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Sabino Ortiz Bergia-Mauricio Beranek

Deteccin del virus de la influenza aviar H5N1 en la zona de La Mar Chiquita y Baados del Ro Dulce como posible punto de ingreso a la regin.

J. Sabino Ortiz Bergia Mauricio Beranek

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Introduccin.
A lo largo de la gnesis humana, esta se ha visto expuesta a la influencia de diversos microorganismos patgeno con mayor o menor grado de capacidad de dao, incluso que han casi exterminado la especie en ciertos lugares de nuestro planeta. Se puede decir que verdaderamente estos agentes han actuado como una fuerza evolutiva en nuestra especie. Uno de estos microorganismos que ha tenido una marcada influencia en nuestra especie es el virus de la Influenza. Es un virus perteneciente a la familia Orthomyxoviridae, y que presenta tres tipos A, B y C, dependiendo del tipo de antgeno interno que presenten. Las caractersticas que hacen particular al virus de la Influenza con respecto a otros virus respiratorios es, que es el nico capaz de producir epidemias todos los aos, que afectan a millones de personas en todo el mundo, e incluso grandes pandemias. Sus sepas del tipo A, por lo general el causante de las pandemias, es epideomiologicamente nica porque cambia regularmente sus caractersticas antignica usando reservorios husped animal para intercambiar sus serotipos. El virus de la Influenza es adems el que con ms frecuencia predispone a la Neumona y problemas ms severos del aparato respiratorio, que incluso pueden llevar a la muerte del sujeto infectado. Siendo los tipos A y B los mas virulentos, y el primero mas que el segundo. El tipo C no provoca epidemias y por lo general los cuadros son leves o asintomticos. A su ves el tipo B posee caractersticas antignicas mas estables que el tipo A, siendo causante por esto de epidemias ms leves. La gripe se presenta generalmente con sntomas como fiebre, astenia, anorexia, mialgias, cefalea, somnolencia, malestar general, tos seca, ronquera, dolor de garganta y, en algunos casos mas raros, trastornos gastrointestinales, como dolor abdominal, nuseas, vmitos, diarrea o deposiciones blandas. Pero tambin puede provocar, como ya indicamos, graves pandemias a nivel regional o mundial, teniendo como antecedentes mas cercanos y bien documentados: La gripe denominada Espaola en 1918 (H1N1) que provoco en todo el mundo ms de 40.000.000 de muertos, la Gripe Asitica en 1957 (H2N2) que provoco cerca de 2.000.000 de muertos en todo el mundo, en donde los daos fueron menores porque la sepa era menos patgena y se contaba ya con mejores mtodos teraputicos, y la Gripe de Hong Kong en el ao 1968 (H3N2) que provoco 47.000 muertes. Todas estas pandemias fueron provocadas por virus de la Influenza del tipo A, lo que nos hace notar la sobresaliente virulencia de estos. Los virus de la influenza de tipo A estn subdivididos en subtipos basados en las protenas hemaglutinina y neuroaminidasa, antgenos externos. Hay 16 tipos de hemaglutininas y 9 subtipos diferentes de neuroaminidasa, lo que proporciona 144 combinaciones diferentes de H y N, pero solo unas pocas combinaciones son potencialmente peligrosas. Hoy en da se cierne una amenaza latente sobre la poblacin mundial en forma de algn subtipo de la Influenza del tipo A, la Organizacin Mundial de la Salud (OMS)(2005) ha avisado de un riesgo substancial de epidemia mundial (pandemia) de gripe en un futuro cercano, con la mxima probabilidad de que derive del tipo de gripe aviar H5N1. El riesgo toma la forma de recombinacin entre el virus de la gripe aviaria y alguno de los virus que circulan por la poblacin humana. Los virus de la gripe aviaria, tambin llamadas gripe del pollo y gripe de los pjaros, y ms tcnicamente influenza aviar, forman parte del tipo virus Influenza A. Estos virus son los nicos que infectan naturalmente a aves, aunque tambin tienen suficiente

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potencial para infectar a distintas especies de mamferos, entre los que se cuentan el ser humano, el cerdo y el gato domestico. Los tipos B y C infectan de modo primario a humanos y, ocasionalmente a cerdos. Se considera que todas las aves son vulnerables a la gripe aviar, pero algunas especies son ms resistentes a la infeccin que otras. Las aves acuticas migratorias constituyen el reservorio natural de los virus de la gripe aviar, en particular los patos salvajes, estos son susceptibles, pero en muchos casos el proceso es subclnico y actan como portadores. Las aves con una mayor susceptibilidad a la infeccin, y por lo tanto a la aparicin de la enfermedad, son las gallinceas. La infeccin causa un amplio espectro de sntomas en las aves, desde una variante leve hasta un cuadro altamente contagioso y rpidamente mortal que da lugar a graves epidemias. Esto ltimo es lo que se conoce como gripe aviar altamente o hiperpatgena. Esta variante se caracteriza por su rpida aparicin, y por la gravedad de los sntomas, ya que es una enfermedad de carcter sistmico con una evolucin fulminante con mortalidad cercana al 100% en las 24hs siguientes a la aparicin de los sntomas, como se a podido comprobar en las explotaciones avcolas comerciales. La altamente patognica gripe aviar o, como fue llamada originalmente flow plague, fue inicialmente descrita en Italia en 1878, y tambin fue conocida como la enfermedad de Lombarda. Es un virus que se transmite por contacto directo con secreciones de las aves, especialmente las heces, tambin de secreciones lagrimales, nasales, inflamacin de las crestas, y de esta manera aumentan el jade por las complicaciones respiratorias. Las aves marinas migratorias clnicamente normales, pueden introducir el virus en las granjas agrcolas, propagndose la enfermedad dentro de un mismo pas como entre otros. Adems de ser altamente contagiosos, los virus de la gripe aviar se transmiten fcilmente de una explotacin a otra por medios mecnicos, como los equipos, vehculos, pienso, jaulas o ropa contaminados. Los virus altamente patgenos pueden sobrevivir durante largos periodos en el ambiente, sobre todo a temperaturas bajas. Una vez ya introducido el virus dentro de una explotacin avcola comercial, al ser excretado por las heces y secreciones respiratorias, la transmisin y difusin del mismo se produce fundamentalmente del siguiente modo: Contacto directo con secreciones de aves infectadas, especialmente heces. Alimentos, agua, equipo y ropa contaminados. Va aergena. Se ha establecido que la transmisin de una explotacin a otra, en los focos que tuvieron lugar en Italia (1999) y los Pases Bajos (2003), se produjo por los siguientes medios: Aergena (< 1 km entre granjas). Personas y equipos. Transportes de huevos contaminados, alimentos o gallinaza.

De las 144 combinaciones de los antgenos externos, se conocen 15 subtipos de virus de la gripe que infectan a las aves, lo que representa un amplio reservorio de virus gripales

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potencialmente circulantes en las poblaciones de aves. Hasta la fecha, todos los brotes de la forma hiperpatgena han sido causados por los subtipos H5 y H7 de la cepa A. De estos virus, la cepa identificada como una de las mas probables en un futuro de causar una pandemia, es la HPAI A/H5N1 que significa Subtipo H5N1 del virus de la influenza aviar tipo A, altamente patgeno por sus siglas en ingls, y es este virus el responsable de la gripe H5N1 comnmente llamada gripe aviar. La alarma se debe a la alta letalidad y virulencia del virus HPAI A/H5N1, su presencia endmica, su creciente rango de organismos huspedes y a su capacidad de presentar mutaciones significativas, el virus se ha convertido en la mayor amenaza de pandemia a nivel mundial. El virus HPAI A/H5N1 pertenece como ya indicamos al gnero Influenzavirus A, miembro de la familia Orthomixoviridae. Es un virus de 90 a 120 nm de dimetro, que posee una envoltura de capa lipdica derivada de la membrana plasmtica de la clula en que el virus se replica, con una cpside de simetra helicoidal que protege el genoma de 13.6 kilobases. El material gentico se compone por una sola cadena linear de ARN, de sentido negativo, dividida en 8 segmentos que contienen la informacin de 10 genes. Cada segmento se encuentra protegido por una nucleocpside, formada estructuralmente por un segmento de ARN, varias molculas de nucleoprotenas, y el complejo ARN polimerasa ms enzimas asociadas necesarias para la sntesis del ARNm viral. Es capaz de conservar la viabilidad en el ambiente durante largos periodos de tiempo, especialmente cuando las temperaturas son bajas, aunque se sabe que no sobrevive a temperaturas superiores a los 70 C ni inferiores a los -80 C. Aves infectadas transmiten el H5N1 a travs de la saliva, secreciones nasales y heces. Otras aves pueden contagiarse mediante el contacto directo con estas secreciones o cuando entran en contacto con superficies contaminadas con este material. Debido a las prcticas migratorias de los portadores del virus H5N1, es posible que se haya diseminado en todo el mundo. La primera aparicin de este tipo de gripe en humanos, se dio en 1997 en Hong Kong. La infeccin en humanos coincidi con una epidemia de gripe aviaria, causada por la misma cepa, en la poblacin de pollos en Hong Kong. La mayora de los datos recolectados sobre la evolucin de la enfermedad, provienen de esta epidemia. En donde 18 casos en humanos durante una epidemia del altamente patgeno H5N1 fue descrita en mercados de venta de aves vivas. Esta epidemia se asoci con alta incidencia de mortalidad (33%), alta incidencia de neumona (61%), y alta incidencia de casos que tuvieron que ser asistidos en unidades de cuidados respiratorios (51%). En los humanos, dado que el H5N1 es un virus de influenza, los sntomas pueden parecer como de una gripe comn, con fiebre, tos, garganta reseca y mialgias (dolor muscular). Sin embargo, en casos ms severos se pueden desarrollar neumona y problemas severos del aparato respiratorio, y eventualmente puede provocar la muerte. Pacientes infectados de H5N1 han presentado pocos casos de conjuntivitis, a diferencia de los casos humanos del virus H7, que junto con los virus H5 son los que han presentado hiperpatogeneidad. Todos los virus de la gripe de tipo A, incluidos los que regularmente causan epidemias estacionales en el hombre, estn adaptados para eludir las defensas del husped. Los virus de la gripe carecen de los mecanismos de correccin de pruebas y reparacin de errores que operan durante la replicacin. De resultar esos errores no corregidos, la composicin gentica de los virus cambia conforme se van replicando en el hombre y en los animales, y la cepa de partida se ve reemplazada por una nueva variante antignica. Estos cambios

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constantes y por lo general pequeos de la composicin antignica de los virus A de la gripe es lo que se denomina deriva antignica. Los virus de la gripe presentan una segunda caracterstica profundamente preocupante para la salud pblica: la cepa gripal A, incluidos los subtipos de diferentes especies, pueden intercambiar o recombinar el material gentico y fusionarse. Ese proceso de recombinacin, conocido como cambio antignico, desemboca en un nuevo subtipo distinto de los dos virus originales. Como las poblaciones carecen de inmunidad frente al nuevo subtipo, y como no hay ninguna vacuna que confiera proteccin contra l, el cambio antignico ha dado lugar a lo largo de la historia a pandemias altamente mortferas. Para que ello ocurra, el nuevo subtipo ha de poseer genes de los virus de la gripe humana que le permitan transmitirse fcilmente de una persona a otra durante periodos sostenibles. Se considera desde hace tiempo que la existencia de poblaciones humanas que viven en estrecho contacto con aves de corral y cerdos domsticos es un factor que favorece el cambio antignico. Como los cerdos son vulnerables a la infeccin tanto por virus aviares como por virus de mamfero, incluidas las cepas humanas, esos animales pueden hacer las veces de tubo de ensayo de mezcla del material gentico de los virus del hombre y de las aves, del que emergera as un nuevo subtipo. La propagacin de la infeccin entre las aves aumenta la probabilidad de una infeccin directa del hombre, ya que las aves que sobreviven a la infeccin excretan el virus durante al menos 10 das, oralmente y por las heces, lo que facilita la ulterior propagacin en los mercados de aves de corral vivas y a travs de las aves migratorias. Si a medida que pasa el tiempo crece el nmero de personas infectadas, aumentar tambin la probabilidad de que el ser humano, cuando se vea infectado simultneamente por cepas de la gripe humana y la gripe aviar, sirva tambin de tubo de ensayo del que emerja un nuevo subtipo que posea los suficientes genes humanos para poder transmitirse fcilmente de una persona a otra. Ese hecho marcara el inicio de una pandemia de gripe. La perspectiva se agrava por la enorme patogenicidad observada en los casos de infeccin humana, que se ha venido saldando con una mortalidad del 72%, sobre todo cuando se compara con la tasa del 2,5% de la pandemia de 1918 que cobro ms de 40 millones de vidas. Hasta ahora todos los genes de los virus estudiados fueron de origen aviar, sugiriendo que el H5N1 haba saltado la barrera de especies sin adaptarse a ellas. La vigilancia serolgica revela poca evidencia de transmisin humano-humano. La futura pandemia ser con toda probabilidad debida a un virus H5N1 producido por recombinacin del virus de la gripe aviaria y de alguna de las variantes de gripe actualmente circulantes (que son de los tipos H3N2 y H1N1). Lo que falta ahora es una infectividad elevada entre humanos, que no se da en las variantes aviares. Se registr un excepcional caso de contagio de un enfermo a dos familiares en Camboya en 2004 (Brown, 2004), pero aparentemente la mutacin producida no fue lo suficientemente infectiva para que se de una epidemia. Para que aparezca una forma con transmisibilidad entre humanos es necesario que los antgenos de superficie (hemaglutinina y neuraminidasa) muten para adaptarse a la especificidad de las membranas de las clulas humanas, en vez de a las aviarias. Adems la forma de contagio podra evolucionar pasando del contacto directo al modo areo. Si sumamos a todo esto que investigaciones recientes han demostrado que los virus de baja patogenicidad pueden, despus de estar circulando durante periodos, a veces breves, en una poblacin de aves de corral, mutar y transformarse en virus hiperpatgenos. Citando como ejemplo la epidemia que se produjo entre 1983-1984 en los Estados Unidos de Amrica, la cepa H5N2 caus inicialmente una baja mortalidad, pero en slo seis meses

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adquiri una alta virulencia, con una mortalidad cercana al 90%. Para controlar el brote hubo que sacrificar ms de 17 millones de aves, lo que cost casi 65 millones de dlares. Tambin durante una epidemia que sufri Italia en 1999-2001, la cepa H7N1, inicialmente de baja patogenicidad, haba mutado al cabo de nueve meses en una variante hiperpatgena. Ms de 13 millones de aves murieron o fueron sacrificadas. La situacin puede elevar crticamente su gravedad, ya que, en ausencia de unas medidas de control rpidas, respaldadas por una buena vigilancia, las epidemias pueden durar aos. Por ejemplo, una epidemia de gripe aviar por H5N2 que se declar en Mxico en 1992 comenz con una baja patogenicidad, pero evolucion hacia una forma altamente mortfera y no se pudo controlar hasta 1995. Por suerte en la epidemia de Hong Kong de 1997(donde el virus adquiri infectividad interespecies con alta patogenidad), la pronta reaccin de las autoridades con un rpido sacrificio, a lo largo de tres das, de toda la poblacin de aves de corral, estimada aproximadamente en 1,5 millones de animales, redujo las posibilidades de transmisin directa con hombres y evit una pandemia. Todo esto se vuelve aun ms preocupante si observamos la rpida evolucin de la epidemia en los aos recientes. En enero de 2004, una epidemia importante se desat en la industria avcola de Vietnam y Tailandia, y en cuestin de semanas se haba propagado a diez pases y regiones de Asia, incluyendo Indonesia, Corea del Sur, Japn y China continental. Mediante esfuerzos intensivos se sacrificaron pollos, patos y gansos (tan solo en las zonas de mayor infeccin se mataron ms de 40 millones de pollos) y la epidemia fue contenida para marzo, dejando 23 personas muertas en Vietnam y Tailandia. En octubre de 2005 se confirm el primer caso de H5N1 en la Unin Europea (un loro en cuarentena en Gran Bretaa) y pocos das despus tambin en Croacia (en cisnes). En febrero de 2006 la gripe aviaria se extendi por Italia, Grecia, Austria, Alemania, Hungra, Eslovaquia, Eslovenia y Francia. En julio de 2006 fue confirmado el primer caso de gripe aviar en Espaa. En enero de 2006 se detect un brote de la cepa de gripe aviaria H5 en las empobrecidas zonas rurales del estado mexicano de Chiapas. Por suerte de acuerdo a la Organizacin para la Alimentacin y la Agricultura (FAO, por su siglas en ingls) esta cepa no es transmisible a los humanos y el brote no est relacionado con la crisis en Turqua ocurrida casi simultneamente, pero que esta sepa mute tambin es una cuestin de tiempo como ya analizamos. Desde el 2003 hasta Marzo de 2006 se lleva contabilizado en el mundo 176 casos en humanos de influenza aviar H5N1 con un total de 97 muertos. La mortandad promedio alcanza el 55.1%, pero de acuerdo al desarrollo e infraestructura de los pases afectados puede llegar a un 100% como fue el caso de Camboya e Irak, y la mortandad mnima que a habido no bajo del 33.3% que fue el caso de Turqua. Segn informaciones publicadas en la revista mdica britnica The Lancet, en la edicin del 22 de diciembre de 2006, si se desatara la pandemia, esta causara entre 51 y 81 millones de muertos en el mundo, 96% ubicados en pases en desarrollo. Todo lo vertido hasta aqu nos lleva a concluir que es cuestin de tiempo que el virus nos alcance y que es necesario estar preparado para lo peor,y solo se puede estar preparado si se cuenta con la informacin suficiente para preparar planes de accin adecuados a las contingencias. Y una de las informaciones ms importantes con las que tenemos que contar es la de los muestreos sistemticos de los posibles puntos de entrada del virus a nuestra regin de influencia. De esta manera detectar tempranamente la aparicin de este y poner en accin sin dilataciones los mecanismos de pertinentes.

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Este proyecto trata de cumplir ese objetivo, en el lugar que consideramos, por el estudio de la bibliografa existente, es uno de los posibles puntos de entrada del virus H5N1 a nuestro pas.

Objetivos
Determinar si hay presencia del virus H5N1 en aves que habitan anualmente o estacionalmente durante los periodos invernales del hemisferio norte, en la regin de los Baados del Ro Dulce y Laguna de Mar Chiquita, posible punto de entrada del virus a la regin. Objetivos especficos. Determinar si ya se ha producido el ingreso del virus en los puntos de muestreo. En el caso de ser positiva la presencia del virus, identificar en que especies de aves se detecto. Identificar si las aves infectadas son migratorias o no. Consultar bibliografa precedente sobre los hbitos de las aves que dieron positivas, para identificar si algunas suelen presentar hbitos urbanos o periurbanos. Segn los puntos de muestreo que resultaron positivos, analizar posibles vas por donde se podra propagar el virus al resto de la regin (por ej. Granjas avcolas cercanas). Elaborar un informe, que sirva de marco para una posterior elaboracin de un plan de accin por las autoridades pertinentes.

Hiptesis.
Un cierto porcentaje de las muestras tomadas en aves de la regin de los Baados del Ro Dulce y Laguna de Mar Chiquita darn positivo para la presencia del virus HPAI A/H5N1, segn se espera del anlisis de los informes de evolucin en la propagacin del virus a trabes de las diferentes regiones del mundo, principalmente causado por su transporte por aves migratorias, ampliando continuamente los posibles focos de epidemias.

Materiales y mtodos.
Lugar de muestreo. Los muestreos se realizaran en la Reserva de usos mltiples Baados del Ro Dulce y Laguna de Mar Chiquita.La misma se ubica en el extremo Noreste de la pcia. de Crdoba en los departamentos San Justo, Ro Seco, Tulumba y Ro I. Cuyas coordenadas geogrficas son 30 23 S - 62 46' W. Con una extensin de 1.400.000ha. La depresin fluvio lacustre de La Mar Chiquita comprende la laguna propiamente dicha y los Baados del Ro Dulce.

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Constituye una amplia concavidad limitada por fallas profundas de orientacin Norte-Sur, la cual recibe los aportes hdricos del Ro Dulce o Petri por el Norte y de los Ros Suquia (Ro I) y Xanaes (Ro II) por el Sudoeste, y en cuya parte mas baja esta emplazada la Laguna Mar Chiquita (Mar de Ansenuza), de aguas salobres. Hacia el Este la depresin tiene un lmite neto en los altos de Morteros, pero es ampliamente abierta hacia el norte. El clima es templado calido a subtropical con estacin seca en invierno. Se han registrado temperaturas estivales absolutas de 42,6C e invernales absolutas de -6C, con un valor promedio en verano de 25C, mientras que en invierno es de 12C. Las heladas son escasas y por periodos breves, generalmente en julio y agosto. La mayor parte de las precipitaciones ocurren entre noviembre y marzo, mientras que las deficiencias hdricas ms altas se observan entre febrero y noviembre. Las precipitaciones anuales varan entre 600 a 800mm por ao. No se registran excesos de precipitaciones en ningn periodo. Sin embargo, las condiciones hdricas de los suelos estn condicionadas por variaciones locales debidas al relieve y la topografa. Por su magnitud constituye la formacin hidrogrfica (cuenca endorreica) mas importante de la provincia. En donde las tierras estn sujetas a inundaciones que siguen el pulso de las crecidas del ro dulce, generando condiciones de hidromorfismo en los suelos y condicionando toda la actividad biolgica y productiva de la regin. La extensin pertenece a la Regin biogeogrfica Regin Chaquea Oriental con particularidades por su tipo de suelo, presentando en su rea ambientes con Bosque Chaqueo, arbustal salino, pastizales inundables, vegetacin de ambientes acuticos, costas salinas y aguas salobres. Esta cantidad de ambientes con sus respectivos ecotonos a dado una regin con una altsima biodiversidad, que en por ejemplo en las aves, organismos en los que estamos en este proyecto interesados en muestrear, alcanzan el numero asombroso de mas de 300 especies diferentes registradas que representan el 70% del total de la avifauna provincial, y el 30% de la nacional. El rea forma parte de las rutas migratorias de 22 especies de aves, como por ejemplo varias especies de Chorlos o Playeros migratorios del hemisferio Norte, como el Falaropo comn (Phalaropus tricolor), el Pitotoy chico y grande (Tringa sp.) y Playeros de varias especies (Calidris sp.). Razn por la cual fue declarada en 1991 uno de los 35 sitios de la Red Hemisfrica Occidental de Reservas de Aves Playeras, y en el 2002 declarado sitio Ramsar, y razn por la cual nosotros hemos elegido esta rea como de importancia para una posible entrada del virus de la Influenza Aviar H5N1 a nuestra regin. Metodologa del muestreo. Para la realizacin del muestreo se realizara un estudio previo de la bibliografa existente, tratando de determinar los lugares con mayor biodiversidad y densidad de la avifauna, y adems se realizara un viaje de campo para contrastar la informacin y poner a punto las tcnicas de captura y extraccin. De las zonas aptas para los muestreos se realizara una seleccin simple al azar de seis sitios de muestreo. Los cuales se realizaran dos muestreos de cada sitio por si hay movimientos de aves, en donde los primeros muestreos se realizaran entre principios de

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Octubre y mediados de Diciembre y los segundos en adelante hasta fines de Febrero. Cada muestreo tendr una duracin de cuatro das. Las capturas se aran por medio de redes de nieblas u ornitolgicas, y a cada ejemplar capturado se le extraer una muestra de sangre mediante puncin alar, se le tomaran medidas morfolgicas que sern consignadas en una planilla de captura juntos con otros datos ambientales y de localizacin. Al ejemplar capturado antes de su liberacin tambin se le realizara la toma de una foto testigo y marcacin por anillado de una de sus patas. A cada individuo capturado se le extraer en lo posible minimamente 0.2ml de sangre, que ser colocada en un Eppendorf con solucin fisiolgica y K 3EDTA como anticoagulante. El Eppendorf ser refrigerado inmediatamente para su transporte y lo antes posible conservado a una temperatura inferior a los -20C, asta su posterior analisis. Todas las muestras debern ir rotuladas con el nmero de identificacin de la extraccin y juntas con una tarjeta en que se consignaran: Fecha de la toma de la muestra. Numero de identificacin de la muestra del instituto o laboratorio que la enva. Instituto o grupo responsable del muestreo. Materiales biolgicos enviados. Origen del mismo. Estudio solicitado. Laboratorio receptor de la muestra (en el caso que se remita a otro).

*En el anexo se adjunta modelo de tarjeta.

Los datos que se debern consignar en la planilla de captura son: Lugar de captura. Coordenadas geogrficas. Fecha de captura. Hora de captura. Muestreador.

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Condiciones climticas al momento de la captura. Condiciones fsicas y ecolgicas del lugar de captura. Temperatura. Mtodo de captura. Numero de identificacin (que ser el mismo que ira en el anillo de marcacin, y en la foto testigo). Nombre cientfico. Nombre vulgar. Sexo. Peso. Observaciones (en la que se anotara si se observa algn hecho inusual en el individuo capturado como por ej. preado, juvenil, lastimado, enfermo, etc.). Tipo de muestra tomada. Mtodo de extraccin de la muestra de sangre. Cantidad de sangre extrada.

**En el anexo se adjunta modelo de planilla.

El anillo de marcaje ser de aluminio con un cdigo nominal (no inteligente) que indicara simplemente el nmero de referencia a la planilla de captura. La manipulacin de las aves se har con guantes de ltex descartables, barbijo, anteojos de seguridad, y el tcnico deber tener colocada la vacuna antitetnica y de ser posible medicamentos antiviricos como mtodos profilcticos. La puncin alar se har por medio de una jeringa descartable de 1ml con aguja 30G y , que ser usada una sola vez, y desechada en un recipiente para residuos patgenos que se llevara a los trabajos de campo para este fin. Se deber esterilizar correctamente con un algodn con alcohol el lugar de la puncin, antes y despus de esta. Antes de liberar el ave, se vera que esta se haya recuperado y este en condiciones de volar, si esto no es as se la retendr un corto periodo de tiempo asta que se note mejora, de lo contrario podr ser presa fcil de predadores y de las altas temperaturas, si esta no logra llegar a un lugar de refugio. Para la deteccin del virus en las muestras de sangre se prefiri, el diagnostico para la influenza aviar por el test de ELISA para la deteccin del antgeno H5, sobre el mtodo del

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test de Inhibicin de la Hemoaglutinacin para antgenos IA H5, por presentar el primer mtodo segn la bibliografa consultada una mayor sensibilidad, aunque cave aclarar que el segundo mtodo tambin es efectivo para la deteccin del virus, as que queda abierto la posibilidad de su uso en el caso de no contar por algn motivo con el primer procedimiento. Los anlisis se realizaran de ser posible en el Instituto de Virologia de la Facultad de Medicina de la UNC. De no ser esto factible, las muestras sern derivadas al Laboratorio del SENASA de Martnez, donde ya desde el ao 1999 han puesto a punto las tcnicas de deteccin de la influenza aviar para los antgenos H5 Y H7. Los resultados obtenidos de las pruebas, sern procesados estadsticamente y los resultados y conclusiones publicados.

Anlisis estadsticos.
Los datos obtenidos de los anlisis se agruparan de la siguiente manera.
Tabla 1

Aves Presencia Ausencia

Sitio I

Sitio II

Sitio III

Sitio IV

Sitio V

Sitio VI

En cada celda se asignara la frecuencia de individuos con presencia o ausencia del virus dependiendo de la fila en que se encuentre.

De esta tabla podremos desprender si hay presencia del virus, en que sitios muestreados se encuentra y estimar cual es el porcentaje de individuos infectados. Si se corrobora el supuesto de la presencia del virus en las poblaciones de aves. Nos interesara conocer cuales son las especies que presentan el virus, y si estas son migratorias o no, porque dependiendo de los hbitos de las especies infectadas y del sitio donde se hizo el muestreo, ser mayor o menor la posibilidad de que el virus se siga propagando en la regin. De haber tambin individuos infectados autctonos, esto implicara adems que el virus consigui portadores locales, y el riesgo de que se extienda la infeccin estar ahora latente durante todo lo largo del ao. Para obtener esta informacin valiosa para un efectivo plan de accin, tomaremos los casos positivos y los agruparemos de la siguiente manera.
Tabla 2

Aves positivas Migratorias Especie a Especie b

Sitio positivo A

Sitio positivo B

Sitio positivo C

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Especie c No Migratorias Especie d Especie e Especie f

En cada celda se asignara la frecuencia de individuos que presenten las caractersticas descriptas.

Los anlisis estadsticos para este tipo de estudios, estn restringidos a una distribucin Chi-cuadrado.

Resultados y conclusiones esperados.

Algunas de las muestras analizadas en el laboratorio darn positivo, lo que indicara que el virus de la influenza aviar H5N1 a ingresado a nuestra regin de influencia, con un consecuente peligro epidemiolgico alto. Esto ara necesario un urgente plan de accin preventivo, que incluya entre otras cosas muestreos sistemticos para seguir la evolucin de la epidemia, y un plan de accin para emergencias epidemiolgicas en el caso que el virus llegue a la poblacin de aves domestica o en la peor de las hiptesis de situacin salte la barrera interespecies y se trasmita al hombre, como ya a sucedido anteriormente.

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V O N

C I D

N E

B E F

R A M

R B A

Y A M

N U J

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R A M

R B A

Y A M

N U J

Cronograma de actividades.
B E F P E S T C O V O N C I D N E

Recursos.
Recursos fsicos disponibles. Laboratorio del Instituto de Virologia de la Facultad de Medicina de la UNC. Equipos e instrumental disponibles. Bibliografa perteneciente a las bibliotecas de la Fac. de Cs. Exactas, Fsicas y Naturales y la Facultad de Medicina de la UNC.
m f D . c r y t o e d s i l a n A

L U J

O G A

o r t s e u M c f a r g l b o i d u t s E n t s u o p m c d e j a i V r m t o e d s i l a n A

i t r o b a L

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Elementos de laboratorio pertenecientes al Instituto de Virologia de la Facultad de Medicina de la UNC. Computadoras del laboratorio de computacin de la Fac. de Cs. Exactas, Fsicas y Naturales. Instrumental de medicin de campo perteneciente a la Ctedra de Diversidad Animal II de la Fac. de Cs. Exactas, Fsicas y Naturales. Redes de niebla pertenecientes al Instituto de Virologia de la Facultad de Medicina de la UNC. Cmara digital propia. GPS propio.

Recursos solicitados. C/U Sueldo para 2 Bilogos por 12 meses 1700.00 Total 20400.00 3900.00 6500.00 15000.00 200.00 500.00 2000.00 600.00 49100.00

Transporte de equipos y 7 personas (5 ayudantes ad honorem) 300.00 por 13 Muestreos de 4 das C/U Viticos para cada muestreo Costos de Test ELISA por aproximadamente pruebas 1500 Insumos de oficina fotocopias, correos, etc. Gastos no previstos Materiales descartables Inscripciones congresos, impresiones Total 500.00 10.00 200.00 500.00 2000.00 600.00

Monto total requerido para la investigacin....$49100.00 (Cuarenta y nueve mil cien pesos). Para los equipos e Instrumentales facilitados por la UNC para realizar la investigacin, se adjuntara si es requerido los comprobantes de los permisos tramitados.

Posibles contratiempos.
Inestabilidad climtica arruine alguno de los muestreos.

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Se rompa la cadena de fri y se pierdan muestras. Demore la llegada de algn insumo. Desperfectos mecnicos en el transporte. No se llegue a conseguir toda la financiacin necesaria para el proyecto. Dificultades en el trmite de los permisos de muestreo. Escasez de suficientes ayudantes para los muestreos. Enfermedad de alguno de los integrantes del grupo.

Posible Financiacin.
Ministerio de Salud de la Nacin. Ministerio de Salud de la Provincia de Crdoba. SENASA.

Bibliografa.
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ANEXO
N: Material Biolgico: Estudio solicitado: Responsable del muestreo: Laboratorio receptor: Fecha: Origen:

*Tarjeta para muestras.

J. Sabino Ortiz Bergia-Mauricio Beranek

Lugar de captura: Coordenadas: Muestreador: Mtodo de captura: N Nombre cientfico

Fecha:

T:

Clima:

Cond. del lugar: Mtodo de extraccin:

Tipo de muestra: Sexo Peso Hora

Nombre vulgar

Cant. Extr.

Observaciones

**Planilla de captura.