Sunteți pe pagina 1din 6

Sedimentarea si centrifugarea

I. Noiuni teoretice 1. Sedimentarea Sedimentarea - Este o tehnic de separare ce se bazeaz pe diferena de densitate dintre componentele amestecului. n practica medical se utilizeaz nu numai ca tehnic de separare dar i ca o metoda de analiz (VSH - viteza de sedimentare a sngelui). Pentru o nelegere mai bun a procesului se poate modela comportarea unei hematii n cmp gravitaional. S consideram o suspensie de particule sferice de raz R i densitate un lichid de densitate
0

aflate ntr-

0).

Asupra particulelor acioneaz urmtoarele forte:


4 3
4 3

- fora de greutate: G - fora Arhimedic: FA

m g
m0 g

R3
R3

g
g

- fora de frecare cu moleculele lichidului - fora de vscozitate; pentru particule sferice i viteze mici de deplasare, fora de vscozitate este dat de legea lui Stokes:
FV 6 R v

unde: v este viteza,

coeficientul de vscozitate iar R raza particulei.

La echilibru dinamic rezultanta acestor fore este nul i particula coboar cu vitez constant (figura 5.1).

Figura 5.1. Forele ce acioneaz asupra unei particule de raz R i densitate aflat ntr-un lichid de densitate 0 (

0).

4 3

R3

4 3

R3

g 6

R v

2 2 R g 9

1 0

(1)

Considernd v

L unde L este spaiul parcurs n micare rectilinie i uniform t

iar t timpul de sedimentare, obinem:


t 9 2 L R
2

1 0

Dup cum se constat din relaia (1) viteza de sedimentare depinde att de mrimea particulelor (R) ct i de interaciunea acestora cu lichidul n care se afl, prin coeficientul de vscozitate . Sedimentarea poate fi deci folosit nu numai ca tehnic de separare a unor particule de interes dar i ca metod de cercetare n vederea obinerii unor informaii legate de aceste particule. De mare importan clinic este determinarea vitezei de sedimentare a eritrocitelor. n tabelul urmtor sunt prezentate valorile normale obinute prin metoda Westergreen. Subiect barbat femeie nou - nascut sugar copil mic 2. Centrifugarea Centrifugarea - reprezint o tehnic de separare a componentelor unui amestec cu densiti diferite sub influena unui cmp centrifugal. Deoarece viteza de sedimentare pentru particule de mrimea hematiilor, sau mai mici, este deosebit de sczut, este necesar o metod care s creasc fora activ (greutatea n cazul sedimentarii). Astfel, n cazul centrifugrii, rolul forei de greutate l joac fora centrifug. 1 ora 2 - 8 mm 4 - 10 mm 1 - 2 mm 5 - 10 mm 7 - 12 mm 2 ore 5 - 18 mm 6 - 20 mm -

Figura 5.2. Forele ce acioneaz asupra unei particule de raza R i densitate aflat ntr-un lichid de densitate 0 (
Fcf m ac 16 3
3

0).

R3

Neglijnd fora de greutate i considernd c migrarea duce la creterea razei traiectoriei circulare, avem urmtoarele relaii:
Fa Fv Fcf

Fv
Fa dt 9 8 16 3
2

6
3

R
R3
2 2 2

dx dt
0

x
1 0

dx x

Prin integrare obinem timpul necesar separrii:


tc 9 8 ( R )
2 0 1

ln

xf . xi

Ultracentrifugarea - Pentru particule foarte mici cum ar fi proteinele plasmatice sedimentarea prin centrifugarea obinuit este practic nerealizabil din cauza fenomenelor de difuzie. Sunt necesare n acest caz turaii deosebit de mari 15000rot/min. Ultracentrifugele ce realizeaz aceste turaii trebuie s fie bine stabilizate mecanic (pentru a evita fenomenul de bti care ar duce la ruperea axului) i bine termostatate (pentru a mpiedica degradarea termic). Cnd sistemul este monodispers apare o limit net de separaie ntre solvent i particulele dispuse la fundul eprubetei. Cnd sistemul este polidispers apar mai multe cmpuri i este necesar o ultracentrifugare fracionat. Se centrifugheaz pe rnd la fiecare turaie de interes i se recolteaz sau sedimentul sau super-natantul.

II. Parte experimental A. Determinarea vitezei de sedimentare a eritrocitelor (metoda Westergreen) Materiale necesare: -snge venos, 1.6 ml, recoltat pe anticoagulantul citrat trisodic 3.8%, n cantitate de 0.4 ml; -materiale pentru puncie venoas; -eprubete de hemoliz; -hemosedimentrul Westergren, alctuit dintr-un stativ metalic prevzut cu pipete Westergren, de aproximativ 300mm lungime i 2.53mm diametru. Mod de lucru: -se aspir cu seringa, n condiii sterile, o cantitate de 0.4ml citrat trisodic 3.8%; -se puncioneaz vena pacientului i se aspir snge pn la diviziunea de 2ml; -dup omogenizare sngele se pune ntr-o eprubet de hemoliz; -se aspir sngele n pipetele Westergren pn la diviziunea zero; -se fixeaz pipetele n stativ (ntr-o poziie perfect vertical), apoi se noteaz timpul (momentul se start) i numele pacientului. Citirea rezultatului se face la o or i/sau la dou ore, valoarea fiind dat de nlimea coloanei de plasm aprut n partea superioar a tubului exprimat n mm, pe unitate de timp.

B. Centrifugarea sngelui Materiale necesare: - sering i ac pentru puncie venoas - eprubete de hemoliz - stativ - pipete gradate - citrat trisodic 3,8% - balan de echilibrare - ser fiziologic - eprubete de centrifugare Mod de lucru: -se recolteaz o cantitate de 5-6 ml snge dup metoda descris anterior; -se introduce n eprubeta de centrifugare 1ml citrat trisodic 3,8%, 4ml ser fiziologic i 5ml snge dup care se aseaz eprubeta pe balana de echilibrare; -pe platanul opus se aseaz o eprubet identic n care se introduce ap distilat pn la echilibrarea balanei; -se aeaz cele dou eprubete n centrifug n poziii diametral opuse una fa de alta, se nchide capacul centrifugii i se regleaz la 2000rotatii/min, dup care se centrifugheaz 2minute; -se scoate eprubeta i se masoar deplasarea frontului eritrocitar, apoi se continu centrifugarea.

Probleme: 1._Cunoscnd valorile fiziologice ale coeficientului de vscozitate la brbat B=0,047Kg/ms i la femeie F=0,043Kg/ms, densitatea eritrocitului =1095Kg/m3 i a plasmei o=1027Kg/m3 calculai din formula vitezei de sedimentare ct ar trebui s fie raza eritrocitului presupus sferic.

2._Determinai viteza de sedimentare a unor particule de cret suspendate ntr-un lichid i raza acestor particule presupuse sferice cunoscnd apa=1 g/cm3, apa=1.05 10-3Kg/ms, creta=1,545 g/cm3. 3._Cunoscnd raza particulei de cret determinat anterior, evaluai folosind modelul matematic al centrifugrii, timpul de centrifugare pentru aceste particule suspendate ntr-un mediu vscos (glicerin). Se cunosc: - =1000rot/min, (500rot/min) - glicerina=13,93 10-3Kg/ms - glicerina=1,26 g/cm3 - ln(x2/x1)=0,143 Verificai experimental rezultatul obinut.