Curs de Biofizic

V rugm: gndii!

8
Prof.dr. Cipriana tefnescu Disciplina de Biofizic i Fizic medical

Microscopia optic

 Istoric Microscopia optic: - pri componente ale microscopului optic, - formarea imaginii, - caracteristici fizice ale microscopului Tipuri de microscopie optic

Rezoluie minim a unui microscop optic este de aproximativ 2 micrometri, dimensiunea unei bacterii mici. Microscopul optic poate mri n mod eficient de aproximativ 1000 de ori dimensiunea unui obiect. Microscopul electronic poate mari de 104 ori imaginea unui microscop optic, de 106 ori imaginea reala.

Istoric
Primele microscoape optice

Exe Exemplu mplu de evoluie a microscopului (la firma Nikon)

100 ani

 Microscopul optic:
Lumina traverseaz preparatul Imaginea este mrit prin intermediul lentilelor (lentile convergente, din sticl)

Oc

R Ob Pl Mv mv c, d

Parti importante ale microscopului optic

(Oc Oc = lentila ocular; Ob = lentila obiectiv; R = sistem revolver; Mv = macroviza; mv = microviza; c = condensor; d = diafragma; l = lampa)

Cracteristici fizice ale microscopului: REZOLUTIA: d = /2n sin u

obiectiv

Apertura numeric: n sin u

u
?

mediu cu indice n

MRIREA
preparat lam\ lamel\

Microscopie cu contrast de faz

Diviziunea celular.
Creterea contrastului prin mperecherea undelor (ntrziate la ieirea din preparat); disc de faza

Microscopie de contrast prin interferen

- Utilizeaz lumin polarizat pentru creterea contrastului

Microscopia polarizant

- Lumina polarizata; - 2 nicoli - Cruce de Malta

Microscopia de fluorescen
- utilizeaz markeri fluoresceni -

Principiul fenomenului fenomenului de fluorescen: 1. Energia este absorbit de un atom 2. Electronul Electronul sare pe un nivel superior de energie. 3. Ulterior, Ulterior, electronul revine la starea initiala si emite un foton fenomenul de fluorescen

Ultramicroscopia
- Fenomenul Tyndall; - Iluminare lateral

 Tipuri de microscopie i imaginea

TEHNIC REZULTAT

(a)

Microscopie optic (preparat nefixat, necolorat). Lumina trece prin preparat. Dac celula nu este colorat natural sau artificial, imaginea are contrast slab. [Punctele (a)(d) reprezint o celul epitelial jugal.]
50 m

(b)

Microscopie optic (preparat colorat). Colorarea mrete contrastul, dar necesit fixarea preparatului.

(c)

Microscopie optic cu contrast de faz. Crete contrastul n celule nefixate, amplificnd diferenele n densitatea structurii de vizualizat; permite vizualizarea unor structuri fr fixare, colorare.

(d)

Microscopie de contrast prin interferen Ca i microscopia optic cu contrast de faz dar utilizeaz lumina polarizat; imaginea apare n relief, 3D.

(e)

Microscopia de fluorescen. Utilizeaz markeri fluoresceni pentru vizualizarea unor structuri intracelulare. Ex.: celul din peretele arterial.
50 m

(f)

Microscopie confocal. Utilizeaz lumina LASER i markeri fluoresceni, pe o seciune care apare cu un contrast mult mai bun dect n microscopia de fluorescen. Celule nervoase (verde), celule de susinere (rou), suprapunerea acestora (galben). Jos, microscopie de fluorescen (imagine neclar, preparat mai gros).

50 m

Microscopia de fluorescenta