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Sparvero LJ, Asafu-Adjei D, Kang R, Tang D, Amin N, Im J, et al.

RAGE (Receptor for Advanced Glycation Endproducts), RAGE Ligands, and their role in Cancer and Inflammation. J Transl Med. 2009 mar 17;7:17. RESUMEN: El receptor para productos finales de glicacin avanzada [Rage] es un miembro evolutivamente reciente de la super-familia inmunoglobulina, codificado en la regin de clase III del complejo mayor de histocompatibilidad. RAGE es altamente expresado solamente en el pulmn a niveles fcilmente medibles, pero aumenta rpidamente en los sitios de inflamacin, en gran medida de las clulas inflamatorias y epiteliales. Se encuentra, ya sea como una protena de membrana o soluble que es marcadamente regulado positivamente por el estrs en las clulas epiteliales, con lo que regula el metabolismo y mejorar su funcionalidad como barrera central. La activacin y la regulacin positiva de RAGE por sus ligandos conduce a una mayor supervivencia. Perpeta seales a travs de las vas de supervivencia inducida por RAGE en la fijacin de nutrientes limitados o los resultados de oxigenacin en la autofagia mayor, la disminucin de la apoptosis y necrosis (con deplecin de ATP). Esto resulta en la inflamacin crnica y en muchos casos es el escenario en el que surgen los cnceres epiteliales. RAGE y sus isoformas se sientan en un papel fundamental, la regulacin del metabolismo, la inflamacin y la supervivencia del epitelio en el contexto del estrs. Comprender la estructura molecular y la funcin de la misma y sus ligandos en el mbito de la inflamacin es de vital importancia para comprender el papel de este receptor en la biologa del tumor. Introduccin El receptor para productos finales de glicacin avanzada [RAGE] es un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas, codificada en la regin de clase III del complejo principal de histocompatibilidad. Este receptor multiligando tiene un dominio de tipo V, dos dominios de tipo C, un dominio transmembrana y una cola citoplasmtica. El dominio V tiene dos sitios de N-glicosilacin y es responsable de la mayora (pero no todos) la unin del ligando extracelular. La cola citoplsmica se cree que es esencial para la sealizacin intracelular, posiblemente de unin a difana-1 para mediar en la migracin celular. Originalmente productos finales de glicacin avanzada (AGE) se crea de hecho que son sus principales ligandos activadores, pero desde entonces muchos otros ligandos de RAGE, incluyendo daos asociados a los patrones moleculares (DAMP) han sido identificados. RAGE por tanto, se considera un receptor de reconocimiento de patrones (PRR), que tiene una amplia variedad de ligandos. RAGE se expresa de dos formas tanto de longitud completa, formas unidas a la membrana-(FL-RAGE o mRAGE, no debe confundirse con RAGE ratn) y diversas formas solubles que carecen del dominio transmembrana. RAGE soluble se produce tanto por escisin proteoltica de FL-RAGE y empalme alternativo del ARNm. Las isoformas solubles incluyen los dominios extracelulares, pero carecen de los dominios transmembrana y citoplsmico. RAGE soluble derivada especficamente de la escisin proteoltica es sRAGE, aunque esta terminologa no es consistente en la literatura - sRAGE veces se refiere a RAGE soluble en general. RAGE se expresa en niveles bajos en una amplia gama de clulas adultas diferenciadas de una manera regulada, pero en neumocitos de tipo I de un pulmn maduro se expresa en niveles sustancialmente ms altos que en otros tipos de clulas en reposo. Es altamente expresado en cantidades fcilmente detectables en las clulas embrionarias. RAGE es tambin altamente expresado y se asocia con la inflamacin relacionados con muchos estados patolgicos como la enfermedad vascular, cncer, la neurodegeneracin y la diabetes (Figura 1). Las excepciones son los tumores de pulmn y fibrosis pulmonar idioptica, en la que la expresin de RAGE disminuye de un nivel ms alto en el tejido sano. RAGE y RAGE soluble El ARNm de RAGE se somete a corte y empalme alternativo, tanto como con otras protenas localizadas en el locus MHC-III en el cromosoma 6. Una forma soluble con una novela C-terminal se detecta en el nivel de protena, llamada "Rage secretora endgena" (esRAGE o RAGE_v1). Esta forma es detectada por inmunohistoqumica en una amplia variedad de tejidos humanos que no se manchan de cantidades apreciables de FL-RAGE. Ms de 20 diferentes variantes de empalme para la RAGE humana se han identificado hasta la fecha. Empalme RAGE humano es muy dependiente de tejido, con ARNm FL-RAGE ms frecuente en los pulmones y la aorta clulas musculares lisas mientras ARNm esRAGE es frecuente en las clulas endoteliales. Muchas de las secuencias de empalme son objetivos potenciales de la nonsense-mediated decay (NMD) y la va por lo tanto es probable que se degrade antes de la expresin de protenas. Varios ms carecen de secuencia de seal en exon1 y por lo tanto la protena expresada podra estar sujeto a la degradacin prematura. Las variantes slo humanos que se han detectado a nivel de protenas in vivo son fl-RAGE, sRAGE y esRAGE. Humano FL-RAGE tambin est sujeto a la escisin proteoltica por la membrana metaloproteinasa ADAM10, liberando el dominio extracelular como una isoforma soluble. Los anticuerpos elevados a la nueva C-terminal de esRAGE no reconocen la isoforma resultante de la escisin proteoltica. En el suero de la especie predominante es la escisin proteoltica y no isoforma mRNA de empalme. El aumento de la divisin proteoltica aumenta los niveles de RAGE soluble, mientras que la inhibicin se incrementar niveles RAGE fl-.Este proceso de escisin es modulada por los niveles de Ca + +, y despus de la escisin proteoltica de la restante unido a la membrana fragmento C-terminal est sujeto a una mayor degradacin por -secretasa. La escisin del fragmento C-terminal por -secretasa dar a conocer un dominio RAGE intercelular (RICD) en el espacio citoslico / nuclear. Aunque RICD an no ha sido detectado y es presumiblemente degradado rpidamente, la sobreexpresin de una forma recombinante de RICD aumentar la apoptosis medida por TUNEL ensayo, indicando procesamiento RAGE tiene otra funcin intercelular. Murino fl-RAGE ARNm tambin sufre splicing alternativo, y algunos de los productos de empalme son orthologs de esRAGE. Hasta la fecha, ms de 17 empalmes de ARNm diferentes se han detectado. Al igual que con las variantes de empalme humanos, las variantes de ratn de empalme se expresan de manera tejido-dependiente y muchos son los objetivos de NMD. Varios patrones de empalme comunes existen al comparar RAGE humana y de ratn, aunque las variantes que daran lugar a una isoforma soluble son mucho menos frecuentes en los ratones. Recombinante RAGE ha sido clonado en una variedad de vectores de expresin, y RAGE soluble nativo ha sido purificado a partir de bovino murino, y pulmn humano. Una isoforma soluble recombinante lleva en un fenotipo dominante negativo y bloques de sealizacin. RAGE soluble puede actuar como un "receptor seuelo" extracelular antagonizar fl RAGE y otros receptores de DAMPs vinculantes y otros ligandos y el reclutamiento de leucocitos en la inhibicin de una variedad de enfermedades inflamatorias agudas y crnicas. Tanto esRAGE y sRAGE actan como receptores seuelo para la HMGB1 ligando. Sin embargo RAGE soluble tiene otras funciones que slo el bloqueo de la funcin RAGE, y tiene propiedades pro-inflamatorias a travs de la interaccin con los Mac-1. As, aunque RAGE soluble tiene propiedades de proteccin en el mbito de la inflamacin crnica, que puede ser mejor descrito como un biomarcador de la inflamacin crnica. La informacin sobre efectos a largo plazo del tratamiento con RAGE soluble exgeno an no est disponible, y an no se ha demostrado que los niveles plasmticos de RAGE soluble son suficientes para actuar con eficacia como un receptor seuelo in vivo. Las dos propiedades diferentes de RAGE soluble (receptor seuelo y pro-inflamatorios) y las diferentes vas asociadas con su produccin podra explicar por qu existen correlaciones positivas y negativas entre los niveles en suero humano y la enfermedad. RAGE soluble total en suero es significativamente menor en los hombres no diabticos con enfermedad coronaria que los que no. Segn la evaluacin de la hipersensibilidad retardada y la colitis inflamatoria, RAGE soluble suprime la inflamacin en IL-10 ratones deficientes, la reduccin de la activacin de NFkB, y la reduccin de expresin de citoquinas inflamatorias. Los ratones knock-out RAGE tienen una capacidad limitada para mantener la inflamacin y el deterioro de la elaboracin y crecimiento de tumores. Por lo tanto, RAGE impulsa y promueve las respuestas inflamatorias en el crecimiento del tumor en mltiples etapas y tiene un papel central en la inflamacin crnica y el cncer. Los niveles ms bajos de los niveles de RAGE solubles se encuentran en la esclerosis lateral amiotrfica (ELA), y niveles ms bajos esRAGE predecir la mortalidad cardiovascular en pacientes con enfermedad renal en etapa terminal [35,36]. En los pacientes con diabetes tipo 2 ms altos niveles de RAGE solubles se correlacionan positivamente con otros marcadores inflamatorios como la MCP-1, TNF-, AGE, y sVCAM-1. RAGE soluble total, pero no se correlaciona con albuminuria esRAGE en la diabetes tipo 2.Curiosamente, a pesar de los cambios en los niveles sricos de humanos RAGE soluble se correlacionan muy bien con la progresin de patologas relacionadas con la inflamacin, en el ratn RAGE soluble en el suero es indetectable. Esto contrasta con la importancia de empalme y corte proteoltico forma RAGE soluble en ratones y seres humanos. Una advertencia es que si bien los ensayos de ELISA basados de RAGE soluble en el suero de alta precisin de espectculo y la reproducibilidad, los niveles muestran una variacin alta (500-3500 ng / LP <0,05) entre

los donantes sanos. Los niveles solubles RAGE se correlacionan con los niveles de edad, incluso en sujetos no diabticos. As, aunque una medicin de RAGE soluble puede no ser suficiente para predecir un estado patolgico, cambios en los niveles en el tiempo podran ser predictivos del desarrollo de una enfermedad. SEALIZACIN RAGE PERPETA LA RESPUESTA INMUNE E INFLAMATORIA Una reciente revisin cubre ampliamente el papel de la sealizacin de RAGE en la diabetes y la respuesta inmune [18]. La activacin de mltiples molculas de sealizacin intracelular, incluyendo el factor de transcripcin NF-kB, MAP quinasas, y molculas de adhesin se observ despus de la activacin de RAGE. La contratacin de estas molculas y la activacin de vas de sealizacin varan con ligandos RAGE individuales. Por ejemplo, HMGB1,S100B, Mac-1, y S100A6 activar RAGE travs de distintas vas de transduccin de seales [42,43]. Ann Marie Schmidt postul un modelo de "dos golpes" para la perturbacin vascular mediada por RAGE y sus ligandos [9].Este modelo de "dos golpes" sustenta la hipotesis de que el primer "hit" es el aumento de expresin de RAGE y sus ligandos expresados dentro de la vasculatura. El segundo "golpe" es la presencia de diversas formas de estrs (por ejemplo, el estrs isqumico, los estmulos inmunes / inflamatorias, estrs fsico o lipoprotenas modificadas), lo que lleva a la respuesta celular exagerada generando el desarrollo de lesiones vasculares. Lo ms importante es la participacin de RAGE perpeta la activacin de NF-kB por sntesis de novo de NF-kBp65, lo que produce un grupo cada vez mayor de este factor de transcripcin pro-inflamatorias [44]. RAGE se asocia con las respuestas de acogida amplificados en varias condiciones patolgicas, como la diabetes, la inflamacin crnica, tumores y enfermedades neurodegenerativas [18]. Noshara de manera similar postulan que durante los perodos de interrupcin de la barrera epitelial que tanto la seal 1, un estmulo del factor de crecimiento, y la seal 2, las diversas formas de estrs, en relacin con ligandos RAGE y RAGE ayudan a mediar este efecto. LIGANDOS DE RAGE Los ligandos de RAGE se dividen en varias familias distintas. Se incluyen las protenas de alta movilidad de la familia del grupo prototpico incluyendo elHMGB1/amphoterin, los miembros de la familia de protenas S100/calgranulin, protenas de la matriz como el colgeno I y IV, el pptido Ap, y algunos productos finales de glicacin avanzados tales como carboximetil (LMC-AGE) [4,6,16,45]. No todos los miembros de estas familias han sido identificados como ligandos de RAGE, muchos ligandos de RAGE tienen una variedad de efectos independientes de RAGE [46]. AGE son molculas frecuentes en estados patolgicos marcados por el estrs oxidativo, la generacin de especies metoxilo, y el aumento de azcar en la sangre, como se encuentra en la diabetes mellitus tipo 2 [6,27]. La familia consta de polipptidos S100/calgranulin estrechamente relacionadas de unin a calcio que actan como citoquinas proinflamatorias extracelulares. La acumulacin de ligando y el compromiso a su vez regula al alza la expresin de RAGE [2]. No se sabe por qu algunos ligandos (como HMGB1, algunos de S100, y CML AGE) producen una fuerte sealizacin pro-inflamatoria a travs de RAGE, mientras que las molculas similares (por ejemplo, pentosidina-AGE y pirralina EDAD) parecen tener mucho menos o nada sealizacin. La hiptesis ms aceptada para conciliar esas diferencias implica oligomerizacin del ligando. De los ligandos RAGE identificados, los que oligomerize activar RAGE ms fuertemente [3]. Los oligmeros de ligandos podra reclutar a varios receptores RAGE, as como los receptores Toll-like[TLR] en la superficie celular o en las vesculas intracelulares y de inducir a su agrupacin en la superficie celular. Por ejemplo, dmeros y multmeros S100 de orden superior se unen varios receptores como TLR4, y la agrupacin de RAGE podra promover una respuesta igualmente fuerte [47]. Estudios recientes muestran que los AGE y ciertos multmeros S100 se cmulo RAGE de esta manera [11,48,49]. Sin embargo, esto no explica por completo por qu algunos ligandos se activar RAGE fuertemente mientras que las de estructura similar no parece que lo active en absoluto [50]. RESUMEN DE HMGB1 Y LA FAMILIA DE PROTENAS HMG HMG (grupo de alta movilidad), las protenas son muy bsicos, nucleares no histonas protenas cromosmicas de los cuales HMGB1 es el nico miembro que se ha demostrado para activar RAGE. Las protenas HMG no deben confundirse con el compuesto relacionado en la va mevalonate "inhibidores de la HMG-CoA" (3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A) y "inhibidores de la HMG-CoA reductasa" (estatinas) [51]. Las protenas HMG se identific por primera vez en el timo de ternera en 1973 y llamado as por su alta movilidad en geles de separacin de protenas [52]. Normalmente tienen un alto porcentaje de aminocidos cargados y son menos de 30 kDa en masa. Protenas HMG se expresan en casi todos los tipos de clulas, relativamente abundantes en el tejido embrionario, y se unen al ADN de un contenido que dependen de la secuencia, pero independiente de la moda [53]. Son importantes en la remodelacin de la cromatina y tiene muchas otras funciones. Datos de ratn knockout muestra que la prdida de cualquiera de las protenas HMG resultar en detectables cambios fenotpicos deletreos. De ellos, la HMGB1 (- / -) ratones mueren de hipoglucemia dentro de las 24 horas del nacimiento [54,55]. Extendido retrocruzamiento del alelo nocaut en varias cepas murinas han puesto de manifiesto un fenotipo an ms profunda con los ratones que mueren por la E15 de desarrollo [Bianchi Marco, comunicacin personal]. La homologa entre el ratn y HMGB1 humano es extraordinario con slo dos diferencias de aminocidos observados. Homologa profunda similar existe en las especies de vertebrados con el 85% de homologa con el pez cebra. Hay tres sub-clasificaciones de las protenas: inhibidores de la HMG HMGA, HMGB y HMGN (tabla (Tabla 1) .1). Hay tambin un conjunto similar conocido como protenas motivo de la HMG-. Las protenas motivo de la HMG-difieren en que son de tipo celular especfico, y el ADN se unen de una manera especfica de la secuencia. Protenas HMGA (anteriormente HMGI / Y) se distinguen de otras protenas HMG por tener tres AT-gancho (secuencias que se unen a secuencias de ADN ricas en AT) [56,57]. Tambin tienen un tanto cido C-terminal de la cola, aunque la HMGA1c recientemente descubierto no tiene cola cida y slo dos AT-ganchos. Protenas HMGN (antes HMG14 y HMG17) tienen dominios de unin a nucleosomal. Protenas HMGB (anteriormente HMG1 travs HMG4) se distinguen por tener dos cajas de unin al ADN que tienen una alta afinidad por el ADN CpG, ncleos apoptticos, y las estructuras altamente dobladas como Holliday cuatro direcciones uniones y platinated / platino-ADN modificado. Las protenas HMGB tienen una larga cola C-terminal cida excepto HMGB4, que recientemente ha sido detectado en el nivel de protena en el testculo, donde acta como un represor transcripcional [58]. La cola HMGB cida consta de al menos 20 residuos consecutivos de cido asprtico y glutmico. Una cola C-terminal de cido de esta longitud y la composicin se ve raramente en la naturaleza, aunque la autofagia y la apoptosis algunos otros relacionados con las protenas, tales como parathymosin tienen una larga franja interna de pptidos cidos [59-61]. De las protenas HMG, HMGB1 tiene un papel adicional citoslica y extracelular como una protena promotora de la autofagia y como una citoquina lder, respectivamente [62]. Los macrfagos, clulas NK y DCs maduros secretan activamente HMGB1, y las clulas necrticas pasivamente secretan. HMGB1 tambin se ha detectado en el citosol, en funcin del tipo de clula, donde tiene un papel positivo importante en la regulacin de la autofagia[63]. Aunque HMGA1 tiene un papel importante en la exportacin de HIPK2(Homeodominio que interacta con la protena quinasa 2, un activador de p53proapopttico) desde el ncleo hasta el citoplasma [64], las protenas HMG distintos HMGB1 son muy rara vez se detecta fuera del ncleo. Esto probablemente se explica por qu HMGB1 es el nico miembro de la familia que se activa RAGE [65]. Desde HMGB1 transloca entre el ncleo y el citosol, existe una posibilidad de que podra unirse a RAGE soluble en el citosol y por lo tanto jugar un papel en la regulacin de su actividad. BIOQUMICA DE HMGB1 HMGB1 es una protena altamente conservada que consta de 215 aminocidos. Se expresa en casi todas las clulas de mamfero. HMGB1 Humanos comparte una similitud del 80% con HMGB2 y HMGB3 [55]. Tiene dos lisina ricos en cajas de unin a ADN (A-y B-) separados por un enlazador corto. Las cajas estn separados de la cola C-terminal de cido por otra secuencia de engarce que termina en cuatro lisinas consecutivos. Una isoforma cree que resulta de la escisin de la cola cida se ha detectado in vivo [66]. HMGB1 tiene tres cistenas, de las cuales las dos primeras cistenas vecinales (Cys 23 y 45, basado en Met1 como el Met inicial en la protena inmadura) pueden formar un enlace disulfuro interno dentro de la unidad de embalaje. La unidad de embalaje y el estado de oxidacin de estos dos cistenas jugar un papel importante en la capacidad de HMGB1 de enlazar a los sustratos. La oxidacin de estos dos cistenas tambin reducir la afinidad de HMGB1 para CpG ADN [67,68]. La adicin de protenas recombinantes de la caja A antagoniza la capacidad de HMGB1 para enlazar a otros sustratos [67,69]. Queda por determinar si la accin de la caja A es el resultado de la inhibicin competitiva de unin a otros sustratos o interferir con la capacidad de la B-caja de enlazar a los sustratos. Las dos cajas que actan en concierto reconocern ADN doblados [70]. La tercera cistena (Cys106, en la B-box) a menudo se mantiene reducida y es importante para la translocacin nuclear [68]. La regin en torno a este cistena es el rea mnima con la actividad de citoquinas [65]. HMGB1

sufre importantes modificaciones post-traduccionales, incluyendo acetilacin de las lisinas algunos, que afecta a su capacidad de transporte entre el ncleo y el citosol [71,72]. Accesibilidad modificacin de unin al ADN y post-translacional puede ser modulado por la interaccin de la cola cida con la base B-caja [73-75]. HMGB1 seales a travs de TLR2, TLR4 y TLR9, adems de rabia [76,77]. Tambin se une a la trombomodulina y syndecan a travs de interacciones con el B-Box [78]. EVOLUCIN DE LA HMGB1 Protenas HMG se puede encontrar en los ms simples organismos multicelulares [79]. Las dos cajas de ADN como resultado de la fusin de dos cajas individuales de uno de los genes [80]. La estructura de dos cajas hace que sea vidamente especfico particularmente para ADN doblados, y est altamente conservada entre muchos organismos [81,82]. Esta similitud hace que la generacin de anticuerpos especficos de HMGB1 un reto. Anticuerpos de reactividad cruzada podra resultar de la gran similitud de HMGB1 en las especies individuales, a otras protenas HMGB1 HMGB, e incluso a las histonas H1 HMGB1 (Sparvero, Lotze, y Amoscato, datos no publicados). La posibilidad de identificacin errnea de HMGB1 se debe descartar con cuidado en un estudio. Una manera de distinguir las protenas HMGB una de la otra es por la longitud de la cola cida (30, 22, y 20 restos cidos consecutivospara HMGB1, 2, y 3, respectivamente, mientras que HMGB4 tiene ninguno).Las colas de cido estn precedidas por un sitio de escisin trptica proximal, y todos ellos tienen composiciones ligeramente diferentes. Esto hace que la espectrometra de masas en conjuncin con la digestin trptica un medio atractivo de identificacin. NORMAL / SANA NIVELES DE HMGB1 Expresin relativa de HMGB1 vara ampliamente dependiendo de la condiciny el tipo de tejido. Tejidos no diferenciados y se inflama tienden a tener una mayor expresin HMGB1 que sus contrapartes. Bazo, timo y los testculostienen cantidades relativamente grandes de HMGB1 cuando se compara con el hgado. Localizacin subcelular vara, con hgado HMGB1 tiende a encontrarse en el citosol en lugar de el ncleo [55,83]. HMGB1 est presenteen algunas clulas a nivel slo superado por la actina y se estima que tanto como 1 106 molculas por clula, o una dcima parte tan abundantes como las histonas totales. Sin embargo, este nmero debe considerarse con cierta cautela, ya que incluye las lneas celulares transformadas y no define los niveles de HMGB1 abundancia en vivo en la mayora de los linajes celulares [55]. Los niveles sricos de HMGB1 (segn lo determinado por Western Blot) se han reportado con amplios rangos: 7,0 5,9 ng / ml en los pacientes sanos, el 39,8 10,5 ng / mL en el hgado cirrtico y 84,2 50,4 ng / mL en el carcinoma hepatocelular [84 ]. Para la comparacin, humanos niveles de protena total en suero varan desde aproximadamente 4575 mg / ml, y el total de los niveles de protena citoslica son aproximadamente 300 mg / ml [85,86]. Esto pone HMGB1 suero en la parte baja por milln rango en masa, por lo quela deteccin y separacin de las protenas sricas muy abundantes reto. HMGB1 Y RAGE EN EL CNCER Y LA INFLAMACIN HMGB1, junto con RAGE, es aumentada en muchos tipos de tumores (tabla(Tabla 2) .2). HMGB1 es pasiva libera de las clulas necrticas, pero no de lamayora de las clulas apoptticas. La razn de esto es desconocida, pero hasido la hiptesis de que es el resultado de cualquiera de los cambios redox oen la acetilacin de las histonas, en las clulas apoptticas [87,88]. HMGB1 (- / -) de las clulas necrticas se ven seriamente comprometidas en su capacidad para inducir inflamacin. HMGB1 de sealizacin, en parte, a travs de RAGE, se asocia con ERK1, ERK2, jun-NH2-quinasa (JNK), y la sealizacin de p38. Esto da como resultado la expresin de NFkB, molculas de adhesin (ICAM y VCAM, llevando a reclutamiento de macrfagos yneutrfilos), y la produccin de varias citocinas (TNF, IL-1, IL-6, IL-8, IL-12 de MCP-1, El PAI-1, y tPA) [89]. Un concepto emergente es que la molcula por s mismo tiene poca actividad inflamatoria, sino que acta junto con otras molculas tales como IL-1, ligandos TLR2, ligandos LPS/TLR4 y ADN. HMGB1sealizacin a travs de TLR2 y TLR4 tambin se traduce en la expresin deNFkB. Esto promueve la inflamacin a travs de un circuito de retroalimentacin positivo, ya que aumenta la expresin de NFkB varios receptores, incluyendo RAGE y TLR2. La estimulacin con LPS de los macrfagos dar lugar a la pronta liberacin de TNF (dentro de varias horas) y ms tarde la liberacin de HMGB1 (despus de varias horas y dentro de unos das). Orientacin HMGB1 con anticuerpos para prevenir la mortalidad de endotoxinas por lo tanto, se convierte en una posibilidad teraputica atractiva, ya que contra la HMGB1 es eficaz en ratones, incluso cuando se les da horas despus de la estimulacin con LPS [90]. HMGB1 estimulacin de las clulasendoteliales y los macrfagos promueve la secrecin de TNF, que tambin, a su vez aumenta la secrecin de HMGB1 [91]. Otro medio para inducir la secrecin de HMGB1 es con el estrs oxidativo [92]. La forma activasecretada de HMGB1 se cree que es al menos parcialmente acetilado,aunque tanto activa como pasiva liberado HMGB1 promover la inflamacin [71]. Una observacin temprana que se remonta a 1973 es que las protenas HMG agregados de protenas menos bsicas [52]. HMGB1 se une LPS y una variedad de citocinas como la IL1. Esto se traduce en un aumento de interfern gamma (INF) produccin por PBMC (clulas mononucleares de sangre perifrica) que es mucho mayor que con slo HMGB1 o citoquinas solas. HMGB1 vinculante a RAGE se ha mejorado con el ADN CpG. HMGB1capacidad para activar RAGE puede resultar ms de su capacidad para formar un complejo con otras molculas pro-inflamatorias, con esta RAGE complejo activador posteriormente [93]. Por tanto, cualquier prueba de la uninBde RAGE nicamente por HMGB1 tendr que dar cuenta de esto, ya que la contaminacin con incluso pequeas cantidades de LPS o CpG de ADN aumentar vinculante. La trombomodulina compite con RAGE HMGB1 para la in vitro y el complejo resultante no parece enlazar a RAGE, lo que sugiere un posible enfoque para atenuar RAGE HMGB1 de sealizacin [78,94]. De hecho la unin a la trombomodulina tambin puede conducir a la escisin proteoltica de HMGB1 por la trombina, que resulta en un producto inflamatorio menos activo [94]. Un pptido constituido por los restos 150-183 de slo HMGB1 (el extremo de la B-caja y su engarce a la cola cida) exhibe RAGE unin y compite con xito con HMGB1 unin in vitro [95]. Esta secuencia similar a los primeros 40aminocidos (la primera parte EF-hlice-lazo-hlice secuencia) de varias protenas S100 NIC. Un mutante de HMGB1 en el que los aminocidos 102-105 (FFLF, B-cuadro central) se sustituyen por dos glycines induce la liberacin de TNF significativamente menor en relacin con HMGB1 de larga duracin en los cultivos de monocitos [96]. Este mutante es tambin capaz de inhibir competitivamente HMGB1 simulacin de una manera dependiente de la dosis cuando ambos son aadidos. ES HMGB1 EL NICO RAGE ACTIVADOR DE LA FAMILIA DE INHIBIDORES DE LA HMG? Por todas las razones mencionadas anteriormente, HMGB1 es el nico conocido inhibidor de la HMG-box ligando de RAGE. Ninguna de las protenasnucleares HMG otros han demostrado que activar RAGE. Las protenaspueden HMGB ADN CpG compleja, y estructuras muy dobladas como Hollidayde cuatro vas y los cruces platinated / platino-ADN modificado, mientras queotros miembros no pueden hacerlo. A diferencia de otras protenas HMGB,HMGB1 se expresa abundantemente en casi todos los tejidos, y por lo tanto es fcilmente disponible para el desplazamiento fuera del ncleo al citoplasmapara la secrecin activa y pasiva. Aunque, como una nota de advertencia, yHMGB2 HMGB3 tambin se upregulated en algunos tipos de cncer, y podra desempear un papel como activadores de RAGE, adems de HMGB1. La similitud de estas protenas para HMGB1 sugiere en diversos ensayos que se han identificado errneamente y se incluyen en los niveles reportados HMGB1.El inhibidor de la HMG y los miembros de la familia S100 se componen cada uno de las protenas similares que tienen diferentes y no aparente a menudo la activacin de RAGE-propiedades. S100 PROTENAS COMO LIGANDOS DE RAGE Y SU PAPEL EN LA INFLAMACIN Una revisin reciente sobre las protenas S100 se ha publicado, y proporciona detalles ms amplios que dan aqu [97]. Nos centraremos en los elementos crticos necesarios para considerar su papel en el cncer y la inflamacin. Protenas S100 son una familia de ms de 20 protenas expresadas en los vertebrados exclusivamente y se caracteriza por dos EFmano motivos de unin de calcio conectados por una regin bisagra central [98]. Ms de cuarenta aos, los primeros miembros fueron purificados a partir de cerebro bovino y recibi el nombre de "S-100" por su solubilidad en sulfato de amonio 100% [99]. Muchos de los primeros identificados protenas S100 se encontr que se unen RAGE, RAGE y por lo tanto vinculante fue la teora de que una propiedad comn de todas las protenas S100. Sin embargo, varios de los miembros de ms reciente identificacin de la familia no se unen RAGE. Los genes se encuentran en un clster en el cromosoma 1q21 humanos se designan como el s100a sub-familia y se numeran correlativamente a partir de S100A1. Los genes S100 en otros lugares se dan una sola letra, como S100B [100]. En general, el ratn y S100 ADNc humano es 79.6-95% homloga aunque el genoma del ratn carece del gen de la S100A12/EN-RAGE [101].La mayora de las protenas S100 existir como no-covalentes homodmeros dentro de la clula [98]. Algunos forman heterodmeros con otras protenas S100 por ejemplo, el heterodmero S100A8/S100A9 es en realidad la forma preferida encuentra dentro de la clula. Los dos EF-mano Ca + + bucles de unin estn cada flanqueado por alfa-hlices. El bucle N-terminal es no cannica, y tiene una afinidad mucho ms baja para el calcio que el bucle C-terminal. Los miembros de esta familia difieren entre s principalmente en la longitud y la secuencia de sus regiones bisagra y de la regin extensin C-terminal despus de los bucles de unin. Ca + + unin induce un gran cambio conformacional que expone un dominio de unin hidrofbica (excepto para S100A10 que est bloqueado en esta conformacin) [47]. Este cambio en la conformacin permite que un dmero S100 de obligar a dos protenas de la meta, y, esencialmente, formar un puente entre un heterotetrmero [102]. Las protenas S100 han sido llamados "sensores de calcio" o "regulados en calcio interruptores" como resultado. Algunas protenas S100 tambin se unen Zn + + o Cu + + con una alta afinidad, y esto podra afectar su capacidad para unirse a Ca + + [101]. Protenas S100 han salvajemente diferentes patrones de expresin (tabla (Tabla 3) .3). Ellos son upregulated en muchos tipos de cncer, a pesar de S100A2, S100A9, y S100A11 han

informado de que los represores de tumores [50]. Protenas S100 y calgranulins se expresan en diversos tipos de clulas, incluyendo neutrfilos, macrfagos, linfocitos y clulas dendrticas [2].Fagocitos especfica, sin lderes protenas S100 son secretados activamente por medio de una va alternativa, sin pasar por el aparato de Golgi [103].Varias protenas S100 enlazar el dominio de tetramerizacin de p53, y algunos tambin se unen al dominio regulador negativo de p53. La unin del dominio de tetramerizacin de p53 (por lo tanto el control de su estado de oligomerizacin) podra ser una propiedad comn a todas las protenas S100, pero esto no se ha comunicado [104]. Sus papeles en la regulacin del contrapeso entre la autofagia y la apoptosis no han sido reportados.

Individuales protenas S100 son prevalentes en una variedad de enfermedades inflamatorias, especficamente S100A8/A9 (que posiblemente seales a travs de RAGE adems de otros mecanismos) y S100A12 (quedefinitivamente seales a travs de RAGE). Estas enfermedades incluyen la artritis reumatoide, artritis idioptica juvenil, la enfermedad autoinmune sistmica y enfermedad intestinal inflamatoria crnica. El bloqueo de la interaccin S100-RAGE con RAGE soluble en ratones redujo la inflamacin del colon de la IL-10-ratones deficientes, inhibe el desarrollo de la artritis, y suprimi la infiltracin de clulas inflamatorias [43,33,32,105]. Algunas protenas S100 tienen dependientes de la concentracin papeles en la cicatrizacin de heridas, crecimiento de las neuritas, y la remodelacin tisular. Hay varias cuestiones importantes que deben abordarse al examinar propuestas S100-RAGE interacciones: Esta interaccin se producen in vivo, adems de in vitro? Podran los efectos observados se explica por unmecanismo independiente de RAGE (o incluso adems de un mecanismo noRAGE)? Es esto depende de la interaccin en el estado oligomrica de laprotena S-100? (S100 estado oligomrica es en s mismo depende de la concentracin de Ca + + y otros iones metlicos, as como el entorno redox).Un rea que no ha recibido mucha atencin es la posibilidad de unin a una S100 RAGE soluble en el citosol o ncleo (a diferencia de RAGE soluble extracelular). Protenas S100 no son ligandos universales RAGE Varios de los miembros de la familia S100 no son ligandos de RAGE. Aunque no existe una forma directa para identificar la capacidad de RAGE vinculante basado en las secuencias de aminocidos de las protenas S-100, se pueden extraer conclusiones comunes sobre la base de las propiedades bioqumicas de las conocidas S100 no ligandos de RAGE: La primera es que los ligandos que no son a menudo muestran la fuerte unin a Zn + +. La segunda es que el Ca + + de unin se ve obstaculizada o diferentes en algunos aspectos de los ligandos de RAGE S100. La tercera es que su estado de oligomerizacin se altera o inexistente. Que no son ligandos de RAGE: S100A2, A3, A5, A10, A14, A16, G, Z S100A2 es un homodmero que pueden formar tetrmeros sobre Zn unin, yeste enlace Zn inhibe su capacidad para unirse Ca. A pesar de dos ligandos(RAGE S100B y S100A12) tambin se unen Zn muy bien, el efecto en ellos es aumentar su afinidad por Ca [106.107]. La S100A3 relacionada une Ca Znmal, pero muy fuerte [101]. S100A5 es tambin un aglutinante de Zn, pero se une con una afinidad de Ca 20-100 veces mayor que otras protenas S100.Tambin se puede unir Cu, lo que dificultar su capacidad para unirse Ca[108]. S100A10 (o p11) es el nico miembro de la familia S100 que es Ca insensible. Tiene alteraciones de aminocidos en los dos dominios de unin de Ca que bloquean la estructura en un estado activo, independientemente de la concentracin de calcio [109]. Se formar un heterotetrmero con AnexinaA2, y que ha sido llamada "cadena ligera Anexina A2" [110]. S100A14 tieneslo 2 de los 6 residuos conservados en el C-terminal EF-mano, y por lo tanto su capacidad para unirse Ca es probable que un impedimento a [111].S100A16 une Ca mal, con slo un tomo por monmero de protena. Sin embargo tras la adicin de Zn, el aumento de los agregados formar [112].S100G tambin era conocido como vitamina D dependiente de calcio-protena de unin, CABP intestinal, Calbindin-3, y Calbindin-D9k [113]. Es principalmente un monmero en solucin y en Ca unin que no exhibe los cambios conformacionales que caracterizan a muchas otras protenas S100[114]. S100Z es una protena de cido 99-amino que se une S100P in vitro.Existe como un homodmero que se une Ca, pero su estado de agregacin no se ve afectada por Ca Posibles ligandos de RAGE: S100A1, S100A8 / 9 S100A1 existe normalmente como un homodmero, y su ARNm se observa ms prominente en el corazn, con la disminucin de los niveles en rin, hgado, piel, cerebro, pulmn, estmago, testculos, msculo, intestino delgado, el timo y el bazo. S100A1 est presente en el citoplasma y ncleo - el corazn de rata de las clulas musculares H9c2 lnea es sobre todo poder nuclear, en su mayora adultos esqueleto citoplsmico. S100A1 se liberan en la sangre durante los periodos de isquemia y S100A1 extracelular inhibe la apoptosis a travs de ERK1 / 2 activacin [101]. S100A1 se une tanto a la tetramerizacin y dominios reguladores negativos de p53 [104]. S100A1 interacta con S100A4 y que antagonizan entre s in vitro e in vivo [116]. Todava hay un debate, si se une a S100A1 RAGE, aunque el trabajo reciente con imgenes de PET de Flor-18 etiquetados S100A1 se administr a ratones indica que co-localiza con RAGE [117]. Adems de homodmeros formadoras, S100A8 y S100A9 pueden formar heterodmeros y heterotetrmeros entre s en una de calcio y de oxidacin-dependiente de la moda [101]. S100A8 y S100A9 no han sido directamente demostrado para activar RAGE, pero no hay evidencia sustancial funcional que muchos de sus efectos son bloqueados por la supresin de RAGE o el silenciamiento. S100A8 / 9 ejerce un efecto pro-apopttico en altas concentraciones, sino que promueve el crecimiento celular a bajas concentraciones [118]. Los efectos de la N-carboximetil-lisina modificada S100A8 / 9 se mejoran en los ratones knockout RAGE o mediante la administracin de RAGE soluble en ratones de tipo salvaje [119]. S100A8 / 9 se une al heparn sulfato, proteoglicanos, y carboxilado N-glicanos [103]. Un pequeo (<2%) sub-poblacin de RAGE expresa en las clulas tumorales de colon se han modificado para carboxilado N-glicanos, y es muy posible que esta subpoblacin es activado por S100A8 / 9 [120]. S100A8 y S100A9 protenas son secretadas de una manera dependiente de la energa por los fagocitos durante los procesos inflamatorios. Estimulan los patrones especficos de la inflamacin en las clulas endoteliales, la interaccin con los componentes del citoesqueleto, como filamentos de queratina, los microtbulos, el tipo de filamentos intermedios, III y F-actina [121]. En presencia de calcio, S100A8 y S100A9 tetrmeros de forma y se unen directamente a los microtbulos. S100A8/S100A9 tambin modula la tubulina dependiente de la reorganizacin del citoesqueleto durante la migracin de los fagocitos. S100A8 y S100A9 interactuar con ambos filamentos de tipo III intermedios y filamentos de queratina para el propsito de la reparacin de heridas. Extracelular, las pantallas S100A8/S100A9 complejas actividades cystostatic y antimicrobianas e inhibe la activacin de macrfagos y la sntesis de inmunoglobulinas por los linfocitos [122]. El reducido, pero no es el oxidado S100A8 homodmero es fuertemente quimiotaxis de los leucocitos [121].Regulacin al alza de S100A8 y S100A9 en el tejido pulmonar premetastatic proporcionar un nicho de mercado para la migracin de las clulas tumorales [123]. Esta regulacin positiva puede ser inducida por la secrecin de VEGF-A, TGF y TNF a partir de tumores distantes. Regulacin al alza en el pulmn VE-cadherina + clulas endoteliales promueve el reclutamiento y la infiltracin de clulas mieloides Mac1 +, y por lo tanto ofrece un nicho para la migracin de las clulas tumorales. El bloqueo de S100A8 y S100A9 expresin en la etapa premetastatic podra evitar este nicho permisiva de ser formado y as inhibir la migracin de las clulas tumorales. Los ligandos de RAGE: S100A4, A6, A7/A7A/A15, A11, A12, A13, B, P S100A4 S100A4 se une a RAGE, y ha sido implicado en la regulacin positiva de la MMP-13 (MMP 13) en la artrosis, lo que conduce a la remodelacin de tejidos [124]. S100A4 se expresa en los astrocitos, clulas de Schwann y otras clulas neuronales, adems de los condrocitos [43]. S100A4 est regulado al alza despus de una lesin del tejido nervioso. Neurite estimulada por S100A4 se observa para la protena en el oligmero, no dimrica, estado [121]. Esta protena estimula la angiognesis a travs de la va ERK1 / 2 sealizacin.S100A4 se une al dominio tetramerizacin pero no el dominio regulador negativo de p53 [104]. S100A6

S100A6 se encuentra principalmente en las neuronas de las regiones restringidas del cerebro [42]. S100A6 se encuentra tambin en el medio extracelular de las clulas de cncer de mama. S100A6 se une al dominio de tetramerizacin de p53 [104]. S100A6 unido de manera significativa al dominio C2 de RAGE, en oposicin a la V y / o dominios C1 a que la mayora de otros ligandos se unen y por lo tanto sugiere que podra tener una funcin discordante de ligandos RAGE otros. S100A6 activa la va de JNK y, posteriormente, la va de la caspasa 3/7, dando lugar a la apoptosis [125]. S100A7/S100A7A/S100A15 S100A7, tambin llamado Psoriasin 1, es parte de una subfamilia de varias protenas [101]. El altamente homloga S100A7A, un miembro de esta subfamilia, era conocido antes como S100A15 pero este nombre ha sido retirado [113]. S100A7 y S100A7A son funcionalmente distintos a pesar de la alta similitud de secuencia [126]. S100A7 es altamente expresado en la enfermedad epidrmica hiperproliferativa y CD4 + recluta linfocitos y neutrfilos [102]. A pesar de varias protenas S100 son upregulated en las diversas formas de cncer de mama, S100A7 es fuertemente regulado hasta slo en el carcinoma ductal in situ [127]. Hay altos niveles de monmero y reticulado covalentemente S100A7 de alto peso molecular en exudado de la herida humana y tejido de granulacin. Los estudios inmunohistolgicos sugieren que S100A7 se produce por los queratinocitos que rodean la herida y se libera en el exudado de la herida. S100A7 ejerce actividad antibacteriana, y la regin central incluyendo slo los aminocidos 35-80 es suficiente para mediar en esta actividad [128]. Aunque ambos S100A7 y S100A7A se expresan en los queratinocitos, S100A7A tambin se expresa en los melanocitos y clulas de Langerhans de la epidermis, dermis y las clulas del msculo liso endotelial [126]. Encuadernacin, de sealizacin, y la quimiotaxis de S100A7 dependen de Zn + + y Rage in vitro, mientras que S100A7A parece sealar a travs de una va independiente de RAGE. S100A7 y S100A7A ejercer un efecto sinrgico, la promocin de la inflamacin in vivo [126]. S100A11 S100A11 est sobreexpresado en muchos tipos de cncer [129]. Es homodimrica e interacta en una forma dependiente de Ca + + con anexina I [130]. Se trata de un mediador clave de crecimiento de queratinocitos epidrmicos humanos provocados por la alta Ca + + o TGF [129]. Bajo estas condiciones S100A11 es fosforilada y transportado al ncleo por nucleolina.S100A11 se une al dominio de tetramerizacin (pero no el dominio regulador negativo) de p53 [104]. S100A11 extracelular se dimerizada por la transglutaminasa 2, y esto homodmero covalente adquiere la capacidad de seal a travs de la va p38 MAPK, acelerar la hipertrofia de condrocitos y el catabolismo de la matriz, y por lo tanto la inflamacin parejas con la activacin de los condrocitos para promover la progresin de la osteoartritis [131]. S100A12/EN-RAGE S100A12 (ES-RAGE) se expresa sobre todo en los granulocitos, sino tambin en encontrado en los queratinocitos y las lesiones psorisicas. S100A12 representa aproximadamente el 5% del total de protenas citoslicas de los neutrfilos en reposo. Se expresa en la inflamacin aguda, crnica y alrgica.Tambin est relacionada con la rabia en una de Ca + + de manera dependiente, pero tambin se une Cu + +. No existe un gen S100A12 en ratones, aunque S100A8 parece ser un homlogo funcional [132.133].S100A12 est regulado hasta en la psoriasis y el melanoma [101]. Se une a la rabia C1 y C2 en lugar de dominios el dominio V [49]. Tambin puede unirse a Rage expresado en las clulas endoteliales, la sealizacin a travs de la NF-kB y las vas de MAPK. S100A12 comparte homologa de secuencia con la supuesta RAGE dominio de unin de HMGB1 (residuos 153-180). Secretada S100A12 se une a la rabia y aumenta la expresin de molculas de adhesin intercelular-I (ICAM-1), la adhesin celular vascular molcula-I (VCAM-1), NF-kB, y factor de necrosis tumoral (TNF)- [43]. S100A12 es un quimioatrayente para los monocitos y mastocitos, aunque slo la regin bisagra parece importante para este ltimo [134]. Dado que las clulas cebadas no expresan la protena RAGE o ARNm, su activacin por S100A12 se produce de una manera RAGE-independiente. S100A12 existe como un homodmero bajo bajo condiciones de Ca + +, pero se forman hexmeros agregados (tres dmeros) a concentraciones milimolares de Ca + + [135]. S100A12, adems de S100A13, se une a los frmacos anti-alrgicos cromolina, tranilast, y amlexanox en una forma dependiente de Ca + +. Esto sugiere que S100A12 y S100A13 podran estar involucrados en la degranulacin de los mastocitos de manera independiente de RAGE [136]. S100A13 S100A13 tiene un patrn de expresin muy amplia, en contraste con las otras protenas S100. S100A13 se expresa en las clulas endoteliales, pero las clulas lisas vasculares no musculares. Se aumentada en las lesiones de endometriosis extra-uterinos en comparacin con tejidos normales, y pueden tener un papel en la vascularizacin [137]. Su afinidad por Ca + + es bajo, pero de Ca + + cables de unin a un cambio conformacional exposicin de una novela de Cu + + sitio de unin [138]. Al Cu + + vinculante, regula la liberacin de estrs depende de FGF-1 y desempea un papel en la angiognesis en gliomas de alto grado astrocticos [139]. S100A13 adems de S100A12 pueden estar involucrados en la desgranulacin de los mastocitos [136]. S100B S100B se expresa principalmente en los astrocitos de la corteza cerebral humana y los melanocitos, as como las clulas dendrticas mieloides [42].S100B, junto con S100A1 y S100A6, son las protenas S100 ms abundantes en el cerebro de varias especies, incluyendo ratones y ratas. Los niveles elevados de S100B se han encontrado en pacientes con traumatismo cerebral, la isquemia / infarto, la enfermedad de Alzheimer y el sndrome de Down [42]. S100B se utiliza como un marcador de activacin de clulas gliales y la muerte [140]. Se cree que existen como una mezcla de dmeros covalentes y no covalentes en el cerebro desde los ensayos de ELISA realizados en condiciones no oxidantes se subestima la cantidad de S100B [141.142]. A este respecto, covalentes dmeros S100B puede ser utilizado como un marcador de estrs oxidativo [142]. S100B se une tanto el dominio de tetramerizacin y el dominio regulador negativo de p53 [104]. S100B tambin inhibe microtubulina y el tipo III conjuntos de filamentos intermedios. S100B se une tanto la variable (V) y constantes (C1) las regiones de rabia, y oligmeros de RAGE S100B se unen con ms fuerza [42,48]. A concentraciones equivalentes, S100B aumenta la supervivencia celular mientras S100A6 induce la apoptosis a travs de interacciones RAGE, que dependen de la generacin de especies reactivas del oxgeno (ROS). Tras la unin de RAGE y la activacin intracelular de la formacin de ROS, S100B activa la va de PI 3-kinase/AKT y, posteriormente, la va de NFkB, lo que resulta en la proliferacin celular. S100B ejerce efectos trficos sobre las neuronas y astrocitos en concentraciones ms bajas y provoca la apoptosis neuronal, la activacin de astrocitos y microglia en concentraciones ms altas [143-146]. La activacin de RAGE S100B upregulates IL-1 y TNF- expresin en la microgla y estimula la actividad AP-1 transcripcional a travs de sealizacin de JNK.Regulacin al alza de la COX-2, IL-1 y TNF- expresin en la microgla por S100B requiere la activacin simultnea de NF-kB y AP-1. S100P S100P se une a la rabia y es importante en la prstata, pncreas y cncer gstrico [146,147]. Tambin se detect en el pulmn normal, as como el tejido del cncer de pulmn, y se incrementa principalmente en los adenocarcinomas [148]. Tratamiento de lneas de clulas pancreticas con S100P estimula la proliferacin celular, la migracin, invasin, y activa la quinasa MAP y las vas de NFkB [149]. El frmaco antialrgico cromoglicato une S100P y bloquear S100P-RAGE interaccin. Inhibe el crecimiento del tumor y aumenta la eficacia de la gemcitabina en modelos animales experimentales [150]. No esteroides anti-inflamatorios esteroideos (AINE) son al mismo tiempo a favor de tumorignico hasta-regulacin de la expresin S100P y anti-tumorignico por la disminucin de la actividad Cox2 [151]. Protenas S100 - sutiles diferencias se traducen en grandes cambios en la unin RAGE A pesar de las protenas S100 compartir mucha similitud estructural con sus dos manos EF-Ca + + dominios de unin flanqueada por alfa-hlices, slo algunos de los miembros de activar RAGE [97]. Sutiles diferencias estructurales que conducen a diferentes propiedades bioqumicas (Ca + + y Zn + + y el estado de oligomerizacin de unin preferido), lo que parece conducir a diferentes habilidades para activar RAGE. Ms altos estados de oligomerizacin tienden a conducir a la activacin de RAGE. RAGE tambin se une a varias familias

de

protenas

que

forman

fcilmente

agregados

oliogmers

pptido

beta

amiloide,

el

colgeno,

AGEs

RAGE Y ABETA El pptido amiloide-beta (Abeta) es un pptido ms comnmente de 40 o 42 aminocidos cuya acumulacin en placas amiloides es una de las caractersticas de los cerebros de Alzheimer. Abeta existe extracelularmente, ya sea como un monmero, oligmero soluble, o fibrillas insolubles y agregados. Abeta se une a RAGE en neuronas y clulas de la microglia [152].En las neuronas, la activacin de RAGE Abeta va a generar estrs oxidativo y activan NF-kB. La activacin de la microglia se Abeta aumentar la proliferacin celular y la migracin [153.154]. Sin embargo otros receptores tambin podra mediar la toxicidad Abeta, ya que RAGE independientes de los efectos tambin existen [155]. La V y C1 dominios de RAGE se unen a los oligmeros de Abeta y agregados (respectivamente), y el bloqueo de stos impidan Abeta neurotoxicidad inducida [156]. La exposicin de RAGE que expresan la lnea humana de clulas de neuroblastoma (SHSY-5Y) de oligmeros de Abeta causado la muerte masiva de clulas, mientras que la exposicin a fibras de Abeta y agregados causado la muerte celular de menor importancia. El tratamiento con anticuerpos bloqueantes especficos a los dominios de RAGE fue capaz de proteger contra la muerte Abeta agregados u oligmero inducuded-(pero no la muerte inducida por fibrilar). RAGE Y COLGENO A diferencia de otros no embrionarias los tejidos, RAGE es altamente expresado en el pulmn sano y su expresin disminuye en estados patolgicos. Expresin de RAGE en el pulmn es un marcador de diferenciacin del tipo de epitelio alveolar I (AT I) las clulas, y se localiza en la membrana plasmtica basolateral [20]. RAGE mejora la adherencia de estas clulas al colgeno superficies recubiertas e induce la propagacin de clulas [16]. RAGE une laminina y colgeno y IV in vitro, pero no la fibronectina. As RAGE juega un papel en el anclaje de las clulas de AT I a la membrana basal de pulmn, que es rico en colgeno IV [20.157.158]. Ausencia de expresin de RAGE en (- / -) ratones conduce a un aumento de la espontnea fibrosis pulmonar idioptica (IPF). Pulmn humano a partir de la ltima etapa de los pacientes con FPI mostr una baja regulacin de RAGE en comparacin con el tejido pulmonar sano [20]. AGE Productos finales de glicacin avanzada (AGE) una amplia clase de productos no enzimticos de las reacciones entre las protenas o lpidos y azcares de aldosa [159]. La reaccin entre la protena y el azcar causa de su caracterstica pardeamiento en productos alimenticios. La dieta occidental, en particular, est llena de AGE. Aunque la glicosilacin es un trmino general para la adicin de un azcar, en este caso se refiere especficamente a no enzimtica adems de una protena. "Glicosilacin" se utiliza a menudo para la adicin enzimtica de azcares. La reaccin de Maillard, a partir de la glicosilacin de la protena y progresando a la formacin de AGE, est implicada en el desarrollo de las complicaciones de la diabetes mellitus, as como en la patognesis de enfermedades cardiovasculares, enfermedades renales, y neurodegenerativas [3119160161]. La reaccin de Maillard se inicia con los azcares que forman bases de Schiff y productos Amadori. Los grupos carbonilo de estos precursores pueden reaccionar con grupos amino, sulfhidrilo funcionales, y guanidinyl en las protenas. AGE no puede ser qumicamente vuelto a sus formas originales, pero su precursor, productos Amadori, puede ser. AGE son una categora diferente de la noenzimticos modificaciones que resultan de estas reacciones, y no todas las protenas AGE-RAGE modificados activan. Ms de veinte modificaciones de diferentes edades se han caracterizado, de los cuales carboximetil lisina (CML), protenas modificadas son potentes inductores de la sealizacin RAGE [3160]. Otras modificaciones de AGE a las protenas (como pentosidina y pirralina) no aumentan la sealizacin RAGE. Como tal, la caracterizacin de AGE de modificaciones de las protenas es importante. Una tcnica prometedora es la espectrometra de masas, sobre todo de abajo hacia arriba "protemica relacionados con la escisin de protenas seguida de un anlisis de los pptidos posteriores [160]. RAGE Y AGE EN EL ENTORNO DE REDOX Acumulacin de AGE en s se considera una fuente de estrs oxidativo. En los entornos de hiperglucemia, la glucosa puede someterse a la auto-oxidacin y la generacin de radicales OH [161.162]. Base de Schiff y productos de Amadori mismos causan la produccin de ROS [162]. Donantes de xido ntrico puede eliminar los radicales libres e inhibir la formacin de AGE [163].Con el tiempo los depsitos EDAD contribuir a la aterosclerosis diabtica en los vasos sanguneos. Como humanos, naturalmente, las edades, uno genera altos niveles de AGEs endgenos [164.165]. RAGE fue originalmente llamado por su capacidad de obligar a los AGE, pero desde 1995 ha habido muchos ms se encuentran ligandos [8166]. La formacin de AGE es una forma de sostener la seal de una rfaga corta oxidativo en una protena mucho ms larga duracin despus de la traduccin modificada [119]. RAGE se unir a la edad albmina modificada, pero no nonglycated albmina [167]. La activacin de RAGE AGE se encuentra en la diabetes, neuodegeneration, y el envejecimiento [168]. Los tumores proporcionar un entorno que favorece la generacin de AGEs ya que de acuerdo a la hiptesis original de Warburg que se basan principalmente en glycolosis anaerobio para obtener energa, y tener una mayor captacin de la glucosa [169.170]. Las clulas de carcinoma de prstata se unen las edades a travs de la V-dominio de RAGE [171]. AGE han hecho se han identificado en el tejido canceroso, lo que conduce a la posibilidad de activacin de AGE de RAGE contribuir al crecimiento del cncer [172]. Sin embargo tambin existen otros ligandos RAGE en mayor abundancia. Molculas individuales de RAGE no se unen envejece bien, pero oligmeros de RAGE que se unen fuertemente [11]. Esto apoya la idea de que la oligomerizacin RAGE es importante para la sealizacin sostenidos. El colgeno se acumula normalmente algn grado de glucosilacin in vivo, pero con colgeno sinttico AGE-modificacin se mejore la adherencia de neutrfilos y la difusin [173]. Sorbinil y zenarestat son activos por va oral aldosa reductasa (ARI) derivado de quinazolina. Ellos, adems de vitamina C y E, tienen beneficios paliativas para disminuir el estrs oxidativo intracelular [174]. La vitamina E es eficaz en parte debido a su estructura qumica. Es capaz de donar un tomo de hidrgeno de su grupo hidroxilo, que combina con el ROS y la neutralizacin de ellos [175]. Lamentablemente, muchos de los ensayos clnicos de antioxidantes no ha logrado modificar el cncer y en algunos casos han mejorado su desarrollo, lo que sugiere que los eventos extracelulares "aerbicas", o la oxidacin puede ser el medio preferido para limitar la inflamacin crnica. La inyeccin de RAGE soluble previene lesiones hepticas reperfusin y disminuye los niveles de TNF- (factor de necrosis tumoral ), una citoquina que seala la apoptosis y contribuye a la inflamacin sistmica, y por lo tanto disminuye la insulitis [176]. La entrega aminoguanidina tambin disminuye los niveles de albmina en la sangre y disminuye los niveles de la aorta y el suero de los AGE por lo tanto retardar la progresin de la aterosclerosis [177]. LIGANDOS DE RAGE EN NEUROBIOLOGA El eje de RAGE-NF-kB acta en la neuropata diabtica. Esta activacin fue menor en los RAGE (- / -) ratones, incluso 6 meses despus de la induccin para la diabetes. La prdida de la percepcin del dolor se invierte en los ratones de tipo salvaje tratados con RAGE soluble exgeno [178]. La interaccin entre HMGB1 y RAGE in vitro promueve el crecimiento de las neuritas de las clulas corticales, lo que sugiere un posible papel de la rabia como un mediador en el desarrollo neuronal [166]. Nanomolar concentraciones de S100B promover respuestas de supervivencia celular, tales como la migracin celular y el crecimiento de neuritas. Si bien la interaccin de RAGE con S100B puede producir seales antiapoptticas, micro-molar concentraciones de S100B producir oxirradicales, la induccin de apoptosis.S100B tambin activa RAGE, junto con HMGB1, la promocin de la produccin del factor de transcripcin NF-kB [144]. Otro mecanismo propuesto por cunto RAGE puede mediar neurite implica carbohidratos sulfoglucuronyl (SGC). El examen de ambos HMGB1 y SGC en el cerebro del ratn en desarrollo revela que la cantidad de RAGE expresado en el cerebelo aumenta con la edad. Los anticuerpos contra HMGB1, la rabia y SGC inhibir el crecimiento de las neuritas, lo que sugiere que la rabia puede estar involucrado con la unin de estas molculas y sus procesos posteriores [179]. Como RAGE pueden estar involucrados con el crecimiento celular y la muerte, su papel en la recuperacin de las clulas despus de la lesin tambin ha sido examinado. En ratas con oclusin permanente de la arteria cerebral media, los niveles de aumento de la rabia como lo hacen en las clulas PC12 despus de la privacin de oxgeno y glucosa (OGD). El bloqueo de RAGE reduce la citotoxicidad provocada por la OGD [180]. La unin de RAGE con sus ligandos activa la va de NF-kB. La presencia de RAGE, NF * B-, y NF-kB citoquinas reguladas en las clulas CD4 +, CD8 + y CD68 + en las clulas de contratacin a los nervios de los pacientes con neuropatas vasculticas sugiere que la va RAGE puede tambin desempear un papel en la regulacin al alza de la inflamacin en este contexto [ 181]. Otro ligando RAGE, EDAD-CML, est presente en las clulas mononucleares y endoneurales epineurial en la polineuropata desmielinizante inflamatoria crnica y polineuropata vascultica [182]. En las clulas de glioma, RAGE es parte de un puesto de control molecular que regula la invasividad de clulas, el crecimiento y movimiento. En contraste con las clulas de cncer de pulmn, las clulas normales de glioma expresan menos RAGE que las clulas tumorales. Adems de los AGE a las clulas estimula la proliferacin, crecimiento y migracin. La adicin de anticuerpos dirigidos a la inversa RAGE inhibe el crecimiento y proliferacin causada por AGE, aumentando el tiempo de supervivencia y las metstasis decrecientes en ratones inmunodeficientes teniendo implantados rata clulas de glioma C6 [183]. RAGE EN LAS NEOPLASIAS EPITELIALES La interaccin entre la rabia y sus diversos ligandos juega un papel importante en el desarrollo y la metstasis del cncer. RAGE perjudica el estmulo de proliferacin de las clulas

del cncer pulmonar y del esfago [184]. RAGE es altamente expresado en I Tipo-pneumatocytes, especficamente localizados en el epitelio alveolar. Curiosamente, la sobre-expresin de RAGE lleva a la proliferacin celular y el crecimiento ms bajo, mientras que downregulation de RAGE promueve el desarrollo de tumores en estadios avanzados de pulmn [19.185]. Por otra parte, el bloqueo de rango de edad-las interacciones conduce a la disminucin de crecimiento de las clulas [186]. Las clulas que expresan RAGE tienen activacin disminuida de la va p42/p44-MAPK y produccin del factor de crecimiento (incluyendo el IGF-1) se ve perjudicada.RAGE ligandos detectadas en los tumores de pulmn incluyen HMGB1, S100A1, y S100P. En las clulas cancerosas pulmonares transfectadas con una forma de seal deficiente de RAGE carece del dominio citoplsmico, el aumento de crecimiento en comparacin con FL-RAGE-transfectadas las clulas se observ. La sobre-expresin de RAGE en las clulas cancerosas pulmonares no aumenta la migracin celular, mientras que la seal de deficiencia de RAGE lo hace [187]. RAGE Y LAS CLULAS INMUNES RAGE tambin acta como un receptor de adhesin endotelial que media la interaccin con la integrina 2 Mac-1 [29]. HMGB1 mejora MAC1 RAGE las interacciones entre las clulas inflamatorias, vinculndolo a la respuesta inflamatoria (tabla (tabla 4) 4) [71,72]. Los neutrfilos y las clulas se adhieren a mielomonoctica RAGE inmovilizado o clulas transfectadas RAGE-, y esta interaccin se atribuye a las interacciones Mac-1 [24,71]. RAGE es altamente expresado en los macrfagos, linfocitos T y linfocitos B [188]. RAGE expresado en estos tipos de clulas contribuye a mecanismos inflamatorios.La activacin de RAGE en las clulas T es uno de los primeros eventos que conduce a la diferenciacin de las clulas Th1 + clulas T [189]. RAGE es tambin un contra-receptor de integrinas de leucocitos, que contribuye directamente a la contratacin de clulas inflamatorias in vivo e in vitro. RAGE soluble se ha postulado como un inhibidor directo del reclutamiento de leucocitos [190]. RAGE mediada por el reclutamiento de leucocitos puede ser particularmente importante en las condiciones asociadas con la expresin de RAGE superior, como la diabetes mellitus, la aterosclerosis la inflamacin crnica, o cncer [33]. RAGE puede mediar directamente en el reclutamiento de leucocitos, que acta como receptor de las clulas endoteliales y los leucocitos adhesiva atraen. RAGE provoca una "indirecta" aumento en el reclutamiento de clulas inflamatorias debido a la activacin mediada por RAGE celular y la regulacin positiva de molculas de adhesin y factores proinflamatorios [190]. S100A12 y S100B activar las clulas endoteliales, de msculo liso vascular, monocitos y clulas T a travs de RAGE, lo que resulta en la generacin de citoquinas y molculas de adhesin proinflamatorias [24,67,68]. Expresin de RAGE en las clulas T es necesaria para el antgeno activadaslas respuestas de proliferacin [189]. Las clulas T deficientes RAGEdisminuir la produccin de IL-2, IFN, y Th1 mientras que produce ms IL-4 e IL-5 como citocinas Th2. La activacin de RAGE por lo tanto juega un papel en el equilibrio de la inmunidad Th1 y Th2. Clulas dendrticas RAGE deficientesparecen mediar actividad antgeno presentacin bastante normal y la migracin tanto in vivo como in vitro. Expresin de RAGE sin embargo se requiere por pases en desarrollo con vencimiento a migrar a los ganglioslinfticos de drenaje [191]. CONCLUSIN RAGE y sus ligandos juegan un papel esencial en la inflamacin, la neurobiologa, el cncer y muchas otras enfermedades. Cada ligandoclaramente activa RAGE y contribuye a la respuesta inmune innata y adaptativa, as como la modulacin, en el complejo y mal entendido, las formasde la capacidad de una variedad de tipos de clulas para expandir y dar respuesta a los factores de crecimiento exgenos. Otros estudios sobreRAGE ligandos debe incluir el enfoque y la caracterizacin de los cambios en la transduccin de seales y los mecanismos inflamatorios. Otras molculas teraputicas, adems de RAGE soluble puede ser importante para inhibir laactivacin de RAGE y, en el ajuste del cncer, la tumorignesis. RAGE es el vnculo entre las vas inflamatorias y las vas de promocin de la tumorognesisy metstasis. Caracterizacin de la funcin de RAGE en vivo e in vitro puedeser ampliamente aplicada a una variedad de estados patolgicos y se incorporan en una amplia gama de regmenes de tratamiento para estas condiciones.