Salmonella spp.

Salmonella spp es un bacilo gramnegativo que se comporta como un patgeno intracelular facultativo. -Su hbitat es el aparato gastrointestinal de animales y el hombre, pero en el hombre nunca forma parte de la microbiota habitual. Cuadros clnicos: gastroenteritis septicemia (fiebre tifoidea) Gastroenteritis Ingresa va oral (agua, huevos) Atraviesan el estmago (genes Atr: gen de respuesta de tolerancia a los cidos)

Salmonella spp.
Llegan a intestino delgado, invaden y se replican en las clulas M (micropliegues)de las Placas de peyer. La unin a clulas M est mediada por adhesinas especficas de especie. Intervienen invasinas: Sips o Ssps (codificadas por la Isla de Patogenicidad SPI-1),encargadas de una reorganizacin de la actina de las clulas M(clulas con ausencia de ribete en cepillo)provocando ondulaciones de la membrana (ruffing/rizado) Las membranas onduladas rodean y engullen a las salmonelas, permitiendo su replicacin intracelular en el fagosoma, con posterior destruccinde la clula anfitriona y extensin a cl. epiteliales adyacentes y tejido linfoide.

Salmonella spp.
La respuesta inflamatoria limita la infeccin al aparato digestivo, interviene en la liberacin de prostaglandinas y estimula la secrecin activa de AMPc y lquidos DIARREA Mecanismo de invasin: Opern SIP-1 que codifica genes Sip-A, Sop-E y Sop-B. Sip-A: sintetiza una protena de unin a actina. Sop-E y Sop-B: inician la polimerizacin de la actina y ramificacin filamentosa de la actina. Inducen re-arreglos del citoesqueleto dando lugar al ondulamiento (ruffling)en superficie de cl M favoreciendo la internalizacin de salmonela.

Salmonella spp.
SIP B, SIP C, SIPD forman poros en la membrana de las clulas eucariotas por los cuales atraviesan protenas que inducen la fagocitosis de las bacterias por clulas no fagocticas. Salmonella genera efectos txicos que destruyen las clulas M e invaden enterocitos adyacentes tanto por la cara apical como basolateral. Induce apoptosis en macrfagos activados. SIP-B se asocia a la proteasa pro-apopttica, caspasa I activando a citoquinas proinflamatorias (IL1, IL 18). Induce fagocitosis en macrfagos no activados para poder ser transportada a hgado y bazo (fiebre tifoidea)

Salmonella spp.
Las protenas efectoras SopB y SopD se encuentran involucradas en la secrecin de fase fluda al estimular la secrecin de cloro. Tambin la protena PipA contribuye a la secrecin fluda y reaccin inflamatoria en la mucosa intestinal. Salmonella induce la migracin de neutrfilos y macrfagos (PMN), liberacin de citoquinas proinflamatorias (IL8, IFN, TNF). El incremento de la permeabilidad vascular que acompaa a la inflamacin junto con la prdida de la integridad epitelial de la mucosa intestinal provoca la diarrea

Islas de Patogenicidad
Una isla de patogenicidad es un grupo de genes involucrados en codificar factores especficos de virulencia. Su porcentaje de G-C difiere del promedio del genoma bacteriano. Presentan repeticiones directas en sus extremos. Portan genes que codifican factores de movilidad como integrasas, transposasas o secuencias de insercin. Se encuentran frecuentemente insertadas en locis de RNAt.

Islas de patogenicidad de Salmonella

SPI-1 SPI-2 SPI-3 SPI-4 SPI-5 SPI-1: -Involucrada en la expresin de genes relacionados con la invasin a clulas hospedadoras no fagocticas -Apoptosis de macrfagos. Se activa en los primeros estados de la infeccin.

Islas de patogenicidad de Salmonella

SPI-2: -Codifica para SSTIII (Sistema de transporte tipo III) que se activa cuando la bacteria se encuentra intracelularmente dentro de una vacuola. - Se localiza en el centisoma 31, situado inmediatamente adyacente al gen ARNt -40 Kb -32 genes que regulan la supervivencia y replicacin bacteriana en los compartimentos intracelulares de fagocitos y clulas epiteliales. Mutantes en esta isla atenan la infeccin sistmica

Islas de patogenicidad de Salmonella

SPI-3:Tambin es requerida para la supervivencia intracelular en macrfagos. Provee productos esenciales para el crecimiento en condiciones limitantes de Mg+2 17 Kb Se localiza en el centisoma 82, adyacente al gen RNAt. SPI-4: Codifica un sistema de secrecin tipo I (SSTI) que interviene en la secrecin de toxinas. Participa en la adaptacin de Salmonella al ambiente intracelular en macrfagos. -27 Kb, 18 genes localizados en el centisoma 92.

Islas de patogenicidad de Salmonella

SPI-5: 75 Kb localizada en el centisoma 20 en el gen ARNt sert. Codifica protenas efectoras involucradas en la secrecin fluda y reaccin inflamatoria de la mucosa intestinal, como Sop B (Sig D) que adems de estimular la secrecin de cloro se encuentra involucrada en el flujo de macrfagos. Para su secrecin utiliza el sistema de transporte SSTIII codificado por SPI-1.

Islas de patogenicidad de Salmonella

Para S. enterica serovar Typhi se reportaron 10 islas de patogenicidad. SPI-6: Contiene el opern de la fimbria tipo chaperona SPI-7: codifica la sntesis de cpsula (Ag Vi), el profago Sop E y el opern de pili tipo IV. SPI-8: Contiene 2 pseudogenes que codifican para bacteriocinas e integrasas. SIP-9: Porta genes para la secrecin tipo I. SIP-10: Contiene el fago 46 y el opern sefA-R Islotes de patogenicidad

Eventos en la patognesis de la infeccin de Salmonella y genes de virulencia asociados

Eventos en la patognesis de la infeccin de Salmonella y genes de virulencia asociados

Staphylococcus aureus
S. aureus produce infecciones localizadas en piel y mucosas fornculo imptigo acn Puede invadir tejidos y rganos neumona osteomielitis endocarditis meningitis pleuritis Produce exotoxinas Enterotoxinas (Intox. Alim) Sndrome de shock txico Sndrome de piel escaldada

Staphylococcus aureus. Patogenia

Primer Paso: Colonizacin bacteriana. Adherencia de la bacteria a clulas y/o tejidos del hospedador: -Protenas superficiales: (MSCRAMM) Protenas de unin a colgeno (Cna) Protenas de unin a fibronectina (Fn Bpa) Protenas de unin a fibringeno (Fn BpB, Prot A) Se forman puentes de fibronectin entre las protenas superficiales bacterianas y las integrinas 51 de la clula eucariota. -Microcpsula y Protena A (Spa) Se desencadenan seales intracelulares que originan la polimerizacin de microfilamentos de actina. Segundo paso: Se forman pseudpodos que internalizan a la bacteria en endosomas.

Staphylococcus aureus. Patogenia

Tercer paso: Salida del endosoma (hemolisina, hemolisina) hemolisina: - Actividad membranoltica: rompe membrana de eritrocitos, cl. mononucleares del sistema inmune, cl. epiteliales, cl. endoteliales y plaquetas. -Actividad citoltica: forma poros en la membrana alterando la osmoregulacin, el flujo de cationes e induciendo apoptosis (Tambin participan hemolisina, esfingomielinasas y leucocidinas P-V) Cuarto paso: Multiplicacin bacteriana en el citoplasma. Sintetizan enzimas extracelulares y toxinas

Staphylococcus aureus. Patogenia

Enzimas extracelulares: Estafiloquinasa: -Activa el plasmingeno y produce la descomposicin de las mallas de fibrina aumentando el potencial invasivo. - Induce la secrecin de defensinas neutrfilo defensina se une a la bacteria y la lisa Estafiloquinasa se une a la defensina neutralizando su efecto bactericida.
Coagulasa
Hialuronidasa Contribuyen a la capacidad invasiva de S. aureus y facilitan la diseminacin tisular

Lipasa Proteasa ADNasa

Staphylococcus aureus. Patogenia

Factores de virulencia que contribuyen a la toxicidad bacteriana: Produccin de enterotoxinas Produccin de toxina del shock txico Produccin de toxina del sndrome de piel escaldada 1-Enterotoxinas (8 tipos: A a E;G a I) y tres subtipos de la enterotoxina C. Son estables a 100C durante 30 minutos y resistentes a enzimas gstricas y yeyunales Las enterotoxinas actan como superantgenos capaces de inducir la activacin inespecfica de los linfocitos T y la liberacin de citoquinas

Staphylococcus aureus. Patogenia

2-Toxina -1 del sndrome de shock txico (TSST-1) Es una exotoxina termoestable y resistente a la protelisis. Codificada por un gen cromosmico. Es un superantgeno que estimula la liberacin de citoquinas y provoca extravasacin de cl endoteliales. La capacidad para atravesar las barreras mucosas provoca efectos sistmicos. La muerte es consecuencia de un shock hipovolmico que origina insuficiencia multiorgnica. 3-Toxina exfoliativa (Sndrome de la piel escaldada)
ETA: termoestable y codificada cromosmicamente ETB: termolbil y codificada por plsmido
No produce ni citlisis ni inflamacin.

3-Toxina exfoliativa (Sndrome de la piel escaldada) Es una enfermedad exfoliativa ampollosa. Inicio brusco de un eritema peribucal localizado que se extiende por todo el organismo en 2 das. Signo de Nikolsky positivo: una ligera presin desprende la piel y despus aparecen ampollas y vesculas cutneas. Forma localizada: imptigo ampolloso.

Imptigo ampolloso, forma localizada de sndrome de piel escaldada.(Tomado de Emond RT, Rowland HAK: A color atlas of infectious diseases, London,1987,Wolfe).

Sndrome de piel escaldada.(Tomado de Emond RT, Rowland HAK: A color atlas of infectious diseases, London,1987,Wolfe).

Staphylococcus aureus. Patogenia

Produccin de polisacrido extracelular (biopelcula) -Produccin de N-succinil 1-6glucosamina (PIA/PNS6) responsable dela formacin de biopelculas (Opern Ica). -protena Bap (protena asociada a biofilm) PIA: favorece la adhesin intercelular Bap: favorece tanto la unin a supeficie inerte como intercelular. Regulacin gentica de factores de virulencia de S. aureus Posee 2 familias de reguladores globales: 1)Sistema Agr 2) SarA

Staphylococcus aureus. Patogenia

Sistema Agr (Regulador de 2 componentes) permite detectar y responder a condiciones ambientales, mediado por QS. 1-Sensor de membrana (histidn quinasa) 2-Regulador de respuesta citoplasmtica 3-Autoinductor (molcula seal) a- Autofosforilacin del sensor de membrana b-Fosforilacin del regulador de respuesta citoplasmtica

Staphylococcus aureus. Patogenia

La molcula RNAIII es la molcula efectora del sistema regulador, cuando est ACTIVA, permite la transcripcin de factores de virulencia (enzimas, toxinas) e inhibe la expresin de protenas superficiales (Prot A, protena de unin a fibronectina). Las protenas SarA son reguladores transcripcionales que actan unindose a una secuencia consenso prxima al promotor de sus genes diana. El locus SarA se transcribe desde 3 promotores:SarP1, SarP2 y SarP3 que se activan en momentos diferentes SarP1 y SarP2: se activan al comienzo de la fase exponencial.SarP3: activo durante fase pos-exponenc.

Staphylococcus aureus. Patogenia

La protena SarA es requerida para activar la transcripcin del locus Agr unindose a una secuencia concenso situada entre los promotores P2 y P3. La protena SarA promueve la sntesis de: 1-protenas de unin a fibringeno y fibrinonectina 2-sntesis de toxinas 3-sntesis de biofilm La protena SarA reprime la sntesis de: 1-protenas de unin a colgeno 2-protena A 3-proteasas

Staphylococcus aureus. Patogenia

Otras protenas homlogas a SarA: SarR SarS SarT SarU Rot MgrA Interaccionan entre s y con SarA y Agr formando una compleja red de regulacin de los diversos factores de virulencia de S. aureus

Escherichia coli enterohemorragica(STEC). Sndrome Urmico Hemoltico (SUH)

Evolucin de E. coli Escherichia es parte de la microbiota anaerobia facultativa del tracto intestinal del hombre y animales. La insercin de la IP LEE en el cromosoma de la bacteria comensal dio lugar a la aparicin del clon E. coli enteropatgena (EPEC) fermentador de sorbitol (SOR+) y con actividad glucuronidasa (GUD+) Mediante transduccin las cepas EPEC adquieren el gen que codifica la produccin de toxina Shiga 2 (STx2)

Escherichia coli enterohemorragica(STEC).

Posteriormente se inserta el gen rfbO157. Se adquiere el plmido EHEC que codifica hemolisinas. Se adquiere el gen stx1 Se pierde la capacidad de fermentar sorbitol (SOR-) y la actividad glucuronidasa (GUD-) E. coli O157:H7 Prototipo de ms de 150 serotipos que comparten el mismo potencial patognico

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC). Marcadores de virulencia.

1-Citotoxinas o verotoxinas Toxina Shiga (Stx) codificada por bacteriofagos insertados en el cromosoma bacteriano. Poseen 2 subunidades: Sub. A (33 kD) parte biolgicamente activa Sub. B (7,5 kD) parte que se une al receptor especfico Globotriasil ceramida (Gb3) Stx se clasifican en Stx1 y Stx2 Stx1 slo posee la variante Stx1C Stx2 posee numerosas variantes: stx2c,2d,2e,2f,2g Stx2 posee una citotoxicidad de 100 a 1000 veces superior que Stx1

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC). Marcadores de virulencia.

2-Plsmido pO157 (90Kb) -proteasa extracelular (espP) -catalasa peroxidasa (katA) -enterohemolisina (hlyA) -Sistema de secrecin tipo 4 (etp) -Fimbria involucrada en la adherencia a enterocitos en la colonizacin inicial (etp) 3- Factores de adherencia intestinal A)Codificados en la regin LEE del cromosoma. B) Codificados fuera de la regin LEE.

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC). Marcadores de virulencia.

A) En la regin LEE se encuentra el gen eae gen eae intimina adherencia ntima
desorganizacin de las microvellosidades Lesin AE (Attaching and effacing) Se produce un reordenamiento del citoesqueleto de la clula hospedadora pedestal rico en actina polimerizada. Regin LEE intimina reguladores transcripcionales chaperonas sistema de secrecin tipo III protenas efectoras (receptor de la intimina:Tir)

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC). Marcadores de virulencia.

B) Codificadas fuera de la regin LEE Grupo de adhesinas en islotes de patogenicidad: - Iha - Efa - LPF - Tox B - Saa - Sfp

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC).Patognesis

Adherencia (sin invasin) a enterocitos. La adherencia mediada por fimbrias causa alargamiento de las microvellosidades Translocacin del receptor Tir (pelo enrollado) Unin de la intimina con Tir. Lesin AE Reduccin de la superficie absortiva Diarrea sin sangre Se libera la toxina Shiga, se une la sub B al receptor Gb3 de la membrana apical de la clula epitelial del enterocito.

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC).Patognesis

Internalizacin de la toxina al aparato de golgi, clivaje de la Sub A, unin a la Sub ribosomal 60s. Inhibicin de la sntesis de protena muerte celular La toxina, tambin puede ser translocada desde la membrana apical a la superficie basolateral Induccin de interleuquina 8 (IL-8) Acumulacin de leucocitos en la pared intestinal Dao en las clulas endoteliales de los vasos sanguneos Diarrea sanguinolenta

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC).Patognesis

La toxina entra en la circulacin sangunea y es transportada a diferentes rganos blancos que posean Gb3 El rin posee Gb3. La interaccin de la toxina con las clulas endoteliales de los vasos sanguneos se hinchan se desprenden a nivel del glomrulo: lesiones histopatolgicas Se acumula depsito de fibrina y plaquetas en la microvasculatura renal, se reduce el flujo sanguneo insuficiencia renal

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC).Manifestaciones clnicas

1 a 2 das de vmitos Fiebre baja o ausente Dolores abdominales severos Diarrea sin sangre Diarrea sanguinolenta o colitis hemorrgica 4 a 6 das La mayora de los casos es autolimitada 5-10% de los nios infectados evolucionan a SUH. Factores predictivos de evolucin a SUH
Edades extremas (nios < de 2 aos) Leucocitosis El genotipo bacteriano Uso de antidiarreicos Fiebre

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC). Sndrome Urmico Hemoltico (SUH)

Enfermedad de comienzo agudo con anemia hemoltica microangioptica Plaquetopenia Dao renal Puede seguir o no a un episodio de diarrea con o sin sangre en un nio previamente sano. Palidez, petequias, hematomas Oliguria, edema Hipertensin arterial convulsiones

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC). Reservorios

Rumiantes en general, ganado vacuno en particular Carne o leche STEC no es patgena para los animales. Vas de transmisin
carne molida, Hamburguesas, morcilla Leche no pasteurizada, yogur, quesos mayonesa papas, lechuga, jugo de manzana Agua no potable, aguas recreacionales Contaminacin cruzada Persona a persona ruta fecal-oral DOSIS INFECTIVA: 10 A 100 BACTERIAS /GRAMO DE ALIMENTO

E. Coli productor de toxina Shiga (STEC). DIAGNSTICO BACTERIOLGICO

Etapa de enriquecimiento: - En medio lquido -Temperatura (42C) Etapa de aislamiento
Agar Mac Conkey Sorbitol (SMAC) Medios cromognicos: CHROMAgar O157 (CHROM) Agar O157:H7 ID (Biomrieux)

Etapa de Identificacin Bioqumica

Colonias incoloras (no fermentadoras de sorbitol) son compatibles con STEC

Pruebas Bioqumicas de STEC

Indol: positivo Rojo de metilo: Positivo Voges-Proskawer: Negativo Utilizacin de Citrato: negativo TSI: Pico cido/fondo cido con produccin de gas LIA: descarboxilacin de lisina: positivo, SH2: negativo, movilidad: positivo Actividad glucuronidasa: negativa

Serotipificacin
Deteccin del antgeno somtico O Deteccin del antgeno flagelar H Identificacin del antgeno H7 Deteccin de factores de virulencia por PCR

Streptococcus pyogenes. Patogenia

1-Capacidad de adherencia 2-Invasin 3-Produccin de toxinas y enzimas Adherencia a clulas epiteliales respiratorias: -Acido teicoico -Protena M -Protena tipo M -Protena F Internalizacin -Protena M -Protena F

Evitar la opsonizacin y fagocitosis:

Cpsula (cido hialurnico) Protena M se puede unir al Factor H:prot. Reguladora de la ruta alternativa del complemento C3b del complemento (mediador de la fagocitosis ) se desestabiliza por el Factor H cuando C3b se une a la Prot M es degradado por Factor H La unin del fibringeno a la prot M inhibe la activacin del complemento por ruta alternativa y reduce la cantidad de C3b unido Produccin de peptidasa del C5a: degrada C5a del complemento: molcula atrayente de neutrfilos y fagocitos mononucleares

Exotoxinas pirgenas o toxinas eritrognicas (Spes)

4 toxinas termolbiles inmunolgicamente diferentes (SpeA, SpeB, SpeC, SpeF) Actan como superantgenos liberan:IL-1,IL-2, IL-6 TNF-, TNF-, IFN- shock e insuficiencia multiorgnica exantema: escarlatina -Estreptolisina S: hemolisina estable al o2 no inmungena lisa hemates, leucocitos y plaquetas Se produce en presencia de suero -Estreptolisina O: hemolisina lbil al o2 inmungena (AELO) lisa hemates, leucocitos y plaquetas

Estreptoquinasa (degradan plasmingeno, fibrina , fibringeno) Desoxirribonucleasas C5a peptidasa Hialuronidasa (factor de diseminacin) Enfermedades estreptoccicas supurativas Faringitis Pioderma (imptigo) Erisipela Celulitis Fascitis necrosante (gangrena estreptoccica) Sndrome del shock txico estreptoccico

Enfermedades estreptoccicas supurativas

Septicemia puerperal Enfermedades estreptoccicas no supurativas Fiebre reumtica Glomerulonefritis aguda

Faringitis o faringoamigdalitis estreptoccica

-Comienzo sbito: dolor de garganta, escalofros, fiebre. -Garganta enrojecida, inflamada, con exudado blanquecino grisceo o claramente purulento -Ganglios cervicales inflamados y dolorosos Cuando la cepa infectante produce toxina pirgena se desarrolla el cuadro de escarlatina

Faringitis

Escarlatina: exantema eritematoso en tronco, cuello y extremidades Lneas enrojecidas en zonas de flexin de extremidades. Petequias y fragilidad capilar Lengua enrojecida con papilas hipertrficas (aframbuesada)

Toxina eritrognica

Imptigo: infeccin localizada de la epidermis por

debajo del estrato crneo. Ppula pruriginosa que evoluciona a vescula rodeada de halo eritematoso. Evoluciona a vescula y pstula con placa costrosa por debajo enrojecida y sangrante.

Celulitis: infiltracin de polimorfonucleares de la

dermis y tejido celular subcutneo, dilatacin papilar y edema.

Imptigo

Sndrome del shock txico (Toxina pirgena que acta como superantgeno)

Se forman inmunocomplejos circulantes (Protena M y fibringeno) que se unen a integrinas leucocitarias que activan a leucocitos, liberacin de productos txicos y enzimas proteolticas En consecuencia ocurre: -lesin endotelial -aumento de la permeabilidad vascular -coagulacin intravascular

Fiebre reumtica
La importancia de esta enfermedad est determinada por las graves secuelas en vlvulas cardacas y articulaciones. -Existencia de una homologa estructural entre la protena M y miosina cardaca, protenas del sarcolema sinovial y cartlago articular -La presencia de anticuerpos anti-cpsula (cido hialurnico) reacciona con cido hialurnico del tejido conectivo humano.

Glomerulonefritis post-estreptoccica
Proceso inflamatorio desencadenado por depsitos de inmunocomplejos en glomrulo renal.

-Anticuerpos anti-protena M -Anticuerpos anti-cido hialurnico Conduce a hipertensin arterial, edema, hematuria, proteinuria

Bibliografa
Murray P, Rosenthal K, Pfaller M. 2006. Microbiologa mdica. 5 Ed. Elsevier, Espaa. Sanchez-Castan CA. 2012. Patogenia molecular de Staphylococcus aureus. Evidencia Mdica e Investigacin en salud. 5(3):79-84 Figueroa IM, Rodriguez AV. 2005. Mecanismos moleculares de patogenicidad de Salmonella sp. Rev Latinoam Microbiol 47:25-42 Ruiz AV, Guilln SM. 2006. Tratado SEIMC de Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica. Ed Med Panamericana. Espaa.