Productos de valor aadido de protena de suero de leche.

Extraccin, fraccionamiento, separacin, purificacin

RESUMEN Las propiedades nicas nutricionales y funcionales de suero de leche protenas, junto con las nuevas actividades biolgicas nuevas de estas protenas y sus pptidos dar lugar a un una mayor demanda de protenas individuales y sus hidrolizados. Por lo tanto, eficaz, selectiva y rentable separaciones eficaces se requiere. Los avances en esta rea incluyen, cromatografa de intercambio inico, ion membranas de intercambio y separaciones de afinidad, que permitir el fraccionamiento de las protenas de suero individuales con alta actividad biolgica, tal como, la lactoferrina protena de menor importancia. Aunque la mayora de estas tecnologas pueden ser mayor escala y permitir la produccin de protenas individuales a escala kg, reduccin de costes sigue siendo un desafo. En este artculo revisamos la evolucin de la superficie de la protena de suero de leche fraccionamiento y los avances en la produccin y purificacin de pptidos a partir de protenas de suero.

INTRODUCCIN El suero es el lquido que queda despus de la eliminacin de la casena protena como resultado de la formacin de la cuajada de leche en la produccin de queso. La produccin mundial total de lquido suero de queso en 2008 se encontraba en la regin de 187 millones toneladas mtricas y de este 3,2 millones de toneladas mtricas fueron utilizado industrialmente y procesados de mayor valor aadido productos tales como, suero en polvo, protenas de suero y suero fracciones de protena (1); el suero restante se utiliza para animales piensos, fertilizantes Revalorizacin y algunos es slo objeto de dumping.

de los residuos es por lo tanto necesario reducir ambiental impacto y hacer que la industria lctea ms competitiva. La protena de suero tiene una excepcional biolgica valor en comparacin con otras protenas alimentarias, tales como, protena de huevo y protena de soja (2); el valor biolgico es una medida del porcentaje del nutriente que es utilizado por el cuerpo. Adems, el suero es una fuente rica de protenas con una amplia gama de actividades biolgicas (2-6). Concentrados de protenas y protenas individuales son as extradas de diversas alimentos y aplicaciones farmacuticas. Otro aadi valor del producto extrado de suero de leche es la lactosa que puede

convertirse adicionalmente por transformacin enzimtica en galacto-oligosacridos y fructo oligosacridos-para su aplicacin como prebiticos para el crecimiento de probiticos y microbiota intestinal mejorado (7,8). Adems las protenas de suero contienen secuencias de pptidos que han demostrado poseer una serie de consiguiente actividades biolgicas (vase ms adelante). Por

protenas de suero de leche puede convertirse en una importante fuente de pptidos bioactivos que podran conducir a una diversificacin de los aplicaciones de protena de suero con la subsiguiente mejora competitividad de la industria lctea. En esta revisin nos centraremos en la extraccin de protenas y pptidos de suero de leche como valor agregado. RECUPERACIN DE PROTENAS DE SUERO Las protenas de suero representan slo el 10% de los slidos totales en el suero de leche. Por consiguiente procesamiento de protena de suero requiere al menos una concentracin antes de la etapa de fraccionamiento adicional. Esto dar lugar a un concentrado de protena de suero de leche que contiene 30-35% de protena. La mayor parte de los concentrados de protena de suero (WPC) se preparan por ultrafiltracin y contener hasta 50% de protena (9); altos preparaciones WPC pureza (80%

protena) se puede conseguir por diafiltracin a fin de reducir el contenido en lactosa. Ms fraccionamiento y separacin de los las protenas individuales se puede lograr mediante la explotacin de las diferencias a cargo como por ejemplo los mtodos de intercambio inico o por la explotacin de las diferencias de tamao como por filtracin con membrana mtodos. Las protenas del suero se pueden dividir en dos grupos en funcin de sus propiedades de la superficie de carga (ver isoelctrico puntos (pI) de la Tabla 1 y las curvas de valoracin en Fuda et al (10)): (i) las protenas principales, tales como -lactoglobulina, BSA y -lactalbmina que tienen un pI cido y la (ii) protenas menores, la lactoferrina y la lactoperoxidasa que tienen un pI bsico. Por lo tanto, estos dos grupos de protenas puede ser fcilmente separados de acuerdo a la carga. Otras separaciones incluir las separaciones bioespecfica de afinidad basados en que explotan

interacciones entre protenas individuales y ligandos.

Fraccionamiento de las protenas principales Las principales protenas del suero tales como, -lactoglobulina, lactalbmina y BSA son una fuente importante de esencial y los aminocidos ramificados. Tambin son ricos en sulfphurcontaining aminocidos, cistena y metionina. Estos aminocidos cuando en altas concentraciones puede mejorar la funcin inmune a travs de la conversin intracelular de glutatin (4). As, se han encontrado particularmente tiles debido a su valor nutricional y funcionalidad. Adems, cada vez que se ha relacionado con la importante actividades biolgicas que producen beneficios para la salud (2, 3,6,11-14), de ah el inters en la purificacin de ellos o producir Las fracciones enriquecidas en estas protenas. Los principales protenas tienen caractersticas similares de carga (ver isoelctrico puntos) (Tabla 1) As, por ejemplo, trabajando a un pH por debajo de su pI y el uso de un intercambiador de cationes que pueden ser selectivamente separado de los componentes de suero de leche y otras protenas. Esto har que una protena de suero de alta pureza aislar (WPI) con 95% de protena total que se compone principalmente de las principales protenas. Fraccionamiento adicional de las protenas podra dar lugar a un mayor valor aadido especializado y productos tales como leche infantil enriquecida con suero de leche en -lactoalbmina y agotado de -lactoglobulina, y bebidas deportivas fortificado en -lactoglobulina. La separacin

de -lactoglobulina a partir de suero de leche puede llevarse a cabo tomando ventaja de su estabilidad al calor en comparacin con la de las albminas y / o por precipitacin con metales tales como hierro cloride (15-17) y por quitosano (18). Algunos de los estos procesos se aplican a escala industrial (por opiniones ver 9, 11 y 19). Sin embargo, un inconveniente de la mtodos de precipitacin puede ser la desnaturalizacin irreversible de las protenas y su consiguiente prdida de bioactividad. Mtodos ms suaves de separacin incluyen la filtracin por membrana que ha sido el mtodo ms ampliamente aplicado en la la industria lechera (20-23). Una de las limitaciones de este mtodo utilizado es que slo aquellas protenas con grandes diferencias de tamao se pueden separar sin embargo, mejor el conocimiento de las propiedades fisicoqumicas de las protenas (24) y la qumica de las membranas ha llevado a ms selectivo separaciones. Por ejemplo tamao, forma y carga de protenas puede ser manipulado por el cambio de pH e inicos la fuerza de las soluciones de protenas y los cambios en estos propiedades dar lugar a diferencias en las interacciones con el membrana y cambios en la permeabilidad de la protena componentes. Cheang y Zidney (25) demostr que tamao, as como cargo desempeado un papel importante en la selectividad de la separacin de -lactaglobulin de -lactalbmina por ultrafiltracin. Otras innovaciones en el mbito de la

filtracin de membrana incluyen membranas de adsorcin (26 28). Estas membranas fueron desarrolladas para eludir limitaciones de lechos empacados incluyen cadas de presin y intrapartcula limitaciones de difusin, especialmente a alta velocidades de flujo (29), el flujo convectivo rpido combinado con insignificantes limitaciones de cada de presin mostrada por la delgada membranas significa que los tiempos de procesamiento son dramticamente reducido en comparacin con columnas de relleno (30,31). Estos membranas puede ser funcionalizado como las resinas con iones grupos de intercambio que estn covalentemente unidos a la superficie de la membrana. Como en la cromatografa de intercambio inico la separacin de las protenas se produce por las diferencias en electrosttica las interacciones entre las protenas y inicos grupos sobre la membrana. La elucin de las protenas se produce mediante la aplicacin de un gradiente de sal o pH. El uso comercial disponibles membranas de intercambio catinico con tamaos de poro de 3-5 micras, suero de queso ha sido fraccionado para producir una corriente de protena lactoferrina y lactoperoxidasa, o persona corrientes de ambas protenas utilizando las diferencias de sal concentracin (32,33). Mediante la optimizacin de la elucin en tres pasos (0,1 M, 0,2 M y NaCl 1,0 M), protena individuo purezas de hasta el 95% se podra lograr. Estos estudios confirmaron que en comparacin con una columna tradicional

basado en proceso, velocidad de flujo se increment hasta en 20 veces y, como se esperaba, las curvas de avance de protenas no se vieron afectados por la tasa de flujo. Sin embargo, uno de los inconvenientes de los estas membranas es su capacidad de unin inferior en comparacin a la de adsorbentes cromatogrficas. Sarfert y Etzel (26) frente a esta en un estudio detallado de la transferencia de masa limitaciones en las separaciones de protenas utilizando intercambio inico membranas. Ellos encontraron que el aumento de tamao de poro en la orden de diez a varios cientos de micrmetros para aumentar capacidad, as como para minimizar el taponamiento, la difusin de protenas por lo tanto, disminuye la masa reducida tasa de transferencia (a travs de la pelcula a la pared de los poros). Esto conduce a una falta de coincidencia entre el tiempo que tarda el lquido para viajar a travs de la membrana (la velocidad de flujo) y el tiempo necesario para que la protena viajar a travs de la pelcula a la pared de los poros (la masa tasa de transferencia) y los resultados en la recuperacin de protena pobres. Ampliar protenas tienen ms pequeos coeficientes de difusin para las consecuencias el aumento del tamao de poro de la membrana en la transferencia de masa debe ser considerado. La cromatografa en columna se ha estudiado ampliamente para la

fraccionamiento de protenas de suero (34-37). Una mayor optimizacin de fraccionamiento de suero de leche se ha logrado mediante la aplicacin elucin selectiva que permite la produccin de diferentes fracciones de suero de leche, enriquecido o empobrecido en las diferentes protenas de suero, utilizando el intercambiador de iones mismo pero aplicando diferentes tampones de elucin (todos de grado alimenticio) (35,38). En una Opina sobre fraccionamiento de protenas de leche Etzel mtodos (6) describe la aplicacin de proceso de cromatografa incluyendo ejemplos de separaciones y detalles acerca de la operacin condiciones. Como se describe por Etzel (6), en proceso cromatografa de aplicaciones en alimentos tales como el fraccionamiento de suero de leche, es importante que todos los tampones y los materiales estn de calidad alimentaria y de bajo costo y que las columnas debe ser operado durante muchos ciclos antes de la limpieza sin prdida de capacidad. Adems, para que el proceso sea rentable la utilizacin de todos los flujos de proceso debe ser maximizada. Los mtodos alternativos a la cromatografa se han investigado para el fraccionamiento de las protenas del suero. Por ejemplo En nuestro laboratorio se han investigado el uso de coloidal afrones de gas para la separacin de protenas (39,40). CGA son microburbujas estabilizadas tensioactivas generados por

agitacin a una velocidad alta (por ejemplo: 8000 rpm) una solucin de tensioactivo. En nuestro trabajo en la separacin de protenas de suero y otros productos bioactivos se demostr que puede actuar como CGA intercambiadores de iones (40-43). Por otra parte nos encontramos con que podra eliminar aproximadamente el 90% de -lactoglobulina a partir de suero de leche en la fase CGA usando el tensioactivo catinico CTAB y a pH 8 (10); bajo estas condiciones electrostticas la interaccin entre el tensioactivo y las protenas se predominante. Sin embargo, de manera interesante, el otro gran protenas con caractersticas similares de carga se mantuvo en el lquido a granel. Esto se explica en base a la diferencial sensibilidad a la desnaturalizacin por el agente tensioactivo que condujo a las interacciones fuertes entre -lactoglobulina y CTAB y la precipitacin de la primera. Uno de los inconvenientes de este proceso es el uso de un tensioactivo de grado no alimentario que debe ser eliminado despus de la separacin. Esto puede hacerse mediante diafiltracin como se muestra en nuestro trabajo en la extraccin de astaxantina (41). Otros mtodos de fraccionamiento incluir el fraccionamiento de espuma (44) y de dos fases acuosa sistemas (45). Otro componente importante de protenas en el suero de leche que Se ltimamente encontrar un montn de aplicaciones interesantes es el

caseinomacropptido (CMP). Este pptido se libera de casena mediante la accin de la quimosina (o pepsina); la Phe105-Met106 durante la fabricacin de queso. El C-terminal caseinomacropptido fragmento hidroflico (CMP) (Residuos 106-169) se libera en el suero, mientras que el parte restante de la casena (para--casena) precipita en la cuajada de queso (46). El CMP comprende tanto una nonglycosylated y forma glicosilada (que tambin se denomina como GMP), el primero representa alrededor del 50% de la total de CMP bovino. El CMP es una de las principales protenas componentes (Tabla 1), que se ha encontrado que poseen una gama de actividades biolgicas. El resto de glicosilada la molcula de los pptidos confiere un rango fisiolgico de funciones tales como, la promocin de biofidobacterial el crecimiento, la modulacin de las respuestas del sistema inmune, supresin de las secreciones gstricas; inhibicin de bacterias y adhesin viral; unin de Escherichia coli y clera enterotoxinas (47-50). La extraccin de la CMP puede ser llevado a cabo mediante la explotacin algunas de sus caractersticas fisicoqumicas nicas (Tabla 1): fuertemente cargado negativamente tamao pequeo (7000 KDa) (46) pero tiene la capacidad de formar polmeros no covalentes vinculados con una molecular

peso hasta 50 kDa a pH neutro, que se disocian en condiciones cidas una alta estabilidad al calor (51,52). Varios procesos se han desarrollado sobre la base de ultrafiltracin que se aprovechan de las propiedades anteriores y result en altas recuperaciones (53,54). Sin embargo, el proceso por Martin-Diana y Fontecha (54) dio como resultado la desnaturalizacin de las protenas de suero de leche (subproducto) y los proceso por Kawasaki et al (53) dio como resultado el procesamiento lento debido a la baja permeabilidad de las BPM. Tolkah y Kulozik (52) investigaron la biotransformacin del CMP en un polmero grande por lo reticulacin con transglutaminasa con el fin de mejorar su separacin por microfiltracin. Este proceso result en 57% y 43% -lactalbmina y -lactoglobulina en el permeado respectivamente; en Para recuperar todos los -lactoglobulina 10 diafiltracin ciclos fueron estimados. Otras separaciones a gran escala son basado en cromatografa de intercambio inico (vase la seccin sobre La purificacin y los procedimientos de enriquecimiento a continuacin). Fraccionamiento de las protenas menores Valor adicional puede ser realizado a partir del suero mediante la extraccin las protenas de menor importancia que tienen actividad biolgica alta, pero

al mismo tiempo, son los ms diluidas (Tabla 1) por lo tanto, 99,9% de los slidos de suero de leche permanecen como subproducto de su extraccin. Procesos de separacin de dichos componentes slo son viables por productores que tienen grandes volmenes de de suero de leche disponible para el procesamiento. La lactoferrina y la lactoperoxidasa son glucoprotenas que se encuentran en el suero a concentraciones de menos de 0,05%, pero poseen importantes actividades biolgicas, tales como los antimicrobianos actividad (55-59) y la actividad contra el cncer (60-62). Hay un gran volumen de literatura que trata el fraccionamiento de estas protenas de suero de leche que tpicamente incluyen, membrana de filtracin y cromatografa en columna (35, 63-66) Estas dos protenas difieren en tamao y carga a partir de las protenas principales (Tabla 1) por lo tanto su separacin de acuerdo con estos resultados las caractersticas fsicas de alta productos de pureza. La separacin selectiva de lactoferrina a partir de la lactoperoxidasa se puede lograr por intercambio inico cromatografa con elucin paso (32) y / o afinidad cromatografa (67, 68). ltimos avances en la separacin de estas protenas se refiere principalmente a las separaciones que combinan una alta selectividad, alta recuperacin, y facilidad para ampliacin al tiempo que reduce los costes de funcionamiento. Una manera de simplificar el proceso de separacin puede ser mediante la eliminacin

los pasos previos al tratamiento, que incluyen la eliminacin de precipitado casena seguido por la eliminacin de la grasa. Esto puede tambin dan lugar a rendimientos mejorados como algunos lactoferrina se une los glbulos de grasa y por lo tanto se pierde con la fraccin grasa. Igualmente, algunos lactoferrina est atrapado en el sedimento casena formado durante la precipitacin con cido de casena. Cargo y Chand (63) investig el uso directo de intercambio de cationes cromatografa para la leche cruda y se ha encontrado que la unin capacidad de la resina para la lactoferrina y la lactoperoxidasa fue incluso mayor que la encontrada para la leche pretratada que mostraron que la presencia de grasa no tuvo un efecto adverso afectar a la unin de las protenas. Esto se debi en parte a la aumento de la temperatura de procesamiento que funciona a (aproximadamente 37 C), el aumento de la temperatura fue posible debido a procesamiento rpido que no le dieron tiempo suficiente para que las bacterias crecimiento. Otro mtodo de separacin que permite proceso de integracin y / o la velocidad de proceso es mayor filtracin por adsorcin mediante adsorcin funcionalizado membranas (vase ms arriba). La lactoferrina y la lactoperoxidasa puede ser efectivamente separado utilizando membranas de intercambio catinico (32,33,56). El scalabililty de esta separacin tiene Se ha demostrado por Ulber et al (33) que utiliza un catin

de membrana de intercambio de recuperar la lactoferrina y la lactoperoxidasa de suero de leche y encontraron que podan recuperar 4 gramos de lactoferrina por ciclo con dos mdulos de 1 m2 a una velocidad de flujo de 2 litros por minuto. Plate et al (56) tambin demostraron la viabilidad de la aplicacin de estos membranas para la recuperacin de la lactoferrina en gran escala; que produjo aproximadamente 7 gramos de lactoferrina por ciclo (Alrededor de 3,5 minutos tiempo de carga por ciclo) y el proceso podra ser ejecutado en tres ciclos posteriores ms sin la necesidad de limpieza que podra hacer acerca 2,3 kg actoferrin por da. La principal ventaja de la membranas adsorbentes ms de las resinas es el procesamiento mayor velocidades de flujo, mientras que la capacidad de unin es mayor para las resinas. Por lo tanto, este mtodo de separacin es adecuado para molculas muy diluidas y grandes. Otros desarrollos en el mbito de la filtracin de membrana incluyen electricallyenhanced microfiltracin que consiste en superponer un campo elctrico a una filtracin de membrana convencional unidad (69). La aplicacin del campo elctrico resultados en ensuciamiento de la membrana reducida y una mayor selectividad de separacin de protenas. Brisson et al (69) encontraron que la selectividad de la separacin de lactoferrina en relacin con la principales protenas aument en aumento de la fuerza elctrica de campo. Adems se ha encontrado que la modificacin de

estructura lactoferrina inducida por la unin de hierro llev a aumento adicional en la selectividad con la aplicacin de la campo elctrico. Una mayor reduccin en el coste del proceso se podra lograr utilizando ms baratos adsorbentes alternativos tales como adsorbentes naturales obtenido a partir de residuos agrcolas. Pifferi y Villalonga (70) afirma que recuperar la lactoperoxidasa directamente a partir de suero de leche mediante la aplicacin de un adsorbente que consiste de pectina o una mezcla de pectina, la celulosa y la lignina de la agricultura residuos tales como manzana Marc; la actividad especfica de los producto era 11 veces mayor que en el suero. Produccin de pptidos de suero de leche La utilizacin creciente de protenas de suero depender nuevas aplicaciones de las protenas de suero individuales y tambin sus hidrolizados que podra conducir a la alimentacin y farmacutica aplicaciones. Los pptidos codificados dentro de la matriz protenas de la leche han demostrado tener antihipertensivo (71), antioxidante (72), antimicrobiano (73,74), antitrombtico (75,76) y la actividad opioide (77) (vase Tabla 2 para las secuencias de pptidos). Uno de los ms ampliamente propiedades estudiadas de pptidos bioactivos derivados de las protenas de la leche es su actividad antihipertensiva, que es medida en trminos de su capacidad para inhibir la angiotensina enzima convertidora (ACE).

Los mtodos ms comunes que se han empleado para la produccin de pptidos bioactivos a partir de protenas de suero son Una hidrlisis enzimtica (78-83); b) fermentacin microbiana (80,81,84) en un proceso por lotes o continuo reactores. El reactor discontinuo es el proceso ms ampliamente usado para la produccin de hidrolizados de protenas. Este enfoque es muy costoso debido a la necesidad de grandes cantidades de enzima como resultado de la inactivacin de la enzima al final de la hidrlisis proceso (85). Lasch y co-autores (86), investigaron el uso de un reactor de enzima inmovilizada Sin embargo, encontraron que el alto costo de la inmovilizacin procedimiento y prdidas significativas en la actividad y las fugas de enzimas limita la aplicabilidad del sistema. El reactor de membrana de enzima (EMR) se ha encontrado que ser una eleccin mejor que el reactor por lotes. En este proceso las enzimas se inmovilizan sobre la membrana o libremente circula en el interior del reactor, donde se conservan y se selectivamente separado del producto final por la membrana. Butylina et al (87) describen el uso de una combinacin de ultrafiltracin y nanofiltracin para purificar pptidos despus de la produccin de concentrado de protena de suero de leche; encontraron que la mejor enriquecimiento se logra utilizando

membranas de ultrafiltracin con bajo corte seguido por nanofiltracin. Adems, la filtracin de membrana permite operacin de los procesos de bioseparacin sin aadir ningn reactivos o productos qumicos y conduce a una mayor produccin sin desnaturalizacin de la protena (88,89). Adems, et al Guadix (90) diseado un reactor de membrana estable para la produccin de un hidrolizado de protena de suero con baja antigenicidad y alcanz 80% valor de conversin. Sin embargo, se detectado inactivacin de la enzima trmica, as como una disminucin en el flujo de permeado 10 a 6,3 ml / min a 16 horas de hidrlisis continuo debido al ensuciamiento de la membrana. La hidrlisis enzimtica Las enzimas se utilizan para la hidrlisis parcial de las protenas del suero para producir pptidos bioactivos y de modificar su funcional propiedades (83). Enzimas diferentes se han aplicarse para la liberacin de estos pptidos bioactivos que son codificada dentro de las protenas parentales. Aparte de la comnmente utilizados enzimas gastrointestinales, tales como pepsina, tripsina y quimiotripsina (78,82), microbiano diferente enzimas tales como proteasa N Amano, termolisina, alcalasa (91-93) tambin se utilizan. En nuestro laboratorio tenemos utilizado Protease N Amano para hidrolizar -lactoglobulina para la produccin de pptidos inhibidores de ECA (93). en este trabajar hemos identificado el heptapptido Ser-Ala-Pro-LeuArg-Val-Tyr, con una CI50 de 8M que tiene casi la

misma potencia que la de la casena bien conocido derivado Tripptido inhibidor ACE Val-Pro-Pro (94). En los ltimos trabajar con esta enzima se ha producido hidrolizados con una mezcla de potentes pptidos inhibidores de ECA a partir de lactoglobulina y CMP (95). Individual, o una mezcla de enzimas se han utilizado para producir secuencias de pptidos con actividades biolgicas diferentes incluyendo, la actividad inhibidora de ECA (82,96-98), antioxidante (78,91), el msculo liso efecto de estimulacin (99), antimicrobianos (74.100), los opiceos (77.101), inmunomodulador (13), y las actividades antitrombticas (75) de diferente protenas de suero (Tabla 2). Por lo tanto, una enzima especfica podra ser elegido para la produccin de hidrolizados con actividades biolgicas especficas, (83). fermentacin Una gama de cepas microbianas se han utilizado para la fermentacin de suero que da lugar a la produccin de secuencias de pptidos bioactivos. Belem et al usaron una levadura

cepa de Kluyveromyces marxianus para la liberacin de altamente potentes secuencias bioactivos a partir de -lactoglobulina (102). Adems L. helveticus y S. cerevisiae se han aplicado para suero de leche de fermentacin y una muy potente antihipertensivo pptido, Tyr-Pro, se identific a partir de una fermentacin yogur-como producto, el sinttico Tyr-Pro mostr muy fuerte actividad antihipertensiva en pacientes hipertensos espontneo ratas (SHR) (103 104). En un estudio reciente sobre la fermentacin suero de leche hidrolizado obtenido usando L. helveticus muestra in vitro antihipertensivo, antioxidante y

inmunomodulador efecto y tambin una disminucin en total IgE y la IgE especfica de ovoalbmina por lo tanto, reduce la ovoalbmina allergencity inducida en ratones (84). Didelot et al (79) producido un pptido inhibidor ACE potente de -lactalbmina, Trp-Leu-Ala-His-Lys, por fermentacin de caprinos suero utilizando microflora queso, un co-cultivo de Candida parapsilosis y Lactobacillus paracasei. Este pptido Era resistente a la digestin in vitro por la pepsina y tripsina pero fue degradada por quimotripsina (80). Purificacin y enriquecimiento procedimientos Varios productos enriquecidos en pptidos derivados de la leche existir ya en el mercado (105) Sin embargo, la comercializacin de estos pptidos bioactivos se ha limitado debido a la falta de tecnologas econmicas eficaces a gran escala. Estos pptidos bioactivos se dice que contiene 3-20 amino secuencias de cido (106). Los pptidos con conversin de la angiotensina Enzima (ACE) actividad inhibidora puede ser eficazmente fraccion mediante filtracin por membrana como pptidos con peso molecular inferior a 1 kDa son tpicamente ms potentes inhibidores de ACE que las ms grandes (107). Adems de el peso molecular de carga, tambin juega un papel importante en la funcionalidad de estos pptidos como en el caso de los pptidos catinicos (cargados positivamente) que poseen actividad antimicrobiana, tales como, lactoferricina-B derivado

de lactoferrina (108). Por lo tanto, adems de la convencional membranas de ultrafiltracin, intercambiadores inicos, as como membranas que contienen otros grupos funcionales son utilizado para pptidos selectivamente separadas de fisicoqumica dado caractersticas. Muchos procesos de cromatografa de intercambio inico han sido desarrollado para el enriquecimiento de las protenas y bioactivos pptidos de la leche. Ellegrd et al (109) desarroll un proceso de cromatografa de escala para el aislamiento, la caracterizacin y la identificacin de pptidos bioactivos utilizando hidrlisis trptica con un rendimiento excelente producto de 40 Kg fosfopptidos de casena enriquecida en calcio o sodio. Bouhallab et al (110) evaluaron cromatografa de intercambio inico mediante un intercambio de iones altamente hidrfila para la separacin de pptidos bioactivos pequeos catinicos, que se prepararon por hidrlisis trptica de caseinomacropptido en un reactor de membrana como una funcin del pH y sal gradiente. Se inform de lograr una excelente selectividad y la recuperacin, a pesar de todos ellos con la misma red carga positiva como su fraccionamiento fue finalmente posible sobre la base de sus diferencias de hidrofilicidad. Recio y Visser (100) informaron de la utilizacin de membrana de intercambio de iones cromatografa de in-situ hidrlisis de lactoferrina y la separacin de lactoferricina-B a partir de suero de queso.

Sugirieron este proceso de membrana basado tiene varios ventajas econmicas: (i) rpidas y (ii) puede ser fcilmente escalar hasta kilogramos gramo o incluso de cantidades. Otro que el convencional de cromatografa de intercambio inico, simulado lecho mvil (SMB) cromatografa ha sido aplicado para la purificacin de pptidos bioactivos a partir hidrolizados de casena (111). En este sistema, a diferencia de la convencional cromatografa, el lecho de adsorbente se divide en pequeas secciones, en el que, la entrada y la salida de la fluido estn cambiando en la direccin del flujo de fluido a una intervalo de tiempo fijo. Ottens et al (111) obtiene una activa fraccin con pureza de producto de hasta el 98%. En general, la tcnicas antes mencionadas son caros o limitada slo a escala de laboratorio. En nuestro laboratorio tenemos desarroll un proceso simple que integra la separacin de -lactoglobulina a partir de suero de leche y su hidrlisis para la produccin de parcialmente puro y menos complejo bioactivo pptidos con la enzima conversora de la angiotensina (ACE) actividad inhibidora (95). La ventaja de este proceso es que al final de la hidrlisis, el sustrato no hidrolizado y pptidos de carga similar como -lactoglobulina permanecer adsorbido sobre el mientras que el intercambiador de iones, altamente pptidos bioactivos libres del sustrato no hidrolizado pasar a travs de la membrana. Una etapa de ultrafiltracin final,

con unos resultados de membrana 1 kDa en una fraccin de pptido con pptidos ms pequeos altamente activos, parcialmente purificadas a partir de la enzima, el sustrato no hidrolizado y pptidos ms grandes. Fraccionamiento pptido bioactivo tambin se ha conseguido usando un proceso hbrido que combina uno o ms de ultrafiltracin membranas en una celda de electrodilisis que contiene tanto nodo y electrodos de ctodo. En esta protena sistema hidrolizados se separan en base a su electrofortica movilidad y el peso molecular en la que el positivamente pptidos cargadas se mueven hacia el ctodo, mientras que el movimiento de carga negativa hacia el electrodo de nodo a travs de la membrana de ultrafiltracin. Este enfoque fue probado en suero (112.113), casena (114), as como planta hidrolizados de protenas (115116). La viabilidad de este enfoque se prob en una escala de laboratorio para fraccionar lactoglobulina derivados pptidos (113). Recientemente Firdaous et al (115) investig esta tecnologa en un semi-industrial escala de planta piloto para recuperar una fraccin enriquecida en antihipertensivo pptido (Val-Trp) de la protena de alfalfa blanco hidrolizado. Se inform de que la integracin de la anionexchange membrana a pH 3 proporciona un pptido mayor velocidad de transporte de la integracin de la membrana de intercambio de cationes a pH 9. Adems se inform de este proceso

reducira al mnimo los riesgos de ensuciamiento de la membrana. TENDENCIAS FUTURAS Las propiedades nicas nutricionales y funcionales de suero de leche protenas, junto con las nuevas actividades biolgicas nuevas de estas protenas y sus pptidos dar lugar a un una mayor demanda de protenas individuales y sus hidrolizados. Por lo tanto, eficaz, selectiva y rentable separaciones eficaces se requiere. Los avances en esta rea incluyen, cromatografa de intercambio inico, ion membranas de intercambio y separaciones de afinidad, que permitir el fraccionamiento de las protenas de suero individuales con alta actividad biolgica, tal como, la lactoferrina protena de menor importancia. Aunque la mayora de estas tecnologas pueden ser mayor escala y permitir la produccin de protenas individuales a escala kg, reduccin de costes sigue siendo un desafo. Un interesante concepto es el de la captura en la finca de alto valor las protenas de la leche cruda, la cual tiene como objetivo desarrollar simplificado sin embargo, los procesos basados en tecnologas eficientes y robustos que permiten la captacin directa de protenas especficas, sin tratamiento previo de la leche. Otra idea interesante, lo que podra conducir a su evolucin, es el uso de adsorbentes a base de residuos agrcolas para la separacin de protenas del suero. Esto ofrece la posibilidad de reducir el costo de resinas y contribuye a la sostenibilidad.

El aumento de la investigacin en el mbito de las actividades biolgicas de protenas y pptidos de suero de leche es continuamente abriendo nuevas aplicaciones potenciales. Una de la aplicacin creciente reas de suero de leche es bebidas funcionales, donde suero protenas y pptidos se podran aadir para producir saludable productos bajos en grasa pero ricos en esenciales y ramificados aminocidos y con un dado de la salud y / o general de bienestar impacto. Una protena de suero de leche con propiedades muy interesantes para tal aplicacin es GMP, como se describe por Etzel (6). GMP como otras importantes protenas tiene una muy alta contenido esencial de (EAA) y ramificada (BCAA) aminocidos. Sin embargo, el uso de protenas de suero de leche para la produccin de caloras y bajo contenido en protenas (Sano) bebidas ha demostrado ser un desafo como protenas sedimentacin se produce por calentamiento durante la pasteurizacin. GMP es una molcula anftera y reemplazando por lo tanto concentrado de protena de suero por esta protena ayuda a resolver el problema de la sedimentacin y / o mientras que la turbidez el mantenimiento de un alto contenido de la EAA y BCAA. Las bebidas deportivas tambin es otra rea de crecimiento para las protenas de suero de leche aplicaciones (7% de crecimiento anual se ha estimado (1)). Los nuevos productos estn siendo desarrollados para permitir recuperacin mejorada y rendimiento, sino tambin con ms

beneficios para la salud, tales como, presin sangunea reducida. Uno de los retos en la produccin de protena de suero hidrolizados es que los pasos de purificacin adicionales son necesarios para enriquecer y concentrar los pptidos que resulta en procesos costosos. Enfoques integradores podra conducir a proceso de simplificacin y de coste reducido, por tanto proceso. En Adems hidrlisis prolongada de protenas de suero de leche conduce a la generacin de un sabor amargo. Una forma de reducir la amargura es mediante la limitacin de la extensin de la hidrlisis sin embargo, esto comprometera la bioactividad. Finalmente las protenas del suero estn encontrando nuevas aplicaciones, encapsulantes de ingredientes bioactivos (117). Su fsico propiedades y su estabilidad a la degradacin por la parte superior del intestino hace muy atractivos para la generacin de micro y nanopartculas para ayudar a la entrega y mejorar la biodisponibilidad de los compuestos bioactivos.