UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFERS

CURSO: ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II DOCENTE: DRA. VIOLETA MORIN GARRIDO ALUMNA: ALINA FABIOLA ROBLEDO RABANAL

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

INTRODUCCION

Nuestro organismo cuenta con un sistema buffer o tampn que amortigua los cambios de pH que pudisemos tener ante el ingreso de sustancias ya sean cidas o bsicas o que por alguna razn haya un cambio en nuestro pH por alguna alteracin como el ingreso de patgenos, o que se presente una acidosis o una alcalosis. Nuestro organismo tiene un pH de 7.4 entonces si hay un cambio va haber una incompatibilidad, habr rompimiento de molculas, lo que resultara en consecuencias adversas para nuestra homeostasis, con la consecuencia prdida de la salud. Nosotros tenemos un sistema que amortigua esta alteracin, stos son nuestros buffer fisiolgicos, aunque tambin lo existen artificiales. Si no existieran estos sistemas de amortiguamiento en nuestro organismo ante la aparicin de una sustancia cida o bsica nuestro pH cambiara de una manera brusca, lo que significa un dao irreparable, estas sustancias buffer lo que permite es q no haya ese cambio precipitado del pH, lo que mantiene nuestra homeostasis.

OBJETIVOS

Conocer una de las tcnicas elementales utilizadas en el laboratorio bioqumico y clnico, para determinacin de metabolismo hdrico y minerales. Conocer la importancia de los anlisis bioqumicos del pH, usos en casos analizados y la interpretacin de Mecanismos cidos bsicos del pH, formulacin de soluciones madres

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

Pgina 2

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

Pgina 3

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

SOLUCIONES BUFFER EFICACIA AMORTIGUADORA

Podemos definir la capacidad amortiguadora de un tampn como la cantidad de cido o base fuerte que puede neutralizar sufriendo un desplazamiento de pH de una unidad (Figura de la derecha). Resulta evidente que la eficacia amortiguadora est vinculada a dos factores:

la concentracin absoluta del sistema la proporcin relativa de las formas disociada y sin disociar

Un sistema de actico y acetato concentrados (1M en cada componente, por ejemplo) tendr el mismo pH que el mismo sistema a concentracin 0,01M (100 veces ms diluido). Sin embargo, la capacidad amortiguadora ser mayor en el sistema ms concentrado . En efecto, si aadimos 0,1 moles de HCl al sistema 1M (cuyo pH es 4,76), se transforman 0,1 moles de NaAc en HAc, y su pH baja a 4,67. En cambio, en el sistema 0,01M, la adicin de HCl lo desborda por agotamiento del NaAc y queda HCl libre, lo que provocar un fuerte descenso del pH. La capacidad amortiguadora es mxima cuando el cociente sal/cido es prximo a la unidad (Figura de la derecha). Si tenemos 50
ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

pH = pKa + Log Sal cido

Pgina 4

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

PROCEDIMIENTO Preparar 50 ml. De una solucin de 0.02 m de buffer fosfato pH 7.5 a partir de: Una solucin 0.1 M. de Na2HPO4 (fosfato disdico) Una solucin 0.05 M. de NaH2HPO4 (fosfato monosdico) a) b) c) d) Medir el pH. Aadir 1 ml. HCl (0.05 N), medir el pH nuevamente. Medir el pH de 50 ml. De H2O estilada, aadir 1ml. HCl (0.05 N). Medir el pH nuevamente. CUESTIONARIO I a) Las relaciones involucradas en c./experimento. En 50 ML. DE UNA SOLUCIN 0.02 M. BUFFER FOSFATO PH 7.5: CONCENTRACIN DE LA SAL X = 8.35 X10 4 M X=8.35 ml (cantidad de sal a colocar) CONCENTRACIN DE CIDO X =1.65 X 104 M X= 3.3 ml (cantidad de cido a colocar) 8.35 ml de sal ml de cido 38.35 ml de agua destilada En 50 ML DE UNA SOLUCIN 0.02 M DE BUFFER FOSFATO PH 7.5

CONCENTRACIN DE NA(OH) X = 8.35 X10 4 M X=8.35 ml(cantidad de Na(OH) a colocar) 8.35 ml de Na (OH) 10 ml de cido 31.65 ml de agua destilada En 50 ML DE UNA SOLUCIN 0.02 DE BUFFER FOSFATO PH 10 ml de sal ml de HCL 36.7 de agua destilada

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

Pgina 5

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA diferentes

b) Los clculos efectuados para la determinacin de las cantidades soluciones a emplearse a cada caso.

Preparar 50 ml. De una solucin 0.02M de buffer fosfato pH 7.5 a partir de: 1)
pH = PK a + Pb

[ cido]

[ Sal ]

6.8

7.5 = 6.8 + log

[ cido]

[ Sal ]

sal. =sal.

0.7 = log

a a2

5.0119 =
a = 0.0167

a a2
Concentracin de sal

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

Pgina 6

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

2) Calculamos lo que necesitamos de Na (OH ) Segn la ecuacin se encuentra en un litro. Preparar 50 ml. 0.0167 X 1000ml 50ml

X = 8.35 x10 4 mol de Na 2 PO4

3) 0.1 8.35 x10 4 X = 8.35 ml de Na 2 PO4 1000ml X ml

(Cantidad de sal a colocar).

4)

Cantidad molar cantidad sal= cantidad de acido 0.02 0.0167 = 0.0033

Cantidad de acido= 0.0033

0.003M X

1000ml 50ml X = 1 .65 x10 4

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

Pgina 7

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS 0.05 1.65 x10 4

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA 1000 ml Y ml

Y = 3.3 ml de NaH 2 PO4

Cantidad de cido a colocar

c) Las lecturas obtenidas en el potencimetro. EL pH del HO si presento cambios bastante notorios segn la escala de pH q estamos usando: COLOR pH Rojo 4 Naranja 5 Amarillo 6 Verde 7 Azul 8 ndigo 9 Violeta 10

En un vaso de precipitados tendremos el Buffer fosfato 0.02 M a pH 7.5 que esta formado por 8.35 ml de Na2PO4 y 3.3 ml de NaH2PO4 a lo cual le aadiremos agua destilada hasta completar los 50 ml. En otro vaso de precipitados solo tendremos 50 ml de agua destilada. Luego utilizamos el indicador universal para calcular el pH de cada uno de las soluciones que se encuentren en los vasos, observaremos que el vaso que esta con agua destilada tiene un color verde, y podemos deducir que se encuentra a un Ph neutro; mientras que el vaso con el buffer tambin es de color verde pero un poco mas oscuro, y podemos afirmar que se encuentra a un p H aproximado de 7.4. d) Cmo reaccionaron las reacciones buffer al aadir sales Na (OH) o HCl? Cambio el pH? Buffer fosfato 0.02 M +Na (OH) pH = 7.5

Cuando agregamos hidrxido de sodio al buffer podemos notar que la solucin toma un color medio azul por lo que podemos decir que tiene un pH de 7.7 y la variacin con

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

Pgina 8

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

respecto al estado inicial no ha sido mucho, es decir el buffer impide que el pH cambie bruscamente. Agua pH = 7 +HCl

Cuando agregamos HCl el color de la solucin se torna mas oscura, y podemos decir que el pH ha tenido un ligero cambio. + Na (OH)

Cuando agregamos hidrxido de sodio podemos ver que el color verde cambia a violeta, lo que significa que hubo un cambio muy grande en el pH d 7 a 10 aprox. La solucin se vuelve alcalina. + HCl

Cuando agregamos acido clorhdrico el color del vaso se torna rosado, lo que significa que el pH disminuyo a menos de 4 y por lo tanto la solucin se volvi acida. En el agua destilada: al inicio el H2O presentaba una tonalidad media amarilla q se acercaba al equilibrio, pero cuando se han ido agregando Na (OH) o HCl respectivamente a habido una variacin notoria y por consiguiente un cambio de pH.

HO y su pH normal

HO y el cambio de pH al agregar HCl se acidifica.

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

HO y el cambio de pH al agregar NaOH, se alcaliniza.

Pgina 9

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

CUESTIONARIO II 1. Seale sustancias de uso clnico que se usan como sustancia hidroelectrolticas. Dextrosa en soluciones acuosas: 5 % en agua isotnica 10% en agua hipertnica Soluciones salinas: Cloruro sdico 0.45% (suero fisiolgico) hipotnico Cloruro sdico 0.9% (suero fisiolgico) normal Cloruro sdico 3.5% hipertnico Dextrosa en soluciones salinas Dextrosa 5% en cloruro sdico al 0.9% hipertnico Dextrosa 5% en cloruro sdico al 0.45% hipertnico Soluciones de electrolitos mltiples Ringer lactato isotnica Dextrosa 5% en ringer lactato hipertnica Lquidos orales Lytren Zumo de naranja Zumo de manzana Gatorade Electroligth Frutiflex, etc. 2. Qu es una solucin tampn o buffer? Cmo se regula el pH? Buffer es un sistema que tiende a impedir el cambio de pH cuando se aaden iones H+ o OH- , la capacidad de taponamiento es mxima, es decir cuando la concentracin de aceptor de protones es igual con la de dador de protones donde se cumple que pH = pK, la capacidad de taponamiento disminuye a medida que aumenta el pH o desciende. Los organismos vivos cuentan con sistemas tampones o amortiguadores de pH, que contribuyen a mantener constante el pH. Como resultado del metabolismo, los seres vivos producen constantemente cidos al medio, tales como el cido lctico y el cido carbnico, que modifican el pH. 3. Qu sustancias de uso clnico se usan como indicadores del pH? Metil violeta
ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II Pgina 10

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS Azul de Timol Amarillo de Metilo Naranja de Metilo Verde de Bromocresol Rojo de Metilo Timolftalena

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA Clorofenol Azul de Bromotimol Rojo Fenol Prpura de Cresol Fenolftalena Carmn ndigo. Amarillo de Alizarina

4. Qu ocurre en los procesos de alcalosis o acidosis? (Metablico Respiratorio)? Alcalosis Metablica: se caracteriza por la presencia de bicarbonato en exceso. Esto puede deberse a una prdida de lquidos (vmitos, diarrea, diurticos) o la ingesta de un exceso de base, entre otros. La Respuesta Compensatoria surgir en el sistema respiratorio. El centro de control respiratorio inducir una hipoventilacin y su consecuente retencin de CO2. En este caso el sistema renal tambin genera su aporte compensatorio aumentando el filtrado glomerular. No debemos olvidar que, en trminos generales, cuando el trastorno primario es metablico (renal), la compensacin es respiratoria y se produce inmediatamente. Por el contrario, cuando la alteracin primaria es de origen respiratorio, la compensacin es metablica y los mecanismos renales que se ponen en marcha requieren varios das para llevar a cabo dicha compensacin. Acidosis Metablica: se caracteriza por la disminucin en la concentracin de HCO3- debido a una disfuncin en su recuperacin del filtrado. Un nivel disminuido de bicarbonato en presencia de una pCO2 normal produce unta disminucin de la relacin entro el bicarbonato y el cido carbnico, por lo que ocasiona una reduccin del pH por acumulacin anormal de cidos orgnicos. La Respuesta Compensatoria es llevada a cabo por los pulmones que tienden a compensar eliminando cantidades mayores de CO2, hiperventilando. Tambin existe una pequea respuesta compensatoria llevada a cabo por el propio rin que disminuye la velocidad de filtrado glomerular. Alcalosis Respiratoria: se caracteriza por una eliminacin excesiva de CO2 a travs de los pulmones con una consecuente disminucin de la PCO2. La causa primaria es la Hiperventilacion. Esta situacin puede deberse a estados de ansiedad, fiebre alta, la exposicin a grandes alturas o la intoxicacin con ciertos frmacos, entre otras. La Respuesta Compensatoria tambin surge en los riones, que se encargarn de disminuir la concentracin de HCO3-. Acidosis Respiratoria: se caracteriza por la incapacidad de los pulmones para eliminar todo el CO2 producido por el organismo, por lo que la PCO2 aumenta. De este modo se produce una disminucin en la relacin bicarbonato / c. carbnico. La causa primaria es la Hipoventilacion que puede deberse al uso de psicofrmacos o a la existencia de enfermedades pulmonares por ejemplo. La Respuesta
Pgina 11

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

Compensatoria es llevada a cabo por el sistema renal que producir un incremento de la concentracin de HCO3-. 5. Cmo influye la concentracin molar de un buffer y la concentracin de cada una de sus especies? Buffer es un sistema que tiende a impedir el cambio de pH cuando se aaden iones H+ o OH- , la capacidad de tamponamiento es mxima, es decir cuando la concentracin de aceptor de protones es igual con la de dador de protones donde se cumple que pH = pK, la capacidad de tamponamiento disminuye a medida que aumenta el pH o desciende . Un buffer o Tampn qumico, en trminos qumicos, tambin es un sistema constituido por un cido dbil y su base conjugada o por una base y su cido conjugado que tiene capacidad "tamponante", es decir, que puede oponerse a grandes cambios de pH (en un margen concreto) en una disolucin acuosa. La clula tiene un pH alrededor de 7.2 y pequeas alteraciones del pH pueden producir graves alteraciones funcionales ya que las enzimas son altamente dependientes del pH. Las fuerzas del buffer dependen de qu especies se pueden ionizar en funcin del pH ya que van a variar la conformacin de las protenas y sus cargas elctricas. Estos cambios pueden alterar la conformacin adecuada para la actividad cataltica. Las especies que se pueden ver afectadas son principalmente, el sistema buffer, el sustrato, el (los) cofactor (es), y los grupos esenciales ionizables del centro activo de la enzima. 6. Cules son los buffer orgnicos e inorgnicos en el organismo y de que dependen? Buffers orgnicos

Las protenas y aminocidos como tampn

Los aminocidos y protenas son electrolitos anfteros, es decir, pueden tanto ceder protones (cidos) como captarlos (bases) y, a un determinado pH (en su pI), tener ambos comportamientos al mismo tiempo. La carga depende del pH del medio. En un medio muy bsico se cargan negativamente, mientras que en el fuertemente cido lo hacen positivamente. Desde el punto de vista fisiolgico este tipo de amortiguador es resulta de especial inters a nivel tisular. Tampn hemoglobina

Es un tampn fisiolgico muy eficiente debido tanto al cambio de pK que experimenta al pasar de la forma oxidada a la reducida, como a la gran abundancia de esta protena en la sangre (15 % del volumen total sanguneo). La oxihemoglobina (pK= 7,16) es un cido ms fuerte que la desoxihemoglobina (pK= 7,71). Los valores de pK son tales que determinan que en la disociacin siguiente, el valor x sea, aproximadamente, 0,7.
ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II Pgina 12

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

HbH+x + O2 HbO2 + xH+ Esta propiedad de la hemoglobina, de cambiar su valor de pK, demuestra el efecto tampn, permite el transporte de una determinada cantidad de CO2 liberada en los tejidos. La hemoglobina oxigenada que llega a los tejidos se disocia liberando O2, un proceso que est favorecido por el estado de los tejidos (baja pO2, menor pH y alta pCO2). 0,7H+ + HbO2 HbH+0,7 + O2 6

Buffers inorgnicos

Tampn carbnico/bicarbonato

Est constituido por H2CO3 y HCO3-. Aunque su valor de pK (6,1) 1) La relacin HCO3-/ H2CO3 es muy alta 20/1 2) Es un sistema abierto, con lo que el exceso de CO2 puede ser eliminado por ventilacin pulmonar de manera rpida 3) Adems, el HCO3- puede ser eliminado por los riones mediante un sistema de intercambio con solutos mecanismos lentos.

7. Cmo se elimina amoniaco a nivel renal y porqu se intercambia? Mecanismos de amortiguacin renal: Excrecin de H+ El rin desempea un papel crtico en el equilibrio cido-bsico a travs de la regulacin del HC03 plasmtico. Esto se lleva a cabo de dos maneras: por la reabsorcin del HC03 filtrado que evita la prdida urinaria y por la excrecin de 50 a 100 mEq de H+ en las 24 horas. En los humanos el pH mnimo que puede alcanzar la orina es de 4.5 a 5.0 unidades, lo que equivale a una excrecin de H+ de 0.04 mEq/l; por lo tanto, para eliminar los 50 a 100 mEq de H+ que produce el cuerpo por da es necesario que el H+ se elimine combinado con los amortiguadores urinarios, lo que se define como acidez titulable (la unin del H+, con fosfatos y sulfatos) y en combinacin con el amoniaco (NH3) para formar amonio (NH4+) y de este modo minimizar los cambios en el pH urinario. Es importante sealar que la reabsorcin de HCO3 y la formacin de acidez titulable y NH4+ todo ocurre por la existencia del mecanismo de secrecin activa de H+ de la clula a la luz tubular. La acidosis metablica afecta habitualmente a tres esferas del organismo: la cardaca, la neurolgica y la sea. La acidosis, sobre todo si el pH se encuentra entre 7.1 y 7.15,
ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II Pgina 13

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

predispone a la aparicin de arritmias ventriculares potencialmente fatales y puede reducir tanto la contractilidad cardaca como la respuesta inotrpica a catecolaminas. Se debe evitar la perpetuacin de la acidosis lctica inducida por choque, ya que su correccin es crtica para que se recupere adecuadamente la perfusin tisular. Las anormalidades neurolgicas son ms prominentes en la acidosis respiratoria que en la acidosis metablica. En otras ocasiones, los trastornos neurolgicos ocurren a consecuencia de la hiperosmolaridad por elevacin de la glucemia ms que por un descenso en el pH arterial. La mayora de las acidosis metablicas son agudas; sin embargo, la insuficiencia renal y la acidosis tubular renal pueden asociarse con acidosis crnica; en estas condiciones, parte de la amortiguacin del H+ retenido se lleva a cabo con el carbonato proveniente del hueso. Cuando esta alteracin ocurre en nios, retarda el crecimiento y produce raquitismo; en los adultos, da lugar a ostetis fibrosa qustica y osteomalacia. En pacientes con ATR, la sola correccin de la acidosis permite la cicatrizacin del hueso y un crecimiento normal.

CONCLUSIONES El pH es el logaritmo negativo de [H+]. Un pH bajo caracteriza un solucin cida y un pH alto denota una solucin bsica Los buffers son amortiguadores resisten un cambio de pH cuando se producen o se consumen protones, la capacidad de amortiguacin mxima ocurre a +/- 1 unidad de pH en cualquier lado del pk. Los amortiguadores fisiolgicos, es decir los que controlan las actividades y el buen funcionamiento del cuerpo, son: bicarbonato, ortofosfato y protenas. Los sistemas amortiguadores tienen una funcin importante en el mantenimiento del pH de los fluidos corporales La eficacia de la accin amortiguadora contra la adicin de cido o lcali depende de la concentracin de los ingredientes del buffer y es mxima cuando se encuentran en proporciones aproximadamente iguales. La concentracin en iones de hidrogeno de una solucin indica su grado de acidez, y el pH es una manera de expresarlo. El organismo dispone de numerosos sistemas tampn que asegura este equilibrio. Protenas, carbonatos, fosfatos, etc.

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

Pgina 14

PRACTICA N01 SOLUCIONES BUFFEERS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

El pulmn regula la concentracin CO2 y el rin regula la concentracin de bicarbonatos.

BIBLIOGRAFIA

http://www.dialogica.com.ar/medline/2005/08/celulaunidad_de_vida.html http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/amortiguadores.html Murria, Granner, Mayes, Rodwel, Bioqumica Harper. (2004) 15ta. Edicin. Editorial El Manual Moderno. Tortora- Grabowski. Principios de Anatoma y Fisiologa (1996). http://es.geocities.com/simplex59/equilibriocidobase. EFICACIA AMORTIGUADORA. Disponible en: http://www.ehu.es/biomoleculas/buffers/efica.htm

ESTRUCTURA, FUNCIN CELULAR Y TISULAR II

Pgina 15