01/04/2011

Techniques de squenage de lADN

Squenage de Sanger

Frederick Sanger. Prix Nobel de Chimie 1980

Squenage de lADN
Technique de Sanger

Principe : mthode par synthse enzymatique du brin complmentaire de lADN dont on cherche dterminer la squence laide dune ADN polymrase et de nuclotides terminateurs de chane ddNTP (didsoxyribonuclotides) qui ont un atome d'hydrogne la place du groupement OH sur le carbone 3' du ribose. Ncessite : ADN simple brin squencer ADN polymrase oligonuclotide amorce complmentaire 4 nuclotides dNTP dans 4 expriences diffrentes : chaque ddNTP

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Squenage de lADN
Technique de Sanger

NH2

NH2

dATP
O O P OH O O P O O O P O OH O O

N N N

N
O O P OH

ddATP
O O P O O O P O O O

N N N

Squenage de lADN
Technique de Sanger

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Squenage de lADN
Technique de Sanger - A -

Squenage de lADN
Technique de Sanger

Automatisation : une seule raction avec tous les ddNTP dans le mlange ractionnel, chaque ddNTP portant un fluorochrome diffrent.

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Squenage de lADN
Technique de Sanger

IV. Drivs de nuclosides

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Drivs de nuclosides dintrt biologique

Ribavirine Analogue de la guanosine

AZT

Zalcitabine Analogues de la cytidine

Aracytidine

Antiviraux

Anti-cancer (leucmie)

Drivs de nuclosides dintrt biologique

O
F HN

O
Thophylline (analogue de la guanosine) proprits bronchodilatatrices (asthme)

N H
Aciclovir ananlogue de la guanosine antiviral (herpes)

5 fluoro-uracile (analogue de la thymine) anticancreux