6.2.

2 DESCRIPCIN Y FUNCIONAMIENTO DE UN ESPECTROFOTMETRO

En la qumica moderna es muy importante la espectrofotometra en particular (aunque no en forma exclusiva) en el rea orgnica. Es una herramienta de rutina para detectar grupos funcionales, identificar compuestos y analizar mezclas. Los instrumentos que registran espectros de infrarrojo se encuentran en modelos comerciales y son fciles ce manejar en forma rutinaria. Al describir la estructura de una molcula en trminos de longitudes y ngulos de enlace fijos, describimos una situacin probabilstica. Imaginemos el modelo de una molcula compleja construido con esferas de madera conectadas entre s por medio de resortes y suspendido de un alambre. Al darle un golpe ala molcula se convertir en un objeto vibrante con todos sus tomos en movimiento, uno con respecto a otro, y probablemente con docenas de resortes alargndose, comprimindose y doblndose. Este movimiento que al principio puede parecer muy complicado, se puede separar en una serie ce modos vibratorios individuales INSTRUMENTACIN PARA LA ESPECTROFOTOMETRA Un espectrofotmetro es un instrumento para medir la transmitancia o la absorbancia de una muestra en funcin de una longitud de onda determinada; tambin se pueden realizar las mediciones de una serie de muestras en una sola longitud de onda. Estos instrumentos se pueden clasificar en manuales o de registro, de simple o doble haz. En la prctica, los instrumentos de un solo haz, por lo general, se operan en forma manual y los instrumentos de doble haz poseen el registro automtico de los espectros de absorcin, pero tambin es posible registrar un espectro con los de un solo haz. Una clasificacin alternativa se basa en la regin espectral y as hablamos de espectrofotmetros de infrarrojo o de ultravioleta, etc. La comprensin completa del funcionamiento de los espectrofotmetros requiere conocimientos detallados de ptica y de electrnica, los cuales estn fuera del alcance de este libro. A pesar de esto, es posible que el estudiante en esta etapa comprenda qu es lo que hacen los instrumentos. Los qumicos pueden obtener buenos datos con los espectrofotmetros modernos combinando los conocimientos fundamentales generales con las instrucciones detalladas que proporcionan los fabricantes en forma de manuales Primero hablaremos de lo espectrofotmetros manuales de un solo haz, porque esto proporcionar los antecedentes necesarios para apreciar la capacidad de los instrumentos ms complejos.

Espectrofotmetros de un solo haz Los componentes esenciales de un espectrofotmetro, los cuales se presentan en forma esquemtica en la figura 14.8, son los siguientes: 1. Una fuente de energa radiante continua que cubre la regin del espectro en la cual opera el instrumento. 2. Un monocromador, que es una parte del instrumento que asla una banda angosta de longitud de onda de todo el espectro emitido por la fuente (por supuesto que no se alcaza a obtener una estricta mono-cromacin). 3. Un recipiente para la muestra. 4. Un detector, que es un transductor que convierte la energa radiante en una seal elctrica. 5. Un amplificador y un circuito asociado que traduce la seal elctrica a la lectura apropiada. 6. Un sistema de lectura de la medicin que pone de manifiesto la magnitud de la seal elctrica.

Esquema de un espectrofotmetro convencional de haz simple Los espectrofotmetros de uno o de dos haces y los instrumentos que operan en diversas regiones del espectro tienen estos componentes esenciales, aunque los detalles son muy diferentes en muchos casos. De acuerdo con el objetivo que nos fijamos antes, explicaremos estos componentes en forma breve. Fuente de energa radiante La fuente de energa radiante acostumbrada para la regin visible del espectro, as como para el infrarrojo cercano y el ultravioleta cercano, es una lmpara incandescente con un filamento de tungsteno. En condiciones de operacin ordinarias, la capacidad de esta lmpara de tungsteno es til en el rango de 325 o 350 nm a 3 m. La energa que emite el filamento caliente vara con la longitud de onda, como se puede observar en la figura 14.9. La distribucin de la energa est en funcin de la temperatura del filamento, la cual depende a su vez del voltaje que se suministra a la lmpara; un incremento en la temperatura de operacin aumenta la energa total que se produce y traslada el pico de la figura 14.9 hacia una longitud de onda ms corta. (En la prctica esto no se puede utilizar para obtener ms radiacin ultravioleta debido a la duracin del filamento de la lmpara a temperaturas ms elevadas). Por esta razn el voltaje de la lmpara debe ser estable; el instrumento tiene incorporado un regulador de voltaje. El calor que produce una lmpara de tungsteno puede ser problemtico; con frecuencia el lugar en donde se coloca la lmpara tiene una chaqueta por la que circula agua o posee un ventilador para prevenir que se caliente la muestra u otros componentes del instrumento.

Por debajo de los 350nm la potencia de una lmpara de tungsteno es inadecuada para los espectrofotmetros y se debe emplear una fuente diferente. La mas comn es un tubo de descarga de hidrogeno (o deuterio) el cual se utiliza de 175 a 375 400nm. Cuando una descarga entre dos electrodos excita la emisin por medio de un gas como el hidrgeno, se obtiene un espectro de lneas que es caracterstico del gas, siempre y cuando la presin sea relativamente baja. Cuando aumenta la presin del hidrgeno, las lneas se ensanchan y con el tiempo se sobreponen, hasta que a presiones relativamente altas emiten un espectro continuo. La presin que se requiere en un tubo de descarga de hidrgeno es menor que la que se necesita con otros gases; adems el tubo funciona a temperaturas ms bajas. La cubierta que se emplea es de vidrio, pero para que pase la radiacin ultravioleta est provista de una ventana de cuarzo. Para los tubos de descarga gaseosos se requiere una fuente de alto voltaje. En algunos espectrofotmetros se pueden intercambiar las fuentes de tungsteno y de hidrgeno para cubrir las regiones visible y ultravioleta en las que opera el instrumento. La fuente de radiacin de los espectrofotmetros de infrarrojo, que operan de 2 a 15 m, por lo general es la lmpara 2

incandescente de Nernst. Esta es una varilla pequea que tiene apariencia de cermica, fabricada con una mezcla especial de xidos metlicos y sellada con platino en los extremos. La varilla a temperatura ambiente no es conductora, pero cuando se calienta entra en un estado de conduccin despus del cual un flujo de corriente mantiene una incandescencia que es rica en radiacin infrarroja. El monocromadar Este es un instrumento ptico que sirve para separar de una fuente de radiacin continua un haz de elevada pureza espectral y de cualquier longitud de onda. Los componentes esenciales de un monocromador son rendijas y un elemento dispersor. La radiacin de la fuente se enfoca sobre la rendija de entrada y es colimada por una lente o por un espejo para que el haz llegue paralelo al elemento dispersor, el cual puede ser un prisma o una rejilla de difraccin. Al mover el prisma o la rejilla las fracciones del espectro que produce el elemento dispersor se enfocan sobre la rendija de salida, desde donde se dirigir hacia la muestra siguiendo un patrn ptico adicional. El estudiante podr recordar, de sus conocimientos de fsica elemental, la accin que tiene un prisma de dispersar la luz blanca en un espectro. Cuando un haz de luz pasa a travs de la interfase que est entre dos medios diferentes, como aire y vidrio, ste se desva y a esto se le conoce como refraccin. El grado de desviacin depende del ndice de refraccin del vidrio. Este ndice de refraccin vara con la longitud de onda de la luz; los azules se desvan ms que los rojos, como se muestra en la figura 14.10. Como resultado de la variacin del ndice de refraccin con la longitud de onda, el prisma es capaz de dispersar o de separar un haz de luz blanca en un espectro en el cual se pueden percibir por separado los diversos colores que forman la luz blanca. Las radiaciones de infrarrojo y ultravioleta se dispersan de la misma forma, pero no se utilizan las palabras luz y color y el material con el que est hecho el prisma no es vidrio. Para elegir el material hay que evaluar el poder dispersante y la transparencia en la regin de longitud de onda que se desea, junto con otros factores. Los espectrofotmetros que abarcan principalmente la regin visible del espectro tienen prismas de vidrio, mientras que el cuarzo es el material del prisma de los instrumentos que abarcan el ultravioleta y el infrarrojo cercano, as como el visible; los espectrofotmetros .de infrarrojo por lo comn tienen prismas de sal de piedra.

La pureza espectral de la radiacin que emerge del monocromador depende del poder del elemento dispersor y del ancho de la rendija de salida. Como primera idea podramos suponer que la monocromacin se puede lograr como la deseamos al disminuir lo suficiente el ancho de la rendija, pero ste no es el caso. Con el tiempo, la rendija ser tan estrecha que los efectos de difraccin en sus orillas slo ocasionarn una prdida de la energa radiante sin aumentar la pureza del espectro (a esto se le llama lmite de difraccin Rayleigh); en realidad, antes de llegar a este limite en un espectrofotmetro tpico, no pasa suficiente energa a travs de una rendija estrecha y el detector no se activa. Con los monocromadores de prisma no se obtiene el mismo grado de monocromacin a lo largo de todo el espectro con una abertura de rejilla. La dependencia que tiene el prisma con respecto a la longitud de onda es tal que las longitudes de onda no se dispersan de manera uniforme en el espectro. La dispersin es mayor para las longitudes de onda ms cortas y por lo tanto en este caso las rendijas anchas alcanzarn el mismo grado de pureza espectral que el que logran las angostas a longitudes de onda mayores. La figura 14.11 es un diagrama esquemtico del sistema ptico de un espectrofotmetro de un solo haz con un prisma de cuarzo. La parte posterior del prisma est cubierta con una superficie metalizada reflejante para que la radiacin pase dos veces a travs del elemento dispersor. Esto no slo aumenta la dispersin, sino que tambin es de gran conveniencia geomtrica. Una rejilla de difraccin (reflexin) se hace trazando un gran nmero de lneas paralelas sobre la superficie pulida de un metal como el aluminio. Para la regin de infrarrojo hay cerca de 1500 a 2500 lneas/pulgada; para las regiones de ultravioleta y visible, de 15,000 a 30,000 lneas/pulgada. Cuando esta superficie refleja la luz, la que choca con las rayas se dispersa, mientras que la que llega a las porciones sin rayas se refleja en forma normal y actan como fuentes individuales de luz. Cuando se sobreponen las ondas de estas fuentes se establece un patrn de interferencia -3

FIG. 6. Diagrama esquemtico de un espectrofotmetro moderno (Beckman Modelo DU). que da como resultado la dispersin de la luz reflejada en las longitudes de onda que la componen. Para encontrar la explicacin completa de este fenmeno el estudiante puede consultar libros de fsica elemental. Las mquinas que trazan las lneas de una rejilla se deben construir con unas especificaciones muy estrechas y las rejillas originales son caras. Son mucho ms baratos y ms utilizados los duplicados de rejillas, muchos de los cuales se pueden preparar con una sola rejilla maestra. Para realizar esto, la rejilla original se cubre con un material plstico y despus de que ste se endurece se separa para obtener un duplicado. El plstico se cubre con una pelcula metlica en la superficie rayada, por lo general con aluminio, para que pueda ocasionar la reflexin y se coloca en el monocromador de tal forma que su rotacin permita que diversas porciones del espectro iluminen la rendija de salida. Las rejillas difieren de los prismas al proporcionar una dispersin uniforme a lo largo de todo el espectro; en otras palabras, una misma abertura de rendija dar el mismo grado de monocroma a lo largo de todo el espectro con la radiacin que emerja. La figura 14.12 muestra la trayectoria ptica en un instrumento de rejilla que es muy utilizado.

Como se mencion antes, la radiacin que emerge de un monocromador no es monocromtica, aunque est ms cerca de esto comparada con la radiacin original. La distribucin de longitud de onda que emerge es similar a la que se muestra en la figura 14.13. La terminologa que se utiliza para describir el ancho de la banda presente en la figura no es uniforme y los anuncios de los instrumentos con frecuencia citan trminos como ancho de banda sin especificar lo que significa. Una terminologa en particular que se comprende bien es la que se presenta en la figura.

Un problema que se presenta en los monocromadores es la llamada luz extraviada, la cual es una radiacin con una longitud de onda no especfica que se refleja dentro del monocromador y que puede dirigirse hacia la rendija de salida. En los buenos instrumentos esto se minimiza utilizando superficie de color negro mate e insertando placas de desviacin en las posiciones adecuadas. Esto se reduce an ms en los instrumentos ms finos que utilizan monocromadores dobles que por lo general combinan un prisma y una rejilla. En los instrumentos ordinarios se pueden obtener lecturas de absorbancia falsas debido a la luz esprea; esto sucede en las regiones del espectro en donde hay muy poca energa con las longitudes de onda que se desean. Hasta hace poco tiempo se utilizaban mucho los instrumentos sin monocromadores verdaderos para medir absorbancias, principalmente en la regin visible, en los laboratorios donde exista una inversin inicial baja; para ellos eran ms importantes la sencillez y la velocidad que la calidad de los resultados. Estos instrumentos, designados como fotmetros de filtro, utilizaban filtros de vidrio de colores para separar de la fuente de energa radiante unas bandas de longitud de onda bastante anchas pero han sido desplazados en gran parte por los espectrofotmetros de rejilla, que no son muy caros. El recipiente para la muestra La mayor parte de la espectrofotometra utiliza soluciones y por esta razn la mayora de los recipientes para la muestra son celdas para colocar lquidos en el haz del espectrofotmetro. La celda debe transmitir la energa radiante en la regin espectral que nos interesa; de esta forma las celdas de vidrio sirven en la regin visible, las de cuarzo o de vidrios especiales con alto contenido de slice para la regin ultravioleta y las de sal de piedra en la regin infrarroja. Debemos recordar que la celda, que en cierto modo es slo un recipiente para la muestra, en realidad es ms que eso puesto que, cuando se coloca en su lugar, forma parte de la trayectoria ptica del espectrofotmetro y sus propiedades pticas son importantes. En los instrumentos ms baratos algunas veces se utilizan tubos de ensayo cilndricos como recipientes para las muestras. Es importante que estos tubos siempre se coloquen igual, para lo que se marcan en un lado y la marca siempre se pone en la misma direccin cuando se coloca el tubo en el instrumento. Las mejores celdas tienen superficies pticas planas. Las celdas se deben llenar de tal forma que el haz de luz pase a travs de la solucin, con el menisco por arriba del haz. Por lo general, las celdas se mantienen en posicin por medio del diseo cinemtico de la cavidad que la- sostiene o mediante sujetadores de resorte que aseguran una posicin reproducible en el compartimiento de la celda en el instrumento. Las celdas tpicas para las regiones visible y ultravioleta tienen 1cm de paso de luz, pero existe una gran variedad que va desde fracciones de milmetro hasta los 10cm o an ms. Podemos encontrar micro celdas especiales por medio de las cuales un diminuto volumen de solucin tendr una longitud ordinaria para la trayectoria del haz y tambin existen las celdas ajustables para obtener una longitud de la trayectoria variable, en particular para utilizarlas en el infrarrojo. Est fuera de nuestro objetivo mencionar toda la variedad de celdas comerciales que se pueden utilizar en el infrarrojo. Los problemas que se presentan en esta regin son diferentes de los de las regiones ultravioleta y visible. Debido a que no hay solventes disponibles que sean transparentes en el infrarrojo, la tendencia es colocar soluciones concentradas en celdas cuya longitud de trayectoria es corta (0.1mm o aun menos) para minimizar la absorcin del solvente y por esto las celdas son muy diferentes de las que se emplean en longitudes de onda ms cortas. Detector Las caractersticas que deseamos encontrar en un detector para un espectrofotmetro son: sensibilidad elevada en la regin espectral que nos interesa, respuesta lineal para la energa radiante, tiempo de respuesta rpido, buena disponibilidad para la amplificacin y alta estabilidad o bajo nivel de ruido. Sin embargo, en la prctica debemos evaluar todos estos factores, y encontrar el trmino medio que sea ptimo. Por ejemplo, una sensibilidad elevada slo se puede obtener a expensas de un incremento en el ruido. Los tipos de deteccin que se han utilizado ms se basan en el cambio fotoqumico (principalmente fotogrfico), en el efecto fotoelctrico y en el efecto termoelctrico. La fotografa ya no se emplea en los espectrofotmetros ordinarios; en general, los detectores fotoelctricos se utilizan en las regiones visibles y ultravioleta y los detectores que se basan en efectos trmicos se usan en el infrarrojo. El detector fotoelctrico ms comn es el foto tubo. Consiste en un tubo al vaco con una ventana transparente que contiene un par de electrodos en los que se mantiene un potencial. La superficie del electrodo negativo es fotosensible; esto quiere decir que, cuando el electrodo se irradia con fotones de suficiente energa, los electrones son expulsados de su superficie. Los electrones se aceleran por la diferencia de potencial, llegan al electrodo positivo y se establece una corriente en el circuito. La emisin de los electrones depende de la naturaleza de la superficie del 5

ctodo y de la frecuencia de la radiacin; el nmero de electrones emitidos por unidad de tiempo, y por lo tanto la corriente, dependen de la energa radiante. Existen varios foto tubos que difieren en el material con el que est construida la superficie del ctodo (tambin es diferente la ventana) y por tanto en su respuesta a la radiacin de diversas frecuencias. Muchos espectrofotmetros estn provistos de detectores intercambiables para mantener una buena respuesta en un rango amplio de longitud de onda. Los tubos foto multiplicadores son ms sensibles que los foto tubos comunes debido a la elevada amplificacin que se logra con el tubo en s. Este tipo de tubo tiene una serie de electrodos, cada uno con potencial positivo que va en aumento en forma progresiva con respecto al ctodo. La geometra del tubo es cal que los fotoelectrones primarios se enfocan en un haz y son acelerados hasta un electrodo que es de 50 a 90 V ms positivo que el ctodo. El bombardeo de este electrodo (o dinodo, como se le conoce) libera mucho ms electrones secundarios que se aceleran hasta un tercer electrodo, ms positivo, y as sucesivamente, puede ser que hasta por diez etapas. Para operar el tubo se necesita una fuente de alto voltaje regulado que alcance de 500 a 900 V. La seal de salida del foto multiplicador se amplifica an ms con un amplificador electrnico externo. La sensibilidad mejorada de este detector permite que en el monocromador existan emanaciones ms estrechas y, por lo tanto, hay una mejor resolucin de la estructura espectral. El detector de infrarrojo comn es el termopar. El estudiante recordar el efecto termoelctrico: si se unen dos metales diferentes en dos puntos, se desarrollar un potencial si las dos uniones se encuentran a diferente temperatura. De esta forma, la deteccin se basa en el calentamiento de una de las uniones por medio de la radiacin infrarroja. Esta unin esta diseada especialmente para que se caliente en forma apreciable con la energa radiante que posee el instrumento, la cual es baja. Amplificacin y lectura. Coloquemos en serie con un fototubo una resistencia elevada, como se muestra en forma esquemtica en la figura 14.14. Supongamos que la energa radiante que e suministra al ctodo es tal que en el circuito fluye una corriente de 1 M (10-6 A). Si la resistencia tiene un valor de 1 M (10 6 ohms) como se ve en la figura, de 1 acuerdo con la ley de Ohm el voltaje a travs de la resistencia E = iR es = 10 -6 x 106 = 1 V. Aunque 1V es un voltaje mediano, no se puede medir conectando un voltmetro ordinario en la resistencia. En el momento que se realiza esta conexin el voltmetro se convierte en parte del circuito y se establece una derivacin en paralelo alrededor de la resistencia. Puesto que la resistencia de un voltmetro tpico es muy baja comparada con i ohms, la mayor parte de la corriente evita pasar por la resistencia elevada y fluye a travs del medidor, con lo cual el voltaje en la resistencia, aunque se mide correctamente, ya no es 1 y sino tal vez unos cuantos milivolts.

El problema se resuelve utilizando un amplificador con una resistencia de entrada elevada para que el circuito del fototubo no se altere. En lugar de esto, el voltaje que atraviesa la resistencia de carga, se utiliza para controlar un circuito que obtiene su energa de una fuente independiente que posee una salida lo suficientemente grande para que opere un medidor u otro instrumento de lectura. Operacin de espectrofotmetro de un solo haz Primero describiremos la forma en que funciona un espectrofotmetro de un solo haz operado manualmente y luego examinaremos en forma breve las posibles variaciones del procedimiento ordinario.

Operacin ordinaria Existe un obturador opaco, controlado por el operador, que puede colocarse enfrente del fototubo de modo que el tubo est en la oscuridad. Con este obturador en posicin fluye una pequea corriente (corriente obscura) en el circuito del fototubo, debido a la emisin trmica de electrones mediante el ctodo o probablemente por una pequea fuga en el tubo. El operador cancela la corriente obscura por medio de un botn del instrumento y coloca la escala del aparato para medir absorbancia infinita (cero transmitancia). En seguida, se coloca la longitud de onda en el valor deseado y la celda que contiene una solucin de referencia se pone en su compartimiento (la referencia puede ser el solvente puro, un blanco de un procedimiento analtico, etc.); despus se quita el obturador para que el detector quede expuesto. Ahora la escala del instrumento se ajusta para leer cero absorbancia (100/o transmitancia) por medio del control del haz que sale del monocromador ajustando la energa radiante que llega al detector y/o cambiando en forma electrnica la ganancia del amplificador. Cuando ya se ajust la escala de esta manera, la solucin que contiene la muestra se coloca en su posicin y se lee la absorbancia o la transmitancia. (La escala por lo general es lineal en transmitancia, pero la mayora de los instrumentos tienen una escala para la absorbancia junto con la de la transmitancia para que se pueda leer cualquiera de las dos.) La escala se debe reajustar, justo como se describi antes, cada vez que se cambie la longitud de onda para compensar la variacin que tiene la salida de la fuente de energa con la longitud de onda, as como la dependencia que tiene la respuesta del detector con la longitud de onda y tambin cualquier absorcin que pudiera tener la solucin de referencia en la nueva longitud de onda. Es una buena prctica verificar la corriente obscura y la solucin de referencia porque puede existir una derivacin en el circuito y en la salida de la fuente. Por lo general se emplean dos celdas. una para la solucin de referencia y la otra para la muestra que se va a medir; es obvio que estas celdas deben ser semejantes con respecto a la longitud que atraviesa el haz y a sus cualidades pticas. Mediciones diferenciales En espectrofotometra lo ms comn es que la solucin de referencia sea el solvente puro o una solucin blanco de algn tipo que no contenga a la substancia que se va a determinar. Utilizando esta referencia y el ajuste de la corriente obscura, el operador ajusta la escala como se describi antes y como se muestra en la parte superior de la figura 14.15. Junto con la escala tambin se muestran los valores de transmitancia y absorbancia de dos soluciones; una es desconocida y es la que se va a medir y la otra es una solucin estndar que contiene una cantidad conocida de la substancia que se va a determinar. Debemos reconocer que el instrumento no sabe nada acerca de la clase de solucin que se encuentra en el haz, slo es capaz de producir una lectura de cero absorbancia (l00% T) cuando llega cierta energa radiante al detector y la amplificacin del circuito electrnico es adecuada. De este modo se puede ajustar el instrumento para que lea cero absorbancia con una solucin que absorbe mucho ms, en vez de colocar en el haz la referencia acostumbrada; esto se logra abriendo las rendijas del monocromador y/o incrementando la ganancia del amplificador. Supongamos queolocamos la solucin estndar que se muestra en la figura14.15

en el haz y que ajustamos la lectura de absorbancia a cero. En la escala de abajo de la figura intentamos mostrar que con esto hemos logrado una expansin de la escala, lo cual se puede ver con las lneas que se extienden de una escala a otra. Lo que era una pequea porcin en la escala de arriba se convirti en una fraccin mucho ms grande de la escala de abajo. Ntese que la diferencia en la absorbancia de las dos soluciones es de 0.30 unidades, pero 0.30 unidades es una porcin mucho ms grande en la escala de abajo. Por lo tanto, podemos esperar que un error constante del instrumento d como resultado un error ms pequeo en la concentracin relativa. En realidad, en algunos casos el error se puede reducir hasta que sea de una parte por mil y la medicin espectrofotomtrica, que normalmente no es tan buena, se puede complementar con las tcnicas volumtricas y gravimtricas ordinarias que, por lo general, se consideran ms precisas. Bastan 8 ha realizado diversas aplicaciones de la espectrofotometra diferencial y Hiskey8 ha desarrollado un anlisis matemtico detallado de la tcnica y de sus errores. Consideremos un ejemplo para ver con ms claridad cmo se puede reducir el error en espectrofotometra diferencial. Supongamos que deseamos determinar cobre midiendo la absorbancia de las soluciones azules de cobre( II). Supongamos sencillamente, para establecer una base especfica para nuestra explicacin, que una solucin con una concentracin de 2 mg/ml de cobre (solucin A) se puede medir contra una referencia de agua pura con un error de 1. Ahora consideremos el error al medir una solucin que contiene 20 mg/mi de cobre( II) (solucin B) utilizando como referencia no el agua, sino otra solucin cprica que contiene 18 mg/ml de cobre( II) (solucin C). La diferencia de concentracin entre E y C es la misma que tienen la solucin A y el agua. As, si se obedece la ley de Beer, las dos mediciones anteriores tendrn el mismo valor de absorbancia y el mismo error. En otras palabras, si la solucin E fuera nuestra solucin desconocida, podramos determinar qu tanto difiere de la solucin C con un error de 1%. Pero conocemos con exactitud la concentracin de la solucin C, porque es una solucin de referencia que se prepar con cuidado (por exactitud queremos decir que no hay ningn error espectrofotomtrico). As, en lo que respecta a los errores espectrofotomtricos, la concentracin de la solucin B se puede determinar con un error de slo 0.1%. (Al medir la solucin A contra agua, el error es 0.02/2 x 100 = 1%; al medir B contra C, el error an es 0.02/(2 x 100 = 1%, pero el error en la concentracin absoluta de E es slo 0.02/20 y 100 = 0.1%.). La aproximacin diferencial no slo disminuye los errores, como se explic antes, sino que tambin permite extender la espectrofotometra al anlisis de soluciones que absorberan demasiado en las mediciones ordinarias. Es posible alcanzar an mayor precisin ajustando el principio y el final de la escala con dos soluciones estndar. En otras palabras, como se describi arriba, se ajusta a 100% T con una solucin estndar ms diluida que la muestra desconocida y para ajustar a 0% T se utiliza una solucin estndar ms concentrada y no el obturador. Reilley y Crawford10 se refieren a esto como el mtodo de precisin final y su publicacin definitiva debe consultarse para obtener mayores detalles. Espectrofotmetros de doble haz Los espectrofotmetros registradores que grafican en forma automtica la absorbancia de una muestra en funcin de la longitud de onda casi siempre son instrumentos de doble haz. Est ms all del alcance de este libro presentar una explicacin completa de estos aparatos que prcticamente han revolucionado la obtencin de espectros de absorcin para los qumicos modernos, pero tenemos la obligacin de por lo menos dar una idea de cmo funcionan. El estudiante debe darse cuenta de que aunque estos instrumentos pueden operarse con facilidad, son muy complejos. Aqu explicaremos en forma breve y muy general un tipo de instrumento en trminos esquemticos, el tipo ptico-nulo. Debemos hacer referencia a la figura 14.16 para toda la explicacin. La figura no intenta representar ningn aparato en particular; se exhibe slo para dar al estudiante una idea de lo que los fabricantes hicieron para los qumicos. Hemos elegido la descripcin del tipo ptico-nulo no porque sea el mejor o el ms comn, sino porque es el ms sencillo de comprender por los estudiantes que se inician. La radiacin de la fuente pasa a travs de un monocromador al igual que en. un instrumento de un solo haz y se topa con un chopper (espejo sectorial). Este chopper es un espejo rotatorio manejado por un motor sincrnico (que no se muestra en la figura) y tiene una forma una colocacin tales que permite eL paso del haz en lnea recta durante la mitad de su periodo de rotacin. En la otra mitad de su periodo, el haz choca con una superficie que lo refleja y lo desva en ngulo recto, dirigindolo hacia la parte de arriba de la figura. 8

La direccin del haz se puede cambiar de nuevo por medio de otros espejos estacionarios. De esta manera ahora tenemos dos haces de la misma fuente, que no son continuos; ya que los pulsos los determina el espejo sectorial. (Una frecuencia tpica del chopper puede ser de 13 ciclos por segundo.) Uno de los haces pasa a travs de la muestra mientras que el otro se encuentra con la solucin de referencia. Despus los haces se recombinan y llegan al mismo detector. Cuando el chopper rota, el detector primero ve un haz y luego el otro. Supongamos que el monocromador se coloca en una longitud de onda en la que no absorbe la muestra. Entonces el haz de la muestra y el de la referencia tienen una energa igual y el detector los ve igual sin importar la posicin del chopper. Una, energa constante choca con el detector y la seal de salida elctrica del circuito del detector no varia con el tiempo; en otras palabras, es un voltaje de cd. La seal que sale del detector se lleva a un amplificador y la caracterstica importante de este amplificador es que se trata de un amplificador de ca que se enciende a la frecuencia del chopper. El voltaje de cd que salga del detector no ser amplificado y la seal de salida del amplificador ser inadecuada y no podr hacer nada en el instrumento. Ahora cambiemos la longitud de onda para que la muestra absorba, La energa radiante en el haz de la referencia es mayor que la del haz de la muestra y el detector capta primero a uno y luego a otro, generando una seal elctrica que refleja esta pulsacin de la energa radiante. Esta seal es un voltaje de ca, una onda cuadrada, en realidad sobrepuesta a la seal de cd que mencionamos antes. El amplificador amplifica esta seal de ca y se alimenta a un motor (llamado servomotor). El motor maneja un prisma ptico o prisma de densidad variable que atraviesa el haz de referencia. Este prisma es un instrumento especial que bloquea una parte del haz y disminuye la energa radiante en forma progresiva y uniforme al irse moviendo. Cuando el prisma se ha movido para atenuar el haz de referencia en el mismo grado en el que la absorcin de la muestra ha atenuado el haz que sale de ella, entonces el detector ve de nuevo la misma energa sin importar el periodo de rotacin en el que se encuentra el chopper. As, la seal elctrica es otra vez de cd, la salida del amplificador decae y el motor se detiene. Este es un ejemplo de retroalimentacin; la seal que pone en movimiento al servomotor se ha suicidado. En este punto, la posicin del prisma ptico se refleja mecnicamente por la posicin de una pluma que se mueve de arriba hacia abajo en el papel graficador. Si manejamos el monocromador comn motor que tambin mueva el papel graficador en ngulo recto con respecto al movimiento de la pluma, podremos obtener una grfica de longitud de onda contra posicin del prisma ptico, lo cual se convierte en longitud de onda contra transmitancia o absorbancia si el prisma est en la posicin adecuada y el papel graficador perfectamente calibrado. En la prctica, los instrumentos son ms complicados de lo que hemos indicado. Por ejemplo, puede existir un servomotor que controle la energa radiante del monocromador y no hemos explicado cmo la seal que llega al motor le dice en qu forma mover el prisma. (Esto se basa en la diferencia de fases en las dos situaciones: si la absorcin de la muestra est aumentando y el prisma se debe mover en el haz de referencia para alcanzar el balance, la seal de ca que sale del detector est defasada 180 con respecto a la seal que acompaa la situacin opuesta.) El acceso al sistema ptico-nulo fue atractivo en la poca en que eran problemticas la linearidad y la estabilidad de los instrumentos electrnicos como los amplificadores. Las caractersticas electrnicas no eran importantes mientras la seal de retroalimentacin mantuviera los dos haces en un balance muy cercano. El desarrollo de los circuitos de 9

estado slido ha hecho posible comparar las energas radiantes de dos haces sin los aspectos mecnicos del difcil manejo de los instrumentos de ptica-nula. Por lo general, el haz de una fuente se divide por medio de un espejo sectorial, como en la figura 14.16, y los haces se recombinan en el detector. En algunos casos, P0 se mantiene constante ya sea por un control de la amplitud de la rendija que se realiza con un servomotor o mediante un ajuste automtico de la ganancia del foto multiplicador que provee una seal de salida constante como referencia; despus la seal de salida asociada con el haz de la muestra de energa P se compara en forma electrnica para dar una lectura de P/F0 o de log(Po/P. La tcnica electrnica que lleva a cabo la comparacin est fuera del alcance de este libro. A algn estudiante se le podra ocurrir preguntar por qu evitamos un arreglo de doble haz verdadero; un instrumento que tuviera dos canales, cada uno con una fuente de energa, un monocromador y un detector y en l que pudiramos amplificar la diferencia entre las seales que salieran de los dos detectores, comparando el haz de la muestra con el haz de la referencia. Hay que hacer notar que evitamos hacer un gasto considerable al no utilizar dos canales separados (un tubo de descarga gaseoso para utilizarlo como fuente de ultravioleta costaba cerca de $600 dlares en 1984 y un buen monocromador costaba casi lo mismo o mas). No tenemos que preocuparnos sobre dos fuentes de energa o dos detecto res que se van gastando en diferentes proporciones. Pero puede ser que lo ms importante sea que ganamos una libertad considerable de las seales indeseables o ruido. Por ejemplo, consideremos un espectrofotmetro de infrarrojo con un detector con sensibilidad trmica. El arreglo con desviacin del haz con el amplificador encendido hace que el instrumento casi no responda a los cambios de temperatura ambiente que de otra forma interferiran en la lectura. Las fluctuaciones de temperatura muy pequeas que hay en un laboratorio tpico tienen la frecuencia correcta para su amplificacin; de esta forma la energa radiante en un haz de infrarrojo desviado se puede monitorear ante una seal ajena que Puede ver el detector pero que permanece sin amplificar. Estos instrumentos son muy complicados, pero su ingeniera es tan buena que cualquiera los puede operar tan slo colocando las muestras y apretando los botones. Sin embargo, para obtener todo lo que puede rendir el instrumento se necesita conocer ms que esto. La mayora de los qumicos deben llegar al trmino medio entre los extremos de la ignorancia total y la dedicacin al estudio de la instrumentacin durante toda la vida. Desafortunadamente, en muchos casos el conocimiento se inclina ms del lado de la ignorancia y los datos obtenidos no son mejores que l& que podra haber proporcionado un instrumento ms barato, e incluso el aparato puede ser daado sin necesidad. ERRORES EN ESPECTROFOTOMETRIA Los errores en las mediciones espectrofotomtricas pueden deberse a multitud de causas, algunas de las cuales ya se han anticipado durante la explicacin anterior de la instrumentacin. Muchas se pueden evitar teniendo cuidado y sentido comn. Las celdas para las muestras deben estar limpias. Ciertas substancias (como las protenas) algunas veces se adsorben con fuerza en la celda y se lavan slo con dificultad. Las huellas digitales pueden absorber la radiacin ultravioleta. La posicin de las celdas en el haz debe ser reproducible. Las burbujas de gas no deben estar presentes en la trayectoria ptica. La calibracin de la longitud de onda del instrumento debe verificarse de vez en cuando y la derivacin o inestabilidad en el circuito se debe corregir. No se debe suponer que la ley de Beer se cumple en un sistema qumico no probado. La inestabilidad de la muestra puede conducir a errores si no se toma el tiempo con cuidado en cada medicin. La concentracin de la especie absorbente no es de gran importancia al determinar el error despus de haber minimizado todos los dems errores controlables. No es razonable que la solucin que se va a medir absorba prcticamente toda la radiacin, ni tampoco que no absorba nada. Por esto podemos esperar que el error en una determinacin espectrofotomtrica sea mnimo en algn valor intermedio de absorbancia que est lejos de los extremos de la escala. De la ley de Beer se puede obtener una expresin que muestre en dnde ocurre este error.

10