HISTORIA El microscopio (de micro-, pequeo, y scopio, , observar) es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado

pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene dos o ms lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. La ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se llama microscopa.

Microscopio compuesto fabricado hacia1751 por Magny. Proviene del laboratorio delduque de Chaulnes y pertenece al Museo de Artes y Oficios, Pars.

El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece en la obra de William Harvey sobre la circulacin sangunea al mirar al microscopio los capilares sanguneos yRobert Hooke publica su obra Micrographia. En 1665 Robert Hooke observ con un microscopio un delgado corte de corcho y not que el material era poroso, en su conjunto, formaban cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llam clulas. Se trataba de la primera observacin de clulas muertas. Unos aos ms tarde, Marcello Malpighi, anatomista y bilogo italiano, observ clulas vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio. A mediados del siglo XVII un holands, Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricacin propia, describi por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides yglbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparacin cientfica, puede considerarse el fundador de la bacteriologa. Tallaba l

mismo sus lupas, sobre pequeas esferas de cristal, cuyos dimetros no alcanzaban el milmetro (su campo de visin era muy limitado, de dcimas de milmetro). Con estas pequeas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observ los glbulos de la sangre, las bacterias y los protozoos; examin por primera vez los glbulos rojos y descubri que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no revel sus mtodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres. Durante el siglo XVIII continu el progreso y se lograron objetivos acromticos por asociacin de Chris Neros y Flint Crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por John Dollond. De esta poca son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersin y la refraccin se podan modificar con combinaciones adecuadas de dos o ms medios pticos, se lanzan al mercado objetivos acromticos excelentes. Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras pticas. Las mejoras ms importantes de la ptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe public su teora del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejor la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los aos 1930 se haba alcanzado el lmite terico para los microscopios pticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1,000X. Sin embargo, exista un deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares (ncleo, mitocondria, etc.). El microscopio electrnico de transmisin (TEM) fue el primer tipo de microscopio electrnico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido.

CLASES Microscopio ptico Microscopio simple Microscopio compuesto Microscopio de luz ultravioleta Microscopio de fluorescencia Microscopio petrogrfico Microscopio en campo oscuro Microscopio de contraste de fase Microscopio de luz polarizada Microscopio confocal Microscopio electrnico Microscopio electrnico de transmisin Microscopio electrnico de barrido

Microscopio de iones en campo Microscopio de sonda de barrido Microscopio de efecto tnel Microscopio de fuerza atmica Microscopio virtual SIMPLE: Un microscopio simple es aquel que utiliza una sola lente de aumento. Es el microscopio ms bsico. El ejemplo ms clsico es la lupa. El microscopio ptico estndar utiliza dos sistemas de lentes alineados. El objeto a observar se coloca entre el foco y la superficie de la lente, lo que determina la formacin de una imagen virtual, derecha y mayor cuanto mayor sea el poder diptrico de la lente y cuanto ms alejado est el punto prximo de la visin ntida del sujeto. El holands Antoni van Leeuwenhoek construy microscopios muy eficaces basados en una sola lente. Esos microscopios no padecan las aberraciones que limitaban tanto la eficacia de los primeros microscopios compuestos, como los empleados por Robert Hooke, y producan una ampliacin de hasta 300 veces; gracias a ellos Leeuwenhoek fue capaz incluso de describir por primera vez las bacterias. COMPUESTO Un microscopio compuesto tiene ms de una lente objetivo. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas: El sistema mecnico est constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y detener los instrumentos a observar. El sistema de iluminacin comprende un conjunto de instrumentos, dispuestos de tal manera que producen las ranuras de luz. El sistema ptico comprende las partes del microscopio que permiten un aumento de los objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente". ELECTRONICO Un microscopio electrnico es aqul que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces ms potentes que los mejores microscopios pticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles". El primer microscopio electrnico fue diseado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1930, quienes se basaron en los estudios de Louis-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de los electrones. Un microscopio electrnico, como el de la imagen, funciona con un haz de electrones generados por un can electrnico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de

lentes magnticas (todo ello al alto vaco ya que los electrones son absorbidos por el aire). Un rayo de electrones atraviesa la muestra (debidamente deshidratada y en algunos casos recubierta de una fina capa metlica para resaltar su textura) y la amplificacin se produce por un conjunto de lentes magnticas que forman una imagen sobre una placa fotogrfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscopios electrnicos producen imgenes sin ninguna clase de informacin de color, puesto que este es una propiedad de la luz y no hay una forma posible de reproducir este fenmeno mediante los electrones; sin embargo, es posible colorizar las imgenes posteriormente, aplicando tcnicas de retoque digital a travs del ordenador.

DESCRIPCIONUn microscopio compuesto tiene ms de una lente objetivo. Los

microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas: El sistema mecnico est constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y detener los instrumentos a observar. El sistema de iluminacin comprende un conjunto de instrumentos, dispuestos de tal manera que producen las ranuras de luz. El sistema ptico comprende las partes del microscopio que permiten un aumento de los objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente".

Parte mecnica del microscopio

Esquema de un micoscopio ptico.

La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el carro y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin; adems, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto. El pie y soporte: contiene la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular. La columna o brazo: llamada tambin asa, es una pieza en forma de C, unida a la base por su parte inferior mediante una bisagra, permitiendo la inclinacin del tubo para mejorar la captacin de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie. El tubo: tiene forma cilndrica . El tubo se encuentra en la parte superior de la columna mediante un sistema de cremalleras, las cuales permiten que el tubo se mueva mediante los tornillos. El tornillo macromtrico o macroscopico: girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a un mecanismo de cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin. El tornillo micromtrico o microscopico: mediante el ajuste fino con movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm, que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos. La platina: es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje ptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares. Las pinzas: son dos piezas metlicas que sirven para sujetar la preparacin. Se encuentran en la platina. El revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, lo que se nota por el ruido de un pin que lo fija.

[editar]Sistema

ptico

Es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego ampla. El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de medir el tamao del objeto observado. Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen el aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersin.

Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos. As, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su apertura numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.

El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos crculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior.

[editar]Sistema

de iluminacin

Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende los siguientes elementos: Fuente de iluminacin: se trata clsicamente de una lmpara incandescente de tungsteno sobrevoltada; en versiones ms modernas con leds. Por delante de ella se sita un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el dimetro de la parte de la preparacin que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de observacin produciendo luces parsitas. El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del microscopio y ya alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para natural (luz solar). Los modelos ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin que el espejo. Diafragma: est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el mismo ngulo que el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de la platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparacin cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliacin); existen condensadores de inmersin, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la preparacin. La abertura numrica mxima del condensador debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se lograr aprovechar todo su poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajndose para su uso con objetivos de poca potencia. Condensador: el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolucin del sistema ptico.

[editar]Trayectoria

del rayo de luz a travs del microscopio

El haz luminoso procedente de la lmpara pasa directamente a travs del diafragma al condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada sobre la preparacin a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar al ocular, donde es captado por el ojo del observador. Propiedades del microscopio Poder separador. Tambin llamado a veces poder de resolucin, es una cualidad del microscopio, y se define como la distancia mnima entre dos puntos prximos que pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una dcima de milmetro. En el microscopio viene limitado por la longitud de onda de la radiacin empleada; en el microscopio ptico, el poder separador mximo conseguido es de 0,2 dcimas de micrmetro (la mitad de la longitud de onda de la luz azul), y en el microscopio electrnico, el poder separador llega hasta 10 . Poder de definicin. Se refiere a la nitidez de las imgenes obtenidas, sobre todo respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la correccin de las aberraciones de las lentes utilizadas. Ampliacin del microscopio. En trminos generales se define como la relacin entre el dimetro aparente de la imagen y el dimetro o longitud del objeto. Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100 dimetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor linealmente que el tamao real del objeto (la superficie de la imagen ser 2 100 , es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el aumento que est proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliacin con que estamos viendo la muestra ser: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto est ampliada 450 veces, tambin expresado como 450 dimetros.

[editar]Campo

del microscopio

Paramecium aurelia. Microscopio ptico. El mejor conocido de los ciliados. Las burbujas que se ven son vacuolas. Todo el cuerpo est cubierto de cilios, que se ven borrosos debido a sus rpidos movimientos.

Se denomina campo del microscopio al crculo visible que se observa a travs del microscopio. Tambin podemos definirlo como la porcin del plano visible observado a travs del microscopio. Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es

inversamente proporcional al aumento del microscopio. Para medir el dimetro del campo del microscopio con cualquiera de los objetivos se utiliza el micrmetro, al que se har referencia en el siguiente punto. [editar]Tipos

de microscopios

Existen diversas clases de microscopios, segn la naturaleza de los sistemas de luz, y otros accesorios utilizados para obtener las imgenes. El microscopio compuesto u ptico utiliza lentes para ampliar las imgenes de los objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio ptico puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observacin en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observacin se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se perciben con mayor nitidez los detalles. Microscopio estereoscpico: el microscopio estereoscpico hace posible la visin tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeos aumentos. El ptimo de visin estereoscpica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio. Microscopio de campo oscuro. Este microscopio est provisto de un condensador paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que iluminan oblicuamente la preparacin. Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un fondo oscuro. Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energticas. El tratamiento del material biolgico con flurocromos facilita la observacin al microscopio. Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparacin. [editar]El

microscopio electrnico

Artculo principal: Microscopio electrnico.

[editar]Invencin del microscopio electrnico En 1932, Bruche y Johnsson construyen el primer microscopio electrnico a base de lentes electrostticas. Ese mismo ao Knoll y Ruska dan a conocer los primeros resultados obtenidos con un microscopio electrnico Siemens, construido con lentes magnticas. As nace el microscopio electrnico. Para 1936 ya se ha perfeccionado y se fabrican microscopios electrnicos que superan en resolucin al microscopio ptico. Estos logros no slo representan un avance en el campo de la electrnica, sino tambin en el campo de la Biologa, pues son muchas las estructuras biolgicas que se han descubierto y que revelan detalles inusitados, al observarlas al microscopio electrnico. [editar]Funcionamiento del microscopio electrnico El microscopio electrnico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta fundamentalmente de un tubo de rayos catdicos, en el cual debe mantenerse el vacio. El ctodo est constituido por un filamento de tungsteno, que al calentarse elctricamente emite

los electrones, los cuales son atrados hacia el nodo por una diferencia de potencial de 50.000 a 100.000 voltios. La lente del condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el objeto que se observa, cuya preparacin exige tcnicas especiales. Los electrones chocan contra la preparacin, sobre la cual se desvan de manera desigual. Se acostumbra a utilizar el trmino microoscopicos para las fotografas tomadas a travs del microscopio ptico y micrografa o electromicrografa para las que se toman en el microscopio electrnico. Los aumentos mximos conseguidos en el microscopio electrnico son del orden de 2.000.000X mediante el acoplamiento al microscopio electrnico de un amplificador de imagen y una cmara de televisin. En resumen, el microscopio electrnico consta esencialmente de: Un filamento de tungsteno (ctodo) que emite electrones. Condensador o lente electromagntica, que concentra el haz de electrones. Objetivo o lente electromagntica, que ampla el cono de proyeccin del haz de luz. Ocular o lente electromagntica, que aumenta la imagen. Proyector o lente proyectora, que ampla la imagen. Pantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano.

[editar]Tipos de microscopios electrnicos Existen varios tipos de microscopios electrnicos, que cada da se perfeccionan ms. El microscopio electrnico de transmisin que utiliza un haz de electrones acelerados por un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una seccin muy fina de la muestra, sean tejidos, clulas u otro material. El microscopio electrnico de barrido se utiliza para el estudio de la morfologa y la topografa de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000 voltios. Las lentes magnticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar repetidamente la muestra, y se produce una imagen ampliada de la superficie observada en la pantalla de un monitor. El microscopio electrnico mixto tiene propiedades comunes con el de transmisin y con el de barrido y resulta muy til para ciertas investigaciones. Hay otros microscopios analticos que detectan seales caractersticas de los elementos que constituyen la muestra. Con estos poderosos instrumentos, que utilizan el flujo de electrones y las radiaciones electromagnticas as como la aplicacin de tcnicas histoqumicas y bioqumicas, adems del empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biologa celular. [editar]Microscopio electrnico de barrido
Artculo principal: Microscopio electrnico de barrido.

El microscopio electrnico de barrido est situado a la izquierda del operador, y las imgenes computarizadas de la muestra se ven en la pantalla de la derecha. Aunque un microscopio electrnico de transmisin puede resolver objetos ms pequeos que uno de barrido, este ltimo genera imgenes ms tiles para conocer la estructura tridimensional de objetos minsculos. [editar]Microscopio

quirrgico

El empleo de microscopios quirrgicos ha permitido que los cirujanos lleven a cabo intervenciones que parecan imposibles, como la reimplantacin de un miembro y la ciruga de los ojos y odos. Estos microscopios son en especial tiles cuando es necesario realinear para

unir o reparar fibras nerviosas y vasos sanguneos individuales. Se usa para operaciones dificultosas. [editar]Medicin

a travs del microscopio

Muchas veces interesa al observador conocer el tamao real de los objetos o microorganismos que est observando a travs del microscopio. Para estas mediciones pueden utilizarse varios mtodos. Mtodo de los micrmetros. Se utiliza para esto un micrmetro de platina o de objetivo, que consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada (de 2 mm de longitud), con separaciones, entre cada divisin, de una centsima de milmetro. Adems se utiliza un micrmetro ocular que lleva una escala graduada en dcimas de milmetros. Se coloca el micrmetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio hasta que las lneas de la escala graduada aparezcan ntidas. Luego se hace superponer la escala del ocular y se toma como referencia las primeras divisiones en que una lnea del micrmetro objetivo y una lnea del micrmetro ocular coincidan o se superpongan exactamente. Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada divisin ocular. Veamos un ejemplo. Si 9 divisiones del micrmetro objetivo (0,09 mm) equivalen a 30 divisiones del micrmetro ocular, cada divisin del ocular equivaldr a: 0,09 mm/30 = 0,003 mm = 3 m Quiere decir que para el objetivo calibrado y el ocular utilizado, cada divisin del micrmetro ocular equivale a 3 m. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la forma que hemos expuesto, teniendo el microscopio ocular podran hacerse todas las mediciones que se deseen. Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparacin, procedemos as: haremos coincidir los extremos del microorganismo con las divisiones del micrmetro ocular. Si la longitud del organismo es de 75 divisiones del micrmetro ocular, y cada divisin equivale a 3 m, la longitud del Paramecium ser 75x3= 225 m. Tambin se pueden efectuar mediciones en el microscopio con cmara clara y utilizando una regla. En realidad, estas medidas no son tan exactas como cuando se utilizan micrmetros por errores que se introducen superponiendo imgenes. [editar]Mantenimiento

del microscopio

El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran daarlo. Mientras no est en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa plstica o campana de vidrio. Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave; en algunos casos, ste se puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc. Que hayan cado sobre las citadas partes. La limpieza de las partes pticas requiere precauciones especiales. Para ello debe emplearse papel de ptico que expiden las casas distribuidoras de material de laboratorio fotografa o utilizar un pao de algodn. Para el polvillo se puede utilizar un perilla con pincel de pelo de camello. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas. Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel de ptica, envolviendo un palillo con algo de punta con una solucin de ter/alcohol (70-30 %) y luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. La limpieza de la ptica ha de realizarse en espiral, desde el centro hacia el exterior. El aceite de cedro que queda sobre la lente frontal del objetivo

de inmersin debe quitarse inmediatamente despus de finalizada la observacin. Para ello se puede pasar el papel de ptica impregnado con una gota de xilol. En caso de estar seco debe ponerse la zona a remojo con la solucin sealada. Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta el tope; el condensador debe estar en su posicin ms baja, para evitar que tropiece con alguno de los objetivos. Gurdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la formacin de hongos. Ciertos cidos y otras sustancias qumicas que producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio. Un microscopio electrnico es aqul que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces ms potentes que los mejores microscopios pticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles". El primer microscopio electrnico fue diseado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1930, quienes se basaron en los estudios de Louis-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de los electrones. Un microscopio electrnico, como el de la imagen, funciona con un haz de electrones generados por un can electrnico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnticas (todo ello al alto vaco ya que los electrones son absorbidos por el aire). Un rayo de electrones atraviesa la muestra (debidamente deshidratada y en algunos casos recubierta de una fina capa metlica para resaltar su textura) y la amplificacin se produce por un conjunto de lentes magnticas que forman una imagen sobre una placa fotogrfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscopios electrnicos producen imgenes sin ninguna clase de informacin de color, puesto que este es una propiedad de la luz y no hay una forma posible de reproducir este fenmeno mediante los electrones; sin embargo, es posible colorizar las imgenes posteriormente, aplicando tcnicas de retoque digital a travs del ordenador.

Limitaciones del microscopio electrnico

El limitado dimetro de la apertura no permite que la informacin detallada alcance la imagen, limitando de este modo la resolucin. El contraste de amplitud (que radica en la naturaleza corpuscular de los electrones) se debe al contraste de difraccin, provocado por la prdida de electrones del rayo. Es un contraste dominante en especmenes gruesos. El contraste de fase (que radica en la naturaleza ondulatoria de los electrones) se debe al contraste de interferencia provocado por los desplazamientos en las fases relativas de las porciones del rayo. Es un contraste dominante en especmenes finos. Existen tambin distintas aberraciones producidas por las lentes: astigmtica, esfrica y cromtica El problema de la funcin de transferencia de contraste (CTF): la CTF describe la respuesta de un sistema ptico a una imagen descompuesta en ondas cuadrticas.

El material biolgico presenta dos problemas fundamentales: el entorno de vaco y la transferencia de energa. Para resolverlos, se utilizan distintas tcnicas dependiendo del tamao de la muestra:

Para muestras grandes como rganos, tejidos o clulas, se utilizan tres tcnicas: 1. La fijacin qumica o la criofijacin 2. La inclusin en resinas (criosustitucin) 3. La rplica metlica

Para muestras pequeas como complejos macromoleculares se utilizan as si uientes t cnicas 1. La tincin negativa: los agentes de tincin ms usados son el molibdato amnico, el fosfotungstato sdico y sales de uranio como acetato y formiato. Todos ellos presentan las siguientes propiedades: interactan mnimamente con la muestra y son estables en la interaccin con los electrones, son altamente solubles en agua, presentan una alta densidad que favorece el contraste, tienen un punto alto de fusin, tienen un tamao de grano pequeo. 2. La rplica metlica: para construir la rplica metlica se evapora el metal (estao), que se deposita sobre la muestra a la vez que esta, por el vaco, se disuelve. 3. La criomicroscopa

[editar]Tipos

de microscopios electrnicos

(1) carcasa, (2) emisor de electrones, (3) electrones, (4) ctodo, (5) nodo, (6) Lente condensador, (7) muestra analizada, (8) Lente objetivo, (9) Lente proyector, (10) Detector (sensor o pelcula fotogrfica).

Existen dos tipos principales de microscopios electrnicos: el microscopio electrnico de transmisin y el microscopio electrnico de barrido. [editar]Microscopio

electrnico de transmisin

Artculo principal: Microscopio electrnico de transmisin.

El microscopio electrnico de transmisin emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto cuya imagen se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el

objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra. Para utilizar un microscopio electrnico de transmisin debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de ngstroms. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar la imagen de un objeto hasta un milln de veces. [editar]Microscopio

electrnico de barrido (MEB)

Imagen de una hormiga tomada con un MEB (microscopio electrnico de barrido). Artculo principal: Microscopio electrnico de barrido.

En el microscopio electrnico de barrido (MEB) la muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es barrida con electrones enviados desde un can. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV. Su resolucin est entre 3 y 20 nm, dependiendo del microscopio. Permite obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos y orgnicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie. [editar]Aplicaciones

en distintas reas

En el estudio de los circuitos integrados se suele utilizar el microscopio electrnico debido a una curiosa propiedad: Como el campo elctrico modifica la trayectoria de los electrones, en un circuito integrado en funcionamiento, visto bajo el microscopio electrnico, se puede apreciar el potencial al que est cada elemento del circuito.

IMPORTANCIA
Te permite ver estructuras muy MUY pequeas, me parece que incluso a nivel sub atmico, eso es muy importante porque muchas veces las funciones de algunas estructuras como las protenas dependen de su conformacin molecular, y el microscopio electrnico te permite comprender esta organizacin.

Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sita cerca del objeto que se quiere estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que acta sencillamente como una lupa. El ocular est situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace divergir los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una

gran imagen invertida situada ms all del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual...