Giberelinas

1. Estructura Qumica *Las Gas son hormonas endgenas de los vegetales superiores que regulan numerosos aspectos del desarrollo. Las giberelinas (GAs) son compuestos naturales que actan como reguladores endgenos del crecimiento y desarrollo en los vegetales superiores. Estas hormonas fueron descubiertas por fitopatologos japoneses y proviene de un hongo llamada Gibberella fujikoroi. Los estudios de aplicaciones exgenas a las plantas y a las investigaciones con las plantas mutantes deficientes en GAs, nos indican que las giberelinas son reguladores esenciales del desarrollo. Las GAs son, por tanto, fitohormonas u hormonas nativas en las plantas que afectan, regulan o modulan un amplio abanico de respuestas del crecimiento. Los efectos ms evidentes se observan en la germinacin de semillas, la estimulacin del crecimiento del tallo, la induccin de la partenocarpia o la liberacin de enzimas hidroliticas. La elongacin del tallo, en general, es una respuesta muy acusada, incluso espectacular en las plantas que crecen en roseta y en algunas variedades que muestran enanismo gentico. *Las GAs con 20 tomos de carbono son precursoras de las GAs con 19 tomos de carbono. Desde un punto de vista qumico, las GAs constituyen una familia de diterpenos tetraciclicos cidos cuyo esqueleto bsico est constituido por un anillo de ent-giberelano. Sin embargo, y a nivel fisiolgico, en este grupo solamente se pueden distinguir unos pocos miembros con capacidad intrnseca para influir en el crecimiento de los vegetales (giberelinas activas). En la descripcin que sigue, se resumen en 4 premisas los aspectos bsicos de la estructura qumica de las giberelinas: a) Las GAs poseen un esqueleto de ent-giberelano que pueden ser de 20 tomos de carbono (giberelinas C20) o de 19 tomos de carbono (giberelinas C19). b) Las GAs C20 se metabolizan mediante oxidaciones continuas del C-20 (carbono en la posicin 20), que inicialmente existe como grupo metilo

(CH3) y se transforma sucesivamente en hidroximetilo (CH2OH), aldehdo (CHO) y finalmente carboxlico (COOH). c) Las GAs C20, que portan un grupo aldehdo en el C-20, son precursoras de las GAs C19 y pierden ese carbono al convertirse en GAs C19. d) La insercin de grupos hidroxilos en las posiciones C-3 y C-2 determina la actividad biolgica de las GAs.

2. Actividad Biolgica La mayora de las giberelinas pertenecientes a esta vasta familia de compuestos no posee capacidad per se para regular el desarrollo de las plantas. De hecho, casi todas las giberelinas son precursores o productos inactivados, laterales o finales, de las rutas que sintetizan las GAs activas. La capacidad individual de cada giberelina para modificar el crecimiento, o su actividad biolgica, se determino en la dcada de los setenta mediante ensayos biolgicos, determinados bioensayos. Muchos bioensayos se basan en la capacidad de las GAs para inducir la elongacin de los hipocotilos, coleoptilos o tallitos y vainas de las hojas de plntulas de variedades enanas de arroz, lechuga, maz, por ejemplo. *Las GAs C19 que portan un grupo hidroxilo en la posicin 3B, como GA1, muestran una elevada actividad biolgica. Algunos estudios indican que solamente las estructuras C19 que portan grupos hidroxilos en la posicin 3B muestran actividad biolgica. Por tanto, podemos afirmar que si las GAs C20 y las GAs que no poseen grupos hidroxilos muestran actividad, es porque se metabolizan en la planta a GAs C19 3B-hidroxiladas. *Las GAs activas se desactivan mediante la incorporacin de un grupo 2Bhidroxilo. Las giberelinas activas, y en algunos casos tambin los precursores de las giberelinas activas, son finalmente desactivadas con carcter irreversible. El mecanismo ms comn de desactivacin es la incorporacin de un grupo hidroxilo en la posicin 2B. Las GAs 2B-hidroxiladas son, por tanto, productos finales de la ruta sinttica sin actividad biolgica.

3. Biosntesis y Metabolismo Los primeros pasos en la ruta de sntesis de GAs son comunes al resto de compuestos terpenoides y se han descrito tanto en animales como en vegetales. Un terpenoide es una sustancia compuesta por bloques o unidades de cinco tomos de carbono denominadas isoprenos. Estos primeros pasos incluyan la transformacin del primer compuesto de la ruta de sntesis de los terpenoides, el acido mevalonico (AMV), en una serie de pasos consecutivos a geranilgeranil pirofosfato (GGPP), el precursor de los diterpenos y, por tanto, de las giberelinas. *La biosntesis de GAs se inicia con la formacin de kaureno y finaliza, mediante reacciones sucesivas de oxidacin, con la interconversion de las distintas GAs. Los estudios con plantas mutantes deficientes en GAs, y otras investigaciones paralelas permiten dividir la biosntesis de GAs en tres partes: 1) desde geranilgeranil difosfato a ent-kaureno; 2) desde ent-kaureno a GA12-aldehido, y 3) desde GA12-aldehido a las GAs. Etapa 1: Desde geranilgeranildifosfato a ent-kaureno. La transformacin que bifurca el flujo biosintetico hacia la sntesis de GAs y, por tanto, el primer paso especifico de la ruta de sntesis de GAs es la ciclacin de GGDP a ent-copalil difosfato (CPP o CDP). Este compuesto se convierte seguidamente en entkaureno. Etapa 2: Desde ent-kaureno a GA12-aldehido. En esta parte de la va, la oxidacin secuencial del ent-kaureno, ent-kaurenal y acido ent-kaurenoico. Posteriormente, el acido kaurenoico se hidroxila primero y despus, por contraccin del anillo B, produce GA12-aldehido. Etapa 3: Desde GA12-aldehido a las GAs. El primer paso de esta etapa es la oxidacin de GA12-aldehido a GA12. El metabolismo posterior a GA12 puede variar entre especies. En general, GA12 incorpora un grupo hidroxilo en C-13 para transformarse en GA53, el primer miembro de la ruta de sntesis de la 13hidroxilacion, que es la va predominante en la mayora de especies. Las GAs pueden conjugarse de forma covalente con molculas menores, principalmente glucosa, formando los conjugados de GAs.

Adems de la va de la 13-hidroxilacion (todos los miembros presentan un grupo hidroxilo en la posicin C-13), existen otras rutas que pueden operar conjuntamente con esta, o bien como rutas mayoritarias en determinadas especies. Son la va de la 3B-hidroxilacion (todos los miembros presentan un grupo hidroxilo en la posicin 3B), y la va de la no-hidroxilacion (las GAs no presentan grupos hidroxilos en las posiciones 3B y 13). *Los genes que codifican las enzimas de biosntesis pertenecen a pequeas familias multigenicas, cuyos miembros se expresan de forma diferencial. **Las enzimas de la etapa 1 son ciclasas que se localizan en el proplastidio. Las enzimas que catalizan la ciclacin de GGDP a CDP y de este a ent-kaureno son ciclasas denominadas ent-copalil difosfato sintasa (CPS) y ent-kaureno sintasa. Estas dos enzimas se localizan en los proplastidios de los tejidos meristematicos de los brotes, pero no en los cloroplastos maduros. **Las enzimas de la etapa 2 son protenas microsomales, ligadas al retculo endoplasmico y dependientes del citocromo P-450. Las enzimas de esta etapa son monooxigenasas dependientes del citocromo P450, ligadas a las membranas (enzimas microsomales) del retculo endoplasmico. Los tres pasos oxidativos del kaureno a acido kaurenoico estn catalizados por la kaureno oxidasa. **Las enzimas de la etapa 3 son dioxigenasas solubles localizadas en el citoplasma. Todos los pasos oxidativos de esta etapa estn catalizados por dioxigenasas solubles que se localizan en el citoplasma y requieren 2-oxoglutarato y oxigeno molecular como cosustratos, y hierro y ascorbato como cofactores. Las dioxigenasas estn codificadas por pequeas familias multigenicas, cuyos miembros se expresan diferencialmente por rganos y estados de desarrollo. Esta observacin constituye una caracterstica importante, probablemente relacionada con la regulacin del crecimiento. Los genes que codifican las 20oxidasas se han clonado en multitud de especies, en donde se ha estudiado su expresin.

*La biosntesis de GAs, adems, est regulada por mecanismos de retroalimentacin negativa y positiva. Los niveles de GAs activas se regulan mediante complejos mecanismos de control. Entre los factores internos existe un mecanismo muy eficaz basado en la retroalimentacin, negativa o positiva, inducida por los mismos niveles de GA activa. Si la planta percibe que posee niveles elevados de GAs activas tiende a reproducir los niveles de GAs C19 y aumentar los de los precursores C20. *Los factores ambientales como la luz tambin regulan la sntesis de GAs. La sntesis de GAs tambin se modifica de acuerdo con las condiciones de luz y temperatura en que se desarrollan las plantas. En relacin con el fotoperiodo, las especies de da largo (long-day, LD, 8 horas de luz intensa y 16 horas de luz de baja intensidad) experimentan elongacin del tallo en estas condiciones; las especies de da corto (short-day, SD, 8 horas de luz intensa y 16 horas oscuridad) muestran elongacin del tallo en da corto, y las especies neutras no presentan requerimientos de fotoperiodo. En las primeras, la elongacin inducida por el da largo est mediatizada por las GAs.

4. Efectos Fisiolgicos Las GAs producen o modulan durante el desarrollo de las plantas un amplio y variado abanico de respuestas. Estas respuestas afectan tanto a la regulacin del crecimiento vegetativo como al desarrollo reproductivo. Las GAs son los factores hormonales determinantes en el control de la elongacin del tallo, y en algunas plantas pueden causar la reversin de la fase de adulto a la fase juvenil. Las GAs tambin modifican sustancialmente los procesos reproductivos de los vegetales, participando en el control de la induccin de la floracin, en el crecimiento y produccin de flores, y en el cuajado y desarrollo de los frutos. Las GAs, asimismo, sustituyen los requerimientos de luz o frio que precisan muchas semillas para germinar y, en los cereales, regulan la hidrlisis de las sustancias de reserva de las semillas. *Las Gas controlan el crecimiento y la elongacin del tallo. Las variedades de plantas producidas por mutaciones que afectan al metabolismo o a la accin de las GAs se reconocen fcilmente porque

muestran alteraciones muy evidentes en la altura normal de la especie. Estas mutaciones, en principio, pueden afectar a la biosntesis de GAs activas, al proceso de desactivacin o al mecanismo de transduccin de la seal. *Las mutaciones en la biosntesis de GAs reducen los niveles de GAs activas y generan fenotipos enanos. Las mutaciones en los genes de la biosntesis de GAs impiden o dificultan la sntesis de niveles adecuados de GAs activas para inducir el desarrollo del tallo. Las plantas mutantes que presentan estas alteraciones generan tallos con el mismo nmero de entrenudos que los genotipos salvajes, pero ms cortos, y hojas de un color verde oscuro intenso. Las mutaciones muy severas tambin producen esterilidad. Estos mutantes, al ser deficientes de GAs responden a la aplicacin de GAs exgenas con la recuperacin del fenotipo normal. Todas las mutaciones de este tipo analizadas hasta la fecha son recesivas. *Las mutaciones de desactivacin bloquean la 2B-hidroxilacion y generan fenotipos elongados. *Las mutaciones de respuesta afectan a la va de transduccin de la seal y generan fenotipos enanos o elongados. Los mutantes de respuesta son los ms desconocidos en su mecanismo de accin y, por esta razn, forman un grupo heterogneo, en el que se incluyen mutaciones de origen diverso. En general, parecen definir e identificar pasos importantes de la va de transduccin de la seal de las GAs. El grupo puede ser dividido en dos clases: mutantes con fenotipo enano y mutantes con fenotipo elongado. Los mutantes de respuesta con fenotipo enano, conocidos tambin como mutantes insensibles, son fenotpicamente idnticos a los mutantes deficientes en GAs y, sin embargo, muestran una respuesta nula o muy reducida a las GAs exgenas. Los mutantes de respuesta con fenotipo elongado son recesivos y no producen, a diferencia de las mutaciones anteriores, fenotipos enanos. El tallo en estos mutantes es de tipo slender, ms delgado y alto de lo normal. Las mutaciones tambin reducen la sensibilidad a las GAs y a los niveles endgenos de las mismas, de modo que la elongacin del tallo parece ser enteramente independiente de las GAs.

*Las GAs mediatizan la elongacin del tallo que el fotoperiodo de da largo induce en las plantas de roseta. El crecimiento del tallo en las plantas de da largo depende del fotoperiodo. En condiciones de da corto, las especies con requerimiento absoluto de LD, como la espinaca, desarrollan una roseta de hojas basales que permanece en estado vegetativo indefinidamente. El crecimiento del tallo, y la floracin que ocurre inmediatamente despus, solamente tiene lugar bajo condiciones de LD. Diversas lneas de estudio indican que la elongacin del tallo en estas plantas est mediatizada por el control fotoperiodico del metabolismo de GAs. As, la aplicacin de Gas en condiciones de fotoperiodo no inductivas estimulan la elongacin del tallo, mientras que los inhibidores de la sntesis de GAs suprimen el crecimiento inducido en LD. Este efecto promotor de las condiciones de da largo en la elongacin del tallo se debe a un incremento endgeno de GAs activas. *El efecto positivo de las GAs en la induccin floral no puede generalizarse a todas las plantas. *Las GAs controlan el crecimiento y desarrollo de numerosos frutos. La regulacin del crecimiento de los frutos depende, en gran medida, de las hormonas sintetizadas en las semillas y, de forma particular, de las GAs. En muchas especies se ha demostrado que el nmero de frutos que cuajan e, incluso, su tamao individual se correlacionan con el nmero de semillas presente. En los frutos con semillas, la usencia de polinizacin y de semillas detiene el crecimiento del fruto y provoca su abscisin. Otras observaciones que relacionan las GAs con el desarrollo del fruto se han obtenido en los mutantes muy deficientes en giberelinas, que no producen frutos o lo hacen en menor escala. *Los fenotipos de las plantas transgnicas que presentan alteraciones en la sntesis de GAs, confirman los efectos fisiolgicos atribuidos a las GAs. Mediante la generacin de plantas transgnicas que expresan en distinto grado los genes de la sntesis de giberelinas, se ha estudiado el efecto de la manipulacin de la produccin de GAs. Los resultados obtenidos con distintos genes y especies confirman, en gran medida, los efectos tradicionalmente atribuidos a las GAs en el control y la regulacin del crecimiento. Con el gen de la copalil fosfato sintasa dispuesta en antisentido, se han transformado plantas

de soya de manera que demuestran fenotipo enano heredable, con retraso en el crecimiento vegetativo, reproductivo y en la floracin. *Las GAs estimulan la germinacin de numerosas especies y, en los cereales, coordinan la movilizacin de reservas que sustenta el crecimiento inicial de la plntula. La germinacin es un proceso regulado hormonalmente. En muchas especies, se ha obtenido evidencias directas de que las GAs son necesarias durante la germinacin. As, tras la fase de desactivacin de GAs en la semilla madura del guisante, la3-hidroxilacion de GA20 a GA1, se activa al inicio de la germinacin e induce el crecimiento de los 10 primero entrenudos de la planta. Las GAs asimismo, sustituyen los requerimientos de luz o frio que precisan muchas semillas para germinar. La induccin de la germinacin por estratificacin (tratamiento con temperaturas bajas) conceptualmente se asemeja mucho al efecto de la vernalizacion en la floracin, y tambin est mediatizado por GAs. Otras demostraciones se han obtenido con los mutantes extremadamente deficientes en GAs de Arabidopsis y tomate, que no germinan sin la aplicacin externa de GA. En los cereales, la movilizacin de reservas est coordinada por las GAs producidas en el embrin. La movilizacin sostiene el crecimiento de la plntula recin germinada hasta que esta es activa fotosintticamente. El embrin de las semillas de los cereales es un tejido diploide que contiene un rgano especializado de absorcin, el escutelo. El endospermo, por otro lado, es un tejido de reserva triploide compuesto por el endospermo almidonoso, formado por celular que almacenan granos de almidn, y la capa de aleurona, constituida por unas pocas capas de clulas que contienen cuerpos proteicos y lipidicos.

5. Mecanismos de Accin