Biosensor Un biosensor es un dispositivo para la deteccin de un analito que combina una biolgica componente con un componente detector fisicoqumica.

Se compone de 3 partes: el elemento sensible biolgica (material biolgico (por ejemplo, tejido, microorganismos, orgnulos, receptores celulares, enzimas, anticuerpos, etc cidos nucleicos), un biolgicamente material derivado o biomimic) Los elementos sensibles pueden ser creados por biolgica ingeniera. el transductor en el medio (asociados ambos componentes) el elemento detector (trabaja de una manera fisicoqumicos; ptico, piezoelctrico electroqumica, termomtrico, o magntico.) El ejemplo ms comn de un biosensor comercial es el biosensor de glucosa en sangre, que utiliza una enzima para romper la glucosa sangunea. Al hacerlo, se transfiere un electrn a un electrodo y esta se convierte en una medida de la concentracin de glucosa en sangre. La alta demanda del mercado para este tipo de sensores ha impulsado el desarrollo de sensor asociado tecnologas. Recientemente, las matrices de muchas molculas de deteccin se han aplicado diferentes en los llamados dispositivos electrnicos nariz, donde se usa el patrn de respuesta de los detectores a huella digital de una sustancia. Un canario en una jaula, como el usado por los mineros para advertir de gas podra ser considerado como un biosensor. Muchas de las aplicaciones de biosensores actuales son similares, en que utilizan organismos que responder a sustancias txicas en un nivel mucho ms bajo que nosotros para avisarnos de su presencia. Tales dispositivos se pueden utilizar tanto en el control ambiental y en el tratamiento de aguas

instalaciones. Principios de Deteccin Biosensores piezoelctricos y biosensores pticos basados en el fenmeno de superficie resonancia de plasmn son ambas tcnicas onda evanescente. Esta utiliza una propiedad que se muestra de oro y otros materiales; especficamente que una fina capa de oro en una refraccin alto ndice superficie de cristal puede absorber la luz lser, que produce ondas de electrones (plasmones superficiales) sobre la superficie de oro. Esto se produce slo en un ngulo especfico y longitud de onda de la luz incidente y es altamente dependiente de la superficie del oro, de tal manera que la unin de un analito objetivo a un receptor en la superficie de oro produce una seal medible. Otros biosensores pticos se basan principalmente en los cambios en la absorbancia o fluorescencia de una compuesto indicador apropiado. Los sensores piezoelctricos utilizar cristales que se someten a una transformacin de fase cuando una corriente elctrica se aplica a ellos. Una corriente alterna (AC) produce una situacin
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onda en el cristal a una frecuencia caracterstica. Esta frecuencia es altamente dependiente las propiedades de la superficie del cristal, de tal manera que si un cristal est recubierto con una biolgica elemento de reconocimiento de la unin de un analito diana (grande) a un receptor producir una cambio en la frecuencia de resonancia, lo que da una seal de unin. Biosensores electroqumicos se basan normalmente en la catlisis enzimtica de una reaccin que produce iones. El sustrato sensor contiene tres electrodos, un electrodo de referencia, un electrodo activo y un electrodo sumidero. Un electrodo contador tambin puede estar presente como un ion fuente. El analito se ve involucrado en la reaccin que tiene lugar en la activa superficie del electrodo, y los iones producidos crear un potencial que es restada de que del electrodo de referencia para dar una seal.

Biosensores basados termomtricas y magnticos son raros. Aplicaciones Hay muchas aplicaciones potenciales de los biosensores de varios tipos. El principal requisitos para un enfoque biosensor para ser valiosa en trminos de investigacin y aplicaciones comerciales son la identificacin de una molcula diana, la disponibilidad de un elemento de reconocimiento biolgico adecuado, y el potencial para desechable portable sistemas de deteccin que se prefiere sensibles basados en tcnicas de laboratorio en algunos situaciones. Algunos ejemplos se dan a continuacin: Monitoreo de glucosa en pacientes con diabetes <- motor del mercado histrico Otras metas de salud relacionados con la medicina Aplicaciones medioambientales, por ejemplo, la deteccin de pesticidas y agua de ro contaminantes Teledeteccin de bacterias en el aire, por ejemplo, en la lucha contra el bioterrorismo actividades La deteccin de patgenos La determinacin de niveles de sustancias txicas antes y despus de biorremediacin Deteccin y determinacin de organophospate Cules son los biosensores? Un biosensor es un dispositivo analtico que convierte una respuesta biolgica en una seal elctrica seal (Figura 6.1). "Biosensor" El trmino se utiliza a menudo para cubrir los dispositivos de sensores utilizados en a fin de determinar la concentracin de sustancias y otros parmetros de biolgico inters incluso cuando no utilizan un sistema biolgico directamente. Esta muy amplio

definicin es utilizada por algunas revistas cientficas (por ejemplo, biosensores Elsevier Applied Science) pero no se aplica a la cobertura aqu. El nfasis de este Captulo se refiera enzimas como el material biolgicamente sensible, pero hay que reconocer que otros sistemas biolgicos pueden ser utilizados por los biosensores, por ejemplo, el metabolismo celular completo, la unin del ligando y la reaccin antgeno-anticuerpo. Los biosensores representan un rpido ampliando el campo, en la actualidad, con una tasa estimada de crecimiento de 60% anual, el mayor
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impulso proveniente de la industria de la salud (por ejemplo, 6% del mundo occidental es diabtico y se beneficiaran de la disponibilidad de un biosensor rpido, exacto y sencillo para glucosa), pero con un poco de presin en otras reas, tales como la evaluacin de calidad de los alimentos y monitoreo ambiental. El mercado mundial analtico estimado es de unos 12 mil millones aos -1 de los cuales el 30% se encuentra en el rea de cuidados de la salud. Existe claramente una gran la expansin del mercado potencial como menos de 0,1% de este mercado est actualmente utilizando biosensores. La investigacin y el desarrollo en este campo es amplia y multidisciplinar, que abarca bioqumica, ciencia biorreactor, qumica fsica, electroqumica, electrnica y ingeniera de software. La mayor parte de esta corriente potenciomtrica esfuerzo y preocupaciones biosensores amperomtricos y tiras colorimtricas enzimticas de papel. Sin embargo, todos los principales tipos de transductores son susceptibles de ser examinado a fondo, para su uso en biosensores, en los prximos pocos aos. Un biosensor exitoso debe poseer al menos algunas de las caractersticas siguientes beneficios: 1. El biocatalizador debe ser muy especfico para el propsito de los anlisis, ser estables

bajo condiciones normales de almacenamiento y, salvo en el caso de la enzima colorimtrica tiras y varillas de inmersin (vase ms adelante), muestran una buena estabilidad durante un gran nmero de ensayos (Es decir, mucho mayor que 100). 2. La reaccin debe ser tan independiente de parmetros fsicos tales como agitacin, pH y la temperatura, es manejable. Esto permitira el anlisis de muestras con mnimo pre-tratamiento. Si la reaccin involucra cofactores o coenzimas estos debe, preferiblemente, tambin ser co-inmovilizada con la enzima (vase el captulo 8). 3. La respuesta debe ser exacta, precisa, reproducible y lineal en el til rango analtico, sin dilucin o concentracin. Tambin debe estar libre de ruido elctrico. 4. Si el biosensor se va a utilizar para la monitorizacin invasiva en situaciones clnicas, la sonda debe ser pequea y biocompatible, que no tiene efectos txicos o antignico. Si se trata para ser utilizado en fermentadores debe ser esterilizable. Esto se realiza preferiblemente por tratamiento en autoclave pero sin enzimas biosensor puede soportar actualmente tan drstica en hmedo tratamiento trmico. En cualquier caso, el biosensor no deben ser propensos a la suciedad o proteolisis. 5. El biosensor completo debe ser barato, pequeo, porttil y capaz de ser utilizado por los operadores semicalificados. 6. Debe haber un mercado para el biosensor. Hay un propsito claramente poco el desarrollo de un biosensor si otros factores (por ejemplo, subsidios gubernamentales, la continua empleo de analistas especializados, o la percepcin de los clientes pobres) fomentar el uso de los mtodos tradicionales y desalentar la descentralizacin de las pruebas de laboratorio. La respuesta biolgica del biosensor est determinada por la membrana biocataltica que realiza la conversin de reactante a producto. Enzimas inmovilizadas poseer una serie de caractersticas ventajosas que los hace particularmente aplicable para su uso en tales sistemas. Se puede volver a utilizarse, lo que asegura que la actividad cataltica es igual

para presentar una serie de anlisis. Este es un factor importante en la obtencin reproducible resultados y evita los problemas asociados con la pipeta rplica de la enzima libre
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de otro modo necesario en protocolos de anlisis. Muchas enzimas son intrnsecamente estabilizados por el proceso de inmovilizacin (ver captulo 3), sino que incluso esto no ocurra hay aparente estabilizacin generalmente considerable. Es normal usar un exceso de la enzima dentro del sistema de sensor inmovilizado. Esto da una redundancia cataltica (es decir, h << 1) que es suficiente para garantizar un aumento de la estabilizacin aparente del inmovilizado enzima (vase, por ejemplo, las figuras 3,11, 3,19 y 5,8). Aun cuando existe cierta la inactivacin de la enzima inmovilizada en un perodo de tiempo, esta inactivacin es generalmente estable y predecible. Cualquier decaimiento actividad se incorpora fcilmente en una analtica esquema de interpolacin con regularidad las normas entre los anlisis de muestras desconocidas. Por estas razones, muchos de estos sistemas de enzimas inmovilizadas son reutilizables hasta 10.000 veces durante un perodo de varios meses. Claramente, esto resulta en un ahorro considerable en trminos de coste relativo de las enzimas en el uso de anlisis de enzimas libres solubles. Cuando la reaccin, que se producen en la membrana enzima inmovilizada de un biosensor, es limitado por la velocidad de difusin externa, el proceso de reaccin poseer un nmero de valiosos activos analticos. En particular, se obedecen a la relacin mostrada en la ecuacin 3.27. De ello se deduce que el biocatalizador da un cambio proporcional en la velocidad de reaccin en respuesta a la sustancia reaccionante (sustrato) en un rango de concentracin lineal sustancial, varios veces la K intrnseca m (Vase la figura 3.12 e lnea). Esto es muy til como analito

concentraciones son con frecuencia aproximadamente igual a la K m s de sus enzimas apropiadas que es aproximadamente 10 veces ms concentrada que puede ser determinado normalmente, sin dilucin, por el uso de la enzima libre en solucin. Tambin despus de la ecuacin 3.27 es la independencia de la velocidad de reaccin con respecto al pH, fuerza inica, temperatura y inhibidores. Esto simplemente evita los problemas difciles a menudo se encuentran debido a la variabilidad reales de muestras de anlisis (por ejemplo, caldo de fermentacin, sangre y orina) y externo condiciones. Control de la respuesta biosensor por la difusin externa del analito puede ser alentado por el uso de membranas permeables entre la enzima y el mayor solucin. El espesor de estos se puede variar con efectos asociados en la constante de proporcionalidad entre la concentracin de sustrato y la velocidad de reaccin (es decir aumento de grosor de la membrana aumenta la capa no agitada (d) que, a su vez, disminuye la constante de proporcionalidad, k L , En la ecuacin 3,27). Incluso si la total dependencia de la tasa difusional externa no se alcanza (o alcanzable), cualquier aumento en la dependencia de la velocidad de reaccin en la difusin externa o interna causar una reduccin en la dependencia del pH, la fuerza inica, la temperatura y las concentraciones de inhibidor. Figura 6,1. Diagrama esquemtico que muestra los componentes principales de un biosensor. La biocatalizador (a) convierte el sustrato en producto. Esta reaccin est determinada por el
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transductor (b) que la convierte en una seal elctrica. La salida del transductor es amplificada (c), procesada (d) y se muestra (e). La parte clave de un biosensor es el transductor (que se muestra como el 'cuadro negro' en la Figura 6.1)

que hace uso de un cambio fsico que acompaa a la reaccin. Esto puede ser 1. la salida de calor (o absorbido) por la reaccin (biosensores calorimtricos), 2. cambios en la distribucin de cargas que causan un potencial elctrico al ser producida (biosensores potenciomtricos), 3. movimiento de los electrones producidos en una reaccin redox (biosensores amperomtricos), 4. salida de luz durante la reaccin o una diferencia entre la absorbancia de luz reactivos y productos (biosensores pticos), o 5. los efectos debidos a la masa de los reactantes o productos (piezo-elctricos biosensores). Hay tres llamadas "generaciones" de los biosensores, los biosensores de primera generacin en el producto normal de la reaccin se difunde hacia el transductor y hace que la elctrica respuesta, la segunda generacin de biosensores especficos que implican mediadores entre la reaccin y el transductor con el fin de generar una respuesta mejorada, y la tercera generacin biosensores donde la reaccin misma provoca la respuesta y ningn producto o mediador difusin est directamente involucrado. La seal elctrica desde el transductor a menudo es baja y superpuestas a una relativamente alta y ruidosos (es decir, que contiene un componente de seal de alta frecuencia de una aparentemente naturaleza aleatoria, debido a las interferencias elctricas o generado dentro de la electrnica componentes del transductor) de referencia. El procesamiento de seal normalmente implica restando una "referencia" de la seal de referencia, derivada de un transductor similar sin biocataltica membrana, a partir de la seal de la muestra, la amplificacin de la seal de diferencia resultante y electrnicamente filtrado (suavizado), el ruido de la seal no deseada. La relativamente naturaleza lenta de la respuesta biosensor facilita considerablemente el problema de ruido elctrico filtracin. La seal analgica producida en esta etapa puede ser la salida directa, pero es generalmente convertida en una seal digital y se pasa a una etapa microprocesador donde los datos son

procesada, convertida a unidades de concentracin y de salida a un dispositivo de visualizacin o almacn de datos. Biosensores potenciomtricos
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Biosensores potenciomtricos hacer uso de electrodos selectivos de iones para transducir la reaccin biolgica en una seal elctrica. En trminos simples esto consiste en una enzima inmovilizada membrana que rodea la sonda de un pH-metro (Figura 6.3), donde la reaccin catalizada genera o absorbe iones de hidrgeno (Tabla 6.2). La reaccin contiguo a la membrana delgada de vidrio de deteccin causa un cambio en el pH que puede ser leer directamente desde la pantalla del pH-metro de. Tpica de la utilizacin de dichos electrodos es que el potencial elctrico se determina en una impedancia muy alta que permite efectivamente cero el flujo de corriente y sin causar interferencia con la reaccin.
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Figura 6.3. Un biosensor potenciomtrico simple. Una membrana semipermeable (a) rodea el biocatalizador (b) atrapado al lado de la membrana de vidrio activo (c) de un pH sonda (d). El potencial elctrico (E) se genera entre el interior de Ag / AgCl electrodo (f) baado en HCl diluido (g) y un electrodo de referencia externo (h). Hay tres tipos de electrodos selectivos de iones que son de uso en biosensores: 1. Los electrodos de vidrio para cationes (por ejemplo, electrodos de pH normales) en el que la deteccin elemento es una membrana muy fina hidratada cristal que genera una transversal potencial elctrico debido a la concentracin dependiente de la competencia entre los tudes de sitios de unin especficos. La selectividad de esta membrana se determina por la composicin del vidrio. La sensibilidad a H + es mayor que alcanzable para NH 4 +

, 2. Los electrodos de vidrio de pH recubierto con una membrana permeable a los gases selectivo para CO 2 , NH 3 oH 2 S. La difusin del gas a travs de esta membrana produce un cambio en pH de una solucin de deteccin entre la membrana y el electrodo que es luego determinado. 3. De estado slido electrodos donde se sustituye la membrana de vidrio por una membrana delgada de un conductor de iones especfico a partir de una mezcla de sulfuro de plata y una de plata haluro. El electrodo de yoduro es til para la determinacin de I en la peroxidasa reaccin (Tabla 6.2c) y responde tambin a los iones cianuro. Tabla 6.2. Las reacciones que implican la liberacin o absorcin de iones que pueden ser utilizados por los biosensores potenciomtricos. (A) H + cacin, glucosa oxidasa H 2 O D-glucosa + O 2 D-glucono-1 ,5-lactona + H 2 O 2 D-gluconato + H + [6,3] penicilinasa penicilina

peniciloico cido H + + [6,4] ureasa (pH 6,0) un H 2 NCONH 2 +H 2 O + 2H + 2NH 4 + + CO 2 [6,5] ureasa (pH 9,5) b H 2 NCONH 2 + 2H 2 O 2NH 3 + HCO 3 +H + [6,6] lipasa lpidos neutros + H 2 O glicerol + cidos grasos + H

+ [6,7] (B) NH 4 + cacin,

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L-amino cido oxidasa L-aminocido + O 2 +H 2 O ceto cido + NH 4 + +H 2 O 2 [6,8] asparaginasa ` L-asparagina + H 2 O L-aspartato + NH 4 + [6,9] ureasa (pH 7,5) H 2 NCONH 2 + 2H 2 O+H + 2NH 4

+ + HCO 3 [6.10] (C) I anin, peroxidasa H 2 O 2 + 2H + + 2I Yo 2 + 2H 2 O [6,11] (D) CN anin, b-glucosidasa amigdalina + 2H 2 O 2glucose + H + benzaldehdo + + CN [6.12] un Tambin se puede utilizar en NH 4 + y CO 2 (Gas) biosensores potenciomtricos.

b Tambin se puede utilizar en un NH 3 (Gas) biosensor potenciomtrico. La respuesta de un electrodo selectivo de iones est dada por (6.5) donde E es el potencial medido (en voltios), E 0 es una constante caracterstica del ionselectivo / externo sistema de electrodos, R es la constante de los gases, T es la temperatura absoluta (K), z es la carga inica firmado, F es el Faraday, y [i] es la concentracin de la libre no complejadas especies inicas (estrictamente, [i] debe ser la actividad del ion pero al Las concentraciones que se encuentran normalmente en biosensores, esto es efectivamente igual a la concentracin). Esto significa, por ejemplo, que hay un aumento en la electricidad potencial de 59 mV por cada aumento de diez aos en la concentracin de H + a 25 C. La dependencia logartmica de la potencial de la concentracin inica es responsable tanto la amplia gama de anlisis y la baja precisin y precisin de estos sensores. Su rango normal de deteccin es 10 -4 - 10 -2 M, aunque una minora son diez veces ms sensible. Tiempo de respuesta tpico es entre uno y cinco minutos, permitiendo hasta 30 analiza cada hora. Los biosensores que implican H + liberacin o utilizacin requieren el uso de muy dbilmente soluciones tamponadas (es decir, <5 mM) si un cambio significativo en el potencial se ha de determinar. La relacin entre el cambio de pH y la concentracin de sustrato es complejo, incluyendo

otros tales efectos no lineales como la variacin de actividad de pH y tamponamiento protena. Sin embargo, condiciones a menudo se pueden encontrar en donde existe una relacin lineal entre la aparente cambio en el pH y la concentracin de sustrato. Un desarrollo reciente de ion selectivo
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electrodos es la produccin de iones selectivos transistores de efecto de campo (ISFET s) y sus uso como biosensor ligados a enzimas transistores de efecto de campo (ENFET s, Figura 6.4). Enzima Las membranas se recubren sobre las puertas selectivos de iones de estos dispositivos electrnicos, el biosensor responder al cambio de potencial elctrico a travs de la corriente de salida. Por lo tanto, estos son dispositivos potenciomtricos aunque producen directamente los cambios en la corriente elctrica. La principal ventaja de estos dispositivos es su tamao extremadamente pequeo (0,1 mm << 2 ) Que permite barato producido en masa utilizando la tecnologa de fabricacin de circuitos integrados. Como ejemplo, una urea sensible al FET (ENFET que contiene ureasa unida con un electrodo de referencia que contiene glicina unido) se ha demostrado que slo muestran una variacin de 15% en respuesta a urea (0,05 - 10,0 mg ml -1 ) Durante su tiempo de vida activa de un mes. Varios analitos puede ser determinado por biosensores miniaturizados que contienen matrices de ISFETs y ENFETs. La sensibilidad de los FETs, sin embargo, puede ser afectada por la composicin, fuerza inica y concentraciones de las soluciones analizadas. Figura 6,4. Diagrama esquemtico de la seccin a lo ancho de una ENFET. La real dimensiones de la zona activa es de aproximadamente 500 mm de largo por 50 mm de ancho por 300 mm de espesor.

El cuerpo principal del biosensor es un chip de silicio de tipo p con dos reas de silicio de tipo n; la negativo de la fuente y el drenaje positivo. El chip est aislada mediante una capa delgada (0,1 mm de espesor) de slice (SiO 2 ) Que forma la puerta del FET. Por encima de esta puerta es una delgada igualmente capa de H + Material sensible (por ejemplo, xido de tntalo), una membrana selectiva de iones de proteccin, el biocatalizador y la solucin de analito, que est separada de las partes sensibles de la FET por un material inerte de encapsulacin de poliimida fotopolmero. Cuando se aplica un potencial entre los electrodos, una corriente fluye a travs del FET dependiente en lo positivo potencial detectado en la puerta selectiva de iones y su consecuente atraccin de electrones en la capa de agotamiento. Esta corriente (I) se compara con el de una similar, pero no ISFET cataltica inmerso en la misma solucin. (Tenga en cuenta que la corriente elctrica es, por convencin, en la direccin opuesta al flujo de electrones)