MBUNTIREA EFICIENEI BACTERIILOR IMPLICATE N PROCESUL DIN BAZINUL DE AERARE AL SEAU

1. Introducere
Bioremedierea avansat utilizat la epurarea apelor uzate i a efluenilor de canalizare reprezint, n acest moment, unul din cele mai importante aspecte ale tehnologiei de tip biologic. ndeprtarea microorganismelor patogene, hidrocarburilor complexe, metalelor grele i nutrienilor a fost studiat cu deosebit atenie. Lucrarea de fa trateaz mbuntirea eficienei bacteriilor utilizate n bazinul de aerare pentru aducerea la randament maxim a procesului de mineralizare a substanelor organice i reducerea, n consecin , a timpului necesar procesului de epurare. Un alt obiectiv este eliminarea nutrienilor (N i P) pentru a evita efectele lor duntoare asupra mediului nconjurtor. n vederea realizrii obiectivelor, au fost efectuate izolarea i identificarea micro-florei bacteriene dominante din bazinul de aerare iar apoi au fost selectate cele mai active tulpini. Se marcheaz cteva probe pentru hibridizarea sau clonarea uneia sau mai multor tulpini dominante n vederea sporirii eficienei acestora de a oxida. A fost realizat un experiment pilot ntr-o ser cu scopul de a mri randamentul treptei biologice a SEAU-urbane ct i pentru a testa tulpinile modificate genetic . De asemenea, s-au preluat lunar datele a 20 de parametri pentru a evidenia controlul asupra influentului i efluentului SEAU din oraul Taif. Cererea biologic de oxigen ( ) i cererea chimic de oxigen (CCO) considerabil mai sczute ce caracterizeaz efluentul indic o ncrcare organic de asemenea sczut. Acurateea datelor anterior menionate este susinut de scderea carbonului organic total (COT), cantitatea total de solide dizolvat (TSD) i a cantitatea total de suspensii solide (TSS). Prezena unei mari cantiti de oxigen dizolvat (OD) n efluent ilustreaz eficiena procesului de pompare-aerare. Coninuturile de nitrai ) i nitrii ( sensibil sczute din efluent indic o cerere crescut de acceptori de Hidrogen. Coninutul de amoniac ( ) scade i el, totui Coninutul de Azot Kjeldahl Total (TKN) crete datorit ncrcrii cu microbi. Duritatea Total (DT) scade, ceea ce nseamn o concentraie sczut a ionilor

i i o calitate superioar a efluentului. Valorile pH-ului scad uor datorit produilor acizi rezultai n urma metabolizrii realizate de microbi. Coninuturile de fosfor (P) i sulfat ( scad artnd consumul sau fixarea lor n microflora bacterian. Pe de alt parte, coninutul de clor n efluent ( ) crete datorit procesului de clorinare. Petrolul i grsimile exist n cantiti relativ sczute n efluent. n final, s-au mai gsit diferite metale grele i hidrocarburi la nivel global n efluent ns sub sau n limitele permise. Concentraia florei microbiene a crescut considerabil n efluent, ndeosebi n lunile de var; cu toate acestea, bacteriile ce realizeaz fermentarea se afl n concentraii destul de mici deoarece exist destul n efluent. Numai 15 din 280 tulpini izolate (aproximativ 5.4 %) s-a descoperit c au o activitate intens n ceea ce privete mineralizarea substanelor organice, acestea au fost n ntregime identificate. Cea mai activ a fost utilizat pentru modificarea tulpinilor dominante prin tehnologia clonrii i apoi re-inoculate n mediul experimentului pilot. Bioremedierea pentru apele de canalizare este considerat cea mai eficient, ieftin i sigur metod din punct de vedere biotehnologic. Operaiile conduse au la baz mai multe procese: a) ndeprtarea mecanic a particulelor solide slab sedimentabile i a spumei. b) Transformarea n minerale a poluanilor organici dizolvabili. Acest proces are loc n bazinul de aerare sau cu biofiltru, se realizeaz de ctre bacterii. c) Fermentarea anaerob a nmolului rezultat de la canalizare cu producerea metanului (Biogazului). d) Tratamentul teriar efectuat n vederea eliminrii elementelor de tip nutrient : , , , , pentru evitarea fenomenului de Eutrofizare. e) Clorinarea sau ozonificarea pentru ndeprtarea microorganismelor patogene. f) Chelarea biologic a metalelor grele cu ajutorul biomasei din drojdii i alge, totui, aceast ndeprtare este temporar. Paradoxul epurrii (i/sau al tratrii) depinde n esen de: 1. Cantitatea i tipul materiei uor scindabile, care ine seama de sursa de energie (donorul de Hidrogen) i furnizeaz carbon pentru sinteza efectuat de tulpinile de microorganisme (Burford and Bremmer, 1975; Stanford et al., 1975; Reddz et al., 1982). 2. Un oxigen suficient de concentrat (p ) este necesar ca acceptor de Hidrogen pentru o reacie intens de mineralizare. Mai mult, bacteriile pot fi schimbate cu ali acceptori cum ar fi azotatul i sulfatul ca o alternativ pentru Oxigen (Abou-Seada and Ottow, 1985; Ottow and Fabig, 1985).
2

3. pH: maximul reaciei de mineralizare se ntlnete de obicei la un nivel neutru al pH-ului (7.1-7.5). Condiii de aciditate sau alcalinitate crescute conduc la o mineralizare lent i mai puin eficient n timpul biodegradrii (Koskinen and Keenez, 1982; Abou-Seada and Ottow, 1986). 4. Efectul specific al calitii microorganismelor din bazinele de aerare (Munch and Ottow, 1984, Abou-Seada and Ottow, 1987). Cu tehnica de clonare a genelor s-a putut controla i mbunti eficiea tulpinilor dominante de bacterii n bazinele de aerare, toate acestea n vederea optimizrii procesului de epurare(sau tratare); (Oliver et al., 1977; Hickez and Smith, 1996). 5. Recent, Tehnologia cu Bioreactor i Membrana (MBR), ce reprezint o bun alternativ la epurarea convenional cu nmol activ urmat de decantor-din cadrul staiilor de epurare a apelor uzate urbane (SEAU). Aceast tehnologie combin procesul biologic cu separarea prin membran ntr-o singur treapt, instalaia ocup de 5 ori mai puin spaiu dect cea cu nmol activ. n plus, concentraia biomasei ataate poate fi mai mare dar n acelai timp volumul reactorului i costurile de exploatare fiind mai mici (Galil, 2003; Stephenson et al., 2002; Verma et al., 2006). Scopul, obiectivul lucrrii de fa este mbuntirea eficienei bacteriilor implicate n procesul din bazinul de aerare i astfel maximizarea ndeprtrii substanelor organice, de asemenea i a nutrienilor.

2. Materiale Utilizate i Metode de Lucru

Acest studiu a fost realizat pe parcursul a 16 luni. Mostre reprezentative au fost prelevate lunar din influentul i efluentul SEAU urbane a oraului Taif, mai apoi analizate bacteriologic i fizico-chimic (pentru 20 de parametrii) pentru a se observa eficiena procesului de epurare.

3. Analiza Bacteriologic
Au fost extrase cu deosebit atenie mostre reprezentative din apa uzat. Probele au fost diluate cu ap distilat n serii. Ulterior s-a determinat densitatea florei microbiene totale i a bacteriilor ce realizeaz fermentarea(cu o tehnic descris de Page et al.-1982). Au fost selectate 280 de culturi i testate mai departe pentru abilitile acestora de a degrada substanele organice complexe (celuloz, derivai ai petrolului i fenoli)-n condiii sterile. Mediul mineral sintetic conine (per litru): 1.4 g ; 2.2 g ; 0.5 g ; 0.2 g ; 10 mg ; 5 mg ; 2.5 mg ; 2.5
3

mg ;1g i 5 % C, soluie de recunoatere a elementelor (un tip de reactiv)-10 ml, pH-7.2 dup cum este descris n literatura de specialitate de Sperl i Hoare (1971). Testul a fost condus n cte 5 cilindri pentru fiecare tulpin. Tuburile au fost inoculate cu soluia final i introduse ntr-un incubator la timp de 48 de ore. Tulpinile active au avut capacitatea de a degrada materia organic (fr apariia turbiditii) n toate tuburile cu probe. Au fost testate, simultan, tuburi fr inoculare cu agentul sintetic-ca grup de control. Pentru a identifica tulpinile cu cel mai inalt grad de activitate, au fost realizate teste standard morfologice i fiziologice pe aceste culturi (Naveke and Trepper-1979 and Sussmuth et al. -1987). Clasificarea tulpinilor izolate a fost efectuat conform manualului Bergy de Bacteriologie Sistematic (Krieg and Holt; Sneath et al., 1986).

4. Determinrile Fizico-Chimice
n acest capitol sunt descrise amnunit metodele cu care s-au realizat determinrile parametrilor fizico-chimici OD, , CCO, COT, TSD, Coninutul de Nitrai, Nitrii i Amoniu, DT (prezena ionilor de Ca i Mg), Alcalinitatea, pHul, Turbiditatea, Coninutul n ioni de Cl, Metalele Grele cu observaia c au fost luate probe n Iulie i August 2009 pentru sezonul de var i n Decembrie i Ianuarie 2010 pentru sezonul de iarn. Observarea acestor parametrii necesit un studiu aprofundat ce nu face obiectul acestei lucrri.

5. Standul Experimental (Pilot)

n vederea optimizrii parametrilor nutriionali i de mediu cu scopul de a mbunti eficiena SEAU din Taif a fost proiectat i realizat un stand pilot cu materiale proprii laboratorului de testare. n interiorul curii Universitii Taif a fost ales un loc pentru amplasarea standului astfel nct s prezinte o parcel de pmnt izolat cu o cldire special construit pentru acest experiment. Aceasta va asigura protecia mediului ce nconjoar incinta n acelai timp facilitnd desfurarea experimentului n condiii optime. Standul se compune din mai muli cilindri de plastic conectai ntre ei prin jonciuni de robinei cu 4 ieiri (Figura 1). Aceste tipuri de robinei confer flexibilitate i permit varierea debitului de ap de la maxim la minim n funcie de compoziia acesteia, tipul de aditiv, gradul de aerare i tipul microorganismelor utilizate.

6. Procedura Experimental
ncercarea vizeaz repartizarea aciunilor de biodegradare pe mai multe vase. Bacteriile se acomodeaz n funcie de componentele cu care reacioneaz cel mai bine, aa cum se ntmpl i n apele uzate de obicei. Astfel c: apa uzat tratat ce vine dintr-un anumit rezervor este pompat ctre urmtorul rezervor pentru o degradare ulterioar a unuia sau mai multor poluani organici remaneni. Se estimeaz c trebuie s se alimenteze de mai multe ori rezervoarele din standul mai sus menonat pn se obin rezultatele optime.

Fig 1 Standul Pilot

7. Microorganismele Testate

Experimentul se realizeaz fie cu microflor natural existent n apele uzate ale SEAU Taif fie cu tulpinile modificate genetic pentru a confirma capacitatea lor sporit de a degrada poluanii organici. n ambele cazuri, apa uzat ce intr n sistem trebuie s fi suferit o pre-tratare ce const n ndeprtarea manual a flotanilor. Un rezervor special poate fi adaptat pentru aceast operaie. nainte ca apa uzat s avanseze, un al doilea rezervor poate fi utilizat pentru optimizarea condiiilor de biodegradare (temperatur, potenialul de oxigen, valoarea pH-ului).

8. Clonarea EDTA i degradarea genei (emoB) din acidul nitrilotriacetic (NTA) din Bacteria BNC1 (Tipul Slbatic) Tulpini de bacterii utilizate Bacteria BNC1 (Tipul Slbatic) : E. coli BL21 (DE3); E. coli BL21 (DE3).
EmoB (F): 5 - GAT GAC GAC GAC CAT ATG ACC TAC TCC - 3 (Contained an additional NdeI recognition site). EmoB (R): 5 - TCA AGT GAT GTG CGG CCG CGC GCG 3 (Contained an additional NotI recognition site). Plasmids: pET30-LIC (expression vector) (Table 1)-from Abou-Seada et al. Mai sus sunt reprezentate secvenele de gene modificate din NTA-ul bacteriei, unde : adenina(A), guanina(G), -A si G sunt baze purinice- timina(T), citozina(C) T si C sunt baze pirimidinice. Tabelul 1. Substanele chimice i enzimele implicate n modificare Nr. crt. 1 2 3 Enzime
Taq-DNA polymerase Mgcl2 + 10Xbuffer Pfu-DNA polymerase Mgcl2 +10Xbuffer dNTPs mix + +

Concentraia (uniti) 200 100 100 mM fiecare(nu au fost furnizai corespondenii S.I.) 50
6

T4-DNA ligase

5 6

NdeI
NotI

200 200

n continuare se realizeaz modificarea genelor bacteriilor mai sus menionate, proces minuios realizat de ingineri chimiti, procesul este extrem de dificil de neles dar am menionat acest fapt ntruct este o metod inovativ i interesant.

10

11

9. Concluzii i Rezultate
n conluzie, datele obinute dup modificarea genetic a tulpinilor i inocularea lor n influentul din bazinul de aerare demonstreaz c eficiena crete fa de bacteriile cu o capacitate mai sczut de degradare a materiei organice. Acestea sunt centralizate n tabelelede mai sus (date extrase din Abou-Seada et al.). Microorganismele modificate genetic au fost inoculate n apa uzat (care a trecut printr-o pe-tratare) din rezervoarele respective i mostrele extrase au fost analizate pn cnd s-a terminat procesul de mineralizare. n comparaie cu mostra din rezervorul de control (ne-inoculat), timpul n care se desfoar procesul s-a redus de la 36 la 28 de ore, ceea ce reprezint o reducere cu 22% a duratei procesului. Acest rezultat este foarte important, ntruct ilustreaz
12

capacitatea crescut i eficiena maxim a SEAU astfel scznd costurile pentru epurare (tratare).

Bibliografie: 1. Abou-Seada, Al-assal, S and Abdalla, S.M. - African Journal of Microbiology Research Vol. 5(18), pp. 2600-2608, 16 September, 2011 Available online http://www.academicjournals.org/ajmr ISSN 1996-0808 2011 Academic Journals - Improving the Efficiency of Involved Bacteria in Aeration Tanks of Waste Water Stations (Accepted 15 July, 2011). 2. Ottow JCG, Fabig W (1985). Influence of oxygen aeration on denitrification and redox level in different bacterial batch cultures. In: D.E. Caldwell et al (eds), Planetary Ecology. Van Nostrand Reinhold Co., New York, pp. 427-440.

13