ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA FACULTAD DE INGENIERA EN BIOTECNOLOGA INMUNOLOGA NOMBRE: FECHA: Luis E.

Gavilanes T. 14 de Marzo del 2013. DIFERENCIACION LEUCOCITARIA MEDIANTE FROTIS SANGUINEO EN SANGRE PERIFERICA 2. OBJETIVOS: 2.1. OBJETIVO GENERAL: Diferenciar las clulas halladas en un recuento diferencial normal de leucocitos de sangre extrada en el laboratorio. 2.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS: Extraer una muestra de sangre en el laboratorio, donada por uno de los estudiantes. Utilizando la tincin de Wright diferenciar clulas sanguneas de origen linfoideo y mieloideo. Identificar y diferenciar estructuras celulares sanguneas que se encuentran en mayor y menor proporcin. 3. MARCO TERICO: Las clulas con funcin inmune ms relevante son los leucocitos o clulas blancas entre los cuales se encuentran diferentes subtipos dependiendo de su estructura y funcin. Entre ellos destacan los neutrfilos, eosinfilos, basfilos, mastocitos, monocitos, macrfagos, linfocitos B, linfocitos T, clulas NK, clulas NKT y clulas dendrticas. De todas ellas veremos cmo se diferencian y sus principales caractersticas funcionales (BORREGO et al., 2004)

1. TEMA:

Figura 1. Proporcion leucocitaria en sangre periferica (BORREGO et al., 2004)

En concreto de las clulas madre pluripotentes, se diferencian, hacia dos tipos distintos de clulas algo ms maduras. Son los progenitores mielomonocticos y los progenitores de leucocitos o glbulos blancos. Estos procesos de diferenciacin no ocurren al azar, sino que estn estrechamente regulados por sustancias conocidas como factores estimuladores de colonias que producidos por el estroma y macrfagos de la mdula sea. Los progenitores mielo-monocticos, se diferencian a su vez en siete lneas celulares que, tras diferentes grados de maduracin, terminan formando los eritrocitos, plaquetas, basfilos, eosinfilos, neutrfilos, monocitos y clulas dendrticas mielomonocticas. Por otra parte los progenitores linfocticos, se diferenciaran en linfocitos T, linfocitos B, clulas NK y clulas dendrticas entre otras (Figura: Hematopoyesis). A continuacin haremos referencia tanto a las clulas con funcin inmune como a la organizacin y funciones de los rganos linfoideos. (NEMOURS, 2011) Enfermedades de los glbulos blancos Neutropenia. Esta enfermedad ocurre cuando no hay suficiente cantidad de un tipo de glbulos blancos, denominados neutrfilos, para proteger al cuerpo contra las infecciones bacterianas. Las personas sometidas a tratamiento de quimioterapia contra el cncer pueden desarrollar neutropenia. Infeccin por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Este virus ataca a un tipo de glbulos blancos -los linfocitos- cuya funcin consiste en luchar contra las infecciones. La infeccin por el VIH puede provocar el SIDA (sndrome de inmunodeficiencia adquirida), una enfermedad que predispone al organismo a contraer infecciones y otras enfermedades. Los jvenes y los adultos pueden contraer esta enfermedad al mantener relaciones sexuales sin proteccin con una persona infectada o compartir agujas contaminadas, sea para inyectarse droga o para hacerse tatuajes. Leucemias. Son cnceres que afectan a las clulas encargadas de fabricar glbulos blancos. Estos cnceres engloban la leucemia mieloide aguda, la leucemia mieloide crnica, la leucemia linfoctica aguda y la leucemia linfoctica crnica. Los dos tipos de leucemia que ms afectan a los nios son la leucemia linfoctica aguda y la leucemia mieloide aguda. Los cientficos han hecho grandes avances en el tratamiento de varios tipos de leucemia infantil, sobre todo de ciertos tipos de anemia linfoctica aguda. (NEMOURS, 2011) 4. MATERIALES Y MTODOS: Materiales: Microscopio. Tubos con anticoagulante (EDTA o HEPARINA). Jeringas 10 ml. Frasco con torundas de algodn + alcohol. Guantes. Capilares. Bandejas de coloracin. Pisetas. Colorantes Wright (eosina y azul de metileno). Aceite de inmersin.

Procedimiento: 1. Se tom una muestra de sangre en el laboratorio, donada por un compaero/a voluntario (aproximadamente 10mL). 2. Los tubos de vacutainer previamente se encontraban con una solucin anticoagulante. 3. Con la utilizacin de un capilar se procede a extraer una alcuota de sangre y se coloca una gota de la muestra sobre un portaobjeto. 4. Se realiza un frotis utilizando otro portaobjeto hasta lograr homogeneidad en la placa y poder observar las diferentes estructuras celulares posteriormente en el microscopio ptico. 5. En una bandeja para coloracin se colocan las placas y se las pone en contacto con una solucin de Wright (eosina y azul de metileno) durante 3 minutos. 6. Posteriormente se coloca gotas de agua destilada sobre la placa durante 6 minutos. 7. Finalmente se deja secar la muestra a temperatua ambiente durante un par de minutos y se lo lleva al microscopio para la observacion. 5. RESULTADOS:

Figura 2. Estructuras celulares leucocitarias encontradas en sangre perifrica de pacientes sanos.

6. DISCUSIN: Se pudo observar que la tcnica empleada fue muy sencilla de realizar; sin embrago, no es la forma ms ptima y adecuada de manipular fluidos biolgicos como la sangre con total asepsia, la tcnica aplicada en laboratorios de bioanlisis es simplemente haciendo una laceracin en el dedo ndice del dedo del paciente con una lanceta para obtener una gota de sangre y ponerla en contacto directamente con el portaobjeto con la finalidad de no permitir que la muestra entre en contacto con otros fluidos o medios extraos y se pueda contaminar PEA, 2009, se considera a la sangre como un fluido corporal extremadamente infeccioso. Por lo tanto mientras menos se pueda manipular el fluido menor probabilidad de infeccin y riesgo para el laboratorista.

Segn KODAK et al., 2010, en un recuento leucocitario normal se determinan porcentajes aproximados de estructuras celulares como 3 % de neutrfilos en banda, 55 % de neutrfilos polimorfonucleares, 30 % de linfocitos, 6 % monocitos, 4 % de eosinfilos y 2 % de basfilos, pese a que no se realizo un conteo aproximado utilizando un mtodo de conteo celular se pudo observar que efectivamente neutrfilos y linfocitos se encuentran en mayor proporcin que el resto de estructuras, lo que sugiere un diagnstico normal en el/la paciente.

7. CONCLUSIONES: Se identific varias estructuras celulares leucocitarias de las cuales los neutrfilos son las que se encuentran en mayor proporcin que otras estructuras por lo tanto se puede deducir que el donante de la muestra est sano. Se determin que el protocolo empleado (tincin Wright) en esta prctica es muy til y fcil de realizar, sin embargo no es el ptimo ya que no garantiza total asepsia para la muestra ni para quien la manipula. Se identifico la presencia de eosinfilos y basfilos, estructuras celulares muy difciles de encontrar debido a su escasez en los fluidos corporales en pacientes sanos.

8. BIBLIOGRAFA: BORREGO, D. HORN, T. FRIAS, J. A. AGUADO, 2004, CELULAS Y ORGANOS DEL SISTEMA INMUNE, Pp. 7:24. En lnea en: (http://img.thebody.com/legacyAssets/46/20/lab_analisis.pdf) Universidad de Cordoba. THE NEMOURS FOUNDATION, 2011, LA SANGRE. En lnea en: (http://kidshealth.org/teen/en_espanol/cuerpo/blood_esp.html) PEA, N., 2009, INTERPRETACIN DE ANLISIS CLNICOS, Universidad Nacional de Tumbes, Per. En lnea en: (http://www.slideshare.net/NANPENO/interpretacion-analisis-clnicos)