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C u r i o s o s p o r l a s C i e nc i a s

BIO MAX
vecinas. Sin duda, las seales moleculares tambin juegan un papel determinante en el marco de la regeneracin de tejidos. Congestin en el  flujo sanguneo En Alemania, las enfermedades cardiovascu lares devenidas, por ejemplo, en infartos de miocardio, causan ms de la mitad de todos los fallecimientos. Los infartos se deben a una escasa irrigacin del msculo cardaco o miocardio, provocada por un bloqueo o estre chamiento de las arterias coronarias. A raz

El corazn humano es en construccin y fun cionalidad una obra maestra de la naturaleza. Como centro del sistema circulatorio reaccio na ante cualquier exigencia, proveniente in cluso de los rincones ms recnditos de nuestro cuerpo. Los vasos sanguneos de mayor dimetro, las arterias y las venas, son simples vas de transporte, mientras que los capilares representan la verdadera va de suministro. La longitud total estimada de los vasos sanguneos es de 130.000 kilmetros. Junto con el corazn, constituyen el primer sistema orgnico funcional que se forma en

rganos del laboratorio celular

el embrin. El pequeo corazn ya comienza a latir en la cuarta semana de embarazo, y lo har unas 2.500 millones de veces durante un ciclo de vida normal. Los principales componentes celulares son las clulas del miocardio (cardiomiocitos), responsables de la funcin de bombeo del corazn, las clulas endoteliales, que revis ten el interior de ventrculos, aurculas y arte rias coronarias, y las clulas del msculo liso, que regulan el dimetro de los vasos. Todas stas surgen del mesodermo, la capa germi nal media del embrin temprano. El proceso de diferenciacin y especializacin en un tipo de tejido especfico es extremadamente com plejo y todava no se comprende en detalle. Lo controlan un sinnmero de seales moleculares que al unirse a receptores (antenas en la superficie de las clulas diana) desencadenan una cascada de reacciones bioqumicas en el interior de la clula. Esto genera numerosos cambios ya sea en su metabolismo, su actividad locomotriz o en los puntos de contacto con clulas

Cmo la bioingeniera genera tejidos artificiales

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 IMP Bad Nauheim

1 Los cientficos estudian la formacin de vasos colaterales en el modelo animal. Las imgenes tomadas con una tcnica especial, muestran la irriga cin sangunea de las patas traseras de un ratn antes del cierre de una arteria central en la pierna izquierda (a) e inmediatamente despus de inducir experimentalmente la oclusin o cierre de sta (b). Debido a la formacin de vasos colaterales, despus de siete (c) o de 21 das (d) se incrementa nota blemente el flujo de sangre en la pierna.

k de la falta de nutrientes y oxgeno, el mscu formando circuitos de derivacin, llamados

lo cardaco afectado muere transformando su estructura durante el proceso. Se forma la denominada cicatriz miocrdica, que ya no contribuye a la funcin de bombeo del cora zn. El dao en el tejido es permanente, ya que la musculatura del corazn no se puede regenerar. Los cientficos suponen que las clulas del miocardio terminan su ciclo de divisiones una vez que el corazn ha conclui do su desarrollo y ha alcanzado su tamao definitivo. Por ende, hace tiempo estn bus cando nuevos enfoques para un eficaz trata miento de los infartos de miocardio. En el Instituto Max Planck de Bad Nauheim, Wolfgang Schaper y sus colaboradores exa minan, entre otras cosas, la regulacin de la regeneracin de vasos sanguneos. En principio, el cuerpo podra evitar las conse cuencias negativas de una oclusin vascular

vasos colaterales. Estos se forman por divi sin celular y transformacin del tejido alre dedor de la oclusin a partir de la red de mi cro arterias preexistentes. As se generan arterias realmente funcionales que, en condi ciones favorables, pueden sustituir completa mente la arteria obstruida (Fig. B). Pero en realidad, el crecimiento de estos bypass naturales es en la mayora de los casos de masiado lento para evitar que el corazn su fra daos. Sin embargo, los investigadores de Bad Nauheim pudieron demostrar que ciertos factores biolgicos aceleran en gran medida el crecimiento vascular y facilitan el desarro llo de un vaso colateral efectivo que, en el caso ideal, compensa ntegramente el flujo sanguneo (Fig. A). Como muestran recien tes estudios elaborados por investigadores del instituto Max Planck de Colonia, esto no slo se aplica al sistema cardaco o a la en fermedad oclusiva arterial perifrica (como por ejemplo la pierna de fumador), sino tam bin al cerebro. Taxi gentico al  interior de la clula Los factores de crecimiento descritos se pueden inyectar directamente en el tejido con fines teraputicos o ser producidos local mente, insertando el gen correspondiente en las clulas; a este procedimiento se lo llama terapia gnica. Para ello, los cientficos se valen de diferentes vehculos de trans porte: una posibilidad es incorporar el gen de inters en un plsmido bacteriano que, a su vez, se inyecta en el tejido afectado, por ejemplo, en el msculo cardaco. Las clulas musculares, a diferencia de las neuronas, incorporan ADN plasmdico puro del medio. Es posible incrementar todava ms la veloci dad de transferencia cuando se recubre el material gentico por diminutos glbulos de grasa llamados liposomas. Por su similar composicin qumica, estos contenedores pueden fundirse fcilmente con la membrana

celular liberando su contenido en el interior de la clula. Si todo transcurre sin incon venientes, la clula receptora transportar parte de este material gentico al ncleo, donde el plsmido permanecer fuera del cromosoma y ser utilizado como patrn de sntesis de la protena teraputica, durante un perodo que generalmente dura entre una y dos semanas. Los virus son vectores mucho ms efectivos como medio de transporte, porque ya tienen mecanismos naturales para descargar su material gentico en las clulas del hospe dante. Mediante ingeniera gentica, los cientficos lograron desactivar el agente pa tgeno del virus y reconstruirlo de tal modo, que pueden introducir un gen particular den tro de las clulas diana sin generar los snto mas especficos de la enfermedad. En gene ral, los retrovirus infectan slo a clulas con capacidad de dividirse. Una excepcin entre ellos son los lentivirus, a los que pertenece el virus del SIDA, que son capaces de infectar clulas que no se dividen. Incluso los denomi nados virus adeno-asociados se ofrecen co mo un vehculo de transporte. Dado que son mucho ms pequeos, pueden infiltrar el material gentico en las clulas muy eficaz mente. El virus del herpes simple que causa las versculas labiales es especialmente ade cuado para transportar genes al interior de las clulas nerviosas. Todos estos virus se incorporan al genoma de la clula husped, dando lugar a una expresin prolongada del gen de inters. Pero esta integracin al geno ma tambin conlleva un riesgo, porque el vi rus puede insertarse en un gen activo cau sando su destruccin o bien activarlo, si se tratara de un gen del cncer (oncogn). Esto puede suceder en una de cada 10.000 clulas genticamente modificadas. Aunque estas estimaciones debern ser confirmadas por datos clnicos, es cierto que el riesgo aumen ta proporcionalmente con el nmero de clu las alteradas.

Oclusin

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1 Despus de la oclusin artificial de una arteria principal se forman numerosos vasos colaterales que restablecen el flujo sanguneo.

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En muchos estudios sobre la angiognesis teraputica, es decir, la formacin de vasos sanguneos, se utilizan ante todo adenovirus. Se los conoce como los agentes patge nos de las enfermedades respiratorias. Al igual que los plsmidos, permanecen fuera del cromosoma y durante un perodo de entre una y dos semanas logran la expresin del gen en las clulas husped. Mientras tanto, son numerosos los estudios clnicos que de muestran fehacientemente la inocuidad del uso de adenovirus. Desde enero de 2004 se aprob para su comercializacin una terapia gnica desarrollada por cientficos chinos, que se basa en adenovirus. Apunta a la cura cin de una forma especfica de tumores en cabeza y cuello. Sin embargo, los cientficos de Bad Nauheim dudan de que la terapia gnica para la formacin de vasos sangu neos tenga resultados positivos inmediatos. Aos de investigacin bsica han demostra do que no uno, sino innumerables factores intervienen en su crecimiento. Sera aconse jable aplicar directamente una fbrica de protenas integral, como lo son por ejemplo los leucocitos. Schaper y sus colaboradores demostraron que un tipo especfico de glbu los blancos, los monocitos, de hecho real mente estimulan el crecimiento de los vasos colaterales o arteriognesis. Dos en Uno An ms interesante sera ampliar el poten cial regenerativo del ser humano. Nuestro cuerpo logra soldar un hueso roto o renovar la piel despus de una quemadura solar, pero carece de la capacidad de regenerar extremi dades u rganos completos. Sin embargo, una serie de organismos multicelulares logran tan sorprendente regeneracin. Ya en 1742, el naturalista suizo Abraham Trembley compro b en sus experimentos con hidras de agua dulce, que los especmenes mutilados perma necan vivos e incluso se regeneraban en Ma r c o l e g a l
La Ley para Garantizar la Proteccin de los Embriones en Relacin con la Importacin y el Uso de Clulas Madre Embrionarias Humanas prohbe la produccin de clulas madre em brionarias en Alemania. A su vez permite la importacin, bajo determinadas condiciones: las lneas celulares deben haber sido generadas antes de la fecha lmite (sta haba sido poster gada durante una reciente votacin en el parla mento federal de Alemania al 1 de mayo de 2007) y slo podrn utilizarse para investigacio nes relevantes que no cuenten con otra alterna tiva para la experimentacin; los donantes de vulos y esperma no deben haber recibido bene ficios econmicos a cambio y, finalmente, todas las importaciones deben ser aprobadas por el Instituto Robert Koch.

Ma e s t r o s d e l a r e g e n e r ac i n
Los humanos tienen una muy limitada ca pacidad de regeneracin. Otros organis mos, como las salamandras y las planarias, pueden regenerar extremidades o incluso nuevos individuos a partir de un fragmento. Para eso reviven una serie de mecanismos que son importantes en el desarrollo em brionario. As, el 20% de las clulas de una planaria son clulas madre, que siguen siendo capaces de formar cualquier tipo de tejido. Cuando se daa a los tejidos, estas clulas madre se acumulan en la zona le sionada y forman una pequea esfera de clulas indiferenciadas, a partir de la cual se regeneran los rganos y tejidos. Usando modernas tcnicas de biologa molecular, los cientficos estn tratando de identificar las seales que desempean un papel determinante en este proceso y que, potencialmente, podran utilizarse para aumentar la capacidad de regeneracin en seres humanos. Porque, aunque exista una brecha evolutiva de varios millones de aos entre estos organismos y los humanos, se observan sorprendentes simi litudes moleculares: as, el coctel mole cular obtenido del mun de una salaman dra denominado extracto regenerativo, es capaz de desdiferenciar las clulas del corazn de un mamfero (que se consideran incapaces de dividirse o diferenciarse) y lograr una nueva divisin celular.

animales completos. En 1768, el italiano Laz zaro Spallanzani describi por primera vez la regeneracin de las extremidades completas en salamandras (vase el recuadro supe rior). stas, al igual que los peces cebra, in cluso pueden regenerar partes del corazn. Investigadores de las ms diversas discipli nas cientficas (desde la biomedicina, los biomateriales, la ingeniera y la biologa celu lar, hasta las diferentes disciplinas quirrgi cas) cooperan juntos para activar la capacidad regenerativa de nuestro cuerpo implantando clulas vivas o reemplazando el tejido daado por tejido constructivo. Una base fundamen tal para el xito de esta tecnologa llamada tissue engineering (en adelante ingeniera de tejidos), es el cultivo de clulas. El ameri cano Ross G. Harrison logr cultivar clulas nerviosas in vitro por primera vez en 1907. En la dcada de 1960, los cientficos fueron ca paces de producir capas de clulas a partir de clulas individuales tomadas del cuerpo. En 1975, lograron reproducir clulas de la piel humana fuera del cuerpo y seis aos ms tarde se realizaron los primeros trasplantes de piel autlogos (cultivados a partir de clu las del mismo paciente) en pacientes con quemaduras graves. Mientras tanto, casi no

hay un tipo de clula que no se haya intentan do reproducir in vitro. Clulas con potencial Estas clulas pueden ser inyectadas en rga nos y tejidos enfermos, degenerados o par cialmente destruidos, reduciendo los defec tos, mejorando el funcionamiento o, incluso, sanando completamente: un enfoque prome tedor, incluso para la terapia cardaca. La mentablemente, es bastante difcil hacer crecer tejido cardaco, ya que en general, las clulas adultas (diferenciadas) ya no se divi den. Una alternativa podra ser el uso de c lulas madre. Las clulas madre embrionarias son pluripotentes, es decir, que tienen la capacidad de formar cualquier tejido, aunque ya no otro organismo completo. Se las obtie ne del interior de la estructura embrionaria, el blastocito, y se las transfiere a placas de cultivo recubiertas con una capa de clulas de tejido conectivo y una solucin especial de nutrientes. All se multiplican hasta llegar a un centenar de clulas, que a su vez se transfieren a nuevas placas de cultivo, de modo que a partir de unas pocas clulas madre embrionarias finalmente se obtienen varios millones: todas ellas capaces de dife renciarse en cualquier tipo de clula con el

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Universidad de Colonia han logrado sustituir de manera selectiva en ratones, parte de una cicatriz miocrdica por clulas madre embrio narias. Demostraron que, efectivamente, las nuevas clulas se acoplaron funcionalmente a los tejidos musculares preexistentes y que incluso se tonific el pequeo corazn de ra tn. En contraste, investigaciones clnicas demuestran que si bien los implantes de mioblastos (clulas musculares an no dife renciadas) mejoraron la funcin cardaca, los pacientes sufrieron trastornos del ritmo car daco (arritmias). Al parecer, las clulas im plantadas no fueron capaces de conectarse con las clulas vecinas para darle continui dad al impulso durante la transmisin de los latidos; algo esencial para lograr que el ms culo del corazn se contraiga de manera co ordinada.

MPI Bad Nauheim

k estmulo adecuado. Neurofisilogos de la

Ratones que brillan verde Mientras la obtencin de clulas madre embrionarias es ticamente controvertida (vase el recuadro de la pgina 3), los procesos para obtener clulas madre adultas no son cuestionados. Pero la pregunta acerca de si stas ltimas son realmente una alternativa, contina sin respuesta; los datos experimentales son demasiado contradicto rios. Hace no tantos aos, algunos investiga dores todava afirmaban que las clulas de mdula sea podan diferenciarse en una variedad de tipos de clulas despus del trasplante (vase Biomax, nmero 10). Mientras tanto, hay cada vez ms dudas; se gn estudios recientes, las clulas madre adultas extradas de la mdula sea y luego implantadas en el corazn, no se convierten en clulas musculares, sino nicamente en diversos tipos de clulas sanguneas. En el Instituto Max Planck de Bad Nauheim, los cientficos han estudiado intensamente el papel que desempean las clulas madre de mdula sea en el crecimiento de los vasos sanguneos. Con el fin de identificarlas en el tejido, los investigadores implantaron clulas madre adultas de mdula sea con luminis cencia verde en los animales de laboratorio, y luego indujeron artificialmente la formacin de vasos colaterales. Las clulas madre de mdula sea fueron tomadas de ratones transgnicos, a los que se les haba incorpo rado el gen de una medusa que codifica una protena verde fluorescente. La pregunta era si estas clulas madre se incorporaran a la pared de los vasos colaterales, para lo cual examinaron ms de tres mil muestras de teji

do bajo el microscopio. Pero no encontraron ni una clula verde-luminosa en dichas pare des que pudiera haber derivado de las clulas madre que circulaban en sangre. En lugar de eso descubrieron que en el entorno inmedia to de las paredes de los vasos colaterales haba principalmente monocitos y linfocitos T, que por su resplandor verde evidenciaban su origen transgnico (Fig. C). Sin embargo, los expertos detectaron que los monocitos al menos estimulaban el crecimiento vascular. Repuestos salidos  del biorreactor La ingeniera de tejidos abre oportunidades sin precedentes en la produccin de vasos sanguneos artificiales. De una pequea biopsia de los vasos de un paciente se ex traen las clulas adecuadas para luego dis ponerlas en medios de cultivo, donde se multiplican mediante la adicin de factores de crecimiento. De una matriz biolgica plana (sustrato de crecimiento) surge una malla tridimensional de tejido conectivo a partir de la cual los bioingenieros pueden elaborar un verdadero tubo. A continuacin se siembran clulas de msculo liso en el exterior y clu las endoteliales en el interior. En un biorreac tor especialmente desarrollado que propor ciona los nutrientes y el oxgeno necesarios, las clulas comienzan a formar un tejido funcional. Para acostumbrar al tejido a las condiciones de estrs fisiolgico que genera el flujo de la sangre, se lo expone a un flujo pulsante del medio de cultivo. Los nuevos vasos as construidos, resisten una presin hidrosttica interna experimental de 1000 mm Hg, lo que equivale de 6 a 8 veces la presin arterial sistlica: un resultado espe ranzador para cientos de miles de pacientes que necesitan un bypass.

Las clulas madre de medula sea que brillan de color verde fluorescente, se renen en torno a una arteria colateral en crecimiento. No son incorporadas a la estructura del vaso.

Sin embargo, hacer crecer rganos comple tos tan complejos como un corazn, es un desafo mucho mayor. No obstante, la de manda clnica es enorme. Los pacientes que necesitan un trasplante de corazn a veces permanecen durante varios aos a la espera de un donante. E incluso cuando hay un rga no disponible, deben sortearse varios obst culos inmunolgicos. Dado que el sistema inmunolgico rechaza los rganos exgenos, es necesario suprimirlo de por vida mediante medicamentos, a veces a expensas de efec tos secundarios que en parte son significati vos. En general, un rgano trasplantado no se mantiene funcional por ms de una dcada. Para que estos pacientes tengan nuevas perspectivas, an debern hacerse grandes esfuerzos en el campo de la ingeniera de tejidos.

pie de impre n t a
Sociedad Max-Planck, departamento de informa cin y relaciones pblicas, Hofgartenstrae 8, 80539 Mnchen / e-mail: presse@gv.mpg.de Redaccin: Dra. Christina Beck Traduccin: Astrid Wenzel Diseo: www.haak-nakat.de La Versin en espaol se hizo con el apoyo del DAAD y con fondos del Ministerio de Relaciones Exteriores de Alemania.

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