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FORMALES
ESCUELA PROFESIONAL DE QUI~nCA
PARA
MONOGRAFIA DE INVESTIGACION
DETERlVIINACIN DEL METABOLITO BENZOILECGONINA
AGRADECIMJENTO:
Un especial agradecimiento para el Comandante: Edrnundo Miranda Cabello ya todos los que Integran el cuerpo de laboratorio de Qumica Forense de la Polica Nacional del Per, filial Arequipa, por el apoyo brindado en la ejecucin de este Trabajo
Resmnen Introduccin
1.1 Aspectos
1.5 Fannacocintica
1.6 Distribucin 1.7 Biotransonnacin 1.8 Qumica 1.9 Constantes Fisco-Qumicas 1.10 Preparacin
1.11.2 CromatografIa a gas con detector captura de electrones 1.11.3 Cromatografia a gas con detector de Ionizacin de Llama 1.11.4 CromatografIa liquida a alta presin (HPLC)
1.11. 5 Cromatograla en capa tIna
2.0 Metodologa 2.1 Concentracin en fluidos biolgicos 2.2 Preparacin de la Muestra 2.2.1 Recoleccin de laMuestra 2.2.2 Estabilizacin 2.2.3 Procedimiento
CAPITULO
ID:
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
DETERMINACIN DEL METABOLITO BENZOILECGONINA COMO INDICADOR DE CONSUMO DE COCAINA 1\1EDIANTE LA TECNICA DE CROMATOGRAFA DE GASES
-Este trab~o ha sido motivado merced a 1.Ula inquietud por conocer 1.Ul problema que tiene muchos 3ilos de vigencia y que est inmerso en prcticamente todos los pases del m1.Uldo generando corrupcin destruccin y deterioro de la sociedad humana. Por tal razn, el siguiente trabajo comprende todos los campos de forma general que involucran a la cocana. Sin embargo; se hace incapi en lo que respecta a los mtodos empleados para. la deteccin el despistaje del conswno de droga en personas adictas y ocasionales.
Dentro de estos mtodos cualitativos, se detalla con mas precisin el de la tcnica cromatogrfica. de gases, la. determinacin de 1.Ul metabolito denominada. benzoilecgonina. como indicador del conswno de cocana. Aqu abarca 1.Ulaextraccin con solvente, anlisis cromatogrfico y forma de interpretar los cromatogramas.
hidrlisis de cuyo producto, el de mas concentracin es la benzoilecgonina, por eso el anlisis cualitativo esta en funcin de este derivado hidrolizado.
El metabolito de la benzoilecgonina responde satisfactoriamente a las sef1ales emitidas por el cromatgrafo de gases, lo cual hace preveer que el mtodo a utilizarse sea factible.
INTRODUCCIN
El laboratorio criminaHstico de qumica. forense de la. de la. Policia Nacional del Per (filial Arequipa) reporta casi diariamente la presencia de personas involucradas con la cocana. a las cuales se les somete a. un despist~e de consumo para. probar su
implicancia. Este despistaje se realiza con el mtodo de cromotograla de capa fina previa extraccin con solventes. Sin embargo aunque no se puede menospreciar el
mtodo usado por la institucin, sucede que la cocana es metabolizada por una hidrlisis en metilster de la ecgonina y benzoilecgonina, quedando muy poca cocana inalterada para su anlisis. Mas aun estudios encontrados bibliogrficamente seala que la. vida
. media de la cocana es de 0.76 + 0.23 horas. Por lo tanto, si se ha de detectar la presencia de cocana en el cuetpo humano, tendr que ser como cocana metabolizada, principalmente como benzoilecgonina. puesto que es el metabolito mas abundante.
Adems este metabolito puede ser acilmente detectable con la cromotografIa de gases, equipo con la que ya cuenta la Polica Nacional del Per, Filial Arequipa.
Con el antecedente mencionado anteriormente, queda entonces demostrar dos objetivos: 1. Ensayar la tcnica cromatogrfica en la determinacin de la cocana en el cuetpo humano para ver su factibilidad. 2. Determinar el metabolito benzoilecgonina como indicador de consumo de cocana con esta misma tcnica. Finalmente, este trabajo encuentra su importancia plena considerando que estamos
y damos as una prueba inefutable. Dicho sea de paso se esta contribuyendo a una
institucin avocada en su lucha contra las drogas como la Polida Nacional del Per.
CAPTULO 1 GENERALIDADES
1.1.
Hay un trmino empleado por estas personas para referirse al consumo de la coca a mitad de faena; este es llamado acullico. El acullico de la coca no es simplemente el mascarlo" sino que tiene WIatcnica propi~ el cual consiste en retener las hojas enteras y moviendo de un lado a otro durante dos horas y media tratando as de extraer todo el zumo. (2)
AWlque el acullico representa la forma mas comn de usar la coca dista de ser la nica Los consumidores lo emplean como estimulante para la interaccin social, como medicin~ como orculo de consulta para diagnosis de enfermedades, para los quehaceres cotidianos y hasta como asentativo de las comidas.
En el altiplano y los valles del Per y Bolivia, todos en general incluso, los no acullicadores requieren de la coca para los fInes de accin civic~ para asumir lIDa responsabilidad, minera. (1) para resistir las faenas mas duras en la agricultura y la
Con el nombre de coca se designan algunas plantas de gnero eritroxilon, bsicamente las especies eritroxilon coca y eritroxilon novogranatense son las que han sido empleados desde hace varios siglos para los fines de eventos sociales y mgico religiosas.
Existen gran cantidad de estudios botnicos de los cuales podemos citar los . aportes de Machado(2) y los Blo\\'lllan(2) que incluso relaciona el porque de la existencia de esta planta en suelos exclusivamente Sudamericano. La pa~ta bsica de cocana en el Per se extrae de la especie de eritroxilon coca, cultivada en el vertiente de la Cordillera de los Andes. Esta e&'Peciees un arbusto de 1 a 3 metros de alto, corteza. pardo rojiza, ramas subrectas y r,.amillas comprimidas, hojas elpticas oblongo elpticas con una nervadw'a central y dos lineas laterales visibles sobre todo en el envs que la hace arrollada extenderse despues. (2) para
Existen dos variables a los que el estudio cHnico se fundamenta la fonna de consumo y vas de administracin. El estudio con estas variables se resumen en la siguiente tabla.
Forma de Consumo
Hoja de coca Pasta bsica de Cocana
Efecto
No definido Euforia ayuda de co110 tiempo Sntoma cardio-vascular Aspirado por la nariz y la intravenosa Sensacin notable, de pero euforia de
mxima euforia
Por otro lado, existen tres clases que acompaan a un conswnidor adicto y que tambin se resumir en lo siguiente:
Es lDla fase en donde emerge la apetencia El individuo siente disforia y angustia y se ve muy impulsado a consmnir la droga y busca muchas maas para conseguida, en los momentos previos al consmno, desaparece todos los sntomas de angustia y surge psicolgicamente amnenta con el primer tabacazo.
(1.)
Comonne el individuo va consmniendo, ir aumentando la euforia Pero llega lDlmomento en que se da cuenta que le quedan las ltimas aspiradas, siente que estas ltimas son menos placenteros y comienza a sentir los sntomas de disforia, irritabilidad angustia y se asociar a otras
FARl\1ACOLGICOS
DE LA PASTA BASICA DE
El estudio de la farmacologa de la cocana en el cuerpo humano, est dirigido mas a la farmacodependencia. La farmacodependencia puede definirse como 1m estado en la cual mla persona consmne droga para satisfacer lDla apetencia compulsiva especfica, es decir; que se desarrolla una apetencia por la droga que es reconocida por el individuo como diferente del hambre, la sed, el libido, cuando es suficientemente intensa, se convierte en el elemento dominante de su vida Para explicar la base farmacologica de la dependencia se han planteado muchos modelos. Al comienzo se quiso encontrar un nico modelo para todas las drogas. Sin embargo; posteriores estudios han demostrado que existen mucho modelos
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que di1eren entre s uno de otro dependiendo de la droga que consumen (ejemplo cocana y anfetaminas tienen bases neurolgicas distintas en donde actan). No obstante, para la cocana, han aceptado (por mayora) que intervendran las neuronas dopaminrgicas asociadas a los centros de gratificacin. Se conocen que si se estimulan elctricamente determinadas estructuras del sistema nervioso
central en animales y se da. a. estos los medios y la oportunidad~ aprenden rpidamente a provocar el estimulo y desarrollan
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comportamiento dirigido a
provocarlo repetidamente dejando de lado el alimento, el ~oua y sexo para conseguirlo. La cocana, provoca comportamiento similar al de la estimulacin elctrica de los centros de placer y adems intervienen en la sipnasis
dopaminrgicas. He all el modelo aceptado por la mayora Hay una pregunta en la que refiere el porqu la cocana produce efectos tan intensos y tarmacodependencias mas severas cuando se usa pasta bsica fumada y
no lo hace tanto cuando se hace por la nariz o via oral. La razn es que el efecto es mucho mas rpido ya que la cocana volatilizada por el calor encuentre una enorme superficie en los alvolos pulmonares pasa rpidamente a la sangre y de all a los tejidos en donde se encuentra en mayor concentracin.
Los estudios revelan que es ms impOltante para el estudio de la farmacocintica que la concentracin plasmtica alcanzada En la tarmacocintica se hace una comparacin entre las vas de administracin, por ejemplo~ la va oral y nasal y las vas filmada y endovenosa llegando a las conclusin de que la va oral y nasal elevan a niveles altos de concentracin, hasta 859 mglmL de plasma en caso de coqueo (reportado por Pali y Cola 1980); pero el ascenso de la concentracin se hace a una velocidad lenta En cambio las vias endovenosa y fumada, la elevacin de la concentracin es mucho ms rpido y por lo tanto sus efectos son mas rpidos e intensos.@
La distribucin de la cocana no esta del todo aceptada. Pero se sabe que su vida media es de alrededor de 0.76 + 0.26 horas Los datos de la pa'3ta bsica de cocana fumada para su vida media es de 1 hor~ alcanzndose concentraciones plasmticas cinco minutos de iniciado el fumado.
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1.7.
BIOTRANSFORJ\,fACIN
En la informacin bibliogrfica refiere que el 32 y 49% se eliminarn como ster metlico de la ecgonina, de 3-l0'? como cocana metabolizada y el resto como benzoilecgonina. Tambin re1eren que la pseudocolinesterasa es la enzima
responsable de la descomposicin en st.er metlico de la ecgonina~ al hidrolizar la unin con el cido benzoico.
La cocana se descompone sin la intervencin de la enzima en benzoilecgonina considerada cocana. (4l como el metabolito principal de la eliminacin urinaria de la
Los alcaloides son sustancias qumicas capaces de fonnar sales en presencia de .cidos. De all el nombre de alcaloides similar a. los lcalis. En general, el tnllino alcaloide es muy poco preciso y se aplica a un grupo heterogneo de sustancias nitrogenadas extradas de vegetales y con accin fannacolgica. mayora son bases aunque algunas (colchicina, por ejemplo) son neutros. La
clsicas de
estos; base nitrogenada capaz de fonnar sales con cidos orgnicos inorgnicos. Son de origen vegetal y actividad fmmacolgica definida, qumicamente es un derivado del tropano, perteneciendo al mismo gmpo qumico de otros alcaloides importantes como Bl'opina y la escopolamina.
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1) de l deriva el
tropano(fig.2) que tiene un grupo metilo(CH3) ligado al nitrgeno (el trmino NOR significa nitrgeno sin radical) del tropano deriva la ecgonina(fig.3), con radical alcohol (OH) en el carbono 3 y un carboxilo (COOH) en carbono 2, resultando ser entonces el 2-hidroxi 3 carboxitropano. La ecgonina puede formar steres con los alcoholes mediante radical cido y con los cidos mediante su radical alcohol. El ster doble, con alcohol metlico y con .cido benzoico, es la cocana(fig.4) l2>.t9>
1.9.
CONSTANTES FISICO-QUlVIICAS
Tratndose de un compuesto qufmico impuro, y por lo tanto de naturaleza qumica no definida, las constantes fIsico-quimicas de la cocana son slo referenciales. Formula: C17H21N04 Punto de fusin (OC): 98 Solubilidades (lg.ml) : Agua Etanol Eterdietilico Cloroformo 1300
7
4
0.5
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su punto de ebullicin es de 187~18goC. Sus sales como el clorhidrato, tiene un comportamiento diferente ya que se descomponen a temperaturas.
1.1O PREPARACIN
Para la preparacin de la pasta bsica de cocana los fabricantes se basan en las propiedades fisico-qumicas del alcaloide, especialmente la diferencia de
El clorhidrato es alrededor de mil veces mas soluble en agua que en base. Lo contrario ocurre con solventes orgnicos. De all se deduce tacilmente procedimiento: alcalinizacin de la hoja, secado extraccin el
con solvente
orgnico, precipitacin con cido fuerte, disolucin con residuo de agua y precipitacin con lcalis. De esta manera, se elimina la gran cantidad de componentes qumicos existentes en la hoja de coca y se obtienen slo los alcaloides y estos en forma bsica. De alli el nombre original y tradicional de pasta bsica de cocana.
Lo descrito no es el nico mtodo de aislamiento de la cocana y se han empleado muchos otros procedimientos que incluyen la utilizacin de alcoholes como solventes el empleo de subacetato de plomo. Con las hojas de coca cultivadas en Asia se preferia extraer los alcaloides, hidrolizarlos hasta ecgonina y luego a partir de esta resintetizar la cocana con alcohol metflico y cido anhfdrido benzoico.
Tradicionalmente en Sudamrica el cido mas empleado ha sido el cido sulfiirico y el solvente orgnico, el kerosene. Como lcalis, carbonatos para las hojas y para neutralizar el cido sulfirico. Cuando se trata de obtener el clorhidrato de cocana, es necesario hacerlo con un compuesto mas purificado. Para ello, se emplean oxidantes como el pennanganato de potasio, obtenindose un producto intennedio que tambin es fumado, la llamada pasta bsica lavada. Luego la cocana se disuelve con ter y se precipita como clorhidrato mediante el tratamiento con cido clorhidrico. @(?)(l)
METOnOS
CROMATO-
1.11.1 CROMATOGRAFA A GAS LQUIDO CON DECTECTOR DE NITROGENO La preparacin de la muestra consiste de una extraccin nonnal, una posterior extracci6n por procedimiento depurado para drogas b.'3icas.Se pone especial cuidado en mantener el pH por debajo de 10 dur~te la extracci6n. El propil ster de labenzoilecgonina, el cual es usado como estndar interno es aadido al comenzar el ensayo. El standar interno es
preparado mediante la esterificacin de la benzoilecgonina en n-propanol acificado. El detector de nitrgeno tambin responde sensitivamente a los
CAPTURA
DE
es necesarIO estabilizar
la cocana
y la
benzoilecgonina para que sea detectable con este detector. Por ejemplo, la cocana fue reducida a dimetiltropina usando LiALH4, y seguida por la preparacin de un derivado fluoroacetilado el cual podra ser medido por captura de electrones.
1.11.3 CROMATOGRAFA
DE IONIZACIN
DE LLAMA
Este mtodo no es lo suficientemente sensible para la deteccin de drogas. Se puede hacer el anlisis con este detector cuando se trato de una "sobredosis"
1.11.4
CROMATOGRAFA LIQUIDA A ALTA PRESIN (HPLC) Esta tcnica rpidamente envolvente est reemplazado muchas aplicaciones. a la GLC en
atractiva en lo que pennite sin derivatizacin, la cromotografla de los metabolitos de cocana relativamente polares. Un problema es que los derivados benzoilados (ecgonina, ecgoninametil-ester, etc.) no muestran suficiente absorbancia de la energa ultravioleta, como para permitir IIDa adecuada deteccin.
@
Mientras que la cromotografIa en capa fina sigue siendo la tcnica mas verstil para el despistle de drogas de abuso en orina, ella resulta menos til para la deteccin de cocana y sus metabolitos solamente
alrededor de 3 al 10% de cocana es excretada sin metabolizar, en la orina. En consecuencia, la concentracin de la cocana en orina, despus de su uso, es a menudo de 0.5 al uglmL, lo cual es casi el lmite inferior de deteccin para la cromotografla en capa fina.
2.0 l\1ETOnOLOGA
La metodologa ha emplear en el anlisis de deteccin de la cocana en el cuerpo humano esta sltieta a la disponibilidad tcnica, a las consideraciones metablicas y farmacocinticas segn los estudios bibliogrficos encontrados. Estas
2.1 CONCENTRACIN
EN FLUIDOS BIOLGICOS
Segn las informaciones encontrados se menciona que las concentraciones de los metabolitos en los fluidos biolgicos va a depender de la va de administracin empleada por el consumidor, por ejemplo, por la va nasal y oral con una dosis de 1 o 5 mglkg de cocana,. las concentraciones plasmticas estn en el rango de 75 a 300 mg/mL, mientras que la va intravenosa y fumada toma las concentraciones plasmticas de disparan rpidamente a
WI0S
ve poca cocana inalterada en la orina,. puesto que en su mayor parte est compuesto de benzoilecgonina.
Una vez recolectada la muestra,. se adiciona a 50 mL de orina,. 2-3 mL de NaOH IN para elevar su pH a un valor mayor de IO Yasegurarse as que la mayor parte de la cocana consumida est hidrolizada en
benzoilecgonina.
2.2.2
Estabilizacin:
la inestabilidad in vitro de la cocana en plasma y en solucin acuosa en pH altos; ha sido demostrada que la cocana es hidrolizada rpidamente por la enzima pseudocolinesterasa; in vitro su vida media en plasma es
alrededor de 60 minutos a 37' C. Esta hidrlisis puede ser inhibida merced a la adicin al suero de inhibidores como la fisostigmina, flor y prostigmina
@
La cocana por ser una base dbil (PK=8.6) puede ser hidrolizada en benzoilecgonina a pH mayor de 10 que ser el metabolito ms estable.
2.2.3
Procedimiento
El procedimiento en si, abarca tres etapas: preparacin de la muestra, anlisis cromatogrfico y la interpretacin de resultados en cuya
Recoleccin de muestra Elevacin de pH>10 (NaOH IN) Extraccin con solvente Cloroformo et3noISO:20%
I Anlisis
Cromatogrfico
Preparacin estndar interno (Etil ester benzoilecgonina) Cromatografia del estndar interno y la muestra
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Anlisis de Resultados
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8. El hecho de que los mtodos analticos cromotogrficos, mencionados aqu tiene sus limitaciones~ no implica que deba evitarse su uso, sino al contrario; debe emplearse pero dominando eSaBcondiciones que limitan.
1. Segn los estudios encontrados en la bibliografia muestra que la cocana es, en su mayor parte metabolizada por la enzima Pseudocolinesterasa esterecgonina, ecgonina excepto benzoilecgonina. en mtil
2. La benzoilecgonina es un metabolito que esta en mayor concentracin en el desecho urinario y por tal razn en el anlisis de despistaje de cocana en el cuerpo humano, se determina segn la concentracin encontrada. de benzoilecgonina
3. La tcnica cromatogrlca
presencia de benzoilecgonina. Razn por la cual, el mtodo a adoptar para el despistaje de cocana puede ser factible. 4. En el anlisis de la deteccin de cocana, la tcnica que mas se ajusta a los requerimientos qumicos, sensitivos, sencillez y rapidez es la Cromatografia en cualquiera de sus clases
2. Federico Len y Ramiro Castro de la Mata Pasta Bsica de Cocana Multidisciplinario. Editado por CEDRO. Lima, 1989.
Wl
estudio
3. OIga Lock de Ugaz. Investigacin fitoqumica (mtodos en el estudio de Productos Naturales. Editorial de la Pontificia Universidad Catlica del Perno Lima, 1994.
4. Douglas Skoog/James
Leary. Anlisis
Instrumental.
Editorial
Me Graw
Hll,
Ediciones