH4)2(SO4)2 (BDH Analar).

II.2. Appareillage

Figure 1 : Appareillage utilis lors de ltude

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1 : Solution (bicarbonates de sodium + acide actique) produisant du CO2 qui sert au dgazage du mlange prsent dans le ballon 3. 2 : bain-marie. 3 : ballon contenant le mlange fermenter. 4 : solution dacide sulfurique 0,1N pour capter NH3. 5 : solution (NaOH 5M + eau de chaux) pour capter CO2 et H2S. 6 : Burette qui permet de dtecter le volume des gaz rsiduels dgags. 7 : Pompe vide. 8 : Robinet. Le ballon 3 contient:

- soit un mlange de 100 mL de fumier + 50 g de bicarbonates: (F). - soit un mlange de 100 mL de fumier + 50 g de bicarbonates + 50 mL de margines avant extraction de polyphnols: (MAP1). - soit un mlange de 100 mL de fumier + 50 g de bicarbonates + 50 mL de margines aprs extraction de polyphnols: (MSP). - soit un mlange de 50 mL de fumier + 50 g de bicarbonates + 50 mL de margine: (MAP2). Ensuite le volume de chacun de ces mlanges est ajust 1000 mL par de leau distille. Notons que laddition de bicarbonates sert ajuster le pH entre 7 et 8. Une fois le ballon 3 est prt, il est mis au bain- marie. Ce ballon est muni dun joint reliant lchantillon deux sorties. Lune est relie un erlenmeyer contenant un mlange de bicarbonate et dacide actique (solution productrice de CO2), ce mlange est utilis au dbut de lexprience pour chasser lair des espaces vides (assurer les conditions danarobioses), pendant 5 min. Lautre est utilise pour recueillir les gaz produits au cours de la fermentation anarobique. Les gaz produits sont barbots dans une solution de NaOH (5M) et de Ca(OH) 2 afin de capter le CO2, H2S, NH3, produits au cours de la fermentation anarobique, le reste (O2, H2, CH4) est rcupr dans une burette tanche et renverse.

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Enfin, la pompe vide utilise au dbut de lessai, sert aspirer le gaz de la burette jusqu ce que la solution 5 (NaOH + eau de chaux) atteint le bout suprieur de la burette gradue. Une fois termin, on laisse fermenter le mlange se trouvant dans le ballon 3 durant 6 7 jours. Lexprience est arrte quand la production de gaz devient faible (1 mL /24h). Au cours de la fermentation, on mesure, chaque jour, le volume du gaz dgag se trouvant dans la burette. Ce volume sert calculer le nombre de moles de biogaz obtenu, ce dernier suppos tre un gaz parfait. Un chantillon du milieu de fermentation est prlev, au dbut et la fin de la fermentation, sur lequel les tests exprimentaux seront effectus: dtermination du pH, de la demande chimique en oxygne, du nombre de moles du gaz dgag, de la teneur en protines et en polyphnols. Au cours de lexprience, les conditions suivantes, ont t varies: - Temprature: maintenue soit 42C, soit 52C - fumier: on a utilis 2 types de fumier - Bovins - Volailles

II.3. Extraction des polyphnols de la margine

En vue de prparer la margine exempte de polyphnols; cette partie savre tre une tape prliminaire de notre travail.

II.3.1. Traitement de la margine Cette tape consiste dlipider la margine: - Mettre la margine brute dans un bcher. - Faire reposer pendant quelques minutes. - Aspirer le surnageant dhuile la surface de la margine. - Rpartir le volume restant de la margine dans des tubes centrifugation, veiller lquilibre statistique et dynamique. - Centrifuger pendant 15 minutes une vitesse de 3200 x g. - Trois phases sont ainsi obtenues : phase huileuse, phase aqueuse et un culot prcipit. - Ajouter au volume de la partie aqueuse un volume analogue dhexane.

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- Mlanger au mixer lectrique (ultra- turrax) pendant 3 minutes une vitesse de 13500 tours / min. - Recentrifuguer le mlange pendant 12 minutes. - Recueillir la margine aprs sparation complte en deux phases: lhexane surnageant et la margine au fond. - Rcuprer lhexane pour une utilisation ultrieure. La margine est ainsi dlipide, prte une extraction liquide-liquide. II.3.2. Extraction lactate dthyle Cette tape consiste extraire les polyphnols de la margine: - Mlanger au mixer lectrique (ultra- turrax) 100 mL de la margine dlipide avec 100 mL dactate dthyle pendant 3 min. - Rpartir le mlange dans des tubes centrifugation. - Centrifuger pendant 10 min une vitesse de 3200 x g. - Recueillir la margine aprs sparation complte en deux phases: lactate dthyle surnageant et la margine au fond. Les composs phnoliques sont ainsi rcuprs dans lactate dthyle, et la margine est prte lutilisation.

II.4. Analyses chimiques

Les analyses chimiques ont t effectues sur les fumiers et sur les deux types de margines avant et aprs fermentation. II.4.1. Mesure de pH (Clesceri et al., 1989) La mesure est effectue laide dun pH- mtre (Jenway) aprs avoir plonger llectrode dans une solution bien homognise. II.4.2. Dtermination de la demande chimique en oxygne (DCO) (AOAC, 1990). Cette mthode titrimtrique ncessite lapplication des tapes suivantes: - Introduire 50 mL de lchantillon dilu 1/10000 dans un ballon de 500 mL.

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- Ajouter 1 g de sulfate de mercure HgSO4 (pour liminer linterfrence du chlore). - Plonger le ballon dans de la glace a fin de rduire leffet exothermique des ractions. - Ajouter 5 mL dacide sulfurique H2SO4 pour dissoudre le HgSO4 sulfate de mercure. -Ajouter avec prcaution et en agitant 25 mL de dichromate de potassium K2Cr2O7 (0,25 N). - Ajouter attentivement 70 mL H2SO4-Ag2SO4. - Porter le ballon 150C dbullition pendant 2 heures sous rfrigrant reflux adapt au ballon. - Laisser refroidir. - Ajuster le volume 300 mL avec de leau distille. - Introduire 8 10 gouttes de ferrone jusqu lobtention de la couleur bleu-vert. - Titrer avec le sulfate ferreux dammonium (0,25N) jusqu changement de la coloration (virage au rouge violac), soit S le volume de Fe(NH4)2(SO4)2 vers. - Dans les mmes conditions, prparer une solution tmoin en utilisant 50 mL deau distille, soit (B) le volume de Fe(NH4)2(SO4)2 vers, et ncessaire pour titrer K2Cr2O7. - COD mg/l = [(B S) x T x 8000] / V O T : titre de Fe(NH4)2(SO4)2 V : volume de lchantillon utilis Notons que le titre de la solution de Fe(NH4)2(SO4)2 doit tre vrifi tous les jours: - Diluer 25 mL de K2Cr2O7 (0,25N) jusqu 250 mL. - Ajouter 75 mL de H2SO4 de densit1,83. - Introduire 10 gouttes de ferrone. - Titrer avec Fe(NH4)2(SO4)2 jusquau virage du bleu vert au rouge violac. T = mL K2Cr2O7 x 0,25 N / mL Fe(NH4)2(SO4)2 II.4.3. Dosage de lazote par Kjeldahl (standard methods of examination of water and waste water, 1992) - Prlever laide dune pipette 5 mL de lchantillon et les introduire dans le matras de Kjeldhal. - Ajouter 7,5 g du catalyseur (CuSO4 + K2SO4). - Ajouter 10 mL de H2SO4.

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- Ajouter 10 mL deau oxygne 30% (H2O2); utilis comme anti-moussant. - Ajouter quelques billes de verres (anti-choc). - Disposer le tube sur le bloc de minralisation. - Mettre la coiffe et ouvrir le robinet deau. - Chauffer avec modration pour viter que la mousse monte dans le tube. - Continuer chauffer doucement jusqu disparition de la mousse et carbonisation de la masse. - Chauffer plus fort jusqu bullition rgulire du liquide (420C) et obtention dun liquide clair et limpide. - Poursuivre le chauffage encore 30 minutes. - Laisser refroidir. - Rgler sur lappareil de distillation automatique le volume de soude 35% (50 mL), le volume deau distille (50 mL) et le temps ncessaire pour la distillation (5 min). - Brancher le tube sur lappareil. - Le distillat est rcupr dans une fiole derlenmeyer contenant environ 25 mL de la solution dacide borique 4% et quelques gouttes de lindicateur color Tashiro (2 V de rouge de mthyle 0,2 % + 1 V bleu de mthylne 0,2 %). - Titrer rapidement lammoniac recueilli dans la solution dacide borique par la solution dacide chlorhydrique (0,1N) jusqu changement de la coloration (virage au violet). % N2 (g) = (V1 x 0.014 x 100 x N) / V0 O N : Normalit de la solution dacide chlorhydrique utilise pour lchantillon = 0,1N. V0 : Le volume en mL, de lchantillon = 5 mL. V1 : Le volume en mL, de la solution dacide chlorhydrique utilise pour lchantillon. II.4.4. Extraction et Dosage des polyphnols totaux II.4.4.1. Prparation de lchantillon - Centrifuger pendant 10 min 3200 x g, 20 mL de lchantillon

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- Filtrer par gravit sur papier filtre lchantillon centrifug - Transfrer 10 mL du filtrat dans un bcher - Ajouter au filtrat une quantit double dhexane; 20 mL - Mlanger au mixer lectrique (ultra- Turrax) pendant 3 min une vitesse de 3500 tours/min. - Laisser reposer pendant 15 min - Recueillir lchantillon aprs sparation complte en deux phases. Lhexane surnageant et lchantillon au fond. L'chantillon est ainsi dlipid et prt une extraction liquide-liquide II.4.4.2. Extraction lactate dthyle - Mlanger au vortex 1,5 mL de lchantillon et 2 mL dactate dthyle. - Laisser reposer pendant 15 min. - lorsque la sparation en 2 phases est complte, rcuprer le surnageant dactate dthyle, et recueillir lchantillon. - Remlanger au vortex lchantillon recueilli avec 2 mL dactate dthyle. - Rpter le processus dcrit ci-dessus. - Ajouter le surnageant dactate dthyle au volume recueilli prcdemment. II.4.4.3. Dosage des polyphnols totaux par colorimtrie (Ryan et al., 1999) En milieu alcalin, les polyphnols rduisent lacide phosphomolybdique du ractif Folin Ciocalteu (Catalano et al., 1999), cette rduction se traduit par lapparition dune coloration bleue fonce. Ainsi, une lecture de la densit optique 765 nm permet de dterminer la concentration des polyphnols, en se rfrant une courbe talon dresse partir dune srie de solutions standard de lacide p-hydroxybenzoque ayant les concentrations suivantes : 0,8g/mL; 3,2g/mL; 4,8g/mL; 6,4g/mL (cf. Annexe 4). A lextrait concentr en polyphnols, obtenu, par extraction liquide-liquide, on procde aux tapes suivantes: - Introduire 0,5 mL de lextrait dans une fiole de 25 mL. - Ajouter 0,5 mL du ractif de Folin Ciocalteu. - Ajouter aprs 3 min, 4 mL de Na2CO3 (1M).

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- Complter le volume, jusquau trait de jauge, par de leau distille. - Prparer un blanc, dans les mmes conditions, en liminant lextrait. - Maintenir les fioles prpares lobscurit pendant 90 minutes. - Lire les densits optiques 765 nm laide dun spectrophotomtre (Pharmacia LKBUltrospec II).

CHAPITRE III

Rsultats et discussions
Dans ce chapitre, on illustre les rsultats des tests exprimentaux obtenus au cours de nos expriences ainsi que leurs interprtations.

III.1. Digestion anarobie des margines

Les tableaux 1, 2 et 3 rsument les caractristiques des milieux de culture et les rsultats des tests physico-chimiques effectus avant et aprs fermentation anarobique. Ces tableaux reprsentent les valeurs des analyses effectues avant et aprs une fermentation anarobie des margines avec polyphnols (MAP), sans polyphnols (MSP), et du fumier (F). Ainsi ils montrent une modification des milieux de culture qui serait la rsultante dune variation de pH, une diminution des matires organiques, une rduction de polyphnols, de protines et une production de gaz. Tableau 1:caractristiques des margines utilises avant et aprs fermentation T=42C en prsence du fumier de volailles. MAP MSP F Paramtres avant aprs avant aprs avant aprs pH 7,91 7,62 7,91 7,52 8,17 7,81 Polyphnols ( g/mL) 6,27 4,83 4,34 2,9 3,86 2,9 DCO g/L 407,68 192,08 331,12 268,48 288,16 101,92 % d'azote total 9,38 7,89 9,17 8,19 8,82 7,98

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Volume total (mL) Biogaz (mmoles)

285,2 11,4

151,8 6,1

96,4 3,85

Tableau 2: caractristiques des margines utilises avant prsence du fumier de bovins. Paramtres MAP1 MAP2 avant aprs avant aprs pH 7,89 7,69 7,76 7,64 Polyphnols (g/mL) 7,72 5,3 10,62 5,3 DCO (g/L) 486,08 388,08 561,76 348,88 % d'azote total 3,64 2,42 3,86 2,29 Volume total (mL) 209,8 355,2 Biogaz (mmoles) 8,3 14,21 Tableau 3: caractristiques des margines utiliss avant prsence du fumier de bovins. Paramtres MAP1 MAP2 avant aprs avant aprs pH 8,06 8,07 7,83 7,96 Polyphnols (g/mL) 9,16 1,93 10,62 1,45 DCO (g/L) 368,48 215,6 486,08 152,88 % d'azote total 3,36 2,24 3,88 2,38 Volume total (mL) 42,4 160,4 Biogaz (mmoles) 1,68 6,4

et aprs fermentation T=42C en MSP avant aprs

7,99 4,34 309,68 3,78 7,72 3,38 251,68 2,57

F avant
8,2 3,38 250,88 3,55

aprs
7,84 2,9 172,48 2,38 157,1 6,26

366,8 14,72

et aprs fermentation T=52C en MSP avant aprs

8 3,86 466,48 3,18 8,15 0,85 282,24 2,5 105 4,18

F avant
7,72 2,9 329,28 3

aprs
8,11 0,48 133,28 2,24 84,2 3,36

III.2. Source de l'inoculum

Plusieurs sources de l'inoculum ont t tests: dcharge des margines en cours de fermentation, fumier de volailles et fumier de bovins. Puisque la margine est caractrise par une concentration leve en DCO, un pH acide et un dficit en azote (Ranalli, 1988); alors l'accumulation des acides gras volatils au cours de la fermentation et un pH faible peuvent tre des effets inhibiteurs de la digestion anarobique (Annesini et Gironi ,1991); ceci est prouv par les rsultats qui ont montr l'absence de la production de gaz, pendant toute la semaine de fermentation, de l'inoculum provenant de la dcharge de margines. Par contre, les rsultats de la figure 2 montrent une production de biogaz qui, ds le premier jour de fermentation pour les deux fumiers seuls, augmente progressivement jusqu'au septime jour. Cette production est plus importante pour le fumier de bovins et elle est lie

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la nature des nutriments et des microorganismes prsents dans ces deux fumiers qui sont en grande partie anarobiques et mthanognes. Vu ceci, une fermentation des margines en prsence du fumier compense ces dficits et les faibles valeurs de pH et donne des conditions favorables pour la fermentation. Alors, pour viter n'importe quel dsquilibre au cours de la digestion anarobie, une rgulation de pH est ncessaire (Beccari et al., 1995); cela a t effectu par une addition de bicarbonates de sodium (Georgacakis et al., 1985) qui maintient le pH entre 7 et 8, pourtant laddition dun produit alcalin ou non, na aucun effet sur le volume de gaz produit (Beccari et al., 1996), mais les ions HCO3- permettent une neutralisation des acides organiques librs et prviennent une accumulation des acides gras volatiles (Florencio et al., 1996).
7 6 mmole CH4 5 4 3 2 1 0 0 2 4 t(j) 6 8 Fvolailles Fbovins

Figure 2: Evolution de la quantit du mthane en prsence de fumier de volailles seul et du fumier de bovins seul T=42C.

III.3. Fermentation de la margine en prsence du fumier

En se basant sur les rsultats obtenus (figure3); la fermentation des margines avant et aprs extraction des polyphnols produisent plus de gaz en prsence de fumier de bovins qu'en prsence de fumier de volailles; puisque pour ce fumier le taux de gaz produit est ds le dbut important pour MAP et MSP et crot progressivement tout le long de l'exprience alors que pour le fumier de volailles, la production de MAP en gaz est tout d'abord minime mais au second jour on assiste une augmentation brusque de ce taux, puis le gaz libr augmente considrablement jusqu'au septime jour, alors que pour MSP l'augmentation de gaz est brusque ds le premier jour, mais elle devient progressive au cours du temps et

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atteint une stade de production stable et minime (sixime et septime jour). De ce fait, on peut conclure que le fumier de bovins prsente des conditions de survie (nutriments) et du dveloppement des bactries mthanognes plus favorables.

16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 2 4 t(j) 6 8

mmole CH4

MAPbo MSPbo MAPvo MSPvo

Figure 3: Influence du fumier (bovins et volailles) sur la productivit en gaz T=42C.

Symbols: MAPbo: margine avant extraction des polyphnols pour le fumier de bovins, MSPbo: margine aprs extraction des polyphnols pour le fumier de bovins, MAPvo: margine avant extaction des polyphnols pour le fumier de volailles, MSPvo: margine aprs extraction des polyphnols pour le fumier de volailles.

III.4. Influence des polyphnols

La margine contient d'une part des produits facilement fermentescibles ex: sucre et glucose, et d'une autre part des composs difficilement dgradables ex: acides gras et polyphnols (Hamdi, 1992). Ces polyphnols ont un effet inhibiteur sur la digestion anarobique (Wang et al., 1991) mais en prsence d'activits mthanogniques, ils peuvent tre partiellement dgradables pH voisin de 8,5 (Beccari et al., 1995); alors suivant la nature de fumier (activit mthanognique) et la nature de margine, la production de gaz diffre. - En prsence du fumier de volailles, ces polyphnols sont dgrads par des bactries actognes (Mountfort et Bryant, 1985) et des bactries oxydantes de l'hydrogne (Roy et al., 1985), ce qui pourrait augmenter la production de gaz chez MAPvo plus que MSPvo (figure4).

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12 10 mmole CH4 8 6 4 2 0 0 2 4 t(j) 6 8 MAPvo MSPvo

Figure 4: Influence des polyphnols en prsence du fumier de volailles T=42C. - En prsence du fumier de bovins, l'activit mthanognique est apparemment inhibe par la prsence des polyphnols alors leur limination a pour effet d'amliorer la digestion (Sayadi et Ellouz, 1991). Puisque lextraction des polyphnols rend les margines riches en mthanol et actate qui sont des substrats des bactries mthanogniques (Hamdi, 1993) ceci se manifeste par une lgre augmentation de la production de gaz MSPbo>MAPbo (figure5).

16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 2 4 t(j) 6 8

mmoleCH4

MAPbo MSPbo

Figure 5: Influence des polyphnols en prsence du fumier de bovins T=42C. Comme prsent dans la figure 5 la diffrence dans la productivit de gaz n'est pas trop significative, alors de ce point de vue, n'importe quelle margine peut tre utilise MSP

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ou MAP, mais si on dsire minimiser en plus l'effet nuisible de la margine, il est prfrable d'extraire les polyphnols, alors d'utiliser MSP. Puisque la margine libre en prsence du fumier de bovins plus de biogaz qu'en prsence du fumier de volailles, les facteurs tudis par la suite porteront sur ce fumier.

III.5. Influence du taux de fumier

Ce facteur a t tudi sur le fumier de bovins et aux deux tempratures; les rsultats de la figure 6 montrent qu' n'importe qu'elle temprature, MAP2 produit plus de gaz que MAP1, puisque la quantit du fumier prsente est double, de mme la perte en DCO, protines et polyphnols est plus efficace pour MAP2 T=42C et T=52C car l'introduction dune quantit de fumier comme source dazote est un important stabilisateur de pH et de la digestion anarobie (Angelidaki et al., 1997 ) ce qui contribue une activit bactrienne et mthanognique plus intense dans MAP2, par suite une dgradation de la matire organique et une production de gaz plus importante.

16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 2 4 t(j) 6 8

mmole CH4

MAP1(42) MAP2(42) MAP1(52) MAP2(52)

Figure 6: Influence de taux du fumier de bovins sur la production en mthane T=42C et T=52C.

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III.6. Influence de la temprature

Les rsultats des figures 7 et 8 montrent une production de gaz plus lev temprature 42oC, mais la perte en DCO, polyphnols et en protines est plus importante 52oC pour MAP1, MAP2, MSP, F (tableau 2 et 3). Pour le fumier de bovins et T=42C, le taux de gaz produit est ds le dbut important pour MAP1, MAP2, MSP, et F, et il crot progressivement tout le long de l'exprience (figure7).

20 mmole CH4 15 10 5 0 0 2 4 t(j) 6 8 MAP1 MAP2 MSP F

Figure 7: Evolution de la productivit en gaz en prsence du fumier de bovins T=42C. Or T= 52C, on remarque une croissance progressive dans la production de gaz pour MAP1 tout le long de l'exprience de mme pour MAP2 et F, alors que pour MSP une augmentation subite se manifeste ds le premier jour ensuite la production de gaz devient progressive jusqu'au cinquime et sixime jour, ou elle atteint un niveau stable de production (fiigure8). Cela peut tre d la slection des germes thermotolrants et au contrle des populations bactriennes en phase thermophile (Van Lier et al., 1997). Alors de point de vue productivit de gaz, il est prfrable de manipuler 42oC, mais de point de vue, protection de l'environnement il est prfrable de manipuler 52oC.

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7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 t(j) 6 8

mmole CH4

MAP1 MAP2 MSP F

Figure 8: Evolution de la productivit en gaz en prsence du fumier de bovins T=52C. Par contre le pH varie diffremment: - T:42C, on remarque sa diminution avec la fermentation qui rsulte de l'accumulation des intermdiaires de la fermentation: acides gras volatils (AGV) qui se trouvent sous forme protone (non ionise) (Mawson et al., 1991). Cette accumulation peut tre d diffrents phnomnes comme l'inhibition des tapes ultrieures ou la biodgradation trop rapide d'un substrat organique. - T: 52C, on remarque une augmentation du pH au cours du temps cela est explique par la production de l'ammoniaque. Or la diminution de DCO est explique par la dgradation des substances organiques qui seraient transforms en produits intermdiaires (AGV, CO2...).

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CONCLUSION
Cette tude rvle l'importance de la fermentation anarobique des margines en prsence du fumier puisqu'elle minimise leur effet indsirable sur l'environnement; par sa capacit dgrader, d'une part, sous l'action de l'activit des bactries de la biomasse, la matire organique nfaste (diminuer le taux de DCO et de polyphnols), et dautre part de produire de l'nergie sous forme de biogaz. Ce gaz est estim tre le mthane puisque les autres gaz librs: NH3, H2S, CO2,sont absorbs soit par la solution d'acide sulfurique, soit par la solution d'hydroxyde de sodium. Puisque le coefficient de production de biogaz varie en fonction de la nature des effluents traiter et le temps ncessaire pour une fermentation complte alors le gaz libr devient faible la fin de chaque exprience suite la diminution de la teneur en matires organiques prsentes (diminution de DCO), et/ou laccumulation probable des composs inhibant la mthanisation (acides gras volatiles, CO2). La performance et lefficacit de la digestion anarobie par rapport aux diffrents fumiers, types de margines et procds de gestion de la matire organique ont t tudies. Tout d'abord en prsence du fumier bovins, l'limination des polyphnols pour effet d'amliorer la digestion et d'augmenter la production de gaz chez MSP jusqu' 14,72 mmoles, mais en prsence du fumier de volailles, la flore mthanogne nest pas inhibe par les polyphnols et mme elle contribuerait leur dgradation ce qui se traduit par une augmentation de gaz libr chez MAP jusqu' 11,4 mmoles; sachant que la diminution de la DCO est peu prs du mme ordre pour ces deux fumiers. Enfin le fumier de bovins favorise une production de gaz plus leve pour les diffrents types des margines (MSP et MAP), ce qui nous permet de privilgier son utilisation sur celui de volailles. De mme en prsence de ce fumier mais tempratures diffrentes le comportement varie du fait que de point de vue productivit de gaz, il est prfrable de manipuler 42oC, mais de point de vue, protection de l'environnement il est prfrable de manipuler 52oC (perte en DCO plus significative).

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Malgr plusieurs points mal prcis (le temps de sjour et les conditions du milieu de culture.) ce traitement reste un moyen pour valoriser ces effluents reconnus pour leur effet nocif sur lenvironnement, et pour produire, en mme temps, une source dnergie. Enfin cette tude pourrait tre poursuivie en: - effectuant un prtraitement, biologique ou chimique, des margines avant de faire la digestion anarobique. - Dterminant la phytotoxicit des rsidus obtenus. - utilisant uniquement la flore anarobique stricte du fumier.

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Annexes
Annexe1: Composition et caractristiques des margines (Vlyssides et al., 1998).
Paramtres Solides totaux (g/l) Solides totaux suspendus (g/l) solides Totaux volatiles (g/l) Cendre (g/l) pH DBO (g/l) DCO (g/l) Conductivit (mS/cm) Protines (g/l) Composs phnoliques minimum 28,85 3,27 27,57 2,58 0,60 12,64 32,63 5,00 9,95 4,55 maximum 99,70 4,51 87,20 9,69 4,50 68,71 158,18 18,00 28,30 17,15

Annexe 2: Nature et pourcentage des gaz produits lors dune digestion anarobie (Ghougassian, 2000). Gaz Mthane CH 4 Dioxyde de carbone CO2 Azote N2 Hydrogne H2 Monoxyde de carbone CO Oxygne O2 Sulfure dhydrogne H2 S Pourcentage 54-70 27-45 0,5-3 1-10 0,1 0,1 Traces

Annexe 3: caractristiques des margines avant et aprs une fermentation anarobie (borja et al., 1992b). Margine Paramtres pH Avant Aprs fermentation fermentation 5,2 5,4

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DCO (g/l) Solides totaux (g/l) Matires sches (g/l) VS (g/l) TSS(g/l) Alcalinit (CaCO3) (g/l) N- NH3 (g/l) Polyphnols (acide cafique) (g/l)

60,0 97,2 13,4 83,8 49,5 1,46 0,06 0,30

22,0 46,4 10,0 36,4 14,1 1,24 0,04 0,103

Annexe 4: Droite d'talonnage de lacide p-hydroxybenzoque.

0.3 0.25 Absorbance 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 1 2 3 4 5 6 7 C (microgramme/ml ) y = 0.0442x R = 0.9936
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REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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