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No. NOMBRE DE LA PRCTICA NOTA REGLAMENTO PARA EL ESTUDIANTE REGLAMENTO DEL LABORATORIO LOS DIEZ MANDAMIENTOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 EL MICROSCOPIO ESTUDIO DE LA MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS TINCION DE GRAM (Modifacion de Hucker) TINCION DE ENDOSPORAS TINCION DE CAPSULAS TINCION DE FLAGELOS TINCION DE ACIDO-RESISTENTE TINCION DE ESTIROQUETAS PRUEBA DE LA MOTILIDAD PRODUCCION DE ACIDO Y GAS PRODUCCION DE ACIDO SULFHIDRICO PRUEBA DE INDOL PRUEBA DEL ROJO DE METILO PRUEBA DE VOGES PROSKAUER PRUEBA DE CITRATOS PRUEBA DE LA REDUCCION DE NITRATOS PRUEBA DE LA LICUEFACCION DE LA GELATINA PRUEBA DE LA CATALASA PRUEBA DE LA OXIDASA PRUEBA DE LA UREASA HIDRLISIS DEL ALMIDON HIDRLISIS DE LA CASEINA CRECIMIENTO ANAEROBICO DE BACTERIAS ACCION DE LOS AGENTES QUIMICOS ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES ACCION DE LOS ANTIBIOTICOS EFECTO DEL PH ACCION DE LA PRESION OSMOTICA ACCION BACTERIOSTATICA DE LOS COLORANTES EFECTO DE LA LUZ ULTRAVIOLETA EFECTOS DE LA TEMP. SOBRE EL CRECIMIENTO IDENTIFICACION DE UNA BACTERIA PROBLEMA BIBLIOGRAFIA PGINAS 1 2 3 4 5 7 10 13 16 19 22 25 28 30 34 36 39 41 43 45 48 50 52 55 57 59 61 63 65 67 69 71 73 75 77 79
NOTA
Las practicas que se presentan a continuacin contienen una serie de recomendaciones para poder interpretarlas adecuadamente al menos en su mayora, presentando alternativas tanto en el uso de reactivos, colorantes o medios de cultivo y tcnicas. Es recomendable de que el alumno lea anticipadamente la practica antes de realizarla, ya que en su mayora se requiere de la preparacin previa de material necesario para el desarrollo correcto del experimento. En cada practica se incluye la preparacin de los reactivos utilizados en la misma, con el propsito de que el alumno considere el factor tiempo.
A) CULTIVOS DE 24 48 HS. DE
1.- Escherichia coli 2. - Staphy lococcus aureus 3. - Streptococcus sp. 4. - Sarcina sp. B) COLORANTES 1. - Cristal violeta 2. Safranina 3. - Pardo Bismarck 4.- azul de metileno C) MICROSCOPIO OPTICO D) ASA BACTERIOLOGICA E) PORTAOBJETOS
PROCEDIEMIENTO: 1.- Si tiene un cultivo liquido: tome una muestra con el asa y extindala sobre el portaobjeto. 2.- En caso de tener un cultivo solido: i) Coloque una gota de agua pequea sobre el portaobjetos ii) Flamee el asa y djela enfriar, tomando inmediatamente una pequea porcin de una colonia bacteriana, haga una pequea suspensin con la gota que esta sobre el portaobjeto, flamee el asa.
A) Haga un frotis, extendiendo la gota de cultivo sobre la superficie del portaobjetos. B) Deje secar al aire C) Fije el frotis pasndolo varias veces sobre la flama de un mechero. D) Agregue el colorante a utilizar (Safranina, Azul de metileno, Cristal Violeta) y djelo actuar por espacio de un minuto. Repita el procedimiento con cada colorante. E) Lavar con agua y dejar secar F) Observe al microscopio observaciones. con objetivo de inmersin(100X), anote sus
REACTIVOS UTILIZADOS 1.- CRISTAL VIOLETA Cristal violeta1.0 gr. Agua destilada.100ml. Disolver el cristal violeta en el agua destilada y conservar en frasco mbar. 2.- SAFRANINA 0.5 % Safranina..0.5gr. Agua destilada.100ml. Disolver la safranina en el agua, filtrar y conservar en frasco mbar. 3.- AZUL DE METILENO Azul de metileno.0.3gr. Alcohol95 C10ml Agua destilada100ml. Disolver el azul de metileno en el alcohol, agregue el agua destilada y conservar en frasco mbar.
PRECAUCIONES: Al realizar estas tcnicas se pueden cometer errores, que son comunes, que entorpecen una buena interpretacin al hacer la observacin.
A) Que el frotis hecho sea muy espeso, haciendo que acumulamientos, sin diferenciar con exactitud su morfologa.
se
observen
B) Que el colorante actu por espacio de tiempo muy corto, lo cual no permitira que la clula bacteriana se coloree lo adecuado, lo cual se entorpecer una buena identificacin de la anatoma bacteriana. C) Que el colorante actu por espacio demasiado largo D) Que el colorante no este bien disuelto, provocando que los cristales del colorante se precipiten sobre el portaobjetos, que pueden distraer al observador. E) No debe lavar con alcohol, puede quitar todo el colorante y que las bacterias sean incoloras de nuevo.
CUESTIONARIO
A) Cuales son los principales grupos de un colorante? B) Porque no se tien las clulas muertas C) Cual es la importancia de las tinciones simples
A) CULTIVOS DE: Escherichia coli y Bacullus Subtilis B) MICROSCOPIO OPTICO C) CRISTAL VIOLETA (MODIFICACION HUCKER) D) SOLUCION YODURADA E) ALCOHOL O ACETONA O ALCOHOL ACETONA
4.- AFRANINA: Safranina.. 0.25 gr. Alcohol 95. 10 ml Agua destilada... 100ml Disuelve la safranina perfectamente en el alcohol, agregue el agua y filtre la solucin, conservar en frasco mbar.
PRECAUCIONES: El mtodo general es sencillo, pero muy engaoso, ya que el aplicar el mtodo de la tincin de GRAM se puede cometer errores que hacen variar el resultado inicial y consecuentemente la interpretacin errnea al observar la preparacin al microscopio ptico, estos errores son con frecuencia: 1.- La falta de fijacin por color del frotis, puede ocasionar que al lavar la preparacin con agua corriente, esta arrastre las bacterias. 2.- El lavado excesivo con agua corriente pude afectar, eliminando el colorante o complejo Yodo-colorante. 3.- La aplicacin del agente decolorante, es la fase mas critica, si el decolorante se deja actuar mucho tiempo, la clula bacteriana dejara escapar por completo el decolorante primario. Recuerde que la acetona decolora mas rpido que el alcohol. Puede ocurrir tambin una dbil decoloracin. 4.- La aplicacin de colorante de contrastes tambin debe de hacerse con minucioso cuidado, ya que si se deja demasiado tiempo de exposicin substituir al colorante primario en los organismos GRAM positivos. 5.-La edad del cultivo tambin es determinante en el resultado final de la tincin de GRAM. La tincin de Gram. nicamente es valida cuando se realiza a partir de cultivos de 18-24 horas de incubacin. Las bacterias de mas tiempo de incubacin varan sus propiedades con respecto a la tincin de GRAM. 6.- Existe una gran variedad de modificaciones de la tcnica de GRAM, que va desde la preparacin de los colorantes hasta el tiempo de aplicacin de cada uno de ellos.
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4.-agregar el decolorante, alcohol-acido por 1 min. 5.- Lavar con agua corriente y secar. 6.-Agregu la safranina por espacio de 30 segundos. 7.-Lavar y secar 8.-Observe al microscopio y anote sus resultados.
RESULTADOS: A) La endospora se tie de color verde. B) El resto del cuerpo bacilar se tie de color rojo. REACTIVOS UTILIZADOS: 1.-Verde de malaquita 5% Verde de malaquita 5.0grs Agua destilada 100ml Disolver el verde de malaquita en el agua y conservar en frasco mbar. 2.-Alcohol acidulado Acido clorhdrico 3ml Alcohol 95 97ml Disolver el acido en el alcohol (con precaucin) conservar en frasco mbar. 3.-Safranina Safranina 0.5grs. Agua destilada 100ml Disolver el colorante en el agua, conservar en frasco mbar. ALTERNATIVA: 1.-En caso de no contar con verde de maquita, utilizar carbolfuscina. Solucin A Fusina bsica 0.3grs. Alcohol 95 10ml. Disolver el colorante en el agua, conservar en frasco mbar. Solucin B Cristales de fenol Q.P. 5gr. Agua destilada 95ml.
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Disolver el fenol en el agua destilada, mezcle la solucin A y B en un frasco, djela reposar cuando menos 48 horas., para que se disuelvan los cristales. Antes de utilizar filtros, la solucin y conserve en frasco mbar. 2.-AZUL DE METILENO (En lugar de Safranina) Azul de metileno 0.3grs. Agua destilada 100ml. Disuelva el colorante en el agua. Filtrar. Conservar la solucin en frasco mbar.
RESULTADOS: Esto es con los colorantes de sustitucin. 1.- La Endospora tomara una coloracin roja o rosada. 2.- El cuerpo de la bacteria tomar una coloracin azul. PRECAUCION: Para hacer una buena interpretacin, tome en cuenta que: A) Debe de utilizar un cultivo de ms de cuatro das de incubacin. B) Que el colorante para la Endospora este bien preparado. C) Mantener la solucin colorante sin que se seque, mientras se aplica el fuego sobre el frotis. D) Que el decolorante este bien preparado.
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MATERIAL
1. MICROSCOPIO 2. CULTIVOS DE ESCHERICHIA KLEBSIELLA SP. 3. ATINTA CHINA 4. AZUL DE METILENO COLI., STAPHYLOCOCCUS AUREUS,
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PROCEDIMIENTO :
Coloque una gota de agua sobre el portaobjeto, con el asa tome una pequea cantidad de cultivo y haga una dilucin. a esta suspensin diluida agregue tinta China mezcle con la suspensin de bacterias (una buena suspensin quedara de color gris) coloque el cubreobjeto sobre la suspensin y observe al microscopio con el objetivo de 100x haga su observaciones
RESULTADOS
Las partculas de tinta china se vern dotadas de movimiento Browniano muy rpido y las bacterias de formas plidas como fantasmas. Si la preparacin se hizo correctamente se podr apreciar el efecto como un halo alrededor de la clula bacteriana; el halo representa la capsula.
ALTERNATIVAS
Puede usar las siguientes tcnicas. haga un frotis del cultivo Tia el frotis con cristal violeta 1% por dos minutos Lavar con sulfato de cobre al 20% Secar al aire Observar al microscopio con objetivo de 100x, haga sus anotaciones
RESULTADOS
La clula bacteriana se observara de un color azul y la cpsula de un color rosa plido. Ponga una gota de agua sobre el portaobjeto Con una pequea cantidad de cultivo haga una dilucin con la gota de agua que esta sobre el portaobjeto Haga el frotis Dejar que seque el frotis Cubrir con safranina durante 10 segundos Enjuagar con cuidado, secar con presin suave o al medio ambiente
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RESULTADOS
La clula bacteriana se observara de color rojo y un halo alrededor de esta.
REACTIVOS UTILIZADOS
1. Solucin de sulfato de cobre 20% sulfato de cobre Q.p. .20.00g. agua destilada.100ml. Disolver el sulfato de cobre con el agua, conservar en frasco mbar.
MATERIAL:
1. 2. 3. 4. 5. 6. CULTIVO LIQUIDO DE Proteus vulgaris de 8 a 16 Hrs. SOLUCIN DE Leifson A, B, C. PORTAOBJETOS ESCRUPULOSAMENTE LIMPIOS PIPETAS LIBRES DE GRASA DE 0.1 ml MICROSCOPIO OPTICO AZUL DE METILENO BORATADO
PROCEDIMIENTO:
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MTODO DE LEIFESON A) Con una pipeta saque 0.1 ml de la suspensin bacteriana de la regin superficial del medio de cultivo. B) Coloque 0.1 ml de suspensin sobre un extremo del portaobjeto. C) Incline el portaobjeto al aire 30 40 para que la gota corra por el portaobjeto. D) Seque el portaobjeto al aire sin agitar. E) Agregue el colorante de Leifson sobre la extensin por espacio de diez minutos. F) Lave con agua corriente, con cuidado y secar sin agitar. G) Agregue el colorante de azul de metileno Boratado, como colorante de contraste. H) Lave con un dado secar sin agitar. I) Observar al microscopio con objetivo de inmersin, haga sus haga sus anotaciones. Solucin de cristal violeta 1% Cristal violeta0.1 % Agua destilada10 ml Disolver el colorante en el agua, conservar en frasco ambar. C) SAFRNIN. Safranina..0.25 grs Alcohol 95 .10 ml Agua destilada100 ml Disolver la safranina en alcohol, agregar el agua y filtrar, conservar en frasco ambar. PRECAUCIONES: Posibles errores en que se puede incurrir. 1. No debe utilizar alcohol para lavar, puede diluir la capsula. 2. Una toma de muestra demasiado profusa dificultar una buena observacin debido al amontonamiento. 3. Demasiada agua en la dilucin debilitar la accin de la tinta china. CUESTIONARIO: 1. Son de importancia econmica los microorganismos productores de mucilago? 2. Los organismos capsulados pierden siempre el poder de producir una capsula? 3. Se puede correlacionar la presencia de la capsula bacteriana con la virulencia de la misma?
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RESULTADO: La clula bacteriana se observara de color azul y el flagelo tomar un color rojo plido o caf incoloro. REACTIVOS UTILIZAD0S: A).- SOLUCION DE LEIFSON (MORDIENTE) SOLUCIN A Cloruro de sodio. ... 1.5 grs_ Agua destilada 100 ml Disolver el cloruro de sodio en el agua destilada. SOLUCION B Acido tnico .3.0 gr. Agua destilada .. . . 100 ml. Disolver el acido tnico en el agua destilada. SOLUCION C Fuscina Bsica (Flagelos) .1.2 grs. Alcohol 96 100 ml. Disolver la fuscina bsica en el alcohol. Mezclar las soluciones A, B y C en igual proporcin y tutilizar de inmediato. Las tres soluciones forman el colorante de Leifson. B).- Solucin de azul de metileno boratado
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azul de metileno .. 0.1 grs. Borax ..1.0 gr. Agua destilada . 100 ml. Disolver el azul de metileno y el Borax en el agua destilada. Conservar en frasco mbar. ALTERNATIVA: En caso de que se le dificulte el mtodo de Leifson, o que le salga negativo constantemente puede sustituirlo por el METODO DE GRAY. A).- Dejar que una gota de agua destilada en el portaobjeto, se extienda aproximadamente dos cm2. B).- Tornar una asada de un cultivo joven de agar nutritivo. C).- Extender la rnuestra tocando en varios puntos de la gota extendida en el portaobjetos. D) Secar al aire sin agitar ni calentar. E) - Agregar el mordiente d GRAY y dejarlo actuar, por diez minutos. F). - Lavar con agua, con cuidado, secar aire sin agitar. G).- Agregar Carbolfuscina (Colorante de GRAY) pr tiempo de 5 a 10 mn. H).- Lavar con agua y secar sin agitar. I).- Observar al microscopio con objetivo de 100X.
REACTIVOS UTILIZADOS:
A).- MORDENTE DE GRAY Sulfato de potasio de aluminio, en solucin acuosa saturada...5 ml. Acido tarico. . 20 % Bicloruro de mercurio en solucan acuosa saturada . . 2 ml. Solucin alcalina saturada de fuscina Basica .0.4 ml. Se debe preparar cada vez que se necesite. B).- C0L0RANTE DE GRAY (Cerbol Fuscina) Fuscina bsica. 0.3 gr. Alcohol 95 10 ml. Fenol 2.P.. 5.0 gr. Agua destilada .95 ml. Disolver la fuscina bsica en alcohol. Disolver el fenol en el agua, mezclar las dos soluciones. RESULTD0:
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La clula bacteriana toma un color rojo, y el flagelo un color cafe. PRECAUCIONES: Para llevar a cabo una buena tincin de flagelos, debe evitar: 1.- Que el portaobjeto contenga grasa. Para evitar el contenido de grasa en el portaobjeto, sumrjalo en mezcla cromica 24 hrs., antes del experimento, no lo agarre de la superficie, slo de los bordes. 2.- No haga el frtis con asa Bacteriolgica, puede destruir los flagelos. 3.- Que el portaobjeto no contenga materia organica, ya que este se tie con intensidad y puede interferir en la interpretacin de la observacin. 4.- No fije el frtis a la llama.
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7.-Tincion Acido-Resistente
INTRODUCCION Otro procedimiento de tincin diferencial bastante usado, es el de acidoresistente. Ya se observo que algunos grupos de bacterias son difciles de teir y resisten igualmente los procesos de decoloracin, cuando se utiliza para este propsito agentes decolorantes eficaces como lo es el acido-alcohol. La propiedad de acidoresistencia este relacionado con la composicin qumica, estas bacterias se caracterizan por su elevado contenido de lpidos acido miclico (considrese como el sustrato de esta reaccin de tincin), ceras y fosfalipidos. Este mtodo de tincin acido-resistente fue desarrollado por Erlich en1882. En la tincin acido-resistente se utiliza un colorante primario, un agente decolorante y un colorante secundario. MATERIAL: a).- Cultivo de Mycobactyerium Tuberculosis b).-Microscopio ptico c).- Colorante de Ziehl Neelsen d).-Acido-Alcohol e).- Azul de Metilo de Loeffler f).- Mechero g).- Asa Bactereologica PROCEDIMIENTO: 1) A).-Haga u n frotis, deje que se seque al aire y fjelo al color. 2) B).-Cubra el frotis con el colorante de Ziehl Neelsen. Caliente la preparacin pasando el mechero por debajo, hasta la emisin de vapores, durante 5 minutos, cuidando que no hierva el colorante de vez en cuando para evitar que se seque. 3) Decolorar con acido-alcohol, hasta que las trazas de color rojo desaparezcan. 4) Lavar con abundante agua corriente. 5) Aplicar colorante de azul de metilo de Loeffler, durante 60 segundos (1min) 6) Lavar con agua corriente y secar al aire. 7) Observe con objeto de 100X y haga sus anotaciones.
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RESULTADOS: Los organismos acido-resistente, despus de terminar el proceso de tincin, aparecen de color ROJO; los organismos negativos a la tincin acido-resistente aparecen de color AZUL. REACTIVOS UTILIZADOS: A. Colorante de Ziehl Neelsen (Carbolfuscina) Fuscina bsica bsica.0.3 gr. Etanol 95.10 ml. Cristales de Fenol Q.P...5.0 gr. Agua destilada.95 ml. Disuelva la fuscina en el alcohol. Disuelva el fenol en el agua destilada. Mezcle las dos soluciones, conservar en frascos mbar. Puede encontrar este colorante en el comercio. B. Acido-Alcohol Acido clorhdrico.0.3 gr. Alcohol etlico 95.....92 ml. Disuelva el acido en el alcohol y conserve en un frasco mbar. C. Azul de Metileno de Loeffler Azul de metileno..0.3 gr Etanol 95.30 ml. Agua destilada100 ml. Disuelve el azul de metileno en el etanol, agregue el agua destilada. Filtrar. Consrvese en un frasco mbar ALTERNATIVA: A. Verde de Malaquita 0.5 % Verde de malaquita0.5 gr. Agua destilada...100 ml. Disuelva el colorante en el agua destilada. Consrvese en frascos de mbar. Con este colorante los organismos acido-resistentes negativos se observan VERDES. B. Caf de Bismarck. Caf de Bismarck 0.3 gr. Etanol 95.. 75 ml. Agua destilada.. 25 ml. Disuelva el colorante con el alcohol, agregu el agua destilada. Consrvese en frasco mbar. Los organismos acido- resistentes negativos se observan de color CAF.
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PRECAUSIONES
El mtodo general es sencillo, pero pueden cometerse errores que hacen variar la interpretacin de la tincin al observar al microscopio, estos errores son con frecuencia: 1.-que el frotis no se fije adecuadamente al portaobjeto, esto se debe ala gran cantidad de material graso que contiene; puede evitarse, agregando una capa de albmina al 1% sobre la superficie del portaobjeto, as como los microorganismos se adhieren fcilmente. 2.- no aplicar calor durante el tiempo suficiente. Recuerde que la composicin qumica de las bacterias cido-resistente hace difcil su coloracin, de aqu que es necesaria la aplicacin de calor para que el colorante penetre, debe tomarse en cuenta el tiempo recomendado. 3.-no debe de aplicar el decolorante en una sola etapa. La decoloracin se debe hacer en forma intermitente. 4.-El colorante secundario no debe estar diluido. Debe prepararse adecuadamente.
CUESTIONARIO
1.-Los organismos GRAM positivos o GRAM negativos son cido-resistente? 2.- puede utilizarse en este procedimiento el alcohol acetona en lugar del alcohol cido? 3.- la composicin qumica de la bacteria es importante para determinar su cidoresistencia?
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REACTIVOS UTILIZADOS: A. Solucin de Ruge Solucin a) Acido actico glacial..1 ml Formol 40%..............................................................................2 ml Agua destilada100 ml Disuelve el formol en el agua y agregar el acido actico. Solucin b) Acido Tnico..5.0 gr Agua destilada..100 ml Disuelva el acido tnico en el agua destilada. Solucin c) Nitrato de plata.4 gr Agua destilada.....200 ml. Disuelva el nitrato de plata en el agua destilada. Solucin d) Amoniaco 10%.........................................................................90 ml Agua destilada.10 ml Agregue amoniaco al agua destilada. Para conjuntar las soluciones y formas la solucin de Ruge, en un frasco ambar agregue las soluciones en el siguiente orden: a, b, c, d, y utilizar de inmediato. Es muy inestable. B. Colorante de Fontana: A 25 ml de la solucin madre de nitrato de plata (Solucin de Ruge), aadir solucin diluida de amoniaco gota a gota hasta que se forme un precipitado moreno que se re-disuelve, seque agregando mas nitrato hasta que la solucin permanezca ligeramente turbia. Use de inmediato C. Acido Tnico: Acido Tnico..5.0 gr Agua destilada..100 ml Hacer la disolucin y usarse de inmediato D. Alcohol Etlico 95
PRECAUCIONES:
Para obtener buenos resultados debe tener en cuenta: 1. Las soluciones son muy inestables y por lo tanto se recomienda su uso correcto. Las soluciones preparadas das antes no sirven.
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2. Asegrese que tanto el lente ocular como el lente objetivo de inmersin estn Perfectamente limpios. 3. Tenga cuidado al preparar el nitrato de plata.
CUESTIONARIO
A).- De que color se observan las espiroquetas en la preparacin?
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MATERIAL.
1.- MUESTRA DE SARRO. OPTICO. 3.- ACIDO TANICO. 5.- COLORANTE DE FONTANE. DIENTES. 7.- MECHERO. 9.- PORTA OBJETOS. 2.- MICROSCOPIO 4.- SOLUCION DE RUGE. 6.PLILLOS PARA 8.- ALCOHOL DE 95%. 10.- TELA DE ASBESTO.
PROCEDIMIENTO.
1.- Con el palillo de dientes extraiga una muestra de sarro dentario, haciendo un raspado. 2.- Haga un frotis con el sarro. 3.- Dejar secar al aire. 4.- Cubrir el frotis con la solucin de Ruge por un minuto. 5.- Lavar con agua. 6.- Fijar con alcohol. Dejando caer el alcohol gota a gota, hasta que cubra todo el frotis. 7.- Encender el alcohol que se encuentra sobre el porta objetos. 8.- Agregar el mordiente, acido tnico. 9.- Calentar suavemente hasta la emisin de vapores; dejar actuar 30seg. Mas. 10.- Lavar con agua y seco. 11.- Cubrir la preparacin con el colorante de Fontana. 12.- Calentar suavemente hasta la emisin de vapores. 13.- Dejar que el colorante actu por 30seg.mas. 14.- Lavar con agua y secar. 15.- Observar al microscopio con el objetivo de inmersin y anote sus observaciones.
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REACTIVOS UTILIZADOS: A).-Medio de cultivo (medio SIM) PH 7.3. Este producto existe en el mercado, preparar de acuerdo de a las indicaciones del envase. Rehidrate el medio en agua destilada, deje reposar de 5-10 minutos, calentar suavemente hasta su dilucin, verter en tubos de ensayo aproximadamente 5ml, esterilizar a 121C. ALTERNATIVA: Si no consigue el medio SIM puede utilizar: A.- AGAR BLANCO Triptosa (peptona)1.0 gr. Cloruro de sodio .0.5gr. Agar-agar...0.5gr. Agua destilada.100gr. Siga las instrucciones de preparado como se indica en el medio de SIM. Cuando las pruebas salen muy dudosas se puede utilizar un indicador para movilidad. B.- REACTIVO (cloruro de 2, 3,5-trifeniltetrazolium) Solucin acuosa Sol. De tetrazolium..0.05gr. Medio de cultivo...1000ml. 5ml. De solucin acuosa al 1%, agrandando a un litro de medio de cultivo, bertir 5ml. De medio de cultivo en un tubo de ensayo. Esterilizar a 121C, por 15 minutos. RESULTADOS: (utilizando el tetrazolium) Formacin de un pigmento rojo donde se lleva acabo el crecimiento bacteriano. PRECAUCIONES: Para esta prueba tenga en cuenta lo siguiente: 1.-si se calienta el cultivo antes de su utilizacin producir un resultado falsamente negativo. 2.-los flagelos de las bacterias pueden ser destruidos por agitacin del tubo de cultivos, lo mas frecuente es fragmentacin lo que dar dbilmente positivos o falsamente negativos. 3.-se deben utilizar cultivos jvenes para realizar la prueba. Los cultivos viejos muestran tendencia a perder la movilidad. 4.-si existe duda en la interpretacin en el tubo de ensayo, puede ayudarse utilizando la tcnica de gota pendiente. utilice un inoculo denso de 18-24hrs.
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B).- PRPURA DE BROMOCRESOL Prpura de bromocresol 4.0 gr. Alcohol 95..125 ml. Agua destilada .125 ml. Disolver el prpura de bromocresol en alcohol, agregue el agua, filtrar, conservar en frasco mbar. Agregue prpura de bromocresol al medio de cultivo, hasta que tome un color prpura definido. C).- CARBOHIDRATOS 1.- lactosa1.0 gr. 2.sacarosa....1.0gr. glucosa.1.0gr. Utilizar un gramo de carbohidratos por cada 100 ml. De medio. 3.-
ALTERNATIVA: a).- en la produccin de gas, en caso de no contar con tubos de durham, puede sustituirse por ampolletas o tubos de vidrio cerrados por uno de sus extremos. b).-en la produccin de acido: el prpura de bromocresol puede ser sustituido por rojo de fenol. Obteniendo los mismos resultados. PREPARACIN: Rojo fenol.0.1 gr. Alcohol.250 ml Agua destilada ..250 ml. Disolver el indicador en el alcohol, agregue el agua destilada y filtrar, consrvese en frasco mbar, agregue al medio de cultivo, hasta que este tome un color definido. c).- en caso de que no tenga medio lquido puede sustituirse por un medio semislido: AGAR CISTINA, TRIPTICASA, nicamente sle agrega el carbohidrato al 1%. RESULTADOS: A).- POSITIVO: variacin de color rojo a amarillo B).- NEGATIVO: no hay variacin de color El medio es un semislido que se esteriliza a 10 libras por 10 minutos, se incula por puntuacin
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PRECAUCIONES: Al realizar este experimento se pueden incurrir en varios errores que pueden dar ocasin a malas interpretaciones de las observaciones. 1.- las altas o bajas concentraciones de los carbohidratos puede ocasionar la reversin de los resultados, por esto se recomienda que los carbohidratos estn entre 0.5%-1% en su mayora. 2.- esterilizar los carbohidratos a altas temperaturas provoca la descomposicin de los mismos. 3.- las altas concentraciones del indicador de PH, puede impedir el crecimiento de los microorganismos. 4.- los tubos invertidos, en el momento de su inoculacin no deben contener burbujas
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REACTIVOS UTILIZADOS: A).- medio de cultivo (medio de kligler) Este producto existe en el mercado, prepara de acuerdo con las indicaciones del envase. Rehidrate el medio con agua destilada, dejar reposar de 5 a 10 minutos. Calentar suavemente hasta su disolucin, verter de 4-5 ml. De medio en un tubo de ensayo, esterilizar a 121C por 15 minutos. Dejar enfriar en forma inclinada. ALTERNATIVAS: Si no cuenta con medio de kligler-agar, puede usar: A).- TRIPLE azcar de hierro (TSI)- agar. B).- ACETATO DE PLOMO- agar. PRECAUCIONES: Para obtener resultados confiables evite: 1.- la prueba de H2S en TSI- agar, puede presentar resultados talmente negativos, ya que la sacarosa presentada en este medio puede inhibir la formacin de H2S. 2.-el empleo de temperaturas altas en la incubacin inhiben la formacin de H2S.la temperatura optima mxima de incubacin para una produccin positiva de H2 es de 30-34C. Cuestionario: a).- Cmo se demuestra la produccin de H2S en un medio de cultivo? b).- Por qu es necesario la presencia de un aminocido azufrado en el medio de cultivo? c).- Cmo se demuestra (reaccin) la formacin de H2S a partir de la cisteina?
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RESULTADOS: A).- POSITIVO: despus de agregar el reactivo de erlich, aparece un anillo rojo en la superficie del medio. B).- NEGATIVO: despus de agregar el reactivo, no aparece ningn color en la superficie del medio. REACTIVOS UTILIZADOS: A).- MEDIO DE CULTIVO (CALDO NUTRITIVO) Caldo nutritivo. 0.8gr. Bacto peptona.. 0.3gr. Agua destilada. 100ml. Disuelva el caldo y la bato peptona en agua destilada, calentar suavemente para disolver, verter en tubos de ensaye 5 ml. Aproximadamente por tubo, esterilizar a 212C por 15 minutos. B).- REACTIVO DE ERLICH. p-dimetilaminobenzaldehido2.0gr. Alcohol etlico.190ml. Acido clorhdrico...40ml. Disolver el aldehdo en el alcohol, agregue lentamente el acido. Agtese con cuidado, conservar el frasco mbar, gurdese en refrigerador, mientras no se utilic. MODO DE UTILIZAR: Agregue 1 ml. De ter a un tobo de caldo peptonado incubado de 24-48hrs. Esperar a que el ter suba hasta la superficie del medio, agregue suavemente 0.5ml. de el reactivo de Erlich. Inclinando el tobo para que el reactivo se deslice por la pared del tubo. ALTERNATIVA: A).- en lugar del caldo peptonado puede utilizar: Caldo triptofano. Este producto existe en el mercado, prepara de acuerdo a las indicaciones del envase. B).- el reactivo de erlich puede sustituirse por: Reactivos de kovac`s p-dimetilaminobenzaldehido10.0gr. Alcohol amilico o isoamilico.150ml. Acido clorhdrico...50.0ml. Disolver el aldehdo en el alcohol, agregar el acido lentamente y con cuidado, conservar en frasco mbar guardar en refrigeracin cuando no se utilice. MODO DE UTILIZAR: Agregue 5 gotas de reactivo de kovac`s, directamente sobre el tubo de 24-48hrs. Agite suavemente y anotar sus resultados.
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PRECAUCIONES: Para hacer una buena interpretacin tenga presente: A).- si un cultivo de 24hrs. Es negativo, deber incubarse otras 24hrs. Y repetir la prueba. B).- la bacto-peptona debe ser adecuada para la produccin del indol, algunos medios con peptona contienen suficiente triptofano para la produccin de indol. C).- no deber emplear medios de cultivo que contengan glucosa, los hidratos de carbono pueden inhibir la produccin del indol. D).- no debe interpretar resultados antes de agregar el reactivo. E).- el periodo de incubacin debe ser el ptimo. F).-si el inoculo es de un cultivo mixto de organismos indol pasivo y negativo, cuando se realiza la prueba pueden producir reacciones dbil mente positivas o falsamente negativas. G).-los reactivos deben ser frescos, si se deja a temperatura ambiente por un tiempo considerable el color del reactivo cambiara de amarillo a castao: desechar el reactivo y preparar nuevo.
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Caldo nutritivo................... 0.8 gr. Glucosa.. 0.5 gr. Agua destilada.. 100 ml. Disuelva el caldo nutritivo y la glucosa en el agua. Calentar suavemente hasta su disolucin. Verter 5 ml. Aproximadamente en cada tubo de ensayo, esterilizar a 125C por 15 minutos. B).- Indicador rojo de metilo. Rojo de metilo. 0.1 gr. Alcohol etlico.. 300 ml. Agua destilada. 200 ml. Disolver el indicador en el alcohol, agregue el agua, filtrar, conservar en frasco mbar. PRECAUCIONES: 1.- La reaccin de R.M. no puede acelerarse aumentando la concentracin de glucosa en el medio. 2.- No debe interpretar sus resultados antes de la 48 Hrs. de incubacin, pueden resultar equivocadas o falsamente negativas. 3.- Evite un exceso en el inoculo en el medio de cultivo, el crecimiento bacteriano puede ser inhibido. 4.- Si despus de agregar el indicador aparece un color anaranjado incube 4 das ms y agregue otra vez indicador.
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MATERIAL:
A. Medio de cultivo con glucosa al 1% (4) B. Alfa naftanol 5%. C. Hidrxido de potasio (KOH) 40%. D. Cultivos de Escherichia Coli y Enterobacter Aerogenes 24 hrs. E. Mechero. F. Etiquetas
PROCEDIMIENTO:
Inocular tubos de medios de cultivo con E. Coli y otros con E. Aerogenes. 1. Incubar de 18-24 hrs, a 35C. 2. Agregue 0.6 ml. de Alfa naftanol 5%. 3. Agregue 0.2 ml. de KOH -40%. 4. Agite el tubo suavemente y djelo reposar de 15 minutos a 1 hr. Anote sus resultados.
RESULTADOS:
A. POSITIVO: la aparicin de un color rojo o rosado en la superficie del medio. B. NEGATIVO: Color amarillo en la superficie del medio, puede aparecer un color cobrizo, pero aun as la reaccin es negativa.
REACTIVOS UTILIZADOS:
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A. MEDIO DE CULTIVO (caldo glucosado 1%) Caldo nutritivo Glucosa Agua destilada 0.8 gr. 1.0 gr. 100 ml.
Re hidrate el medio de cultivo y la glucosa en el agua, calentar suavemente para su dilucin. Verter 5 ml. de medio en cada tubo de ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos. B. ALFA NAFTANOL 5% Alfa naftanol Alcohol etlico 5.0gr. 100 ml.
Disolver los 5 gr. De alfa naftanol en menos de 100 ml. De alcohol, traspasar la solucin a un frasco volumtrico y agregar alcohol etlico hasta completar 100 ml, conservar en frasco mbar. Guardar en el refrigerador. C. HIDROXIDO DE POTACIO 40%. KOH Agua destilada 40 gr. 100 gr.
Disolver en menos de 100 ml. De agua el KOH, traspasar a un vaso volumtrico de 100 ml. Agregar agua destilada hasta completar 100 ml. Conservar en frasco mbar, guardar en refrigeracin. El KOH puede ser sustituido por hidrxido de potasio.
PRECAUCIONES:
Para obtener buenos resultados tome en cuenta. 1. Si la produccin de acetilmetilcarbinol es muy dudosa, calentar suavemente el cultivo que contiene los reactivos. Un organismo VP positivo presentara una coloracin roja en la superficie. 2. El orden de los reactivos es muy importante, agregue primero alfa naftanol, luego el KOH. La inversin de los reactivos puede ocasionar resultados falsamente negativos o dbilmente positivos. 3. No debe exceder el volumen de los reactivos, ya que pueden ocultar la reaccin de VP.
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4. Un buen resultado se obtiene despus de una hora de haber agregado los reactivos al medio de cultivo y manteniendo en reposo.
A).-POSITIVO: Hay viraje de color verde a azul. B).- NEGATIVO: No sucede viraje de color, permanece verde. REACTIVOS UTILIZADOS: A).- Medio de cultivo (agar citrato de Simmons), estre producto existe en el comercio, preparar deacuerdo a las indicaciones del medio. Verter 5 ml del medio en tubos de ensayo. Esterilizar a 121c por 15 minutos, dejar enfriara en forma inclinada. ALTERNATIVA: A).-Medio de KOSER (liquido), este producto se encuentra en el comercio. Preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Vertir 5ml en el tubo de ensayo. Esterilizar a 121c por 15 minutos. RESULTADO: (MEDIODE KOSER) A).-POSITIVO. Hay turbiedad en el medio de cultivo debido al crecimiento de bacterias B).- NEGATIVO.- No hay crecimiento de bacterias, el medio permanece claro. PRECAUCIONES: Para obtener buenos resultados tenga en cuenta: 1.-Puede obtener resultados falsamente negativos si hay variaciones del pH del medio. Se recomienda que el pH sea de 6.9 para obtener resultados confiables. 2.- Un inoculo demasiado espeso puede provocar un resultado falsamente negativo. 3.-En los medios donde ase tenga duda en las primeras 48 hrs, de incubacin, se pueden dejar otras 48 hrs, mas , con observaciones cada 4 o 6 hrs. 4.- N o se deben interpretar resultados sino hasta despus de 24 hrs.
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*Acido actico (5 N) 30 %.............................100 ml. Disolver en Alfa naftilamina en menos de 100 ml. de acido actico, para disolver calentar suave. Pasar la solucin a un matraz volumtrico de 100 ml. y agregar acido actico 5 N 30 % hasta completar 100 ml.
1.- Filtrar la solucin con un algodon absorbente. Guardar en un frasco mbar bien tapado. *Acido actico.30ml. Agua destilada1000ml. 2.- Acido sulfanilico al 0.8% Acido sulfanilico0.8gr. Acido actico (5N, 30%)..100ml. Disolver el acido sulfanilico en menos de 100 ml. De acido actico. Traspasar la solucin a un matraz volumtrico de 100 ml. Y agregar acido actico hasta completar 100 ml. Guardar en un frasco de vidrio color mbar, bien tapado.
MATERIAL:
1.- Cultivos de 2.- Agar Nitratado o Caldo Nitratado en un tubo de ensayo (6) 3.- Alfa Naftlamina 0.5% 4.- Acido Sulfanilico 0.8% 5.- Pipetas o goteros 6.- Mechero 7.- Asa bacteriolgica 8.- Etiquetas
PROCEDIMIENTOS:
1.- Inocular dos tubos de ensayo con ______________________ Y dos con ___________________. 2.-Incubar a 37C de 24 a 48 horas. 3.- Agregar 1 ml. De alfa-naftilamina. 4.- Agregar 1 ml. de acido sulfanilico 5.- Dejar reposar por 30 segundos 6.- Interpretar sus resultados y haga sus anotaciones.
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INTERPRETACIONES:
a) POSITIVA: Despus de agregar los reactivos aparece un color rosado o rojo intenso, lo que indica que el nitrato ha sido reducido a nitrito. b) NEGATIVA: Despus de agregar los reactivos no se ha desarrollado color.
PRECAUCIONES:
A) Interpretar los resultados inmediatamente, ya que cuando se utiliza en esta prueba el reactivo de afta-naftilamina, puede desvaneserse rpidamente B) No realice esta prueba en medios que contengan nitritos, puede obtener resultados falsamente positivos. C) En ocasiones un organismo reductor del nitrato fuertemente positivo puede mostrar un precipitado color castao. D) Algunos organismos pueden reducir parcialmente el nitrato o perder temporalmente su capacidad para reducir el nitrato dando resultados falsamente negativos.
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A) POSITIVO: Despus de cada 24 hrs. De incubacin colocar los tubos cundo menos una hora. En refrigeracin (6*C). Si el cultivo continuo liquido, es positivo. B) NEGATIVO: Si despus de la refrigeracin el medio continua solido. REACTIVOS UTILIZADOS: A).- Medio de cultivo (Gelatina Nutritiva). Este producto existe en el comercio, preparar de acuerdo a lo indicado en el avance. Re hidrata, el medio en agua destilada, dejar reposar por 30 minutos, calentar suavemente hasta su disolucin, distribuir 5 ml. En cada tubo de ensayo, esterilizar a 21*C por 15 minutos dejar enfriar en posicin vertical. PRECAUCIONES: Para obtener buenos resultados tenga en cuenta: 1.- la gelatina es solida cuando se incuba a 20*C y liquida a 35*C si la incubacin es a 35*C, los tubos con el medio deben de ser colocados en el refrigerador antes de su interpretacin. 2.- no agitar los tubos con medio de cultivo al sacarlos de la incubadora ya que con frecuencia y la licuefaccin se producen solamente en la capa superficial al agitar existe la posibilidad de pasar por alto un resultado positivo 3.- el PH del medio debe de ser 6.8-7.2 algunas bacterias no muestran en el medio de loa gelatina nutritiva.
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MATERIAL
A).- Tubos de ensayo con mediosde cultivo (agar nutritivo) (4) B).- Cultivo de 24 horas. De erichia coli y basillius subtillis C).- Perxido de H al 30 % D).- Mechero E).- Asa bacteriolgica F).- Etiquetas
PROCEDIMIENTO
a).-Inocular 2 tubos con medio cultivo con E. coli y otros con B. subtillis. b).-Incubar 18-14 horas; a 35 C. c).-Agregue 0.5ml de perxido de H al 30% d).-Anote sus resultados
RESULTADOS
a).- POSITIVO: Al aadir el perxido, hay formacin inmediata de burbujas bien visibles b).- NEGATIVO: Al agregar el reactivo no hay formacin de burbujas.
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REACTIVOS UTILIZADOS
A).- MEDIO DE CULTIVO (agar nutritivo). Este producto existe en el mercado, preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Antes de esterilizar vertir 5ml del medio a cada tubo de ensayo y esterilizar a 121C por 15 min, dejar enfriar en forma inclinada. B).- PEROXIDO DE HIDROGENO: Este producto existe en el comercio.
PRECAUCIONES
Para tener una buena interpretacin de esta prueba tenga presente que : 1.- Los cultivos utilizados para la prueba de la catalaza debe de ser de 18-14 horas 2.- Los cultivos viejos pueden perder la actividad de la catalaza, dando por resultados falsamente negativos. 3.- El peroxido de H al 30% es una solucin bastante custica, debe evitarse su contacto con la piel. 4.- El peroxido de hidrogeno, debe de ser un reactivo fresco, es un reactivo bastante inestable y se descompone con facilidad al exponerse a la luz. Debe mantenerse en un frasco ambar y en refrigeracin. Tenga en cuenta que la velocidad de descomposicin del peroxido de H aumenta a medida que aumenta la temperatura. 5.- No hacer las pruebas de catalaza en medio de agar chocolate, los resultados serian negativos
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MATERIAL:
A).-. CAJAS DE PETRI CON MEDIO DE CULTIVO (AGARSANGRE) (4) B).- CULTIVOS DE ESCHERICHIA COLI Y PSEUDUMONAS SP. DE 24 HRS. C).- REACTIVO DE OXIDASA D).-ASA BACTERILOGICA E).- MECHERO F). ETIQUETA
PROCEDIMIENTO:
A). Inocular dos cajas de PETRI con Escherichia Coli y otras con Pseudomonas sp. B).- Incubar a 35C por 24-48 hrs. C).- regregue de dos a tres gotas del reactivo de oxidasa sobre la colonia escogida para la prueba.
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RESULTADOS:
A).-Las colonias toman un color rosado, despus marron y finalmente negro o azul. B).- NEGATIVO: No se produce cambio de color en las colonias, o solo adquieren un color rosado palido por el reactivo, Puede producrse un color negro en el medio circundante a la colonia
REACTIVOS UTILIZADOS:
A).- MEDIO DE CULTIVO (AGARSANGRE. Este producto existe en el mercado como Agar Base para Sangre. Preparar como se indica en el envase. Depuse esterilizar y cuando el medio esta a una temperatura de 55 C Agregar la sangre (10 ml./1CO) y vertir de 15-18 ml, en cajas de petri esteriles. B) - REACTIVO DE LA OXIDASA (OXALATO DE Pamino Dimetilanilina) (xolato de P.amino Dimetilanalina . . . . . . 0.1 gr. Agua destilada . . . . . . . . . . . . . . . 10 ml. Disolver la amina en menos de 10 ml. de agua, calentar suavemente hasta su disolucion, pasar a un fraso volumetrico y agregar agua destilada hasta completar 10 ml. Conservar en frasco ambar y no exponerlo innecesariamente a luz, guardar en refrigeracion cuando no se utilice, hasta por tres das.
ALTERNATI VA:
A).- Medio de Cultivo (Agar-Chocolate). Este producto se encuentra en el mercado como Agar Base para sangre, preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Despus de esterilizar, Agregar 10!00 de sangre, vertir de 15-18 ml. en cajas de Petri esteriles
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B). Reactivo de la oxidasa. 1. Diclorhidrato de Tetrametil-P-Fenilendiamina 2. Diclorhidrato de DimetilPFenilendiamina. (N. Dimetil-P-Fenilendiamina) (Monoclorhidrato de P-aminodmetil anilina) Preparar en la misma forma y concentracion que el oxalato.
PRECAUCION :
Para poder interpretar adecuadamente esta prueba tenga en cuenta lo siguiente: 1 . No intente realizar la prueba de la oxidasa en cultivos que crezcan en un medio con glucosa. La fermentacion inhibira la accion de la oxidasa y dar resultados falsamente negativos. 2. El medio de Cultivo no deber contener una elevada concentracion de sangre; puede producir resultados falsamente positivos. 3. Se recomienda el uso de alambre de platino para la inoculacio de los cultivos, vestigios de hierro pueden catalizar la reaccion de la oxidasa dando una reaccion falsamente positiva. 4. Para la prueba de la oxidasa deben utilizarse cultivos puros, nunca cultivos mixtos. 5. Una interpretacion adecuada de esta prueba se hara. de 10-60 segundos despus de agregar el reactivo.
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El SUSTRATO UREA ES UNA DIAMIDA DEL ACIDO CARBNICO, A LA QUE FRECUENTEMENTE SE MENCIONA COMO CARBAMIDA. LA HIDRLISIS DE LA UREA ES CATALIZADA FRECUENTEMENTE POR UNA ENZIMA ESPECIFICA, LA UREASA, PARA DAR DOS MOLCULAS DE AMONIACO, EN SOLUCIN LA UREA SE HIDROLIZA DANDO CARBONATO DE AMONIO COMO PRODUCTO FINAL. LA UREASA ES UNA IMPORTANTE ENZIMA MICROBIANA VINCULADA CON LA DESCOMPOSICIN DE LOS COMPUESTOS ORGNICOS. LA UREASA ES CONSIDERADA UNA ENZIMA CONSTITUIDA DADO QUE ES SINTETIZADA POR CIERTAS BACTERIAS SIN TENER EN CUENTA LA PRESENCIA O AUSENCIA DE SUSTRATO UREA. LA UREASA SE CLASIFICA COMO UNA AMIDASA, CATALIZANDO LA HIDRLISIS DE LAS AMIDAS.
MATERIAL
TUBOS CON MEDIO DE AGAR UREA CHRISTENSEU (ph6.8) CULTIVO DE ESCHERICHIA COLI Y PROTEUS VULGARIS DE 24 HORAS ASA BACTERIOLOGICA MECHERO ETIQUETAS
PROCEDIMIENTO
INOCULAR DOS TUBOS CON MEDIO DE E. COLI Y OTROS CON P. VULGARIS INCUBAR A 35 POR 24-48 HRS. ANOTE SUS RESULTADOS
RESULTADOS
POSITIVO: APARECE UN COLOR ROSADO INTENSO EN EL MEDIO NEGATIVO: NO PRODUCE CAMBIO DE COLOR
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REACTIVOS UTILIZADOS
MEDIO DE CULTIVO(AGAR UREA) UREA BASICA DESHIDRATADA NOTA: NO CALENTAR LA UREA NI EL MEDIO CON UREA PORQUE SE DESCOMPONE
PRECAUCION:
NO EXPONER AL CALENTAMIENTO LA UREA NI EL MEDIO CON UREA EL AUMENTO EN EL PH DA COMO RESULTADO DISMINUCION DE LA ACTIVIDAD DE LA UREASA OBSERVAR LOS TUBOS INCUBADOS CADA 6 HORAS, ALGUNOS ORGANISMOS DAN RESULTADOS DURANTE LAS PRIMERAS 12 HORAS EN OCASIONES ES NECESARIO UN PERIODO PROLONGADO DE HASTA 6 DIAS.
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MATERIAL
A) Cajas petri con medio de cultivo (agar almidn) (10) B) Cultivos de escherichia coli, basilus subtilis, staphilococcus aureus, pseudomonas sp, proteus sp. C) Mechero D) Lugol E) Etiquetas F) Asa bacteriolgica
PROCEDIMIENTO
A) Inocular dos cajas de petri con E. coli. Segn el mismo procedimiento con cada una de las bacterias mencionadas. B) Incubar a 35 grados centgrados por 24 horas. C) Agregue lugol sobre las lneas de crecimiento. D) Anote sus resultados
RESULTADOS
A) POSITIVO: en la zona de crecimiento se presenta un color caf. B) NEGATIVO: en la zona de crecimiento se presenta un color azul. REACTIVOS UTILIZADOS A) Medio de cultivo (agar almidn). Este producto en el mercado. Preparar de acuerdo con lo indicado en el envase. Despus esterilizar, verter 15 a 28 ml. De medio en cajas de petri estriles. Dejar enfriar.
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B) REACTIVO LUGOL: Iodo Q P 5.0 g Yoduro de potasio Q P 10.0 g Agua destilada 100 ml Mezclar el iodo y el yoduro de potasio en un mortero y triturar adecuadamente, agregar agua hasta su dilucin completa; conservar en un frasco mbar. PRECAUCIONES Para interpretar los resultados en esta prueba tenga en cuenta: A) No deber interpretar los resultados antes de agregar los reactivos. B) No aumentar la concentracin del almidn, podra retardar los resultados d la prueba o dar dbilmente positivo. C) No haga inoculacin profusa sobre la superficie de agar- almidn, haga una sola lnea de inoculacin en la mitad de la caja.
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MATERIAL
a).- Cajas de petri con medio de cultivo (agar nutritivo) (4) b).- Cultivos de escherichia coli y basillus subtillis c).- Leche fresca descremada y estril d).- Pipetas de 1 ml estriles e).- Asa bacteriolgica f).- Mechero g).-Etiquetas
PROCEDIMIENTO
A).- Cu|ando el medio de cutlivo esterilizado tenga una temperatura aproximada de 55-50C , verter en cajas de petri esteriles de 15-18 ml de medio B).- Inmediatamente y antes que el medio de cultivo de la caja se solidifique. Agregar 1 ml de leche descremada esteril, difundir. Dejar enfriar. C).- Inocular dos cajas con medio de cultivo con E. coli y otros con B. subtillis D).- Incubar a 35 C por 24-48 horas. E): Anote sus resultados
RESULTADOS
a).- POSITIVO: Aparece un halo claro y definido alrededor de la colonia bacteriana.
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REACTIVOS UTILIZADOS
a).- Medio de cultivo ( AGAR NUTRITIVO) Este producto existe en el mercado, preparace de acuerdo a las indicaciones del envase. b).- LECHE DESCREMADA ESTERIL. La leche se esteriliza hirviendola 20 min diarios por 3 dias consecutivos.
PRECAUCIONES
A).- Asegurese de que la leche que utiliza este estril B).- Cuando se utiliza leche no estril, microorganismos presentes en este pueden crecer e inhibir a los que se utilizan el la prueba. C).- No utilice la autoclave para esterilizar la leche.
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El efecto del oxigeno atmosfrico sobre el crecimiento bacteriano, esta relacionado con el potencial de oxidoreduccion del medio de cultivo.. Las bacterias anaerobicas pueden ser cultivadas eliminando el oxigeno libre del medio ambiente. Se puede obtener un medio libre de oxgeno mediante la adicion-de los suficientes materiales reductores al medio de cultivo. Las bacterias anaerobicas para crecer exigen la eliminacion total del oxgeno.
MATERIAL
A).- TUBOS DE ENSAYO CON MEDIO DE CULTIVO (AGAR EXTRACTO DE DE MA.LTA) (10) B).- CULTIVOS DE ESCHERICHIA- COLI, BACILLUS SUBTILIS STAPHYLOCOCCUS AUREUS, , KLEBSIELLA, SP. ENTEROBACTER AEROGENES. C). ASA;. BACTERIOLOGICA D). PIROGALOL E). CRISTALES DE HIDRCXIDO DE SODIO F).- MECHERO G) .- TAPONES DE HULE PAR CERRAR LO TUBOS DE ENSAYO. H). ETIQUETAS
PROCEDIMIENTO:
A).- Incubar do tubos de ensayo con E. Coli. Repita el procedimiento con cada una de la bacterias asignadas , tape con algodon la Boca del tubo, corte con tijeras el algodon que sobresale. Empuje el algodon hacia el interior del tubo unos cuatro cm. llene el espacio de arriba con pirogalol, vierta una pequea cantidad de NaOH concentrado, cierre hermticamente el tubo con el tapon de hule, invierta el tubo incube en esta posicion. Repita la operacion con cada tubo inoculado. B).-Incubar a 35 C por hasta 10 dias. C).-Haga observaciones cada 24 hs. .Anote sus resultados.
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RESULTADOS:
A).- POSITIVO: Hay crecimiento de Bacterias. B).- NEGATIVO: No hay crecimiento.
REACTIVOS UTILIZADOS:
A).- MEDIO DE CULTIVO (AGAR GLUCOSA EXTRACTO DE MALTA). Este producto existe en el comercio. Preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Vertir de 5 ml. en cada tubo de ensayo. Esterilizar 121 C por 15 rninutos Dejar enfriar en forma inclinada. B).- PIROGLOL C).-Hidroxido de Sodio,
ALTERNATIVAS:
A).- Medio de Cultivo (AGAR NUTRITIVO) B).-Hidroxido de Potasio. C).- Vasija de Brewer D).-Cajas de Petri de Brewer E). Incubadora de anaerobica. F).-Colocar una veladora encendida en un frasco que se cierre her mticamente.
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PRECAUCIONES:
A).- No utilizar un inoculo demasiado denso. Puede dar resultados falsamente positivos. B).- En los tubos invertidos evitar que el algodon toque el medio de cultivo. C).-. Evitar al maximo el contacto con el Pirogalol. D).- Siempre debe conservar el tubo en forma invertida. E).- Si utiliza un frasco hermetico, asegrese de que la tapa no esta perforada.
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24. INTRODUCCION
Muchos productos qumicos, tanto inorgnicos como orgnicos, son txicos para los microorganismos. Los agentes qumicos o inhiben simplemente las actividades ye l crecimiento microbiano o son letales y causan la muerte de los microorganismos. Los desinfectantes son agentes letales para los microorganismos. Los antispticos son agentes inhibidores del crecimiento. la eficacia de un desinfectante se mide por su coeficiente de fenol (slo se alica a los desinfectantes fenlicos. Ningn desinfectante posee las mismas caractersticas ideales para su eficiencia.
MATERIALES
A) Cajas de petri con medio de cultivo (agar nutritivo) (6) B) Agentes qumicos proporcionados (fenol 5%, acetona, alcohol 95, alcohol 70%, solucin de lejia 1% y 20%, antisptico bucal). C) Hisopos. D) Etiquetas. E) Discos de papel filtro de 1cm de dimetro. F) Tubos de ensayo con solucin fisiolgica .85% (3) G) Cultivos proporcionados.
PROCEDIMIENTO
A) Impregne aproximadamente 20 discos de papel filtro de cada agente qumico proporcionado, djelos secar. (Manjelos con pinzas de diseccin). B) Haga una suspensin del cultivo en la solucin sisiolgica, tome un poco del cultivo deseado y haga la suspensin. C) Inocule toda la superficie del medio de cultivo de una caja de Petri con un organismo escogido. D) Coloque cuatro discos impregnados en el medio de cultivo inoculado. Un disco por cada sustancia. E) Incubar por 24-48 horas., a 35 C. F) Realice lo mismo con cada uno de los microorganismos asignados.
REACTIVOS
A) MEDIO DE CULTIVO (AGAR NUTRITIVO). Este producto esite en el comercio, preparar de acuerdo a lo indicado en el envase. Despus de esterilizar, verter 15-18ml en cada caja de Petri estril, dejar enfriar. B) SUSTANCIAS QUMICAS: 1. Fenol 5% Fenol Q.P (cristales).......................................5.0 gr.
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Agua destilada......................................................100 ml. Disolver el fenol en el agua destilada y conservar en frasco mbar. 2. Alcohol al 70% Alcohol 95%.........................................................25 ml. Agua destilada.....................................................75 ml. Hacer la disolucin del alcohol en el agua destilada, conservar en frasco mbar. 3. Lejia 1% Lejia (jabn amarillo)............................................1 gr. Agua destilada.....................................................100 ml. Disolver la lejia ene l agua, conservar en frasco mbar. 4. Lejia 20% Lejia (jabn amarillo)............................................20 gr. Agua destilada.....................................................100 ml. Disolver la lejia en agua y conservar en frasco mbar. 5. Antisptico bucal. 6. Alcohol 95.
PRECAUCIONES
A) No maneje el fenol con los dedos, es custico y provoca quemaduras. B) No introduzca a la boca. C) El inculo no debe ser tan denso ni tan ralo, puede dar resultados falsamente negativos o positivos. D) El inculo no debe ser profundo, provoca resultdos falsamente negativos.
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25.
INTRODUCCION
Es bien sabido que muchas sustancias que son txicas en caractersticas relativamente grandes, estimulan el crecimiento a concentraciones bajas. Cuando un metal se coloca en un medio inhibiendo el crecimiento de los microorganismos en una zona situada alrededor de la pizca metlica. Este fenmeno es atribuido a la denominada accin oligodinmica de los metales. Podra suponerse que en la periferia de cesta capa estril, como sea que la concentracin de los iones metlicos constituye con la distancia de la zona de metal. Puede haber indicado un crecimiento en la cercana de la zona estril o ala estimulacin para el crecimiento por una concentracin baja ptima de los iones metlicos existen iones metlicos ms efectivos que otros.
MATERIAL
A) B) C) D) E) F) G) Cultivos en caldo de 24 hrs., de scherichia coli y Staphylococus aureus. Tubos de ensayo con 15 ml de agar nutritivo (4) Monedas de cobre y/o plata (4) Cajas de Petri estriles (4) Pinzas. Pipetas de 0.1 ml. (2) Etiquetas.
PROCEDIMIENTO
A) Lave las monedas con agua y jabn y djelas durante 5 minutos en la solucin de alcohol-cido. B) Coloque la moneda en el centro de la Caja de Petri. C) Cuando los tubos de ensayo que contengan agar nutritivo entre aproximadamente 50-45 C, inocular dos tubos con Escherichia Coli, agregando 0.5 ml. Agite bien el tubo. D) Vierta el contenido de lso tubos de ensayo inoculados uno en cada caja, dejndolo caer sobre la moneda. Aspticamente. E) Repita con Staphylococus Aereus. F) Incube a 35 C por 34-48 hrs.
RESULTADOS
A) POSITIVO: Aparece un halo alrededor de la moneda. B) NEGATIVO: No hay halo alrededor de la moneda.
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REACTIVOS UTILIZADOS
A) MEDIO DE CULTIVO (AGAR NUTRITIVO). Este prodcuto existen en el comercio. Despus de disolver el medio, verter 15 ml de medio de cultivo a cada tubo de ensayo y esterilizar a 121 C por 15 minutos. B) SOLUCION DE ALCOHOL-ACIDO cido Clorhdrico.......................................................3 ml. Alcohol 95..................................................................97 ml. Disolver el cido clorhdrico en el alcohol, conservar en frasco mbar.
PRECAUCIONES
A) Si el inculo es demasiado poco, puede interpretarse como condiciones ptimas de crecimiento. B) Si el inculo es demasiado denso, puede interpretarse como condiciones ptimas de inhibicin. C) Vierta el contenido del tubo de ensayo inoculado antes de que solidifique. D) Las monedas deben estar perfectamente limpias.
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26. INTRODUCCION
La determinacin de la sensibilidad de un microorganismo dado a los antibiticos, constituye unA tcnica habitual y de inters en muchos laboratorios, constituye una tcnica habitual y de inters en muchos laboratorios. El resultado de esas pruebas se utiliza para la seleccin de los antibiticos correctos en la teraputica de una infeccin determinada. Es de desear que los cultivos se obtengan antes de la administracin de antibiticos, as el verdadero microorganismos infectante podr se aislado. La variacin en la sensibilidad, deben desde luego realizarse preferentemente antes de la administracin. Los antibiticos pueden ser bactericidas, en tales casos provocarn la muerte de los organismos susceptibles o pueden ser Bacteriostticos, cuando inhiben y evitan la multiplicacin sin ocasionar su muerte. A dilucin adecuada un antibitico bactericida puede actuar como bacteriosttico. Si los cultivos no nacen hasta que se ha administrado el antibitico, el organismo causante puede ser inhibido y no crezcan y slo los microorganismos secundarios puedan crecer.
MATERIAL
A) B) C) D) E) F) G) H) Cajas de Petri con medio de cultivo (Agar nutritivo) (78). Tubos de ensayo con 3 ml de solucin fisiolgica. 85% c/u (4) Cultivos de Eschirichia Coli, Staphylococus Aereus, Pseudomonas. Antibiogranas. Hisopos. Pinzas. Mechero. Asa bacteriolgica.
PROCEDIMIENTO
A) B) C) D) Haga una suspensin de Eschirichia Coli en un tubo de solucin fisiolgica. Impregne un hisopo con la suspensin. Con el hisopo, siempre toda la superficie de la caja de Petri. Con pinzas de diseccin estril, tome el antibiograma y colquelo sobre el medio de cultivo inoculado. E) Incubar por 24-48 hrs. a 35 C. F) Realice el mismo procedimiento con cada uno de los cultivos asignados. G) Observe sus resultados.
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RESULTADOS
A) NEGATIVOS: No hay formacin de halo alrededor del disco que contiene el antibitico. B) POSITIVO: Se forma un halo alrededor del disco que contiene el antibitico.
REACTIVOS UTILIZADOS
A) MEDIO DE CULTIVO (AGAR NUTRITIVO). Este producto existe en el comercio, prepare de acuerdo a las indicaciones del envase. Despus de esterilizar, vierta de 15-18 ml en cada caja de Petri estril. B) SOLUCIN FISIOLGICA (ESTRIL). Cloruro de Sodio........................................................0.85 gr. Agua destilada...........................................................100 ml. Disolver el cloruro en el agua, verter 3 ml en cada tubo de ensayo, esterilizar a 121 C por 15 minutos.
PRECAUCIONES
Para interpretar adecuadamente esta prueba tenga en cuenta: A) Inocule el medio de cultivo primero y luego coloque el antibiograma. B) Utilice concentraciones adecuadas de antibiticos, segn los resultados que busca. C) Utilice medios de cultivos estandarizados. D) La inoculacin debe ser superficial, nunca profunda. E) No utilice inculos demasiados densos. F) La eficacia de cada uno de los antibiticos se hace mediando el dimetro de la zona de inhibicin (Mtodo Emprico). G) No deber tomar el antibiograma con la mano.
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27. INTRODUCCION
EFECTOS DEL PH
Existen muchos factores en el medio ambiente de los microorganismos que son letales o potencialmente letales para ellos. La mayora de las bacterias soportan una concentracin de iones hidrgeno ptima para su crecimiento, aunque crecen en lmites de PH bastante amplio. Las variaciones de PH en un medio de cultivo puede afectar la viabilidad de las bacterias.
MATERIAL
A) Tubos de ensayo con caldo nutritivo ajustados a PH de 3.0, 5.0, 7.0, 9.0 y 11.0. B) Tubos de ensayo con caldo extracto de malta, ajustado a los mismos valores de PH. C) Cultivos de: a) Escherichia Coli. b) Scharomyces Cerevisiae. c) Potencimetro. d) Papel indicador de PH. e) Asa bacteriolgica. f) Mechero.
PROCEDIMIENTO
A) Siembre dos tubos de cada valor de PH con Escherichia Coli y otros con Sacharomyces Cerevisiae (Caldo nutritivo). B) Inocule dos tubos de cada valor de PH con Escherichia Coli y otros con Scharomyces Cerevisiae (Caldo extracto de malta). C) Incubar a 35 C por 24-46 hrs. D) Anote sus resultados.
RESULTADOS
A) POSITIVO: Existe crecimiento en el medio de cultivo. B) NEGATIVO. No existe crecimiento.
REACTIVOS UTILIZADOS
A) Medio de cultivo (Caldo nutritivo). Este producto existe en el mercado, preparar de acuerdo a lo indicado en el envase. Despus de disolver. Ajustar a los diferentes PH indicados anteriormente. Verter 5 ml en cada tubo de ensayo. Esterilizar a 121 por 15 minutos.
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B) MEDIO DE CULTIVO (Caldo extracto de malta). Este prodcuto existe en el mercado, preparar de acuerdo a lo indicado en el envase. Para utilizar siga las instrucciones que se den en el caldo nutritivo de esta prctica.
PRECAUCIONES
Para obtener resultados adecuados tome en cuenta: A) No utilice un inculo demasiado denso. B) Tome sus resultados despus de 25 hrs.
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28. INTRODUCCION
La presin osmtica describa la tendencia del agua a moverse en la direccin que tienda a igualar las concentraciones de agua en todos los sistemas. El cambio en la presin osmtica que de continua amenaza la existencia de los microorganismos en su medio ambiente. Cuando la concentracin de los solutos en la realizacin a los solutos dentro del organismo, se establece un equilibrio y se dice que el sistema en Isotnico. Un sistema que cause el enjuntamiento del citoplasma como resultado de la prdida de agua hacia el exterior de la clula se llama HIPERTNICO. Si la concentracin de agua es menor en el interior de la clula que en el exterior, este tendr que fluir hacia el interior, este sistema se llama HIPOTNICO.
MATERIAL
A) Tubos de Ensayo con medio de cultivo (Caldo nutritivo). Ajustados a concentraciones de Glucosa a 0.0%, 5.0%, 10.0%, 20.0%, 50.0%. Dos tubos de cada concentracin. B) Tubos de Ensayo con medio de cultivo (Caldo extracto de malta). Ajustados a concentraciones de glucosa a 0.0%, 5.0%, 10.0%, 20.0%, 50.0%. Dos tubos de cada concentracin. C) Cultivos de Escherichia Coli y Staphylococus Aereus. D) Asa bacteriolgica. E) Mechero. F) Etiquetas.
PROCEDIMIENTO
A) Inocular dos tubos de caldo nutritivo de diferentes concentraciones de Glucosa con E. Coli, otros con Staphylococus Aereus. B) Inocular dos tubos de caldo Extracto de Malta con diferentes concentraciones de glucosa con E. Coli y otros con Staphylococus Aereus. C) Incubar a 351 por 24-48 hrs. D) Anote resultados.
RESULTADOS
A) POSITIVO: Crecimiento de microorganismos. B) NEGATIVO: No hay crecimiento.
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REACTIVOS UTILIZADOS
A) MEDIO DE CULTIVO (Caldo nutritivo). Este producto en el comercio, preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Despus de disolver, ajustar a las diferentes concentraciones de glucosa. Verter 5 ml en cada tubo. Esterilizar a 121 por 15 minutos. B) MEDIO DE CULTIVO (Caldo extracto de malta). Este producto existen en el comercio, preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Ajustar a las diferentes concentraciones de glucosa. Verter 5 ml en cada tubo de cada concentracin. Esterilizar a 121 C por 15 minutos.
PRECAUCIONES
Para obtener buenos resultados de esta prueba, tenga en cuenta: A) No debe obtener resultados antes de las 25 hrs. de incubacin. B) Si sus resultados son negativos despus de 48 horas, incubar hasta por 5 das ms.
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29.
INTRODUCCION
Varios de los colorantes empleados para teir microorganismos tienen poder antisptico. Estos colorantes son de gran utilidad para ajustar las condiciones los medios bacteriolgicos de tal manera que supriman el crecimiento de ciertas especies. Un colorante que se usa mucho con este propsito en el cristal violeta. A concentraciones relativamente altas, este colorante inhibe las bacterias gram-positivas y las gram-negativas. Al recibir las concentraciones, la accin del colorante se vuelve selectiva en cuanto que inhibe las bacterias gram-postivas, pero no las gram-negativas. Si las concentraciones se reducen todava ms, alcanza un nivel tolerable para ambos tipos de bacterias. Debido a su gran actividad contra los microorganismos, el cristal violeta es un antisptico til en caso de infeccin causada por organismos grampositivos.
MATERIAL
A) Cajas de Petri con medio de cultivo (Agar nutritivo) (9). B) Soluciones acuosas estriles de cristal violeta a las siguientes concentraciones: a) 1:1 b) 1:1000 c) 1:2000 C) Cultivos de Escherichia Coli, Bacillus Subtilis, Staphylococus Aereus. D) Discos de papel filtro de 0.5 cm. de dimetro estriles. E) asa bacteriolgica. F) Mechero. G) Etiquetas.
PROCEDIMIENTO
A) Inocule tres cajas de petri con Escherichia Coli, otras tres con Bacillus Subtilis y otras tres con Staphylococus Aereus. B) Tome un disco de papel filtro estril con las pinzas y sumerja ligeramente uno de sus bordes en uno de lso colorantes. Observe como el colorante asciende rpidamente por el papel filtro por accin capilar. Cuando el colorante haya ascendido dos tercios del disco, extrigalo, el colorante se esparcir hasta ocupar todo el disco. C) Una vez, el disco lleno de colorante, depostelo sobre el agar. D) Incube a 35 C por 24-48 hrs.
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REACTIVOS UTILIZADOS
A) MEDIO DE CULTIVO (AGAR NUTRITIVO). Este producto en el comercio. Preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Despus de esterilizar. Verter de 15-18 ml en cada caja de Petri. B) CRISTAL VIOLETA 1:1 % Cristal violeta.............................................................1.0 gr. Agua destilada...........................................................10 ml. Disolver el colorante en el agua. Conservar en frasco mbar. C) CRISTAL 1:1000 % Cristal violeta.............................................................0.5 gr. Agua destilada...........................................................100 ml. Disolver el colorante en el agua, conservar en frasco mbar. D) CRISTAL VIOLETA 1:2000 % Cristal violeta.............................................................0.5 gr. Agua destilada...........................................................100 ml.
PRECAUCIONES
A) Asegrese de que el disco impregnado de colorante haga contacto con el medio e cultivo. B) Est seguro de haber inoculado en toda la superficie del medio. C) No tome el disco con los dedos.
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30. INTRODUCCION
Uno de los agentes fsicos que afectan el crecimiento de los microorganismos, es la energa radiante. aunque ciertas longitudes de ondas son benficas e incluso esenciales para algunas bacterias. Estas radiaciones pueden ser de muchas formas, tales como rayos X, rayos Beta, Rayos Gama y Luz ordianaria. Desde hace tiempo se conoce que ciertas longitudes de onda entre 2.6 y 2.7 A (Amstrong), es letal para clula en general, en particular para los microorganismos. Ciertos materiales celulares, particularmente los cidos nucleicos absorben estas radiaciones y aparentemente les causa daos irreversibles, si la intensidad y el tiempo de exposicin son suficientes. La radiacin ionizadora puede causar daos permanentes al material gentico de la clula. Las lmparas de luz ultravioleta tiene varias desventajas como agente esterilizante. Desde el punto de vista prctico, la exterminacin de bacterias son luz ultravioleta tiene usos muy limitados, puesto que son pocas kas situaciones en que las bacterias son vulnerables a este tipo de radiaciones. La capacidad exterminadora de esta luz tambin depende de la distancia de la fuente al organismo y del tiempo de exposicin. Generalmente es preciso que el organismo est razonablemente cerca de la fuente lumnica.
MATERIAL
A) B) C) D) E) F) Cajas de Petri con medio de cultivo (Agar nutritivo) (4). Cultivo de Escherichia Coli de 24 hrs. en caldo. lmpara de luz ultravioleta con longitud de onda de 2.65 A. Asa bacteriolgica. Mechero. Etiquetas.
PROCEDIMIENTO
A) Inocule cada caja de Petri con medio de cultivo con Escherichia Coli. B) Con las cajas destapadas exponga a la accin de la luz ultravioleta. 1. 10 segundos. 2. 60 segundos. 3. 30 segundos. 4. 5 minutos. C) Irradie cada caja por separado. D) Despus de la irradiacin coloque la tapa de la cha de Petri. E) Incubar a 35 C por 24-48 hrs. F) Anote sus resultados.
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RESULTADOS
A) MEDIO DE CULTIVO (AGAR NUTRITIVO). Este producto existe en el comercio. Preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Esterilizar. Verter de 15-18 ml de agar en cada caja de Petri estril.
PRECAUCIONES
A) B) C) D) E) F) Procure no mirar directamente los rayos ultravioleta. Evite mirar los reflejos de la luz ultravioleta. No irradie los medios inoculados cuando la caja de Petri tenga colocada la tapa. No exponer a la luz visible durante e inmediatamente despus de la irradiacin. Despus de la irradiacin, envuelva las cajas en papel de estraza. Haga la irradiacin de preferencia en cmara oscura.
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31. INTRODUCCION
EFECTO DE LA TEMPERATURA
La temperatura es uno de los factores de ms importante influencia sobre todas las formas vitales. Las relaciones de la temperatura con el crecimiento son singulares complejas. De acuerdo con los requerimientos de temperaturas mnimas y mximas de las bacterias, se dividen en: A) MESFILAS, crecen entre los 10 - 45 C B) PSICROFILAS, crecen a 0 - 8 C C) TERMOFILAS, crecen a 50 - 72 C Las actividades metablicas de un organismo son resultados de reacciones qumicas, y como el desarrollo de estas reacciones est condicionada por la temperatura, los procesos vitales tambin se encuentran infludos por ella. La temperatura ptima de crecimiento para un organismo est en correlacin con la de su hbitat. Cuando se utiliza la temperatura para el control de los microorganismos, las temperaturas superiores a la mxima ejercen un efecto letal, mientras que las inferiores a la mnima se consideran, en general, ejercen un efecto esttico. Como el calor es uno de los agentes de esterilizacin ms eficaz y seguro, es el que se utiliza con ms frecuencia.
MATERIAL
A) B) C) D) E) Tubos con medio de cultivo (Caldo nutritivo) (36) Cultivos de Escherichia Coli, Bacillus Subtilis, Staphylococus Aereus. Mechero. Etiquetas. Asas bacteriolgicas.
PROCEDIMIENTO
A) inocule 12 tubos con medio de cultivo con Escherichia Coli, otros 12 con B. Subtilis y otros 12 con Staphylococus Aereus. B) Incubar por pares a las temperaturas de 5, 10, 20, 35, 45 y 60 por 24-48 hrs. C) Anote sus resultados.
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REACTIVOS UTILIZADOS
A) MEDIO DE CULTIVO (AGAR NUTRITIVO. Este producto existe en el comercio, preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Verter 5 ml de medio en cada tubo de ensayo, esterilizar a 121 C, por 15 minutos.
ALTERNATIVA
A) MEDIO DE CULTIVO 1. Caldo Glucosado: Este producto se encuentra en el comercio, preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Verter 5 ml de medio en cada tubo de ensayo. Esterilizar a 121 C por 15 minutos. 2. Agar Nutritivo. Este producto existe en el comercio, preparar de acuerdo a las indicaciones del envase. Disolver. Verter 3 ml de medio en tubos de ensayo (13 x 100). esterilizar a 121 C por 15 minutos, dejar enfriar en forma inclinada.
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32. INTRODUCCION
La taxonoma o ciencia de la clasificacin trata del arreglo ordenado de los seres vivos en grupos de acuerdo con sus semejanzas intrnsica. Los microorganismos se podran clasificar en un reino aparte PROTISTA- distinto del animal y del vegetal. En general, la mayor parte de los organismos que nos ocupan pertenecen al orden en bacteriales (Bacterias verdaderas). Conforme ms se familiarice con la taxonoma, ms claro le parecer el esquema general de clasificacin. El gran principio unificador subyacente a todas las ciencias biolgicas es el concepto de la Evolucin Orgnica. Este concepto relaciona entre s todos los seres vivos en un rbol filogentico. La doctrina evolutiva nos afirma que todas las formas de vida se originan de otras formas de vida preexistentes. Desde hace ya tiempo que los microbilogos se han visto forzados a establecer una clasificacin de tipo claves de donde, para diferenciar un grupo de organismos de otras, se emplean factores bioqumicos observables tanto como las diferencias morfolgicas. La taxonoma de los microorganismos es una clasificacin basada en varios tipos de anlisis qumicos y tinciones. En esta prctica hemos incluido versin modificada de algunas de las claves del manual de Bergeys. Por medio de estas claves puede usted identificar tentativamente los organismos que se le asignen. Estos cuadros constituyen una lista de todos los organismos que usted pudiera encontrarse. Al tratar de identificar una bacteria, el estudiante seguido se encuentra con la dificultad de decidir si se trata de un bacilo o de un coco, a menudo se desea consultar al instructor para verificar la morfologa o el resultado de un anlisis enzimtico. El siguiente experimento debe llevarse a cabo, por el estudiante de manera completamente idependiente, sin ser asistido por su instructor. Despus de que se le haya asignado su cultivo, proceda a identificarlo lo mejor posible.
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MATERIAL
A) Cultivo asignado para su identificacin. B) Medios de cultivos necesarios. C) Reactivos.
D) E) F) G) H) I) J) Colorantes. Tubos de ensayo Cajas de Petri. Asa Bacteriolgica. Mechero. Etiquetas. Pipetas.
PRECACUCIONES
A) B) C) D) E) F) Asegrese de tener un cultivo para la identificacin. Evite que se le contamine. Que los medios de cultivo estn preparados adecuadamente. Que los colorantes sean los especficos para cada tincin. Que los reactivos sean bien preparados. Establezca un patrn de trabajo, para trabajar diariamente.
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BIBLIOGRAFA
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