UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ PR-REITORIA DE PESQUISA E PS-GRADUAO DEPARTAMENTO DE CINCIAS BIOLGICAS PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM GENTICA E BIOLOGIA MOLECULAR

Seminrio de Qualificao de Mestrado

Discente: Sanli Santos Lima Orientadora: Dra. Karina Peres Gramacho Co-orientadores: Dr. Didier Clement Dr Fernanda Gaiotto

Diversidade gentica de Moniliophthora perniciosa em cacaueiros do Estado do Esprito Santo

O basidiomiceto Moniliophthora perniciosa (Mp) o agente etiolgico da vassoura-de-bruxa do cacaueiro (Theobroma cacao L.). O primeiro caso descrito no Sul da Bahia foi em 1989, na regio de Uruuca e depois um novo foco da doena foi registrado na regio de Camacan. Em 1999 pesquisadores estudando a diversidade do patgeno nos dois focos iniciais, mostraram evidncias do municpio de Camacan ser o primeiro local de introduo. No Esprito Santo, a doena chegou em fevereiro de 2001, no municpio de Linhares. Atualmente verifica-se que o aumento da doena exponencial, estimando-se mais que 95% das lavouras estejam infectadas, provocando queda de 40% na produo de cacau capixaba (ABC,2012), quarto produtor nacional, antecedido pela Bahia, Par e Rondnia. Este estudo representa a primeira anlise detalhada de gentica de populaes da vassoura de bruxa no Esprito Santo. Foi testada a hiptese de que subpopulaes geogrficas de M. perniciosa de cacau so geneticamente homogneas. Buscamos tambm estudar a estrutura gentica de Mp, associada as regies dos primeiros relatos da doena no estado do Espirito Santo, respondendo a questo : Como se distribui a diversidade gnica e genotpica de Mp, 10 anos aps a sua introduo no estado? Para responder essa questo, 137 isolados do patgeno foram coletados em sete reas de cultivo comercial de cacau nas principais zonas produtoras no municpio de Linhares e So Mateus. Esses isolados foram genotipados usando dez locos polimrficos de microssatlites. A utilizao desses marcadores, associado a anlises de gentica de populaes vem sendo utilizado com sucesso em diversos patossistemas, auxiliando tanto na identificao de gentipos patognicos, como tambm permitindo inferir sobre a biologia dos fitopatgenos. Os dez locos de microssatlites apresentaram de 2 a 10

alelos por loco (mdia de 3,7 alelos). Alelos privados estiveram presentes em 4 das 7 subpopulaes. Setenta e cinco gentipos multilocos distintos foram encontrados entre os 137 isolados analisados. O valor mdio da diversidade genotpica, estimada segundo a medida de Stoodart e Taylor foi 10,17. Um total de quatorze gentipos foram compartilhados entre subpopulaes. A riqueza allica mdia entre todas as subpopulaes foi 2,57. A heterozigosidade esperada (HE) variou de 0,19 a 0,37 entre as subpopulaes. A anlise da diferenciao entre pares de populaes foi baseada na Estatstica F de Wright, usando a soma do quadrado das diferenas em nmero de repeties (RST). A maioria da variao na frequncia de alelos foi observada dentro de subpopulaes (86,4 %), enquanto 13,6 % da variao total foi atribuda a diferenas entre subpopulaes. Valores de RST foram significantemente diferentes de zero, com variao de 0,08 a 0,37, indicando moderado a elevado nvel de diferenciao entre subpopulaes. A presena de gentipos compartilhados entre todas as subpopulaes forneceu as evidncias de disperso do patgeno entre regies geograficamente distintas, sustentando a hiptese de fluxo gnico. As caractersticas naturais do ciclo da doena, a impede de disseminao a maiores distncias, visto que, os basidiocarpos so viveis por um curto perodo de tempo. Acredita-se ento, que os gentipos no foram compartilhados ao acaso, e sim devido ao movimento de estacas (assintomticas) para enxertia, visto que os primeiros sintomas da doena s so visveis num perodo de 20 a 30 dias aps a infeco. Assim, um inculo associado a estacas transportado um local a outro, teria funo significativa na disseminao da vassoura de bruxa nessas localidades. Vale lembrar que a disseminao natural da doena pela ao do vento ou chuva ocorre de modo eficiente, no mximo, at 300 m da fonte de inculo. Uma possvel explicao para a alta diversidade encontrada em Mp a ausncia de perodos desfavorveis a doena na regio. Apesar de a regio possuir uma estao seca bem definida, a cacauicultura irrigada, sob cabruca e aliado ao fato do controle cultural no ser realizado por muitos dos produtores, em plantas perenes como o cacau (de origem comum), o tecido suscetvel encontra-se disponvel durante todo o ano, assegurando a sobrevivncia do inculo pelos prprios hospedeiros doentes. Dessa forma, a populao do patgeno no sofre redues severas. Sabe-se que M. perniciosa apresenta elementos transponveis ativos, uma importante fonte de mutao, que possui sistema reprodutivo misto, apresenta alta diversidade gentica, que possui elevado tamanho populacional em cacaueiros suscetveis cultivados em larga escala e fluxo gnico comum entre as reas plantadas. Patgenos com essas caractersticas possuem um grande potencial de adaptao em mudanas de ambiente. Portanto, o conhecimento da evoluo do fungo na regio amostrada ser imprescindvel para se entender a sua dinmica populacional e fornecer subsdios para o manejo da doena nesse importante plo cacaueiro do Brasil. Ciente: