BIOSENZORI MICROBIENI

MASTER BRN, anul I, 2012

Biosenzori

Schema de principiu

1. Biosenzori cu enzime Biosenzori monoenzimatici Biosenzori bi- i multi-enzimatici 2. Biosenzori cu sisteme catalitice nalt integrate (High Integrated Systems) HIS 3. Biosenzori de afinitate (imunosenzori)

Biosenzori cu sisteme catalitice nalt integrate (High Integrated Systems)

Sisteme nalt integrate (HIS)- reprezentate de: microorganisme (principala surs de enzime) organite celulare fragmente de esuturi de origine animal sau vegetal

Celule nervoase Organe complete

Biosenzorii microbieni
Contin microorganisme imobilizate si un lant de transductie In general, sunt utilizati pentru un singur proces biochimic.

Avantajele biosenzorilor microbieni

Sensibilitate mai mic la inhibare i impurificarea substratului Toleran mai mare n ceea ce privete variaiile de pH i temperatur Timp de via mai mare comparativ cu cei enzimatici Ieftini Variabilitate mare, deoarece se adapteaz mai bine la condiiile de mediu Independen de cofactori Rspuns fiziologic la compuii toxici Pregatire uoar datorat cultivrii facile a microorganismelor

Biosenzori HIS cu microorganisme

DIFERENA fa de ali biosenzori: celule vii regenerarea lor Apariia unor modificri nedorite n timpul operrii biosenzorului Timp de rspuns mai mare dect la biosenzorii enzimatici Reutilizarea lor ntr-o alt determinare necesit o durat mai mare de timp.

Domenii de utilizare
Industria alimentar, producerea medicamentelor, tratarea apelor reziduale, producerea de energie. Reacii de fermentare i transfer de electroni.

Biosenzori microbieni
Determinarea concentraiei unor substane
de Bacillus subtilis Determinarea ionilor amoniu Accelerarea procesului respirator prin ptrunderea NH4 n celule sistem de permeaze pentru NH4+ : represat activ prin limitarea nutrienilor scderea timpului de rspuns al biosenzorilor
Celule

Biosenzori microbieni
Determinarea concentraiei unor substane

Celule de Bacillus cadaveris i Proteus morgani

Determinarea [L-aspartat] i [L-cistein] Regenerarea senzorilor microbieni plasarea electrozilor epuizai ntr-un mediu de cultur adecvat tulpinilor bacteriene utilizate dezvoltarea celulelor noi direct pe suprafaa electrozilor Regenerarea activitii iniiale i prelungirea duratei de funcionare a biosenzorului Celulele autolizate rmn la suprafaa electrodului limitare la cteva cicluri de regenerare

Biosenzori microbieni
Selecionarea agenilor mutageni
Urmrirea respiraiei celulelor imobilizate pe un electrod de oxigen Electrod de O
Mutaie
Glucoz Membran filtrant

INCUBARE

IMOBILIZARE

MSURARE

Salmonella typhimurium His10 ore Mediu lipsit de histidin Mutagen

Biosenzori hibrizi
Biotraductor = HIS + enzim Biosenzori hibrizi realizai cu microorganisme

Determinarea ureei
Electrod de O2

Uree + H2O O2

NH4 + CO2

NH3

NH4+ 1 NO2- 2 NO3-

O2

O2
Bacterii imobilizate: 1. Nitrosomonas sp. 2. Nitrobacter sp.

Membran cu ureaz Membran schimbtoare de ioni Strat alcalin Membran din Teflon

Biosenzori hibrizi
Biotraductor = HIS + enzim

Determinarea - amilazei
PA: - amilaza AMG AMG AMG Amidon AMG
Electrod de O2

PA: - amilaza Amidon Produi cu mas molecular redus difuzie n membrana catalic AMG Glucoz Asimilat de bacterii

AMG

Biosenzori fotomicrobieni
Se bazeaza pe fenomenele optice manifestate de microorganisme in procesele metabolice: fotoluminiscenta; chemoluminiscenta; electroluminiscenta; polarizare; absorbanta etc.

Termistor microbian
Plasarea microorganismelor imobilizate imediat in apropierea unui termistor, care masoara caldura absorbita sau eliberata de microorganisme in procesele metabolice.

Cu reactor termistor

Cu microreactor pe termistor

 Se bazeaz pe principiul general al schimbului entalpic. Multe reacii metabolice sunt nsoite de o evoluie considerabil a cldurii calorimetrie. Exemple: entalpia reaciilor metabolice, clduri specifice, latente. Principiile calorimetriei nu pot fi aplicate datorit costurilor ridicate ale instrumentelor sensibile i complexe.

Intrebari?