INSTRUES DE UTILIZAO MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR

PA-257480.03 Rev.: Sep 2011

BD CHROMagar Candida Medium

UTILIZAO PRETENDIDA
O BD CHROMagar Candida Medium (Meio para Candida CHROMagar) um meio de isolamento e identificao para Candida albicans, C. tropicalis e C. krusei. Possui uma aco inibidora para as bactrias e tambm pode ser utilizado como meio de isolamento selectivo para outras espcies de leveduras e para fungos filamentosos.

PRINCPIOS E EXPLICAO DO PROCEDIMENTO

Mtodo microbiolgico. O BD CHROMagar Candida Medium um meio selectivo para diferenciao utilizado para o isolamento de fungos. Com a incluso de substratos cromognicos no meio, as colnias de C. albicans, C. tropicalis e C. krusei produzem cores diferentes, permitindo assim a deteco directa destas espcies de leveduras na placa de isolamento.1-6 As colnias de C. albicans aparecem com uma cor verde-claro a verde mdio, as de C. tropicalis aparecem azuis esverdeadas a azul metalizado e as de C. krusei aparecem cor-de-rosa claro com um rebordo esbranquiado. Outras espcies de leveduras podero desenvolver a sua cor natural (creme) ou aparecer cor-de-rosa ou cor de malva claro a escuro [por exemplo Candida (Torulopsis) glabrata e outras espcies]. Uma vantagem adicional deste meio consiste a fcil deteco de culturas mistas de leveduras devido apresentao das suas colnias com cores diferentes.1,5,6 As peptonas especialmente seleccionadas para o efeito fornecem os nutrientes no BD CHROMagar Candida Medium. A mistura exclusiva de cromognios composta por substratos artificiais (cromognios), que libertam compostos de vrias cores na sequncia da degradao de enzimas especficas. Tal permite a diferenciao de determinadas espcies, ou a deteco de determinados grupos de organismos, utilizando apenas um nmero mnimo de testes de confirmao. O cloranfenicol inibe a maioria dos contaminantes bacterianos. O CHROMagar Candida Medium foi desenvolvido por A. Rambach e comercializado pela BD Diagnostic Systems no mbito de um acordo de licena com a CHROMagar, Paris, Frana.

REAGENTES
BD CHROMagar Candida Medium Frmula* por Litro de gua Purificada Cromopeptona 10,0 g Glucose 20,0 Mistura de cromognios 2,0 Cloranfenicol 0,5 gar 15,0 pH 6,0 0,3 *Ajustada e/ou suplementada conforme necessrio para cumprir os critrios do desempenho.

PRECAUES
. Apenas para uso profissional. No utilizar as placas que apresentem sinais de contaminao microbiana, descolorao, secura, fissuras ou outros sinais de deteriorao. Consultar as INSTRUES GERAIS DE UTILIZAO para informao sobre os procedimentos de manuseamento assptico, os riscos biolgicos e os procedimentos de eliminao do produto usado.

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ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE

Aps recepo das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8C, dentro do invlucro original at ao momento da utilizao. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As placas podem ser inoculadas at ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e incubadas durante o tempo de incubao recomendado. As placas so fornecidas em pilhas de 10 placas e, quando uma destas pilhas aberta, as respectivas placas tero de ser utilizadas no prazo mximo de uma semana, se forem conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8C.

CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR

Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as INSTRUES GERAIS DE UTILIZAO). Incubar as placas em atmosfera aerbia durante 20 a 48 h, a uma temperatura de 35 2C. Convm salientar que necessria uma incubao superior a 42 h para o desenvolvimento completo da cor das colnias. Estirpes Candida albicans ATCC 60193 Candida albicans ATCC 10231 Candida krusei ATCC 34135 BD CHROMagar Candida Medium Crescimento bom a excelente; colnias verde-claro a verde mdio Crescimento bom a excelente; colnias verde-claro a verde mdio Crescimento bom a excelente; colnias planas de grande dimenso, cor-de-rosa claro a vermelho claro com um rebordo esbranquiado. Crescimento bom a excelente; colnias azuis acinzentadas a azuis esverdeadas ou azuis metalizadas com ou sem halos violetas no meio circundante Crescimento bom a excelente, colnias cinzentasazuladas com ou sem halos violetas Inibio parcial a completa Incolor a bege claro, transparente

Candida tropicalis ATCC 1369

Candida tropicalis ATCC 9968 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 No inoculadas

PROCEDIMENTO
Materiais fornecidos BD CHROMagar Candida Medium (placas Stacker de 90 mm). Microbiologicamente controlado. Materiais no fornecidos Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessrio. Tipos de amostra Este meio utilizado para o isolamento e identificao directa de Candida albicans, C. tropicalis e C. krusei a partir de todos os tipos de amostras clnicas. Tambm pode ser usado para o isolamento de outros fungos (consultar tambm CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAES DO PROCEDIMENTO). Procedimento do teste Espalhar a amostra para isolamento sobre a superfcie do meio. Se a amostra estiver a ser cultivada a partir de uma zaragatoa, fazer rolar suavemente a zaragatoa sobre uma pequena rea da superfcie na extremidade e, em seguida, espalhar a partir desta rea com um ansa. Incubar as placas em condies aerbias, a uma temperatura de 35 2C, durante 20 a 48 h numa posio invertida. necessrio um perodo de incubao de 42 h para o desenvolvimento completo da cor das colnias de Candida. Minimizar a exposio luz antes e durante a incubao. Os isolados ocasionais, como o caso de Cryptococcus neoformans e dos fungos filamentosos, iro necessitar de um perodo de incubao mais longo e, possivelmente, uma temperatura de incubao mais baixa para se desenvolverem bem. Por essa razo, deve inocular-se e incubarPA-257480.03 -2-

se uma placa contendo um segundo meio fngico, por exemplo BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol a uma temperatura entre 20 e 25C, caso se preveja a existncia de outros fungos que no os da espcie Candida. Resultados Aps a incubao, as placas provenientes das amostras que contm fungos apresentaro indcios de crescimento. Recomenda-se a leitura das placas sobre um fundo branco. Se estiverem presentes espcies de Candida, as colnias iro apresentar-se com uma cor verdeclaro a verde mdio (C. albicans), cor-de-rosa claro a vermelho claro com um rebordo esbranquiado (C. krusei), ou azuis esverdeadas a azul metalizado com ou sem halos violetas (C. tropicalis). As restantes espcies de Candida e outro tipo de leveduras aparecero com uma cor de malva claro a escuro (rosa a violeta) ou, no casos em que no utilizado nenhum dos substratos cromognicos, iro apresentar a sua cor natural das colnias (creme a branco). Os dados dos vrios estudos realizados indicam que no so necessrios mais testes de identificao relativamente s espcies Candida albicans, C. tropicalis e C. krusei.1-3

CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAES DO PROCEDIMENTO

A utilizao do CHROMagar Candida Medium para a identificao directa de C. albicans, C. krusei e C. tropicalis foi documentada em diversos estudos que tambm podem ser consultados para se obter informaes adicionais sobre os procedimentos recomendados.1-5 Os resultados de uma avaliao recente sobre o desempenho do BD CHROMagar Candida Medium so referidos por Jabra-Rizk e colaboradores.4 A Candida (Torulopsis) glabrata produz normalmente colnias cor de malva a malva escuro neste meio.2 No entanto, recomenda-se que os organismos que aparecerem com esta cor sejam confirmados com testes bioqumicos adicionais, uma vez que esta cor de colnia pode ser produzida por uma variedade de espcies de leveduras. As colnias que apresentam, neste meio, uma cor rosa plido ou claro ou cor de malva claro a escuro ou que aparecem na sua cor creme natural tm de ser identificadas utilizando os mtodos padro.7-8 As leveduras, excepo das espcies acima referidas e dos fungos filamentosos, tambm podem ser isoladas neste meio, caso sejam incubadas a uma temperatura e durante um perodo de tempo adequados para estes organismos. Uma vez que os bolores e outros fungos filamentosos podero metabolizar os substratos cromognicos, as cores apresentadas por estes organismos no BD CHROMagar Candida Medium podero diferir das apresentadas noutros meios fngicos. No utilizar a aparncia do crescimento dos fungos filamentosos neste meio para uma identificao morfolgica tradicional. Foi referido que a C. dubliniensis produz uma cor verde-escuro distinta no isolamento primrio com BD CHROMagar Candida Medium.9-11 No entanto, esta propriedade poder no ser mantida no processo de repicagem. necessria a execuo de testes fenotpicos e genotpicos adicionais para a confirmao de C. dubliniensis. Antes da primeira utilizao do BD CHROMagar Candida Medium, recomendamos que seja treinado o surgimento de colnias tpicas com estirpes definidas de C. albicans, C. krusei, e C. tropicalis, por exemplo, as estirpes descritas na seco CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR.

BIBLIOGRAFIA
1. Odds, F.C., and R. Bernaerts. 1994. CHROMagar Candida Medium, a new differential isolation medium for presumptive identification of clinically important Candida species. J. Clin. Microbiol. 32: 1923-1929. 2. Pfaller, M.A., A. Huston, and S. Coffman. 1996. Application of CHROMagar Candida Medium for rapid screening of clinical specimens for Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei, and Candida (Torulopsis) glabrata. J. Clin. Microbiol. 34: 56-61. 3. Beighton, D., R. Ludford, D.T. Clark, S.R. Brailsford, C.L. Pankhurst, G.F. Tinsley, J. Fiske, D. Lewis, B. Daly, N. Khalifa , V. Marren, and E, Lynch. 1995. Use of CHROMagar
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Candida Medium medium for isolation of yeasts from dental samples. J. Clin. Microbiol. 32: 3025-3027. 4. Jabra-Rizk, M.A. et al. 2001. Evaluation of a reformulated CHROMagar Candida Medium. J. Clin. Microbiol. 30: 2015-2016. 5. Bauters, T.G., and Nelis, H.J. 2002. Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species. J. Clin. Microbiol. 40: 1838-1839. 6. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 1998. Bailey & Scotts diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 8. Larone, D.H. 1995. Medically important fungi. A guide to identification. ASM Press, Washington, D.C. 9. Schoofs, A., F.C. Odds, R. Coleblunders, M. Ieven, and H. Goosens. 1997. Use of specialised isolation media for recognition and identification of Candida dubliniensis isolates from HIV-infected patients. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 16: 296-300. 10. Kirkpatrick, W.R., S.G. Revankar, R.K. McAtee, J.L. Lopez-Ribot, A.W. Fothergill, D.I. McCarthy, S.E. Sanche, R.A. Cantu, M.G. Rinaldi, and T.F. Patterson. 1998. Detection of Candida dubliensis in oropharyngeal samples from Human Immunodeficiency Virusinfected patients in North America by primary CHROMagar Candida Medium screening and susceptibility testing of isolates. J. Clin. Microbiol. 36: 3007-3012. 11. Odds, F.C., L. Van Nuffel, and G. Dams. 1998. Prevalence of Candida dubliensis isolates in a yeast stock collection. J. Clin. Microbiol. 36: 2869-2873.

EMBALAGEM/APRESENTAO
BD CHROMagar Candida Medium No. de cat. 257480 Meios em placas preparados, 20 cpu No. de cat. 254106 Meios em placas preparados, 120 cpu

INFORMAES ADICIONAIS
Para obter informaes adicionais, contacte o representante local da BD.

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CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2011 BD

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