16/01/2013

CITOLOGIA E FISIOLOGIA DA CLULA BACTERIANA

Profa. Dra. Vnia Lcia da Silva

MORFOLOGIA BACTERIANA

BACTRIAS - clulas procariontes, constituindo os menores seres vivos e os mais simples estruturalmente, embora complexos e diversificados do ponto de vista bioqumico e metablico - ADAPTAO Caractersticas bsicas dos procariontes: Ausncia de compartimentos dentro da clula - metablitos dispersos no citoplasma; Ausncia de ncleo verdadeiro - cromossomo bacteriano disperso no citoplasma Morfologia Bacteriana: As clulas bacterianas so caracterizadas morfologicamente pelo seu tamanho, forma e arranjo. Tamanho: 0,3 /0,8 m at 10/25 m. As espcies de interesse mdico variam entre 0,5 a 1,0 m por 2 a 5 m. Forma e arranjo: - Cocos (formas esfricas): grupo homogneo em relao a tamanho, sendo clulas menores (0,8 a 1,0 m).

Diplococos: cocos agrupados aos pares. Ex.: Neisseria (meningococo)

Ttrades: agrupamentos de quatro cocos Sarcinas: agrupamento de oito cocos em forma cbica. Ex.: Sarcina

Estreptococos: cocos agrupados em cadeias. Ex.: Streptococcus

Estafilococos: cocos em grupos irregulares, lembrando cachos de uvas. Ex.: Staphylococcus

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Bacilos ou bastonetes: cilndricos, forma de basto, podendo ser longos ou delgados, pequenos e grossos, extremidade reta, afilada, convexa ou arredondada.

Diplobacilos: bastonetes agrupados aos pares. Estreptobacilos: bastonetes agrupados em cadeias. Paliada: bastonetes agrupados lado a lado como palitos de fsforos.

Formas helicoidais ou espiraladas: clulas de forma espiral.

Espirilos: possuem corpo rgido e se movem s custas de flagelos externos, dando uma ou mais voltas espirais em torno do prprio eixo.

Espiroquetas: so flexveis e locomovem-se s custas de filamentos axiais (flagelos periplasmticos), podendo das vrias voltas completas em torno do prprio eixo. Ex.: Gnero Treponema

Formas de transio

Bacilos muito curtos: cocobacilos. Ex.: Prevotella

Espirilos muito curtos, assumindo formas de vrgula: vibries. Ex.: Vibrio cholerae

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CITOLOGIA BACTERIANA A observao interna das estruturas celulares d-nos uma idia de como a bactria funciona no ambiente. A figura a seguir representa as diversas estruturas bacterianas:

ESTRUTURAS CELULARES EXTERNAS

Flagelos Estruturas especiais de locomoo, constitudas pela protena flagelina, que formam longos filamentos que partem do corpo da bactria e se estendem externamente parede celular. O flagelo propulsiona a bactria por movimento rotatrio => dependente de energia fornecida pela diferena de potencial de membrana (fluxo de ons H). Distribuio dos flagelos: atrquias (sem flagelo)

a) monotrquio

b) anfitrquio

c) lofotrquio

b) peritrquio

Fmbrias Estruturas filamentosas mais curtas e delicadas que os flagelos, semelhantes a plos, que se originam da membrana plasmtica, e so usados para fixao, e no para motilidade. So constitudas por uma protena denominada pilina. Esto relacionadas com a aderncia s superfcies mucosas (fmbrias comuns) => colonizao. Pili F => relacionado com a transferncia de material gentico durante a conjugao bacteriana (fmbrias ou pili sexual codificadas pelo plasmdeo F).

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Fmbria sexual

Fmbria comum

Cpsula Camada que circunda a clula bacteriana externamente a parede celular, de consistncia viscosa e de natureza polissacardica (polissacardeo extracelular) ou polipeptdica. Pode ser evidenciada por mtodos especiais de colorao (tinta nanquim). Funes: proteo da clula bacteriana contra desidratao, permitir a fixao da bactria em vrias superfcies, evitar a adsoro de bacterifagos na clula bacteriana. Relacionada virulncia da bactria, pois confere resistncia fagocitose pelas clulas de defesa do corpo em uma mesma espcie, amostras encapsuladas so mais virulentas que as no-encapsuladas AUMENTA A CHANCE DE INFECO.

Parede Celular Estrutura rgida que recobre a membrana citoplasmtica e d forma s clulas, alm de proteo, mantendo a presso osmtica intrabacteriana e prevenindo expanso e eventual rompimento da clula. Composio: peptidioglicano (mucopeptdeo ou murena) estrutura rgida da parede: N-acetilglicosamina (NAG) cido N-acetilmurmico (NAM) tetrapeptdeo (4 aminocidos)

Devido as propriedades da parede celular, as bactrias podem ser divididas em dois grandes grupos: GRAM POSITIVAS e GRAM NEGATIVAS, de acordo com a sua resposta colorao de GRAM.

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Composio do tetrapeptdeo
Contm L e D aminocidos, sempre ligado ao NAM. Ligaes cruzadas entre o COOH terminal do aminocido de um tetrapeptdeo e o grupo NH2 do aminocido do tetrapeptdeo vizinho. L-alanina
D-cido glutmico

L-alanina
D-cido glutmico

L-lisina D-alanina

L-lisina D-alanina

Ligao cruzada

PAREDE DAS GRAM POSITIVAS Possuem maior quantidade de peptidioglicano, o que torna a parede dessas bactrias mais espessa e rgida. Composta por peptidioglicano e cidos teicicos (cadeias de polifosfato com resduos de ribitol e glicerol) ou cidos lipoteiccicos.

cidos teicicos

Peptideoglicano

Membrana citoplasmtica

Citoplasma

Os cidos teicicos/lipoteicicos esto ligados ao peptidioglicano APENAS nas bactrias Gram positivas, nunca nas Gram negativas.

PAREDE DAS GRAM NEGATIVAS Mais complexa - a quantidade de peptidioglicano menor, e possui uma membrana externa envolvendo a fina camada de peptidioglicano, que se situa no espao periplasmtico. MEMBRANA EXTERNA: Serve como barreira seletiva que controla a passagem de algumas substncias. Estrutura: bicamada assimtrica, contendo fosfolipdios, semelhante MP.

Internamente => camada de fosfolipdeos e lipoprotena, que est ancorada ao peptidioglicano. Externamente => camada impermevel de lipopolissacardeo (LPS) molcula anfiptica.

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A membrana externa das bactrias Gram negativas contm protenas (OMP), que formam canais por onde penetram diversas substncias.

Lipopolissacarideo

Membrana externa
Espao periplasmtico lipoprotenas e

Peptideoglicano

Espao periplasmtico

Membrana citoplasmtica

Citoplasma

Essas protenas presentes na membrana externa das Gram negativas constituem aprox. 50% da membrana, no relacionadas com as protenas da MP, e possuem diversas funes.

LPS
3 segmentos ligados covalentemente: lipdio A, cerne do polissacardeo e antgenos O.

A poro lipdica do LPS tambm chamada de ENDOTOXINA. O LPS pode ser txico, causando febre, diarria, destruio de hemcias e um choque potencialmente fatal. Efeito protetor nas bactrias Gram negativas intestinais (resistncia solubilizao pelas enzimas intestinais e bile).

Implicao da estrutura da parede celular bacteriana - COLORAO DE GRAM Baseado nas propriedades da parede celular (substncias lipdicas na camada externa)

1884 Hans Christian Joachim Gram

Experimentos com pneumococos corantes seletivos para bactrias

Desenvolvimento de um protocolo de colorao de esfregaos bacterianos

Permitiu a diviso destes organismos em 2 grandes grupos - visualizao por microscopia ptica

Revoluo no diagnstico das doenas infecciosas.

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PAREDE CELULAR DAS MICOBACTRIAS

Bacilos aerbios, imveis, no-formadores de esporos, de parede celular complexa rica em lipdios e ceras, especialmente cidos miclicos que so ligados covalentemente a lipidios acil (cidos arabnogalactamicos). Causadores da tuberculose e da lepra.

Estrutura da parece celular: A parede celular das micobactrias responsvel por muitas caractersticas das bactrias (por exemplo, cido resistncia, crescimento lento, resistncia aos detergentes, resistncia aos antibiticos comuns).

Nutrientes solveis em gua entram nas clulas atravs de porinas.

Os diferentes lipdios da parede celular das micobactrias formam uma bicamada assimtrica com cadeias curtas de glicerol-fosfolipdios que atuam como barreira a substncias aquosas tornando a superfcie celular hidrofbica e resistente a numerosos desinfetantes, lcoois e cidos.

Membrana Citoplasmtica Aproximadamente 10 nm e separa a parede celular do citoplasma. constituda de fosfolipdeos e protenas. Desempenha importante papel na permeabilidade seletiva da clula funciona como barreira osmtica. Difere da membrana citoplasmtica dos eucariotos por: - no apresentar esteris (colesterol) em sua composio; - ser sede de numerosas enzimas do metabolismo respiratrio => (MESOSSOMO); - controlar a diviso bacteriana atravs do mesossomo.

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ESTRUTURAS CELULARES INTERNAS

rea citoplasmtica Citoplasma: 80 % de gua, cidos nuclicos, protenas, carboidratos, compostos de baixo peso molecular, lipdios, ons inorgnicos. Stio de reaes qumicas. Ribossomos: ligados a uma molcula de mRNA, so chamados de poliribossomos. Presentes em grande nmero nas clulas bacterianas. So menores ribossomos 70S Grnulos de reserva (incluses): os procariotos podem acumular no citoplasma substncias sob a forma de grnulos, constitudos de polmeros insolveis (ex.: grnulos de glicognio, amido, lipdios, polifosfato, enxofre e xido de ferro) .

rea citoplasmtica Ribossomos: ligados a uma molcula de mRNA, so chamados de poliribossomos. Presentes em grande nmero nas clulas bacterianas. So menores ribossomos 70S

Tipo de rRNA em procariotos 16s 5s 23s

Nmero aproximado de nucleotdeos 1542 120 2904

Localizao da subunidade 30s 50s 50s

rea nuclear Nucleide: cromossomo bacteriano, constitudo por uma nica molcula dupla fita circular de DNA no delimitado por membrana nuclear e sem a presena de histonas. Contm as informaes necessrias sobrevivncia da clula e capaz de replicao. Elementos extracromossomais Plasmdeos:, molculas menores de DNA, dupla fita, circulares, cujos genes no codificam caractersticas essenciais, mas podem conferir vantagens seletivas para as bactrias que os possuem (ex.: genes de resistncia a antibiticos, metais txicos, produo de toxinas, etc). Auto-duplicao independente do cromossomo bacteriano, e podem existir vrias cpias dentro da clula. Transposons e integrons

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Esporos Tambm chamados de endsporos (porque se formam dentro da clula). Esporos contm pouca gua no citoplasma, possuem parede celular muito espessa, so altamente resistentes a agentes fsicos e qumicos, devido a sua capa impermevel de protena tipo queratina (associado ao clcio) e presena de cido dipicolnico. Funo: proteo da clula vegetativa das adversidades do meio ambiente (limitao de nutrientes, temperatura, e dessecao). Sua formao leva em torno de 6 horas. Tm pouca atividade metablica, pode permanecer latente por longos perodos forma de sobrevivncia, e no de reproduo. Ex. Bacillus e Clostridium.

FISIOLOGIA BACTERIANA
As clulas procariticas so compostas por gua, macromolculas, apresentando tambm uma menor quantidade de outros compostos orgnicos e ons.

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Todos os organismos vivos necessitam de compostos para sua nutrio, crescimento e multiplicao. Esses compostos so utilizados para a formao dos constituintes celulares e na obteno de energia.

VIAS ANABLICAS E CATABLICAS

Dentro da clula bacteriana ocorrem reaes qumicas catalisadas por enzimas. O conjunto de transformaes da matria orgnica denominado METABOLISMO e compreende basicamente dois processos:
Construo de molculas orgnicas complexas a partir de molculas simples, com gasto de energia. Ex.: formao das protenas.

Quebra de compostos orgnicos complexos em compostos mais simples, com liberao de energia. Ex.: Degradao do acar.

CATABOLISMO

ANABOLISMO

NUTRIO DOS MICRORGANISMOS

Os microrganismos necessitam de um ambiente propcio com todos os constituintes fsicos e qumicos necessrios para seu crescimento. As substncias ou elementos retirados do ambiente so utilizadas como blocos para a construo da clula.

NUTRIENTES
Os nutrientes podem ser de vrios tipos, dispostos em trs categorias, de acordo com a sua concentrao e importncia na clula bacteriana: macronutrientes, micronutrientes e fatores de crescimento.

MACRONUTRIENTES
Macronutrientes gramas Carbono (Compostos orgnicos, CO2) Oxignio
(O2, H2O, comp. orgnicos)

Funes

Nitrognio (NH4, NO3, N2, comp. org.) Hidrognio (H2, H2O, comp. Orgnicos) Fsforo (PO4) Enxofre (SO4, HS, S, comp. enxofre)

Constituintes de carboidratos, lipdeos, protenas e cidos nuclicos

mg Potssio (K+) Clcio (Ca2+) Magnsio (Mg2+) Ferro

(Fe2+/Fe3+)

Atividade enzimtica Resistncia ao calor do endosporo Cofator de enzimas, complexos com ATP, estabiliza ribossomos e membranas Constituio de citocromos, cofator de enzimas, cofator de protenas transportadores de eltrons

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MICRONUTRIENTES

Mangans

FATORES DE CRESCIMENTO
So compostos que alguns tipos celulares necessitam em quantidades muito pequenas. Embora a maioria dos microrganismos seja capaz de sintetiz-los, alguns microrganismos necessitam que eles sejam adicionados ao meio de cultura. Estes compostos entram na composio das clulas ou de precursores dos constituintes celulares.

Aminocidos Purinas e pirimidinas Colesterol Heme Vitaminas

Vitaminas requeridas pelos microrganismos e suas funes

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FONTES DE CARBONO E ENERGIA PARA O CRESCIMENTO BACTERIANO

As bactrias, de acordo com a fonte de carbono e de energia que utilizam, podem ser classificadas em diferentes tipos nutricionais:

CARBONO

ENERGIA

HETEROTRFICOS

AUTOTRFICOS

FOTOTRFICOS

QUIMIOTRFICOS

Microrganismos que utilizam carbono orgnico

Microrganismos que utilizam carbono inorgnico (CO2)

Microrganismos que Microrganismos que energia utilizam energia utilizam qumica (compostos radiante (luz) qumicos)

Diversidade Metablica entre os organismos

Os microrganismos exibem os mais diversos mecanismos nutricionais. A nutrio ocorre predominantemente pela absoro, atravs da oxidao de substncias com alto valor energtico, preferencialmente os acares.

PROCESSO DE NUTRIO EM PROCARIOTOS

1) Nutrio em Gram positivos
=> Estas bactrias sintetizam uma srie de exoenzimas, as quais so liberadas no meio, clivando os nutrientes, que so captados por protenas transportadoras.

2) Nutrio em Gram negativos

=> Devido presena de uma membrana externa (LPS), as bactrias Gram negativas apresentam um grande nmero de porinas associadas camada lipopolissacardica, e que permitem a passagem de molculas hidroflicas, de baixa massa molecular. => No espao periplasmtico dessas clulas, so encontrados proteases, fosfatases, lipases, nucleases e enzimas de degradaco de carboidratos.

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FORMAS DE OBTENO DE ENERGIA

I Fermentao: processo no qual os compostos orgnicos so parcialmente degradados
Ltica: Alcolica: Aceto-butrica: Actica: Propinica: cido ltico etanol cido butrico e acetona cido actico (vinagre) cido propinico

=> Libera energia de acares (2 ATP) ou molculas orgnicas; => No requer oxignio (mas pode ocorrer na presena deste); => No requer o uso do ciclo de Krebs ou cadeia de transporte de eltrons; => Utiliza uma molcula aceptor final de eltrons orgnica como

II - Respirao

a) RESPIRAO AERBICA: processo onde os compostos orgnicos so completamente degradados, e o O2 o aceptor final dos eltrons.

b) RESPIRAO ANAERBICA: processo no qual os compostos orgnicos so completamente degradados, e uma molcula diferente do O2 o aceptor final dos eltrons (SO4, CO3, NO3, fumarato, etc)

A quantidade de ATP gerada na respirao anaerbica varia de acordo com o microrganismo e a via.

Devido a somente uma parte do ciclo de Krebs funcionar sob condies anaerbias, o rendimento de ATP nunca to alto quanto o da respirao aerbica.

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REQUERIMENTOS FSICOS E AMBIENTAIS PARA O CRESCIMENTO MICROBIANO

Quando falamos em crescimento microbiano no referimos ao nmero e no ao tamanho das clulas. Os microrganismos em crescimento esto, na verdade, aumentando o seu nmero e se acumulando em colnias COLNIAS => grupos de clulas => visualizao sem utilizao de microscpio. CONDIES NECESSRIAS PARA O CRESCIMENTO MICROBIANO
Qumicos gua Macronutreintes Micronutrientes Fatores de crescimento Fsico-qumicos (ambientais) Temperatura pH Presso Osmtica O2

Temperatura
Cada tipo de bactria apresenta uma temperatura tima de crescimento. Acima do limite, ocorre desnaturao protica e conseqente morte celular. Temperaturas inferiores levam a uma desacelerao das atividades metablicas.

pH
A maioria das bactrias cresce melhor dentro de variaes pequenas de pH, sempre perto da neutralidade, entre pH 6,5 e 7,5.

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Presso Osmtica
A capacidade dos microrganismos se adaptar a presses osmticas chama-se OSMOADAPTAO.

Os microrganismos so frequentemente encontrados em ambientes onde a concentrao do soluto igual o seu citoplasma (meio isotnico).

Halotolerantes: toleram altas concentraes de sais-10% NaCl Haloflicos: requerem altos nveis de NaCl (Vibrio cholerae).

Oxignio
O oxignio pode ser incuo, indispensvel ou letal para as bactrias, o que permite classific-las em:

OXIBINTICAS
Aerbios

ANOXIBINTICAS
Anaerbios obrigatrios

Aerbios obrigatrios Microaerfilos Anaerbios facultativos

Extremamente sensveis Aerotolerantes

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Por que o oxignio letal para os anaerbios?

Incapacidade de eliminao ou capacidade limitada de eliminar produtos do metabolismo do oxignio molecular.
Reduo do Oxignio O2 + e- = O2- (nion superxido) O2 + 2 e- = H2O2 (perxido de hidrognio) O2 + 3 e- = H2O + OH- (radical hidroxila) O2 + 4 e- = H2O (gua => reduo total)

Espcies Reativas do Oxignio (EROs)

Estratgias de defesa dos microrganismos: mecanismos antioxidantes

REPRODUO BACTERIANA As bactrias se multiplicam por DIVISO BINRIA SIMPLES, um processo devido formao de septos na regio do mesossomo, que se dirigem da superfcie para o interior da clula, dividindo a bactria em duas clulas filhas. A fisso precedida pela duplicao do DNA, que se processa de modo semiconservativo, e cada clula filha recebe uma cpia do cromossomo da clula-me. O perodo da diviso celular depende do tempo de gerao de cada bactria

Tempo de gerao: tempo necessrio para um clula se dividir em duas

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CURVA DE CRESCIMENTO BACTERIANO

Quando uma bactria semeada em um meio apropriado, nas condies apropriadas, o seu crescimento segue uma curva definida e caracterstica:

A Fase LAG: pouca diviso celular, os microrganismos esto se adaptando ao meio em que esto crescendo. As clulas aumentam de volume, mas no se dividem. B Fase exponencial (log): crescimento exponencial, divises celulares sucessivas, grande atividade metablica. C Fase estacionria: decrscimo na taxa de diviso celular, onde a velocidade de crescimento = velocidade de morte D Fase de declnio ou morte: condies imprprias para o crescimento, meio deficiente em nutrientes e rico em toxinas, onde as clulas mortas excedem o nmero de clulas vivas

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