CAPITOLUL I

1. Genetica tiina ereditii i variabilitii organismelor vii

1.1. Definiia i obiectul de studiu Genetica este tiina biologic a crei obiect de studiu l constituie ereditatea i variabilitatea organismelor, stabilind mecanismele care asigur conservarea informaiei genetice precum i cele ale modificrii ereditare. Anul apariiei geneticii ca tiin este 1865, cnd GREGOR MENDEL a emis primele legi ale ereditii, redescoperite n 1900 de HUGO de VRIES, CORRENS i TSCHERMACK (BOTEZ, 1991). Denumirea de genetic a fost introdus de BATESON la Congresul de genetic din anul 1906. Ereditatea, ca obiect de studiu a geneticii reprezint nsuirea descendenilor de a moteni de la prini caracteristici asemntoare. Aceast nsuire asigur stabilitatea caracterelor de-a lungul generaiilor, continuitatea biologic a indivizilor n cadrul speciei de la o generaie la alta. Potenialitatea realizrii acestui caracter se face prin intermediul genelor. Gena este definit ca particula material a ereditii localizat n cromozom i care condiioneaz formarea uneia sau mai multor caractere sau nsuiri. Totalitatea genelor unui organism viu (cele nucleare) reprezint genotipul. Totalitatea genelor din cadrul unui set haploid de cromozomi, transmise ca o unitate de la unul din prini reprezint genomul. Felul de a fi a unui individ ca mod de manifestare a genotipului, n interaciune cu condiiile de mediu reprezint fenotipul. Noiunile de genotip i fenotip au fost introduse de JOHANSEN n 1909 (PANFIL, 1980). Variabilitatea ca cel de al doilea obiect de studiu a geneticii, reprezint nsuirea organismelor vii, cu diferite grade de nrudire, de a se deosebi ntre ele. n natur nu exist doi indivizi identici. Chiar i gemenii uniovulari nu sunt identici din punct de vedere genetic, ei manifestnd profile imunologice diferite, constituite n primele ase luni de via (BOTEZ, 1991). Variabilitatea poate fi ereditar i neereditar. a) Variabilitatea ereditar se transmite n descenden, de la prini la urmai i are ca surs recombinarea genelor n procesul de formare a gameilor i fecundare (variabilitate recombinativ), sau prin modificarea materialului genetic sub aciunea unor factori mutageni (variabilitate mutaional).

b) Variabilitatea neereditar este determinat exclusiv de influena condiiilor de mediu i cu toate c nu se transmite n descendeni, face parte din aspectul fenotipic al unui anumit individ. Variabilitatea fenotipic, sau diferenele constatate ntre indivizi are dou surse primare i inseparabile de variabilitate: variabilitatea genotipic i variabilitatea indus de mediu sau ecologic. Aceast relaie poate fi exemplificat prin formula VP=VG+VE, n care VP reprezint variabilitatea fenotipic; VG reprezint variabilitatea genetic i VE variabilitatea ecologic. 1.2. Scopul i importana geneticii Variabilitatea genotipic sau ereditar are cel mai important rol n evoluie precum i n munca de ameliorare. Diversitatea genetic a organismelor vii a permis ca prin intermediul seleciei naturale sau artificiale s fie promovate, n generaiile succesive, doar genotipurile cel mai bine adaptate condiiilor de mediu, sau a celor ce rspund obiectivelor ameliorrii. Datorit dezideratelor prezentate, genetica este considerat o adevrat plac turnant n cadrul tiinelor biologice, fiind esenial pentru toi cei care studiaz viaa plantelor, a animalelor sau microorganismelor. Ea ocup o poziie central n diverse sectoare ale activitii umane (agricultur, alimentaie, medicin, ecologie .a.) (Elena TMA, 2000). Pentru creterea produciei agricole apare necesitatea ameliorrii materialului biologic existent. Orice program de ameliorare necesit un studiu a determinismului genetic a materialului iniial pentru stabilirea metodei de ameliorare. Genetica constituie de fapt baza teoretic a ameliorrii plantelor. Descoperirile din domeniul geneticii moleculare i a ingineriei genetice sunt n prezent tot mai utile, fiind utilizate n elucidarea unor probleme de interes major. Obiectivul principal al ingineriei genetice const n modificarea genomului unor plante sau animale prin introducerea unor gene sau a unor fragmente de ADN de la o celul donatoare la una receptoare, obinndu-se specii transgenice. Pe aceast cale, la plante s-au obinut genotipuri rezistente la boli i duntori, la ierbicide, pesticide, stresuri climatice .a. Prin intermediul ingineriei genetice au fost obinute surse bacteriene capabile de a produce proteine specifice mamiferelor, cum ar fi insulina, interferonul, hormonul de cretere .a. De asemenea prin aplicarea metodelor genetice se pot contracara acumulrilor tarelor genetice (caractere nefavorabile patogenetice .a.). n ceea ce privete genetica forestier, ea se individualizeaz n primul rnd datorit naturii aparte a plantelor lemnoase din pduri, cu 2

deosebire, arborii. Ca plante slbatice, extrem de vechi, policarpice, foarte longevive, de dimensiuni mari, arborii dein un grad avansat de heterozigoie i mari rezerve de variabilitate genetic, se difereniaz prin ponderea mare a caracterelor cantitative supuse unui control poligenic aditiv, convieuind adeseori n ntinse comuniti (populaii) naturale, politipice, polimorfe, n care panmixia se manifest cu deosebit intensitate, iar mecanismele generale de homeostazie genetic sunt extrem de perfecionate (STNESU, 1982). 1.3. Ramurile geneticii i metodele de cercetare utilizate Genetica formal sau genetica clasic, studiaz legile ereditii descoperite de GREGOR MENDEL (transmiterea n descenden a caracterelor determinate de gene plasate pe cromozomi diferii) i THOMAS HUNT MORGAN i colaboratorii si (transmiterea n descenden a caracterelor determinate de gene plasate pe aceiai pereche de cromozomi). n studiul mecanismelor ereditii genetica a utilizat metode de lucru i baze de date oferite de alte tiine. Din mbinarea acestora, au luat natere numeroase ramuri ale geneticii, dintre care menionm: Citogenetica, care studiaz structurile celulare cu rol genetic. Radiogenetica, studiaz efectele radiaiilor asupra bazei materiale a ereditii. Genetica molecular, studiaz ereditatea la nivel molecular, biochimic. Genetica populaiilor, studiaz structura genetic a organismelor vii, precum i factorii care modific structura populaiilor. Genetica ecologic, studiaz procesele de adaptare a populaiilor naturale la mediul lor de via. Genetica cantitativ, studiaz legitatea variabilitii caracterelor, prin aplicarea metodelor matematice la studiul variabilitii. Genetica uman, cu rol major n prevenirea, combaterea i tratarea bolilor ereditare la om. Genetica fiind o disciplin experimental, dezvoltarea ei a fost condiionat de metodele i posibilitile de cercetare proprii, dar i de altele specifice altor discipline, de care genetica se poate folosi pentru nelegerea i explicarea legitilor i fenomenelor sale. Metoda genealogic, const n nregistrarea i analiza datelor privind relaiile dintre indivizi ntr-o succesiune de generaii. Prin utilizarea acestei metode se poate stabili modul de transmitere ereditar a caracterelor, precum i modul de manifestare. Metoda hibridologic, const n ncruciarea unor organisme cu ereditate diferit i analiza statistic-matematic a motenirii caracterelor la 3

urmai. Prin intermediul ei se poate urmri modul de transmitere ereditar a caracterelor, a aciunii genelor i a grupelor de linkage ale acestora .a. Cu ajutorul acestei metode au fost descoperite primele legi ale ereditii de ctre G. MENDEL i T.H. MORGAN. Metoda biometric, const n studierea diferitelor caracteristici cantitative i stabilirea corelaiilor dintre diferite caractere. Aceast metod ofer informaii asupra variabilitii diferitelor caractere i corelaiilor existente ntre ele, gradul de meninere i mbuntirea caracterelor i a nsuirilor obinute prin selecie .a. Metoda citogenetic, este utilizat pentru studiul structurilor celulare cu rol genetic, cu ajutorul aparaturii de laborator specifice (microscoape, tehnici cromatografice, difracie cu raze X .a.). Cu ajutorul ei s-au studiat caracteristicile cromozomilor i a altor structuri cu rol genetic. Metoda radiaiilor, permite utilizarea diferitelor tipuri de radiaii pentru modificarea ereditii organismelor. Metode biochimice i biofizice, contribuie la cunoaterea structurii materialului genetic la nivel molecular. Materialul genetic utilizat, n general pentru studiile de genetic clasic trebuie s prezinte urmtoarele particulariti: - s aib caractere bine conturate, uor de urmrit (markeri genetici); - s aib ciclul scurt de dezvoltare; - s permit obinerea unui numr mare de descendeni; - s posede un numr relativ mic de cromozomi; - s fie acceptabil la aciunea factorilor mutageni; - s nu fie foarte scump i s fie relativ uor de ntreinut. Ca teste genetice ce ndeplinesc condiiile de mai sus, se poate utiliza: Drosophila, Neurospora, Escherichia, diferite virusuri, mai ales fagi, porumbul, bobul .a. 1.4. Scurt istoric a dezvoltrii geneticii n anul 1865, GREGOR MENDEL a comunicat rezultatul cercetrilor sale privind hibridarea la plante, marcnd nceputurile geneticii, tiina ereditii. El a fost primul naturalist care a aplicat cu succes teoria probabilitilor, pentru a explica fenomenul de dominan i segregare a factorilor ereditari la hibrizi, fiind considerat unul dintre fondatorii geneticii ca tiin. Cercetrile lui MENDEL au rmas necunoscute pn n 1900, cnd au fost redescoperite de HUGO de VRIES, CORRENS i TSCHERMACK,

simultan i independent unul de cellalt, moment care marcheaz cu adevrat apariia geneticii ca tiin. Trebuie menionat faptul, c problemele legate de genetic i transmiterea ereditar a caracterelor au preocupat din totdeauna omenirea. Primele dovezi scrise privind cunotinele despre ereditate ale civilizaiilor antice, au fost ntlnite la popoarele asiro-caldeene din Orientul mijlociu. n Mesopotamia, la Elam, a fost descoperit o tbli de piatr cu o vechime de 6.000 de ani, cu pedigre-ul capului i copitei la cinci generaii de cai. n Grecia Antic filozofii greci ncercau s gseasc rspuns la nterbarea de ce copii seamn cu prinii, sau care sunt cauzele bolilor motenite. Ei au emis aa numita teorie preformist prin care explicau c noul organism este preformat n gamei, spermatozoid (teoria spermatocist), sau n ovul (teoria ovocist). Un reprezentant de seam a teoriei spermatociste a fost filozoful ANAXAGORA. n Evul Mediu, ideile gnditorilor greci au fost perpetuate, fr ns a se aduce noi argumente sau supoziii referitoare la problemele ereditii. Cercetrile legate de genetic iau o amploare deosebit ncepnd din secolul al 19-lea, cnd diferii biologi au elaborat o serie de ipoteze teoretice, speculative despre mecanismele ereditii. n toate aceste teorii se susine c motenirea caracterelor se realizeaz prin intermediul unor particule care migreaz din toate organele corpului ctre celulele sexuale, unde se activeaz i se transmit, dup fecundare, n descendeni. Dei au un principiu comun privind transmiterea ereditar a caracterelor, poart denumirea dat de autorii lor: - teoria panspermiei sau teoria pangenezei, elaborat de DARWIN - teoria plastidulelor, elaborat de HAECKEL; - teoria micelar, elaborat de NGELI; - teoria pangenelor, elaborat de H. de VRIES. n acelai secol, WOLFF i BAER au formulat teoria epigenetic, dup care noul organism se formeaz n momentul fecundrii, iar WEISMANN teoria plasmei germinative care a stabilit experimental c nc de la primele diviziuni ale zigotului are loc separarea liniei germinale (care va da natere la glandele sexuale), de linia somatic (din care se vor forma celelalte organe ale embrionului i ale adultului). Importana acestor teorii rezid din faptul c dei speculative, au cutat s gseasc un suport material fenomenului ereditii. Toate se caracterizeaz prin aceea c admiteau dualitatea germen soma n sensul c organismul oricrui individ este alctuit din dou pri distincte, independente una de alta, germenul sau plasma germinativ, rspunztoare de pstrarea caracterelor ereditare i transmiterea lor i soma, restul corpului.

Dup fecundare, germenul se separ de som i nu poate fi influenat de condiiile de mediu, urmnd a fi integrat n gamei (BOTEZ, 1991). Teoria factorilor ereditari formulat de MENDEL (1865), constituie prima teorie tiinific a ereditii, legile formulate de el fiind valabile i astzi. Conform acestei teorii, caracterele unui organism sunt determinate de factori ereditari grupai n perechi, care n momentul formrii gameilor se separ, fiecare gamet cuprinznd un singur factor, factori ce se reunesc n moduri diferite n momentul fecundrii, conducnd, ca urmare a relaiilor de dominan i recesivitate ce se stabilesc ntre ei, la apariia segregrii (diferenierea caracterelor parentale n anumite proporii) (BOTEZ, 1991). n primii ani ai secolului 20, BATESON descoper c legile mendeliene au valabilitate i n lumea animal, iar n 1908 tot el este acela care denumete noua tiin biologic ce se ocup de studiul ereditii, genetica (dup RAICU, 1980). Ulterior, JOHANSEN a emis noiunea de genotip, prin care se nelege baza ereditar a organismelor care cuprinde totalitatea factorilor ereditari (gene) i fenotip, prin care se nelege totalitatea caracterelor i nsuirilor organismului. n 1906, a introdus n tiin noiunea de gen. Cu toate c n urma cercetrilor efectuate de HERTWIG n 1875 i apoi de FLEMMING (1882)i alii, au fost descoperii cromozomii, denumii astfel de WALDEYER (1888), legtura dintre acetia i factorii mendelieni nu s-a fcut dect dup 1900 n urma cercetrilor lui SUTTON i BOVERII, care n 1902 au formulat ipoteza conform creia factorii ereditari se regsesc n cromozomi, fiecare specie avnd un anumit numr de cromozomi, cu o anumit form i mrime (dup RAICU, 1980). Aceast idee a fost preluat de T. MORGAN i colaboratorii si, care n primele decenii ale secolului 20, au pus bazele geneticii clasice elabornd teoria cromozomal a ereditii. n urma cercetrilor fcute de BATESON i PUNNET n 1906, acetia au descoperit fenomenul de linkage. MORGAN, fcnd o sintez a cunotinelor acumulate, consider c genele sunt plasate n lungul cromozomului, liniar, transmindu-se mpreun cu cromozomii n procesul formrii gameilor, iar ntre cromozomii perechi, omologi, provenii de la cei doi prini, pot avea loc schimburi reciproce de gene (fenomenul de crossing-over). Mai trziu, AVERY, McLEOD i McCARTY (1944) au demonstrat faptul c ADN-ul (acidul dezoxiribonucleic), din care sunt constituii n mare parte cromozomii, este purttorul material al ereditii. Dup cel de al doilea Rzboi Mondial, s-au dezvoltat considerabil cercetrile privind materialul genetic la nivel molecular. Printre cele mai importante realizri ale geneticii moleculare pot fi citate, descoperirea fenomenului de transformare la bacterii cu ajutorul ADN (AVERY i colab., 1944), descoperirea structurii macromoleculei de AND, deschiznd calea 6

cercetrilor privind acizii nucleici (WATSON, CRICK i WILKINS, 1953), realizarea biosintezei artificiale a ARN (GRUNBERG-MANAGO i OCHOA, 1955) i ADN (KORNBERG, 1956), descoperirea faptului c la ribovirusuri ARN-ul constituie materialul genetic n care se gsete codificat informaia genetic (FRAENKEL i colab., 1956), descifrarea codului genetic (OCHOA, NIRENBERG i alii, 1961-1967), descoperirea reglajului genetic (JACOB i MONOD, 1961), sinteza artificial a genei (KHORANA, 1970) .a. Dup 1970 s-au dezvoltat considerabil cercetrile de inginerie genetic care i propune: izolarea i sinteza artificial a genelor, transferul intraspecific i interspecific a genelor, de la organisme procariote la cele eucariote i invers, manipularea materialului genetic la nivel celular prin realizarea de haploizi prin androgenez experimental la plante, crearea de microorganisme capabile s sintetizeze aminoacizi, proteine, hormoni, vitamine, antibiotice .a. n 1981, BERG i GILBERT, au reuit s sintetizeze in vitro i s construiasc o molecul de ADN-recombinant, prin care s-au demarat spectaculos cercetrile n domeniul ingineriei genetice i ale biotehnologiilor. Dintre realizrile spectaculoase, n acest domeniu, din ultima jumtate a secolului 20, merit menionate: 1951 - primul transfer de embrioni la o vac; 1952 - primul viel nscut prin nsmnare artificial; 1952 - prima clonare la amfibieni; 1952 - prima plant regenerat in vitro; 1970 - prima plant regenerat pornind de la protoplati; 1972 - primul hibrid interspecific obinut prin fuziune de protoplati (la tutun); 1973 - identificarea plasmidului Ti (tumor inducting); 1978 identificarea primei gene umane; 1983 - obinerea primei plante transgenice; 1984 - prima natere uman, pornind de la un embrion congelat; 1985 - prima plant transgenic rezistent la o insect; 1986 - prima clonare la mamifere, utiliznd celule embrionare; 1987 - prima plant transgenic rezistent la ierbicid; 1983 - prima cereal transgenic; 1991 - prima utilizare a unui segment de ADN ca medicament; 1995 - primul copil pornind de la fecundarea in vitro a unui ovocit; 1997 - prima clonare somatic in vitro la mamifere (oaia Dolly); 2001 - descifrarea genomului uman (dup Mihaela CORNEANU, 2001). La noi n ar primele cercetri de genetic au fost efectuate nc nainte de 1900. C. VASILESCU (1840-1902) a urmrit n experienele 7

hibridologice modul de transmitere a unor caractere la suine, semnalnd fenomenul de dominan i recesivitate precum i segregare n generaia F 2 (dup RAICU, 1980). C. SANDU-ALDEA (1874-1927), a publicat n 1915 primul manual de ameliorarea plantelor fundamentat pe principii genetice. E. RACOVI (1868-1947), a dezvoltat teoria legturii dintre ereditate i mediu. Gh. IONESCU SISETI (1885-1963) s-a afirmat prin realizri remarcabile de crearea unor soiuri de gru. Traian SVULESCU (1889-1963), fondatorul colii moderne de fitopatologie la baza creia st conceptul evoluiei conjugate gazd-parazit i al modificrilor ereditare n urma interaciunilor bilaterale. N. SULESCU (1898-1977), are contribuii remarcabile n domeniul geneticii cantitative. n 1936, la iniiativa savantului Gh. MARINESCU a luat fiin prima Societate de Genetic din Romnia (BOTEZ, 1991). Ultimii 20 de ani constituie perioada celor mai remarcabile realizri materializate prin lucrri de mare valoare teoretic i practic. Prin aplicarea principiilor de genetic, n ameliorarea plantelor s-au fcut progrese remarcabile, crendu-se hibrizi i soiuri valoroase, la majoritatea speciilor cultivate. Au fost obinui hibrizi interspecifici i intergenerici la gru (PRIADCENCU, 1901-1975) la Bucureti, linii homozigote obinute artificial la porumb (C. BOTEZ) i hibrizi obinui din linii dihaploide, haploizi la cartof prin ncruciri interspecifice (PANFIL i MARIN), linii poliploide de trifoi rou la Cluj-Napoca. Realizri remarcabile s-au obinut la Institutul Agronomic Bucureti mai ales n domeniul geneticii cantitative (T. CRCIUN). Realizri deosebite n domeniul ameliorrii plantelor au fost obinute de N.N. SULESCU, la gru, Al. VRNCEANU la floarea soarelui, CBULEA i O. COSMIN, la porumb, L. DRGHICI la orz .a. n domeniul ingineriei genetice s-au obinut rezultate notabile obinute de colectivul condus de P. RAICU de la Universitatea Bucureti, precum i n cadrul Institutului de Biologie i ICCPT Fundulea.

CAPITOLUL II
2. Legile mendeliene ale ereditii
G. MENDEL a nceput cunoscutele sale experiene de hibridare la plante n 1857 i opt ani mai trziu el sintetizeaz rezultatele obinute n cele dou legi ale segregrii i anume: - legea puritii gameilor sau segregrii factorilor ereditari; - legea liberei combinaii a factorilor ereditari, sau a segregrii independente a perechilor de caractere. G. MENDEL a nceput experienele de hibridare la diferite specii de plante ca: Pisum, Hieracium, Phaseolus, Cirsium, Linaria, Mirabilis, Zea etc., ns n mod deosebit a fcut cercetri la mazre (Pisum sativum), plant autogam care are caractere morfologice ce se pot uor recunoate. El a nceput s lucreze cu 34 de soiuri de mazre, dar dup doi ani de experiene s-a fixat asupra a 22 de soiuri ce se deosebesc prin caracterele distincte (bob galben - bob verde, plante nalte - plante pitice, bob neted - bob zbrcit etc.) i constante, dnd natere unei descendene omogene. 2.1. Monohibridismul i legea puritii gameilor Monohibridarea const n ncruciarea a doi indivizi, care se deosebesc printr-o singur pereche de caractere. GREGOR MENDEL a ncruciat mazrea cu bobul neted (caracter datorat prezenei amidonului) cu mazrea cu bobul zbrcit (caracter datorat prezenei dextrinei), obinnd n prima generaie numai plante cu bob neted. Acest caracter a fost denumit dominant, n timp ce caracterul bob zbrcit, care nu a aprut n prima generaie, a fost denumit recesiv. Prin autopolenizarea plantelor din prima generaie, a obinut n generaia a doua att plante cu bob neted, ct i cu boabe zbrcite, proporia dintre caracterul dominant i cel recesiv fiind de 3:1. G. MENDEL a cercetat modul de segregare i la alte perechi de caractere, rezultatele fiind prezentate n tabelul 2.1. G. MENDEL explic segregarea celor dou caractere studiate, bob neted i bob zbrcit, ca fiind datorate prezenei n celul a dou tipuri de factori ereditari, notai cu A i a. Plantele din soiul cu boabe netede (AA) conin excesiv factorul ereditar care determin acest caracter, iar cele din soiul cu boabe zbrcite (aa) conin exclusiv factorul ereditar al caracterului respectiv. La hibrizii din prima generaie, factorii ereditari ai mamei i tatlui se altur (Aa), astfel c atunci cnd acestea formeaz gamei, factorii

ereditari se separ, fiecare gamet neavnd dect un singur tip de factor ereditar (fig. 2.1.)
Tabelul 2.1. Rezultatele ncrucirilor ntre diferite soiuri de mazre (efectuate de G. MENDEL) nsuirea
Forma boabelor Culoarea cotiledoanelor Culoarea cojii boabelor Consistena pstilor Culoarea pstilor Dispoziia florilor Forma plantei
Total pentru toate nsuirile

Dominante (D) Neted Galben Colorat Tare Verde Axilar nalt

Caractere Proporia Recesive D: r Dominante Recesive (r) Zbrcit 5.474 1.850 2,989 :1,0104 Verde 6.022 2.001 3,0023:0,9977 Alb 705 224 3,0355:0,9645 Moale 882 299 2,9873:1,0127 Galben 428 152 2,9517:1,0483 Terminal 651 207 3,0349:0,9651 Pitic 787 277 2,9586:1,0414 14.949 5.010 2,9933:1,0067

Fig. 2.1. Schema experienei de hibridare ntre mazrea cu boabe netede (AA) i cea cu boabe zbrcite (aa)

n mod asemntor, poate s se desfoare i o ipotetic monohibridare la salcm (fig. 2.2.)

10

Fig. 2.2. Monohibridare ipotetic la salcm: AA forma normal cu flori albe; aa forma decaisneana cu flori roz

Gameii sunt, n felul acesta, puri din punct de vedere genetic . Prin unirea acestor gamei pe baz de probabilitate n F 2, n procesul fecundrii, se obin plantele generaiei a doua, care se comport astfel: - 25% din plante sunt pure cu bobul neted, avnd un singur tip de factori ereditari (AA); - 25% din plante sunt pure cu bobul zbrcit, avnd exclusiv cellalt tip de factori ereditari (aa); - 50% din plante cu bobul neted, poart ambii factori ereditari alturai (Aa). MENDEL a denumit plantele, care conin un singur tip de factor ereditar homozigote, iar cele care conin ambele tipuri, heterozigote. La indivizii heterozigoi nu se manifest dect unul dintre factorii ereditari, cel dominant (bob neted), cellalt rmnnd n stare ascuns (bob zbrcit). n acest fel, G. MENDEL a reuit s descopere deosebirea dintre structura 11

genetic a organismelor i nfiarea lor, noiune care mai trziu a fost denumit de JOHANSEN genotip i respectiv fenotip. Genotipul reprezint totalitatea genelor coninute de un organism. Fenotipul reprezint suma nsuirilor morfologice, fiziologice, biochimice i de comportament a unui organism ca rezultant a interaciunii dintre genotip i mediu. Din exemplul anterior se remarc faptul c plantele cu acelai fenotip (75% bob neted), prezint genotipuri diferite: 25% sunt homozigote i 50% sunt heterozigote. Studiul comportrii n descenden a hibrizilor obinui l-a condus pe Mendel la elaborarea primei legi a ereditii, legea puritii gameilor. Gameii sunt ntotdeauna puri din punct de vedere genetic, adic nu conin dect unul dintre factorii ereditari. Prin combinarea probabilistic a acestor gamei rezult n generaia a doua, n urma fenomenului de segregare, un raport de 3 dominant : 1 recesiv. Prin autofecundarea generaiei a doua se obine generaia a treia, la care se observ urmtoarele: - din plantele pure cu bobul neted se obin exclusiv plante cu bobul neted; - din plantele pure cu bobul zbrcit se obin exclusiv plante de acest tip; - plantele heterozigote cu bobul neted segreg n felul urmtor: 25% plante homozigote cu bobul neted, 25% plante homozigote cu bobul zbrcit i 50% plante heterozigote cu bobul neted. Deci, plantele heterozigote din generaia a doua se comport n generaia a treia la fel cum se comport hibrizii din prima generaie. Dac florile plantelor hibride din prima generaie se polenizeaz cu polen de la plantele genitorului cu bob neted (backcross), atunci se obin n generaia a doua numai plante cu boabe netede, din care 50% sunt homozigote i 50% heterozigote. n caz contrar, dac polenizarea se realizeaz cu polen de la plantele cu bobul zbrcit, se va forma n generaia a doua jumtate plante heterozigote cu bobul neted i jumtate homozigote cu bobul zbrcit (fig. 2.3.).

Fig. 2.3. Segregarea la ncruciarea heterozigoilor (Aa) din F1 cu genitorii (AA sau aa)

12

Obinerea ultimei combinaii nu ar fi posibil dac gameii ar conine ambii factori ereditari, deci gameii sunt puri din punct de vedere genetic, adic conin un singur factor ereditar (o singur gen) din perechea considerat. 2.2. Dihibridarea i legea segregrii independente a perechilor de caractere ncruciarea ntre prini care se deosebesc prin dou perechi de caractere poart numele de dihibridare. G. MENDEL a studiat cazul cnd genitorii se deosebesc prin dou perechi de caractere. El a ncruciat mazrea cu bobul neted i culoare galben cu mazrea cu bobul zbrcit i de culoare verde. n prima generaie hibrid, toate plantele aveau boabe netede i de culoare galben (caractere dominante). Prin autopolenizarea plantelor din prima generaie s-a obinut generaia a doua (F2) n care aproximativ 9/16 din plante aveau boabe netede i galbene, 3/16 zbrcite i galbene, 3/16 netede i verzi i 1/16 zbrcite i verzi (fig. 2.4.) n mod ipotetic, ncruciarea unei forme de salcm cu flori albe (AA) i cu lujeri spinoi (SS) caractere dominante, cu o form cu flori roze (aa) i lujeri nespinoi (ss) caractere recesice n prima generaie s-ar obine numai exemplare cu flori albe i lujeri spinoi. n F2, la arborii obinui prin autofecundarea hibrizilor F1 s-ar ajunge la urmtoarea repartiie a caracterelor: 9/16 plante cu flori albe i lujeri spinoi, 3/16 plante cu flori albe i lujeri nespinoi, 3/16 plante cu flori roze i lujeri spinoi i 1/16 plante cu flori roze i lujeri spinoi (STNESCU, 1982). Aceast segregare se explic prin aceea c hibrizii din prima generaie provenii din prini ce se deosebesc prin dou perechi de caractere, formeaz patru categorii de gamei n care se afl cte un singur factor ereditar din fiecare pereche. Prin combinarea celor patru categorii de gamei se formeaz 16 combinaii care reprezint segregarea n cazul ncrucirii prinilor ce se deosebesc prin dou perechi de caractere, care se realizeaz astfel: 9:3:3:1. n cazul unei trihibridri, cnd se ncrucieaz organisme care se deosebesc prin trei perechi de caractere, se formeaz opt tipuri de gamei masculi i opt tipuri de gamei femeli, prin a cror unire pe baz de probabilitate se formeaz 64 de combinaii i 8 tipuri de organisme: - 27/64 cu trei caractere dominante (ABC); - 9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (ABc); - 9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (AbC);

13

Fig. 2.4. Dihibridarea tip Pisum (raport de segregare fenotipic 9:3:3:1)

14

9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (aBC); 3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (Abc); 3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (aBc); 3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (abC); 1/64 cu trei caractere recesive (abc).

n acest fel, MENDEL a ajuns la concluzia c la ncruciarea ntre organisme ce se deosebesc prin dou sau mai multe perechi de caractere are loc fenomenul segregrii independente a perechilor de caractere . El a considerat, de asemenea, c ereditatea unei perechi de caractere este independent de ereditatea celeilalte perechi de caractere, astfel c i segregarea are loc independent. Dac n exemplul cu dihibridarea, se studiaz segregarea perechii de caractere bob neted i bob zbrcit, fr s se in seama de culoarea bobului (galben sau verde), atunci se obine acelai raport de segregare de 3:1 ntre boabele netede i cele zbrcite. Acelai lucru se ntmpl i n cazul culorii boabelor. Aceasta este segregarea de tip Pisum denumit astfel deoarece a fost descoperit la mazre. n conformitate cu acest tip de segregare, n F2 heterozigoii de tip Aa sunt identici fenotipic cu homozigoii AA. 2.3. Alte tipuri de segregare Abaterile de la legile mendeliene ale ereditii apar n urma mecanismelor de interaciune a genelor, ce genereaz fenomene de dominan complet, incomplet, letalitate .a. Raportul de segregare genotipic n F2 este acelai, dar n funcie de relaiile existente ntre genele alele sau nealele, aceste constituii genotipice determin fenotipuri diferite. 2.3.1. Semidominana n cazul dominanei complete, organismele homozigote (AA) prezint acelai fenotip cu cele heterozigote (Aa). n unele cazuri ns, fenotipul organismelor ce conin genele alele n stare heterozigot se deosebete de cel al organismelor ce conin genele respective n stare homozigot (deci AAAa). Fenomenul menionat este cunoscut sub denumirea de semidominan sau dominan incomplet. Semidominana a fost descoperit de CORRENS n 1912 la specia Mirabilis jalapa. ncrucind o plant cu flori roii (RR), cu una cu flori albe (rr), a obinut n generaia F1 plante cu flori de o culoare intermediar, roz (Rr). Indivizii heterozigoi (Rr) manifest caractere intermediare ntre fenotipurile genitorilor, datorit dominanei incomplete sau semidominanei genei R dominant asupra genei r recesiv. Prin autopolenizarea plantelor hibride F1, n F2 s-au obinut att plante cu flori roii i albe, dar i plante cu 15

flori roz. Raportul fenotipic este identic cu cel genotipic 1RR (flori roii):2Rr (flori roz):1rr (flori albe) (fig. 2.5.).

Fig. 2.5. Fenomenul de semidominan n transmiterea culorii florii la Mirabilis jalapa (raport de segregare fenotipic 1 rou:2 roz:1 alb)

La Zea mays, din ncruciarea unei varieti cu boabe albastre cu una cu boabe galbene au rezultat n F1 plante cu boabe violete, culoare intermediar ntre genitori. n F2 s-a produs segregarea astfel:1 albastru: 2 violet:1 galben. Acest tip de segregare (1:2:1), n care organismele heterozigote prezint fenomenul dominanei incomplete, este cunoscut sub denumirea de segregare de tip Zea, pentru a-l deosebi de segregarea de tip Pisum de 3:1 observat de MENDEL. La psri fenomenul de dominan incomplet a fost observat la ginile de Andaluzia, cu penaj de culoare albstruie. Ele provin din ncruciarea unei rase de gini cu penajul negru cu una cu penajul alb. n F 1 toate psrile au penaj albastru. n F2 se produce segregarea astfel: 25% penaj negru, 25% penaj alb i 50% penaj albastru. Aceasta nseamn c ginile de Andaluzia cu penaj albastru sunt heterozigote, fapt pentru care ele segreg mereu, neputndu-se crea o ras de gini de Andaluzia. Dominana incomplet intervine i n cazul raporturilor de segregare la arbori, fenomenul acionnd probabil, n cazul unor caractere cum sunt forma acuminat a solzilor conurilor de molid, n raport cu forma rotunjit

16

sau culoarea rocat a ritidomului, la pinul silvestru, n raport cu culoarea cenuie-nchis a ritidomului .a. 2.3.2. Supradominana n acest caz, indivizii heterozigoi depesc n productivitate, fertilitate, viabilitate etc., genitorii homozigoi, dominani sau recesivi, AA<Aa>aa. Fenomenul se numete supradominan i el poate fi observat att la plante ct i la animale. n procesul de apariie a supradominanei sunt de obicei, implicate mai multe gene cu caracter aditiv. Fenomenul mai poart denumirea de heterozis monogenic. La Drosophila melanogaster, heterozigoii ww+, prezint o cantitate mai mare de pigmeni n ochi (sepiaterina), fa de genitorii homozigoi w +w+ (ochi rou-crmiziu) i ww (ochi albi). 2.3.3. Codominana Codominana determin apariia la indivizii heterozigoi pentru genele dominante a unui fenotip nou, comparativ cu indivizii homozigoi. Se tie c indivizii din populaia uman pot s aib patru grupe de snge notate cu A, B, AB i 0. Aceste grupe de snge sunt determinate genetic de trei grupe de gene polialele notate LA, LB i l. Genele LA i LB sunt dominante asupra genei l, iar mpreun sunt codominante, adic determin un fenotip nou grupa de snge AB. Ca urmare, indivizii pot fi fenotipic i genotipic de mai multe tipuri (tabelul 2.2.)
Fenotip
0 A B AB

Genotip
ll

LL LAl LBLB LBl LALB

A A

Fig. 2.2. Schema grupelor de snge din sistemul AB0

n cazul fenomenului de codominan, ambele gene sunt funcionale, determinnd apariia unui fenotip nou. Genotipul heterozigot LALB se manifest prin grupa de snge AB. Pentru realizarea unor transfuzii sangvine trebuie cunoscute grupele de snge ale donatorului i receptorului. Cunoaterea modului cum se motenesc grupele sangvine are importan i n stabilirea paternitii. 17

2.3.4. Pleiotropia Prin fenomenul de pleiotropie se nelege efectul fenotipic multiplu a unei singure gene. Genele care au capacitatea de a determina la acelai organism dou sau mai multe caractere se numesc pleiotropice. Fenomenul a fost observat de MENDEL, care a demonstrat c mazrea cu flori albe are boabe cu tegumentul alb, cea cu flori colorate are tegumentul cenuiu sau brun. NILLSON-EHLE a artat c o anumit gen la ovz modific simultan forma aristelor spicului, pilozitatea i fragilitatea tulpinilor. Un exemplu caracteristic de pleiotropie l ofer hibridul Nicotiana silvestrisNicotiana tabacum, la care apar ase caractere distincte, deschiderea carpelelor, transformarea ovulelor n carpele, alungirea axei florale deasupra carpelelor, placentaia, cantitatea de nectar i ncreirea bazal a corolei, care sunt controlate de aceiai gen. 2.3.5. Genele letale Genele letale schimb raportul mendelian de segregare, deoarece prezena lor n stare homozigot (dominant sau recesiv) determin moartea indivizilor purttori, nainte de maturitatea sexual. Dup gradul de manifestare, efectul genelor letale poate fi: - gene letale, ce cauzeaz o mortalitate de 100% a indivizilor purttori; - gene semiletale, n acest caz 50% dintre indivizii purttori mor; - gene subvitale, care cauzeaz moartea unui numr mai mic dect 50% dintre indivizii purttori. Noiunea de gen letal a fost introdus n tiin de ctre CUNOT (1911), n urma cercetrilor intreprinse pe oareci de culoare galben. Acetia s-au dovedit a fi ntotdeauna heterozigoi, deoarece prin ncruciarea a doi oareci galbeni, nu se obin niciodat numai oareci galbeni, ci un amestec cu indivizi de alt culoare. Raportul ntre oarecii galbeni i cei de alt culoare este n general de 2:1. Dac se noteaz gene pentru culoarea normal a blnii cu a i mutanta sa care determin culoarea galben a blnii cu A y (yellow = galben), prin ncruciarea ntre organisme heterozigote ar trebui s se obin raportul de 3:1 ntre indivizii galbeni i de alt culoare (fig. 2.6.)

18

Fig. 2.6. Fenomenul de letalitate de dominan la oareci (raport de segregare fenotipic 1:2:1 letal)

AyaAya=AyAy+2Aya+aa Dac se ine seama de tipul AyAy, adic galben homozigot lipsete, s-a dedus c gena Ay este o alel mutant letal, care n stare homozigot duce la moartea organismului. S-a constatat c prin sacrificarea unei femele gestante, o parte a oarecilor de culoare galben mor n stadiu embrionar. La plante au fost identificate numeroase gene letale care n stare homozigot provoac moartea embrionilor, sau plantelor nainte de maturitate. La porumb se cunosc 15 gene diferite care n stare homozigot blocheaz fotosinteza i formarea clorofilei (plante albinotice), incapabile s supravieuiasc. Acelai fenomen a fost semnalat i la Antirrhium majus (fig. 2.7.).

Fig. 2.7. Fenomenul de letalitate de recesivitate, la specia Antirrhium majus (raport de segregare 1:2:1 letal)

19

2.3.6. Complementaritatea genelor Interaciunea dintre dou sau mai multe gene nealele, prezente mpreun, determin apariia unui alt fenotip, dect fenotipul determinat de fiecare gen n parte. A. Complementaritatea de dominan a fost evideniat de BATESON i PUNNET (1908) la specia Lathyrus odoratus. S-a remarcat c n urma ncrucirii a dou varieti de L. odoratus, cu flori albe, n generaia F1 s-au obinut plante cu flori roii, iar n generaia F 2, raportul de segregare a fost 9/16 plante cu flori roii, 7/16 plante cu flori albe. Pentru formarea antocianului este necesar prezena concomitent a dou gene dominante (C i P). Fiecare genitor prezint n stare homozigot o gen dominant i una recesiv (CCpp, respectiv ccPP). n stare dominant ambele gene sunt ntlnite numai n F1 (CcPp) i 9/16 din plantele obinute n F 2 (C-P-). Raportul fenotipic de segregare este de 9:7 (fig. 2.8.) B. Complementaritatea de recesivitate, a fost evideniat de SHULL n 1914, la specia Capsella bursa pastoris (traista ciobanului). S-a remarcat c forma capsulei plantei este determinat de interaciunea dintre dou gene nealele. n starea de recesivitate a ambelor gene, apare tipul cu capsul ovoid. Dac una sau ambele gene se afl n stare dominant, apare tipul cu capsul triunghiular. Raportul genotipic de segregare n F2 este de 9/16 A-B (capsul triunghiular):3/16 aaB (capsul triunghiular):3/16 A-bb (capsul triunghiular):1/16 aabb (capsul ovoid), iar cel fenotipic de 15:1 (fig. 2.9). Aciunea complementar a genelor recesive se explic prin prezena unor gene duplicate, adic a unor gene similare ca aciune, care ns se transmit independent. Planta Capsella bursa pastoris fiind un tetraploid, are dou perechi din fiecare cromozom omolog i ca atare posed gene duplicate, care determin aciunea de complementaritate recesiv.

20

Fig. 2.8. Fenomenul de complementaritate de dominan n transmiterea culorii florii la Lathyrus odoratus (raport de segregare fenotipic 9 rou:7 alb)

21

Fig. 2.9. Fenomenul de complementaritate n transmiterea formei capsulei la Capsella bursa pastoris (raport de segregare fenotipic 15 triunghiular:1 ovoid)

22

2.3.7. Interaciunea dintre gene Interaciunea dintre genele nealele poate determina apariia unui fenotip nou. Forma crestei la gini este determinat de interaciunea a dou gene nealele P i R. n funcie de interaciunea lor, forma crestei poate s fie: - pprr creast simpl; - P-rr creast mzrat; - pp-R creast trandafir; - P-R creast nuc. n urma ncrucirii ntre doi indivizi homozigoi, pentru ambele gene, PPrr i ppRR, cu creast mzrat, respectiv trandafir, n F 1 se obin numai indivizi cu creasta tip nuc RrPp, iar n F2 se obin cele patru tipuri de creast n raport de 9 nuc:3: trandafir:3 mazre:1 simpl (fig. 2.10.)

Fig. 2.10. Fenomenul de interaciune n transmiterea formei crestei la gini (raport de segregare fenotipic 9 nuc: 3 trandafir: 3 mazre:1 simpl)

23

Interaciunile dintre genele nealele intervin i n formarea i transmiterea caracterelor la arbori, numai c, pn n prezent, ele au fost puin studiate din cauza dificultilor metodologice de care s-a amintit. 2.3.8. Epistazia Epistazia const n mascarea expresiei fenotipice a unei gene numit hipostatic, de ctre o alt gen nealel numit epistatic. Epistazia poate fi de dominan sau de recesivitate, dup cum gena epistatic este dominant sau recesiv. A. Epistazia de dominan. Culoarea glumelor i bobului la ovz este determinat de dou gene: N, epistatic, pentru culoarea neagr i C hipostatic, pentru culoarea cenuie. Prezena genei N, n stare dominant mpiedec manifestarea genei C. ncrucind ovzul slbatic ( Avena fatua), NNCC, cu boabe negre, cu ovzul cultivat (A. sativa), nncc, cu boabe galbene, s-au obinut n F1 plante hibride, heterozigote pentru ambele gene NnCc, cu boabe negre. Prin autopolenizarea generaiei F1 s-a obinut n F2 raportul de segregare fenotipic: 12 boabe negre:3 boabe cenuii: 1 boabe galbene (fig. 2.11.). Raportul de segregare geonotipic a fost: 9/16 N-C: 3/16 N-Cc: 3/16 nnCC: 1/16 nncc.

Fig. 2.11. Fenomenul de epistazie de dominan n transmiterea culorii glumelor i boabelor la ovz (raport de segregare fenotipic 12 negre: 3 cenuii: 1 galbene)

24

B. Epistazia de dominan i recesivitate a fost evideniat de BATESON i PUNNET, n experienele lor privind transmiterea colorat a penajului la gini. Culoarea penajului este determinat de dou gene nealele. Una dintre gene I epistatic, care determin penajul alb (fie c este n stare homozigot dominant II, sau heterozigot Ii) mascheaz manifestarea celeilalte gene, hipostatic C, care determin penajul colorat. n urma ncrucirii a dou rase de gini cu pene de culoare alb, Leghorn (IICC) i Wyandotte (iicc), n F1, s-au obinut heterozigoi IiCi, cu penaj de culoare alb. Prin ncruciarea indivizilor F1 ntre ei, n F2 s-au obinut indivizi cu penajul alb i colorat n raport de 13:3; cei 3/16 indivizi cu penaj colorat (negru) avnd combinaia C-ii, n care gena C nu mai este represat de gena I, aflat n stare recesiv (fig. 2.12.).

Fig. 2.12. Fenomenul de epistazie de dominan i recesivitate n transmiterea culorii penajului la gini (raport de segregare fenotipic: 13 alb: 3 colorat)

25

C. Epistazia de recesivitate. Aciunea unei gene recesive n stare homozigot, gen epistatic, inhib manifestarea altei gene nealele, n stare homozigot sau heterozigot, gena hipostatic. Culoarea blnii la cini este controlat de dou gene: cc (gena epistatic), determin culoarea alb; B (gena hipostatic), care n absena cc, determin culoarea neagr; bb (gen hipostatic), n absena cc, determin culoarea maron. n urma ncrucirii ntre dou rase de cini, una homozigot cu blana alb, BBcc, i alta homozigot cu blana maron, bbCC, se obin n F1 numai indivizi cu blan neagr, BbCc. n F2 se obine raportul de segregare fenotipic: 9 blan neagr: 4 blan alb: 3 blan maron (fig. 2.13.)

P F1

BBcc (alb)

BbCc (negru)

bbCC (maron)

P F1

F2

/ BC Bc bC bc

BC BBCC negru BBCc negru BbCC negru BbCc negru

Bc BBCc negru BBcc alb BbCc negru Bbcc alb

bC BbCC negru BbCc negru bbCC maron bbCc maron

bc BcCc negru Bbcc alb bbCc maron bbcc alb

F2

Fig. 2.13. Fenomenul de epistazie de recesivitate, n transmiterea culorii blnii la cini (raport de segregare 9 blan neagr: 4 blan alb: 3 blan maron

2.3.9.Poligenia (polimeria) Mai multe gene nealele, care segreg independent, pot afecta acelai caracter, expresia sa fenotipic depinznd de numrul de gene dominante prezente. NILSSON-EHLE a constat c la gru, n determinarea culorii bobului sunt implicate 2 (3) perechi de gene nealele, notate cu R 1, R2, (R3). Culoarea bobului depinde de numrul de gene dominante prezente i numrul de gene nealele (2 sau 3), implicate. Din figura 2.14, rezult c intensitatea culorii boabelor de gru, la indivizi rezultai n F2, este proporional cu numrul de 26

gene n stare dominant prezente n genotipul lor. Indivizii cu 4 gene R (R1R1R2R2) n genotipul lor, vor avea bobul rou nchis, cei cu trei gene R, vor avea bobul rou, cei cu dou gene R, vor avea bobul roietic, cei cu o gen R, vor avea bobul rou pal, iar cei cu ambele gene n stare recesiv (r1r1r2r2), vor avea bobul alb. Raportul de segregare n F1 este de 1:4:6:4:1, formndu-se 5 grupe fenotipice.
P F1

R1R1R2R2
bob rou nchis

r1r1r2r2
bob alb

P F1

R1r1R2r2
bob roietic

F2

/ R1R2 R1r2 r1R2 r1r2

R1R2
R1R1R2R2 rou nchis R1R1R2r2 rou R1r1R2R2 rou R1r1R2r2 roietic

R1r2
R1R1R2r2 rou R1R1r2r2 roietic R1r1R2r2 roietic R1r1r2r2 rou-pal

r1R2
R1r1R2R2 rou R1r1R2r2 roietic r1r1R2R2 roietic r1r1R2r2 rou pal

r1r2
R1r1R2r2 roietic R1r1r2r2 rou pal r1r1R2r2 rou pal r1r1r2r2 alb

F2

Fig. 2.14. Fenomenul de poligenie (polimerie) n transmiterea culorii cariopsei la gru (raport de segregare fenotipic 1 rou nchis:4 rou:6 roietic:1 alb)

2.3.10. Transgresiunea Mai multe gene nealele, determin n generaiile de segregare F2-F5, la o parte din descendeni, depirea expresiei maximale i minimale a unui caracter, fa de gradul de manifestare a acestui caracter la genitori. Prin ncruciarea unor iepuri, cu blan de culoare nchis (M1M1M2M2M3M3m4m4), cu iepuri cu blan de culoare deschis (m1m1m2m2m3m3M4M4), n prima generaie s-au obinut indivizi heterozigoi cu blan de culoare intermediar (M1m1M2m2M3m3M4m4). Din descendena acestora, pe lng indivizi cu diferite nuane ale blnii, apar i iepuri cu blan alb (m1m1m2m2m3m3m4m4), transgresiune negativ (nglobeaz toate genele recesive), precum i iepuri cu blan de culoare neagr (M1M1M2M2M3M3M4M4), transgresiune pozitiv (nglobeaz toate genele dominante). Formele transgresive pozitive pot fi utilizate ca genitori valoroi, n procesul de ameliorare.

27

Excepiile de la tipurile de segregare mendelian prezentate, sunt n fond aparente, deoarece mecanismul separrii factorilor ereditari i al formrii combinaiilor rmne de tip mendelian. Exist ns i abateri reale de la proporiile respective, avnd o alt surs, cum ar fi segregarea preferenial a cromozomilor, nesepararea cromozomilor omologi n meioz, formarea nerandomizat a zigoilor la fecundare. Astfel, repartiia ntmpltoare n meioz a cromozomilor omologi la celulele fiice i formarea gameilor cu cromozomi omologi i gene alele n raport de 1:1 sunt uneori deranjate, producndu-se segregarea preferenial a unor cromozomi. n consecin, n macrosporogenez, la plante, se ntmpl ca un cromozom s se localizeze de preferin n oosfer, iar omologul lui n unul din ceilali nuclei ai sacului embrionar, neparticipnd astfel la formarea zigotului. Aberaii similare pot s apar i la formarea spermaiilor i a polenului i ele afecteaz proporiile n care apar grupele de fenotipuri n descenden. Nondisjuncia cromozomilor n meioz are ca efect la prima diviziune apariia unei celule haploide cu un cromozom suplimentar i a celeilalte celule haploide cu un cromozom n minus celulele sexuale care iau natere vor produce astfel n procesul fecundrii zigoi cu 2n+1 i 2n-1 cromozomi, deci cu alte caractere i cu alt repartiie la descendeni dect n cazul normal. Formarea nerandomizat a zigoilor, adic unirea gameilor n procesul fecundrii nu n mod ntmpltor, dup cum se realizeaz de obicei, ci dup anumite preferine condiionate genetic, cum ar fi viabilitatea inegal a celulelor sexuale mascule sau capacitatea de formare i maturizarea inegal a stigmatului. Fecundarea nerandomizat duce, de asemenea, la modificarea raporturilor de segregare mendelian. 2.4. Ereditatea caracterelor calitative i cantitative nsuirile organismelor sunt de o mare diversitate. Ele se pot totui grupa n dou categorii importante: caractere calitative i caractere cantitative. Caracterele calitative sunt trsturi ale unui organism care-l fac s se deosebeasc categoric de un alt organism. Diferenele calitative mpart indivizii n tipuri distincte, fr legturi prin intermediari. Cele mai tipice prezint stri alternative ca : prezena aristelor la gru - lipsa lor, prezenalipsa coarnelor la animale, prezena - lipsa pigmentului, pigment de o culoare - pigment de alt culoare.

28

n aceast categorie se nscriu i trsturile definitorii la arbori, forma, structura anatomic, nsuirile metabolice caracteristice la frunze, flori, fructe, tulpin .a. Caracterele calitative au un grad ridicat de stabilitate i sunt prea puin influenate de factorii de mediu, care nu pot determina dect mici variaii de expresie, structur sau comportament, niciodat fundamentale. La om, un exemplu concludent l ofer grupele sangvine, care depind n exclusivitate de fondul genetic. n analizele genetice, MENDEL, ca i ali cercettori, au exprimat n cercetrile lor, ndeosebi, caractere calitative. Ele sunt determinate adesea de una sau dou perechi de gene (gene majore), iar efectul fluctuaiilor mediului nconjurtor asupra lor, poate fi imperceptibil dup cum s-a mai amintit. Din aceste considerente, n urma ncrucirilor apar fenotipuri distincte, bine conturate, cu dominan complet sau incomplet (gene semidominante), ceea ce determin o variabilitate discontinu. Caracterele cantitative se caracterizeaz prin urmtoarele: se apreciaz cantitativ prin msurare, cntrire, numrare, cronometrare etc., de aceea se mai numesc i caractere metrice; sunt determinate, adesea, de mai multe gene i nu pot fi separate uor i categoric pe clase de fenotipuri. Sunt puternic influenate de condiiile de mediu i prezint o variabilitate continu, adic fenotipuri cu valori cuprinse ntre cele mai mici i cele mai mari valori, ca un ir continuu de fenotipuri. Variabilitatea unor asemenea caractere se studiaz cu ajutorul biometriei. 2.4.1. Caracteristicile ereditii caracterelor cantitative Un exemplu privind ereditatea mendelian a caracterelor cantitave i punerea n eviden a principalelor sale caracteristici o reprezint cercetrile lui EAST (1916) la Nicotiana longiflora. ncrucind ntre ele dou varieti de Nicotiana, una cu corola de 40 mm lungime (P 1), iar cealalt cu corola de 93 mm (P2), caractere foarte constante, EAST a obinut n F 1 i F2 plante cu lungime intermediar, cu deosebirea c variabilitatea hibrizilor F 2 a fost dubl fa de cea a hibrizilor din F1 (fig. 2.15).

Fig. 2.15. Variaia lungimii corolei la dou varieti deNicotiana longiflora i la hibrizii din diferite generaii obinui din ncruciarea acestora

29

Autofecundnd plante din F2, deosebite n ceea ce privete lungimea corolei, s-au obinut n F3 familii care n medie au avut aceeai lungime a corolei ca i formele parentale din F2. Mai mult, prin selecia divergent a plantelor din F2 i F3 s-au obinut familii care au avut valori foarte apropiate de valorile tipice prinilor iniiali (P1 i P2). Aplicnd selecia n F4 i F5 s-a reuit s se deplaseze media formelor extreme i mai mult ctre cea a varietilor parentale (P 1 i P2). Rezultatele obinute l-au fcut pe EAST s emit urmtoarele postulate: - ncruciarea ntre varieti homozigote va da n F1 populaii avnd aceiai uniformitate ca cea a formelor parentale; - variabilitatea populaiilor din F2, va fi mai mare dect a populaiilor din F1 ; - n cazul cnd populaiile din F2 sunt suficient de mari, pot fi ntlnii indivizi cu valori egale cu ale formelor parentale ; - n unele cazuri unii indivizi din generaia F 2 pot chiar depi tipurile parentale, apar deci transgresiuni ; - indivizii situai n diferite puncte ale curbei de frecven a populaiilor F2, vor da n F3 i n generaiile urmtoare familii care se vor deosebi marcant ntre ele. Rezultatele obinute de EAST n urma hibridrii celor dou varieti de Nicotiana i postulatele stabilite au dus la concluzia c genele joac un rol foarte important n ereditatea caracterelor cantitative. NILSSON-EHLE (1909) cercetnd ereditatea culorii la boabele de gru a stabilit c aceasta este determinat de trei perechi de gene i anume: R1r1, R2r2, R3r3 din care genele dominante R1, R2 i R3 condiioneaz culoarea roie, iar genele recesive r1, r2 i r3 culoarea alb. Fiecare din cele 3 perechi de gene segreg independent conform legii segregrii independente a perechilor de caractere a lui MENDEL. Astfel, n urma autofecundrii indivizilor R1r1 se obin plante cu boabe roii i cu boabe albe n raport de 3 roii (R1-) : 1 alb (r1r1). n cazul segregrii a dou perechi de gene (R 1r1, R2r2) raportul dintre cele dou categorii de plante este de 15 roii : 1 alb, iar n cazul segregrii a trei perechi de gene (R1r1, R2r2, R3r3) raportul de segregare este de 63 roii : 1 alb. Interpretnd rezultatele, NILSSON-EHLE a elaborat teoria genelor polimere potrivit creia exist factori ereditari cu aciune foarte asemntoare, care i nsumeaz efectele, determinnd formarea aceluiai caracter cantitativ. Cu ct numrul factorilor crete, cu att caracterul controlat devine mai expresiv. Astfel de gene cu aciune individual redus care particip la formarea aceluiai caracter au fost numite gene polimere (gene multiple, factori multipli). Fiecare gen n parte urmeaz ereditatea de tip mendelian 30

ntocmai ca genele cu efect calitativ. Cnd genele respective se asociaz produc, n urma adiiei efectelor, o variaie cantitativ continu. La arbori, un exemplu ipotetic de determinism polimeric poate fi dat la molid, n ceea ce privete forma solzilor conurilor. Molidul carpatic (Picea abiens var. montana) prezint conuri cu solzi acuminai (ascuii), n timp ce molidul de origine austriac ( P. abiens var. europaea) are conuri cu solzi rotunjii la vrf. Este posibil ca formarea solzilor s fie codificat de dou perechi de gene alele A 1a1 i A2a2 care, prin ncruciri, n F2 s dea combinaii genotipice de 9 i clase fenotipice n numr de 5 (fig. 2.16 ). Reiese din analiza datelor din tabel c n funcie de cota de participare a alelelor A1a1 i A2a2, vrfurile solzilor variaz de la puternic acuminai n genotipul A1A1A2A2, la evident rotunjit n genotipul a1a1a2a2. n acest caz, ns, nu numai genele A1 i A2 ar fi active ci i alelele a1 i a2 care codific forma rotunjit a conurilor, fr ns ca ntre aceste gene s apar relaii de dominan i recesivitate.

Fig. 2.16. Ereditatea formei solzilor la conurile de molid - ipotez

Teoria genelor polimere a lui NILSSON-EHLE a fost confirmat prin cercetrile lui EMERSON i EAST (1913) la porumb, DEVENPORT la om, SHULL (1914) la traista ciobanului i EAST (1916) la tutun. 31

Ereditatea caracterelor cantitative a fost fundamentat sub aspect tiinific de ctre MATHER (1949, 1953). Potrivit concepiei sale transmiterea caracterelor se efectueaz prin dou categorii de gene : poligenele minore i obligogenele sau genele majore. Primele controleaz caracterele cantitative iar ultimele caracterele calitative. Poligenele sunt gene cu efect slab, de unde i numele de gene minore. Pe msur ce se acumuleaz ele exercit o aciune puternic n procesul de formare a caracterelor, fiind echivalent cu genele polimere.

CAPITOLUL III Bazele citologice ale ereditii

3. Organizarea celular a matariei vii Celula, ca form superioar de organizare a materiei vii, este unitatea morfologic i funcional de constituire a tuturor organismelor vii, cu excepia virusurilor. Celula posed metabolism individual, ciclu de via i energie proprie, fiind capabil de cretere i autoreproducere independent. n raport cu complexitatea structural a celulei i mai ales a nucleului, organismele vii aparin la dou tipuri de organizri: tipul procariot i tipul eucariot. 3.1. Organizarea celular la eucariote Organizarea eucariot, mai complex, este caracteristic algelor verzi, brune i roii, ciuperci, muchi, ferigi, gimnosperme i angiosperme, i organismelor animale. n linii mari, o celul eucariot este alctuit din membran, citoplasm i nucleu (fig. 3.1.) Membrana celular (plasmalema) la plante este protejat, de regul, de un perete celular de natur pectic-celulozic, avnd rol de schelet. La animale, plasmalema reprezint un strat superficial de condensare plasmatic, peretele celular lipsind.

32

Fig. 3.1. Organizarea celular la eucariote

Citoplasma, nalt difereniat structural i funcional, este alctuit din : a) citosolul (hialoplasma), reprezint mediul n care sunt incluse celelalte componente putnd s existe n stare de gel, sau de sol. b) sistemul de membrane sau reticolul endoplasmetic , poate fi neted (alfa), sau rugos (beta). Cel neted este reprezentat printr-o reea de tubuoare i vezicole la nivelul crora se sintetizeaz n principal hormoni. Sistemul endoplasmatic rugos are pe suprafaa sa formaiuni granulare ribozomale, constituind ergastoplasma, activ n sinteza proteinelor de secreie. Organitele celulare sunt formaiuni intracelulare, unele prezente n toate celulele (mitocondriile, aparatul Golgi, lizozomii, ribozomii), altele prezente numai n celulele vegetale (plastidele), cu rol n procesele metabolice specifice. a) Ribozomii sau granulele lui Palade sunt constituite din ARNribozomal i proteine, cu rol important n sinteza proteic. Au o structur constant, sub form sferic sau elipsoidal. Ribozomii pot exista n citoplasm, sau ataai de reticolul endoplasmatic. Ei se pot cupla cu ARN-m n procesul de biosintez formnd polizomii. b) Mitocondriile sunt structuri mici, independente, considerate centrele energetice ale celulei. La nivelul lor a fost pus n eviden ADN, cu rol n ereditatea extracelular. ADN-ul mitocondrial este 33

dublu eliciodal circular i reprezint mai puin de 1% din ADN-ul celular. Mitocondriile sunt capabile de autoreplicare, de cretere, de stocare i transmitere a informaiei genetice specifice, comportnduse ca nite organite semiautonome, cu continuitate citologic i genetic. c) Plastidele sunt organite citoplasmatice proprii celulei vegetale, cu rol esenial n procesul de sintez i stocare a substanelor organice. Conin toate elementele unui sistem genetic (ADN i ARN), avnd astfel rol ereditar. d) Aparatul Golgi este o reea perinuclear, alctuit din formaiuni numite dictiozomi, cu rol n procesul de maturare proteic, n transportul i depozitarea substanelor elaborate. e) Centrozomul, depistat n celula animal i vegetal, este format din doi centrioli i centrosferi i are rol n formarea fusului de diviziune. Fiind purttor de ADN, are rol ereditar. f) Lizozomii sunt corpusculi de form ovoid, ce conin enzime digestive fiind responsabili de digestia intracelular. Beneficiaz de enzime hidrolitice (proteoz, ribonucleoz, fosfataz .a.) i sunt specifice celulei animale. Formaiuni cu funcii asemntoare au fost semnalate i la plante (peroxizomi, sferozomi i glioxizomi). Nucleul sau carionul este partea cea mai reprezentativ a celulei sub aspect genetic, reprezentnd 1/4-1/3 din volumul total al celulei. Nucleul ca entitate morfologic, este alctuit din membran nuclear, cariolimf, nucleol, cromocentrul i cromatin (cromozomi). a) Membrana nuclear se evideniaz n interfaz. Este format din dou membrane lipoproteice, prevzute cu pori prin care se realizeaz schimburile dintre cariolimf i citoplasm. Membrana exterioar se racordeaz cu reticolul endoplasmatic, prin care realizeaz legtura ntre membrana nuclear i cea celular. Are rol important n organizarea i funcionarea cromozomilor, precum i n procesul de replicare i transcriere de ADN. b) Cariolimfa, nucleoplasma sau matrixul nuclear, este mediul n care sunt incluse formaiunile nucleare, putnd exista n stare de gel sau sol. c) Nucleolul, este prezent n nucleu ca un corp sferic, vizibil n interfaz i profaz ataat la unii cromozomi n zona strangulaiei secundare. Numrul nucleolilor este caracteristic fiecrei specii. d) Cromatina reprezint starea n care se gsete materialul cromozomal n interfaz sub forma fibrei elementare de

34

cromatin. Prin condensarea fibrei elementare de cromatin, n cursul diviziunii celulare se pot evidenia cromozomii. 3.1.1. Cromozomii la organismele eucariote Principalii purttori ai informaiei genetice la eucariote sunt cromozomii prezeni n nucleul celular. Acetia sunt constituii din cromatin, ce conin aproximativ 60% proteine, 35% acid dezoxiribonucleic (ADN) i 5% acid ribonucleic (ARN). Dup funciile lor, cromozomii sunt de dou tipuri: autozomi, ce se regsesc n celulele somatice i variaz ca numr de la o specie la alta i heterozomi, sau cromozomi ai sexului. Celulele somatice conin dou seturi de autozomi i doi heterozomi XX sau XY, iar celulele sexuale conin un set de autozomi i un heterozom. 3.1.1.1. Morfologia cromozomului la eucariote Sub aspect morfologic, cromozomul eucariot prezint urmtoarele formaiuni: cromatidele surori, centromerul, constricia secundar, telomerii, satelitul i knobul. Cromatidele surori sunt dou uniti structurale identice genetic, unite la nivelul centromerului. Centromerul (strangulaia sau constricia primar) este zona cu care cromozomul se fixeaz de fibrele fusului de diviziune celular. El mparte cromozomul n dou brae scurt, sau proximal (p) i braul lung, sau distal (q) (fig. 3.2). n raport cu poziia centromerului, distingem urmtoarele tipuri morfologice de cromozomi: - telocentrici, cu poziia centromerului terminal; - acrocentrici, poziia centromerului fiind subterminal ; - submetacentrici, cu poziia centromerului submedian ; - metacentrici, poziia centromerului fiind median. Strangulaia sau constricia secundar este asemntoare centromerului, ns la nivelul ei cromatidele nu se unesc. Zona se mai numete i organizator nucleolar, la acest nivel fiind ataat de obicei nucleolul. Telomerii sunt formaiuni terminale ale cromozomilor ce le confer stabilitate. n lipsa acestora apar restructurri cromozomale i modificarea morfologic. Satelitul sau trabantul este o formaiune facultativ, separat de restul cromozomului prin strangulaia secundar. De regul este dispus pe braul proximal (scurt) al cromozomului.

35

Knobul este o formaiune terminal sau subterminal heterocromatic, dispus pe anumii cromozomi, cu valoare de marker citologic (fig. 3.3.).

Fig. 3.2. Morfologia general a cromozomului

Fig. 3.3. Morfologia cromozomului eucariot

36

3.1.1.2. Structura cromozomului eucariot Elementul structural de baz al cromozomului este nucleosomul. La microscopul electronic, nucleosomii apar ca un irag de perle, fiecare fiind alctuit dintr-un miez histonic pe care se nfoar dou spire de ADN. ntre doi nucleosomi exist elemente de legtur constituite din segmente scurte de ADN asociate cu o component histonic H1 (fig. 3.4). Succesiunea mai multor nucleosomi determin formarea fibrei simple de cromatin, care la rndul ei se spiraleaz sub form de selenoid i formeaz fibra elementar de cromatin, care constituie elementul de baz a cromozomului. n interfaz cromozomii se gsesc sub aceast form elementar de cromatin.

Fig. 3.4. Formarea fibrei simple i a fibrei elementare de cromatin

37

3.1.1.2. Compoziia chimic a cromozomului eucariot Cromozomii sunt alctuii din cromatin, substan fundamental ce conine acizi nucleici i proteine, lipide i poliglucide, ioni de calciu i magneziu. ADN-ul nuclear reprezint aproximativ 95% din totalitatea ADN-ului celular, i rspunde de stocarea informaiei genetice i continuitatea ei de la o generaie la alta. Cantitatea constant de ADN din fiecare cromozom este supus unei variaiuni ciclice, determinat de separarea cromatidelor n cadrul ciclului celular. ADN-ul din care este constituit cromatina poate fi de dou feluri : ADN cu coresponden de codare i fr corespondent de codare. - ADN-ul cu coresponden de codare este activ n procesul de transcripie, putnd fi de dou feluri : a) ADN nerepetitiv (unic) care conine gene active n procesul de sintez a proteinelor celulare, ce poart mesajul genetic necesar transcrierii ARN-m ; b) ADN repetitiv, corespunde genelor ce poart mesajul genetic transcrierii ARN-r, ARN-t i ARN-m necesar biosintezei histomelor. - AND-ul fr coresponden de codare , inactiv n procesul de transcripie este nalt repetitiv, fiind sub dou forme: a) ADN spaiator, dispus ntre secvenele unice; b) AND satelit cu localizare telomeric, sau n vecintatea centromerului i a satelitului. ARN-ul cromozomal se gsete n cantitate diferit n celulele diferitelor organe, reprezentnd cca. 10% comparativ cu ADN. Proteinele se prezint sub forma de nucleoproteine i sunt: histon i nonhiston. Histonele sau proteinele bazice sunt omogene, cu rol de reglare nespecific al activitii genelor i rol structural. Nonhistonele sunt foarte heterogene, cu rol enzimatic, structural i reglator specific a activitii genelor. 3.1.1.3. Caracteristicile cariotipului la eucariote Alturi de elementele morfologice, caracteristicile cromozomilor sunt exprimate prin numrul, forma i mrimea acestora. Numrul, forma i mrimea cromozomilor dintr-o celul somatic constituie cariotipul unui individ sau a unei specii. Acesta reprezint un criteriu de identificare a speciilor. Numrul cromozomilor oscileaz de la o specie la alta i este relativ stabil pentru indivizii aparinnd unei entiti taxonomice. n celulele 38

somatice cromozomii sunt dispui n perechi, unul de origine matern i unul de origine patern (cromozomi omologi), avnd aceiai form, aceiai mrime i aceiai valoare genetic, alctuind garnitura diploid, notat cu 2 n. n celulele sexuale, sau gamei, exist un singur set de cromozomi, adic cte un cromozom din fiecare pereche, numrul lor fiind redus la jumtate. Aceasta este starea haploid i se noteaz cu n. La monocotiledonate numrul de cromozomi este cuprins ntre 2n=4 i 2n=300, iar la dicotiledonate ntre 2n=6 i 2n=226 (DARLINGTON i WHYLIE, 1995). La arbori n celulele somatice numrul cromozomilor (2n) este cuprins ntre 12 i 14 (la genurile Cercis, alnus, Laurus .a. i 62-82 la genurile Ailanthus, Tilia etc. majoritatea speciilor forestiere de interes, de la noi molidul, bradul, laricele, pinul, fagul, stejarul, castanul .a. au 24 de cromozomi. Forma cromozomilor se stabilete n metafaza diviziunii mitotice, cnd cromozomii ating maximum de contracie, n funcie de poziia centromerului. n anafaz, ca urmare a ndoirii braelor cromozomale la nivelul centromerului, pot s apar configuraii n forma literei V, L sau I. Mrimea cromozomilor difer de la o specie la alta. Lungimea lor variaz ntre 2 i 220 microni, iar grosimea ntre 0,2 i 2 microni. Datorit caracteristicilor morfologice, fiecare cromozom poate fi identificat n celulele indivizilor. Cu toate modificrile care apar pe parcursul diviziunilor celulare, cromozomii apar n acelai numr, cu aceiai form i mrime, ceea ce permite individualizarea i recunoaterea lor n cadrul complexului cromozomal. 3.2. Reproducerea celular Substratul material al ereditii se caracterizeaz prin continuitate. Aceast proprietate se realizeaz la nivel celular i se asigur prin reproducerea sa cu fidelitate, transmindu-se odat cu diviziunea, de la o celul la alta i n procesul reproducerii, de la o generaie la alta. 3.2.1. Ciclul celular mitotic i semnificaia sa genetic Ciclul celular mitotic se desfoar n celulele somatice i poate fi definit ca fiind diviziunea celular n urma creia plecnd de la o celul mam cu un anumit numr de cromozomi, rezult dou celule fiice cu acelai numr de cromozomi ca i celula mam, identice genetic ntre ele, identice i cu celula mam de la care provine. n cadrul ciclului mitotic se disting dou etape : diviziunea nucleului sau cariochineza i diviziunea citoplasmei sau citochineza (fig. 3.5.) 39

Fig. 3.4. Ciclul celular mitotic: 1,2,3-profaza; 4-metafaza; 5 nceputul i 6-sfritul anafazei, 7,8-telofaza; 9-citochineza; c.p.-calote polare; m.n.-membran nuclear; z.c.-zona clar; chr-cromocentre; ph-fragmoplast; p.c.-plac celular

Chariochineza. Procesele prin care trece materialul genetic din nucleu n cariochinez se regsete n interfaz i mitoza propriu-zis. Interfaza sau interchineza, este faza dintre dou mitoze succesive. La microscop se observ nucleul conturat de membrana nuclear, cromozomii fiind prezeni sub forma fibrei elementare de cromatin i nu pot fi individualizai. n cadrul nucleului pot fi vzui unul sau mai muli nucleoli.

40

n funcie de momentul sintezei ADN-ului, interfaza se mparte n trei etape : G1, S i G2. Faza G1 sau prereplicativ se caracterizeaz prin sinteza proteinelor i a ARN-ului. Cromozomii sunt monocromatidici. Faza S (de sintez sau replicativ) este caracterizat de sinteza ADNului, concomitent cu a proteinelor histonice, astfel c fiecare cromozom devine bicromatidic, cele dou cromatide surori fiind identice. Faza G2 (postreplicativ) este perioada de postsintez n care are loc maturarea nucleului i pregtirea sa pentru diviziunea propriu-zis. Mitoza sau mitoza propriu-zis, cuprinde patru faze : profaza, metafaza, anafaza i telofaza. Profaza este marcat de apariia n cadrul nucleului a cromozomilor sub forma unor fibre subiri i lungi. n profaz dispar nucleoli, se dezorganizeaz membrana nuclear i se constituie fusul de diviziune. Metafaza. Cromozomii ajuni la condensarea maxim se ataeaz cu ajutorul centromerului de fibrele fusului de diviziune i se aliniaz la centrul celular formnd placa metafazic sau ecuatorial. n metafaz se pot determina numrul, forma i mrimea cromozomilor, elemente ce definesc cariotipul unei specii. Anafaza se caracterizeaz prin clivarea longitudinal a cromozomilor, dup ce n prealabil s-a produs clivarea centromerilor. Cromozomii monocromatici se deplaseaz cu centromerul nainte, spre polii celulei. n anafaz se asigur repartizarea aceleai informaii genetice la celulele fiice, avnd n vedere c cele dou cromatide surori sunt identice. Telofaza este un proces invers profazei. n cursul telofazei fibrele fusului de diviziune dispar, iar cromozomii monocromatici ajuni la cei doi poli se despiraleaz, se subiaz i iau aspectul unui ghem (spirem). Are loc procesul de reconstituire a membranei nucleare i a nucleotidelor. Citochineza. n esuturile somatice, n condiii normale, cariochineza este urmat de diviziunea citoplasmei. n celula vegetal, cu perete celular rigid, diviziunea citoplasmatic are loc la apariia la centrul celulei a unui corpuscul plasmatic denumit fragmoplast, de forma unui inel care treptat i umple lumenul cu substane celulozo-pectice, care se transform n perete celular. La animale citochineza const n apariia unei strangulaii n zona ecuatorial a celulei, care asigur separarea celulelor fiice.

41

Distribuia tuturor componentelor protoplasmatice este foarte precis i exact, realizat sub control genetic, fapt ce determin formarea a dou celule fiice cu aceiai alctuire structural i constituie genetic. Semnificaia esenial a diviziunii celulare mitotice const n aceea c ea asigur continuitatea genetic de-a lungul generaiilor celulare succesive. Ciclul celular, prin sporirea numrului de celule i procesele de biosintez ce le implic, asigur creterea organismului, asigurndu-se continuitatea genetic n ontogenez, de la o celul la alta, prin copierea mesajului genetic n interfaz i repartizarea acestui mesaj n condiii riguros exacte celulelor fiice prin mecanismul mitozei, n anafaz. n consecin, n privina informaiei genetice nucleare, toate celulele sunt identice. Prin desfurarea mitozei se asigur constana numeric morfologic i structural a cromozomilor. 3.2.2. Ciclul celular meiotic i semnificaia sa genetic Ciclul celular meiotic, sau diviziunea meiotic este un tip particular de diviziune celular, caracteristic organismelor ce se nmulesc pe cale sexuat i n urma cruia dintr-o celul somatic cu 2 n cromozomi se formeaz 4 celule fiice cu n cromozomi, diferite genetic ntre ele, diferite i de celula mam de la care provin. Diviziunea meiotic se desfoar n celule germinale, localizate n organele de reproducere i implic dou diviziuni succesive, meioza I i meioza II, interfaza fiind prezent o singur dat, la nceputul ciclului celular, avnd ca finalitate formarea gameilor (fig. 3.6.) Meioza I (primar sau reducional). n aceast faz are loc reducerea la jumtate a numrului de cromozomi i fenomenul de recombinare genetic. Diviziunea meiotic are aceleai faze ca i cea mitotic, att pentru metafaza I i II, ns profaza este mai complex. Profaza I-a. n aceast faz cromozomii parcurg o serie de procese ce se realizeaz n urmtoarele subfaze: leptonem, zigonem, pachinem, diplonem i diachinez. n leptonem nucleul se mrete n volum, cromozomii apar sub forma unor filamente subiri, n lungul crora ncep s se contureze cromozomii. n zigonem cromozomii omologi, unul de provenien matern i altul de provenien patern, se altur i se unesc doi cte doi, formnd cromozomi bivaleni. Fenomenul de conjugare a cromozomilor se numete sinaps. mperecherea cromozomilor omologi este controlat genetic, realiazndu-se strict gen alel la gen alel i se caracterizeaz prin formarea complexului sinaptomenal, care permite realizarea recombinrii genetice prin crossing-over. 42

Pachinemul, se caracterizeaz prin condensarea cromozomilor, legatura dintre ei devine din ce n ce mai intim, devenind posibile fenomenele de recombinare prin crossing-over. Diplomenul se caracterizeaz prin faptul c la fiecare bivalent se pot observa 4 cromatide, datorit tendinei omologilor de a se separa, rmnnd unii ns la nivelul chiasmelor. Aceast configuraie poart denumirea de tetrad cromatidic. Diachineza este reprezentat de condensarea i scurtarea puternic a cromozomilor. Spaiile dintre chiasme se mresc, chiasmele fiind deplasate spre extremitile cromozomilor, fenomen denumit terminalizare. La sfritul profazei I nucleolul i membrana nuclear dispar, formndu-se fusul nuclear, pe care se ataeaz configuraiile cromozomale bivalente. Metafaza I. Cromozomii bivaleni se aeaz pe fibrele fusului de diviziune, orientai cu centromerii spre polii opui, formnd placa ecuatorial. n metafaz sunt vizibile inc chiasmele care leag cromozomii fiecrei perechi. Anafaza I. Legtura dintre cromozomii omologi se diminueaz, bivalenii se separ n cromozomi bicromatici, ce migreaz spre polii celulei. n anafaza I are loc reducerea numrului de cromozomi i recombinarea genetic intracromozomial, datorit segregrii libere a perechilor de cromozomi. Telofaza I. Cromozomii, n numr haploid, se grupeaz n cei doi nuclei, se formeaz membrana nuclear, se reorganizeaz nucleolii i apar dou celule haploide (o diad). Cu aceasta se ncheie prima diviziune meiotic. Nucleii nou formai intr ntr-un stadiu numit interchinez. n urma meiozei I, uneori citoplasma se divide, alteori nu. n acest ultim caz rezult celule binucleate, numite diade. Meioza II (mitoz haploid) este asemntoare unei mitoze. Ea se petrece n celule cu numr haploid de cromozomi. Profaza II. n nucleul normal constituit, cromozomii se condenseaz i se individualizeaz. La sfritul profazei II are loc dezintegrarea membranei nucleare i formarea fusului de diviziune. Metafaza II. Cromozomii se deplaseaz spre centrul celulei, unde se fixeaz cu centromerul de fusul de diviziune, formnd placa metafazic (ecuatorial). Aspectul cromozomilor este de forma literei X, configuraie determinat de prezena unui singur centromer pentru cele dou cromatide, iar braele lor se resping. Centromerul fiecrui cromozom, care a inut unite cromatidele surori, se dubleaz structural i funcional. 43

Anafaza II. Are loc separarea centromerilor i a cromozomilor n cromatide, care devin cromozomi independeni ce migreaz spre poli. Telofaza II. Se formeaz patru nuclei cu numr haploid de cromozomi monocromatidici. Membrana nuclear se reface n jurul fiecrui grup de cromozomi haploizi i are loc apoi citokineza.

Fig. 3.6. Ciclul celular meiotic la Aloe thraskii 1-5-profaza heterotipic:1-leptoten, 2-zigoten, 3-pachitem, 4-diploten, 5-diachinez 6-metafaza heterotipic; 7- anafaza; 8-telofaza; 9-interchinez; 10-metafaza homeotipic; 11-anafaza; 12-teleofaza

Formaiunea format din patru celule haploide ce ia natere la sfritul meiozei II se numete tetrad celular. Astfel, dintr-o celul diploid cu 2n cromozomi, n urma celor dou diviziuni ale meiozei, rezult patru celule fiice haploide, cu n cromozomi. 44

Fiecare din cele patru celule formate, conin combinaii diferite de gene, asigurndu-se astfel variabilitatea genetic. * * * Ciclul celular mitotic este, de fapt, un ciclu nchis n sensul c celulele rezultate n urma meiozei nu mai reiau ciclul ntruct, la animale, acestea nu se mai divid urmnd a funciona ca i gamei n procesul de fecundare, iar la plante sufer un numr limitat de diviziuni mitotice haploide n procesul de formarea gameilor. Ciclul celular mitotic contribuie la realizarea a dou funcii biologice majore: diversitatea lumii vii prin asigurarea variabilitii genetice a gameilor i continuitatea genetic de la o generaie la alta n procesul de fecundare, asigurnd constana numrului de cromozomi a descendenelor. Variabilitatea genetic a gameilor se asigur n cadrul proceselor de recombinare intracromozomal prin crossing-over n profaza meiozei I i intercromozomal la nivelul setului haploid de cromozomi prin segregarea independent a perechilor de cromozomi omologi n anafaza meiozei I (fig. 3.7.).

Fig. 3.7. Reprezentarea schematic a consecinelor fenomenului de crossing-over: T = cromozom patern; M = cromozom matern

3.2.3. Ciclul de via i recombinarea genetic la plantele superioare; semnificaia biologic i genetic Prin ciclul de via se asigur continuitatea genetic de la o generaie la alta n filogenez i cuprinde alternarea unor generaii celulare haploide, n procesul de formare a gameilor (gametogeneza), cu a unor generaii celulare 45

diploide, datorit fecundrii. Gradul de reprezentare a celor dou generaii celulare, haploid i diploid, difer la plante i animale. La plante, gradul de reprezentare a nivelului haploid i diploid difer n raport de poziia ocupat pe scara evolutiv. n urma meiozei rezult celule haploide, care nu reprezint gamei ca i n cazul animalelor ci spori din care n urma mitozei haploide succesive va rezulta gametofitul (generaia haploid), formaiune ce va da natere gameilor. Gameii n urma procesului de fecundare vor da natere zigotului diploid i apoi prin diviziuni mitotice succesive se va forma sporofitul (generaia diploid), care n urma meiozei va produce din nou celule haploide (spori), ncheindu-se astfel ciclul de via. Diviziunea reducional (meioza), se produce att la animale, n spermatogenez i ovogenez, ct i la plante, n microsporogenez i macrosporogenez. n spermatogenez (meioza, la animale mascule), toate cele patru celule rezultate sunt de regul, funcionale, reprezentnd spermatozoizii. n ovogenez (meioza, la animale femele), doar una dintre cele patru celule este funcional ovulul gametul femel. Gametogeneza la plantele superioare cuprinde microgametogeneza, sau procesul de formare a gameilor masculi i mega sau macrosporogeneza, adic procesul de formare a gameilor femeli (fig. 3.8)

46

Fig. 3.8. Microsporogeneza (b) i megasporogeneza (a) (dup E.A. WHINCHESTER, 1961, modificat de A. MNTZIG, 1967)

n microsporogenez (meioza la plante, n cazul grunciorilor de polen) din fiecare celul haploid a tetradei se formeaz cte un gruncior de polen (fig. 3.8.). Acesta, n timpul germinrii, sufer dou diviziuni mitotice succesive, n urma crora rezult un nucleu generativ i unul vegetativ. Nucleul vegetativ se resoarbe, iar nucleul generativ haploid trece printr-o nou diviziune mitotic, dnd natere la doi nuclei spermatici, care reprezint gameii masculi. n macrosporogenez (meioz, n cazul gameilor femeli), numai una dintre cele patru celule ale tetradei este funcional, devenind sacul embrionar. Nucleul haploid al sacului embrionar parcurge trei diviziuni mitotoce succesive n urma crora rezult opt nuclei. Unul dintre aceti nuclei haploizi ai sacului embrionar devine nucleul oosferei (gametul femel la plante), doi se contopesc dnd nucleul secundar diploid al sacului embrionar, trei formeaz nucleii antipodelor i doi devin nucleii sinergidelor. n urma procesului de fecundare se realizeaz fuziunea celor dou celule sexuale, mascul i femel. Sub aspect genetic, semnificaia fecundrii este primordial, deoarece prilejuiete ntlnirea i regruparea cromozomilor omologi din gamei, unul de provenien matern, cellalt de provenien patern. Celula, dispune astfel de 2n cromozomi fiind diploid, fa de gameii care sunt haploizi cu n cromozomi. Unirea gameilor la fecundare se produce n mod ntmpltor, nedirijat, ceea ce constituie o surs primordial de variabilitate genetic. Astfel, n cazul combinrii a n gene, fiecare fiind reprezentat prin cte a alele, numrul de genotipuri (g) ce vor rezulta, sunt:
a (a +1) g = 2
n

Din exemplul dat, dac se iau n calcul numai 10 gene, fiecare cu cte 2, 3 sau 4 alele, numrul de combinaii este de 310, respectiv 610 i 1010 etc. n cazul plantelor superioare, Angiosperme, se produce dubla fecundare, din contopirea oosferei cu gametul mascul, rezultnd oul sau zigotul, iar din unirea nucleului secundar cu al doilea gamet se formeaz zigotul accesoriu (fig. 3.9.). 47

Dac zigotul este diploid, zigotul accesoriu are trei seturi de cromozomi, fiind tetraploid, deoarece rezult din fuziunea nucleului secundar diploid cu gametul mascul haploid. Faptul c n setul triploid (3n) cromozomi, un numr de 2n cromozomi provin de la printele matern i numai n cromozomi de la cel patern are consecine n producerea unor fenomene genetice, de tipul ereditii citoplasmatice.

Fig. 3.9. Fazele fecundrii la Angiosperme

Din zigot, prin diviziuni celulare succesive mitotice, ia natere embrionul, iar din zigotul accesoriu, se formeaz endospermul secundar i albumenul. n cazul Gymnospermelor fecundarea este simpl, un singur gamet contopindu-se cu oosfera (fig. 3.10.)

48

Fig. 3.10. Fecundarea la Pinus

Endospermul primar al gimnospermelor, dei ndeplinete aceleai funciuni ca i la angiosperme, are origine diferit, lund natere dintr-o celul a nucelei aflat n apropierea micropilului i fiind haploid ( n cromozomi). n esen, diferenierea timpurie a esuturilor embrionului, ca i diferenierea postembrionar care urmeaz, att la angiosperme ct i la gimnosperme, are ca surs primordial informaia genetic din structurile ADN ale celulei-ou n care sunt memorizate de la nceput toate caracterele organismului.

CAPITOLUL IV
Teoria cromozomal a ereditii
4. Noiuni introductive Pentru genetic, studiul celulei i a diviziunii celulare prezint o mare importan deoarece face posibil identificarea materialului genetic, a mecanismului prin care genele se transmit de la celula mam la celulele fiice, de la ascendeni la descendeni, a modului cum se realizeaz recombinarea genetic i cum se produc mutaiile la nivel genetic, precum i restructurrile la nivelul cromozomilor. Teoria celular elaborat de SCHLEIDEN i SCHWANN (1838) i completat de WIRCHOW (1855), au demonstrat c organismele au o alctuire celular sau pluricelular i c celulele provin exclusiv din alte celule. Dup elaborarea teroriei celulare, studiul celulei a luat un avnt deosebit spre sfritul secolului al 19-lea i nceputul secolului al 20-lea, permindu-i lui MORGAN s sintetizeze cunotinele acumulate ntr-o teorie cromozomial a ereditii, completat i cu rezultatele experimentale proprii. Legile ereditii elaborate de MORGAN, explic transmiterea ereditar a caracterelor determinate de gene plasate pe perechi diferite de cromozomi. 49

Teoria cromozomial a ereditii are patru principii de baz: plasarea liniar a genelor pe cromozomi; fenomenul de linkage, sau transmiterea genelor plasate pe aceeai pereche de cromozomi; fenomenul de crossing-over sau schimbul reciproc de gene ntre cromozomii pereche; numrul limitat a grupelor de nlnuire a genelor. Cercetrile lui MORGAN i colaboratorii si, au fost efectuate n special asupra musculiei de oet (Drosophila melanogaster). Aceasta se nmulete foarte repede, o generaie putnd fi obinut, la o temperatur de 20C n numai 12 zile. Acest lucru, a permis ca pe parcursul unui an s se poat studia un numr mare de generaii succesive. Fiecare femel produce cteva sute de descendeni. Numrul de cromozomi somatici la D. melanogaster este mic (2n=8), putnd fi uor identificai la microscop, datorit deosebirilor lor morfologice. Studiind cteva sute de mii de indivizi timp de mai muli ani, T.H. MORGAN i colab. au reuit s identifice peste 500 de mutaii care afectau toate organele insectei. Aceste mutaii au servit ca material de studiu transmiterii ereditare a caracterelor la descendeni i respectiv a mecanismului cromozomial al ereditii. Prin ncruciarea mutantelor ntre ele sau cu tipul normal, denumit i slbatic s-a studiat modul de transmitere ereditar a diferitelor gene n cursul generaiilor succesive. Aceste rezultate corelate cu cercetrile citologice ale materialului respectiv, au dus la elaborarea principiilor menionate la nceputul capitolului. 4.1. Plasarea liniar a genelor pe cromozomi Prima tez a teoriei cromozomiale a ereditii consider c factorii ereditari (genele) sunt plasai pe cromozom n anumite poziii precise, denumite loci (locus). De obicei, genele se prezint sub form de perechi alele ce determin dezvoltarea unor caractere contrastante, din care una este dominant i cealalt recesiv. T.H. MORGAN a constat c genele pot suferi mutaii transformnduse n gene alele. Prin mutaie, gena dominant A ce determin tipul normal (slbatic) se poate transforma n gena alel recesiv a. Ca urmare, genele se gsesc de regul sub form de pereche (alele). Genele se noteaz cu primele 1-4 litere ce desemneaz prescurtat caracterul afectat de gena respectiv (n limba englez sau latin). De exemplu, gena mutant recesiv ce determin ochi de culoare alb la musculia de oet se noteaz cu w (de la engl. white = alb), iar gena alel ce determin tipul normal cu ochi roii, cu aceeai liter avnd indicele + (w+). Gena ce determin corpul de culoare galben se 50

noteaz cu y (de la engl. yellow = galben), iar alela sa ce determin corpul normal gri, cu y+. Din cele de mai sus se confirm ideea c genele alele sunt situate n aceiai pereche de cromozomi, n loci omologi, i influeneaz aceiai nsuire a organismului, determinnd apariia unor caractere contrastante (tabelul 4.1).

Tabelul 4.1.

Caracterul 1 2 3 Culorae ochilor Culoarea corpului Forma aripilor

Genele alele w ochi de culoare roie w ochi de culoare alb y+ corp de culoare gri y corp de culoare galben vg+ aripi normale vg aripi vertigiale
+

ncrucind indivizi normali cu diverse mutante sau diferite mutante ntre ele, MORGAN constat c transmiterea multor caractere se abate de la cea de-a a doua lege a lui MENDEL. Admind c diferitele caractere ale organismului sunt determinate de genele plasate pe cromozomi, MORGAN i d seama c numrul genelor este mult mai mare dect numrul cromozomilor unui organism. De aici concluzia c mai multe gene sunt plasate n acelai cromozom, ntr-o succesiune liniar, n anumii loci. MORGAN, analiznd un mare numr de indivizi de D. melanogaster, femeli i masculi, insect ce are un numr de 8 cromozomi, constat c femelele au o pereche de cromozomi omologi (XX), iar masculii un cromozom X de form linear i un cromozom neomolog, Y de forma unui bastona frnt. Aadar, prezena cromozomilor XY determin sexul mascul, iar prezena perechii XX determin sexul femel. Aceti cromozomi au fost denumii cromozomi ai sexului, heterozomi sau gonozomi, spre deosebire de restul cromozomilor somatici, denumii autozomi. Aceast descoperire constituie un argument n favoarea ideii plasrii genelor pe cromozomi, ntruct s-a pus n eviden c o anumit structur cromozomic este corelat cu un caracter important, i anume sexul. 4.2. Fenomenul de nlnuire a genelor (linkage) Studiul celor peste 500 de mutante de D. melanogaster au dus la constatarea nu numai c genele trebuie s fie plasate n cromozomi, dar 51

innd seama de numrul mare al genelor i numrul redus al cromozomilor, mai multe gene trebuie s fie plasate n acelai cromozom. S-a ajuns la concluzia c pe fiecare cromozom exist un numr mare de gene i c ele se transmit mpreun, nlnuite la descendeni, manifestnd fenomenul de linkage. La Drosophila melanogaster experienele fcute de MORGAN au artat c transmiterea caracterelor nu se face conform tipurilor de segregare cunoscute, fapt consemnat nc din 1905 de BATESON i PUNETT. Cei doi, au constatat c prin ncruciarea a dou varieti de Latyrus odoratus, unul cu flori purpurii i grunciori de polen alungii, cellalt cu flori roii i grunciori de polen rotunzi, dac n prima generaie s-au obinut hibrizi cu flori purpurii i polen alungit, conform tezei dominanei al lui MENDEL, n generaia a doua (F2) s-au realizat raporturi de segregare diferite de cele mendeliene. Excedentul de flori purpurii i polen alungit, ca i de flori roii i polen rotund, care s-au nregistrat fa de raportul de segregare 9:3:3:1 a fost pus pe seama tendinei caracterelor respective de a se transmite mpreun, fenomen denumit de BATESON i PUNETT, cuplajul gameilor. La Drosophila, ncrucindu-se un individ mutant pentru dou caractere (corp negru i aripi vertigiale) cu un individ normal slbatic (corp cenuiu i aripi normale = caractere dominante), n F1 s-au obinut numai musculie cu fenotip slbatic corp gri i aripi normale (fig. 4.1.), din heterozigoi normali.

52

Fig. 4.1. Ereditatea la dou gene nlnuite la Drosophila

Acetia, masculii () se ncrucieaz cu indivizi dublu mutani homozigoi (femele ) realizndu-se aa numita retroncruciare sau backcross. n F3 reapar tipurile genitoare n raport de 1:1 datorit faptului c genele respective fiind plasate pe acelai cromozom, se transmit nlnuite (linkage). Constatnd c fenomenul se repet i n cazul altor mutante, MORGAN consider c faptul se datoreaz plasrii celor dou gene (corp gri i aripi normale) pe acelai cromozom i transmiterea lor se face nlnuit, fenomen pe care l-a numit linkage. Conform celei de a doua legi mendeliene, n F 2 trebuia s se realizeze o segregare independent a caracterelor i s apar urmtoarele tipuri de indivizi: (1) aripi normale i corp gri, (2) aripi normale i corp negru, (3) aripi vertigiale i corp gri i (4) aripi vertigiale i corp negru. n realitate, n urma ncrucirii respective, s-au obinut numai dou tipuri de indivizi - cu aripi normale, corp gri i cu aripi vertigiale i corp negru -, identici cu formele parentale. ntruct numrul genelor este mult mai mare dect numrul cromozomilor i implicit unele dintre gene fiind localizate pe acelai cromozom, este normal ca acestea s nu se supun legii liberei combinri a genelor, ci s aib tendina de a se transmite la descendeni mpreun, odat cu cromozomul respectiv. Genele ale cror locui sunt situai n cromozomi omologi i care au tendina de a se transmite mpreun, n bloc, la descendeni, aparin aceluiai grup de linkage. Numrul grupurilor de linkage este egal cu numrul haploid de cromozomi (n) din celul. Astfel, la Drosophila (2n=8) sunt patru grupe de linkage (n=4); la mazre (2n=14) 7 grupe de linkage; la porumb (2 n=20) 10 grupe. Extrapolnd, la principalele specii forestiere numrul grupelor de linkage ar fi: 12 la molid, pin, brad, larice, tisa, fag, stejar, castan (fiecare specie avnd 2n=24 i n=12); 11 la ienupr, tuia, chiparos de California (2n=22 i n=11); 13 la duglas (2n=26, n=13); 14 la mesteceni, ulmi i duzi (2n=28, n=14); la salcm 10 (2n=20, n=10). De remarcat c problema numrului grupelor de nlnuire nu este foarte simpl. Sunt specii la care numrul grupelor de nlnuire este inferior numrului perechilor de cromozomi. La tomate (Solanum lycopersicum) se 53

cunosc numai 10 grupe de linkage, fa de cele 12 posibile (2 n=24), iar la iepure numai 11 grupe de linkage, n raport cu cele 22 posibile (2n=44). Fenomenul de linkage se manifest numai n cazul genelor plasate pe acelai cromozom, n timp ce pentru genele plasate pe cromozomi diferii transmiterea ereditar a perechilor de gene se face independent, aa cum a descoperit MENDEL. Intensitatea linkage-ului, capacitatea de transmitere nlnuit a genelor n descenden, depinde de distana dintre ele pe cromozom, genele apropiate transmindu-se linkat cu o frecven mai mare dect cele situate la distane mai mari. Aceast constatare a permis lui MORGAN s pun bazele teoretice privind dispunerea liniar a genelor pe cromozomi i s obin date pentru ntocmirea hrilor cromozomale. La speciile forestiere, fenomenul transmiterii nlnuite a genelor de pe acelai cromozom acioneaz ca i n cazul altor specii de plante, dar depistarea caracterelor linkate rmne incert din cauza greutilor metodologice ale cercetrii, a structurii genetice practic necunoscute la cromozomii respectivi. n multe ncruciri ntre forme i varieti ale speciilor forestiere se remarc faptul c numeroase caractere nu sunt independente, foarte posibil ca efect al fenomenului de linkage. La foiase, WRIGHT semnaleaz, c n general, tipul nervaiunilor la frunze corespunde cu grosimea frunzei i coninutul acestora n ulei. La frunza de fag multe caractere se asociaz foarte strns n timp ce marginea frunzei vdete o anumit independen, ceea ce duce la supoziia c gena respectiv are raporturi slabe de asociere cu alte gene implicate n specificitea frunzei. 4.3. Recombinarea genelor ntre cromozomii pereche (crossingover) Schimbul reciproc de gene Studiul mecanismului de transmitere ereditar a artat c nu ntotdeauna genele care fac parte din aceiai grup de linkage, adic sunt plasate n acelai cromozom, se transmit nlnuit i c de la acest fenomen exist o serie de excepii. Pentru a explica aceste excepii s-a ajuns la concluzia c ntre cromozomii pereche are loc un schimb reciproc de gene, fenomen denumit crossing-over. La Drosophila, n experienele clasice ale lui MORGAN, s-au studiat transmiterea ereditar a caracterelor de la mutante, una cu aripi vestigiale (vgvg) i corp normal (b+b+) i alta cu aripi normale (vg +vg+) i corp mutant negru (bb). Genele respective sunt plasate n perechea a doua de cromozomi. n F1 au rezultat indivizi heterozogoi care aveau caracterele normale (corp gri i aripi normale). Ulterior, o femel obinut n prima generaie dup 54

ncruciare a fost retroncruciat cu un mascul care prezenta ambele mutante, aripi vestigiale i corp negru (vgvg-bb). n F2 s-au obinut patru tipuri de musculie, adic cele dou tipuri intrate n combinaie (vestigiale-gri i normale-negru) i dou recombinate genetic (fig. 4.2.). Ultimele dou categorii de organisme se datorete segregrii genelor care de obicei se transmit nlnuit. Cauza const n schimbul reciproc de gene plasate pe cromozomii pereche n timpul diviziunii meiotice. Analiza hibridologic arat c hibridul femel F1 produce patru tipuri de gamei i anume: b+vg i bvg+ i doi gamei noi cu genele bvg i b+vg+. Cei doi gamei noi apar prin schimbul segmentelor ntre cromozomii omologi (crossing-over). Crossing-overul este o alt tez a teoriei cromozomale a ereditii, supranumit i teza schimbului echilibrat de gene ntre cromozomii pereche. n loc s apar jumtate din descendeni cu aripi vestigiale i corp normal i jumtate cu aripi normale i corp negru, se obin 41,5% indivizi cu aripi vestigiale i corp gri, 41,5% cu aripi normale i corp negru, 8,5% cu aripi i corp normale i 8,5% cu aripi vestigiale i corp negru.

Fig. 4.2.

Explicaia pe care o d MORGAN este urmtoarea: n timpul diviziunii mitotice, cromozomii omologi se apropie foarte mult i se ating 55

unul de altul, n unul sau mai multe puncte de contact.. n aceste puncte de contact cromatidele se pot rupe, astfel c ntre cromozomii pereche poate avea loc un schimb reciproc de segmente cromatidice. Dac pe aceste segmente se afl localizate gene diferite, dar alele, schimbarea unor segmente cromatidice duce la schimbul de gene, n urma crora apar cromozomi i gamei recombinai. Fenomenul de crossing-over, aa cum s-a vzut, se produce n stadiul de zigonem-pachinem al profazei primei diviziuni meiotice, cnd cromozomii omologi bivaleni (fiecare cu cte dou cromatide) se apropie foarte mult unul de altul i vin n contact direct cu unul sau mai multe puncte chiasme, n care, din cauza tensiunilor dintre cromatidele externe i interne se pot produce rupturi i implicit, transfer reciproc de segmente (stadiul de diplomen). n funcie de numrul de rupturi n punctele de contact, se ajunge la crossing-over simplu, dublu, multiplu. n timp ce MORGAN i colab. si limitau crossing-over-ul la nivel intergenic, gena fiind ultima unitate de recombinare, cercetrile ulterioare (dup 1950), au demonstrat i existena crossing-over-ului intragenic. n afara recombinrii genetice reciproce s-a mai relevat i existena recombinrii nereciproce, unidirecional, numit conversie. 4.3.1. Factorii care modific frecvena crossing-overului n condiii normale i uniforme de via, de la o generaie la alta, valoarea crossing-over ntre dou puncte rmne constant. Regularitatea manifestrii crossing-over-ului, precum i lipsa acestui fenomen la o serie de organisme (molute, viermi), fac s se admit c att crossing-over-ul ct i linkage-ul se gsesc sub un anumit control genetic. Frecvena fenomenului de crossing-over este determinat de o serie de factori, dintre care menionm: Genotipul. La unele organisme fenomenul de crossing-over este frecvent, n timp ce la altele este practic absent. Constituia genetic influeneaz frecvena fenomenului de crossingover. S-a constatat la toate organismele c, n segmentele adiacente centromerului, frecvena chiasmei este mai redus. Cauza principal se datorete faptului c n aceste segmente, n general, genele sunt foarte dense i tot aici se afl principalele zone heterocromatice. Aberaiile cromozomale structurale i numerice afecteaz frecvena crossing-over-ului. Inversia ntr-o cromatid suprim omologia i deci conjugarea regiunii afectate i ca urmare nu pot aprea chiasma i implicit, nici crossing-over-ul. modificarea numrului de cromozomi (autopoliploidia, alopoliploidia, monosomia) afecteaz n diferite moduri producerea chiasmei 56

i ca urmare apariia crossing-over-ului. procentul de crossing-over crete odat cu creterea distanei dintre gene. Sexul. La diptere i lepidoptere la sexul heterogametic (mascul XY, respectiv femela ZW) nu apare n meioz fenomenul de crossing-over. Faptul este explicat prin lipsa de omologie ntre cromozomii X i Y, respectiv Z i W, care nu conjug n meioz. Vrsta. Frecvena crossing-over-ului este maxim la maturitatea sexual i scade odat cu naintarea n vrst. La om, frecvena procesului de crossing-over este mai mare la femeile de peste 36 de ani. Factorii de mediu. Temperatura, lumina, nutriia pot produce perturbri n apariia fenomenului de crossing-over. la Drosophila melanogaster s-a remarcat faptul c temperatura sczut mrete frecvena crossing-over-ului n unele segmente i o micoreaz n alta. 4.4. Hrile cromozomale Determinarea frecvenei crossing-over-ului i a linkage-ului i, implicit a distanelor dintre diferitele gene din acelai grup de linkage, a permis s se elaboreze hrile cromozomale (hri genetice), adic reprezentrile grafice ale cromozomilor cu indicarea poziiei relative a genelor linkage (a markerilor genetici), constituente. Pentru aceasta s-a ncercat s se stabileasc distana existent ntre diferite gene, utilizndu-se ca unitate de msur frecvena cu care se manifest fenomenul de crossingover, deci frecvena cu care apar organismele recombinate. Procentul de crossing-over n cadrul unei perechi de cromozomi depinde de distana dintre gene. Aceasta pornete de la raionamentul logic c dac genele de pe acelai cromozom sunt plasate mai departe una de alta, posibilitatea manifestrii crossing-over-ului este mult mai mare dect dac sunt alturate (fig. 4.3.). Pentru ntocmirea hrilor cromozomale se folosete deci analiza genetic, care const n efectuarea de hibridri ntre indivizi diferii din punct de vedere genetic i studierea descendenei la mai multe generaii. n acest fel se determin att grupele de linkage, ct i frecvena crossing-over-elor, adic distana dintre gene. Hrile cromozomiale constituie reprezentarea grafic a cromozomilor i a genelor care alctuiesc diferite grupe de linkage, gene plasate n cromozomi la distane relative, exprimate n procente de recombinare. O alt metod pentru ntocmirea hrilor cromozomiale la unele diptere (D. melanogaster) este metoda studiului citologic al cromozomilor uriai (politeni) Cromozomii uriai sunt de 150 de ori mai lungi dect cromozomii metafazici. ei sunt formai dintr-un mare numr de cromatide paralele, 57

datorit unei replicri succesive ale cromozomilor fr ca aceasta s fie urmat de separarea cromatidelor. Fenomenul poart denumirea de politenie. Deci, celulele glandelor salivare care conin cromozomii politeni rmn n profaz i ca urmare nu se mai divid.

Fig. 4.3. Harta genetic a perechii nr. 1 (X) de cromozomi de la Drosophila melanogaster

Prin colorare, de-a lungul cromozomilor politenici se disting benzi (ntunecate) i interbenzi (luminoase). Cromozomii uriai de la D. melanogaster prezint circa 5.000 de astfel de benzi, cu o morfologie caracteristic i o poziie constant. Studiul comparativ a numrului, morfologiei i poziiei benzilor din cromozomii uriai de la musculie de oet normale i diferitele mutante au artat c ntre poziia genelor pe cromozomi i distribuia benzilor exist o 58

corelaie direct. Cercetrile mai recente au artat c numrul de gene de la D. melanogaster este de circa 5.000, ceea ce corespunde cu numrul de benzi din cromozomii politenici. Aceste observaii au contribuit la alctuirea hrii citologice la D. melanogaster. Aceasta a permis gsirea unui suport celular localizrii genelor n cromozomi (fig. 4.4.). Primele hri cromozomale au fost realizate de MORGAN i colab. nc din anul 1920, la Drosophila i la Zea mays, specii cu nsuiri genetice foarte adecvate acestui scop. Rezultatele notabile n stabilirea grupelor de linkage i constituirea hrilor cromozomale sunt cunoscute la tomate, gru, orz, gura leului i n ultimul timp i la om.

Fig. 4.4. Microfotografia unui cromozom uria din glanda salivar la Drosophia melanogaste

La arbori, ntocmirea hrilor cromozomale rmne o problem deschis, deoarece identificarea genelor marker i verificarea segregrii mutantelor n descendeni prin metoda hibridrilor sunt greu de analizat. n plus, n cazul arborilor intervin complicaii din cauza frecvenei mari a sistemelor poligenice. Problema nu este totui de nerezolvat dac, de exemplu, se vor putea gsi markeri fenotipici i se vor desfura studii la specii cu forme i varieti distincte sau interhibride, cum ar fi molidul, pinul silvestru, stejarul sau, ntr-o msur mai mic, bradul, fagul .a. (tabelul 4.2.).
Tabelul 4.1. Caractere controlate de gene simple Specia Caragana arborescens Caragana arborescens Picea abies Caracterul Culoarea puieilor Ramuri Culoarea puieilor AA verde verde verde Fenotipuri Aa verde erecte verde aa galben pendante alb

59

Fagus silvatica

Culoarea frunzelor

armie

verde

* * * Teoria cromozomial a ereditii a avut i are importante aplicaii practice. Aceste cunotine sunt importante n alctuirea programelor de ameliorare a soiurilor de plante i a raselor de animale. Astfel, printr-o alegere judicioas a genitorilor se obin hibrizi la care, n urma fenomenului de recombinare genetic apar noi combinaii de gene, crendu-se posibilitatea selecionrii unor forme utile pentru practic. Prin cunoaterea hrilor cromozomiale, a devenit posibil transferul anumitor cromozomi sau segmente cromozomiale de la un soi la altul, sau chiar de la o specie la alta. n acest fel s-au transferat gene utile pentru procesul de ameliorare a plantelor i animalelor (ex. tranferul rezistenei la rugini de la speciile slbatice la gru). Elaborarea hrilor cromozomiale la om prezint importan pentru studiul maladiilor ereditare.

CAPITOLUL V Ereditatea caracterelor sexuale

5. Consideraii generale
Caracterele sexuale de ordin morfologic, anatomic, fiziologic, comportamental sunt foarte bine evideniate la animale, respectiv la om. La plantele superioare ele sunt mai puin distincte, deoarece att la speciile dioice, ct i la cele unisexuate monoice, diferenele dintre exemplarele mascule sau femele se limiteaz adeseori la structura aparatelor florale. Faptul se coreleaz, de altfel, cu existena i evoluia paralel a capacitii de regenerare, att pe cale sexuat, ct i pe cale vegetativ mai

60

ales la Angiosperme, ca i cu capacitatea remarcabil a celulelor de a-i pstra timp ndelungat multipotena informaional. La animale, caracterele sexuale determinate genetic rmn numai acelea care asigur formarea unui anumit gen de celule sexuale i care condiioneaz deosebiri n structura organelor interne i externe de reproducere, implicate n procesul fecundrii. Aceste deosebiri intr n sfera caracterelor sexuale primare, n timp ce caracterele sexuale secundare, au un anumit rol n reproducerea sexuat, dar nu particip n procesele de gametogenez i fecundare i nu sunt supuse unui control genetic direct, formndu-se sub influena sistemului hormonal (ex. penajul la psri, talia, pilozitatea, vocea la om .a). Apariia i determinarea sexelor au nceput s fie explicate nc din antichitate printr-o serie de ipoteze naive, cum ar fi aceea a lui Hipocrate privind puterea sexual a seminei la prini sau n legtur cu funciile specifice ale testiculelor, cu direcia din care bate vntul .a. Primele cercetri privind mecanismul determinrii sexelor se datoresc citologului HENKING. n anul 1906 WILSON, pe baza cercetrilor citologice la diferite insecte din genul Protenor, clarific rolul i semnificaia cromozomului X n sexualizare i introduce termenul de cromozomi ai sexului, numii ulterior heterocromozomi, gonozomi .a. Se poate vorbi de un determinism cromozomal al sexelor. Asociat cu determinismul cromozomal exist i un determinism genic al sexelor, descoperit la Drosophila de ctre BRIDGES. Determinismul cromozomal, ca i cel genic, al sexelor trebuie s fie prezent i la plantele lemnoase dioice, Ginko biloba, Taxus bacata, Juniperus communis, dintre rinoase, Populus alba, P. nigra, P. trenula, Salix alba, Acer negrendo, dintre foioase. Existena unui asemenea determinism genetic rezult cu certitudine din faptul c la nmulirea vegetativ, n cazul plopilor negri hibrizi, sexul arborelui mam se pstreaz cu strictee la descendeni. 5.1. Tipuri de determinism cromozomal al sexelor La plante i la animale s-au pus n eviden mai multe tipuri de determinism cromozomal al sexelor, tipul Drosophila, cu subtipul Lygaeus i Protenor, tipul Abraxas cu subtipurile fluture i pasre i tipul cu haploidie mascul. Tipul Drosophila, se caracterizeaz prin masculi heterogametici i femele homogametice i au fost identificate la insecte, mamifere, inclusiv la om, precum i la plante. Sexul femel, prezint o pereche de cromozomi ai sexului (heterozomi) identici (XX), astfel c toi gameii femeli produi de astfel de 61

organisme vor poseda cte un cromozom X, fiind deci un sex homogametic. Sexul mascul posed doi cromozomi sexuali diferii ( XY), astfel c jumtate din gamei vor poseda cromozomul X i jumtate cromozomul Y. Este deci un sex heterogametic. Din unirea n procesul fecundrii a unui gamet femel ce posed cromozomul X, cu unul mascul ce posed cromozomul X, va rezulta o femel (XX). Din contr, prin unirea unui gamet femel cu cromozomul X, cu unul mascul ce posed cromozomul Y, va rezulta un mascul (YX) (fig. 5.1.).

Fig. 5.1. Tipul Drosophila de determinism cromozomial al sexelor

De obicei, cromozomul Y este mai mic ca dimensiune dect cel X i posed mai puine gene. n unele cazuri cromozomul Y a disprut complet. Este vorba de subtipul Protenor de determinare a sexelor la care femela este XX iar masculul X0, avnd deci un cromozom mai puin (se ntlnete la lcuste i la nevertebrate). n general, la tipul Drosophila, cu subtipurile Lygaeus i Protenor, raportul numrului de masculi i femele numit sex-ratio este egal (1:1) i a fost verificat la numeroase specii de plante i animale (Melandrium, Brygonia, Canabis .a). Sex-ratio dei, n general constant, poate suferi modificri condiionate de factorii de mediu, cum ar fi termo- i fotoperioada. n cazul tipului de determinism sexual de tip Drosophila, ca de altfel i a altor tipuri, sexul se hotrete n momentul fecundrii tipul singamic n funcie de natura cromozomilor sexului din gamei. De asemenea, din cele de mai sus rezult c genele care determin sexul se transmit de la o generaie 62

la alta prin acelai mecanism ca i genele ce specific alte caractere raportul genotipic i fenotipic sex-ratio 1:1 fiind de factur mendelian. Sexul mascul (XY) se comport ca heterozigot dominant, iar sexul femel (XX) ca homozigot recesiv. n ceea ce privete determinismul sexual genetic, la Drosophila doar cromozomul X conine gene ale sexului, respectiv ale feminitii, n timp ce cromozomul Y, este heterogametic i practic lipsit de gene ale formrii sexului mascul. ncrucirile dintre musculie cu numr variabil de cromozomi X (diploizi i poliploizi) i seturi de autozomi au dovedit c genele determinrii sexului se gsesc att n heterozomi, ct i n autozomi, iar sexualizarea depinde de balana dintre genele feminitii din cromozomul X i genele masculinitii din autozomi. Aceast teorie a echilibrului genelor n determinarea sexului, este valabil n cazul Drosophilei, la o serie de animale i probabil, la arborii dioici. Tipul Abraxas. n comparaie cu tipul Drosophila, tipul Abraxas de determinism cromozomal al sexelor se caracterizeaz prin sex femel heterogametic i sex mascul homogametic. Astfel, femelele posed doi cromozomi ai sexului diferii (ZW sau XY) fiind deci heterogametici. Masculii sunt homogametici avnd doi cromozomi ai sexului identici (ZZ sau XX). Prin fecundarea gameilor femeli cu cromozomul Z sau Y, cu gameii masculi Z sau X, vor rezulta descendeni masculi (ZZ sau XX). Dac ns fecundarea se realizeaz ntre femele ce posed cromozomul W sau Y,cu gamei masculi cu cromozomul Z sau X, vor rezulta n descenden femele (fig. 5.2.). Acest tip de determinare a sexelor este ntlnit la psri, la unele specii de amfibieni i reptile, precum i la unele nevertebrate.

63

Fig. 5.2. Tipul Abraxas de determinism cromozomial al sexelor

Adesea cromozomul W sau Y este mai mic ca dimensiuni dect perechea lui (Z sau X), iar n unele cazuri el a disprut complet. Este vorba de subtipul fluture, la care femela este Z0 sau X0, iar masculii ZZ sau XX. Cele dou tipuri de determinism cromozomal al sexelor asigur totodat un raport constant i egal ntre sexe (sex-ratio) de 1:1. Tipul de determinism al sexelor cu haploidie masculin (femel 2n i mascul n). Se ntlnete la diferite specii de himenoptere, ca de exemplu albina (Apis mellifera). Femelele provin din ovule fecundate i sunt diploide (2n=32), iar masculii din ovule nefecundate pe cale partenogenetic i sunt haploizi. Masculul genereaz ns spermatozoizi normali cu 16 cromozomi, datorit formrii nucleilor de restituie, prin care toi cromozomii dintr-o celul se dirijeaz ctre un singur pol. n determinismul genetic al sexelor la albine intervin mai multe gene alele, iar femelele diploide sunt heterozigote pentru aceste alele, n timp ce masculii, haploizi, sunt hemizigoi, incluznd o alt alel dect femela. ncruciarea dintre o femel diploid cu un mascul haploid heteroalelic, duce la apariia de femele diplogenotipice, motenind att caracterul mamei ct i al tatlui, n timp ce trntorii sunt haplogenotipici, motenind numai caracterul mamei. 64

5.2. Ali factori care influeneaz determinismul genetic al sexelor Determinismul genetic al sexelor i funcionarea sau nefuncuinarea genelor pentru masculinitate sau feminitate sunt influenate de o seam de factori dintre care menionm: cantitatea de citoplasm, modul de via, condiiile de mediu (temperatura, lumina, umiditatea), hormonii sexuali etc. Cantitatea de citoplasm. La viermele marin Dinophilus, femele depun dou tipuri de ou: cu mult citoplasm, din care apar femelele i altele mai mici, cu citoplasm mai puin, din care apar masculii. La omida proas a stejarului (Lymantria dispar), GOLDSCHMIDT a semnalat existena unor factori genetici nucleari i citoplasmatici ai sexualizrii. Insecta manifest un puternic dimorfism sexual, masculii fiind homogametici (ZZ), iar femelele heterogametice (ZW) (determinism sexual tip Abraxas). Prin ncruciarea unor indivizi masculi i femeli din rasa european, cu femele i masculi din rasa japonez, GOLDSCHMIDT, a obinut n afar de descendeni de un anumit sex i descendeni intersexuai. Pentru a explica fenomenul el presupune c sexul este determinat de interaciunea dintre factorii masculinizai (M), localizai n cromozomul Z i factorii feminizai (F), localizai n citoplasm. Modul de via. Deosebit de interesant este determinarea sexelor la viermele nematod Mermis subnigrescens. Acesta i depune oule pe frunze care fiind mncate de lcuste ajung n intestinul acestora unde are loc ecloziunea. Larvele ptrund apoi n corpul lcustei unde i completeaz dezvoltarea, ducnd o via parazitar, viermii prsind la maturitate gazda pentru a tri liber pe sol. Sexul viermilor depinde de numrul paraziilor care infecteaz o aceiai lcust: dac numrul este de 1-3 indivizi ei devin femele care se reproduc prin partenogenez, dac numrul paraziilor este de 4-23 ei se transform o parte n masculi, o parte n femele i o parte sunt intersexuai. n fine, cnd numrul paraziilor depete 24 ei devin toi masculi. Exemplul de mai sus evideniaz importana modului de via a unor organisme, n procesul de sexualizare. Condiiile de mediu La plante s-a remarcat faptul c sub influena condiiilor modificate de mediu (lungimea zilei, temperatura, umiditatea etc.), au loc schimbri importante privind raportul dintre sexe i modificri profunde ale inflorescenelor. Astfel, la cnep (Cannabis sativa), plant dioic, prin cultivarea sa iarna n ser, sub influena zilelor scurte se mrete proporia de plante femele de la 50%, la 80-90%.

65

Mutaiile suferite de genele care controleaz organele sexuale, sau anumite condiii de mediu, pot s conduc la apariia de rudimente ale florii femele n floarea mascul sau invers, ajungndu-se uneori s se formeze gamei masculi n inflorescena femel sau ovule i stigmate n inflorescena mascul (ex. porumb). Un arbore monoic cum este molidul dezvolt flori femele numai n vrful ramurilor, n timp ce florile mascule sunt plasate lateral pe lugeri. Aceas difereniere strict a unor celule identice ca potenial sexual genetic se gsesc sub control fiziologic programat, condiionat de nivelul sintezei auxinelor. S-a constatat c auxinele n concentraie de 0,1% administrate pe cale artificial altereaz expresia sexului, n sensul feminizrii, n timp ce giberelinele induc o puternic tendin de masculinizare. Detaarea frunzelor tinere dinspre partea superioar a ramurilor, cauznd reducerea cantitii de auxine n zonele apicale, conduce la o masculinizare evident a florilor. Influena condiiilor de mediu asupra formrii mugurilor florali nu poate fi contestat la arborii monoici, care ajung s nfloreasc i s fructifice la vrste naintate (n masivele pduri, la fag, stejari, brad, molid, chiar la 6070 de ani) i la care nflorirea este periodic. Hormonii sexuali. Determinismul genetic al sexelor la animalele vertebrate are un caracter complex, n sensul c diferenierea cromozomal a sexelor este completat cu un mecanism care desvrete sexualizarea n cursul dezvoltrii ontogenetice. La mamifere, de pild, zigotul are o structur cromozomial bine determinat, fiind genetic mascul sau femel. Aceasta este etapa genetic a procesului de sexualizare. La om, aceast etap ine de la fecundare i formarea zigotului, pn ce embrionul atinge vrsta de 35 de zile. Cu toate acestea embrionul i ncepe dezvoltarea ca organism hermafrodit i numai ulterior din progonada hermafrodit, n funcie de informaia genetic a autozomilor i heterozomilor, se dezvolt gonadele unisexuate (ovarele i testicolele). Se poate deci conchide c informaia genetic mai ales a heterozomilor determin formarea de gonade unisexuate. Aceasta este etapa gonadic a procesului de sexualizare care la om ine pn n a 60-a zi de dezvoltare embrionar. Procesul de sexualizare masculin este continuat apoi cu ajutorul hormonilor androgeni elaborai de testicolul embrionar, n timp ce procesul de sexualizare feminin se continu pasiv fr a necesita astfel de hormoni. Un argument n acest sens, l constituie castrarea embrionilor n perioada n care organele genitale sunt nedifereniate sexual i care indiferent de sexul genetic duce la sexualizarea sa feminin. Apariia organelor genitale mascule i femele constituie astfel o nou etap n procesul de sexualizare a organismelor, etapa hormonal. n etapa pubertii are loc desvrirea diferenierii sexuale a organismelor sub influena hormonilor secretai de ovar (foliculina i progesteronul) i de testicole (testosteronul) (RAICU, 1980). 66

Punerea n eviden a rolului hormonilor sexuali la vertebrate s-a realizat cu ajutorul unor experiene de castrare, transplantare a gonadelor, parabioz, tratamente cu hormoni etc. 5.3. Fenomenul de sex-linkage Cromozomii X i Y conin i alte gene n afara celor sexuale. Aceste gene au tendina s se transmit la descendeni mpreun, legate de sex. Astfel, D. melanogaster conine pe cromozomul X peste 140 de gene care se transmit nlnuit, manifestnd sex-linkage. Se difereniaz gene complet sex-linkage cu cromozomul X, gene complet sex-linkage cu cromozomul Y, gene incomplet sex-linkage cu cromozomul X i gene incomplet sex-linkage cu cromozomul Y. Genele complet sex-linkage se transmit dup mecanisme particulare, n funcie de tipul de determinism sexual Drosophila sau Abraxas. La D. melanogaster, pe cromozomul Y se gsesc foarte puine gene gene ale fertilitii masculilor i gene pentru epi aa c genele de pe cromozomul X nu au alele corespondente, fiind homozigote. De aceea, n cazul musculiei de oet, fenomenul complet de sex-linkage nu se manifest numai la cromozomul X. Ca exemplu, n acest sens, se poate da caracterul culoarea ochilor, care, n experienele fcute de MORGAN, a permis gsirea unor prime concluzii privind sex-linkage. Astfel, la ncruciarea unei femele cu ochi roii, normali, cu un mascul cu ochi albi (white eyes w), mutant, n prima generaie s-au obinut numai indivizi cu ochi roii. Prin ncruciarea descendenilor n F2 s-a ajuns, conform raporturilor mendeliene la 75% indivizi normali (ochi roii) i 25% indivizi cu ochi albi (raport 3:1), ceea ce dovedete c nsuirea ochi roii este dominant, iar cea de ochi albi, recesiv i c genele respective segreg independent. Important de reinut este faptul c toi indivizii cu ochi albi erau masculi, n timp ce indivizii cu ochi roii se structurau 2/3 femele i 1/3 masculi (fig. 5.3.). ncrucind femele cu ochi roii, heterozigote, din F1, cu masculi cu ochi albi, au aprut n F2 50% descendeni cu ochi roii, dintre care 1/2 femele i 1/2 masculi i 50% indivizi cu ochi albi, de asemenea 1/2 femele i 1/2 masculi. S-a putut deduce astfel c genele care determin culoarea roie sunt plasate pe cromozomul X, ntruct transmiterea lor din generaie n generaie urmeaz calea transmiterii cromozomului X.

67

Fig. 5.3. Fenomenul de sex-linkage la Drosophila melanogaster

Ereditatea complet legat de cromozomul Y la D. melanogaster, se datorete genelor situate pe segmentul specific, neomolog, a heterozomului Y. Genele Y complet sex-linkage sunt numite gene holandrice, iar modul de transmitere ereditate holandric. Ele se motenesc exclusiv de descendenii masculi cazul genelor care afecteaz forma urechilor sau formarea membranelor dintre degetele de la picioare etc. Genele incomplet sex-linkage formeaz perechi de alele n heterozomii X i Y, n segmentele lor omoloage. Aa sunt genele mutante care controleaz daltonismul, retinita pigmentar, un tip de nefrit .a.

68

Transmiterea ereditar a caracterelor prin sex-linkage pe cromozomul X a fost relevat i la plantele dioice din genurile Melandrium, Rumex .a. i nu exist motive s se conteste c s-ar putea manifesta i la speciile din genurile Populus sau Salix.

CAPITOLUL VI Noiuni de genetic molecular

6. Genetica molecular este acea ramur a biologiei care studiaz ereditatea organismelor la nivel molecular biochimic. La toate organismele materialul genetic este reprezentat de acizii nucleici (ADN i ARN). Acetia au capacitatea de a nregistra sub o form codificat biochimic informaia genetic, care determin toate caracterele i nsuirile organismelor vii. 6.1. Acizii nucleici i rolul lor genetic Primele experiene care urmreau s descopere determinismul genetic al unor caractere la bacterii au fost efectuate de GRIFFITH (1928). Acesta a injectat la oareci pneumococi vii neviruleni, mpreun cu pneumococi viruleni, dar care n prealabil au fost omori prin cldur. S-a constatat c oarecii din experien au murit de pneumonie. Din animalele moarte au fost izolai pneumococi viruleni vii. De aici s-a desprins concluzia c pneumococii neviruleni n contact cu resturile pneumococilor viruleni, devin i ei viruleni. Deci, are loc un proces de transformare a pneumococilor neviruleni n pneumococi viruleni (fig. 6.1.). Procesul de transformare n acest caz, a fost descifrat, n 1944, de ctre AVERY i colab. care au descoperit experimental c acidul dezoxiribonucleic (ADN) este capabil s transforme caracterele ereditare de la un tip de pneumococi la altul. Unii pneumococi, notai cu litera S, formeaz colonii netede, au o capsul i sunt viruleni; alii notai cu litera R alctuiesc colonii rugoase, nu au capsul i sunt neviruleni. Din cauz c la tipul S capsula poate fi format din diferite polizaharide, exist mai multe tipuri de pneumococi SI, SII,SIII etc.

69

Fig. 6.1. Schema experienei lui E. GRIFFITH: 1 - pneumococi neviruleni; 2 - pneumococi viruleni; 3 - pneumococi viruleni omori prin cldur; 4 - pneumococi viruleni omori prin cldur mpreun cu cei neviruleni.

n mod spontan, prin mutaie, aceti pneumococi i pot pierde capsula i devin neviruleni de tipul RI, RII, RIII etc. AVERY i colab. au extras ADN din celulele pneumococilor de tipul SIII, pe care l-au introdus n mediul de cultur al pneumococilor neviruleni de tipul RII (fig. 6.2.). Dup 24 h s-a constatat c printre pneumococi de tip RII apare i un anumit numr de pneumococi SIII. S-a dovedit c pneumococi RII s-au transformat n pneumococi SIII sub influena ADN de tipul donor. Pneumococii transformai transmit caracterele respective n descendeni.

70

Fig. 6.2. Schema experienei lui O.T. AVERY: a mediu de cultur

La eucariote, primele tentative de transformare genetic s-au fcut la rae de ctre BENOIT i colab., n 1959. Raele de ras Peking injectate cu ADN extras din testicolele i eritrocitele sngelui rasei Khaki Campell au suferit modificri importante n ce privete culoarea ciocului, a penajului, talia, forma i poziia capului, comportamentul .a. creindu-se o nou ras de rae, Blanche neige. Fenomenul de transformare a fost pus, ulterior, n eviden la numeroase specii de plante i animale fapt ce a demonstrat c ADN reprezint substratul biochimic al ereditii, de la virusuri pn la sistemele biologice celulare. ADN-ul constituie, n mod indiscutabil materialul genetic celular, avnd capacitate transformatoare att la microorganisme, ct i la organismele superioare. Cantitatea de ADN n celule este constant, spre deosebire de cantitatea de acid ribonucleic (ARN) sau proteine, care sufer variaii substaniale. De asemenea, ADN are o mare stabilitate, ceea ce atest, odat n plus, semnificaia sa major de substrat genetic, transmis ca atare de la o generaie la alta. ADN reprezint substratul ereditar universal al ereditii. Structurile ADN joac rol de stocare sau memorizare a informaiei genetice, secvenele succesive de baze azotate constituindu-se n ceea ce se cunoate sub numele de gene. Unele virusuri nu posed ADN, ci ARN, fiind denumite ribovirusuri. Evidenierea rolului genetic al ARN viral s-a realizat la virusul mozaicului tutunului (VMT). Rolul genetic al ARN la VMT s-a pus n eviden prin separarea pe cale chimic a ARN de proteina viral, dup care s-au fcut infecii artificiale cu ambele componente ale virusului. S-a constatat c numai ARN viral are capacitate infecioas. La plantele infectate cu ARN a avut loc sinteza de ARN viral, dar i a proteinei virale. Aceasta dovedete c materialul genetic n cazul ribovirusurilor este acidul 71

ribonucleic (ARN). La ribovirusuri, genele sunt constituite din ARN. La viroizi, organisme mai simple ca virusurile, capabile de a provoca boli la plante, materialul genetic este reprezentat de o molecul de ARN. n concluzie, la unele virusuri i la viroizi, ARN-ul este materialul genetic cu rol n transmiterea ereditar a caracterelor. 6.2. Structura chimic a acizilor nucleici Acizii nucleici sunt substane chimice macromoleculare alctuite din uniti mai simple denumite nucleotide. O nucleotid este alctuit dintr-o baz azotat, un zahar i un radical fosforic. Bazele azotate din molecula acizilor nucleici sunt de dou tipuri: purinice i pirimidinice, ele rezultnd dintr-un nucleu denumit purin i respectiv pirimidin. Structura molecular a ADN-ului a fost descoperit n 1953 de ctre WATSON i colab. Purina este un tip de baz de azotai, alctuit dintr-un heterociclu format din 5 atomi de carbon i 4 de azot, n timp ce pirimidina are o alctuire ceva mai simpl, fiind o baz azotat format dintr-un heterociclu de 6 atomi din care 4 de carbon i 2 de azot. Cele mai importante baze purinice sunt adenina (A) i gaunina (G). Acestea sunt prezente att n molecula de ADN ct i n cea de ARN. Cele mai importante pirimidine sunt: citozina (C), i timina (T) n ADN. La ARN, n locul timinei se afl uracilul (U). Zaharurile care intr n alctuirea acizilor nucleici sunt riboza la ARN i dezoxiriboza la ADN. Aceste zaharuri sunt pentoze, avnd cte 5 atomi de carbon (fig. 6.3., 6.4., 6.5.).

72

Fig. 6.3., 6.4., 6.5.

Prin unirea unei baze azotate cu un zahar, riboza sau dezoxiriboza, se obin aa numitele nucleozide. Prin fosfatizarea nucleozidelor se obin nucleotidele care sunt unitile de baz ale acizilor nucleici. Prin nlnuirea nucleotidelor se obin polinucleotide sau acizi nucleici, n care intr mai mult de 10 nucleotide. 6.2.1. Acidul dezoxiribonucleic (ADN) Macromolecula de ADN este bicatenar fiind format din dou lanuri polinucleotidice, nfurate elicoidal n jurul unui ax comun, formnd un dublu helix. Cele dou catene ale helixului de ADN sunt antiparalele. Cele dou lanuri polinucleotidice sunt complementare, n sensul c ntotdeauna o nucleotid care conine o baz azotat purinic se leag cu una ce conine o baz azotat pirimidinic i invers. Ca urmare n macromolecula de ADN nu exist dect 4 tipuri de legturi: A-T, T-A, G-C, C-G. Structura bicatenar a ADN se realizeaz cu ajutorul unor puni de hidrogen - duble ntre adenin i timin i triple ntre guanin i citozin. Aceste legturi sunt de natur electrostatic (fig. 6.6.).

73

Fig. 6.6.Un segment din macro-molecula de ADN

Denaturarea i renaturarea ADN. Un fenomen legat de structura bicatenar a ADN este denaturarea. Prin nclzirea unei soluii n care se gsete ADN, cele dou catene se despart i ADN-ul devine monocatenar. Dac se realizeaz o rcire brusc a soluiei, macromoleculele rmn sub forma monocatenar i poart denumirea de ADN denaturat. Dac rcirea se realizeaz treptat, se refac punile de hidrogen dintre cele dou tipuri de catene complementare i macromoleculele devin bicatenare, rezultnd ADN renaturat. Pe aceast baz se pot realiza hibrizi moleculari dintr-un amestec de catene de ADN, provenind de la diferite specii. Prin realizarea de hibrizi moleculari de tip ADN-ADN de origini diferite se poate determina gradul de complementaritate a nucleotidelor i respectiv nrudirea filogenetic a organismelor de la care s-a preluat ADN-ul. 6.2.2. Replicaia macromoleculei de ADN n celulele fiecrei specii se gsete o anumit cantitate de ADN, n care se afl sub form codificat informaia genetic. Pentru realizarea diviziunii celulare este necesar, printre altele, dublarea prealabil a cantitii de material genetic. n acest fel, celulele fiice vor avea aceeai cantitate de ADN cu celula mam. Sinteza ADN poart denumirea de replicaie deoarece se realizeaz dup modelul semiconservativ (fig. 6.7.). Prin ruperea punilor de hidrogen, moleculele de ADN se separ n cele dou catene complementare, iar nucleotidele libere din citoplasm se ataeaz pe baz de complementaritate 74

de catenele vechi. Vor rezulta dou molecule de ADN bicatenar, fiecare avnd o caten veche (care are rol de matri) i caten nou sintetizat. n acest fel se asigur sinteza noilor molecule de ADN cu mare fidelitate, moleculele-fiice fiind identice cu moleculele-mam.

Fig. 6.7. Replicaia ADN dup tipul semiconservativ

Ipoteze privind sinteza ADN consider c aceasta s-ar realiza dup tipul conservativ (sinteza de novo) sau dup tipul dispesriv (dispersarea ADN n pri componente). Studiul sintezei ADN in vivo i in vitro a demonstrat c ea se realizeaz dup tipul semiconservativ propus de WATSON i CRICK deoarece acest mecanism asigur o nalt fidelitate n sinteza noilor macromolecule de ADN, identice cu cele vechi. innd seama c sinteza 75

ADN se realizeaz dup sistemul semiconservativ, c n acest proces cele dou catene servesc drept matrie pentru catenele nou sintetizate i c prin acest proces informaia ereditar este transmis fidel noilor macromolecule, procesul de sintez a ADN a primit denumirea de replicaie. ADN a fost replicat in vitro, ce ctre KORNBERG n 1954, cu ajutorul enzimelor celulare. 6.2.3. Acizii ribonucleici (ARN) Acizii ribonucleici (ARN) au, n general, o structur monocatenar, fiind alctuii dintr-un singur lan polinucleotidic. Exist mai multe tipuri de ARN, avnd funcii diferite: 1) ARN viral constituie materialul genetic al unor ribovirusuri cum sunt: virusul mozaicului tutunului (VMT), virusul poliomelitei, virusul gripal .a. 2) ARN mesager (ARN-m) are rol de a copia informaia genetic a unei catene din macromolecula de ADN i, n felul acesta, realizeaz ceea ce se cheam fenomenul transcripie, o etap n procesul de decodificare a informaiei genetice i de sintez proteic. La ARN-m succesiunea nucleotidelor este complementar cu aceea a catenei de ADN de la care a copiat informaia. Greutatea molecular a ARN-m este variabil, deoarece i mrimea informaiei copiate este variabil. 3) ARN de transfer (ARN-t) are rolul de a transfera aminoacizii la locul sintezei proteice. Are o greutate molecular mic i relativ constant, alctuit dintr-o succesiune de 70-90 de nucleotide. Este monocatenar, cu poriuni bicatenare, care formeaz o tij i trei bucle mari, fapt care i confer forma de trifoi. 4) ARN ribozomal (ARN-r) intr n alctuirea ribozomilor i are rol n sinteza celular a proteinelor. n molecula sa sunt numeroase plieri neuniforme datorit legturilor dintre nucleotidele complementare U-A sau G-C. 5) ARN nuclear mic (ARN-sn) se gsete n nucleul eucariotelor, legat n mod stabil de proteinele nucleare. Acest tip de ARN este alctuit dintr-o secven de circa 100 de nucleotide, avnd un rol important n funcionarea nucleului. 6.3. Codul genetic i sinteza proteic n anul 1953, dup descoperirea structurii macromoleculei de ADN, s-a lansat supoziia existenei unui cod genetic i c secvena nucleotidelor de-a lungul macromoleculei de ADN trebuie s conin sub form codificat 76

informaia genetic a organismelor. Evident c s-a pus problema legturii dintre secvena celor 4 tipuri de nucleotide, ce conin diferite baze azotate purinice i pirimidinice (adenina, guanina, citozina i timina) cu secvena aminoacizilor din catenele polipeptidice. SAMOV (1954) a emis ipoteza c n macromolecula acizilor nucleici se gsete codificat informaia genetic necesar sintezei moleculelor de proteine. Macromoleculele de acizi nucleici conin un numr mare de nucleotide, astfel c prin modificarea secvenei nucleotidelor se poate nregistra o enorm cantitate de informaie genetic. Dac se consider c o gen este format n medie dintr-o secven de 1000 de nucleotide, numrul posibil de schimbri n secvena nucleotidelor este imens, fiind egal cu 41000 sau 10602. Prin nlocuirea unei singure nucleotide din cele 1000 ale unei gene, se pot produce 3000 de tipuri de gene alele. Evident c n felul acesta macromoleculele de acizi nucleici au o capacitate practic infinit de variaie i respectiv de nregistrare a informaiei genetice. Macromoleculele de ADN conin programul sintezei proteinelor, informaia genetic ce determin ordinea de succesiune a aminoacizilor. Legturile dintre secvena nucleotidelor n ADN i succesiunea aminoacizilor n molecula proteic se realizeaz cu ajutorul codului genetic. Unitile de codificare a informaiei genetice sunt reprezentate de codoni. Codonul este alctuit dintr-o secven de trei nucleotide din macromolecula de ADN, avnd capacitatea de a determina includerea unui anumit aminoacid n molecula proteic. Prin codificarea celor 20 de aminoacizi care intr n alctuirea proteinelor, exist 64 de codoni, fiecare fiind format dintr-o secven de trei nucleotide. Informaia genetic din moleculele de ADN este mai nti transferat ntr-o macromolecul de ARN mesager (ARN-m), prin fenomenul de transcripie, dup care este decodificat i transformat ntr-o secven de aminoacizi prin translaie (fig. 6.8.) ntre secvena nucleotidelor din ADN i secvena aminoacizilor din molecula proteic exist o strns corelaie, fenomen denumit colinearitate. Prin combinarea variat a celor 20 de aminoacizi, prin modificarea secvenei lor n catenele polipeptidice, se poate realiza un numr imens de proteine. Macromoleculele de ADN sunt alctuite dintr-un numr mare de nucleotide, care sunt ns de numai 4 tipuri. Prin modificarea secvenei celor 4 tipuri de nucleotide, se poate nregistra, cu ajutorul codului genetic, o cantitate imens de informaie genetic. ADN-ul este deci alctuit dintr-o secven de codoni, ce determin succesiunea aminoacizilor n moleculele proteinelor.

77

Fig. 6.8. Transcripia i translaia macromolecului de ADN

6.3.1. Codul genetic i caracteristicile sale Codul genetic este alctuit din 64 de codoni, cifra reprezentnd totalitatea combinaiilor posibile a celor 4 tipuri de nucleotide luate cte 3, adic 43 (fig. 6.9.). S-a reuit descifrarea complet a codului genetic, n sensul c sunt cunoscute toate tripletele de nucleotide (codoni) din ARN-m ce codific diferiii aminoacizi. Aceti codoni sunt formai din 4 tipuri de nucleotide coninnd bazele azotate adenin, uracil, guanin i citozin. Adevratul cod genetic coninut n macromolecula de ADN poate fi foarte uor cunoscut prin nlocuirea nucleotidelor din ARN-m (fig. 6.9.) cu componentele lor: citozina (C) prin guanin (G), guanina (G) prin citozin (C), adenina (A) prin timin (T) i uracilul (U) prin adenin (A). innd seama c exist mai muli codoni dect aminoacizi (20), s-a dovedit experimental c mai muli codoni pot codifica un acelai aminoacid. Deci codul genetic este degenerat. Datorit fenomenului de degenerare a codului genetic, un anumit aminoacid poate fi codificat de mai muli codoni diferii. Astfel, leucina este codificat de codonii UUA, UUG, CUU, CUC i CUG.
Prima nucleotid a codonului 5
U UUA Leucin UUG Leucin CUU CUC Leucin CUA CUG AUU Izoleucin UCA UCG CCU CCC Prolin CCA CCG ACU CAA CAG Glutamin AAU

A doua nucleotid U
UUU Fenil UUC alanin UCU UCC Serin UAA Stop UAG Stop CAU CAC Histidin UGA Stop UGG Triptofan CGU CGC Arginin CGA CGG AGU

A
UAU UAC Tirozin

G
UGU Cistein UGC

A treia nucleotid a codonului 3

U C A G U C A G U

C A

78

AUC AUA AUG Metionin GUU GUC Valin GUA GUG

ACC ACG Treonin ACG GCU GCC Alanin GCA GCG

AAC AAA Asparagin AAG Lizin GAU Acid GAC aspartic GAA Acid GAG glutamic

AGC AGA Serin AGG Arginin GGU GGC Glicin GGA GGG

C A G U C A G

Fig. 6.9. Codul genetic ARN

Codul genetic este nesuprapus, adic doi codoni succesivi nu au nici o nucleotid comun i este fr virgul (citirea informaiei genetice se face continuu: ntre doi codoni succesivi nu exist semne de punctuaie). Din totalul de 64 de codoni ai codului genetic, un numr de 61 codific cei 20 de aminoacizi, iar 3 codoni (UAA, UAG i UGA) nu codific aminoacizii, ci numai marcheaz sfritul unui mesaj genetic (STOP). Codul genetic este universal. Acest fapt a fost dovedit prin studiul proteinelor biosintetizate n sisteme celulare libere, provenite de la bacterii i de la mamifere, sub influena unor ARN sintetizai artificial. S-a constatat c indiferent de originea sistemului celular liber se obin aceleai proteine, fapt ce constituie argumentul c aminoacizii ce intr n alctuirea proteinelor respective sunt codificate de aceeai codoni. inndu-se seama de universalitatea codului genetic, s-a dedus c are o origine foarte veche, lund natere n nsi procesul de apariie a vieii pe pmnt. Recent, s-a demonstrat existena unor excepii de la universalitatea codului genetic. Astfel, n genomul mitocondriilor (organite celulare de la eucariote) codul genetic prezint mici deosebiri fa de cel universal. De pild, codonul UGA, care n nucleu are semnificaia de STOP, n genomul mitocondrial (ADN-mt) codific aminoacidul triptofan. Existena unor deosebiri minore n ADN-mt nu afecteaz n ansamblu, universalitatea codului genetic, acelai la procariotele acelulare i celulare, precum i la eucariote. O alt caracteristic a codului genetic este modalitatea n care se realizeaz descifrarea mesajului genetic coninut ntr-o succesiune de nucleotide. S-a demonstrat c citirea mesajului genetic se face ntr-un singur sens, astfel c, absena unei singure nucleotide (deleia) sau adugarea unei nucleotide (adiia) face ca mesajul s fie citit eronat, n continuare. 6.3.2. Funciile materialului genetic (transcripia i translaia informaiei genetice) Rezultatele cercetrilor privind funciile materialului genetic pot fi sintetizate n relaia ADN ARN proteine (fig. 6.10). 79

Fig. 6.10. Relaia ADN

ARN proteine

Conform acesteia informaia genetic se reproduce prin replicaie i este decodificat (transformat ntr-o protein sau enzim specific) prin transcripie i translaie. Transcripia constituie fenomenul prin care informaia unei catene de ADN este transmis la ARN-mesager (ARN-m), precum i altor tipuri de ARN. Translaia nseamn transformarea unei secvene de nucleotide i respectiv de codoni din ARN-m ntr-o secven de aminoacizi n catena polipeptidic. Dup cum se tie, proteinele, care au un rol extrem de important structural i funcional, sunt foarte variate n natur. Ele reprezint, de regul, circa 50% din substana uscat a celulelor. Unele proteine, cum este colagenul, au rol n realizarea structurilor organismului, iar altele, cum sunt enzimele, au rol de a cataliza reaciile metabolice. Sinteza proteinelor in vivo se realizeaz pe baza informaiei genetice din acizii nucleici. Pn n prezent au fost identificate peste 100.000 proteine diferite, vegetale i animale. n linii mari, toate aceste proteine sunt alctuite din variaia secvenei a 20 de aminoacizi. n procesul de sintez proteic la nivel celular, intervin trei tipuri de acizi ribonucleici: ARN-mesager (ARN-m), ARN-ribozomal (ARN-r) i 80

ARN-solubil (ARN-s), fiecare avnd un rol bine determinat. Rolul ARN n decodificarea informaiei genetice a fost pus n eviden de BRACHET i colab. (1950-1955), care au demonstrat c n celul sinteza proteic este nsoit de o mrire considerabil a cantitii de ARN. Recent s-a descoperit c unele ribovirusuri, la care materialul genetic este o molecul de ARN, sunt capabile s determine n celula respectiv sinteza unui ADN cu ajutorul cruia se replic. Este pentru prima oar cnd se demonstreaz experimental c ARN-viral (ARN-v) poate servi ca matri pentru sinteza ADN-ului. Fenomenul poart denumirea de reverstranscripie sau inverstranscripie. 6.3.3. Etapele sintezei proteice Dependena sintezei proteice de informaia genetic din nucleu a fost pus n eviden la alga monocelular Acetabularia mediteraneea. Dac se ndeprteaz nucleul celular, biosinteza proteinelor continu ctva timp n celula anucleat a algei, ns cu vitez redus. Dup aproximativ 20 de zile, activitatea biosintetic nceteaz complet i alga anucleat moare. Dac ns n acest timp se introduce un nucleu n citoplasma respectiv, n cteva minute alga i reia pe deplin activitatea. Prima etap n procesul de sintez proteic o constituie transcripia informaiei din ADN n ARN-m. Fenomenul de transcripie a informaiei genetice de la ADN la ARN se realizeaz cu ajutorul enzimei ARN polimeraza. ARN-m copiaz informaia genetic numai a unei catene din macromolecula de ADN. n celulele procariotelor, ARN-m copiaz informaia genetic a mai multor gene adiacente care alctuiesc un operon. Ca urmare, se sintetizeaz mai multe proteine, de care celula are nevoie la un moment dat. Pe msur ce se sintetizeaz moleculele de ARN-m, ncepe sinteza catenelor polipeptidice. La eucariote, ARN-m copiaz de regul informaia genetic a unei singure gene. Acest ARN-m, dup ce sufer unele modificri prin eliminarea secvenelor non-informaionale, migreaz n citoplasm, unde are loc sinteza proteic. Prin transcripia informaiei genetice se nelege nu numai sinteza ARN-m ci i a celorlalte dou tipuri de acizi ribonucleici (ARN-r i ARN-t), care sunt necesari pentru realizarea sintezei proteice. A doua etap a sintezei proteice este reprezentat de translaie, n urma creia o secven de nucleotide din ARN-m este transformat ntr-o secven de aminoacizi n molecula proteic. ARN-m se cupleaz cu ribozomii din citoplasm formnd poliribozomi. Concomitent are loc activarea aminoacizilor (AA) din citoplasm prin legarea lor de ATP (adenozintrifosfat), substan chimic ce servete ca donator de energie. 81

Cele trei faze ale biosintezei proteice pot fi redate sintetic astfel:

1.

min oacil sin tetaza AA + ATP a

AA~AMP+P~P

In aceast faz un aminoacid oarecare AA este activat n urma reaciei cu molecula de ATP donatoare de energie sub influena enzimelor denumite aminoacilsintetaze. Ca urmare, aminoacidul se leag de AMP (adezinmonofosfat), iar dou grupuri fosfat sunt puse n libertate.

2. AA~AMP+ARN-t

a min oacil sin tetaze

AA~ARN-t+AMP

n aceast faz are loc transferul aminoacizilor activi la ARN-t, sub influena acelorai enzime din etapa precedent. Cu ajutorul moleculelor de ARN-t aminoacizii sunt transferai la locul sintezei proteice n ribozomi.
eraze 3. AA1~ARN-t1+AA2~ARN-t2 peptidpo lim AA1~AA2+ARNt1+ARN-t2

n aceas faz, aminoacizii, de exemplu, AA 1 i AA2 se unesc ntre ei prin legturi peptidice cu ajutorul enzimelor peptidpolimeraze. Se formeaz n acest fel catene polipeptidice, iar moleculele de ARN-t sunt puse n libertate i sunt reciclate, adic refolosite n procesul sintezei proteice. De asemenea i ribozomii sunt reciclai n cursul sintezei proteice.

6.4. Gena. Structur i funcii n concepia clasic, gena era definit de ctre JOHANNSEN (1909), ca unitate a materialului genetic, localizat n cromozomi. n organismele haploide genele se prezint sub form simpl, iar n cele diploide sub form de alele. Tipul primar al genei (tipul slbatic) se modific prin mutaii formnd una sau mai multe alele ce afecteaz acelai caracter. n cazul organismelor diploide descendenii primesc numai cte un membru al perechii respective de alele, de la fiecare genitor. n concepia clasic, gena are trei trsturi de baz: - uniformitatea funcional, n sensul c determin producerea unui efect fenotipic ;

82

unitate mutaional, prin care gena normal ce determin tipul slbatic se transform prin mutaii n alela, sau alelele sale, astfel c este afectat caracterul respectiv ; - unitate de recombinare genetic, prin care genele se pot transfera de pe un cromozom pe perechea sa, prin fenomenul de crossingover. Genele, pe baza localizrii lor pot s fie autozomale i heterozomale. Determinarea poziiei unei gene ntr-un anumit cromozom a fcut posibil alctuirea hrilor genetice. Sub aspectul manifestrii lor genele pot s fie recesive, dominante, codominante, epistatice, hipostatice, complementare sau indiferente. n timp ce genele nucleare se transmit la descendeni i segreg dup tipul mendelian, genele extranucleare prezint un tip de motenire nemendelian. ntre cele dou tipuri de gene de la organismele eucariote poate exista un fenomen de interaciune, n sensul c cele nucleare pot determina funcionarea sau nefuncionarea celor extranucleare, mpreun putnd produce un anumit fenotip. Apogeul n concepia clasic despre gen a fost reprezentat de ipoteza o gen - o enzim, elaborat de BEADLE i TATUM (1941). Aceast ipotez poate fi sintetizat astfel: Toate procesele biochimice din organisme sunt controlate genetic, fiecare reacie dintr-un lan metabolic fiind determinat primar de o gen. ntre gene i enzimele respective exist raportul de 1:1. Prin mutaia unei singure gene are loc blocarea sintezei enzimei corespunztoare i a reaciei biochimice catalizat de ea. Ca urmare are loc blocarea ntregului lan metabolic. Ipoteza consider c fiecare gen controleaz sinteza, funcionarea i specificitatea unei anumite enzime. Noiunea de gen a evoluat foarte mult odat cu apariia geneticii moleculare i a perfecionrii metodelor de investigaie la nivel molecular. Gena n concepia actual poate fi definit drept un segment al macromoleculei de ADN (sau ARN n cazul unor virusuri), format dintr-o anumit secven de nucleotide, care acioneaz ca o unitate funcional i care conine secvena nucleotidelor ntr-o molecul de ARN-m (transcripia genetic) i respectiv a aminoacizilor ntr-o caten polipeptidic (translaia genetic) Gena este alctuit dintr-un mare numr de subloci potenial mutabili, dispui linear ntr-o anumit ordine i ntre care poate avea loc fenomenul recombinrii genetice. Dimensiunea genelor este variabil, n funcie de cantitatea de informaie genetic pe care o posed. La bacterii s-a calculat c n medie o -

83

gen este format dintr-o secven de 900-1.500 nucleotide, fiecare aminoacid fiind controlat genetic de o triplet de nucleotide denumit codon. Dac o protein este alctuit dintr-o singur caten polipeptidic sau din mai multe dar identice, ea este codificat de o singur gen. n cazul cnd molecula proteic este format din mai multe catene polipeptidice nonidentice, ea este codificat de mai multe gene. De exemplu, hemoglobina A este alctuit din 4 catene polipeptidice, identice dou cte dou ( i ), ea fiind codificat de dou gene diferite. Sub aspect funcional, genele pot fi clasificate n 4 categorii : 1) Gene structurale care determin secvena aminoacizilor ntr-o caten polipeptidic, astfel c ntre secvena nucleotidelor n acidul nucleic i cea a aminoacizilor din proteina corespunztoare se observ fenomenul colinearitii. 2) Gene reglatoare, au rolul de a controla sinteza proteic la nivelul celulei, n funcie de condiiile de mediu extracelular sau de necesitile funcionale ale celulei. 3) Gene arhitecturale care asigur integrarea proteinelor sintetizate n structurile celulare. 4) Gene temporare care activeaz cele 3 gene anterioare, pe baza unui program n timp i spaiu, astfel c n organism se realizeaz fenomenul citodiferenierii. WADDINGTON (1965), a denumit ntreaga serie de procese biochimice care duc de la gen la caracterul fenotipic respectiv sistem de aciune a genelor. n timp ce la procariote genele sunt formate dintr-o secven de nucleotide continu, ce codific o secven de aminoacizi, la eucariote genele sunt alctuite din segmente informaionale, separate de segmente noninformaionale. De exemplu, gena ce determin sinteza ovalbuminei la gin este constituit din buci prezentnd ntreruperi de secvene de nucleotide care este transcris n ARN-m. Aceasta nseamn c n apte regiuni ale genei exist inserii de secvene de nucleotide care nu sunt transcrise n ARN-m. Ca urmare gena este alctuit din segmente informaionale, separate prin segmente de ADN non-informaional, sau silenios. Secvenele de nucleotide non-informaionale incluse n gena respectiv se numesc introni. Au o mrime variabil ntre 300 i 1.400 perechi de nucleotide. Regiunile intercalare se numesc extroni i ele constituie cu adevrat gena. n genomul eucariotelor exist un numr relativ mic de gene, comparativ cu cantitatea total de ADN. De exemplu, la om, s-a calculat c numrul posibil de gene ar fi egal cu 3106. n realitate, numrul de gene este mult mai mic, fiind egal cu 5104. Aceasta nseamn c numai o mic parte din genomul uman este constituit din gene funcionale, n timp ce cea mai 84

mare parte din genom este constituit din ADN non-informaional, cu alte roluri. 6.4.1. Funciile genelor i dogma central a geneticii Genele au dou funcii: autocatalitic i heterocatalitic. Dogma central a geneticii const n faptul c informaia genetic se gsete n ADN, ea putnd s fie replicat (funcie autocatalitic) i decodificat prin transcripie i translaie (funcie heterocatalitic). Ca urmare, fluxul de informaii este unidirecional : ADN ARN proteine. Funcia autocatalitic a genelor. Const n capacitatea lor de a se autoreplica cu mare fidelitate, astfel c n procesul diviziunii celulele fiice motenesc, de regul, aceleai gene existente i n celula mam. La organismele pluricelulare, fiecare celul a organismului posed totalitatea genelor caracteristice speciei respective, numai c n celule specializate funcioneaz anumite gene, restul gsindu-se n stare represat. La plante s-a demonstrat c att celulele diploide ale organismului, ct i cele haploide, sunt capabile s regenereze n culturi celulare ntreg organismul. Deoarece la majoritatea organismelor materialul genetic este reprezentat de ADN i numai n cazul unor virusuri este reprezentat de ARN, funcia autocatalitic a genelor este reprezentat de procesul de replicaie a acizilor nucleici. Acest proces se realizeaz dup tipul semiconservativ, prin care moleculele de ADN nou sintetizate sunt de fapt numai pe jumtate, deoarece ele sunt formate dintr-o caten polinucleotidic veche i una nou sintetizat. Existena complementaritii nucleotidelor de-a lungul macromoleculei de acizi nucleici, permite sinteza materialului genetic, cu o mare fidelitate. Numai aa se poate explica stabilitatea relativ a organismelor vii, transmiterea informaiei genetice n cursul generaiilor succesive. Funcia heterocatalitic a genelor. Const n capacitatea lor de a determina sinteze specifice de proteine, enzime i alte biomolecule. Aceasta nseamn c informaia genetic pe care o conine fiecare gen este la un moment dat decodificat i transformat ntr-o secven de aminoacizi, adic n catene polipeptidice. n fiecare celul de tip procariot sau eucariot, genele se gsesc, de regul, ntr-un singur exemplar sau form de alele, n timp ce numrul moleculelor proteice este foarte mare, de zeci sau sute de mii. Aceasta nseamn c decodificarea informaiei genetice coninut n moleculele de ADN se realizeaz cu o vitez foarte mare, nct celulele pot sintetiza rapid cantiti mari de molecule proteice. Pentru aceasta exist un sistem de amplificare, prin care genele sunt copiate n numeroase exemplare de

85

ARN-m prin fenomenul de transcripie i apoi prin translaie sunt transformate n secvene de aminoacizi, adic n catene polipeptidice. Recent s-a descoperit c la eucariote genele cuprind secvene de nucleotide informaionale denumite exoni i secvene non-informaionale denumite introni. Astfel, gena este alctuit din mai multe buci, din care numai exonii sunt transcrii n ARN-m i informaia lor genetic este decodificat i transformat n segmente de aminoacizi. n procesul de transcripie intronii sunt eliminai. De exemplu, gena ovalbuminei, a proteinei din albuul oulor de gin, este format dintr-o secven de 8 exoni i 7 introni, care alterneaz. Ca urmare, genele de la eucariote sunt mult mai mari dect cele de la procariote, deoarece au segmente de ADN non-informaional. Acest ultim tip de ADN are rol n procesul de evoluie prin duplicarea genelor. Genele de la eucariote au o structur discontinu sau n mozaic. 6.4.2. Gene suprapuse. La bacteriofagul phix 174, care are un genom circular, s-au descoperit gene suprapuse. Gena A a acestui virus bacterian este mai mare, iar gena B de dimensiuni mai reduse, fiind inclus n gene A. De asemenea genele D i E sunt suprapuse (fig. 6.11.). Aceasta nseamn c sinteza ARN-m poate ncepe din dou puncte diferite ale aceleai gene, astfel c se pot sintetiza dou catene polipeptidice de mrimi diferite.

Fig. 6.11. Harta genetic a fagului phiX 174

6.4.3. Pseudogene. n genomul unor eucariote au fost evideniate pseudogene, adic nite gene relicte, care i-au pierdut funciile i care au numai rol n meninerea arhitecturii moleculare a cromozomilor. Astfel de gene se regsesc n familia genelor hemoglobinelor, a imunoglobinelor etc. cu care se nrudesc structural. Fiind nefuncionale, pseudogenele acumuleaz mutaii cu o frecven mrit. 6.4.4. Elemente genetice transpozabile

86

Elementele genetice transpozabile sau transpozonii sunt segmente de ADN de 750-40.000 perechi de baze, capabile s circule n cadrul genomului att la procariote, ct i la eucariote i s se insere n diverse locusuri. Ele pot determina mutaii genice, restructurri cromozomale, activarea unor gene silenioase, inactivarea unor gene etc. Traspozonii sunt de dou tipuri : - traspozoni simpli, mai mici ca dimensiuni i care conin numai gena traspozazei, enzim cu ajutorul creia se realizeaz transpoziia ; - transpozoni compleci, de dimensiuni mai mari, care pe lng gena traspozazei conin una sau mai multe gene care sunt transpozate dintr-un locus n altul al genomului. Inducerea transpoziiei se realizeaz n condiii de stress provocat de agenii fizici (radiaii, ocuri de temperatur) i chimici (substane mutagene, poluante etc.) sau prin cultura de celule i esuturi pe medii artificiale. n aceste condiii se produce o destabilizare a genomului, fapt ce determin o mare variabilitate genetic. Aceasta permite o capacitate mrit de adaptare a organismelor la condiiile nefavorabile de mediu i bineneles supraviauirea. Elementele genetice transpozabile au un rol important n evoluia rapid a organismelor vii n condiii de stress.

87

CAPITOLUL VII
7. Ereditatea extranucler 7.1. Gene extranucleare n celulele eucariotelor marea majoritate a genelor, respectiv a materialului genetic sunt localizate n nucleu. Ca urmare, genele nucleare se manifest n conformitate cu legile mendeliene i cu teoria cromozomial a ereditii. O mic parte din materialul genetic celular se gsete ns plasat n citoplasm, alctuind ereditatea extracromozomial sau citoplasmatic. Fenomenul ereditii extranucleare este determinat de prezena n citoplasma celulelor a unor gene denumite gene extranucleare sau plasmagene, spre deosebire de genele nucleare sau cromogene. n timp ce o mic parte din fenomenele de ereditate extranuclear sunt controlate exclusiv de genele citoplasmatice, n cazul majoritii fenomenelor de acest tip, au un control dublu rezultat din interaciunea cromogenelor i plasmagenelor. Determinanii genetici necromiozomiali pot fi clasificai, dup natura lor, n trei grupe : 1) Gene necromozomiale localizate n diferite organite de tipul cloroplastelor i mitocomdriilor ; 2) Gene necromozomiale localizate n particole infecioase stabilizate n celul (particole kappa i lambda la parameci, particole sigma i cele ce modific sex-ratio la Drosophila etc.) ; 3) Gene necromozomiale plasate n constituieni citoplasmatici foarte mici, nedetectabili citologic (gene care determin androsterilitateea citoplasmatic). 7.1.1. Genele mitocondriale i cloroplastice Mitocondriile i cloroplastele sunt organite celulare care conin ADN sub forma unui singur cromozom, de form circular i care se replic independent de materialul genetic din nucleu. Acest ADN extranuclear se deosebete de cel nuclear prin greutatea molecular i prin raportul bazelor A+T/G+C. n cloroplaste i n mitocondrii se gsesc ribozomi asemntori celor bacterieni i se realizeaz sinteza unor proteine, pe baza informaiei genetice din ADN propriu.

88

Genele mitocondriale. Fiecare celul vegetal sau animal conine circa 100 de mitocondrii, ns n unele cazuri numrul lor este mult mai mare. De exemplu, n celulele hepatice de la mamifere exist circa 800 de mitocondrii. n mitocondrii se gsete un tip special de ADN mitocondrial (ADNmt), n care se gsesc n special genele ce codific enzimele necesare respiraiei celulare. n genomul mitocondrial de la om se gsesc un numr de 37 de gene. Genele cloroplastice. Cloroplastele sunt organite celulare n care se gsete clorofila, pigmentul verde cu rol esenial n fotosintez. Numrul de cloroplaste per celul vegetal variaz de la 1 la alga Spyrogira, la 30-50 n frunzele plantelor superioare. n cloroplaste se gsete un tip special de ADN cloroplastic (ADNcp). Cantitatea de ADNcp este de regul mai mare dect cea din mitocondrii, astfel c pot fi codificate 100-150 de polipeptide diferite. ADNcp alctuiete un singur cromozom i deci, un singur grup de linkage. Mitocondriile i cloroplastele sunt transmise ereditar exclusiv pe linie matern. 7.2. Ereditatea de tip matern CORRENS (1902) a studiat la planta Mirabilis jalopa (barba mpratului) un fenomen de apariie a unor ramuri pe care frunzele erau de culoare alb sau erau de tip amestecat, regiuni albe alternnd cu cele verzi (mozaicate) Acest ultim tip de frunze l-a denumit albomaculatus, i se transmite n descenden pe linie matern, fenomen care a fost pus n eviden prin efectuarea de ncruciri ntre tipul normal de plante, albinotice i cele albomaculatus (tabel 7.1.)
Tabelul 7.1. Rezultatele ncrucirilor ntre florile de pe ramurile de diverse tipuri de Mirabilis jalopa Ramura cu flori paterne verde (normal) Albinotic Albomaculatus Ramura cu flori materne Verde Albinotic Albomaculatus Verde Albinotic Albomaculatus Verde Albinotic Albomaculatus Generaia F1 Verde Albinotic Verde, albinotic, albomaculatus Verde Albinotic Verde, albinotic, albomaculatus Verde Albinotic Verde, albinotic, albomaculatus

89

Se observ, c descendenii seamn cu forma matern i c numai n cazul florilor materne de tip albomaculatus se produce o segregare. Aceast segregare se datorete faptului c pe ramurile de tip albomaculatus exist att celule cu cloroplaste, ct i celule lipite de cloroplaste. Plantele albinotice neavnd posibilitatea de a realiza fotosinteza, piereau de timpuriu. Transmiterea ereditar pe linie matern a caracterelor se datorete faptului c cloroplastele se gsesc exclusiv n citoplasm, se reproduc independent de nucleu i zigotul motenete tipul de plastide ale mamei. Cauza o constituie faptul c n sacul embrionar se afl primordiile cloroplastelor n citoplasma oosferei, n timp ce nucleii spermatici care realizeaz fecundarea sunt lipsii de astfel de primordii. Deosebiri importante ntre hibrizii reciproci, datorit influenei materne au fost semnalate i la animale. De exemplu, din ncruciarea unui iepe ( Equus caballus, 2n=64), cu un asin (E. asinus, 2n=62) se obine catrul (2n=63); din ncruciarea invers dintre o mgri i un armsar rezult bardoul (2 n=63). ntre catr i bardou exist deosebiri nsemnate n ceea ce privete talia, culoarea, puterea de munc etc. dei ambii hibrizi au 2n=63 de cromozomi. Non-identitatea hibrizilor reciproci interspecifici ne se poate explica dect datorit existenei unor gene extranucleare, care se transmit pe linie matern. 7.3. Merogonia Un exemplu interesant de ereditate extranuclear l constituie fenomenul de merogonie, prin care se nelege obinerea unor hibrizi prin fecundarea unei ovule enucleate cu un spermatozoid normal, hibrizi care manifest multe caractere materne. BOVERI (1899) a demonstrat acest lucru prin introducerea ntr-o ovul enucleat de arici de mare a unor spermatozoizi de la crinul de mare, obinnd larve haploide care nu aveau dect o garnitur de cromozomi provenit de nucleul patern. Larvele haploide nu erau exclusive de tip patern, dei cromozomii proveneau exclusiv de la forma tat, ci prezentau i caractere materne transmise din citoplasm (RAICU, 1980). * * * Fenomenul de transmitere a unor caractere prin intermediul citoplasmei materne se numete matroclinie. Faptul este explicabil avnd n vedere c celulele sexuale femele conin o cantitate sporit de citoplasm, n comparaie cu cele mascule, ceea ce asigur transmiterea ereditar a unor anumite nsuiri. La mamifere 90

organismul poate influena dezvoltarea hibridului n cursul vieii intrauterine. De asemenea, la plantele superioare, zigotul ncepe s se divid imediat dup fecundare, formnd embrionul nc din perioada cnd acesta se afl n organismul matern. Pe de alt parte, la Angiosperme endospermul este format din celule triploide (3n), cu dou garnituri de cromozomi (2n) de origine matern i numai o garnitur (n) de origine patern, ceea ce face ca influena endospermului s fie mai pronunat pe linie matern. Esenial ns n ereditatea extranuclear este faptul c n citoplasm se localizeaz genomuri specifice (cloroplaste, mitocondrial) sau factori genetici necromozomali, cu aparat genetic propriu, care au rol direct n ereditate. 7.4. Gene extranucleare localizate n particole infecioase n diferite organisme au fost evideniate gene necromozomiale localizate n particole de tip infecios care sunt particolele kappa (K), lambda () i miu () la parameci, particole care afecteaz sex-ratio i cele de tip sigma la Drosophila melanogaster etc. La parameci s-au pus n eviden mai multe particole infecioase. SONNEBORG (1945) a studiat la Paramecium aurela modul cum se produce segregarea la ncruciarea ntre dou tipuri de indivizi : tipul rezistent care segreg n mediul nconjurtor o substan toxic denumit paramecin, care nu aparine tipului sensibil . Capacitatea de a segrega paramecina se datorete unor particole kappa aflate n citoplasm i care se transmit pe linie matern, lipsind complet la cele sensibile. 7.5. Gene extranucleare nelocalizate Pe lng determinani genetici extranucleari localizai n diferite organite celulare exist, de asemenea, o seam de fenomene de ereditate extranuclear crora nu li s-a descoperit suportul celular corespunztor. pentru aceste fenomene poate fi citat i androsteriltatea citoplasmatic la porumb, sorg, ceap, petunii etc. Androsterilitatea sau sterilitatea mascul face ca polenizarea strin s devin obligatorie, deoarece gametul mascul (polenul) este nefuncional. Androsterilitatea duce la modificri profunde ale florii i n special a organelor sexuale mascule (stamine, grunciori de polen), favoriznd apariia polenului steril, incapabil de fecundare. Fenomenul androsterilitii citoplasmatice a fost descoperit n 1904 de CORRENS la planta Satureja hortensis. Ulterior fenomenul androsterilitii a fost remarcat la mai multe specii de plante : ceap, porumb, in, sorg, sfecla de zahr, gru .a. studiul acestor plante au evideniat trei tipuri de androsteri

91

ereditari (fig. 7.1.) i anume : citoplasmatic, nucleo-citoplasmatic i nuclear.

Fig. 7.1.

Androsteriltatea nuclear (tipul I) este determinat de gene recesive localizate n nucleu (msms). Aceste plante nu se pot reproduce singure neavnd polen i de aceea pentru a le pstra ele se ncrucieaz cu plante androfertile heterozigote (Msms), obinndu-se n descendena F1, 50% plante homozigote androsterile (msms) i 50% plante heterozigote (Msms) androfertile. Androsterilitatea citoplasmatic (tipul II) este determinat de gene localizate n citoplasm. prin ncruciarea acestor plante androsterile (S), transmis prin citoplasm, cu plante normale fertile (F), n descenden domin androsteriltatea (S) transmis prin citoplasm. Ca urmare, plantele ce posed acest tip de androsteriltate se reproduc numai pe cale vegetativ sau prin ncruciri cu alte plante androfertile. Sterilitatea mascul citoplasmatic poate fi transmis de la un soi la altul prin ncruciri repetate, n care genitorul patern se folosete mereu soiul ce trebuie transformat. De exemplu, soiul de ceap Crystal Wax poate fi transformat n soi androsteril prin ncruciarea cu soiul Rou italian (cu androsterilitate citoplasmatic) (fig. 7.2.) Folosind ca genitor matern soiul Rou italian i ca genitor patern Crystal Wax se obine n prima generaie androsteril, care este n ceea ce privete nucleul, 50% de tip Crystal Wax. retoncrucind aceast generaie (F1) cu Crystal Wax, descendena va fi androsteril dar cu nucleul n proporie de 75% de tipul Crystal wax. repetnd retroncruciarea mai multe generaii se obine o plant care va fi androsteril, dar cu genomul de la 92

Crystal Wax. Experiena prezentat constituie o certitudine n ceea ce privete responsabilitatea plasmagenelor n expresia caracterului de androsterilitate.

Fig. 7.2.

Androsterilitatea citoplasmatic poate fi utilizat cu succes n producerea de semine hibride la speciile la care plantele F1 se cultiv pentru diverse organe vegetative, cum sunt rdcinile, tulpinile, frunzele sau florile. Plantele hibride F1 sunt viguroase, prezentnd organe vegetative bine dezvoltate. Androsterilitatea nucleo-citoplasmatic (tipul III) este determinat de interaciunea unor factori ereditari, situai att n nucleu, ct i n citoplasm. Acest tip de androsterilitate difer n manifestare fa de cea citoplasmatic prin aceea c descendentele plantelor androsterile nu sunt n mod obligatoriu androsterile. Prin ncruciarea plantelor androsterile ca genitori materni cu plante fertile (F) heterozigote (Rfrf) se obine o descenden care n F1 este 50% androfertil (F, Rfrf) i 50% steril homozogot (S, rfrf). n acest fel tipul de androsterilitate poate fi pstrat la descendeni.

93

n sfrit, dac se ncrucieaz plante androsterile (S, rfrf) cu plante androfertile dar care nu au capacitatea de restaurare a polenului (F, rfrf) se obine n F1 o descenden androsteril i homozigot (S, rfrf), deoarece, dup cum s-a vzut, androsterilitatea determinat de factori din nucleu se transmite ca un caracter minor. Acest tip aparine de fapt androsterilitii citoplasmatice. Androsterilitatea de tipul III (nucleo-citoplasmatic) este utilizat n producerea de hibrizi la porumb, sorg i alte plante, avnd importan economic. 7.6. Caracteristicile ereditii citoplasmatice n general, fenomenul ereditii citoplasmatice se caracterizeaz prin : - transmitarea caracterelor n alte proporii dect cele mendeliene, i anume n mod uniparental, adic de la printele care particip cu cea mai mare cantitate de citoplasm (fig.7.3.);

Fig. 7.3.

94

manifestarea n F1 a caracterelor genitorului matern, indiferent de constituia genetic a organismelor respective ; fenomenul de linkage este absent vis--vis de grupele reprezentate de cromozomii nucleari, fapt ce face s nu se poat ntocmi hri genetice pentru genele necromozomiale ; manifestarea unor caractere fenotipice depinznd de constituia genotipic a organismului matern, independent de genotipul propriu ; posibilitatea apariiei mutaiilor spontane sau induse artificial la genele extranucleare.

O seam de cercetri relativ recente au demonstrat existena n citoplasm a unui aparat genetic propriu, realtiv independent de cel nuclear. Deosebirile dintre ADN nuclear i ADN din organitele celulare se manifest n imposibilitatea obinerii de hibrizi moleculari ntre ADN nuclear i ADN din organite.

CAPITOLUL VIII
8. Reproducerea plantelor de cultur 8.1. Sistemele de reproducere i implicaiile lor genetice O variabilitate genetic corespunztoare nu poate fi creat fr existena reproducerii sexuate. Majoritatea plantelor de cultur se reproduc pe cale sexuat, prin fuziunea a doi gamei identici sau diferii din punct de vedere genetic, pentru a da natere unui zigot. n general, suprafaa receptoare a stigmatului n acel moment este apt de a primi polen de la planta care-l poart (autopolen), sau polenul plantelor vecine (alopolen). n aceast situaie, n mod normal, sunt realizate autofecundri i fecundri ncruciate. n cele mai multe cazuri reglrile biologice impun o predominan a unuia sau a celuilalt sistem de polenizare, iar n funcie de natura genetic a gameilor vor rezulta indivizi homozigoi sau heterozigoi (SAVATTI, 1983). Dup modul n care are loc polenizarea i fecundarea, speciile se mpart n dou grupe: autogame i alogame. Trebuie menionat faptul c autogamia i alogamia nu este perfect, n natur existnd specii ce manifest i un anumit grad de auto- sau alogamie.

95

n unele cazuri, speciile au scpat sexualitii prin adaptarea unor regimuri de reproducere asexuat, sau chiar pe calea multiplicrii vegetative. 8.2. Bazele genetice ale plantelor autogame Speciile autogame au n general flori hermafrodite, organele sexuale ajungnd n acelai timp la maturitate (homogamie). Ele se reproduc prin autogamie natural, adic prin unirea a doi gamei sexuali diferiti, dar identici genetic, formai pe acelai individ, cel mai adesea n aceeai floare. Un mare numr de specii se reproduc prin autopolenizare. Sunt considerate autogame speciile la care fecundarea strin nu depete n mod obinuit 4%, cum sunt: grul, orzul, ovrul, orezul, inul, mazrea, soia, fasolea, tutunul, tomatele .a. Incidena alogamiei la speciile autogame depinde de genotip, factorii de mediu i interaciunea dintre acetia. Procentul tinde s creasc n condiiile care favorizeaz, mai ales, perioada prelungit de nflorire i de deschidere a florilor. Mecanismele care asigur autogamia pot fi riguros fixate la speciile cleistogame, la care florile nu se deschid naintea polenizrii. Anterele, situate la nivelul stigmatului, asigur polenizarea n interiorul corolei. n aceast categorie de specii, menionm violetele i numeroasele specii floricole spontane de primvar, care emit i flori de var, cleistogame, mai mici, destinate s produc semine. n numeroase cazuri, florile fr a fi cleistogame, nu se deschid dect dup ce fecundaia a fost realizat; este cazul grului unde inflorescenele sunt nchise n glume, iar florile n glumele, a cror deschidere se realizeaz tardiv. La fel, n cazul inului, fecundaia are loc naintea deschiderii florilor. Un alt dispozitiv floral, l prezint leguminoasele autogame, la care, n caren este nchis pistilul, nconjurat de cele zece stamine. La Solanaceae, la tomate, florile sunt aparent casmogame, adic floarea lor posed o corol deschis n momentul fecundrii, ns pistilul, n cursul creterii sale, trece prin tubul format din anterele sale (DEMARLY, 1977). Dup cum am mai menionat, descendenii provenii de la plantele autogame homozigote, sunt identici din punct de vedere genetic, toate variaiile sunt datorate modificaiilor. n natur se pot ntlni rar linii pure; cultivarele autogame sunt n majoritatea cazurilor constituite dintr-un amestec de linii pure. Datorit autogamiei, ele prezint o omogenitate i o stabilitate mai pronunat dect cultivarele alogame. 8.2.1. Teoria liniilor pure (Structura genetic a descendenei la plantele autogame) 96

Teoria a fost elaborat de botanistul danez JOHANNSEN n 1903, plecndu-se de la supoziia c exist o variabilitate i la plantele autogame, aparinnd aceleai varietai. Pentru a stabili acest fapt, el a aplicat metoda seleciei individuale la cultivarul de fasole Princess. Descendenii plantelor alese au fost diferii n ceea ce privete nlimea, perioada de vegetaie, mrimea seminelor i alte caractere. JOHANNSEN a difereniat 19 tipuri de plante, foarte diferite ntre ele, numindu-le linii. Desecendenii acestor linii au fost foarte uniformi din punct de vedere genetic, capabili s transmit aceast uniformitate i descendentele lor, fapt ce a fcut s fie denumite linii pure. JOHANNSEN a fost interesat s estimeze efectele seleciei n cadrul unei linii pure. El a mprit seminele unei linii pure n trei grupe, mari, mijlocii i mici. Cele care au provenit din semine mari produc i semine mijlocii i mici. Acelai lucru s-a ntmplat i n cazul descendenelor provenite din celelalte categorii de smn. Privitor la producia de semine pe unitatea de suprafa, cele trei grupe de descendeni au produs aproximativ aceeai cantitate de smn. Rezultatele obinute pe parcursul a ase ani de selecie individual, n cadrul unei linii pure, au artat c nu apar diferene semnificative n greutatea medie a seminelor care provin din semine mari sau mici. JOHANNSEN a concluzionat c orice ncercare de selecie n cadrul unei linii pure este ineficient. Rezultatele sale sunt n concordan cu constituia genetic a liniilor pure. O linie pur este constituit din descendenii unei singure plante homozigote i toi indivizii sunt homozigoi, avnd acelai genotip. Homozigoia lor este rezultatul autopolenizrii, a unirii gameilor de sex opus cu alele identice din punct de vedere genetic (tabelul 8.1.).
Tabelul 8.1. Efectele seleciei pe parcursul a ase generaii, ntr-o linie a varietii Princess (JOHANNSEN, dup ALLARD, 1969)
Anul de cultur Greutatea medie a seminelor parentale
mici mari
Greutatea medie a seminelor

Diferena

descendenilor
mici mari

Diferena

1902 1903 1904 1905 1906 1907

60 55 50 43 46 56

70 80 87 73 84 81

10 25 37 30 38 25

63,15 75,19 54,59 63,55 74,38 69,07

64,85 70,88 56,68 63,64 73,00 67,66

+1,70 -4,31 +2,09 -0,09 -1,38 -1,41

97

Din moment ce toi indivizii dintr-o linie pur sunt homozigoi, neexistnd o variabilitate genetic n cadrul lor, selecia ntr-o linie pur va trebui s fie inevitabil ineficient. Variabilitatea care se observ la o linie pur se datoreaz efectului factorilor de mediu, selecia putnd avea efect numai dac materialul ales posed o variabilitate heritabil (MAYO, 1980; ARDELEAN, 1986). n mod normal, o linie pur nu este absolut uniform i permanent homozigot pentru toate caracterele. n silvicultur obinerea de linii pure la speciile hermafrodite - tei, salcm, ulmi, cirei .a. se dovedete dificil, deoarece, n natur autogamia acestora nu este perfect, iar vrsta naintat a maternitii lor limiteaz mult posibilitile de selecie. Schimbrile heritabile ntr-o linie pur au loc datorit mutaiilor i polenizrii libere. Mutaiile spontane au loc n mod regulat cu o anumit frecven/gen/generaie, iar un anumit procent de polenizare liber este inevitabil, fenomene ce pot constitui surse de variabilitate genetic n linia respectiv. O alt surs de variabilitate ntr-o linie pur poate fi dat de heterozigotia rezidual, rmas n urma hibridrii formelor parentale. n cazul n care selecia natural va favoriza heterozigoii, ei vor manifesta o productivitate mai mare, dnd mai muli descendeni, fenomen ce va fi reflectat n meninerea mai ndelungat a heterozigotiei dect se ateapt n mod teoretic. Meninerea variaiei genetice n cadrul unei linii autogame, va depinde pe lng avantajul dat de nivelul heterozigotiei i de avantajul competitiv (MAYO, 1980). Se poate afirma c toate sursele de variabilitate genetic dintr-o linie pur, pot s se manifeste cu o frecven foarte sczut, aa c o asemenea linie va prezenta un nalt grad de uniformitate n ansamblul ei. Se poate concluziona c selecia aplicat ntr-o singur varietate a unei specii autogame (gru, orz, soia etc.) va fi eficient numai n cazul n care varietatea nu este constituit dintr-o linie pur, ci din cteva linii diferite n unele caractere. Odat ce se obine o linie pur, selecia n cadrul ei va fi ineficient, fiind mai profitabil s se ncerce o recombinare genetic prin hibridare, sau prin alte metode convenionale sau neconvenionale, dect s se conteze pe schimbri genetice ce pot avea loc ntr-o perioad ndelungat de timp. Trebuie menionat faptul c, timp de muli ani, s-a pus accentul pe crearea cultivarelor tip linie pur, considerate extrem de uniforme i performante. n ultimele decenii, s-a ajuns la concluzia c o uniformitate excesiv nu este necesar, din contra, uneori este de nedorit. Cultivarele tip linie pur, extinse pe areale geografice ntinse, au manifestat o vulnerabilitate genetic evident. Aceast schimbare de concepie se bazeaz pe observaia c un soi ce se caracterizeaz printr-o variabilitate genetic mai pronunat are o mai mare adaptabilitate ecologic, realiznd producii mai stabile n condiii climatice schimbate (POEHLMAN, 1989). 98

8.2.2. Semnificaia genetic a hibridrii la plantele autogame ncruciarea sau hibridarea, este rezultanta fuziunii gameilor genetic diferii, rezultnd organisme hibride, heterozigote pentru una sau mai multe gene alele. n cazul unui organism autogam, dup hibridare, n urma autopolenizrii, homozigotia se instaleaz relativ rapid (fig. 8.1.). Se constat c n F1 toi indivizii sunt heterozigoi avnd constituia genetic Aa. Plantele vor avea dou tipuri de gamei, A i a. Autofecundarea n F1 ofer anse egale fiecrui gamet de a se uni cu fiecare tip de gamet. Rezultanta acestui eveniment este generaia F2, constituit din genotipurile: 25% AA:50% Aa:25% aa. Proporia genotipurilor homozigote (AA i aa) fa de cele heterozigote (Aa) este 50%:50%. n generaiile urmtoare de autopolenizare indivizii heterozigoi vor produce descendeni homo i heterozigoi (AA i aa, respectiv Aa), numrul homozigoilor crescnd n fiecare generaie de autofecundare cu 1/2 din diferena dintre cele dou generaii precedente, n timp ce procentul heterozigoilor scade cu 1/2. Dup cinci generaii de autofecundare vor rezulta 96,9% indivizi homozigoi, iar dup zece generaii 99,9% (tabelul 8.2.).
F1 F2 F3 F4 F5 F6 Aa 25%AA 25%AA 37,5%AA 43,75%AA 46,875%AA 50%Aa 12,5%AA 6,25%AA 3,125%AA 1,562%AA 25%aa 25%aa 37,5%aa 43,75%aa 46,875%aa

25%Aa 12,5%Aa 6,26%Aa 3,125%Aa

12,5%aa 6,25%aa 3,125%aa 1,562%aa

Tabelul 8.2.
Fig. 8.1. Proporia genotipurilor homozigote i heterozigote dup cteva generaii de autofecundare (dup POEHLMAN, 1989)

Efectul autofecundrii asupra unei populaii hibride, constituit din genotipuri heterozigote de tipul Aa (dup BOROJEVI, 1990)

Generaia 0 1 2 3 4 5 10

Genotipurile AA 1/4 3/8 7/16 15/32 31/64 1023/2048

Aa 1 2/4 2/8 2/16 2/32 2/64 2/2048

aa 1/4 3/8 7/16 15/32 31/64 1023/2046

Numrul heterozigoilor 1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/024

Procentul homozigoilor 0 50,0 75,0 87,5 93,8 96,9 99,9

99

:
n (2n-1)2n-1 2/2n-1=1/2n (2n-1)2n+1 1/2n

Dac formele parentale difer printr-un numr mare de gene alele, homozigoia va fi realizabil relativ mai tardiv. n cazul diferenelor de 100 de perechi de gene, populaia va avea 50% de indivizi homozigoi, pentru toate genele, dup apte generaii de autopolenizare (fig. 8.2.)

Procentul de homozigoti

Generaii de consangvinizare

Fig. 8.2. Procentul de indivizi homozigoi dup mai multe generaii de autofecundare, cnd numrul perechilor de gene ce se motenesc independent este de 1,5,10,20,40 sau 100 (dup ALLARD, 1960)

Procentul indivizilor homozigoi (ho)/generaie, dup hibridare, poate fi calculat cu formula: ho = (1-he)n, unde (he) este procentul indivizilor heterozigoi i (n) este numrul de loci prin care difer genitorii. Avnd n vedere c numrul heterozigoilor scade cu jumtate n fiecare generaie 100

de autofecundare, rezult c he = (1/2)g, unde (g) reprezint numrul generaiilor de autofecundare. Pentru exemplificare, s considerm c prinii difer n doi loci (n), procentul indivizilor homozigoi dup trei generaii de autofecundare (g) va fi:

ho = (1 (1/2)3)2 = 0,767 = 76,7% Chiar dac exist diferene de 40 de loci, peste 50 % din linii vor fi homozigote n F3 pentru toi locii; n generaia F 10 diferenele n ceea ce privete numrul de loci nu mai sunt relevante (vezi fig. 8.2.). Formula menionat, este aplicabil numai n cazul n care toate genotipurile au aceeai rat de supravieuire i dac genele nu sunt linkate. 8.2.3. Motenirea caracterelor calitative Caracterele calitative sau alternative sunt acelea a cror apariie este condiionat de aciunea genelor cu un efect puternic, aa numitele gene majore. Culoarea i forma florilor, fructelor, frunzelor i altor pri din plant i, uneori, chiar i rezistena la patogeni pot fi ncadrate n caracterele calitative. Din moment ce nu exist cultivare ideale care s posede combinaii de gene i caracteristici satisfctoare pentru o lung perioad de timp, apare necesitatea crerii n mod continu, de noi recombinri genetice i pe baza lor, obinerea de cultivare cu caracteristici noi, mai valoroase. Pentru exemplificare, s considerm ca obiectiv de realizat obinerea unui cultivar de orz cu dou rnduri, care s posede rezistent la rugin. Pentru aceasta se presupune c ne stau la dispoziie un soi de orz de dou rnduri, sensibil la rugini i o varietate de orz (de ase rnduri) rezistent la rugini. Se tie c locusul genelor pentru structura spicului este localizat ntr-un singur cromozom i c gena care determin apariia spicului cu dou rnduri de boabe, este dominanta (D), fa de gena care determin apariia a ase rnduri de boabe (d). Locusul genelor pentru rezisten este dominant (R), fa de gena ce marcheaz susceptibilitatea la rugini (r).

101

Dac varietatea de orz susceptibil la rugini este utilizat ca form matern, pentru a preveni autofecundarea, se efectueaz castrarea manual sau aplicarea unui gametocid. Planul de hibridare va fi urmtorul: P1 gamei F1 DDrr ddRR Dr dR DdRr P2

Se constat c n generaia F1 au aprut plante rezistente la rugini. Avnd n vedere c prinii difer n dou perechi de gene alele, generaia F 1 este heterozigot, segregnd n F2, dup urmtorul model mendelian:

F1 gamei DR Dr dR dr

Dd Rrautofecundat DR Dr

dR

Dr

DDRR DDRr DdRR DdRr

DDRr DDrr DdRr Ddrr

DdRR DdRr ddRR ddRr

DdRr Ddrr ddRr ddrr

Din cele 16 combinaii posibile, 9/16 din plante vor poseda combinaia de gene dorite, rezistena la rugini i dou rnduri de semine. Fenotipul celor 9/16 combinaii nu vor avea acelai genotip. Numai 1/16 va fi homozigot pentru ambele perechi de gene dominante (RRDD). Avnd n vedere c genele ce determin apariia plantelor cu dou rnduri i gene pentru rezistent sunt dominante, fa de alelele lor recesive, starea homozigot nu va putea fi separat din punct de vedere fenotipic de cea heterozigot. De aceea, n generaia F2 apare necesitatea efecturii alegerii tuturor plantelor rezistente i cu dou rnduri (D-R-) i numai n generaia F3 va fi posibil selecia genotipurilor pentru ambele caractere 102

dorite, care nu vor segrega n aceast descenden n ceea ce privete caracterele (DDRR). Dac generaia F4 nu segreg, se poate considera c s-a obinut o linie de orz de dou rnduri i rezistena la rugini. Aceast linie multiplicat n urmtoarele generaii, dac va manifesta o calitate i producie satisfctoare, se poate considera c s-a obinut un cultivar nou. Deoarece s-a urmrit mbinarea ntr-un singur genotip a dou gene majore, frecvena unor astfel de fenotipuri n F 2 a fost mult mai mare dect al altor fenotipuri, 9/16 din 16/16. Datorit acestui fapt, nu apare necesitatea cultivrii unei populaii numeroase de plante F 2, pentru a gsi recombinarea favorabil a genelor. De exemplu, o populaie de 300 de plante va conine 9/16300 = 168 plante rezistente i cu dou rnduri, din care 18 vor fi DDRR (1/16300). Cazul prezentat poate fi considerat cel mai simplu exemplu. n practic, de obicei, se urmrete obinerea recombinrilor utiliznd trei sau mai multe caractere. Spre exemplificare, s considerm c se urmrete obinerea unui cultivar de orz cu dou rnduri (DD), rezistent la rugini (RR) i cu spicul erect (nn). n acest caz, planul de hibridare va fi: P1 gamei F1 DDrrnn ddRRNN DrndRN DrRrNn P2

n generaia F1 plantele vor prezenta cte dou rnduri de boabe, rezisten i spic erect. Pentru a se realiza recombinrile dorite, generaia F1 trebuie cultivat fr nici o intervenie. Plantele F 1, cu constituia genetic DdRrNn, vor produce opt tipuri de gamei: DRN,DRn, DrN, Drn, dRN, dRn, drN, drn. Aceti gamei pe baza recombinrilor ntmpltoare vor produce 64 combinaii n F2. Dintre acestea, 9/64 vor prezenta recombinarea D R nn. n continuare plantele de orz rezistente i cu spicul erect vor trebui reinute i supuse n continuare unei selecii pn se va ajunge la starea complet de homozigoie, pentru toate caracterele. Din punct de vedere teoretic, n cazul n care avem de a face cu trei caractere i cu o recombinare a genelor cu o frecven de 9/64, este necesar s avem un numr suficient de plante pentru a se asigura combinarea de gene dorit. n cazul unei populaii de 300 de plante, n F 2 frecvena recombinrii ateptate va fi de 9/64 300 = 42 plante. Acest 103

numr poate fi considerat prea mic deoarece pierderea incidental a ctorva tipuri dorite, vor scdea ansele de succes. Datorit acestui fapt este necesar cultivarea unei populaii de circa 1000 plante n F2, pentru a avea certitudinea c se va asigura un numr aproximativ de 100 plante cu recombinarea dorit (9/641.000). 8.2.5. Motenirea caracterelor cantitative Motenirea caracterelor dorite, cum sunt talia plantelor, numrul de semine, coninutul n proteine, procentul de ulei, producia de SU, producia de semine etc. aparin grupului de caractere cantitative, sau metrice. Aceste caractere sunt controlate de cteva gene, fiecare contribuind la formarea i expresia caracterului n cauz, acionnd n mod obinuit aditiv. Asemenea gene, datorit efectelor individuale mai puin pronunate se numesc gene minore. Din moment ce ele acioneaz mpreun, se numesc i poligene. Formarea i expresia unui caracter cantitativ depinde i de factorii de mediu. Aceti factori sunt capabili s modifice efectele poligenelor. Datorit acestui fapt, pot exista diferene privind nlimea la o linie consangvinizat, numrul de semine, coninutul n protein i, n special producia total. Din momentul n care o linie consangvinizat este practic homozigot lipsindu-i variabilitatea genetic, orice variaie ce se manifest se datorete factorilor de mediu i se exprim sub forma unei distribuii cu frecven normal. O asemenea manifestare a caracterelor cantiative complic lucrrile de selecie dup hibridare, deoarece variabilitatea datorat i factorilor de meniu este meninut n descenden, pe cnd succesul n ameliorare depinde de efectul genetic i heritabilitatea caracterului selecionat. Un exemplu de motenire a unui caracter cantitativ l constituie transmiterea caracterului de talie, la gru, ilustrndu-se efectul genelor minore i apariia variabilitii. Descendenii F1 ai varietii de gru M910, cu o nlime medie a paiului de 131 cm i a varietii Acciaio, cu 57 cm, au o nlime medie de 102,7 cm, ceea ce evideniaz dominana parial a printelui mai nalt. Trebuie menionat c nu toate plantele F 1 au o talie de 103 cm, dar prezint o variabilitate mai pronunat dect cele dou forme parentale. n generaia F2 valoarea medie a nlimii tulpinilor a fost de 84 cm, intermediar ntre cei doi genitori. Variabilitatea n generaia F 2 a fost continu i mai mare dect la formele genitoare i generaia F 1. 104

Variabilitatea n F2 se datorete, n principal, efectului segregrii genelor. Dup cum s-a menionat, aciunea genelor pentru determinarea unui caracter cantitativ sunt, de obicei, aditive, iar cnd efectele ambelor gene sunt aditive se formeaz un fenotip care reprezint suma efectelor pozitive i negative ale genelor individuale. Anumite gene pentru caracterele cantitative pot exercita un efect dominant. n acest caz, valoarea medie a generaiei F 1 este apropiat de valoarea medie a oricrui printe i distribuia frecvenelor n generaia F2 nu va manifesta o variaie simetric continu, ci una asimetric, conducnd la printele care posed genele dominante. n cazul dominanei complete, valoarea fenotipic a generaiei F1, egaleaz valoarea unuia dintre prini (BOROJEVI, 1990). Cheia succesului n procesul de selecie este dat de variabilitatea genetic ce se manifest n generaia F2. n exemplul dat, privind nlimea tulpinii, variabilitatea generaiei F1 a fost mare. Distribuia frecvenelor a oferit posibilitatea selecionrii genotipurilor cu o nlime a tulpinilor diferit de cea a genotipului B, pn la nlimea tulpinii ntre 70 i 90 cm, suficient de rezistente la cdere. Cercetrile din ultimele decenii sub aspect citogenetic i a geneticii moleculare, au evideniat faptul c nu toate caracterele cantitative sunt controlate exclusiv de gene minore; unele dintre ele pot fi controlate i de gene majore. Au fost evideniate un numr de zece gene majore care sunt implicate n controlul nlimii tulpinii la gru, caracter tipic cantitativ. Un exemplu n acest sens, l reprezint genele Rht, gsite la soiul japonez Norin 10 i care transmite fenomenul de reducere a taliei (ALLAN, 1970). Studiile lui Gale i Youssefian (1985) efectuate pe plante monosomice, au evideniat c genele Rht1 i Rht3 sunt localizate pe cromozomul 4A, Rht2 i Rht10 pe 4D i Rht8, pe 2D. Gene majore au fost identificate ca influennd vernalizarea (Vrn), stadiul fotoperiodic (Ppd) i rezistena la iernare (PUGSLEY, 1983; MAYSTRENKO, 1978). Poziia frunzelor este controlat de cel puin dou gene majore, poziia orizontal fiind dominant fa de cea erect (BOJOVI, 1990). Din cele menionate reiese faptul c succesul n ameliorarea unor caractere cantitative depinde nu numai de relaia genetic i cea indus de mediu, dar i de componentele variabilitii genotipice. 8.3. Bazele genetice ale plantelor alogame

105

Mecanismele fecundrii ncruciate duc la meninerea stadiului de heterozigoie, deci a unei mai bune vigori hibride. n msura n care, pentru o specie, aceast vigoare reprezint un avantaj selectiv, toate mutaiile care favorizeaz alogamia vor avea o puternic valoare selectiv. La speciile alogame, polenul poate fi rspndit de ctre insecte (plante entomofile), vnt (plante anemofile), sau n unele cazuri de ap. La numeroase plante monoice sau hermafrodite, regimul de alogamie este asigurat de un decalaj existent ntre organele sexuale mascule i femele. Aceast dichogamie ia dou forme: protogenie, cnd organul femel este receptiv nainte de dehiscena anterelor aceleai flori, ca n cazul unor graminee; protandria, cnd organele mascule sunt apte pentru reproducie nainte ca stigmatul s fie receptiv. n cazul n care nu exist un decalaj ntre maturarea celor dou sexe, apare un alt tip de mecanism genetic, incompatibilitatea, care frneaz mai mult sau mai puin, creterea tubului polinic n cazul autopolenului, n raport cu alopolenul. n natur se gsesc diferite dispozitive biologice a cror existen se opune autofecundrii, datorit unor relative avantaje pe care le prezint alogamia, fa de autogamie. Principalul avantaj este meninerea n cadrul populaiilor alogame a unei mai mari rezerve de variabilitate, datorit n principal prezenei genelor recesive, mai puin favorabile n condiii obinuite, dar care pot deveni favorabile n condiii schimbate. Acest fapt determin supleea evolutiv a populaiilor alogame (NAGHIU, 1978). 8.3.1. Incompatibilitatea Pe lng mecanismele morfologice i mecanice care asigur polenizarea liber, mai exist i un mecanism fiziologic, condiionat genetic, care genereaz efectul de incompatibilitate. Acest fenomen poate fi definit ca o reacie intim legat de polen i esuturile femele, naintea fecundaiei. Incompatibilitatea sexual poate fi definit c incapacitatea organismelor hermafrodite de a produce zigoi, cu toate c gameii masculi i femelei sunt normali fertili, putnd n anumite condiii s fuzioneze. Aceast inhibiie, sau mpiedecarea fecundrii n cadrul sistemului de ncruciare sexual se bazeaz pe mecanisme fiziologice dirijate de genele sau alelele incompatibilitii i nu exclude influena condiiilor de mediu asupra procesului de reacie care vizeaz exprimarea genelor implicate. 106

Incompatibilitatea se mparte n dou categorii: - incompatibiltatea intraspecific; - incompatibiltatea interspecific. Incompatibilitatea intraspecific sau autoincompatibilitatea este un sistem homogenic, determinat de alelele multiple ale unui locus. n procesul fecundrii, dac ambii parteneri au alele identice de incompatibilitate, rezult o reacie de incompatibilitate. Incompatibilitatea interspecific este un sistem heterogenic, bazndu-se pe cel puin dou gene situate n locusuri diferite. Acest sistem constituie o barier n apariia de rase i specii noi. Uneori, sistemele genetice care impun polenizarea ncruciat pot fi asociate cu caracteristici morfologice care faciliteaz acest tip de polenizare. Dup locul, respectiv perioada de timp a reaciei de incompatibilitate, SEARS (dup LISKENS i KROH, 1976), o clasific astfel: inhibarea se produce nainte sau la germinarea polenului, la suprafaa stigmatului; tubul polinic este stopat n procesul de cretere, cnd se gsete n esutul stilar; reacia de incompatibilitate se produce n momentul intrrii tubului polinic n ovar; ca urmare a reaciei de incompatibilitate, dup cariogamie, intervine avortarea ovulei fecundate, sau a embrionului. Mecanismul autoincompatibilitii a fost confirmat n cazul a peste 3.000 de specii, aparinnd la circa 68 de familii, mai ales la cele cultivate din familia Cruciferae, Saxifragaceae, Rosaceae, Solanacea, Compositae i Liliaceae (BREWBAKER, 1959; FRANKEL i GALUN, 1977). LEWIS (1954) a clasificat incompatibilitatea plantelor n dou grupe mari: heteromorfic i homomorfic. 8.3.1.1. Incompatibilitatea heteromorfic Existena variaiei structurii florale din cadrul aceleai specii, a fost aprofundat dup publicarea studiilor lui HILDEBRAND n 1869 i a observaiilor lui DARWIN, n 1877, constatndu-se existena unor relaii ntre variaiile florale i obstrucionarea autopolenizrii. Cu toate c heteromorfismul poate induce un numr mare de caractere (lungimea anterelor, mrimea grunciorilor de polen, lungimea stilului, suprafaa stigmatic), incompatibilitatea heteromorfic se 107

bazeaz pe diferena de lungime a stilului i stigmatului, fenomen denumit heterostilie. LEWIS (1954) a denumit tipul de floare cu stilul lung i antere scurte, pin, iar cellalt tip de floare cu antere lungi i stil scurt, thrum. Constituia genetic a tipului pin este ss, iar cea a tipului thrum Ss, S fiind dominant fa de s (fig. 8.4.).

Fig. 8.4. Sistemul heteromorfic de incompatibilitate (dup BRIGGS i KNOWLES, 1967)

Polenizrile sunt posibile numai ntre urmtoarele genotipuri: (1) (2) pin (ss) 1 pin (ss) thrum (Ss) 1 pin (ss) x : x : thrum (Ss) 1 thrum (Ss) pin (ss) 1 thrum (Ss)

Combinaiile pin x pin sau thrum x thrum sunt incompatibile, ceea ce nseamn c genotipul SS nu apare. Importana acestui tip de incompati-bilitate este minor pentru procesul de ameliorare. 108

8.3.1.2. Incompatibilitatea homomorfic La angiosperme, nainte ca gametofitul mascul (polenul), s ntlneasc gametofitul femel, acesta trebuie s ptrund prin esutul sporofit (pistilul), pentru a ajunge la acesta din urm. Pistilul constituie seciunea unde, cu mici excepii, apare fenomenul de incompatibilitate. Mai mult, din moment ce pistilul este un esut diploid sporifitic, reacia de incompatibilitate este controlat genetic de genom, sau sporofitic. Pe de alt parte, gametofitul mascul (polenul) poart cel puin cteva componente din sporofitul pe care care s-a dezvoltat. El poart totodat i citoplasma printelui sporofit. Astfel, reactivitatea incompatibilitii polenului poate fi controlat genetic sau de genomul gametofitului patern. Modificarea genetic, n declanarea reaciilor de incompatibilitate sunt legate de procesele reglrii morfogenezei grunciorilor de polen. Se distinge o condiie numit gametofitic, n care specificitatea fiecrui gruncior de polen este determinat de alela Sx, pe care o conine. Din contra, se consider condiia sporofitic, cazul n care toi grunciorii de polen ale aceleai plante, au aceeai specificitate, determinat de genotipul SxSy ale acesteia. A. Incompatibilitatea gametofitic Acest tip de incompatibilitate a fost menionat pentru prima dat la Nicotiana sanderae, de ctre EAST i MANGELSDORF (dup BRIGGS i KNOWLES, 1967) pentru ca ulterior s fie semnalat i la trifoiul rou, trifoiul alb, sfecla de zahr, tutun, cartof, ierburi perene etc. Posibilitatea polenului de a fecunda ovula depinde de o serie de alele la un singur locus, denumite S1,S2,S3..Sn. esutul stilar diploid va avea oricare dintre aceste dou alele din serie, dar niciodat aceeai alel. Grunciorul de polen va avea numai o alel, deoarece este haploid. Dac esutul stilar conine o alel identic cu cel al grunciorului de polen, atunci tubul polinic nu poate penetra n stigmat i polenizarea nu poate avea loc, deoarece creterea acestuia este inhibat. Polenizarea poate avea loc dac alela din grunciorul de polen difer de cel al stigmatului i al ovarului. Capacitatea de fecundare a polenului depinde de propriul lui genotip. De aceea, ncruciarea plantelor cu o constituie genetic diferit poate fi: (1) complet incompatibil; (2) jumtate incompatibil; (3) complet 109

compatibil (tabelul 8.3.). Aceast form de incompatibilitate este ilustrat i n figura 8.5. Dac o plant cu genotipul S1S2 se autopolenizeaz, sau se polenizeaz cu polen de la o alt plant, nucleii grunciorilor de polen pot s conin fie alela S1 , fie alela S2. ntruct ambele alele sunt prezentate n esutul stilului, tubii polinici nu strbat sau strbat n cazuri rare stilul, ntr-un timp destul de lung pentru a nu ajunge la timp la ovule, pentru a avea loc fecundaia (fig. 8.5.A).
Tabelul 8.3. Trei nivele de ncruciare compatibil pentru sistemul de autoincompatibilitate gametofitic i sporofitic (dup BRIGGS i KNOWLES, 1967)
Gamet mascul Sistemul
ncruciare gamei Femel Mascul V ia b il N e v ia b il t o at e S
1

Genotipuri le descenden ei

Gametofitic Ambele plante cu acelai genotip: polen neviabil Plante ce difer printr-o alel: jumtate din polen viabil Plante ce difer n ambele alele: tot polenul viabil

S1S2x S1S2 S1S2x S1S3 S1S3x S1S2

n u S
3

nici unul S1S3,S2S3 S1S2, S2S3

S
2

S
1

S 3, S
4

S1S2x S3S4 S3S4x S1S2

S 1, S
2

Sporofitic* Ambele plante cu acelai genotip: polen neviabil Plante ce difer printr-o alel: polen viabil i neviabil

S1S2x S1S2

S1S2x S1S2 S3S4x S1S2

n u n u S 1, S
2

n u n u t o at e S 2, S
3

S1S3, S2S3, S1S4, S2S4 S1S3, S2S3, S1S4, S2S4

nici unul

n u

nici unul S1S2, S2S3, S2S2,S2S3

110

Plante ce difer n ambele alele: polen viabil S 3, S

4

S1S2x S3S4 S3S4x S1S2

*

S 1, S
2

n ic i u n u l n ic i u n u l

S1S3, S2S3, S1S4, S2S4 S1S3, S2S3, S1S4, S2S4

presupunnd

Fig. 8.5. Sistemul gametofitic de incompatibilitate A incompatibilitate total; B incompatibilitate parial; C compatibilitate total

Dac planta cu genotipul S1S2 este polenizat cu polenul de la o plant cu genotipul S3S4, att tubul polinic cu alela S3, ct i cel cu alela S4, vor strbate stilul, fecundaia realizndu-se normal (fig. 8.5. C). Dup cum s-a mai menionat, incompatibilitatea poate fi definit ca o reacie intim legat de polen i de esuturile femele nainte de fecundaie. Aceasta este un linkat coninnd cel puin trei gene care determin aceast reacie (LEWIS, 1949; BREWBAKER, 1954; PANDEY, 1967; De NETTANCOURT; TAYLOR, 1985). Una dintre gene, de specificitate, codific un polipeptid specific pentru fiecare alel S; acelai polipetid se regsete n stil i n polen. O alt gen, adiacent, va antrena pentru polen, activitatea factorului de specificitate. O a treia gen va fi activatoare pentru stil. 111

Reacia de incompatibilitate se deruleaz dup cum urmeaz: Contactul tub polinic esut femel va provoca declanarea celor dou gene activatoare nct locusul de specificitate a polenului i a stilului vor codifica polipetida lor specific (fig. 8.6.)

Fig. 8.6. Derularea reaciei de incompatibilitate (DEMARLY, 1977)

n cazul n care o protein specific se localizeaz n extremitatea de cretere a tubului polinic i se transform ntr-un dimer sau un tetramer inhibitor, pe care dac l gsete i n esutul femel va provoca fenomenul de incompatibilitate (LISKENS, 1964; FRANKEL i GALUN, 1977; DEMARLY, 1977). Particularitile incompatibiltii gametofitice se pot rezuma la urmtoarele: se manifest n general, la speciile la care grunciorul de polen este binucleat (Nicotiana, Trifolium, Petunia, Prunus .a.). ereditatea fenomenului este condiionat n cele mai multe cazuri, monofactorial. n locusul S pot exista un numr foarte ridicat de alele, de la 700 la 800 la Trifolium pratense, 64 la Trifolium repens. Aceast 112

caracteristic i gsete explicaia considernd locusul S ca fiind un linkat. n unele cazuri, la ierburi, genetica incompatibilitii gametofitice difer de sistemul unui singur locus descris mai sus, acesta fiind bifactorial. Locii implicai n acest caz, au fost notai cu S i Z. Dac alelele din locusul S i cei din locusul Z ale grunciorilor de polen sunt identice cu alelele S i Z din stil, se manifest fenomenul de incompatibilitate. Dac alelele din locusul S sau cele din locusul Z vor fi diferite de cele din stil, sistemul va fi compatibil. n cadrul sistemului cu doi loci, mperechierile compatibile se realizeaz cu o frecven de 5-10% mai mare dect n cazul sistemului cu un locus, evideniat la trifoi i la tutun. Sistemul cu doi loci, a fost descris la secar i la cteva graminee perene, considerndu-se c este preponderent n cadrul familiei graminee. La sfecla de zahr a fost pus n eviden un sistem de incompatibilitate cu patru loci, avnd la baz acelai principiu de funcionare ca al sistemului cu doi loci. Efectele alelelor incompatibilitii nu sunt ntotdeauna att de puternice nct s mpiedice n ntregime fecundaia. La numeroase specii se poate forma, ocazial, o smn n urma strbaterii de ctre tubul polinic a stilului care poart aceleai alele ca i esutul stigmatului. n acest caz, avem de-a face cu fenomenul de pseudoautoincompatibilitate. Acest fenomen poate fi provocat de factori de mediu, cum ar fi: temperatura, mutaiile, sau eventuale gene modificatoare. Pe lng aceasta, pot s apar i alele ale autofertilitii (Sf), capabile s inactiveze alelele incompatibilitii. Alela Sf este o alel din seria S, ce poate da natere unei anumite mutaii. n unele cazuri, nfrngerea barierei de autoincompatibilitate a fost obinut prin procedee diferite, dintre care menionm: polenizarea n stadiul de buton, polenizarea ntrziat, aciunea temperaturilor nalte, a substanelor chimice i hormonale, tetraploidizarea artificial, amestecul de polen, selecia genelor de pseudofertilitate .a. (FRANKEL i GALUN, 1977; TAYLOR, 1985; SAVATTI i colab., 1986, 1992). B. Incompatibilitatea sporofitic Controlul sporofitic a incompatibilitii polenului a fost sugerat de CORRENS, n 1912, la planta Cardaminae praetensis (Cruciferae), dar o explicaie tiinific a fenomenului a ntrziat 38 de ani. Atunci, s-a explicat controlul genetic a sistemului de incompatibilitate la 113

Crepis foetida (Compositae) (GERSTEL, 1950). Ulterior, acest sistem de incompatibilitate a fost evideniat la numeroase specii cu importan economic din familiile Cruciferae, Compositae i Convolvulaceae. Acest tip de incompatibilitate este i ea condiionat de o serie de gene alele, la un singur locus i n contrast cu tipul gametofitic, funcionalitatea polenului este determinat de constituia genetic a plantei care l produce. Particularitile sistemului sporofitic pot fi rezumate la urmtoarele: se ntlnete la speciile la care grunciorii de polen sunt, n general, trinucleate (Gramineae, Compositae, Cruciferae); sistemul poate avea o condiionare genetic mono- sau plurifactorial; n general, se reunesc n linkajul de incompatibilitate caracteristici morfologice care ntresc incompatibilitate (exemplu, heteromorfia); la polen, specificitatea naintea individualizrii fiecrui microspor se determin n esuturile diploide, n funcie de relaiile de aditivitate sau de dominana, mai mult sau mai puin complet, ntre alelele omoloage; dominana nu este aceeai pentru stamine i pentru stil; reacia de incompatibilitate se declaneaz din momentul n care polenul s-a depus pe stigmat; se pot obine plante homozigote pentru o alel S 1, fie prin frngerea barierei de autoincompatibilitate fie prin pseudoautoincompatibilitate. Mecanismul acestui tip de incompatibilitate se explic prin aceea c dac o plant posed genotipul S1S2 i S1 este dominant fa de S2, ntreaga cantitate de polen va funciona ca i cnd ar fi S 1; att grunciorii de polen cu alelele S1, ct i cu cele S 2, vor fi imcompatibile pe un stigmat S1 i compatibil pe un stigmat S 2. Combinaiile genetice din cadrul unui sistem sporofitic sunt multiple i complexe ( vezi tabelul 8.5.). Sistemul sporofitic a fost pus n eviden la floarea soarelui, varz i alte specii dicotiledonate. La diferite specii de Brassica s-au utilizat numeroase metode de ngrngere a barierelor incompatibilitii, de la suprafaa stigmatului. Aceste metode include polenizarea timpurie, ndeprtarea suprafeei stigmatului, ocuri electrice, creterea concentraiei de CO 2, altoirea .a. n cazul polenizrii bobocilor florali, impedimentul autoincompatibilitii este depit prin aceea c se depune polen pe 114

stigmate imature, care nu au avut timpul s-i dezvolte barierele de incompatibilitate. 8.3.2. Semnificaia biologic a heterozigoiei 8.3.2.1. Consangvinizarea. Noiuni introductive Prin consangvinizare se nelege reproducerea prin autofecundare fora a plantelor alogame hermafrodite, sau monoice, sau ncruciarea ntre indivizii nrudii n cazul plantelor dioice. n mod normal, speciile alogame care nu sunt autoincompatibile pot fi consangvinizate prin autopolenizare controlat. Unde sexele sunt separate pe plante diferite, sau sunt controlate de sisteme ale incompatibilitii, se utilizeaz ncruciarea frate-sor (SIB). Eficiena comparativ a celor dou sisteme de mperechere este ilustrat n fig. 8.7.

Fig. 8.7.

Din figur se desprinde faptul c trei generaii de autopolenizare aproape c egaleaz efectele a zece generaii de mperechere SIB n ceea ce privete homozigotizarea (BRIGGS i KNOWLES, 1967). Structura mai mult sau mai puin heterozigot a unui individ, determin un efect global, extrem de important, n urma consangvinizrii. La 115

cea mai mare parte a organismelor sexuate fecundarea consangvin antreneaz o cretere a nivelului mediu de homozigoie, nsoit de diminuarea general a vigorii, fenomen semnalat ca efect al consangvinizrii. ntr-o situaie invers, creterea heterozigoiei este legat de fenomenul de vigoare hibrid, sau heterozis. Aceste particulariti au fost evideniate nc din 1760, de ctre KELREUTER, iar noiunea de heterozis a fost propus de SHULL n 1914, dup studiile privind vigoarea hibrid a liniilor de porumb, ncepute n 1909. Heterozisul este considerat ca o stare de heterozigoie maxim, care este mai uor de realizat prin hibridarea liniilor genetic diferite, consangvinizate. Vigoarea hibrid, sau heterozisul, se manifest n toat plenitudinea n F1. Prin heterozis se nelege fenomenul de superioritate a organismelor hibride fa de formele parentale, sub aspectul vigorii generale, a adaptabilitii, capacitii de producie, a calitii etc. 8.3.2.2. Seminificaia genetic a consangvinizrii Principala seminificaie genetic a consangvinizrii este creterea homozogoiei. n acest sens, o importan deosebit o are faptul c alelele recesive apar cu frecven mai mare n stare homozigot n populaii consangvinizate, dect n populaiile cu ncruciare liber. O populaie supus n mod normal unui sistem de consangvinizare (autofecundare repetat, ncruciri ntre rude), se desface ntr-o serie de linii reproductiv independente (subpopulaii). La orice linie, cretrea homozigoiei este nsoit de modificri ale frecvenei genice i tendina fixrii unei sau altei alele n fiecare locus ; la liniile derivate din aceeai populaie de baz, frecvenele genice tind s devin divergente. Efectul caracteristic al consangvinizrii la plantele cu fecundare ncruciat este reducerea mai mult sau mai puin pronunat a vigorii, adic apariia fenomenului de depresie de consangvinizare (reducerea valorii medii a caracterelor cantitative legate de cretere, dezvoltare i reproducere, ca urmare a creterii gradului de homozigoie). Mecanismul genetic care produce depresia de consangvinizare nu este pe deplin elucidat, dar presupune c un rol determinant l joac segregarea i recombinarea genelor. Ca efect a acestora, menionm : - separarea n homozigoi a factorilor favorabili, care au fost reunii n heterozigoi ;

116

existena unor linkage strnse ntre unii factori favorabili i alii nefavorabili, poate face imposibil obinerea unui homozigot care s ntruneasc toate genele posibile ; - dispariia interaciunilor de epistazie. Oricare ar fi mecanismul genetic al depresiei de consangvinizare, s-a constatat c aceasta se accentueaz pe msura creterii homozogoiei materialului biologic, pn cnd se ajunge la un minim de consangvinizare (cea mai sczut valoare medioe a unei populaii, valoare la care se ajunge dup un numr de 7-10 generaii de consangvinizare i care rmne relativ stabil n cazul continurii consangvinizrii). Reducerea vigorii prin consangvinizare este diferit de la o specie la alta i chiar de la un genotip la altul, n cadrul speciei. De exemplu, efectele consangvinizrii sunt minime la dovleac, dar evidente la porumb, floarea soarelui, lucern, trifoi etc. n urma consangvinizrii, valoarea medie a multor caractere cantitative i calitative la arbori (capacitatea de cretere n dimensiune i volum, capacitatea de regenerare .a.) scade considerabil, putndu-se ajunge n condiii extreme, chiar la stress genetic diminuarea puternic a capacitii de adaptare datorit segregrii heterozigoilor. Cele mai sensibile sunt populaiile nchise i mici, la care depresiunea de consangvinizare se manifest puternic. n populaiile mari, la care apariia homozogoilor recesivi este condiionat de legea hazardului, consangvinizarea are efecte mai slabe. Aceasta este, de fapt, situaia principalelor specii forestiere de la noi, pentru care, n natur, problema pericolului consangvinizrii nu se pune deocamdat. De altfel, chiar n cazul unor populaii mici sau izolate populaiile de fag din Dobrogea sau de pin negru de Banat s-au creat prin selecie natural, mecanisme speciale de echilibru genetic, care mpiedic manifestarea depresiei de consangvinizare (STNESCU, 1982). Depresia de consangvinizare face ca la plantele alogame autopolenizarea s nu faciliteze obinerea de genotipuri utilizate direct n producie, ca n cazul plantelor autogame. Cu toate acestea, consangvinizarea ofer avantajul de a facilita izolarea de genotipuri homozigote, deci stabile, care pot fi utilizate n producerea de hibrizi. ntradevr, homozigotizarea ce apare n urma consangvinizrii duce la pariia, datorit segregrii i recombinrii, a unor noi genotipuri. ntre acetia, alturi de numeroase tipuri aberante ca efect a trecerii n stare homozigot a unei gene recesive duntoare, se ntlnesc i genotipuri care concentreaz un numr mare de gene favorabile. ncruciarea unor asemenea linii a cror zestre genetic valoroas se completeaz reciproc, ntr-un model echilibrat, vor da natere la hibrizi valoroi, dect populaia iniial din care au fost extrase liniile. ca un efect pozitiv, menionm i uniformizarea liniilor ca urmare a autofecundrii repetate, mai multe generaii succesive. Homozigoie complet apare dup un 117

mare numr de consangvinizri repetate, n funcie de gradul de heterozigoie a materialului iniial, i are ca urmare eliminarea genelor letale sau subletale (SAVATTI, 1983). genotipurile care apar pot s fie homozigot recesive, sau homozigot dominante. Majoritatea genotipurilor homozigot recesive prezint fenomenul de nanism, defecte clorofiliene, malformaii, sterilitate parial sau total, dar i unele nsuiri valoroase, cum sunt : tulpini scurte i rezistente la cdere (porumb i sorg), tulpini erecte i bogate n frunze (trifoiul rou), coninut sczut de alcaloizi la lupin i rapi, rezisten la stresurile climatice, boli i duntori .a. Formele homozigote receseve pot fi uor recunoscute, eliminate sau reinute, din prima sau a doua generaie consangvinizat (PAMFIL i colab., 1978, 1981). Deosebit de valoroase sunt genotipurile homozigote dominante, deoarece prin ncruciarea lor, nsuirile i caracterele valoroase ale acestora se transmit dominant. 8.3.2.3. Bazele genetice i tipurile de heterozis Fenomenul de heterozis reprezint vitalitatea maxim a hibrizilor din prima generaie hibrid, F1. Se exteriorizeaz prin vigoare mrit, reflectat prin cantitatea mare de rpoducie. Afecteaz toate caracterele i nsuirile biologice i economice ale plantelor, ndeosebi producia de semine sau fructe. Hibrizii heterotici (F1) prezint cel mai nalt nivel de heterozigoie, fiind reversul consangvinizrii. Cercetrile genetice privind heterozisul, efectuate de LERNER n 1954 i MATHER n 1955 (dup MUREAN i CRCIUN, 1972), explic acest fenomen genetic pe baza faptului c hibridul F 1 prezint n acelai locus dou alele diferite care determin vigoarea hibridului respectiv. Aceast vigoare hibrid este mai accentuat la hibrizii plantelor alogame, obinui pe baza ncrucirii liniilor consangvinizate i mai puin accentuat la hibrizii plantelor autogame. Se presupune de asemenea, c hibrizii F1 manifest o modificare pozitiv a metabolismului, datorit genelor nealel (POTLOG i colab., 1989). Majoritatea cercetrilor au concluzionat c n toate cazurile formele hibride F1 manifest o vigoare sporit, o vigoare hibrid specific mai mare dect a generaiilor hibride mai avansate. Acest mod de manifestare a hibrizilor, n prima generaie (F1), poart denumirea de heterozis, fiind un fenomen pur genetic cu consecine biologice specifice. Fenomenul de heterozis are un spectru larg, dar intensitatea lui difer de la un hibrid la altul, de la o specie la alta. Caracteristice de baz a fenomenului de heterozis este vigoarea maxim n F1 i scderea acesteia n generaiile hibride ulterioare (F 2). Prelungirea fenomenului n generaiile hibride avansate este posibil numai 118

n anumite cazuri i mai ales la plantele cu reproducere somatic sau vegetativ a cror hibrizi nu prezint fenomenul segregrii, att de specific hibrizilor sexuai. Manifestarea fenomenului de heterozis difer de la hibrizii intraspecifici unde este ami accentuat, la hibrizii interspecifici la care vigoarea hibrid este de obicei mai mic. n cadrul aceleai specii nu toi hibrizii F1, ntre soiuri sau linii consangvinizate manifest aceeai intensitate a fenomenului de heterozis. Pentru determinarea manifestrii maxime a fenomenului de heterozis se determin n prealabil capacitatea combinativ general i specific a genitorilor (soiuri sau linii consangvinizate). Heterozisul la plante, ca mijloc de sporire a produciei, reprezint una dintre problemele genetice contemporane, cu cele mai largi implicaii teoretice i practice pentru ameliorarea plantelor. Heterozisul, ndeosebi la o serie de specii de plante cultivate ca, porumbul, floarea soarelui, sfecla, tomatele .a. tinde a deveni singura i cea mai eficient metod de exploatare a homozigoiei n ameliorarea plantelor. La speciile forestiere sunt cunoscui numeroi hibrizi naturali cu manifestri evidente a fenomenului de heterozis, n ceea ce privete capacitatea de cretere, vitalitatea .a. Pe primul plan se situeaz plopii negri hibrizi plopi de Canada hibrizi ntre plopul negru european ( Populus nigra) i plopii negri americani (P. deltoides i P. angulata), utilizai pe scar larg n culturi i n ara noastr. n cadrul genului Quercus s-au semnalat o serie ntreag de hibrizi naturali cum sunt : Q. rosacea, (Q. roburQ. petraea), Q. dacica (Q. polycarpaQ. pubescens), Q. hainaldiana (Q. frainelto Q. robur) .a. care ns, n general, nu par superiori speciilor parentale. La genul Fagus, hibridul Fagus taurica (F. sylavticaF. orientalis) ntlnit la noi n Banat, Dobrogea, Muntenia i Oltenia, se dovedete deosebit de productiv (mai ales n Banat) i viguros, precum i o mare capacitate de adaptare la un climat relativ secetos (mai ales n Dobrogea). La genul Platanus, hibridul P. hybrida (P. acerifolia) rezultat din ncruciarea P. orientalisP. occidentalis, manifest fenomenul de heterozis i este complet fertil . La genul Abies, hibrizii naturali A. bormlleria (A. nordmanniana A. cephalonica) din Anatolia (Turcia), A. borisii-regis (A. alba A.cephalonica) din Grecia i Albania, A. rubrodensis (A. albaA. cephalonica) din Sicilia (Italia) sunt deosebit de rezisteni la secet. n cadrul genului Larix, hibridul L. eurolepis (L.deciduaL.leptolepis) este mai repede cresctor i mai rezistent la cancer comparativ cu prinii.

119

Hibridrile controlate la specii din genurile Populus, Quercus, Fraxinus, Pinus, Picea, abies, Larix .a. au dus la obinerea de rezultate contradictorii, iar n unele cazuri efectul heterozis a fost obinut numai n prima generaie (F1) (STNESCU, 1982). Hibridarea creaz totui combinaii de gene, unele superioare prinilor i n cazul speciilor lemnoase. Dac aceste combinaii sunt urmrite i utilizate corespunztor n scopuri practice, hibridarea i pstreaz, prin efectele pe care le d, ntreaga seminificaie genetic. Multiplicarea pe cale vegetativ, reprezint unul din mijloacele de meninere a combinaiilor posibile de gene i de aici a meninerii vigorii hibride, mai ales la speciile care se nmulesc uor prin butai, cum ar fi plopii, slciile etc. (STNESCU, 1982). Dintre ipotezele i teoriile privind baza genetic a heterozisului amintim : - teoria heterozigoiei, elaborat de EAST i SHULL, consider drept cauz a fenomenului starea de heterozigoie a hibridului n F1 ; - teoria dominanei, elaborat de BRUCE, explic fenomenul de heterozis prin acumularea i combinarea n F1 a genelor sau alelelor dominante provenite de la genitori ; - teoria nlnuirii, emis de JONES, menioneaz c fenomenul are la baz nlnuirea genelor dominante, situate n cromozomii omologi ; - teoria stimulrii, dup care, fenomenul se datoreaz unui sistem genetic stimulator ; - teoria alelomorfismului multiplu, pune la baza fenomenului ideea ereditii cumulative alelomorfe ; - teoria supradominanei, emis de HULL, explic fenomenul pe baza prezenei heterozigoiei monofactoriale ; - teoria epistaziei, formulat de TURBIN, consider drept cauz genetic intervenia heterozigoiei structurale sau a heterozigoiei inversiunilor. Oricare ar fi teoria privind heterozisul, apare ca certitudine c fenomenul exist i se manifest avnd un rol deosebit n ameliorarea plantelor. Cauzele adevrate ale heterozisului trebuie cutate n rolul i aciunea factorilor genetici care intervin n dezvoltarea ontogenetic a plantei. Cele mai importante tipuri de heterozis utilizate n ameliorarea plantelor sunt : heterozis reproductiv, determin sporirea produciei de smn i fructe i n general organe reproductive, obinute n urma polenizrii i fecundaiei ; 120

 heterozis somatic sau vegetativ, determin formarea i sporirea masei vegetative ; heterozis adaptativ, accentueaz nsuirile legate de capacitatea de adaptare a plantelor la condiii ecologice diferite ; heterozis adevrat, determin dezvoltarea luxuriant a plantelor hibride F1, comparativ cu plantele nehibride. Dup modul de manifestare, fa de populaia iniial, deosebim dou tipuri de heterozis : cisheterozis, prin care se nelege tipul de heterozis n care hibridul depete nivelul productiv al formelor parentale consangvinizate, dar nu i nivelul populaiei cu polenizare strin din care acestea au fost extrase ; transheterozis, este tipul de heterozis n care hibridul heterotic depete nu numai formele parentale consangvinizate ci i nivelul populaiei cu polenizare liber din care au fost extrase. Intensitatea heterozisului este condiionat genetic de factori genetici i de mediu. Dintre factorii genetici care influeneaz intensitatea de manifestare a heterozisului se pot menion : - modul de reproducere a plantelor, plantele alogame reacioneaz, n general, mai puternic dect cele autogame ; - heterozisul, dup cum s-a amintit, este n general mai accentuat n cazul hibridrii intraspecifice dect n cazul celor interspecifice i intergenerice ; apar i excepii cum este cazul la hibrizii RaphanusBrassica, sau diferite tipuri de Nicotiana ; - hibrizii dintre varieti prezint un heterozis mai pronunat dect cei dintre biotipurile aceleai variati ; - formele geografic ndeprtate manifest o intensitate mai pronunat a heterozisului, dect cele apropiate ; - hibrizii dintre formele homozigote (linii) prezint un heterozis mai pronunat dect cei rezultai din prini heterozigoi ; - cu ct prezint o difereniere genetic mai pronunat (pn la o anumit limit), cu att hibrizii manifest un heterozis mai pronunat i invers ; ordinea ncrucirii genitorilor influeneaz intensitatea heterozisului ; uneori genitorul matern are o influen mai mare asupra hibridului dect cel patern, datorit patrimoniului citoplasmatic. Heterozisul depinde de asemenea, de interaciunea dintre genotip i factorii de mediu. cercetrile au evideniat c acelai hibrid este capabil de producii diferite, n funcie de condiiile climatice ale diferiilor ani din zona n care se cultiv, de agrotehnica aplicat. Comportarea diferit a aceluiai 121

hibrid n zone ecologice diferite este determinat de reacia termoperiodic i mai ales fotoperiodic a acestuia.

CAPITOLUL IX
9. Mutaiile i mecanismul lor molecular 9.1. Definiia mutaiei i tipuri de mutaii Noiunea de mutaie a fost elaborat n anul 1901 de H. de VRIES, cel ce a elaborat teoria mutaionist. Mutaia poate fi definit ca fenomenul prin care se produc modificri ereditare n materialul genetic, modificri ce nu sunt provocate de recombinri genetice sau de segregare. Ele pot s apar n mod spontan i atunci sunt denumite mutaii naturale, sau pot fi induse experimental, denumite mutaii artificiale. ntre cele dou tipuri de mutaii sunt deosebiri de ordin calitativ. Mutaiile naturale sunt produse de numeroi ageni mutageni din natur (radiaii, schimbri de temperatur etc.). Mutaia poate fi definit i ca modificri discontinue cu efect genetic (MAYR, 1963). Ele pot afecta diferite uniti ale materialului genetic. Sub acest aspect mutaiile pot fi clasificate n : - mutaii genice, cnd afecteaz genele ; - mutaii cromozomiale, cnd afecteaz cromozomii ; - mutaii genomice, n cazul cnd ntregul genom este afectat. Dup modul de exprimare fenotipic ele pot fi clasificate n mutaii dominante sau masive. n funcie de locul unde sunt plasate genele, mutaiile pot fi autozomale, plasate pe autozomi i heterozomale, plasate pe heterozomi. Acest tip de mutaii manifest sex-linkage. De asemenea, exist i mutaii extranucleare ale genelor din citoplasm. O alt categorie o constituie mutaiile letale i semiletale, care afecteaz gene de importan major n organism, prin a cror blocare se realizeaz moartea individului nainte de maturitatea sexual. Mutaiile pot afecta genele de diferite tipuri (structurale, operatoare, reglatoare), care iau parte la realizarea reglajului genetic. De asemenea ele pot afecta regiuni mai mici sau mai mari de-a lungul genei, determinnd mutaii punctiforme fiind mutaii intragenice. Referitor la frecvena mutaiilor, pot fi evideniate gene mutabile, care sunt mai instabile i prezint o frecven mai mare a mutaiilor comparativ cu celelalte gene din organism. 122

O alt categorie sunt genele mutatoare care mresc frecvena mutaiilor altor gene. Dac mutaiile afecteaz celulele liniei germinate, atunci ele pot fi transmise ereditar prin gamei la noua generaie. n cazul cnd avem de a face cu mutaii somatice, acestea nu se transmit n descenden dect n cazul n care esutul sau organul respectiv se obine prin nmulire vegetativ, indivizi care au apoi posibilitatea s se reproduc vegetativ. 9.2. Frecvena mutaiilor i natura lor Apariia brusc a unor indivizi avnd caractere schimbate (mutante) i care transmit modificarea n descenden a fost observat de mult timp i apar la ntmplare sub influena condiiilor de mediu. La plante, dup ce SPRENGER din Heidelberg a descris mutanta cu frunze lacrimate la Chelidonium majus (sec XIV), DUCHESNE a descris fragul monofil, cu frunze indivizate. O mutaie asemntoare a fost gsit la Robinia pseudoacacia n anul 1855 i ea a dat natere salcmului monofil. Variatile pendula la numeroase specii de arbori, cum sunt Saphora japonica, Ulmus glabra, Quecus robur, Prunus padus .a. se datoresc, de asemenea, unor mutaii spontane. DARWIN a descris numeroase mutaii la piersici i la animale (oile de Ancona, cini buldogi .a. SENBUCH (1942) a gsit o mutaie spontan la lupinul alb (Lupinus luteus) care nu coninea n seminele sale alcaloizi. La pomii fructiferi i al hamei s-au observat un mare numr de mutaii spontane, acestea fiind utilizate direct ca soiuri noi, sau n programele de ameliorare. Un mare numr de mutante s-au semnalat la plantele ornamentale (ex. laleaua Murillo). Cea mai cunoscut mutant spontan din natur este gena opaque, la porumb, care influeneaz coninutul n lizin. O mutaie accidental de tipul celei genice, poate avea loc dup afectarea tautomeric a atomului de hidrogen care mpiedic mperecherea bazelor complementare la nivelul acidului dezoxiribonucleic (ADN). Schimbrile care pot avea loc la nivelul nucleotidelor ADN-ului provoac schimbri de cod, care la rndul lor produc schimbri n codonii ARN-m (ARN-mesager). n aceast situaie, diferiii aminoacizi pot fi eliminai rezultnd sinteza unor proteine diferite, ce pot s se manifeste prin apariia unor mutaii spontane naturale, ca de exemplu mutaiile de culoare, de talie .a. WATSON (1974), consider c mutaiile spontane rezultate numai din modificri tautomerice pot s apar cu o frecven de 10-9 la nivelul nucleotidelor i de 10-6 la nivelul genelor/generaie.

123

n afara acestui mecanism, mutaiile pot fi cauzate de aberaii cromozomiale (deleia, duplicaia, inversia, translocaia) i de multiplicrile de genom (poliploidia). La microorganisme, care au o extraordinar capacitate de multiplicare, numrul mutaiilor care apar ntr-un ciclu de reproducie este foarte mare. De exemplu, numrul uredosporilor de rugin a frunzelor de gru (Puccinia recondita ssp. tritici), n condiiile n care infecteaz numai 1% din suprafaa foliar/1 mp de teren este de 300 spori/1 mmp/zi, respectiv 1011 spori/zi/ha (PARLEVLIET i ZADOKS, 1977). Dac frecvena estimat a mutaiilor este de 10-8 vor aprea 1.000 mutante/locus/zi/ha. Dac se ia n considerare c fiecare organism conine cteva mii de gene, putem afirma c fenomenul mutaional este practic continuu. WRIGHIT (1931) menioneaz c mutaiile spontane sunt ntotdeauna mai numeroase dect necesitile evolutive ale speciei. Rata mutaiilor depinde de genele afectate, de condiiile ecologice .a.. Unele gene i schimb uor structura, dovedindu-se labile i genernd un mare numr de mutaii. Asemenea gene, dup cum s-a amintit se numesc mutabile sau instabile i apar ndeosebi n celulele somatice ale plantelor condiionnd variaiile n culoarea frunzelor, petalelor .a. Alte gene sunt stabile i sufer foarte rar modificri structurale. Dac se accept c mutaiile au jucat un rol decisiv n evoluia speciilor, atunci la genul Picea i Abies cele dou tipuri de gene i-au pus amprenta. De exemplu, genele care condiioneaz forma bazei acelor i ale persistenei sau caducitii solzilor la conuri trebuie s fi fost foarte stabile, aprnd prea puine modificri sub acest aspect, n comparaie cu genele ce afecteaz forma general i dimensiunea acelor sau a formei solzilor i bracteelor la conuri, care au fost afectate probabil, n msur mult mai mare de diverse mutaii (STNESCU, 1982). Cnd MLLER (dup BOROJEVI, 1990) a reuit s induc mutaii la Drosophila melanogaster, prin iradiere cu raze X, aceasta a marcat nceputul unei noi ere a geneticii aplicate, mutaiile induse devenind o important surs de variabilitate. De la acest eveniment s-au descoperit i utilizat, pe parcursul anilor, un numr impresionant de factori mutageni fizici i chimici. Primele studii privind inducerea mutaiilor la plante se datoresc italianului PIROVANO i americanului STADLER. Frecvena mutaiilor induse este mai mare dect a celor sponatne, oscilnd ntre 10-3-10-5/gen/generaie. Unele gene muteaz cu o frecven mai mare dect altele. S-a constatat c spectrul mutaiilor sponatne i a celor induse sunt similare i c mutaiile induse, s-au gsit sau se vor gsi n natur.

124

n funcie de utilitatea lor mutaiile pot fi folositoare, nefolositoare, sau neutre pentru organism. Deoarece procesul mutaional este aparent ntmpltor i necontrolabil, majoritatea mutaiilor sunt cosiderate neutre, neafectnd n mod pozitiv sau negativ individul purttor. Asemenea mutaii pot s se menin ntr-o populaie timp ndelungat, att timp ct genele respective se gsesc n stare heterozigot. Cnd genele devin homozigote mutaiile pot s se exteriorizeze, putnd aduce chiar un avataj purttorului, n condiii de mediu schimbat.din moment ce mutaiile rezult nu numai printr-o schimbare genetic faa de tipul slbatic, dar i prin deleia uneia sau mai multor baze n ADN i n urma aberaiilor cromozomale numeroase mutaii pot s manifeste un efect negativ. Asemenea mutaii sunt eliminate n procesul seleciei naturale sau artificiale. Selecia natural favorizeaz mutaiile care sunt avatajoase purttorilor lor. Aceste mutaii sunt surse poteniale a tot ce este nou, ele jucnd un rol important n evoluia speciilor, iar pe de alt parte pot constitui o inepuizabil surs de variabiltate genetic. Mtaiile structural cromozomale, numite i aberaii cromozomale, se coreleaz cu schimbri n poziia i numrul genelor i se datoresc posibilitii fragmentrii cromozomului n meioz sau n mitoz. ele pot fi intracromozomale i intercromozomale (fig. 9.1.)

Fig. 9.1. Restructurri intra- i extracromozomale

Deleia reprezint pierderea de ctre cromozom a unui fragment acentric, cu una sau mai multe gene. Deleiile au efecte duntoare sau pot fi 125

letale, dac sunt de anvergur. La plantele superioare, deficienele sunt transmise numai pe cale matern nu i pe cale patern, ntruct polenul afectat de deficien nu este viabil, sau nu poate fecunda oosfera. Duplicaia constituie fenomenul invers deleiilor, prin care un fragment de cromozom este ataat la un cromozom omolog. Duplicaiile se declaneaz odat cu deleiile, ca efect a schimbului de fragmente ntre cromozomii omologi n locusuri neomoloage. Cromozomul omolog care cedeaz un segment sau o gen devine deficient pentru genele respective, iar cromozomul acceptor are dou seturi de gene pentru segmentul duplicat. Duplicaiile afecteaz organismele n msura mai mic dect deleiile, neavnd efect letal. Dein un rol important n evoluia speciilor, putnd sta la originea unora dintre sistemele de gene multiple. Se presupune c la arbori avnd n vedere numrul mare al poligenelor i valoarea lor biologic definitorie, duplicaiile trebuie s se fi manifestat pe scar larg. Duplicaia anumitor gene poate s prezinte interes deosebit n scopul sporirii capacitii de producie a plantelor agricole i a celor lemnoase, ca i a rezistenei fa de duntori. Inversia se realizeaz prin schimbarea cu 180 a poziiei unui segment de cromozom care a suferit dou rupturi simultane. Dac fragmentul rotit conine centromerul, inversia este pericentric, iar dac ruptura a avut loc ntr-un singur bra a cromozomului ea se numete paracentric i nu include centromerul. n mod obinuit, inversiile apar n profaza meiozei, n urma ruperii cromatidelor sau cromozomilor. Inversiile au i ele un rol important n evoluia unor specii, contribuind la amplificarea variaei lor genetice. Translocaia ia natere prin ncorporarea unui segment de cromozom, n alt sector al aceluii cromozom translocaie intracromozomal sau transpoziie, sau prin schimbul reciproc ntre cromozomii neomologi translocaii intercromozomale sau reciproce. Translocaia afecteaz conjugarea normal a cromozomilor n profaza I a meiozei (zigonem), determinnd apariia de gamei anormali n proporie de pn la 60-70%. Translocaiile s-au manifestat activ n procesul de evoluie. Se consider, c la originea apariiei hominidelor a stat la baz un fenomen de translocaie care a facilitat trecerea de la 48 de cromozomi la 46 de cromozomi, prin fuziunea a doi cromozomi acrocentrici.

9.3. Factorii mutageni

126

Factorii mutageni care intervin n declaarea mutaiilor genice i structural cromozomale sunt de natur fizic, chimic i biologic. Factorii mutageni fizici sunt n special radiaiile, ce pot fi ionizante i neionizante i care produc modificri genice i structural cromozomale prin ruperea legturilor chimice din molecula de ADN, cauznd deleii, inversii, translocaii etc. Mutaiile induse de radiaii sunt cunoscute i sub denumirea de radio mutaii. Radiaiile ionizante, electromagnetice (razele X i gamma) i corpusculare (razele beta, alfa, protonii, neutronii rapizi i leni, particolele grele) produc efecte mutagene puternice prin fenomenul de ionizare. Ele induc mutaii proporional cu creterea cantitii de energie sau cu intensitatea iradierii esuturilor vii. Radiosensibilitatea celulelor se dovedete direct proporional cu capacitatea lor de nmulire i invers proporional cu gradul lor de difereniere (tabelul 9.1.).
Doza letal, respectiv cantitatea de radiaii ce provoac moartea a cel puin 50% (DL50) din indivizii expui iradierii variaz de la 350 r (uniti roentgen) la om, 10.000 r la pr, mr, porumb, 20.000 r la tomate, trifoi, 75.000-100.000 r la in, varz, ridichi etc.

Radiaiile neionizante sunt radiaiile ultraviolete (UV) avnd energie cuantic mic, cu o capacitate penetrant redus i de aceea ele se folosesc pentru inducerea de mutaii la microorganisme i la polen.

Factorii mutageni chimici. Efectul mutagen al substanelor chimice depinde de natura lor i de starea ADN din celul n momentul aciunii acestora. Substanele chimice mutagene au o structur chimic extrem de variat, de aceea o clasificare a lor dup acest criteriu este extrem de grea. FREESE (dup PAMFIL, 1980) a propus clasificarea agenilor chimici n dou grupe mari:
ageni mutageni care acioneaz n perioada de biosintez replicativ a acizilor nucleici; ageni mutageni chimici care acioneaz direct asupra acizilor nucleici n repaus.

Tabelul 9.1. Radiosensibilitatea unor specii de plante la iradierea cu radiaii gamma i rentgen (dup (I. NICOLAE, A. NASTA, 1975)

127

Specia sau grupul de specii Porumb gru Mazre Cartof Teior Mac Timoftic Golom Ovscior Coada vulpii Firu Vi de vie Trandafir Vi slbatic Prun Mr Coacz negru Dud Specii forestiere Specii forestiere Rinoase Foiase Arbuti decorativi

Organul iradiat Smn uscat Smn uscat Smn uscat Tuberculi Smn uscat Smn uscat Smn uscat Smn uscat Smn uscat Smn uscat Smn uscat Smn uscat Muguri Muguri Muguri dorminzi Muguri dorminzi Muguri Smn uscat Muguri dorminzi Smn uscat Smn uscat Smn uscat Smn uscat

Doza critic (n r) 10.000 15.000 10.000 5.000 10.000 15.000 10.000 20.000 40.000 20.000 20.000 10.000 3.000 8.000 3.000 5.000 3.000 10.000 1.500 5.000 1.000 10.000 20.000

Domeniul zonei critice 8.00015.000 5.000-20.000 5.00020.000 5.00010.000 100.000 12.00016.000 8.00010.000 20.000 40.000 20.000 20.000 10.000 1.5005.000 8.000 2.5004.000 5.0007.500 3.000 10.00020.000 1.5008.000 2.00020.000 8.00015.000 2.00020.000 10.00030.000

Din prima categorie fac parte, azaserina, metiluretanul, cofeina, teobromina care sunt inhibitori de concuren a precursorilor acizilor nucleici; substane analoage bazelor purinice i pirinidinice (2aminopurina (2-AP), 5-ioduracilul (5-IU), 2-oxipurina (2-OP) etc.),

128

care pot fi incorporate n molecula de ADN, n locul bazelor azotate naturale, ce duc la apariia de mutaii. Din a doua categorie fac parte: acidul nitros (HNO2), hidroxilamina i hidrazina i substanele alkilante (dietilsulfatul, etilmetansulfonat), cu aciune direct asupra acizilor nucleici n repaus. Substanele chimice mutagene prezint cteva caracteristici care le deosebeesc, sub aspectul aciunii lor, de mutagenii fizici: - au o eficien mutagenic mai mare (de 2-100 ori mai mare) dect radiaiile; - majoritatea mutaiilor provocate nu sunt letale; - produc frecvent mutaii somatice; - provoac un numr mic de deficiene, asemntor iradiaiilor, dar mult mai puine. Factorii mutageni biologici care acioneaz asupra materialului ereditar din celul, sunt virusurile i microplasmele plasmele, ce pot provoca mutaii genice i aberaii cromozomale, ntrerupnd sinteza ADN n celula gazd. 9.4. Mecanismul molecular al mutaiilor nc din anul 1953, WATSON i CRICK care au descoperit structura macromoleculei de ADN au emis ipoteza c mutaia este o eroare n secvena nucleotidelor acizilor nucleici. Ipoteza WATSON-CRICK privind mecanismul molecular al mutaiei consider, n esen, c printre cauzele care duc la apariia mutaiilor la nivel molecular pot fi menionate urmtoarele: - Modificarea structurii macromoleculei de ADN; - Deleia sau adiia uneia sau mai multor nucleotide n macromolecula de ADN; - Substituia uneia sau a mai multor nucleotide n macromolecula de ADN; - Inversia unei secvene de nucleotide din macromolecula de ADN. Toate aceste modificri ale informaiei genetice coninute n macromolecula de ADN se pot manifesta sub form de mutaii. Sub influena diverilor factori mutageni se produc erori n procesul de replicaie a acizilor nucleici , care duc la apariia de mutaii, ca efect a nlocuirii unei baze purinice n macromolecula de ADN cu o alt baz purinic sau a unei baze pirimidinice cu o lat baz pirimidinic.

129

CAPITOLUL X
POLIPLOIDIA (INGINERIA CROMOZOMAL) 10. Importana i inducerea poliploidiei Poliploidia reprezint un fenomen deosebit de interesant sub aspect genetic i economic. Considerat ca o mutaie de genom, poliploidia se datorete unei schimbri a numrului de baz de cromozomi (x). Unii autori consider c n cazul poliploidiei schimbarea const n adugarea uneia sau mai multor garnituri cromozomale ntregi (autopoliploizi), sau njumtirea numrului de cromozomi (haploizi i monoploizi). Poliploidia apare prin multiplicarea seturilor proprii de cromozomi, a seturilor cromozomale ale hibrizilor interspecifici sau intergenerici, sau prin hibridarea unor specii poliploide. n primul caz avem de a face cu autopoliploidie, iar n al doilea caz se obin organisme alopoliploide, amfidiploide sau amfiploide. Poliploizii care au un numr par de seturi cromozomale se numesc artioploizi, iar cei cu seturi impare perisoploizi. Se pot distinge urmtoarele tipuri de poliploizi: triploizi (2n 3n), tetraploizi (2n 4n), pentaploizi (2n 5n), hexaploizi (2n 6n) etc. i haploizi sau monoploizi (2x x). Poliploidia a jucat un rol important n evoluia plantelor. Determinnd apariia unor plante mai viguroase, datorit creterii volumului celular n urma multiplicrii garniturii cromozomale i favoriznd fixarea unor hibrizi interspecifici sub form de amfiploizi, poliploidia a dat natere la noi specii care s-au extins dincolo de arealul de existen a speciilor diploide.

130

Speciile angiosperme sunt poliploide n proporie de 30-35%, iar dintre cele 652 de genuri care constituie 80% din flora Europei Centrale, 233 genuri (cu 421 specii) sunt diploide i 419 genuri (cu 1803 specii) sunt poliploide, adic 64,2% din total (STEBBINS, dup STNESCU, 1982). Numrul speciilor poliploide este mai mare n regiunile cu climat aspru, cum ar fi cele nordice, de altitudine mare, sau zonele deertice, ca i consecin a vitalitii lor sporite i a rezistenei mai mari fa de stresurile climatice. La plantele lemnoase printre primii poliploizi semnalai sunt tetraploizii Alnus glutinosa i A. japonica. NILSON-EHLE descoper n Suedia plopul tremurtor triploid, Populus tremula f. gigans, cu cretere mult mai viguroas dect a formei diploide. La rinoase speciile poliploide sunt foarte puine (4,6% din total), putndu-se semnala Sequoia sempervirens (6n=66 cromozomi), Pseudolarix amabiils (4n=44 cromozomi), Juniperus chinensis f. phitzeriana (4n=44). La foioase, exist numeroase specii i biotipuri poliploide la genurile Alnus, Betula, Salix, Acacia, Acer, Tilia, Fraxinus .a. Odat cu descoperirea factorilor poliploidizani, ameliorarea plantelor a putu s utilizeze avantajele pe care le poate oferi multiplicarea numrului de cromozomi. Inducerea artificial a poliploizilor se realizeaz uor i sigur prin utilizarea tratamentelor cu soluie apoas de colchicin. Colchicina este un alcaloid obinut din brndua de toamn (Colchicum autumnale). n stare pur are formula brut C 22H25O6N i se prezint sub form de cristale fine, ce se dizolv n alcool, cloroform sau ap rece. Sub influena luminii i a cldurii se degradeaz uor. Metoda colchicinizrii s-a rspndit rapid deoarece se aplic uor, iar soluia are o bun capacitate de difuziune n celule. S-a constatat c tratamentul apexului vegetativ al plantelor, sau imersarea seminelor n colchicin, sau alte substane chimice poliploidizante, duce la dublarea numrului de cromozomi n celulele somatice. Colchicina mpiedic formarea fusului de diviziune n mitoz, cromozomii nu se deplaseaz spre placa ecuatorial ci se disperseaz n celul. Dup diviziunea centromerilor, cromozomii se divid, nu se deplaseaz spre polii opui ai celulei, rmnnd ntr-o singur celul. O asemenea celul va avea un numr dublu de cromozomi (2n=4n), n loc de numrul diploid (2n=2x), iar n diviziunile mitotice se vor forma celule cu 2n=4x cromozomi. Inhibarea prin colchicin a formrii fusului nuclear i meninerea ulterioar a ciclului cromozomial normal, reprezint bazele poliploidizrii prin utilizarea acestei substane.

131

Pentru a obine plante tetraploide se trateaz cu colchicin diferite organe ca: semine, plntue n primele stadii de dezvoltare, inflorescene i muguri axiliari, la nceputul dezvoltrii .a. Metodica de aplicare a tratamentului cu colchicin este condiionat, n general, de natura organului tratat i de specia utilizat. Tehnica tratamentelor cu colchicin a prilor vegetative ale plantelor sau a seminelor, este simpl. Pentru tratarea apexului vegetativ se utilizeaz o soluie de 0,25-0,50% colchicin care se picur pe apex sau se aplic tampoane de vat mbibat cu soluie, timp de 1/2 - 1or. Se mai poate plasa apexul vegetativ pe un substrat de agar impregnat cu soluie de colchicin 1% timp de ctev ore. n cazul imersrii seminelor negerminate, mbibate sau nembibate n prealabil n ap, se folosete o soluie apoas de colchicin cu o concentraie de 0,5-1,0-2,0%. Imersarea poate dura 24-48 ore, sau poate fi accelerat prin efectuarea tratamentelor n vid (PANFIL i colab., 1972; SALONTAI i SAVATTI jr., 1993, SAVATTI jr., 1997). La diferenierea primelor frunze, sau a celor cotiledonale, se fac determinri microscopice, pentru a se stabili gradul de ploidie prin metode indirecte i care vizeaz: - numrul de cloroplaste n celulele stomatice; - lungimea diametrului mare a celulelor stomatice; - numrul de celule stomatice n cmpul microscopic. Metodele indirecte de determinare a gradului de ploidie se bazeaz pe existena unor corelaii ntre gradul de ploidie i diferitele caractere macroscopice i microscopice ale plantelor i permit o triere rapid a plantelor potenial poliploide (RAICU i colab., 1969). Acestea sunt completate ulterior cu analize citologice ce sunt determinante n cunoaterea cu exactitate a gradului de poliploidie. Cele mai bune rezultate se pot obine prin efectuarea analizelor citologice pe radicele recoltate la orele 7-8 dimineaa, prefixarea lor n colchicin 0,5%, timp de 3 ore, urmat de fixarea n soluie Carnoy, mbierea n pectinaz 5% timp de 5 ore i n final colorarea cu orcein acetic. Principala metod de obinere a alopoliploizilor este hibridarea ntre specii diferite, compatibile. Hibridarea nu realizeaz n mod direct poliploizi, aprnd necesitatea tratamentului cu colchicin a hibrizilor, pentru dublarea numrului de cromozomi. Succesul utilizrii poliploidiei este condiionat de urmtoarele: - s se lucreze cu specii caracterizate prin numr mic de cromozomi; - s se realizeze mai degrab la plante alogame dect la cele autogame;

132

s se utilizeze specii cultivate mai ales pentru organe vegetative i mai puin pentru smn.

10.1. Efectele poliploidiei

n procesul de ameliorare a plantelor, poliploidia poate constitui premizele unor obiective majore dintre care menionm: Obinerea unor dimensiuni mai mari ale diferitelor pri ale plantei poate constitui un cert avantaj la speciile de la care se utilizeaz diferitele organe vegetative, sau la plantele decorative. De exemplu, poliploidia este utilizat n ameliorarea sfeclei de zahr i furajere, a trifoiului rou, a secarei., a diferitelor specii floricole (narcise, zambile) .a. La speciile care se cultiv pentru smn avantajele conferite de dimensiunile mai mari ale acesteia sunt adesea anulate de fertilitatea mai sczut a poliploizilor. Sporirea productivitii i a calitii constituie obiective majore n ameliorarea poliploizilor deoarece utilizarea lor, imediat dup obinere, nu prezint o eficien economic deosebit. n cazul trifoiului rou s-au obinut sporuri de producie cu 20-30% de mas furajer, comparativ cu formele diploide. La aceeai specie, coninutul n protein a crescut cu 2-3% la formele 4n comparativ cu cele 2n. Acelai lucru este semnalat i n cazul raigrasului tetraploid (SAVATTI, 1998). Obinerea unor nsuiri noi , ce nu se manifest la formele diploide este realizabil prin poliploidizare. Sfecla poliploid este mai rezistent la cercosporioz, comparativ cu formele diploide din care provine. Secara, trifoiul rou, raigrasul tetraploid manifest o mai bun rezisten la factorii stresani de mediu, avnd caliti biochimice superioare celor diploide. n cazul ultimelor dou specii se observ o cretere a perenitii. Favorizarea polenizrii este un efect al poliploidiei, fiind utilizat cu succes n ameliorarea sfeclei de zahr. S-a constat c polenul haploid de la plantele diploide germineaz i realizeaz o fecundare mai rapid dect polenul diploid produs de plantele tetraploide. Datorit acestui fapt, prin cultivarea alternativ a unei forme diploide (2n) i a unei tetraploide (4n) de sfecl, sau n amestec de 3:1 n favoarea formei tetraploide, pe genitorul tetraploid se formeaz un procent ridicat de smn triploid hibrid (3n), utilizat n producie. Smna triploid de sfecl mbin avantajele poliploidiei cu prezena heterozisului, ceea ce permite realizarea unor sporuri substaniale de producie, comparativ cu soiurile diploide sau tetraploide. Sterilitatea poliploizilor cu numr impar de garnituri cromozomale reprezint un avantaj economic la unele plante agricole. La pepenele verde, prin ncruciarea formei diploide cu cea tetraploid, hibrizii triploizi nu

133

formeaz smn. Asemntor, bananierul cultivat este un triploid la care nu se formeaz semine. Se poate spune c exist unele culturi la care autotriploidia poate constitui un obiectiv n sine. Acestea sunt hameiul, speciile de citrice i pyrethrum. Propagarea clonal este implicat n aceste cazuri. Sterilitatea este atractiv pentru primele dou culturi. La Pyrethrum sterilitatea conteaz mai puin deoarece floarea i nu fructul constituie rezultatul culturii. mbinarea genomurilor de la specii diferite. Prin poliploidizare s-a reuit s se fixeze hibrizii interspecifici sub form de amfiploizi, unii cu importan practic. Specia sintetic Triticale, care mbin genomurile grului cu cel al secrii, prezint avantaje, comparativ cu grul, n zonele cu ierni foarte aspre, sau pe terenuri nisipoase. Amfiploizii pot fi utilizai ca forme intermediare pentru realizarea unor ncruciri ndeprtate. Elocvent n acest sens este soiul de gru Transfer realizat de SEARS (GIOSAN i SULESCU, 1972). Fixarea strii de heterozigoie reprezint una din direciile de perspectiv n utilizarea poliploidiei n ameliorare. Dublarea numrului de cromozomi permite ca fiecare gamet s posede doi cromozomi omologi, care pot fi diferii prin genele lor. Datorit acestui fapt, se poate stabiliza un nalt grad de heterozigoie care rmne neschimbat chiar i n cazul autofecundrii. Pe aceast cale se sper s se obin fixarea heterozisului la porumb. Autotetraploizii Autopoliploizii naturali se formeaz prin unirea gameilor cu numr neredus de cromozomi (x=2x). Cei artificiali sunt obinui, dup cum s-a menionat, prin tratamente cu diferite substane poliploidizante. Comparativ cu formele diploide, autotetraploizii au organele vegetative mai dezvoltate, manifestnd fenomenul de gigantism. Utilizarea n procesul de ameliorare a unui astfel de material iniial a permis realizarea de rezultate notabile la cteva plante de cultur. Trifoiul rou tetraploid (2n=4x=28). Primele plante poliploide de trifoi rou au fost create artificial, de ctre LEVAN n 1940, iar obinerea primei varieti de trifoi rou tetraploid s-a realizat n Suedia (JULN, 1959). Dup aceast dat, au fost create numeroase varieti tetraploide. Rspndirea lor a fost la nceput limitat de un coninut mai sczut de substan uscat, o sensibilitate la secet i mai ales de o producie de smn inferioar formelor diploide. Principalul dezavantaj a trifoiului rou tetraploid, ca i a altor culturi furajere poliploide, este o mai slab legare a seminelor comparativ cu formele diploide. Pe lng unele neregulariti ale meiozei, intervine i faptul 134

c plantele tetraploide au flori mai mari i mai puine dect plantele diploide, fapt ce face ca polenizarea s se realizeze cu o oarecare dificultate de ctre polenizatori. Pe de alt parte, varietile tetraploide se evideniaz printr-o perenitate evident, o bun rezisten la boli i duntori, coninut ridicat n protein i glucide solubile, producia ridicat de biomas (SAVATTI, 1998). Raigrasul tetraploid. Euploidia i aneuploidia constituie o surs important de mrire a variabilitii genetice, utilizat cu succes n genul Lolium, respectiv la L. perenne, L. multiflorum i L. hybridum, ceea ce a permis crearea i introducerea n cultur a soiurilor tetraploide. Primele soiuri tetraploide de raigras peren (L. perenne) i raigras italian (L. multiflorum) au fost create n Olanda, prin tratarea seminelor ncolite sau a plntuelor nfrite n diferite stadii, cu soluie de colchicin 0,2% concentraie, timp de 2-4 ore. Soiurile tetraploide cultivate au un MMB mai mare cu 72-82% dect soiurile diploide, un spor de producie de mas verde de 8-18% comparativ cu soiurile diploide, dar aproximativ egal sub aspectul S.U. S-a constatat c dei animalele prefer s pasc plantele tetraploide, acestea nu prezint rezisten la clcare, comparativ cu cele diploide (BOGOERT, 1975). n general, plantele tetraploide, comparativ cu cele diploide au culoarea verde nchis, mai puin lstarii vegetativi, dar au frunze i lstari cu limea, respectiv cu grosimea mai mare (SCHITEA, 1998). Dup MARIA SCHITEA (1998) selecia plantelor tetraploide se face prin analiza mitozei, metod ce a fost completat cu determinarea numrului i msurarea lungimii stomatelor, ceea ce permite o difereniere expeditiv a plantelor 2n de cele 4n, cu o mare marje de siguran. Soiurile tetraploide, de raigras aristat ct i cel de raigras peren au fost create i extinse n cultur fiind superioare formelor diploide, sub aspectul produciei de mas verde i a calitii acesteia. Soiurile tetraploide sunt stabile din punct de vedere genetic, nu se ncrucieaz cu cele diploide. Cercetrile recente, n domeniul utilizrii euploidiei la raigras au vizat selecia unor genotipuri cu coninut ridicat de substan uscat pornindu-se de la un soi diploid valoros sub acest aspect (REHEUL i BAERT, 1993; BAERT, 1994). Secara tetraploid (2n=4n =28). Utilizarea ocurilor de temperatur iau permis lui DORSEY (1936) s obin primul soi tetraploid de secar. Amplificarea lucrrilor s-a realizat dup 1941, odat cu utilizarea curent a colchicinei n lucrrile de ameliorarea plantelor. Comparativ cu diploizii, autotetraploizii se caracterizeaz prin mrimea prilor vegetative, rezultant a unui numr mai mare de cromozomi i a unui volum mai mare a celulelelor. Cultivarele tetraploide au paiul mai 135

tare i mai nalt, frunze mai mari, spice mai lungi, iar seminele sunt de aproape dou ori mai grele dect n cazul diploizilor. Aceast ultim modificare a adus schimbri n raportul dintre hidraii de carbon i proteine, secara tetraploid avnd cu cca. 2% mai mult protein i de aici proprieti panificabile superioare. Un neajuns a secarei tetraploide este proporia ridicat a sterilitii, cu cca. 20% mai mare dect la secara diploid, cultivat n condiii de producie. Sterilitatea rezult din formarea trivalenilor i univalenilor, ca i a lipsei balansului necesar ntre cromozomi i citoplasm. Aceste cauze au fcut ca secara tetraploid s fie timid acceptat de cultivatori. Un alt dezavantaj este acela c dac este cultivat n vecintatea unui lot cu secar diploid incidena triploizilor va fi ridicat datorit polenizrii libere, plantele triploide fiind complet sterile. Secara tetraploid este adecvat a fi cultivat pentru furaj verde, avnd o dezvoltare luxuriant a prilor vegetative. Poliploidia deine un loc important n ameliorarea arborilor. Astfel, creterile viguroase i producia foarte ridicat de mas lemnoas n cazul unor specii forestiere poliploide ca Sequoia sempervirens, Populus tremula f. gigans, Alnus glutinosa .a. sunt puse n valoare n practica silvic. Poliploizii indui artificial la Angiosperme manifest, n general, capacitate de acumulare de biomas superioar diploizilor. La Gymnosperme, poliploidia, avnd efecte de reducere puternic a ritmului diviziunilor celulare, respectiv a creterilor, este folosit pentru obinerea de arbori pitici ornamentali(mai ales n Japonia). n silvicultur, ns, poliploidia este departe de a-i fi dezvluit marile sale resurse de ameliorare a arborilor, n vederea scurtrii substaniale a ciclurilor de producie, a mbuntirii calitii lemnului, a creterii coninutului de celuloz i colofoniu .a. Inducerea autotetraploidiei are o vechime mai mare de o jumtate de secol, obinndu-se rezultate remarcabile doar la un numr relativ mic de specii. Din cauza profundelor schimbri genetice i a unei evidente lipse de balansare ntre nucleu i citoplasm, fac ca ciclul mitozei s fie mai lent, maturizndu-se mai trziu comparativ cu diploizii. Totodat, numrul diviziunilor mitotice poate fi redus ceea ce face ca tetraploizii, n majoritatea cazurilor, s nu prezinte o cretere evident, n ciuda prilor vegetative mai mari. Principalul neajuns al tetraploizilor artificiali este dat de sterilitatea parial ce apare, n ciuda unui numr par de cromozomi. La tetraploizi exist patru cromozomi omologi care favorizeaz un quadrivalent n stadiul de pachinem al meiozei. Dac n anafaza I, o pereche de cromozomi migreaz spre un pol i cealalt pereche spre cellalt pol, celulele sexuale vor conine 136

acelai numr de cromozomi, fiind capabili de fecundare. n cazul neformrii de quadrivaleni, ci trivaleni i univaleni, caz frecvent ntlnit la tetraploizii indui, i apreciat de CANDERON (1986), ca fiind n proporie de 30-60%, apar gamei cu numr inegal de cromozomi, incapabili de o fecundare normal. Dac o gen este prezent n patru doze n loc de dou doze, ea poate interaciona diferit cu alte gene, incluznd gene localizate n cloroplaste i mitocondrii (MORRIS, 1983). Acest fapt poate genera, de asemenea, apariia sterilitii pariale, care reduce valoarea practic a unor tetraploizi, exceptnd pe cele care pot fi propagate vegetativ. Schimbarea din starea diploid n cea tetraploid cere o perioad apreciabil pentru realizarea unui balans biochimic i genetic n cadrul celulelor i prilor vegetative, ca i pentru adaptarea la mediu. Datorit acestui fapt, se recomand lrgirea bazei genetice pentru inducerea autotetraploizilor i aciunea cu succes a presiunii de selecie. Autotriploizii Organismele la care n genomul complet fiecare cromozom este prezent de trei ori, se numesc triploizi (3x). Organismele triploide sunt mai viguroase dect echivalenii lor diploizi sau chiar tetraploizi, utilizndu-se cu succes n cultur (exemplu, sfecla de zahr, sfecla furajer .a.). Din cauza numrului impar de cromozomi meioza la triploizi este neregulat, rezultnd organisme sterile. Acest fenomen prezint un evident avantaj n cazul soiurilor comerciale triploide, neavnd semine (struguri, pepene verde, banane .a.). La speciile cu multiplicare vegetativ cum ar fi ierburile, pomii fructiferi i plantele decorative, triploizii sunt foarte frecveni. Ei pot s apar i n cazul n care o ovul cu un numr neredus de cromozomi (n=2x) este fecundat de polen cu numr redus de cromozomi (n=x). Obinerea frecvent a triploizilor se realizeaz i prin ncruciarea formelor tetraploide cu cele diploide. Sfecla de zahr (2n=2x=18; 3x=27; 2n=4x=36), triploid este un produs indiscutabil a ingineriei cromozomale. n 1938, SCHWANITZ a obinut sfecla de zahr tetraploid, care prin ncruciarea cu sfecla diploid a dus la crearea sfeclei triploide, mai productiv dect ambele forme parentale (dup HENDRICKSEN, 1979). Crearea soiurilor poliploide de sfecl necesit urmtoarele etape: - inducerea artificial a tetraploizilor i selecia acestora;

137

obinerea formelor tetraploide valoroase, cu capacitate combinativ ridicat; - gsirea celor mai favorabile combinaii hibride ntre formele tetraploide i diploide. Soiurile poliploide conin indivizi care aparin la diferite grade de ploidie, de obicei di-, tri- i tetraploizi, din care cauz au fost denumite anizoploide, spre deosebire de cele diploide i tetraploide, care prezint un singur grad de ploidie, fiind denumite izoploide. Componena soiurilor anizoploide este diferit, n sensul c proporia triploizilor se ridic n general la peste 40%, de obicei 40-60%. La soiurile create pe baz de androsterilitate ea poate depi 90%. Proporia diploizilor, care variaz n limite mari, nu trebuie s depeasc 40%. n sensul strict al cuvntului, este considerat soi poliploid numai acela care este format din plante triploide i tetraploide, iar soi triploid, n care predomin plantele triploide, avnd o proporie redus de plante cu alte grade de ploidie ale genomului. Componena soiurilor anizoploide este condiionat de raportul dintre plantele soiurilor parentale, de gradul de fecundare selectiv a celor dou forme parentale, de procedeul de recoltare, de sterilitatea polenului unuia dintre cele dou soiuri componente .a. (STNESCU i RIZESCU, 1976). Cel mai bun raport ntre formele parentale este de 1:3 sau 1:2, n favoarea formelor tetraploide, cnd se folosesc butai. Utilizarea butailor cu grad diferit de ploidie face ca plantarea s se fac alternnd trei rnduri ale soiului tetraploid cu un rnd a soiului diploid, sau 6:2. n cazul n care amestecul este format din smn (baz), raportul poate fi de 1:5; 1:8, deoarece smna tetraploid are o germinaie mai sczut i dimensiuni mai mari. S-a constatat c nu apar diferene marcante ntre proporia tetraploizilor obinui din smna realizat de la semincerii plantai n rnduri alternative i smna rezultat din recoltarea n amestec a formelor parentale. Apar diferene evidente n cazul n care cele dou forme parentale se planteaz alternativ i se recolteaz smna numai de la componentul tetraploid. Efectul heterozis ce se manifest la formele poliploide de sfecl de zahr se datoreaz fenomenului de selectivitate n procesul fecundrii. ncruciarea liber a formelor 4n i 2n ar trebui teoretic, s duc la realizarea unei semine hibride n proporie de 50%. n realitate proporia plantelor triploide poate fi de 60-80% n cazul utilizrii -

138

soiului tetraploid ca mam i de 10-20% cnd soiul diploid este utilizat n aceast calitate. Avantajele oferite de sfecla de zahr triploid au fost evideniate mai ales dup descoperirea fenomenului de androsteriltate de ctre OWEN n 1942. Aceasta, a fcut posibil producerea pe scar larg, a hibrizilor triploizi monogermi. n acest scop se utilizeaz ca form mam linii androsterile, diploide sau tetraploide. FISCHER (dup STNESCU i colab., 1976), rezumnd avantajele uneia sau altei forme materne, consider ca neproductiv utilizarea formei tetraploide din cauza slabei capaciti de germinare a seminelor acestei forme. Pentru a crea soiuri comerciale triploide apare necesitatea, naintea obinerii hibrizilor, de a realiza o selecie la nivelul liniilor androsterile diploide i realizarea de smn diploid prin utilizarea liniei diploide menintoare. La nivel tetraploid apare necesitatea verificrii gradului de ploidie i capacitatea genitorului patern de a realiza un polen fertil. Pepenii verzi fr smn (3x=33). Geneticianul KIHARA a obinut n 1951 pepeni verzi fr smn, prin ncruciarea pepenilor diploizi (2n=2x=22), cu cei tetraploizi (2n=4x=44). Din cauza meiozei complet neregulate, plantele triploide (3x=33) nu formeaz semine, situaie ce avantajeaz comercializarea acestora. Via de vie triploid i tetraploid (3x=57; 2n=4x=76). Soiurile triploide i tetraploide de vi de vie au fost realizate de asemenea, prin colchicinizare. Cele tetraploide au boabe mari i un numr redus de semine, cu avantaje comerciale. Aspectele negative sunt condiionate de producia relativ sczut. Soiurile triploide sunt complet lipsite de smn fiind ideale pentru obinerea stafidelor (soiuri apirene). La speciile forestiere din genurile Populus, Alnus, Betula, Robinia, stadiul triploid pare s reprezinte numrul optim de cromozomi, cruia i corespunde potenialul biologic maxim. Triploidul rezultat prin ncruciarea laricelui european cu laricele occidental (Larix occidentalis) s-a dovedit de asemenea, deosebit de viguros. Triploidul natural a plopului tremurtor crete mai viguros dect diploizii (tabelul 10.1) . Tabelul 10.1 Volumul tulpinilor la diploizi i triploizi de plop treurtor (diploizi=100%) (dup Institut of Paperehemistry, din J.W.WRIGHT, 1964) 139

Prini
P. tremula P. tremula
P. tremuloids P. tremula

Diploizi (%)
100 100

Triploizi (%)
92 129

Mai repede dect diploizii cresc i triploizii de Alnus glutinosa i Ulmus glabra. n schimb, la Betula verrucosa i B. verrucosa B. mandshurica var. japonica, viteza de cretere a triploizilor este uor diminuat. Alopoliploidia Alopoliploizii sau amfiploizii rezult n urma hibridrii naturale sau artificiale a dou sau mai multe specii sau genuri, urmate de dublarea sau multiplicarea seturilor de cromozomi. Duplicarea apare dup fuzionarea a doi gamei cu numr neredus de cromozomi. O metod mai eficient pentru obinerea alopoliploizilor s-a dovedit tratarea generaiei F1 cu colchicin. O alt cale este backcrosarea generaiei F1 cu printele ce posed un numr mai mare de cromozomi. Alopoliploizii, datorit prezenei n stare dubl a seturilor originare de cromozomi, fixeaz i manifest caracteristicile ambelor specii genitoare. Ei sunt fertili deoarece n meioz mperecherea cromozomilor este la fel de regulat ca i la diploizii originari. Spre deosebire de autotetraploizi la care n meioz, din cauza homologiei cromozomilor se formeaz multivaleni, n meioza alopoliploizilor (n lipsa homologiei dintre seturile de cromozomi) se formeaz numai bivaleni. Datorit acestui fapt, n sporogenez se vor forma gamei normali. Pentru a nelege procesul formrii alopoliploizilor aceasta poate fi exemplificat prin intermediul unor specii sintetice, ca de exemplu, Triticale. n urma ncrucirii ntre gru i secar apar plante F 1 cu 28 de cromozomi, a cror caractere sunt intermediare. Plantele F1 sunt complet sterile deoarece toi cromozomii sunt univaleni i gametogeneza este neregulat. Cnd plantele F1 sunt backcrosate cu grul, descendenii rezultai posed 42 de cromozomi derivai de la gru i 7 de la secar. Deoarece cromozomii de gru formeaz bivaleni n meioz, univalenii de secar nu prezint un efect negativ puternic asupra procesului meiotic a plantelor primului backcross, fiind parial fertile. Gameii diferii apar n cursul gametogenezei la plantele primului backcross. Cromozomii grului fiind bivaleni se distribuie regulat la polii celulei, cte 21 cromozomi la fiecare, n 140

timp ce cromozomii secarei fiind univaleni se distribuie neregulat. Dac un ovul va avea 21+7 cromozomi i va fi fecundat de un gruncior de polen cu 21+7 cromozomi, plantele rezultate vor avea cromozomii de la gru i de la secar, n total 56 cromozomi, constituind specia sintetic de tip octoploid denumit Triticale (genomul AABBDDRR, 2n8x=56) Acest tip de triticale a fost obinut de ctre MUNTZING n Suedia i PISAREV n Rusia, dar el nu s-a putut impune n producia agricol datorit produciei de boabe relativ sczut (SAVATTI, 1983). Pentru a corecta deficiena semnalat, n ultimele decenii ale secolului trecut, s-au investit eforturi susinute pentru a realiza Triticale hexaploide (AABBRR, 2n=6x=42), prin ncruciarea varietilor de gru turgidum (2n=4x=28), cu secara (2n=2x=14) i tratarea plantelor F1 cu colchicin (BOROJEVI, 1990). Amploarea lucrrilor efectuate au dus la obinerea unor soiuri valoroase de triticale, sub aspect cantitativ i calitativ. n acest sens menionm soiurile Mapache, Beagle, Rohum .a. obinute la CIMMYT n Mexic, Lasko, Grado, Bokro i Malmo n Polonia, Vldeasa, Ulpia, Silver Tebea .a. n Romnia. Hibrizii ntre diferitele specii i genuri ofer posibiliti pentru creterea potenialului genetic a productivitii. S-au creat aloploizi cu 42 de cromozomi ntre Elymus, care, posed spice cu peste 100 spiculee i gru. MUJEEB-KASI i colab., (1983) au menionat astfel de realizri. Metodele moderne de inginerie cromozomal i genetic pot duce la realizri noi n acest domeniu. Raigrasul hibrid este rezultanta ncrucirii ntre Lolium perenne i L. italicum, fiind considerat un amfiploid sintetic, de perspectiv. Are o cretere iniial rapid i o valoare nutritiv ridicat motenit de la raigrasul italian i o rezisten ridicat la stresuri i o bun fertilitate motenite de la raigrasul peren. Rapia (Brassica napus, 2n4x=36) este un sintetic realizat prin ncruciarea lui B. campestris (2n2x=20) i B. oleracea (2n2x=16). Brassica napus a aprut n mod natural, dar se poate realiza i pe cale artificial. ncrucirile ntre alotetraploizii naturali i cei sintetici duc la o evident cretere a variabilitii genetice, variabilitate care se folosete pentru ameliorarea noilor soiuri de rapi. Pe lng alopoliploizii menionai, au fost obinui i ali alopoliploizi, dar acetia se folosesc ca material experimental sau au o semnificaie teoretic pentru studiile de genetic. Speciile forestiere. Anumite familii cu specii lemnoase, avnd numere de baz relativ mari: Fagaceae x=12, Aceraceae x=13, Betulaceae x=14, 141

Ulmaceae x=14, Juglandaceae x=16 par a fi provenit printr-un proces de alopoliploidie din trecutul ndeprtat de evoluie a angiospermelor. n ceea ce privete formarea speciilor, de exemplu Aesculus carnea (4x) rezult din ncruciarea speciilor A. hippocastanum (2n)A. pavia (2x), fiind un alotetraploid fixat i fertil. Triploidul A. plantierensis (2n=3x) a luat natere prin ncruciarea dintre A. carnea (4x)A. hippocastanum (2x), fiind steril. Fraxinus tomentosa (6x) pare s fie rezultanta ncrucirii ntre F. americana (4x)F. pennsylvanica (2x), iar Prunus domestica (2n=6x=48) este un amfiploid rezultat din ncruciarea P. spinosa (2n=4x=32) P.cerasifera (2n=2x=16). Aneuploizii Aneuploizii sunt organisme ce prezint un numr mai mare sau mai mic de cromozomi individuali, comparativ cu disomicii (2n). n acest sens se pot meniona: - monosomicii, 2n-1, organisme care au pierdut un cromozom; - nulisomicii, 2n-2, la care lipsesc ambii cromozomi ai unei perechi omoloage; - trisomicii, 2n+1, un cromozom fiind prezent de trei ori; - tetrasomicii, 2n+2, un cromozom este prezent de patru ori. Aneuploizii nu pot fi utilizai direct n producie. Cnd se obin serii monosomice i trisomice, ele pot fi utilizate pentru substituirea sau adiia cromozomilor individuali, la soiurile existente. Serii de monosomici i trisomoci s-au obinut la numeroase culturi agricole (tabelul 10.2), iar posibilitile de utilizare a acestora au fost menionate de ctre SEARS (1972), KHUSH (1973), RILEY i LAW (1984).
Tabelul 10.2. Linii monosomice i trisomice la diferite specii agricole (dup BOROJEVI, 1990)

Gru (T. aestivum) Ovz (Avena sativa) Tutun N. tabacum) Tomate (Lycopersicum esculentum) Spanac (Spinacia oleracea) Secar (Secale cereale) Orez (Oryza sativa) Sorg (Sorghum vulgare) 142

2n = 42, cu 21 linii monosomice 2n = 42, cu 21 linii monosomice 2n = 48, cu 24 linii monosomice 2n = 24, cu 21 linii trisomice 2n = 12, cu 6 linii trisomice 2n = 14, cu 7 linii trisomice

Orz (Hordeum vulgare)

2n = 24, cu 12 linii trisomice 2n = 20, cu 10 linii trisomice 2n = 14, cu 7 linii trisomice

Prin utilizarea liniilor monosomice i trisomice se poate evidenia rolul anumitor cromozomi n expresia caracterelor i a dezvoltrii organismului ntreg. Monosomicii permit localizarea poziiei genelor pentru anumite caractere, pe cromozomi. Pentru a stabili care cromozom a unui soi este purttor a unei gene sau mai multor gene pentru o rezisten la un anumit patogen, se va ncrucia soiul respectiv cu monosomii altui soi. Dac rezistena este diminuat i controlat de o singur gen, se poate atepta ca 75% din plantele F 2 s fie rezistente i 25% susceptibile. Hibridarea care va da numai descendeni rezisteni indic c gena de rezisten este localizat pe cromozomul pentru care aceast plant este monosomic. Maniera de lucru poate fi sumarizat la urmtoarele: A. pentru localizarea cromozomului care poart gena dominant: a. un genitor disomic posednd gena dominant este ncruciat cu seriile monosomice ale altui genitor; b. n generaia F1, att plantele monosomice ct i cele disomice vor evidenia un caracter dominant i cromozomul purttor al genei de rezisten nu poate fi identificat; c. n generaia F2 plantele disomice segreg n dominante i recesive n raport de 3:1. Descendenii care nu segreg sunt monosomici i posed cromozomul care poart gena dominant. B. pentru localizarea unui cromozom care poart gena recesiv: n acest caz, localizarea cromozomului ce poart gena recesiv se poate realiza n F1, pe baza urmtoarei scheme: a. un genitor disomic posednd o gen recesiv este ncruciat cu seriile monosomice ale altui genitor; b. n generaia F1, planta cu caracterul recesiv este monosomic i posed cromozomul purttor a genei recesive. Pe baza celor menionate, numeroase gene de pe cromozomii individuali au fost localizai cu ajutorul seriilor monosomice. Menionm c gena Lr9 pentru rezistena la rugina frunzelor de gru este localizat pe braul lung al cromozomului 6B, gena Hg pentru glume proase, pe braul scurt al cromozomului 1AS (SEARS, 1966).

143

n cazul speciilor forestiere, la genul Tiletia (x=41=67-1), cei mai apropiai prini au 7 cromozomi, aa c originea sa se explic prin multiplicarea seturilor iniiale i prin aneuploidie (WRIGHT, 1950). 10.2. Adiia i substituia de cromozomi Pe lng importana deosebit ce o prezint pentru studiile genetice, aneuploidia st i la baza unor metode de ameliorare cum sunt: adiia de cromozomi, substituia de cromozomi i transferul de gene. Prin intermediul lor s-au obinut rezultate favorabile sub aspectul ameliorrii rezistenei grului la boli. Utilizarea seriilor monosomice a permis substituirea cromozomilor individuali dintr-un soi, cu cromozomii din alt soi. n cazul ncrucirii a doi genitori, exist anse reduse ca descendena s aib toi cromozomii unui printe i numai un cromozom de la cellalt printe, a crui caracter se intenioneaz a fi transferat. Aceasta a fost posibil prin obinerea i utilizarea seriilor monosomice. SEARS (1956) a transferat rezistena la rugina frunzelor, de la Aegilops umbellulata la grul comun. Pentru reuita hibridrii a folosit o specie intermediar, Triticum dicoccoides, dup schema: T. dicoccoides AABB Ae. umbellulata UU F1 grul comun (T. aestivum) AABBDD BC1F1 grul comun BC2F2 grul comun BC2F3 realizndu-se o plant cu 21" (gru)+1' (Aeg) (simbolul ' reprezint univa-lenii, iar " bivalenii). S-a obinut o plant rezistent la rugina frunzelor cu 42 cromozomi de la gru i un bivalent de Aegilops. Hibridul obinut prezenta unele deficiene, ceea ce a pus problema separrii din cromozomul de la Aegilops purttor a rezistenei la rugin, de caracterele negative. Descendenii plantelor primare au fost expuse iradierii cu raze X, iar polenul iradiat a fost utilizat pentru polenizare. Din cele 6.091 plante obinute, 40 au prezentat partea dorit de la cromozomul de Aegilops, translocat cromozomului 6B al grului comun. SEARS a denumit noul soi Transfer, care, timp de muli ani a servit, n programele de ameliorare, ca surs de rezisten la rugina frunzelor i tulpinilor (fig. 10.1.). 144

Un exemplu mai recent, l constituie transferul rezistenei la Pseudocercosporella herpotrichoides de la Aegilops ventricosa la Triticum aestivum prin intermediul T. turgidum subsp. carthlicum (CAUDERON, 1986). Soiul ROASARE prezint gene de rezisten de la Ag. ventricosa pe cromozomul 7D, prezentnd i translocaia 5B/7B. Adiia de cromozomi a fost aplicat i n obinerea unor linii de adiie prin ncorporarea unui cromozom de la secar, ntr-un set cromozomal al grului (OMARA, 1951; EVANS i JENKINS, 1960). Liniile de adiie de secar, ovz, gru i tutun obinute pn n prezent, nu au dus la crearea unor soiuri comerciale valoroase, deoarece genotipurile cu una sau mai multe perechi de cromozomi adiionai de la alte specii sunt instabile i cromozomul adiionat se pierde n mod frecvent. Substituia interspecific i intervarietal are o seminificaie mult mai mare pentru ameliorarea plantelor dect adiia de cromozomi. Dac un soi, posednd o serie monosomic se utilizeaz ca recurent i se intenioneaz ncorporarea rezistenei la rugina frunzelor (ex. Lr9) n acesta, se ncrucieaz cu un soi donator care posed gena (ex. soiul Transfer). n generaia F1 se realizeaz selecia pentru plantele rezistente la rugina frunzelor i se retroncrucieaz cu soiul recurent. Dup 4-6 backcrossuri i autopolenizri, se obin plante disomice care au majoritatea perechilor de cromozomi de la soiul recurent i o pereche de cromozomi de la donator, purttoare a genei pentru rezisten. Pentru substituia cromozomilor intervariatali, o perioad ndelungat de timp a fost utilizat soiul Chinese Spring, la care SEARS (1954), a creat o serie complet de monosomici, asigurnd smn tuturor amelioratorilor interesai. Soiul menionat neavnd valoare agronomic deosebit, liniile de substituie au prezentat interes pentru studiile de genetic privind rolul cromozomilor individuali n controlul anumitor caractere.

145

Emmer
(Triticum turgidum ssp. diccocoides)

Fig. 10.1. Substituie de gene prin hibridare interspecific

LAW i colab. (1987) au obinut linii de substituie la un soi comercial valoros, Capelle Desprez i la soiul semipitic Hobbit Sib.

146

Liniile de substituie ale lui Capelle Desprez au fost folosite pentru studii genetice privind vernalizarea, talia plantelor, rezistena la boli, calitile de panificaie i compenentele produciei. Exemplele menionate ilustreaz substituiile intervarietale, respectiv ntre dou soiuri ale aceleai specii. Se pot realiza substituii de cromozomi ntre diferite specii sau genuri. La gru, n urma studiilor fcute de RILEY i CHAPMAN (1958), RILEY (1968), s-au obinut rezultate interesante. Ei au demonstrat c mperecherea cromozomilor omologi este controlat de o gen dominant (Ph) localizat pe braul lung al cromozomului 5B. RILEY (1968), a transferat rezistena la Puccinia striiformis de la Aegilops comosa la grul comun. Plantele rezulate au 42 de cromozomi de la grul comun i un bivalent cromozomul 2M de la Aegilops. Rezultatul acestei hibridri a fost soiul Compire. Acest soi are o meioz normal i poate fi utilizat la transferul rezistenei la P. striiformis fr a manifesta dificultile ce apar de regul n cazul hibridrilor interspecifice. LAW i colab. (1983) au reuit ca prin substituirea cromozomului 2M de la Aeg. comosa cu unul dintre cromozomii 2A, 2B sau 2D de la grul comun s ridice n mod semnificativ coninutul n protein la ultima specie. Substituirile de cromozomi ntre gru i secar au stat la baza obinerii unor soiuri de gru de mare valoare comercial. Cele mai interesante substitiii i translocaii sunt cele ale cromozomului 18 de la gru i cromozomul 1R la secar. Soiul Zorba obinut n Germania are un cromozom complet al secrii 1R, substituind o pereche de cromozomi de la gru, 1B. Aceast substituie a dus la imprimarea rezistenei fa de unele rase de rugin, rugina tulpinilor (Sr31), rugina frunzelor (Lr26), rugina striat (Yr9) i finare (Pm8). Ca rezultat a ncrucirilor ntre varieti de gru i secar, braul scurt al cromozomului de secar 1R a fost translocat la cromozomul de gru 1B, formnd translocaia 1BL/1BS, n care sunt pstrate genele pentru rezisten la boli de la secar. Prin acceai metod s-a obinut i soiul Salzmunder Bartweizen, cu translocaia 1B/1R. De la acest soi au derivat numeroase soiuri cu substituie, dintre care menionm soiul Neuzucht, utilizat de LUKYANENKO pentru obinerea soiurilor Caucaz i Aurora cu o bun rezisten la boli, o excelent structur a spicului i fertilitate. Dei nu s-au rspndit n cultur n URSS, au contribuit la crearea a numeroase soiuri cu productivitate ridicat din multe ri, cum sunt Lovrin10 n Romnia, Anika, Istra i Solaris n Cehoslovacia, Burgas, Balcan i Zvesda n Iugoslavia .a. (BOROJEVI, 1990). 147

Au fost realizate substituii sau translaii de cromozomi ai grului, cu ali cromozomi, de la secar (2R i 7R), dar fr a se atinge succese notabile n ameliorare, comparativ cu cele menionate anterior.

10.3. Haploidia
Pe lng fenomenul de poliploidie, n natur se ntlnesc i cazuri de reducere la jumtate a numrului de cromozomi din celulele somatice, adic de la 2n la n, fenomen denumit haploidie (n fiind multiplul numrului de baz x). Cu alte cuvinte organismele haploide posed n celulele somatice acelai numr de cromozomi (n) ca i un gamet al aceleiai specii. Primii haploizi au fost detectai, i studiai la Datura stramonium de ctre BLAKESLEE i colab. n 1923 (dup BOROJEVI, 1990). Ulterior, s-au gsit haploizi la porumb, tutun, tomate, gru, .a. O plant haploid se dezvolt dintr-un ovul nefecundat (ginogenez), din alte celule ale gametofitului (apogamic), dintr-un gamet mascul (androgenez) sau prin poliembrionie, coninnd diferite forme genomice, n funcie de nivelul de ploidie a speciilor din care provin (LACADEMA, 1974). njumtirea numrului de cromozomi din celulele somatice i de apariie a haploizilor i-a gsit aplicare n ameliorarea plantelor. Astfel, la porumb, haploizii care apar n mod natural, cu o frecven redus, sunt utilizai prin redublarea numrului de cromozomi la obinerea de linii absolut homozigote. Odat izolat secvena urmrit, se recurge la dublarea numrului de cromozomi prin colchicinizare, pentru a reveni la numrul normal de cromozomi. Frecvena haploizilor naturali este sczut, de aproximativ 1/1.000 n cazul partenogenezei i cca. 0,1/1.000 n cazul androgenezei. La plantele superioare, incidena haploidiei naturale este de 0,05% la Zea mays, 0,5% la Triticum monococcum, 0,025% la T. aestivum, 0,0250,037% la Gossypium barbadense etc. Ca o regul general, plantele haploide sunt mai scunde dect cele diploide, mai puin viguroase, tardive i complet sterile din cauza cromozomilor univaleni. Pentru a se corecta aceste deficiene, haploizii se dubleaz cu ajutorul colchicinei pentru a se obine organisme diploide, aa numiii dihaploizi sau dubli haploizi. Oragnismele dihaploide sunt complet homozigote pentru toate genele alelice, situaie ce nu se realizeaz n totalitate n cazul liniilor consangvinizate, sau a organismelor autogame. Importana lor pentru 148

studiile de genetic ca i n ameliorare au dus la aprofundarea metodelor de obinerea lor in vivo i in vitro, cu o frecven sporit.

10.3.1. Metode de inducere a haploizilor i dublu haploizilor Dei are o valoare teoretic i potenialiti largi de aplicare, haploidia, pn n ultimele decenii a ocupat un loc nesemnificativ n programele de cercetare genetic i de ameliorare a plantelor de cultur. Aceasta s-a datorat incidenei reduse a haploidiei spontane, dar mai ales lipsei unor metode experimentale eficiente pentru izolarea de haploizi cu frecven ridicat i de obinerea de linii dublu haploide homozigote. Dintre metodele experimentale, actuale, de inducere a haploizilor, cele mai utilizate sunt: a. Poliembrionia, respectiv apariia de embrioni gemeni sau mai muli embrioni, este destul de frecvent la plante. Embrionii gemeni pot avea o constituie cromozomal identic: diploid-diploid, haploidhaploid sau diferit, diploid-haploid, diploid-tetraploid, haploidtriploid etc. Poliembrionia ca surs de haploizi se utilizeaz frecvent la speciile de Linum usitatissimum, Caspicum annuum, Beta vulgaris .a. (NITZSCHE i WENZEL, dup SAVATTI, 1983). Frecvena poliembrioniei variaz n funcie de specie i de genotip. Existena unui control genetic a acestui fenomen permite selecia de genotipuri cu capacitate mrit de formare de poliembrioni, dei ntre incidena poliembrioniei i frecvena haploizilor nu s-a gsit nici o corelaie stabil. La ICCPT Fundulea s-a utilizat cu succes aceast metod pentru obinerea de haploizi i linii dublu haploide homozigote la in (DOUCET, 1970). b. Hibridarea interspecific i interploid, permite obinerea haploizilor partenogenetici sau semigametici la speciile cultivate Solanum, Medicago, Brassica, Nicotiana, Gossypium .a. La Solanum tuberosum se obin haploizi n procente relativ ridicate prin ncruciarea speciilor tetraploide (2n=4x=48), cu specii diploide (2n=2x=24). Aceast metod a devenit extrem de folosit odat cu descoperirea polenizatorului diploid Solanum phureja de ctre HOUGAS i PELAQUIN (1957). Prin selecia riguroas a genitorilor 149

s-a mrit frecvena haploizilor de 10-11 ori (PANFIL, ELENA MARIN, 1972-1974). n cazul lui Medicago sativa, autotetraploid, obinerea de linii dihaploide se realizeaz prin hibridarea cu diploidul Medicago falcata (BINGHAM, 1969). Cnd un tetraploid i un diploid sunt ncruciai, ca rezultat al partenocarpiei, se obine un dihaploid care posed embrion 2x i endosperm 6x, n loc de 4x+6x. n cazul cpunului, octoploid, ncruciarea se realizeaz cu tetraploidul Potentilla arsenina utilizat ca polenizator (JANICK i HUGHES, 1974). Se ntlnete adeseori i fenomenul de semigamie cnd celula generativ a unui gruncior de polen intr n sacul embrionar dar nu fuzioneaz cu ovula, rezultnd o plant haploid himeric. Frecvena haploizilor poate fi influenat pozitiv de polenizarea ntrziat (CHASE, 1969), tratamente chimice (LACADENA, 1974), sau sub efectul citoplasmei strine (TSUNEWAKI i colab., 1968). c. Selecia de genotipuri stimulatoare i a markerilor genetici pentru inducerea i depistarea haploizilor, se utilizeaz cu succes n special la porumb (CHASE, 1974). Pentru izolarea de haploizi prin procedeul markerilor genetici, forma matern cu gene recesive, este polenizat cu polen ce prezint alele dominante marcatoare. Cea mai mare parte a descendenei fiind de origine hibrid, va manifesta caracterele dominante marcatoare ale tatlui i se va elimina. O mic parte a descendenei (cca. 1/1.000) la care nu se manifest caracterele dominante marcatoare ale genitorului patern, se presupune a fi haploid (de origine partenogenetic) i se va menine pentru analiz citologic, n vederea confirmrii strii haploide (BOTEZ, 1979). nc din anul 1949, CHASE a obinut la porumb linii homozigote de origine haploid, prin utilizarea markerilor genetici de culoare. La nceput a utilizat markeri de culoare ai plntuei, apoi markeri de culoare ai embrionului i seminei. Paralel cu utilizarea markerilor genetici, CHASE a selecionat i folosit genotipuri valoroase ca surs pentru haploizi. Varietile de porumb Stock 6, Golden Cross Bantam i Stiff Stalk Sinthetic au indus o frecevn de 4/1.000 haploizi, iar hibrizii dubli de la aceti haploizi au dat frecvene de 10/1.000 de indivizi. Selecia de genotipuri din Stiff Stalk Sinthetic a mrit frecvena haploizilor de la 1,2 la 8,7/1.000. d. Cultura in vitro. Metoda culturii de antere a devenit cea mai important metod in vitro de obinere a haploizilor, din polen. S-au 150

obinut haploizi, prin aceast metod la peste 60 de specii, 90% din familiile Solanacee i Gramineae (SUNDERLAND, 1983; JENSEN, 1986). Regenerarea cu succes a plantelor ntregi din calusul anterelor a fost realizat numai la un numr limitat de specii de plante, tutun, cartof, varz, tomate, orez, gru, petunia, porumb etc. (JENSEN, 1986). Perspectivele utilizrii androgenezei ale crei potenialiti au fost insuficient valorificate depinde de elucidarea unor aspecte de biologie celular privind modificrile ce au loc n antere n cursul meiozei i diferenierii polenului, ca i de mbuntirea metodologiei de lucru, la nivelul tuturor etapelor (SAVATTI, 1989). Deaorece haploizii pot aprea n mod natural dintr-un ovul nefecundat sau alte celule din ovar, s-a ncercat obinerea de haploizi din culturile in vitro din ovare i ovule. n general, prin ginogenez experimental s-au obinut unele succese la sfecla de zahr i gerbera, dar mai puin spectaculoase la alte specii, ca de exemplu la gru (BOROJEVI, 1990). O metod laborioas a obinerii de haploizi in vitro const n eliminarea preferenial a cromozomilor, metod denumit bulbosum i a fost elaborat de cercettorii canadieni KASHA i KAO (1970). Cnd orzul cultivat (Hordeum vulgare) este ncruciat cu orzul slbatic (H. bulbosum) seminele rezultate au endospermul nedezvoltat. Este posibil obinerea de plantule din astfel de semine, prin culturi de embrioni. Embrionii derivai din H. bulbosum sunt eliminai n stadiile timpurii de dezvoltare a plantulelor, iar cele care au supravieuit sunt de fapt plante haploide de H. vulgare (SIMPSON i SNAPE, 1981) (fig. 10.2.). n aceast ncruciare are loc n mod normal fecundarea, formndu-se zigoi n proporie de 65%, iar n stadiul timpuriu al dezvoltrii embrionare (12-14 zile dup polenizare), are loc eliminarea preferenial treptat a cromozomilor bulbosum. Plntuele formate din aceti embrioni conin numai genomul vulgare n stare haploid. Eliminarea difereniat a cromozomilor are loc indiferent de specia folosit ca genitor femel sau mascul. Metoda a fost extins i la gru, polenizator fiind folosit porumbul. Tehnica culturilor in vitro a fost pus la punct i este folosit pe scar tot mai larg i n cazul speciilor forestiere. Realizarea n mas, chiar n F1, a unor populaii de linii complet homozigote la arbori, prin utilizarea metodei menionate, deschide largi perspective n analiza genetic privind structura cromozomilor, localizarea mutaiilor, transformarea genelor prin recombinare, ca i n selecie i extinderea n cultur a genotipurilor superioare. Haploizii avnd o structur 151

genetic unitar, pun n eviden, pregnant, intensitatea de impact a mediului, n diferite condiii ecologice de cultur forestier comparat (STNESCU, 1982).

Fig. 10.2. Producerea de haploizi prin metoda bulbosum

10.4. Particularitile citologice ale poliploizilor Autopoliploizii se formeaz prin dublarea genomurilor proprii, n meioz sau mitoz. Astfel, diviziuni meiotice anormale conduc la apariia de celule sexuale nereduse, diploide (2x) i dup fecundarea acestora, la organisme tetraploide (4x). Diviziuni mitotice anormale ale celulelor zigotului, prin nesepararea i nedeplasarea cromozomilor n anafaz, cauzeaz, de asemenea, formare de organisme tetraploide (4x). 152

La plantele autotetraploide, meiozele relativ anormale cauzeaz scderea fertilitii i apariia de forme aneuploide, cu vitalitate diminuat (fig. 10.3). Se consider, de aceea, c derivaii autotetraploizi ai diploizilor fertili au tendina de a fi sterili, aa cum se ntmpl n cazul autotetraploizilor de Larix europaea i Cryptomeria japonica.

Fig. 10.3. Meioza normal (a) la diploizi i anormal (b,c,d) la autotetraploizi, care care duce la formare de gamei cu numr variat de cromozomi (dup RAICU, 1980)

n natur exist totui numeroase specii autotetraploide cu fertilitate normal, care, avnd nsuiri superioare diploizilor, probabil s-au meninut la nceput prin nmulire vegetativ, pentru ca, ulterior, prin selecia natural, s se elimine treptat formele cu meioz anormal, precum i cele aneuploide, puin viguroase. Alopoliploizii sunt adeseori sterili, deoarec pot rezulta fie prin ncruciarea unor genitori cu genomuri complet diferite i, ca urmare, mperecherea cromozomilor provenii de la cei doi prini nu este posibil, fie prin ncruciarea unor forme cu genomuri omoloage, caz n care n meioz apar tetravaleni, trivaleni i univaleni, cu aceleai efecte nefuncio-nale ca la autopoliploizi. Alotetraploizii provenii din hibrizi diploizi sterili sunt ns susceptibili de a fi fertili i fixai. Hibrizii diploizi, coninnd dou serii diferite de cromozomi, de exemplu, A i B, relev aceleai 153

dezechilibre n repartizarea cromozomilor n gamei, menionate mai sus. Alotetraploizii i amfiploizii derivai din acetia include cte dou seturi genomice de la cei doi prini (AABB), aa nct, la formarea celulelor sexuale, n meioz, fiecare gamet primete n total 2n cromozomi, i anume de la fiecare genitor cte n cromozomi. Ca urmare fertilitatea polenului se restaureaz i fructificaia se normalizeaz.

CAPITOLUL XI
Ingineria genetic (Transferul de gene) Metodele i tehnicile discutate se ncadreaz n sens larg n domeniul ingineriei genetice, cu toate c ele nu au de-a face cu transferul genelor individuale, ci doar cu manipularea celulelor plantelor n care sunt ncorporate genoame nucleare sau citoplasmatice, sau fuziunea acestora. Transferul unei gene particulare de la un organism la altul prin tehnicile ADN-ului recombinant, este considerat ca fiind domeniul ingineriei genetice pure. Cu alte cuvinte, ingineria genetic const din manipularea direct a materialului genetic i transferul genelor dorite, de la un organism la altul ca i transferul unor gene obinute prin sintez chimic (DARBESHWAR ROY, 2000). Descoperirea enzimelor de restricie a permis segmentarea moleculelor de ADN n anumite puncte, fiecare fragment fiind n majoritatea cazurilor o gen individual i recombinarea acestor fragmente ntr-un nou lan de ADN recombinant (WATSON i colab., 1983). Ingineria genetic implic urmtoarele proceduri : - selecia unui donor pentru o gen dorit ; - selecia unui vector sau a unei tehnici de transfer a genei la un receptor (sau recurent) ; - selecia unui receptor n care gena transferat va funciona normal. Tehnicile ADN recombinant s-au dovedit de mare succes la nivelul procariotelor n producerea unor medicamente, cum ar fi insulina i interferonul (WATSON i colab., 1983). Aplicarea ingineriei genetice la plante nu s-a dovedit att de fast, de la nceput. Una din ncercrile de pionierat a fost transferul genelor de nitrificare (nif) de la Rhizobium la plante care nu triesc n simbioz cu aceste bacterii (porumbul, grul, alte monocotiledonate). S-au fcut ncercri de transfer al genelor nif de la Rhizobium, prin intermediul unui bacteriofag ca vector, la specia Trema canalina. 154

Studiile au evideniat c transferul genelor nif nu este suficient pentru a realiza obiectivul propus i c pe lng ele trebuiesc transferate gene promotoare i c exist n planta gazd gene specifice care afecteaz genele nif (VERMA i LONG, 1983). O reuit viitoare a transferului genelor nif, care s controleze fixarea azotului atmosferic la plantele neleguminoase va diminua substanial utilizarea fertilizanilor cu azot. Pe lng virusurile utilizate ca vectori pentru transferul unei gene dorite n receptor, sunt utilizate i plasmidele, n special plasmidul Ti (plasmid inductor de tumoare), izolat din Agrobacterium tumefaciens. Plasmidele sunt molecule circulare de ADN care se comport ca microcromozomi. Ele se regsesc n aproape toate microorganismele. Plasmidul se poate seciona prin enzimele de restricie i genele dorite se pot introduce n el. Dup aceea, plasmidul este refcut, enzimatic, formnd un plasmid himer. Acesta se ncorporeaz din nou n bacteria care este folosit apoi pentru infecia organismului recipient. Dac ADN-ul plasmidial este integrat n genomul receptorului i genele transferate se manifest, se consider c s-a obinut pe aceast cale un organism transformat sau transgenic (fig.11.1.) Manipularea genetic la plante se desfoar n mai multe etape care n principiu include transferul unei gene strine n alt organism. Gena utilizat este o gen himeric, constituit din trei pri : (1) o gen bacterian care codeaz secvenele pentru fosfotransferaza de neomicin, sau NPT, care confer rezisten la antibioticul kanamicin, (2) un promotor i (3) un terminator al lui T-ADN din Agrobacterium ; ultimele dou permit funcionarea genei transferate n noul mediu. (A) Gena este introdus n plasmidul Ti (care nu poart genele care cauzeaz boala tumoral) i ncorporat n Agrobacterium. (B) cu Agrobacterium se infecteaz protoplatii plantelor de tutun. Dup cteva sptmni, protoplatii formeaz calus (D) din care se regenereaz plante ntregi (E). Testarea rezistenei plantelor regenerate la kanamicin se face prin semnarea seminelor lor ntr-un mediu care conine kanamicin (F). Plantele care rmn verzi i se dezvolt, posed gena bacterial ce stimuleaz existena enzimei NPT, capabil s detoxifice kanamicina. Cele lipsite de gena bacterial rmn albe, deoarece kanamicina distruge cloroplastele (dup TEMPE i SCHELL, 1987) (fig. 11.2). Cea mai simpl metod de transformare a plantelor prin intermediul plasmidului Ti este metoda discului (HORSCH i colab., 1985). Discurile foliare, cu un diametru de 6 mm, se infecteaz cu Agrobacterium tumefaciens care conine un plasmid himeric cu gena

155

dorit. Prin aceast metod s-a reuit s se transfere gene rezistente la antibiotice, kanamicin i carbamicin (HORSCH i colab., 1985). Transferul de gene prin ncorporarea direct a unui plasmid Ti n protoplast apare ca o posibilitate eficient n cazul petuniei i a altor dicotiledonate (COCKING i DAVEY, 1987). Primele rezultate ale transferului direct de gene pentru rezistena la kanamicin au fost obinute cu protoplati de Triticum monoccum i Lolium multiflorum (POTRYCUS i colab., 1985). Microinjectarea de ADN n nucleii protoplatilor sau n inflorescene constituie o metod nou de transfer a genelor (SCHELL, 1987), demonstrat cu imprimarea rezistenei la kanamicin i ncorporarea genelor de rezisten n mugurii floriferi de secar.

156

157
Fig. 11.1. Obinerea de plante transgenice prin utilizarea de ADN-T de la Agrobacterium tumefaciens i A. rhizogenes

Fig 11.2. Obinerea ADN-recombinant. Inseria genei pentru rezisten la kanamicin kanr din plasmidul pSC102 n plasmidul pSC101 i introducerea ADNrec ntr-o celul de Escherichia coli (dup G. ZUBAY, 1992).

Transferul de gene pentru rezistena la antibiotice n plante se utilizeaz numai ca marker pentru alte transferuri folositoare n ameliorarea plantelor. Un exemplu l constituie transferul genelor pentru rezisten la ierbicide, realizare deosebit de important pentru agricultur. Ierbicidul glyphosphat este un inhibitor al enzimei 5enolpiruvilshikimate-3-fosfataz (EPSP) sintetizat de plant. COMAI i colab. (1985) au izolat gena mutant aro A pentru EPSP din bacteria Salmonella typhirium i l-au transferat n plasmidul Ti la A. tumefaciens cu care au infectat plante de tutun. Plantele transformate au manifestat o anumit rezisten la ierbicide. SHAH i colab. (1986) au izolat o clon de ADN complementar care cuprinde sinteze de EPSP dintr-o linie de petunia, tolerant la glyphosphat. O gen himer EPSP a fost realizat cu ajutorul 158

virusului conopidei 35 S, n calitate de promotor, indus n celulele de petunia. Plantele transformate au artat toleran la ierbicid. Unele ierbicide comerciale conin fosfinotricin (PPT) care este un inhibitor al glutaminei i al sintezei acestuia n plante, fiind utilizat ca un ierbicid neselectiv. DE BLOCK i colab. (1987) au folosit gena bar care confer rezisten la Streptomyces hygroscopicus la bialaphos (o tripeptid care conine PPT) i include fosfinotricinacetiltransferaza (PAT) capabil s converteasc PPT-ul ntr-o acetilat netoxic. Prin intermediul vectorului Agrobacterium, s-a reuit transferul genei bar n tutun, tomate i cartofi. Plantele transgenice au manifestat o cretere a enzimei PAT, fiind complet rezistente la dozele ridicate din produsele comerciale de fosfinotricin i bialaphos. Exemplul reprezint un succes n obinerea plantelor rezistente la ierbicide. POWEL-ABEL i colab. (1986) au evideniat posibilitatea obinerii de plante transgenice pentru bolile virotice. O gen himeric avnd un ADN clonat pentru proteina protectoare (CP) i gena acestuia la virusul mozaicului tutunului (TMV) a fost ncorporat n celule de tutun prin intermediul unui plasmid TI. Plantele regenerate au manifestat rezisten la TMV ca pe un caracter nuclear. Tehnica ADN recombinant ofer multe alte posibiliti. JAMES i colab. (1986) au urmrit s mbunteasc compoziia proteic a plantelor. Ei au sintetizat un fragment de ADN care codific coninutul ridicat de aminoacizi eseniali. Fragmentul denumit gen de introducere a acizilor eseniali (HEAAE-gene) a fost clonat i introdus ntr-o bacterie. n acest fel gena a fost introdus n cartof prin intermediul lui Agrobacterium rhizogenes (plasmid Ri), obinndu-se plante transformate. Un rezultat interesant l-a obinut OW i colab. (1986) care au reuit transferul genei luciferaza de la licurici (Photinus pyralis), prin intermediul virusului mozaicului conopidei 35 S n protoplatii de Daucus carota prin electroporaie i la Nicotiana tabacum prin folosirea plasmidului Ti de la A. tumefaciens. Dei fr importan practic deosebit, realizarea menionat poate fi de larg interes pentru unele plante horticole, dar poate servi i la realizarea de markeri pentru manipularea altor gene. Utilizarea lui Agrobacterium n procesul de transformare genetic a plantelor este destul de complicat. Datorit acestui fapt au fost ncercate i alte metode. Una dintre acestea este un transfer direct de gene n celulele plantelor cultivate in vitro. Metoda injectrii de ADN a ridicat cteva probleme legate de dificultile de penetrare a peretelui celular, daune produse celulelor injectate (SCHWEIGER i 159

colab., 1987). Injectarea direct n plante, semine, embrioni sau polen nu au dovedit c gena introdus este integrat i motenit stabil (SCHELL, 1987). De dat mai recent s-a demonstrat reuita transformrii prin injecie direct, a ADN-ului plasmidial n mugurii florali de secar, reuindu-se obinerea a trei plante transgenice de secar (BOROJEVI, 1990). Tehnica ADN recombinant este fr ndoial o realizare fascinant a gndirii umane, dar de la care nu trebuiete s se atepte miracole. Trebuiesc aprofundate n continuare procesele metabolice la nivel molecular, procese de difereniere celular i organogenez, bariarele de integrare i funcionare a genelor strine transferate i nu n ultimul rnd dac plantele transgenice nu pot fi duntoare regnului animal. O plant transformat genetic pentru rezisten la un ierbicid sau o boal poate s-i piard rezistena ca rezultat al apariiei de noi rase patogene sau noi ierbicide, n mod asemntor ca i n cazul genelor ncorporate prin metodele convenionale de recombinare. Transferul uneia sau mai multor gene de la un organism la altul este numai o parte a procesului de ameliorare, unde recombinrile genetice pentru caractere multiple rmn absolut necesare. Obinerea de noi genotipuri valoroase trebuie considerat ca un sistem integrat bazat pe legi genetice, selecie natural i artificial i diferite metode de creare i utilizare a variabilitii genetice obinut prin recombinare genetic, mutaii i transfer. Metodele neconvenionale biotehnologice, trebuiesc considerate ca o parte integrant a sistemului de ameliorare i nicidecum un nlocuitor a ameliorrii convenionale.

CAPITOLUL XII
Elemente de genetic a populaiilor
12.1. Frecvena genelor i a genotipurilor Populaiile alogame, datorit sistemului lor de reproducere sunt conduse de legi diferite, comparativ cu plantele autogame. Sistemul polenizrii libere se bazeaz pe ncruciri ntmpltoare care ofer posibiliti constante de unire a gameilor genetic diferii. Alogamia este cel mai frecvent mod de reproducere i cel mai apropiat de panmixie (sistem de mperechiere ntmpltoare, liber i nediscriminatorie ntre indivizii unei populaii alogame). n acest fel, la 160

reproducerea prin panmixie se menine neschimbat frecvena genelor i structura populaiei (PANFIL, 1974). n cadrul unei populaii formate din numeroase biotipuri i cnd nu intervin restricii n procesul polenizrii i fecundrii (cazuri de selectivitate n procesul fecundrii sau de incompatibilitate), plantele alogame sunt heterozigote pentru aproape toate genele care le conin. Sistemul polenizrii libere menine n mod constant heterozigoia, pe cnd prin autopolenizare, odat cu creterea numrului de generaii se ajunge la o homozigoie complet. Datorit acestui fapt, efectul seleciei n populaiile cu polenizare liber este diferit de cel pe care-l are asupra unei populaii cu autopolenizare, motiv pentru care i metodele de ameliorare vor diferi inevitabil. O populaie a unei specii alogame, conine genotipuri homozigote (AA i aa) i genotipuri heterozigote (Aa). Proporia dintre genotipuri se poate schimba depinznd de frecvena lui A i a. Datorit acestui fapt, populaiile alogame prezint o anumit frecven de genotipuri i gene. HARDY (1908) n Anglia i WEINBERG (1908) n Germania au descoperit c n populaiile mari se atinge un echilibru ntre gene i genotipuri, fapt cunoscut sub denumirea de legea Hardy-Weinberg. Echilibrul poate fi meninut de la o generaie la alta n condiii de ncruciare liber i fertilitate constant a tuturor genotipurilor prezente n populaie. Frecvena genotipurilor ntr-o populaie depinde de frecvena genelor din generaia precedent. Dup prima generaie de polenizare liber, frecvena genotipurilor se stabilizeaz, se atinge un echilibru pentru orice frecven iniial de gene, n cazul unui singur locus. Echilibrul este meninut pn cnd se schimb frecvena genelor n populaie. Meninerea neschimbat a frecvenei genelor ntr-o populaie panmictic diploid, nelimitat, este determinat de legea hazardului i poate fi uor exemplificat, considernd o pereche de alele Aa, A cu frecvena iniial p i a cu frecven iniial q, astfel nct p+q=1. Prin unirea gameilor care cuprind genele A i a, gameii ce se ntlnesc la ambele sexe din populaie, n frecvenele menionate p i q, vor da urmtoarele genotipuri: Gamei femeli A/(p) a/(q) A/(p) AA/(p2) Aa/(pq) a/(q) Aa/(pq) aa/(q2)

Gamei masculi adic:

Frecvena genotipului

- genotipuri homozigote AA cu frecvena p2 - genotipuri homozigote aa cu frecvena q2 - genotipuri heterozigote Aa cu frecvena 2pq 161

n generaiile urmtoare, genele ce conin gena A sau a se vor forma n aceeai proporie p i q, deoarece: - gena A va fi prezent n toi gameii formai pe organismele heterozigote Aa deci: p2+p2pq/2=p2+p(1-p)=p2+p-p2=p - gena a va fi prezent n toi gameii formai pe organismele heterozigote Aa, deci: p2+q2pq/2=q2+q(1-q)=q2+q-q2=q Gameii purttori ai genei A sau a, se formeaz n aceeai populaie se vor menine i ele n generaiile urmtoare n acelai raport de: p2(AA):2pq(Aa):q2(aa) ca i n generaiile anterioare Dup cum se observ, legea Hardy-Weinberg acioneaz numai n condiii strict delimitate, ce se gsesc greu n realitate, n cadrul unei populaii naturale. Dac frecvena genotipurilor difer de cea a populaiei iniiale este evident c noua populaie nu se va afla n echilibru genetic. n sistemul ncrucirilor randomizate, dac nu se schimb frecvena genelor se realizeaz un echilibru a frecvenei genotipurilor, asemntoare cu cea a formelor parentale. Exist factori care pot modifica echilibrul genetic a unei populaii, producnd schimbarea genotipurilor i a genelor din cadrul populaiei respective. 10.2. Schimbri n frecvena genelor Cu toate c o populaie alogam mare este relativ stabil, starea de echilibru constituie mai mult o excepie dect o regul, deoarece factorii ce tind s dezechilibreze structura genetic a unei populaii acioneaz continuu. Factorii cei mai importani care tind s schimbe frecvena genelor i a genotipurilor sunt migraia, mutaia i selecia .a. Aciunea lor poate fi individual, cu toate c de cele mai multe ori este combinat. a. Abaterile de la panmixie se ntlnesc, n principal, la plantele la care se manifest mai mult sau mai puin predominant autogamia. n prezena autogamiei, frecvena genotipurilor din populaie nu mai rmne constant, 162

aprnd tendina de eliminare treptat a genotipurilor heterozigote. De exemplu, dac n urma unei ncruciri apare un organism heterozigot pentru o pereche de gene, prin autopolenizare timp de cteva generaii procentul heterozigoilor se reduce foarte mult. Acelai efect de cretere a homozigoiei se manifest i n cazul n care apare o tendin de ncruciare preferenial ntre organisme asemntoare. De exemplu, ntr-o populaie alogam de porumb poate s se manifeste o fecundare preferenial ntre plantele care nfloresc concomitent, fapt ce poate duce la sporirea procentului de homozigoie pentru genele precocitii, peste valoarea prevzut de legea Hardy-Weinberg. Ceea ce apare ca important este c abaterile de la panmixie modific frecvena diferitelor genotipuri, fr a afecta frecvena genelor din populaie, care rmne n continuare neschimbat de la o generaie la alta. b. Migraia duce la modificarea frecvenei genelor ntr-o populaie, n urma contactului cu alt populaie n care frecvena acelorai gene este diferit. Migraia poate modifica n mod evident echilibrul genetic al unei populaii i anume: cu att mai puternic cu ct populaia indivizilor introdui din alt populaie este mai mare i cu ct diferena n frecvena genelor ntre cele dou populaii este mai accentuat. c. Mutaiile determinnd modificarea unei gene prin transformarea ntr-una din alelele ei, provoac schimbarea frecvenei genelor i deci a echilibrului populaiei. Din acest punct de vedere, intereseaz ndeosebi mutaiile care se repet cu o anumit frecven n populaie, mutaii denumite recurente (mutaie care apare repetat, cu o anumit frecven, n interiorul unei populaii, modificnd starea de echilibru genic a acesteia). Presupunnd c gena A se transform prin mutaie n alela sa a cu o rat a mutaiei de n, iar mutaia invers de la a la A se produce cu rata de mutaie v, frecvena celor dou gene se va modifica treptat, pn va ajunge la o nou stare de n echilibru n care gena a va avea frecvena q = . Dac mutaia invers nu n+v se produce (v = 0), atunci echilibrul populaiei nu se realizeaz dect dup eliminarea total a genei A. Rspndirea noilor mutaii n genofondul unei populaii depinde de aciunea lor asupra viabilitii i fecunditii individului, de penetra-bilitatea i expresivitatea lor, de caracterul dominant sau recesiv precum i de valoarea lor selectiv. Rspndirea mutaiilor depinde i de mrimea populaiei (PANFIL, 1974). d. Selecia face ca, datorit diferenelor de viabilitate sau fertilitate, care se manifest ntre diferitele genotipuri ale populaiei, acestea s participe inegal la producerea de descendeni. Este evident c n acest mod selecia 163

poate schimba considerabil frecvena genelor, modificnd astfel echilibrul populaiei. Efectul seleciei depinde n mod substanial de felul genotipului asupra cruia acioneaz. Dac selecia este ndreptat mpotriva unei gene dominante, toate organismele care prezint aceste gene sunt mpiedicate de a se reproduce; n acest caz gena poate fi eliminat n cursul unei singure generaii. n mod contrar, selecia mpotriva unei gene recesive are un efect mult mai lent. Astfel, presupunnd c selecia ndeprteaz n fiecare generaie toi indivizii homozigoi, datorit pstrrii genei recesive n indivizii heterozigoi, dup n generaii de selecie frecvena acestei gene va q0 scdea de la q0 la qn = n care: q0 este frecvena genei nainte de 1 + nq 0 selecie, iar n reprezint numrul generaiilor. Alturi de apariia continu de noi mutaii, selecia ca i fenomenul de superioritate adaptativ a heterozigoilor fa de oricare dintre homozigoi, favorizeaz meninerea n populaii a unor gene recesive, cu influen evident duntoare asupra organismelor, n condiiile respective de mediu. Orict ar prea de curioas aceast ncrctur de gene nefavorabile, prezint o importan deosebit pentru capacitatea populaiilor de a evolua, adaptnduse la condiiile schimbate de mediu. Genele cu efect nefavorabil n condiii normale de mediu pot s fie uneori eseniale pentru adaptarea la noile condiii, iar meninerea lor n interiorul populaiei asigur acesteia posibiliti sporite de a supravieui unor schimbri radicale ale mediului. Interaciunea proceselor de mutaie i selecie asigur, aadar, populaiilor nu numai o stare de echilibru optim pentru adaptare la condiiile de mediu existente, dar i meninerea unei variabiliti care s permit adaptarea la condiii schimbate. e. Numrul redus de indivizi dintr-o populaie face s apar fluctuaii ntmpltoare n frecvena genelor i a genotipurilor, dnd natere la fenomenul denumit drift genetic. Este uor de neles c dac ntr-o populaie mare toate combinaiile de gamei au anse egale de realizare, ntr-o populaie redus anumite combinaii de gamei se pot realiza ntmpltor mai frecvent dect altele. Asemenea modificri ntmpltoare ale frecvenei genelor, alturi de izolarea unor grupri mici de biotipuri, pot duce la apariia unor diferenieri considerabile la populaia de aceeai provenien. Efectele nefavorabile ale driftului genetic se nltur prin alegerea unui numr suficient de plante elite, plante care s reprezinte, pe ct posibil, ntregul fond genetic al populaiei.

164