La actividad inhibidora de irrigantes del conducto radicular contra Candida albicans, Enterococcus faecalis y Staphylococcus aureus.

Tatiana Kelly da Silva Fidalgo, Roberta Barcelos, Maristela Barbosa Portela, Rosangela Maria de Arajo . Rogrio Gleiser, Fernando Costa e Silva-Filho Resumen: El presente estudio evalu la actividad antimicrobiana de tres irrigantes del conducto radicular contra Enterococcus faecalis, Candida albicans y Staphylococcus aureus. Estos microorganismos se incubaron en presencia de cido ctrico (6% y 10), EDTA (17%), y NaOCl (0,5, 1,0, 2,5, y% 5,25). Pruebas de difusin en agar se realizaron y redox indicador resazurina fue usado para evaluar el efecto inhibidor de los irrigantes en la actividad metablica de estos microorganismos. Los dimetros medios de las zonas de inhibicin para los cultivos de C. albicans eran 11,6 mm (17% de EDTA), 5,5 mm (0,5% de NaOCl), 12,9 mm (1 NaOCl%), 22,1 mm (2,5% de NaOCl), y 28,5 (mm 5,25% NaOCl). Los dimetros medios de las zonas de inhibicin para E. faecalis fueron de 2,8 mm (1% NaOCl), 5,4 mm (2,5% de NaOCl), y 8,3 mm (5,25 NaOCl%). Para S. aureus, los valores medios fueron 8,0 mm (17% de EDTA), 3,0 mm (1% NaOCl), 8,8 mm (2,5% de NaOCl), y 10,0 mm (5,25 NaOCl%). La mayora de las soluciones de irrigante presenta actividad antimicrobiana eficaz contra C. albicans. Un alto efecto inhibidor sobre la actividad metablica de E. faecalis se detect cuando los microorganismos se incubaron con 17% de EDTA. El mismo resultado se alcanza cuando S. aureus se incub en presencia de NaOCl 2,5%. En conjunto, estos resultados indican que el 2,5% y el 5,25% NaOCl son microbicidas contra S. aureus, mientras que 0,5% y 1% NaOCl son slo microbiosttica contra las bacterias probadas. El cido 6% y 10% de cido ctrico, as como 17% de EDTA no afect la viabilidad de cualquiera de los microorganismos ensayados.

Descriptores: Candida albicans, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus; Irrigantes conducto radicular.

Introduccin Los microorganismos son el factor causal principal asociado con fracaso del tratamiento endodntico. 1,2 El xito del tratamiento endodntico depende de la reduccin o eliminacin de las bacterias presentes en el sistema de conductos radiculares. Tejido pulpar residual, bacterias y restos de dentina puede persistir en las irregularidades del sistema de conductos radiculares, incluso despus de una meticulosa mecnico preparacin. 3 Por lo tanto, las soluciones de irrigante se debe utilizar en combinacin con la preparacin del conducto. 4-6

Irrigantes radiculares se utiliza durante los procedimientos quimio-mecnica no slo como agentes antimicrobianos, pero tambin para eliminar los residuos sueltos, para lubricar las paredes dentinales, y para disolver los compuestos orgnicos en el canal. 7,8 preparacin quimio-mecnica es una de las fases ms importantes del tratamiento endodntico y irrigantes como hipoclorito de sodio (NaOCl), cido ctrico, y cido etiln diamino tetra-actico (EDTA) se utilizan comnmente. La eficacia de estos procedimientos depende tambin de la vulnerabilidad de las especies implicadas. 9 Muchos estudios in vitro relacionar la actividad antimicrobiana de irrigantes canal de raz contra los microorganismos, pero los estudios sobre la actividad metablica de microorganismos despus del contacto con estos irrigantes no se ha encontrado en la literatura. 5,6 Por tanto, este primer estudio evalu la eficacia de NaOCl (0,5, 1, 2,5, 4, y% 5,25), EDTA (17%), y cido ctrico (6% y 10) frente a Enterococcus faecalis, Candida albicans, y Staphylococcus aureus, y luego evaluaron sus actividades metablicas en las mismas condiciones. Material y Mtodos. Microorganismos Los siguientes microorganismos y sus cepas ATCC relacionados se utilizan en todo: Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Enterococcus faecalis (ATCC 29212) y Candida albicans (ATCC 10231). Todos los microorganismos se cultivaron en medio BHIagar (Difco, Rio de Janeiro, RJ, Brasil) suplementado con sangre de oveja al 10% (24 h, 37 C, Atmsfera al 5% de CO2 o en anaerobiosis). Los microorganismos se recogieron entonces con una esptula Drigalsky para normalizacin de las cantidades recogidas y se resuspendieron en tampn estril 0,01 M fosfato pH 7,2, que contena NaCl 0,15 M (PBS pH 7,2). La cantidad de todos los microorganismos se ajust utilizando la escala de McFarland (McFarland no estndar. 0,5) y espectrofotometra ajustado a 10 5 UFC. ml-1 a travs de medicin de la densidad ptica a 600 nm (DO600). Irrigantes radiculares Los irrigantes de conductos utilizados fueron: cido ctrico (6 y 10% - VETEC, Rio de Janeiro, RJ, Brasil), EDTA (17% - Biodinmica, Rio de Janeiro, RJ, Brasil), y NaOCl (0,50, 1,00, 2,50 , y 5,25% Formula & Ao, So Paulo, SP, Brasil). Todos estos compuestos se diluyeron en PBS estril pH 7,2. Prueba de difusin en agar (ADT) Para este ensayo, las membranas de nitrocelulosa (13,0 mm - N de catlogo GSWP04700; Millipore Co., Billerica, MA, EE.UU.), impregnada con el canal de la raz irrigantes (30 l cada uno), descritos anteriormente, se colocaron en la parte superior de S. aureus, E. faecalis y C. albicans (0,1 ml, 10 5 CFU.ml -1 , Se resuspendieron en PBS pH 7,2)

homogneamente separados extendi sobre placas de Petri (10 cm de dimetro) que contena medio agar BHI. La cultivos de microorganismos se mantuvieron en una incubadora (24 h, 37 C, 5% CO2 ambiente o en condiciones de anaerobiosis) antes de medir las zonas de inhibicin de crecimiento. La viabilidad celular (control negativo) fue determinada por incubacin de las bacterias con Bactrin (Sulfametoxazol trimetoprima-- RJ 0401, Roche, Ro de Janeiro, RJ, Brasil) y el hongo con fluconazol (Ache, Rio de Janeiro, RJ, Brasil), y los controles positivosconsisti en la incubacin de los mismos microorganismos en PBS pH 7,2. El lmite de la zona de inhibicin fue medida desde el borde del disco de membrana a el final de la zona de inhibicin. Una regla milimetrada marcado se utiliz para este propsito. 9 Todos los ensayos realizaron por triplicado. La actividad metablica Con el fin de recoger una cantidad estndar de las muestras sometidas a ADT, los autores desarrollaron la siguiendo el mtodo. En pocas palabras, puntas de micropipeta (S1111- 0006; TipOne; Blakelands, MK, UK) con 15 mm aislados del extremo ms delgado se utilizan para recoger un fijo (estndar) la cantidad de muestra de la zona de inhibicin. Para cada toma de muestras, la punta fue insertada 1 mm de la membrana de nitrocelulosa, y a continuacin, la muestra recogida se resuspendi en PBS (300 l). Puntos equivalentes de seleccin para recoger Anlisis estadstico Los datos se analizaron mediante el 16,0 SPSS (SPSS Inc, Chicago, IL, EE.UU.) utilizando el software de anlisis de la varianza (ANOVA) y la prueba de Tukey (p <0,05).

Resultados Los datos resumidos en la Tabla 1 muestran que la incubacin de los microorganismos con cido ctrico (6 o 10%) no inhibir su crecimiento, ya que las zonas de inhibicin no fueron aparentes (no se muestran datos). Ni 17% de EDTA 0,5% NaOCl ni inhibi la crecimiento de Enterococcus fecalis, y el segundo lo hizo no tiene ningn efecto sobre Staphylococcus aureus tampoco. En contraste, 17% de EDTA presenta actividad contra tanto Candida albicans y Staphylococcus aureus. NaOCl a altas concentraciones (1, 2,5, y% 5,25) presentan actividad inhibidora frente a todos los microorganismos ensayados. Adems, el efecto antimicrobiano de los 5,25% NaOCl era comparable a los resultados presentados por los controles negativos (Bactrim y fluconazol). EDTA (17%) presentaron mayor actividad antimicrobiana que 0,5% NaOCl, cuando se prob contra Candida albicans y Staphylococcus aureus. La efecto de EDTA (17%) sobre Candida albicans fue similar a la exhibida por NaOCl al

1%, pero ms efectiva sobre Staphylococcus aureus. Mayores concentraciones de NaOCl (2,5 y 5,25%) fueron ms eficaces en Candida albicans de 17% de EDTA, sin embargo, sus actividades en Staphylococcus aureus eran similar. EDTA (17%) presentaron una mayor actividad antimicrobiana eficaz de cido ctrico (6% y 10) contra todos ensay microorganismos. Tambin se puede sealar que la eficacia de NaOCl en E. faecalis fue dependiente de la dosis. Por otra parte, el 5,25% NaOCl fue letal a todos los microorganismos ensayados (Tabla 2). Para evaluar el microbicida o microbiosttica actividad de los irrigantes del conducto radicular estudiado aqu, los anlisis redox de las muestras tomadas de la inhibicin zonas se llevaron a cabo. Candida albicans y Enterococcus faecalis actividades metablicas fueron detectados en todos los canales irrigantes evaluados raz (que se form zonas de inhibicin). Sin embargo, ninguna actividad metablica de Staphylococcus aureus se detect el 2,5% y 5,25% NaOCl (Tabla 3 y Grfico 1).

Discusin Procedimiento quimico-mecnica juega un importante papel en la reduccin de los microorganismos en el conducto radicular. 11 Estudios anteriores han demostrado que el riego con 0,5% NaOCl elimina las bacterias en 50% a 75% de conductos radiculares infectados al final del primer tratamiento. 12 En el presente estudio, slo Candida albicans era sensible a 0,5% NaOCl. Sin embargo, todas las especies microbianas ensayadas eran sensibles a 5,25% NaOCl. EDTA es una sustancia auxiliar que tiene un quelante accin, biocompatibilidad con los tejidos periapicales 13y las capacidades ptimas de limpieza. 14 En el actual estudio, 17% de EDTA mostr un superior antimicrobiana efecto en la prueba de zona de inhibicin contra Candida albicans en comparacin con 0,5% NaOCl. Enterococcus faecalis se considera una de las especies ms resistentes en la cavidad oral y una posible causa del fallo en tratamientos de conductos. Puede sobrevivir despus de la instrumentacin y la irrigacin con NaOCl hasta 2,5%. 15 Los resultados de este estudio mostraron que el 5,25% NaOCl tuvo un desempeo significativamente mejor que el 2,5% NaOCl contra este microorganismo. Quelato y soluciones cidas, incluyendo EDTA y cido ctrico, se han recomendado para eliminar la capa de frotis de los conductos radiculares instrumentados. 16En el presente estudio, la solucin de EDTA presenta falta de actividad microbicida contra. Enterococcus faecalis, corroborando los hallazgos obtenidos por Arias-Miliz y Ferrer Luque.16 Por el contrario, los mismos autores demostraron una zona de inhibicin con 10% de cido ctrico contra Enterococcus faecalis. Aunque el cido ctrico presenta citotoxicidad bajo como una ventaja, 17in el presente estudio, 6% y 10% de cido ctrico no form ninguna zona de inhibicin contra cualquiera de los microorganismos ensayados. De acuerdo con Grawehr et al., 18 El presente estudio demostr que el 17% de EDTA fue ms eficaz que 0,5% NaOCl contra Candida albicans y Staphylococcus aureus. El mantenimiento de los microorganismos en contacto con EDTA durante un perodo prolongado es

tan letales como periodos cortos de contacto, aumenta la permeabilidad de la membrana externa de molculas hidrfobas, y mejora la accin antibacteriana de agents.19 Branin et al, 20 informaron de que el metal quelante EDTA se sabe que tienen actividad contra las biopelculas de bacterias gram-positivas tales como Staphylococcus aureus. La prueba de difusin en agar no distingue propiedades microbiosttico y microbicida de dental materiales tampoco proporciona ninguna informacin sobre la viabilidad de los microorganismos despus de la prueba. 21 Las bacterias alrededor de la zona de inhibicin podra crecer atrs despus de algunos das. En la prctica clnica, puede ser posible que despus de tener contacto con irrigantes del conducto radicular, microorganismos todava podra permanecer viable; esto dependen del irrigante y su concentracin. Para eso es importante asociar el metablico actividad a la prueba de difusin en agar, al evaluar la actividad inhibidora de irrigantes de conductos. Incluso despus de la irrigacin del conducto radicular con un solucin antimicrobiana, puede no ser posible eliminar todos los microorganismos del canal de la raz. 22 Los microorganismos pueden multiplicarse rpidamente en 2-4 das, casi volviendo a sus nmeros originales, si el canal no se llena con una sustancia antimicrobiana entre las visitas. 12 En el presente estudio, una baja actividad metablica que no fue estadsticamente significativa se observ. Tal vez la actividad bajo podra ser explicarse por el corto perodo de incubacin, desde la actividad metablica se evalu despus de slo 24 h. Se necesitan ms estudios para evaluar la actividad metablica despus de perodos ms largos. El alto pH de NaOCl interfiere en la integridad de la membrana citoplasmtica con inhibicin enzimtica irreversible, alteraciones biosintticas en el metabolismo celular y la destruccin de fosfolpidos, 9 y probablemente 24 h no era suficiente para permitir la recuperacin bacterias, lo mismo ocurri con 17% de EDTA contra Candida albicans y Staphylococcus aureus. En la prueba de zona de inhibicin, Candida albicans, Enterecoccus faecalis y Staphylococcus aureus fueron sensibles a NaOCl al 1% y concentraciones ms altas. Sin embargo, slo el 2,5 y el 5,25% eran NaOCl confirm como irrigantes microbicidas para Staphylococcus aureus despus de la prueba de la actividad metablica. La asociacin de los dos ensayos demostraron que los irrigantes otros ensayados tenan un efecto microbiosttica contra Candida albicans y faecalis Enterecoccus. Estos resultados sugieren que la erradicacin de microorganismos en un infeccin endodntica puede obtenerse en asociacin con otras medidas como la medicacin intracanal entre perodos de sesiones. Por otra parte, los resultados obtenidos por los asociacin de las dos pruebas demostraron la importancia de la actividad metablica de prueba como una prueba complementaria para evaluar las propiedades antimicrobianas de la raz irrigantes del canal. Los presentes resultados apoyan la hiptesis inicial que existe una actividad

metablica alrededor de la zona de inhibicin despus de la prueba de inhibicin, aunque sin significacin estadstica. El corto perodo de incubacin puede contribuir a este resultado. Otros estudios son necesarios para evaluar la actividad metablica durante un perodo de tiempo prolongado. Conclusin El cido ctrico no presentaron actividad antimicrobiana. Slo el 2,5% y el 5,25% NaOCl presentan actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus. Adems, 17% de EDTA, 0,5% y 1% NaOCl presenta slo la actividad microbiosttica contra algunos de los microorganismos ensayados. La mayor concentracin de NaOCl (5,25%) presentaron superiores a los antimicrobianos actividad cuando se compara con otros irrigantes utilizados.

Agradecimientos Los autores desean agradecer a la Dra. Catarina Akiko Miyamoto desde CNRMN-UFRJ para la revisin de este manuscrito, la gramtica y estilo. Esta estudio fue apoyado por el texto siguiente brasileo agencias: FUJB-UFRJ, FAPERJ y INPeTAm. Referencias
1. Siqueira Jr JF. Infecciones endodnticas: conceptos, paradigmas, y perspectivas. Oral Surg oral Med oral Pathol oral Radiol Endod. 2002 Sep; 94 (3) :281-93. 2. Siqueira Jr JF, Rocas IN. Reaccin en cadena de polimerasa basada anlisis de microorganismos asociados con el fracaso del tratamiento endodntico. Oral Surg oral Med oral Pathol oral Radiol Endod. 2004 Jan; 97 (1) :85-94. 3. Abou-Rass M, MV Piccinino. La eficacia clnica de cuatro mtodos de riego en la remocin de escombros del conducto radicular. Oral Surg oral Med oral Pathol. 1982 Sep; 54 (3) :323-8. 4. D'Arcangelo C, Di Nardo Di Maio F, Stracci N, Spoto G, Malagnino VA, Caputi S. Pulp capacidad de disolucin de varios irrigantes endodnticos: una evaluacin espectrofotomtrica. Int J Immunopathol Pharmacol. 2007 Apr; 20 (2) :381-6. 5. Nudera WJ, MI Fayad, BR Johnson, M Zhu, Wenckus CS, Begole EA, et al. Efecto antimicrobiano de triclosn y triclosan con Gantrez en cinco patgenos endodnticos comunes. J Endod. 2007 Oct; 33 (10) :1239-42. 6. Oliveira DP, Barbizam JV, M Trope, Teixeira FB. In vitro eficacia antibacteriana de irrigantes endodnticos contra Enterococcus faecalis. Oral Surg oral Med oral Pathol oral Radiol Endod. De mayo de 2007, 103 (5) :702-6. 7. Siqueira Jr JF, Rocas IN, SR Santos, Lima KC, Magalhaes FA, de Uceda M. Eficacia de las tcnicas de instrumentacin y regmenes de riego para reducir la poblacin bacteriana en conductos radiculares. J Endod. 2002 Mar; 28 (3) :181-4. 8. Fidalgo TKS, Barcelos R, Petrpolis DB, Azevedo BR, Primo LG, Silva FC. Citotoxidade de Diferentes concentraes de hipoclorito de sodio Sobre osteoblastos Humanos. RGO (Porto Alegre). 2009 Jul; 57 (3) :317-21. 9. Estrela C, RG Ribeiro, Estrela CR, Pecora JD, Sousa-Neto MD. Efecto antimicrobiano de hipoclorito de sodio al 2% y Clorhexidina al 2% probado por

diferentes mtodos. Braz Dent J. 2003; 14 (1) :58-62. 10. Mariscal A, Lpez-Gigosos RM, Carnero Varo-M, J. FernandezCrehuet ensayo fluorescente basado en resazurina para la deteccin de actividad de los desinfectantes contra la biopelcula bacteriana. Appl Microbiol Biotechnol. 2009; 82 (4): 773-8311. 11. La Academia Americana de Odontologa Peditrica. Directriz sobre la pasta tratamiento para los dientes permanentes de primaria y jvenes. Pediatr Dent. 2004; 26 (7 Suppl): 115-9. 12. Bystrom A, Sundqvist G. evaluacin bacteriolgica del efecto de 0,5 por ciento de hipoclorito de sodio en la terapia endodntica. Oral Surg oral Med oral Pathol. 1983 Mar; 55 (3) :307-12. 13. Segura JJ, JR Calvo, JM Guerrero, A Jimnez Planas, C Sampedro, R. Llamas EDTA inhibe la adherencia in vitro sustrato capacidad de los macrfagos: implicaciones endodoncia. J Endod. 1997 Apr; 23 (4) :205-8. 14. Garberoglio R, Becce Smear C. remocin capa de conducto radicular irrigantes. Un anlisis comparativo del estudio de microscopa electrnica. Oral Surg oral Med oral Pathol. 1994 Sep; 78 (3) :359-67. 15. Gomes BP, CC Ferraz, Vianna ME, bereber VB, Teixeira FB, Souza Filho-FJ. Actividad antimicrobiana in vitro de varias concentraciones de hipoclorito de sodio y gluconato de clorhexidina en la eliminacin de Enterococcus faecalis. Endod Int. J 2001 Sep; 34 (6) :424-8. 16. Arias-Moliz MT, Luque Ferrer-CM, Espigares-Rodrguez E, Libana Urea-J, Espigares Garcia-actividad bactericida M. de soluciones de cido fosfrico, cido ctrico, EDTA y contra Enterococcus faecalis. Oral Surg oral Med oral Pathol oral Endod Radiol. 2008 Aug; 106 (2) :84-9. 17. Guimares LF, Fidalgo conocimientos tradicionales, Menezes GM, Primo LG, SilvaFilho FC. Efectos del cido ctrico en cultivos de osteoblastos humanos las clulas. Oral Surg Med Oral Patol Oral en Radiol Endod Oral. En presione 2010. 18. Grawehr M, Sener B, Waltimo T, Zehnder M. Interacciones de etilendiamina tetraactico con hipoclorito de sodio en soluciones acuosas. Int Endod J. 2003 Jun; 36 (6) :411-7. 19. Nikaido H. Bases moleculares de la permeabilidad de la membrana externa bacteriana revisado. Mol Biol Rev. Microbiol 2003; 67 (4): 593 -656. 20. Banin E, KM Brady, EP Greenberg. Quelante inducida por dispersin y la muerte de las clulas de Pseudomonas aeruginosa en un biofilm. Appl Environ Microbiol. 2006 Dec; 72 (3) :2064-9. 21. C Estrela, Estrela CRA, Bammann LL, Pecora JD. Dos mtodos para evaluar la accin antimicrobiana de hidrxido de calcio pegar. J Endod. 2001 diciembre; 27 (12) :720-3. 22. Bystrom A, Claesson R, G. Sundqvist El efecto antibacterianode paramonoclorofenol alcanforado, fenol alcanforado y de hidrxido de calcio en el tratamiento de conductos radiculares infectados. Fin Traumatol Dent. 1985 octubre; 1 (5) :170-5.