CROMATOGRAFA EN COLUMNA

OBJETIVOS a) Conocer la tcnica de cromatografa en columna, sus caractersticas y los factores que en ella intervienen. b) Utilizar la cromatografa en columna para la separacin de mezclas de compuestos orgnicos. c) Controlar por cromatografa en capa fina la separacin de una mezcla de compuestos por cromatografa en columna.
ANLISIS DE LA TCNICA

I.

Purificacin del cido benzoico

Para la separacin de cido benzoico del azul metileno se utiliza la tcnica de cromatografa por columna. Se agregaron 8 mL del eluyente (acetato de etilo) y luego se introdujo un pedazo de algodn con la varilla de vidrio el cual movi hacia arriba y hacia abajo dentro del acetato de etilo para sacar el aire y luego se coloc en el fondo, el algodn fungi como sostn del gel de slice. Luego se agreg la suspensin de slica gel (8 g. de slica gel en 30 mL de acetato de etilo) a travs del embudo. Se enjuag el vaso de la preparacin de la suspensin para vaciar el slica gel que se qued en l. Luego se abri la llave de la columna para eliminar el exceso de acetato de etilo, dejando el nivel de acetato de etilo un dedo por encima del nivel del adsorbente para evitar que se seque. Despus se prepar una disolucin de 0.4 g. de la mezcla problema en aprox. 2 mL de eluyente, la cual se verti poco a poco y en el centro sobre la slica gel con ayuda de una pipeta conectada a una jeringa, para evitar que la disolucin traspase el adsorbente. Enseguida se colectaron los 8 eluatos (de 6 mL c/u) en los frascos viales, agregando eluyente en la columna sobre la muestra para evitar que se secara. Al abrirse la llave la muestra poco a poco se iba adsorbiendo en la slica gel. Para verificar la separacin de la mezcla usamos la tcnica de cromatografa en capa fina. En una placa colocamos 1 gota de dos de las farcciones y una gota de una muestra testigo y se colocaron en una cmara de elucin con una mezcla de hexano-acetato 2:1. Luego se revelaron las placas con lmpara de luz UV, para observar en cuales se presentaban manchas semejantes a la muestra testigo. Notamos que en las fracciones 3,

4, 5 y 6 haba presencia del compuesto y que a medida que el nmero de fraccin creca la intensidad de era menor (lo que indica disminucin de la concentracin). Para recuperar la sustancia, se someti a destilacin simple aquellas fracciones en las que hubo presencia de compuesto. En la probeta qued el exceso de eluyente y en el matraz qued un residuo de 5 mL, el cual se vaci en un vidrio de reloj (pesando antes ste) y se dej secar. Por ltimo se pes la muestra para obtener el porcentaje de rendimiento. CUESTIONARIO a) Explique por qu el producto se eluy y el colorante se adsorbi en la fase estacionaria. Esto sucede debido a que tanto el acetato de etilo como el cido benzoico son sustancias apolares, por lo que el acetato logr diluir al cido benzoico; en tanto que el azul de metileno tiene ms afinidad por el gel de slice ya que ste presenta una polaridad mayor a la del cido benzoico, por lo cual queda adsorbido por la slica gel. b) Si se deseara recuperar el colorante adsorbido, qu debera hacerse? Se podra mezclar el gel de slice que contiene el colorante con un disolvente que disuelva a este colorante, o sea un disolvente ms polar, y volver a separar por cromatografa en columna. c) Qu debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para una sustancia en una cromatografa en columna? Se debe verificar las polaridades de las sustancias. Si la sustancia es polar, el eluyente debe de ser un eluyente muy polar, para lograr que se eluya en l. Si no es polar, como fue el caso del cido benzoico, se debe de utilizar un eluyente no polar, con el fin de que se alcance la mxima solubilidad y que las fuerzas intermoleculares ayuden a que el soluto pase a travs de la columna. Esto se puede hacer realizando una cromatografa en capa fina. d) La recuperacin cuantitativa del producto principal de la prctica, sera ms completa si se recogieran fracciones mayores o menores de 6 mL, por qu? Sera ms eficaz si las muestras fueran de menor volumen, ya que sera ms fcil detectar las muestras que contienen al compuesto, por lo que el volumen en que se encuentra el compuesto sera ms exacto. e) Indique algunas de las aplicaciones de la cromatografa de adsorcin en columna y capa fina. Cromatografa en capa fina Determinar la pureza de un compuesto Determinar la polaridad de disolventes Separacin de pequeas cantidades de una mezcla. Determinar el nmero de componentes de una mezcla. Identificar compuestos a partir de la comparacin del valor Rf.

Cromatografa en columna Separacin de una mezcla en cantidades por arriba de los 0.1 g. Separacin de mezclas de sustancias coloridas. Separacin de sustancias por medio de estratos que nos permite saber cuntos componentes tiene la muestra.

f) Escriba una lista de eluyentes utilizados en cromatografa en columna en orden de polaridad decreciente (anote su bibliografa). 1. 2. 3. 4. 5. 6. Hexano Tolueno ter Diclorometano Acetato de etilo Isopropanol (PRIMO, 2007) g) Diga cul es la diferencia entre la cromatografa en capa fina y la cromatografa en columna. En la cromatografa en capa fina el adsorbente se coloca en forma de una capa fina adherida sobre un soporte rgido asciende el eluyente por capilaridad. Adems en esta el eluyente sube al adsorbente por la accin de capilaridad. Esta tcnica sirve para determinar el nmero de componentes de una mezcla y controla la cromatografa en columna. Slo da resultados cualitativos. En la cromatografa en capa fina, el adsorbente se coloca dentro de una columna de vidrio mezclada con el eluyente. El eluyente se hace caer a travs del adsorbente contenido en la columna por gravedad. Esta tcnica controla la cromatografa en capa fina, se puede usar para separar grandes cantidades de una mezcla (mayor a 0.1 g). Muestra resultados cuantitativos.

RESULTADOS

Porcentaje de rendimiento

Masa inicial de la muestra: 0.4 g Masa final de la muestra: 0.35 g Porcentaje de rendimiento: 87.5 %
(0.35g/0.4 g)x100%=87.5 %

CONCLUSIONES La cromatografa de columna es un mtodo sencillo para separar las sustancias de una mezcla sin embargo es un mtodo el cual es difcil realizar sin ayuda ya que es necesario mantener la columna hidratada y no permitir que esta se seque al obtener las muestras de la sustancia, ya que si la columna llegara a secarse permitira el paso de las otras sustancias de la mezcla. Este mtodo se apoya en la cromatografa de capa fina, ya que esta nos ayuda a detectar en que muestras se encuentra el componente destilado despus de haberlo expuesto a los rayos UV o a la cmara de yodo, para despus destilarlo y separar el compuesto (solamente usando las muestras que contienen alguna marca del componente), el rendimiento de la cromatografa de columna es un mtodo muy eficaz

BIBLIOGRAFA

Durst, D. et. al. Qumica orgnica experimental. Edit. Revert. Espaa: 2007. Pg. 79. Gmez, A. Tcnicas analticas de separacin. Edit. Revert. Espaa: 1988. Pg. 398. Primo, E. Qumica orgnica bsica y aplicada: de la molcula a la industria. Edit. Revert. Espaa: 2007. Pg. 1228.