Bactrias anaerbias

Aerbios Obrigatrios Anaerbios Facultativos Estritos Propriamente Estritos Aerotolerantes Metabolismo na presena de O2 Exigem O2 como aceitador final de electres Metabolismo na ausncia de O2 Crescem aerobicamente, usando O2 como aceitador final de electres e anaerobicamente, obtendo energia pela fermentao de compostos orgnicos Incapazes de usar O2 e inibidas por ele No tolera [O2] maior que 0,5% So membros da flora normal Toleram [O2] at 2-8% Responsveis pela maioria das infs.

Bactrias anaerbias e toxicidade ao O2

Do metabolismo aerbio bacteriano resultam espcies reactivas de O2 perxido de hidrognio radicais hidroxilo anies superoxido Estas espcies reactivas de O2 tornam-se txicas: Causam danos no DNA Destroem componentes lipidicos das clulas Inactivam enzimas essenciais para as actividades metablicas Bactrias aerbias e anaerbias facultativas tm enzimas protectoras Catalase Peroxidase Superoxido dismutase Conceito clssico toxicidade do O2 nos anaerbios dependia da ausncia destas enzimas protectoras. Actualmente: Superoxido dismutase Produo induzida pela exposio ao O2 em Bacteroides e outros Os nveis de enzima so superiores nos Gram- que nos Gram+ Correlacionam-se com o grau de tolerncia ao O2 nos anaerbios obrigatrios moderados Papel importante na tolerncia ao O2 e na virulncia de alguns anaerbios Catalase Produo demonstrada em Bacteroides, Peptostreptococcus e Propionibacterium No se correlaciona com a tolerncia ao O2 Peroxidase A sua actividade no foi demonstrada em anaerbios. As razes pelas quais outros anaerbios (Clostridium perfringens) so capazes de sobreviver a exposies de O2 superiores a 72h ou mais apesar da ausncia de enzimas protectoras so desconhecidas.

Bactrias anaerbias so predominantes no organismo Maioria das inf. so endgenas, provocadas por bactrias que ganham virulncia ou passam para locais estreis onde se tornam patognicas A identidade dos anaerbios associados com infs. especificas pode frequentemente ser previsvel pelo local do organismo envolvido Passagem atravs de barreiras muco-cutneas (trauma ou cirurgia), propagao a partir de zonas contguas, exp., por aspirao. Algumas inf. so exgenas associadas a agentes esporulados: Botulismo Clostridium botulinum Ttano Clostridium tetani Gangrena Gasosa Clostridium perfringes Processo infeccioso envolve uma mistura de bactrias que actuam por sinergismo de virulncia e complementaridade metablica por vezes, associam-se a bactrias aerbias que numa 1 fase lhes fornece alguns metabolitos. SNC Cabea e pescoo Pleuropulmonar Abcessos cerebrais Abcesso periodontal Outras infs. orais Pneumonia por aspirao Abcessos pulmonares Pneumonia necrosante Peritonites e abcessos Abcessos tubo-ovarianos Abcessos vulvo-vaginais Aborto sptico Gangrena gasosa (mionecrose) Celulite crepitante Fasceite necrosante

Intra-abdominais Tracto genital feminino

Tecidos moles

Colheita de amostras
Por aspirao com agulha e seringa Amostra de tecido por bipsia Zaragatoas se possvel, devem ser rejeitadas! Mais susceptveis de contaminao Mais expostas ao O2 e dessecao No permitem a preparao de um bom esfregao Colheita de pequeno volume de produto para amostra Local Sangue Dentes Espcimen aceitvel Sangue Aspirados endodentarios Aspirados de coleco purulenta Aspirados de abcessos com agulhas Especimens colhidos por interveno cirrgica Espcimen inaceitvel Raspados das superfcies gengivais, dos dentes ou mucosa vizinha Zaragatoa Irrigao ou aspirados 2

Faringe Seios

perinasais rea pulmonar

SNC rea abdominal Tracto genital feminino

Tracto urinrio Tecidos moles

Aspirao transtraquel Aspirados de coleces purulentas Colheira por operao Aspirao percutnea pulmonar Liquido pleural Aspirado por broncoscpio com proteco terminal LCR Aspirados por paracentese Bile Colheitas por interveno cirrgica Culdocentese Colheita cirrgica Colheita por laparoscopia Espcimen da cavidade endometrial com curette de suco Aspirado de urina supra-pbico Aspirados de feridas profundas Aspirados com agulha atravs de zonas intactas Colheira cirrgica

Expectorao espectorada Aspirados nasofarngeos Broncoscopia vulgar Aspirado de traqueostomia

Contedo gstrico, Fezes Amostras intraluminares Zaragatoa rectal Descarga vaginal Amostras cervicais Corrimento colhido com zaragatoa Exsudado do endomtrio Urina Amostra superficial

Transporte da amostra
Amostras mantidas a 37C Evitar refrigerao das amostras leva diminuio do n microrganismos viveis Em caso de atraso de 15-20 mins entre colheita e processamento Velocidade de transporte tanto maior quanto menor a amostra colhida Usados para pequenas amostras de tecido, fluidos aspirados ou especimens colhidos com zaragatoas Tubos fechados ou frascos com uma atmosfera anaerbica e base de agar isotonica que mantm ambiente hmido Port-A-Cul system, Anaerobic Transport Mdium, Anaport e Anatube Tubos de vidro ou plstico, com sistemas catalticos para gerar um ambiente anaerbico depois da zaragatoa ser inserida Vacutainer anaerobic specimen collector, Anaerobic Culturette system Tubos com ambiente anaerbico e meio de transporte reduzido PRAS, anaerobic transport system, anaerobic transport medium

Exame macroscpico
Inspeco visual sugerem a presena de bactrias anaerbias: Purulncia Odor ptrido Tecidos necrosados Pus com gros de enxofre Exame com luz U.V. (360 nm) pesquisa de fluorescncia vermelho tijolo: anaerbios pigmentados Porphyromonas e Prevotella 3

Exame microscpico
Esfregao corado pelo Gram observao de morfologia tpica de mts bacts Bacteroides bacilo Gram- pouco corado, pleomrfico Fusobacterium bacilo Gram- fusiforme e fino Veillonella coco Gram- pequeno Actinomyces bacilo Gram+ ramificado Clostridium perfringens bacilo Gram+ largo e rectangular Mtodo de Gram - funciona como um controlo de qualidade Se espcimen transportada correctamente Se meio de isolamento foi apropriado Se sistema de incubao anaerbico foi apropriado Se subcultura anaerbica foi feita correctamente Se crescimento foi inibido pela presena de outras bactrias ou antibiticos Microscopia de campo escuro e contraste de fase demonstrao de espiroquetas Imunoflourescncia com anticorpos monoclonais rpida identificao de mts espcies anaerbias, caro, mts falsos + e , no substitiu cultura

Outros procedimentos
Cromatografia gs-liquida (GLC) analise directa dos AG de cadeia curta Culturas de sangue com algum valor Analise directa de material purulento pouco sensvel e especifico Testes serolgicos uso limitado, teste de antigenio do ltex para Clostridium difficile

Seleco dos meios de cultura

Maioria das inf. so polimicrobianas Vai depender tipo de amostra, volume amostra, recursos econmicos Meios devem ser frescos e/ou pr-reduzidos Meios no selectivos devem ser enriquecidos com vit K1 e hemina Agar-sangue crescimento de anaerbios estritos e facultativos Brucella bacilos Gram- anaerbios Brain-heart Columbia CDC cocos anaerbios Schaedler bacilos Gram- anaerbios, alta dose de glicose, favorece crescimento de organismos sacarolticos Fastidious Anaerobe agar Fusobacterium Meios selectivos 4

BBE agar (Bacteroides bile esculin agar) crescimento selectivo de B. fragilis, ocasionalmente outras bactrias crescem: Fusobacterium, Klebsiella, Enterococcus KVLB agar (agar sangue lisado com vancomicina e kanamicina) crescimento selectivo de Bacteroides e aumenta a produo de pigmento nos Bacteroides pigmentados (Prevotella e Porphyromonas); bacilos Gram- resistentes kanamicina podem crescer neste meio Agar sangue de carneiro com lcool fenietil crescimento da maioria dos anaerbios Gram- e +; inibe bacilos anaerbios facultativos GramAgar sangue com colistina e acido nalidixico crescimento dos anaerbios estritos e facultativos Gram +; maioria das bactrias Gram- so inibidas Caldos se sistema de incubao anaerbico falhar, a espcimen em cultura no ser perdida Meio de tioglicolato enriquecido com hemina e vit K1 isolamento de anaerbios de crescimento lento, como Actinomyces Chopped meat broth (caldo de carne) para isolamento de anaerbios

Preparao das amostras para sementeiras

Volume liquido concentrao por centrifugao, semear o sedimento Zaragatoa extracao suave num pequeno volume (0,5-1ml) de caldo de tioglicolato; semear o espcimen no meio de cultura usando uma pipeta Tecidos homogeneizao em 1ml caldo de tioglicolato suave e rpido, para evitar exposio ao O2 Usar sempre pipetas e ansas esterilizadas na inoculao dos meios

Incubao em anaerobiose
Composio habitual 5% H2, 5% CO2, 90% N2 Sistemas produo de anaerobiose: Jarra de anaerobiose Custo inicial Custo de manuteno Tempo Espao Outras caractersticas Moderado Moderado Baixo Moderado Sistemas de vlvulas Sistema de evacuaosubstituio Sistema gerador de gs Sistema Gs-Pak catalisador palladium e indicador de anaerobiose Saco de anaerobiose Baixo Alto Baixo Pequeno 1 ou 2 placas, crescimento pode ser detectado examinando as placas pelo saco transparente Cmara de anaerobiose Alto Moderado Moderado Moderado-grande Sistema em anaerobiose por catalisador palladium, reactivo pelo calor a 160C/2h, ambiente mantido seco por gel de slica (pode empobrecer crescimento bact) Placas inspeccionadas a Roll tube Moderado Moderado Moderado Moderado ptimo p/ espcies extremamente sensveis ao O2, no conveniente para isolamento de anaerbios obrigatrios moderados associados s infs. humanas Tubos inspeccionados a 5

Vantagens

Simples, conveniente, permite uso de tcnicas

Placas inspeccionadas a

convencionais

Desvantagens

Possibilidade de exposio prolongada das placas ao O2 durante inspeco/subculturas

qq momento sem perturbar as condies de anaerobiose; simples, conveniente, permite uso de tcnicas convencionais Uso de apenas 2 placas, possibilidade de exposio prolongada das placas ao O2 durante subculturas

qq momento sob condies de anaerobiose, isolamento segundo tcnicas tradicionais

qq momento sem perturbar as condies de anaerobiose

Ocupa mt espao, custo inicial elevado, consumo de tempo elevado

Tecnicamente difcil, difcil isolamento de estirpes em cultura pura, no permite obs da morfologia celular tpica

Identificao das bactrias anaerbicas

Presumptiva: TSA colistina, vancomicina, kanamicina Provas bioqumicas - catalase, produo de indol, reduo de nitratos, polianetolsulfonato de sdio, crescimento em 20% bile, alanina peptidase, discos verdes brilhantes, urease, licitinase e lipase Testes cromognios kits de identificao rpida (4-24h) -glicosidase, -galactosidase, glicosidase, -fucosidase Definitiva Cromatografia gs-liquida (GLC) analise directa dos ac. gordos de cadeia curta Testes bioqumicos PRAS determinar actividade sacaroltica Placas Presempto testes diferenciais nos quadrantes das placas I, II e III Sistemas rpidos de identificao API 20 A, Minitek system, API-ZYM system

Dupla zona de -hemolise

vancomicina

Crescimento em 20% bile

Produo de indol

kanamicina

Reduo de nitratos

urease

B. fragilis B. pigmentados B. ureolyticus Fusobacterium Veillonella Peptostreptococcus C. perfringens C. difficile Propionibacterium Eubacterium

B CB/B B B C C B B B CB/B

+ + -

+ -

R R S S S V S S S S

R V S S S R R R R R

R V R R R S S S S S

+ V + + -

V V V + -

+ + V +/V

V V V V +/-

+ + V + +

V -

V V -

lipase

Anaerbios

+ -

V + -

Mobilidade

Morfologia

Alanina peptidase

lecitinase

colistina

Esporos

catalase

Bactrias anaerbias

Bacilos anaerbios, Gram +, formadores de esporos

Bacilos anaerbias, Gram +, no formadores de esporos

Cocos anaerbios Gram +

Bactrias anaerbias Gram

Actinomyces Mobiluncus Bifidocterium Eubacterium Propionibacterium Lactobacillus Actinomyces

Pele e mucosas (oral, TGI, genital) do Homem e animais Mts so oportunistas Inf. graves com risco de vida Crescimento lento

Anaerbios estrictos ou facultativos Produo de inf. crnicas de desenvolvimento lento Desenvolvimento de filamentos ou hifas semelhante aos fungos Crescimento lento em cultura 2 semanas A. israelli, A. meyeri, A. naelundii, A. odontolyticus, A. viscosus Colonizam tracto resp. sup, TGI, TGU feminino Baixa virulncia traumatismos, cirurgia, infs. Actinomicose macroscopicamente: gros de enxofre amarelos ou laranja Cervicofacial, torcica, abdominal, plvica, SNC Sensveis penicilina e resistentes ao metronidazole Propionibacterium Bacilos pequenos Gram + em cadeias curtas Na pele, conjuntiva, ouvido externo, orofaringe, TGU feminino Anaerbios facultativos ou estritos, imveis, catalase +, fermentadores de carbohidratos co produo de c. proprinico P. acnes acne e inf. oportunistas P. propionicus - canaliculite lacrimal e abcessos Lactobacillus Bacilos anaerbios facultativos ou obrigatrios Boca, estmago e TGU (o + comum na uretra) Frequentemente isolado na urina e sangue Resistente vancomicina Bacteremia, endocardite, septicemia oportunista Tratamento penicilina + aminoglicosdeo Bifidobacterium e Eubacterium Orofaringe, clon e vagina Baixa virulncia raramente causam infs. Mobiluncus Anaerbios obrigatrios de crescimento lento Gram varivel ou Gram Bacilos encurvados com extremidades afiladas Classificados como Gram + Parede celular Gram+ Falta de endotoxina Susceptvel vancomicina, clindamicina, eritromicina e ampicilina Resistente colistina Vaginose bacteriana

Bactrias anaerbias

Bacilos anaerbios, Gram +, formadores de esporos

Bacilos anaerbias, Gram +, no formadores de esporos

Cocos anaerbios Gram +

Bactrias anaerbias Gram

Eram classificados como Peptostreptococcus Colonizam cavidade oral, TGI, TGU e pele Infs ocorrem qd bacts. Passam destes locais para outros estreis Tracto resp. sup. sinusite e inf. pleuropulmonares TGI inf. intrabdominais TGU endometrite, abcessos plvicos, salpingite Pele celulite, infs. tecidos moles Sangue infs. sseas Dx lab difcil: Necessrio meio de transporte para prevenir contaminao com outros agente que colonizem as mucosas Meio de transporte sem oxignio Meios de cultura nutricionalmente ricos Incubao 5-7 dias Sensveis penicilina, metronidazole, imipenem e cloramfenicol Resistentes aos aminoglicosdeos (tds anaerbios) Anaerococus, Fingoldia, Micromonas, Peptostreptococcus, Schleiferella

Colonizam tracto resp.sup, TGI, TGU (prevalentes) Patognicas possuem catalase e superxido dismutase toleram exposio ao O2 Produzem enzimas citotxicas Causam infs. endgenas Tracto resp. Abcessos cerebrais Intrabdominais Ginecolgicas Cutneas e dos tecidos moles Bacteremia Gastroenterite Meios selectivos Enriquecidos com bile Enriquecidos com sangue lisado estimula produo de pigmento por Prevotella e Porphyromonas Bacteroides bacilos, crescimento estimulado em meios com 20% bile, crescimento rpido (2 dias), sem endotoxinas B.fragillis pleiomrfico, o + virulento, produz BFT e -lactamases , identificao: Gram e morfologia das colnias Resistncia kanamicina, vancomicina e colistina Crescimento estimulado em meios com 20%bile Fusobacterium bacilos alongados, produzem -lactamases Porphyromonas bacilos assacarolticos, bilesusceptivel, pigmentados, produzem -lactamases Prevotella bacilos pequenos sacarolticos, bile-susceptivel, pigmentados e no-pigmentados, produzem -lactamases

Bactrias anaerbias

Bacilos anaerbios, Gram +, formadores de esporos

Bacilos anaerbios, Gram +, no formadores de esporos

Cocos anaerbios Gram +

Bactrias anaerbias Gram

Clostridium

Anaerbios estritos Ubiquitrios solo, gua, TGI de humanos e animais Maioria comensais Capacidade de patogenicidade Sobrevivncia em condies adversas pela esporulao Crescimento rpido em meios sem O2, enriquecidos nutricionalmente Produo Toxinas histoliticas Enterotoxinas Neurotoxinas Clostridium difficile Anaerbios estritos Infs. endgenas Diarreia ps-antibioterapia Colite pseudomembranosa Produo: Toxina A = enterotoxina Toxina B = citotoxina Hialuronidase Factores de adeso Diagnstico deteco de enterotoxina ou citotoxina nas fezes Tratamento vancomicina e metanizadole Clostridium botulinum Anaerbios estritos Crescimento lento Produo de 1 de 7 toxinas (A-G) toxinas botulinicas (termo-labeis) Estirpes que causam da produzem lipase, protenas digerem leite, gelatinases, fermentam glicose Da humana toxinas A, B, E e F Botulismo bloqueio da libertao de Ach paralisia flcida Isolar bacts 10 mins a 80C Toxinas inactivadas se 10 mins a 60-100C

Clostridium perfringens Bacilos grandes, rectangulares, Gram + Esporos raramente obs (in vivo/in vitro) Imveis, crescimento tpico de bacts. mveis Hemolticos zona dupla de hemolise pelas toxinas e em agar-sangue Produo de toxinas letais: , , , 5 tipos (A-E): A infs. + freq C enterite necrosante Produo de lecitinase (PLC) = -toxina (lise) Da por exposio exgena ou endgena Infs. tecidos moles, celulite, miosite supurativa, mionecrose ou gangrenas gasosas, gastroenterite, intoxicao alimentar (autolimitada), enterite necrosante Tratamento penicilina Clostridium tetani Bacilo mvel, com esporos nas extremidades Difcil crescimento anaerbios estritos Proteoliticos, no fermentam carbohidratos 2 toxinas: Tetanolisina hemolisina, oxignio-labil Tetanospasmina neurotoxina termo-labil provoca Ttano por desregulao da actividade excitatria neuronial paralisia espstica Vacinao com toxoide tetnico Testes de neutralizao antitoxina tetnica Ttano:sistmico, localizado, ceflico,neonatal