Controle Qualidade

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GUIA PARA O CONTROLE DA QUALIDADE PARA A ANLISE DE RESDUOS DE AGROTXICOS EM ALIMENTOS PARA OS LABORATRIOS INTEGRANTES DO PARA.
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Diretor Presidente Dirceu Raposo de Mello Diretores Jos Agenor lvares da Silva Cludio Maierovitch Pessanha Henriques Maria Ceclia Martins Brito Gerente-Geral de Laboratrios de Sade Pblica - GGLAS Galdino Guttmann Bicho Gerente Geral de Toxicologia - GGTOX Luiz Cludio Meirelles Gerente de Avaliao do Risco - GAVRI/GGTOX Ricardo Augusto Velloso Grupo de Trabalho de suporte laboratorial do PARA Adriano Barros Pacheco Andr Luiz Oliveira da Silva Carlos Alexandre Oliveira Gomes Cristina Salgado Junqueira Peter Rembischevski Jose Nilton Carneiro de Lima Thelma Helena Inazaki Elaborao do documento Andr Luiz Oliveira da Silva Adriano Barros Pacheco Carlos Alexandre Oliveira Gomes Cristina Salgado Junqueira Peter Rembischevski Jose Nilton Carneiro de Lima Thelma Helena Inazaki Reviso Adriano Barros Pacheco Andr Luiz Oliveira da Silva Carlos Alexandre Oliveira Gomes Cristina Salgado Junqueira Daniela Beatriz de Castro Gomes Galdino Guttmann Bicho Thelma Helena Inazaki Vera Regina Rossi Lemes - Instituto Adolfo Lutz - SP Tereza Atsuko Kussumi - Instituto Adolfo Lutz - SP Viviane Emi Nakano Fukasawa - Instituto Adolfo Lutz - SP
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SUMRIO 1 2 3 3.1 3.2 4 5 6 6.1 6.1.1 6.1.2 6.1.3 6.2 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.2.4 6.3 6.3.1 6.3.2 6.4 6.4.1 OBJETIVO ESCOPO REFERNCIAS Normativas Tcnicas RESPONSABILIDADE E AUTORIDADE TERMOS, DEFINIES, SIGLAS E ABREVIAES PROCEDIMENTOS PARA A GARANTIA DA QUALIDADE Amostragem, transporte, processamento e armazenamento das amostras Amostragem Transporte Preparao das amostras e processamento prvio da amostra Padres de pesticidas, solues de calibrao e outros reagentes Identidade, pureza e armazenamento de padres. Preparao e armazenamento dos padres Preparao, uso e armazenagem das solues padro (padres de trabalho) Testando e substituindo padres Extrao e concentrao Condies de extrao e eficincia Concentrao e diluio Contaminao e interferncia Contaminao 7 7 7 7 7 8 8 8 8 8 8 9 9 9 9 10 11 11 11 11 12 12
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6.4.2 6.5 6.5.1 6.5.2 6.5.3 6.5.4 6.5.5 6.5.6 6.5.7 6.5.8 6.5.9 6.6 6.6.1 6.6.2 6.6.2.1 6.6.2.2 6.7 6.7.1 6.8 6.9 6.9.1 6.9.2
Interferentes Calibrao analtica, analtos representativos, efeitos da matriz e integrao cromatogrfica Requisitos gerais Calibrao Analtos representativos Efeito matriz Adio padro Efeitos de misturas de pesticidas na calibrao Calibrao de pesticidas que so misturas de ismeros Calibrao de produtos derivados ou de degradao Integrao cromatogrfica Mtodos analticos e performance analtica Validao de mtodos Aceitabilidade dos mtodos analticos validao metodolgica Mtodos para a determinao de alimentos gordurosos ou desidratados Verificao de performance Determinao rotineira da recuperao Aceitabilidade da performance recuperao de rotina analtica das determinaes da
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Ensaios de proficincia e a anlise de materiais de referncia Confirmao dos resultados Princpios da confirmao Separao cromatogrfica
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6.9.3 6.9.4 6.10 6.10.1 6.10.2 6.10.3 6.10.4 6.10.5 7 7.1 7.2 7.3 8
Confirmao por Espectrometria de Massas (MS1) Confirmao por um laboratrio independente Elaborao dos relatrios de ensaio Expresso dos resultados Clculos dos resultados Arredondamento de resultados Incerteza de medio Interpretao dos resultados INTERPRETAO E EMISSO DOS RELATRIOS DE ENSAIOS Consideraes Ingredientes ativos de uso no autorizado Ingredientes ativos de uso autorizado para a cultura DOCUMENTOS RELACIONADOS ANEXO 1 - commodities /amostras representativas para a validao de procedimentos analticos para a determinao de resduos de pesticidas. ANEXO 2 - Principais grupos de pesticidas ANEXO 3 - Grupos de multiresduos para frutas, legumes e verduras ANEXO 4 - parmetros que devem ser avaliados no processo de validao metodolgica em diversas circunstncias. (extrado de: guidelines on good laboratory practice in residue analysis CAC/GL 40-1993, rev.1-2003)
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APRESENTAO O impacto do uso de agrotxicos sobre a sade humana tem merecido ateno da comunidade cientfica, dos rgos governamentais e da sociedade civil organizada em todo o mundo, sobretudo nos pases em desenvolvimento onde o impacto sade tem sido mais relevante. Estes impactos sade humana podem ser observados de maneiras distintas, tais como: as intoxicaes agudas, provenientes em sua maioria de atividades laborais agropecurias e industriais, homicdios, suicdios e acidentes domsticos; e as intoxicaes crnicas, que majoritariamente so o resultado da exposio ocupacional e do consumo de gua e alimentos contaminados por resduos de agrotxicos. Cabe ressaltar que diversos agravos srios sade estariam correlacionados com a exposio crnica a estes agentes, entre eles teramos: neoplasias malignas, disrupo endcrina, danos neurolgicos, distrbios no desenvolvimento e no crescimento. Sendo assim o monitoramento da presena de agrotxicos nos alimentos fundamental para a preservao da sade da populao brasileira. Como resposta a essa demanda a ANVISA, representada pela GGTOX, coordena o Programa de Anlise de Resduos de Agrotxicos em Alimentos (PARA). O objetivo deste guia normatizar os parmetros de qualidade analtica exigidos pelo PARA e fornecer subsdios para a melhoria contnua das anlises realizadas.
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1 OBJETIVO Este documento tem como objetivo delinear os requerimentos para a garantia da qualidade das anlises realizadas pelos laboratrios integrantes do PARA. Este guia descreve as exigncias analticas do controle de qualidade (CQ) para garantir a validade dos resultados obtidos no programa. Os principais objetivos so: I) Certificar que falsos positivos e falsos negativos no sejam reportados; II) Garantir que seja obtido um grau de acurcia aceitvel; III) Delinear parmetros para confeco de amostras em branco e fortificadas para a garantia do controle da qualidade das anlises; IV) Harmonizar os parmetros de garantia da qualidade analtica entre os laboratrios integrantes do PARA; V) Conferir suporte para a implementao da norma ISO/IEC17025. 2 ESCOPO Este procedimento aplica-se a todos os laboratrios que realizam anlise de resduos de agrotxicos em alimentos, participantes do programa.
3 REFERNCIAS 3.1 Normativas ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005 ABNT NBR ISO/IEC 17011:2005 ABNT ISO/TR 10013:2002 ANVISA/ EURACHEM Guia para a Qualidade em Qumica Analtica Uma Assistncia a Habilitao Sries temticas Laboratrio Vol 1 - 2005 3.2 Tcnicas USDA/MAS PDP Quality assurance European Commission. - Directorate General for Health and Consumer Affairs. SANCO 10232 (24/March/2006). Holland PT, Hamilton D, Ohlin B, Skidmore, MW (1994) Effects of Storage and Processing on Pesticide Residues in Plant Products. Pure & Appl. Chem., Vol. 66, No. 2, pp. 335-356 Commission Decision of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results (2002/757/EC). Soboleva E, Ahad K, Ambrus A (2004) Applicability of some mass spectrometric criteria for the confirmation of pesticide residues, Analyst, 129, 1123-1129. Report of the thirty-seventh session of the Codex Committee on Pesticide Residues, The Hague, The Netherlands, 18-23 April 2005, ALINORM 05/28/24, Appendix XII. Proposed draft guidelines on estimation of uncertainty of results. Guia para Expresso da Incerteza de Medio, 3 edio (Guide to the Expressem of Uncertainty in Measurement - ISO GUM), INMETRO, agosto de 2003. EURACHEM/CITAC Guide, Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement, 2 edition, (http://www.measurementuncertainty.org/mu/guide/index.html) AOAC/FAO/IAEA Consultation held in Miskolc, Hungary, in 1999 (www.iaea.org/trc) A. Fajgelj & A. Ambrus Principles and Practices of Method Validation, Royal Society of Chemistry, 2000
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4 - RESPONSABILIDADE E AUTORIDADE Este guia deve ser seguido por todos os laboratrios integrantes do PARA. 5 TERMOS, DEFINIES, SIGLAS E ABREVIAES ABNT ANVISA API CG CI CL DAD ECD EI-MS eletrnico FPD GGLAS GGTOX IEC ISO LMR MNC MS MS/MS NPD PARA RSA RSDL S/N TR Associao Brasileira de Normas Tcnicas Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (Atmospheric Pressure Ionization) Ionizao por presso atmosfrica Cromatografia Gasosa (Chemical ionization) Ionizao qumica Cromatografia Lquida (Diode Array Detector) Detector em arranjo de Diodo (Electron Capture Detector) Detector de Captura de Eltrons (Electron impact-mass spectrometry) Espectrometria de massas de impacto (Flame Photometric Detector) Detector Fotomtrico de Chama Gerncia Geral de Laboratrios de Sade Pblica Gerncia Geral de Toxicologia International Eletrotechnical Comission International Organization for Standardization Limite mximo de resduos Menor nvel calibrvel Espectrometria de Massas (Seqencial mass detector) Detector de massas sequencial (Nitrogen Phosphorous Detector) Detector de Nitrognio e Fsforo Programa de Anlise de Resduos de Agrotxicos em Alimentos (repetitividade) desvio padro relativo da anlise (reprodutibilidade) desvio padro relativo do resultado do laboratrio Razo sinal/ rudo Relatrio Tcnico
6 PROCEDIMENTOS PARA A GARANTIA DA QUALIDADE 6.1 Amostragem, transporte, processamento e armazenamento das amostras 6.1.1 Amostragem As amostras devem ser coletadas de acordo com o POP de coleta do PARA (POP AMOST PROC -1, POP AMOST PROC -2, POP AMOST PROC 4). O nmero de amostras a ser coletado definido pela coordenao do PARA. Amostras, que por motivos de fora maior, forem coletadas em desacordo com o procedimento acima citado devem ser registradas e informadas coordenao do programa e ao laboratrio executante. Cabe ao laboratrio e coordenao definir o descarte ou no da amostra. 6.1.2 Transporte As amostras devem ser embaladas e enviadas ao laboratrio de acordo com o POP de coleta do PARA (POP AMOST PROC -3). O transporte e a embalagem de amostras, que por motivos de fora maior, forem coletadas em desacordo com o procedimento acima citado devem ser registrados e informados a coordenao do programa e ao laboratrio executante do programa. Cabe a coordenao definir o descarte ou no da amostra.
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6.1.3 Preparao das amostras e processamento prvio da amostra Cada amostra recebida pelo laboratrio deve possuir cdigo de identificao unvoca. Alimentos in natura
A preparao, processamento e o fracionamento devem ser feitos imediatamente aps o recebimento da amostra. Amostras deterioradas no devem ser analisadas. Alimentos enlatados, desidratados, processados ou similares.
Devem ser analisados dentro do prazo de validade. Caso ocorram anlises fora dos prazos de validade, devem ser observados os mesmos procedimentos de informao coordenao e emisso de laudos dos alimentos in natura. A preparao da amostra deve estar adequada, conforme definio da commodity e de acordo com a parte a ser analisada. O laboratrio deve comprovar que os procedimentos de processamento e armazenamento no alteram significativamente a concentrao de resduos na amostra analisada. Em situaes especficas onde o monitoramento de resduos lbeis estiver sendo feito e os mesmos possam ser perdidos, as amostras podero ser processadas (trituradas) congeladas (Anlises de resduos extremamente lbeis ou volteis, assim como todos os procedimentos que possam acarretar perda potencial do analito, devem ser iniciados no dia do recebimento da amostra). Onde o processo de triturao conhecidamente afeta a concentrao de resduos (ex.: ditiocarbamatos ou fumigantes) e procedimentos alternativos no estejam disponveis, a poro teste deve consistir na unidade inteira da commodity ou segmentos removidos de grandes unidades (quarteamento e excluso dos quartos opostos). Se uma poro analtica no for representativa, pores replicadas devem ser analisadas para garantir um resultado mais preciso. 6.2 Padres de pesticidas, solues de calibrao e outros reagentes. 6.2.1 Identidade, pureza e armazenamento de padres. Padres de referncia e padres internos devem ser de conhecida pureza e cada um deve ser univocamente identificado. As datas de recebimento e abertura dos frascos devem ser registradas. Os padres devem estar armazenados em baixas temperaturas (entre -10 oC e -18 o C) na ausncia de luz e umidade, visando reduzir as taxas de degradao. Sob tais circunstncias a data de validade do fornecedor, que baseada frequentemente em condies de armazenamento menos estritas, pode ser prorrogada por um perodo de at 10 anos, de acordo com cada padro. O padro puro pode ser retido a fim de se comprovar que sua pureza e taxa de degradao aps o vencimento da data de validade so aceitveis. A identidade de padres fora da rotina do laboratrio (i.e., nunca antes analisados) deve ser confirmada. 6.2.2 Preparao e armazenamento dos padres As solues estoque de padres analticos e internos devem ter a identidade, massa (ou volume, para componentes altamente volteis) do padro puro utilizado, assim como a identidade e a quantidade do solvente (ou outro diluente) devem ser devidamente registrados. O solvente
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dever ser adequado ao analito (boa solubilidade, sem reaes, de preferncia de baixa volatilidade) e ao mtodo de anlise. Devem ser adotados procedimentos para evitar a interferncia da umidade durante o equilbrio trmico da temperatura do padro analtico puro e a temperatura ambiente. Somente quantidades maiores que 10 mg de padro puro de pesticida podem ser pesadas usando balanas calibradas de pelo menos cinco casas decimais. A temperatura da sala da balana dever ser a mesma na qual esta foi calibrada. A preparao da soluo padro deve ser baseada em sua massa. Analitos lquidos e volteis devem ser dispensados, por peso ou volume (se a densidade for conhecida), diretamente no solvente. Analitos gasosos (fumigantes) devem ser dispensados por borbulhamento no solvente e a pesagem dever ocorrer a partir da massa transferida ao solvente, ou pela preparao de diluies gasosas. As solues estoque de padres devem ser devidamente rotuladas. O rtulo deve conter a identificao do padro, lote do padro puro, fabricante e data de validade. Estas solues devero ser armazenadas a baixa temperatura (entre -10 oC e -18 oC) em compartimento que seja protegido da luz. Os frascos destas solues devem impedir a perda de solvente e a entrada de gua. A literatura tem demonstrado que solues estoque de padres, em frascos de vidros bem vedados, para a grande maioria dos pesticidas dissolvidos em tolueno e acetona so estveis por pelo menos cinco anos quando armazenados em freezer. Solues estoque novas devem ser preparadas quando: As solues padro anteriormente preparadas no forem mais confiveis (no necessariamente quando o prazo de validade estiver expirado); For a primeira vez que o laboratrio avalia o agrotxico; For suspenso (ex.: alguns ditiocarbamatos) ou soluo de pesticidas fumigantes altamente volteis (diluio gasosa). A preciso da soluo deve ser comparada com uma segunda soluo feita de maneira independente e simultnea. 6.2.3 Preparao, uso e armazenagem das solues padro (padres de trabalho) Quando do preparo dos padres de trabalho, o processo deve ser devidamente registrado, identificando seus componentes, inclusive soluto(s) e solvente(s), informando suas respectivas quantidades. O solvente dever ser adequado ao analito (boa solubilidade, sem reaes, de preferncia de baixa volatilidade) e ao mtodo. Os padres de trabalho devem ser devidamente rotulados, armazenados a baixa temperatura (entre -10 oC e -18 oC) e em frascos que impossibilitem qualquer perda de solvente e/ou entrada de gua. A rea de fechamento dos septos particularmente crtica em relao perda de solvente e conseqentemente torna-se uma possvel fonte de contaminao. Caso as solues sejam armazenadas, os septos devem ser substitudos no menor prazo possvel aps serem furados. Durante a fase de equilbrio entre a temperatura do padro de trabalho e a temperatura ambiente, as solues devero ser agitadas novamente e deve-se verificar se nenhum analito permaneceu no dissolvido, especialmente onde a solubilidade do agrotxico em baixas temperaturas for limitada. No desenvolvimento de novos mtodos analticos, validao ou para novos analitos averiguados pelo laboratrio, a preciso do mtodo dever ser demonstrada. Caso as tcnicas empregadas levem a degradao do analito durante a extrao, clean-up ou separao, e gerem subprodutos que sejam facilmente encontrados em amostras no contaminadas, os resultados positivos devem ser confirmados utilizando-se tcnicas alternativas adequadas.
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6.2.4 Testando e substituindo padres Na aquisio, substituio ou quando do vencimento da validade do padro, sua pureza deve ser verificada. Solues padro estoque e de trabalho armazenadas Devem ser comparadas com solues recm preparadas, averiguando-se a resposta dos detectores obtida a partir de diluies apropriadas de padres individuais ou misturas destes. Diferenas inexplicveis na concentrao aparente entre padres antigos e novos devem ser investigadas. Padres puros A pureza de um padro puro antigo pode ser averiguada comparando-se as respostas dos detectores, a partir de solues estoque recm preparadas, com o padro puro vencido e um padro puro que ainda esteja dentro de sua data de validade. Diferenas significativas sem causa aparente na concentrao entre padres antigos e novos devem ser investigadas. As mdias de pelo menos cinco (5) replicatas de cada uma das solues (previamente armazenadas ou vencidas X recm preparadas ou dentro do prazo de validade) no devem possuir diferena maior que 5%2. A mdia das solues previamente armazenadas deve ser tomada como o valor de referncia (100%). No caso de analitos problemticos, o valor de diferena entre mdias pode ser de 10%. O uso de padres internos pode reduzir o nmero de injees necessrias para se alcanar o valor de 5% (ou 10% no caso de analitos problemticos). Caso a resposta do padro antigo possuir diferena maior que 5% (ou 10% no caso dos analitos problemticos), estes devem ser substitudos e as condies de temperatura e armazenagem (incluindo-se ai tambm o tempo) devem ser ajustados. NOTA: altamente recomendado que os laboratrios do programa realizem intercmbios de padres puros, solues padro estoque e de trabalho, a fim de se reduzirem os custos de averiguao de conformidade destes padres. 6.3 Extrao e concentrao 6.3.1 Condies de extrao e eficincia As pores de amostras devem ser totalmente desintegradas durante a extrao, a fim de se maximizar a eficincia da extrao, excetuando os casos onde sabidamente isto no necessrio ou inapropriado (ex: determinao de fumigantes ou determinao de resduos presentes em superfcies). Caso afetem a eficincia da extrao, estabilidade do analito ou volume do solvente, parmetros como temperatura, pH, entre outros devem ser estritamente controlados. A interferncia ou no destes fatores deve ser devidamente registrada e comprovada. 6.3.2 Concentrao e diluio Durante o processo de extrao, a etapa de evaporao do solvente particularmente sensvel, j que alguns analitos (principalmente aqueles em quantidade trao) podem ser perdidos por arraste. Um volume pequeno de solvente com alto ponto de ebulio deve ser utilizado como guardio e a temperatura de evaporao deve ser a mais baixa possvel. A gerao de bolhas nas paredes dos tubos, borbulhamento vigoroso dos extratos e a disperso de gotas devem ser Alternativamente, pode ser usado o test-t e as mdias no devem possuir diferena significante em um nvel de significncia de 5%.
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evitadas. O uso de uma corrente de nitrognio seco ou evaporao a vcuo prefervel ao uso de uma corrente de ar, j que esta pode carrear contaminantes, oxidar mais facilmente componentes da amostra ou introduzir gua no sistema. Em metodologias em que os extratos so diludos a um volume fixo, frascos calibrados de pelo menos 1 ml devem ser utilizados e devem ser tomadas medidas que impeam posterior evaporao. Alternativamente, um padro interno pode ser usado, especialmente no caso de pequenos volumes. A estabilidade do analito nos extratos deve ser investigada e comprovada durante a validao do mtodo. O armazenamento dos extratos em geladeira ou freezer ir minimizar a degradao, entretanto as perdas potenciais decorrentes das altas temperaturas do injetor automtico devem ser levadas em considerao. 6.4 Contaminao e interferncia 6.4.1 Contaminao As amostras devem ser devidamente separadas entre si e de fontes potenciais de contaminao durante o transporte at o laboratrio e no armazenamento. Esta manobra particularmente importante para resduos de superfcie, em p ou volteis. As amostras que sabidamente, contenham resduos de natureza acima relacionada, devem ser duplamente embaladas em sacos de polietileno ou nylon (alm dos outros passos para embalagem e transporte), transportadas e processadas separadamente. O controle de pestes no laboratrio e em suas proximidades deve somente fazer uso de agrotxicos que no sejam de nenhuma forma de uso agrcola. Toda vidraria deve ser cuidadosamente lavada, e quando for praticvel, set ups de vidraria individualizados para anlises particularmente crticas devem ser alocadas, a fim de se evitar contaminao cruzada. Deve-se evitar o uso de vidraria rachada ou arranhada. Os solventes utilizados devem ser verificados a fim de se garantir que os mesmos no estejam contaminados pelo analito. Quando um padro interno utilizado, contaminao no intencional dos extratos ou das solues analticas com o padro interno, ou vice versa, deve ser evitada. No caso de analitos que ocorrem naturalmente, ou que so produzidos a partir da amostra (ex: brometos inorgnicos em praticamente todos os alimentos; enxofre no solo; ou dissulfeto de carbono produzido pela Cruciferaceae), nveis muito baixos de resduos de pesticidas no podem ser devidamente diferenciados dos nveis naturais destes compostos. A ocorrncia natural de analitos deve ser levada em conta durante a interpretao destes resultados. Determinados artigos de borracha podem conter resduos de ditiocarbamatos, etiluria ou difenillamina, logo este material deve ser evitado em processos crticos na anlise de resduos de agrotxicos. 6.4.2 Interferentes Equipamentos, frascos, recipientes, solventes (incluindo a gua), reagentes, filtros, etc., devem ser constantemente averiguados, atravs de testes. Uma vez que so possveis fontes de interferncia. Artigos de borracha e plstico, polidores e lubrificantes so fontes freqentes de interferncia. O selamento dos vials deve ser feito com PTFE (Politetrafluoroetileno, mais conhecido como teflon). Os extratos da amostra devem ser mantidos sempre na posio correta (em p) a fim de impedir o contato destes com os selos dos vials. Os selos dos vials devem ser
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imediatamente substitudos aps serem furados durante a injeo da amostra no equipamento, caso seja necessrio uma re-anlise. Deve ser feita anlise em branco do procedimento completo, para verificar possveis interferentes, sempre que um novo lote ou nova marca de solvente e reagente for utilizada. A interferncia de constituintes naturais das amostras freqente, podendo ser peculiar ao sistema de determinao utilizado, sendo de ocorrncia e intensidade variveis. Caso o interferente tenha um pico que sobreponha o do encontrado para o analito, um diferente mtodo de clean up ou determinao poder ser necessrio. A interferncia na forma de supresso ou no aumento da resposta do sistema de deteco tratada na tabela 1. Caso seja impraticvel eliminar a interferncia ou compens-la pela calibrao (utilizando-se a matriz), a acurcia (bias) e a preciso da anlise devem estar de acordo com os critrios estabelecidos no item 6.6.2 Aceitabilidade dos mtodos analticos validao metodolgica. 6.5 Calibrao analtica, analitos representativos, efeitos da matriz e integrao cromatogrfica 6.5.1 Requisitos gerais Uma calibrao correta depende da identificao exata do analito (veja item 6.9 - Confirmao dos resultados). A calibrao suporte3 (bracketing calibration) deve ser usada, a menos que tenha se demonstrado que o sistema de determinao no apresente variao significativa em resposta absoluta (padronizao externa) ou relativa (padronizao interna). As respostas utilizadas para quantificar os resduos devem estar dentro da faixa de trabalho do detector. O dimensionamento dos grupos (de concentrao dos padres) para a determinao deve estar ajustados para que em uma nica injeo dos padres da calibrao suporte no ocorram variaes >20% quando 2 X MNC4 ou >30% quando 1-2 X MNC (caso o MNC seja prximo ao limite de quantificao). Caso a variao exceda estes valores, a repetio das anlises no necessria onde as amostras certamente no contm o analito, desde que a resposta do MNC seja mensurvel. Extratos que contenham altos nveis de resduos devem ser diludos at que os nveis estejam adequados a faixa de trabalho do equipamento, entretanto, onde as solues padro devem ser feitas juntamente com a matriz, a concentrao do extrato da matriz deve ser ajustada. 6.5.2 Calibrao Resduos que estejam abaixo do MNC so considerados no calibrados, e devem ser relatados como <MNC, sendo a resposta evidente ou no. Caso seja desejvel (ou necessrio) relatar valores de resduos abaixo do MNC original, as determinaes devem ser repetidas com um MNC menor. Se a relao sinal - rudo produzido pelo MNC de menor concentrao inadequada (menor que 5:1), um nvel mais alto de MNC deve ser adotado. Um ponto de calibrao, por exemplo, duas vezes maior que o MNC de menor nvel, fornece um valor MNC alternativo o MNC menor anteriormente previsto no seja mensurvel. Os mtodos de validao analtica devem incluir as taxas de recuperao no MNC proposto.
Uma calibrao convencional avalia um ou mais padres e logo aps, as amostras so analisadas. A calibrao suporte avalia um ou mais padres antes e depois das anlises das amostras, ento os resultados so avaliados utilizando-se todas as avaliaes dos padres. Isto permite o processamento de todas as amostras utilizando-se fatores consistentes de resposta. 4 Menor nvel calibrvel Menor concentrao (ou massa) de analto que pode ser calibrado com sucesso, atravs da anlise de um grupo de amostras.
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A calibrao pela interpolao entre dois nveis aceitvel, desde que a diferena entre estes pontos no seja maior que um fator de 4, O maior valor utilizado neste procedimento no deve ser maior que 120% (110% nos casos em o LMR est prximo ou foi excedido) do menos valor onde a mdia destes, derivados das determinaes das replicatas em cada nvel indique linearidade aceitvel. Onde 3 ou mais nveis so utilizados, uma funo da calibrao apropriada deve ser calculada e usada entre o menor e maior valores calibrados. A curva de calibrao no deve ser forada (via software) a passar pela origem do grfico. O grfico da funo da calibrao deve ser confeccionado e inspecionado visualmente, evitando-se a confiana cega nos coeficientes de correlao, para assegurar que o grfico adequado regio de interesse para a deteco destes resduos. Caso pontos individuais de concentrao tenham um desvio de 20% (10% nos casos onde o LMR esteja prximo ou excedido) da curva de calibrao, uma funo de calibrao alternativa deve ser utilizada. Uma calibrao em nvel um nico nvel pode fornecer resultados mais exatos do que uma calibrao em diversos nveis de concentrao, caso a resposta do detector seja varivel com o tempo. Quando uma calibrao de nvel nico de concentrao aplicada, a resposta da amostra deve estar dentro de um limite de 10% da resposta do padro, no caso do LMR for excedido. Quando o LMR no for excedido, a resposta deve estar dentro de um limite de 50%. A menos que uma extrapolao adicional seja suportada pela evidncia de uma resposta linear aceitvel. Onde adicionado o analito para a determinao da recuperao em uma concentrao correspondente ao MNC, valores de recuperao <100% devem ser calculados utilizando-se de um nico ponto de calibrao com valor de concentrao igual ao MNC. Este clculo em particular tem a inteno somente de indicar a performance analtica obtida em MNC e no implica que resduos <MNC devem ser determinados desta maneira. 6.5.3 Analitos representativos O sistema de determinao deve ser calibrado com analitos representativos para cada grupo de analises. A freqncia mnima de calibrao dos analitos dada na tabela 1 Tabela 1 Freqncia mnima de calibrao e de recuperao Analitos representativos -A cada grupo de amostras. - Pelo menos um nvel deve corresponder ao limite de determinao. -A cada grupo de amostras. Outros analitos - Anual, entretanto, recomendase realizao semestral*. - Pelo menos um nvel deve corresponder ao limite de determinao. - Cada analito ao mesmo tempo seguindo a temporalidade proposta para calibrao
Freqncia Mnima de Calibrao
Freqncia Mnima de recuperao (Ver item 6.7)
- Pelo menos um nvel deve corresponder ao limite de determinao. * Os requerimentos mnimos so: (i) no incio e no final do programado das coletas para o ano corrente; (ii) quando o mtodo sofre alteraes significativas. A confiana excessiva nos analitos representativos, sem que estes sejam devidamente averiguados, est associada com o aumento do risco da obteno de resultados incorretos,
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especialmente os falsos negativos. Estes devem ser escolhidos cuidadosamente, para garantir que os parmetros obtidos com estes analitos, possam evidenciar a adequao dos outros analitos. A escolha deve basear-se nas caractersticas fsico-qumicas dos analitos, o nos parmetros abaixo: (i) Analitos que tenham grande probabilidade de serem detectados nas amostras analisadas; (ii) Analitos que tenham resposta muito varivel e/ou baixa recuperao. Quando um analito que no seja considerado representativo detectado na amostra, o resultado deve ser considerado uma tentativa at a sua calibrao. Quando o resultado de uma varredura analtica indica que um LMR pode ter sido excedido, ou ter sido detectado um pesticida no autorizado, a amostra deve ser re-analisada e acompanhada de evidncias de recuperao aceitvel do analito detectado. Caso o programa de calibrao e recuperao (tabela 1) dos analitos representativos produzir resultados inaceitveis em sua 1 tentativa, todos os resultados obtidos aps programas de recuperao e calibrao prvias devem ser tratados como potencialmente errados. 6.5.4 Efeito matriz Os possveis efeitos da matriz no resultado da anlise devem ser avaliados durante o processo de validao. Estes efeitos so notoriamente variveis em sua ocorrncia e intensidade, entretanto, algumas tcnicas so particularmente susceptveis a este. Caso a as tcnicas utilizadas no sejam intrinsecamente livres destes efeitos, a calibrao utilizando-se de uma matriz limpa de resduos dever ser feita rotineiramente, a menos que uma abordagem alternativa demonstre ter acurcia equivalente ou superior. Extratos (ou amostras, conforme o caso). A melhor maneira de averiguar o efeito matriz a calibrao por adio padro. Um dos potencias problemas do efeito matriz que diferentes amostras, tipos de extratos, commodities e diferentes concentraes da matriz, podem apresentar efeitos desta natureza em diferentes graus de magnitude. Onde a calibrao pode aceitar pequenos erros, uma matriz representativa (veja glossrio) pode ser utilizada para se calibrar uma ampla gama de tipos de amostra. Se necessrio, na anlise por CG, a limpeza do sistema deve ser imediatamente antes da primeira srie de determinaes da calibrao em grupo de anlises. 6.5.5 Adio padro A adio pode ser utilizada como abordagem alternativa em relao ao uso de calibrao pareada com a matriz. Normalmente, a adio padro envolve a adio de quantidades conhecidas de um analito para uma ou duas duplicatas de amostras imediatamente antes da extrao. A diferena na resposta dos dois extratos de amostra (fortificado e no fortificado) obtidos do detector, teoricamente calibra a resposta s quantidades sabidamente conhecidas do analito adicionado e compens-la para a recuperao. A quantidade do analito presente na amostra no fortificada calculada por proporo simples. O efeito de matriz assim compensado. Esta tcnica presume algum conhecimento relativo a provvel concentrao do analito na amostra, de modo que a quantidade adicionada de analito seja similar a aquele presente na amostra. Caso a concentrao do analito seja completamente desconhecida, ento ser necessrio fortificar algumas replicatas com quantidades crescentes do analito, ento uma curva de calibrao poder ser construda de maneira similar a curvas padro tradicionais. Esta tcnica ajusta automaticamente tanto a recuperao como a calibrao. A adio padro no ir solucionar as interferncias cromatogrficas causadas por picos de sobrepostos/no-resolvidos de compostos co-extrados.
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A adio de quantidades conhecidas de um analito em uma alquota de um extrato da amostra, imediatamente antes da determinao final outra forma de adio padro, entretanto, neste caso, somente ter somente utilidade no processo de calibrao (e no no de recuperao). Quando um mtodo baseado em um equipamento (ex.: CG-MS, CL-MS, etc.) a amostra fortificada normalmente chamada de seringa ou injeo padro, a fim de se compensar as variaes de volume da injeo. 6.5.6 Efeitos de misturas de agrotxicos na calibrao A calibrao feita fazendo-se uso de misturas de solues de analitos, devem ser verificadas durante a validao metodolgica, a fim de garantir de que os picos encontrados na mistura sejam equivalentes aqueles encontrados em injees dos analitos em separado. Caso a resposta tenha diferena significante, ou suscite dvidas, os resduos devem ser quantificados utilizandose de calibrao individual (por analito) na matriz, ou preferencialmente, atravs da adio padro analito (individualizada). 6.5.7 Calibrao de agrotxicos que so misturas de ismeros Quando o padro de calibrao for uma mistura de ismeros de um analito, assume-se que a resposta do detector seja similar a estes, em uma base molar, para cada componente. Entretanto, ensaios enzimticos, imuno ensaios e outros ensaios que possuam base biolgica podem gerar erros na calibrao se a razo dos padres possurem diferena significativa dos resduos medidos. Um sistema alternativo de deteco poder ser utilizado para se quantificar estes resduos. Nos casos onde uma resposta seletiva do detector pode ser obtida (eficincia da captura eletrnica dos ismeros do HCH) padres de calibrao devem ser utilizados separadamente. Em situaes onde estes padres no existam, sistemas alternativos de deteco podem ser utilizados. 6.5.8 Calibrao de produtos derivados ou de degradao Quando o agrotxico for determinado atravs de um produto de degradao ou derivado, as solues de calibrao devem ser preparadas a partir de um padro puro do produto de degradao ou derivado, caso disponvel. Padres de agrotxicos que sofram procedimentos para gerar derivados ou produtos de degradao somente devem ser utilizados quando esta for a nica opo. 6.5.9 Integrao cromatogrfica O analista deve examinar os cromatogramas e verificar a adequao da linha de base. Quando picos ou caudas interferentes estiverem presentes, uma abordagem consistente deve ser adotada a fim de garantir o posicionamento da linha de base. Tanto a altura ou a rea dos picos podem ser utilizadas, deve se escolher aquele que gere resultados mais precisos e reprodutveis. A menos que um biosensor seja empregado, a calibrao de misturas de padres de ismeros (ou similares) pode fazer uso da soma das reas, das alturas dos picos, ou da medida de um dos componentes. Deve se escolher aquele que gere resultados mais precisos e reprodutveis. 6.6 Mtodos analticos e performance analtica 6.6.1 Validao de mtodos A validao metodolgica deve ser conduzida de maneira a evidenciar e garantir que o mtodo adequado ao objetivo desejado. A validao metodolgica um requisito dos organismos de
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acreditao, e deve ser subsidiada e melhorada atravs de processos de verificao do desempenho do mtodo. Todas as etapas do mtodo devem ser validadas, caso seja praticvel. Para mtodos multiresduos, matrizes representativas devem ser utilizadas. A escolha destas matrizes deve ser feitas rigorosamente, baseando-se em suas similaridades biolgicas e analticas. Estas similaridades podem ser, por exemplo, contedos de gua, acares, lipdios, protenas, pH, etc. Laranjas podem ser utilizadas como uma matriz representativa de ctricos e a alface como representante dos vegetais folhosos, etc. O mtodo deve ser testado para se avaliar a sensibilidade, mdia das recuperaes e preciso. A acurcia do mtodo deve ser avaliada atravs dos estudos de recuperao. Um mnimo de 5 replicatas necessrio (para se verificar a preciso) tanto nos limites de determinao ou quantificao, quanto e um nvel de maior concentrao (recomenda-se neste caso LMR do pesticida). Onde a definio de resduos incorpora um ou mais analitos, o mtodo deve ser validado para todos os analitos includos nesta definio de resduo. A tabela 2 lista os critrios mnimos de repetitividade e de recuperao desejados para um mtodo quantitativo para a anlise de resduos de agrotxicos em alimentos. No caso de mtodos analticos que no permitam a determinao da recuperao (ex: anlise direta de amostras lquidas, anlise no headspace), a preciso determinada a partir de repetidas anlises de padres de calibrao. Usualmente, assume-se a bias com valor igual zero. Tabela 2 Critrios para mtodos quantitativos Faixa de concentrao (mg\kg) 0,001 0,01 >0,01 0,1 >0,1 1 >1 Preciso RSAA%5 (repetitividade) 30 20 15 10 RSDL%6 (reprodutibilidade) 32 22 18 14 Faixa de recuperao 70-120 70-120 70-120 70-120
6.6.2 Aceitabilidade dos mtodos analticos validao metodolgica Um mtodo analtico uma srie de procedimentos que vo desde a recepo da amostra at o resultado final. Validao o processo de verificao o qual demonstra que o mtodo utilizado adequado ao objetivo desejado. O mtodo pode ser desenvolvido no prprio laboratrio, oriundo da literatura ou obtido de outra maneira de uma terceira parte. O mtodo pode ser adaptado ou modificado para melhor responder aos requisitos e capacidades do laboratrio e/ou a proposta ao mtodo ser usado. Tipicamente, a validao acompanha a finalizao do desenvolvimento metodolgico e assume que todos os itens como calibrao, adequao do sistema, estabilidade do analito, etc., tenham sido estabelecidos satisfatoriamente. As medidas devem ser calibradas dentro da faixa de utilizao do sistema de deteco adequado, tanto na validao quanto na utilizao do mtodo de anlises. Geralmente, a validao precede a aplicao prtica do mtodo para a anlise das amostras, entretanto, verificaes de performance contnuas e subseqentes so muito importantes. Os requisitos de verificao de performance devem ser baseadas nos parmetros utilizados na validao. O mtodo analtico deve ter (atravs de sua validao) capacidade de prover uma recuperao que esteja de acordo com a tabela 2, para todos os compostos avaliados e em nveis
5 RSA (repetitividade) desvio padro relativo da anlise , excluindo alguma contribuio devido a heterogeneidade da amostra. A 6 RSD (reprodutibilidade) desvio padro relativo do resultado do laboratrio, incluindo uma heterogeneidade sub-amostral de 10%. L
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apropriados. A mdia das recuperaes em cada nvel de fortificao para cada commodity representativo deve estar em uma faixa de 70 a 120 % (em certos casos, podem-se aceitar valores fora desta faixa, desde que devidamente justificados). Onde o mtodo no permitir se alcanar estes valores, e na inexistncia de mtodos alternativos satisfatrios, os valores insatisfatrios de recuperao devem ser utilizados com extrema cautela. Excepcionalmente, onde a recuperao baixa, porm, consistente (i. e. demonstra boa preciso) e o seu fundamento seja bem estabelecido (ex: a distribuio do pesticida na partio), uma mdia de recuperao abaixo de 70% poder ser aceita. Entretanto, um mtodo mais preciso deve ser utilizado, caso praticvel. Ensaios de proficincia (ou outros testes interlaboratorais), onde praticvel, fornece uma importante ferramenta de verificao da preciso dos resultados gerados pelo mtodo, fornece informaes relativas variao interlaboratorial dos resultados. Entretanto, ensaios de proficincia geralmente no so dirigidos a avaliar a estabilidade do analito, homogeneidade ou extractabilidade dos analitos na amostra processada. Os dados relativos incerteza (quando aplicveis) devem ser incorporados na verificao de performance e no somente ns dados de validao metodolgica. Toda vez que um laboratrio assume a responsabilidade de desenvolver e/ou modificar um mtodo, os efeitos das variveis analticas devem ser estabelecidos, ex. utilizando-se de testes de robustez, antes da validao. Controles rigorosos devem ser utilizados em todos os aspectos do mtodo que podem influenciar os resultados, como: tamanho da amostra; volumes da partio; variaes na performance dos sistemas de clean-up utilizados; estabilidade dos reagentes ou derivados preparados; efeitos da luz, temperatura, solventes, armazenamento solventes nos analitos; efeitos dos solventes, injetores, colunas de separao, caractersticas da fase mvel (composio e fluxo), temperatura, sistema de deteco, co-extrativos, etc. no sistema de deteco. Estas caractersticas so mais importantes que a relao inequvoca qualitativa e quantitativa entre o sinal medido e o analito. Deve-se dar preferncia a mtodos aplicveis a multiresduos e/ou multi-matrizes. O uso de analitos ou matrizes representativos so importantes na validao metodolgica. Com este objetivo, as commodities devem ser suficientemente diferenciadas. Por exemplo, alguns produtos esto disponveis em amplo espectro de variantes manufaturadas, variedades cultivadas, ou raas, etc. Geralmente, uma nica variante de uma commodity em particular pode ser considerada como representativa de todas as demais. Entretanto, uma fruta ou vegetal no devem representar todas as frutas e vegetais. Onde variantes particulares da commodity possuem sabidamente diferenas na performance do mtodo, as avaliaes destas variaes so necessrias. Diferenas considerveis na exatido e preciso do mtodo, especialmente em uma etapa especfica da determinao, podem ocorrer entre as diferentes espcies. Onde a experincia demonstra performances similares na extrao e clean-up entre commodities/ matrizes similares, uma abordagem simplificada deve ser adotada no processo de validao. Uma commodity representativa pode ser escolhida (anexo 1) para representar cada grupo de commodities que possuem propriedades em comum. No anexo 1 as commodities so agrupados e classificadas de acordo com a classificao do Codex Alimentarius. Alguns exemplos do quanto validao por grupos pode ser abrangente (ou no) so dados abaixo: Cereais validao para gros integrais no podem ser estendidas para farelos e pes, entretanto, a validao feita para trigo em gros pode ser aplicada para cevada em gros ou farinha de trigo;
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Produtos de origem animal A validao para tecido muscular no deve ser aplicada para tecido adiposo (gordura), entretanto, a validao de gordura de galinha pode ser aplicada para gordura de bovinos. Frutas e vegetais A validao da fruta inteira fresca no pode ser aplicada a produtos desidratados, entretanto, a validao para repolho pode ser aplicada para couve de Bruxelas.
Analitos representativos similares podem ser usados para a avaliao da performance de um mtodo. Os compostos devem ser selecionados para cobrir as propriedades fsicas e qumicas dos analitos destinados a serem determinados pelo mtodo. A seleo de analitos representativos deve ser baseada no escopo de anlise proposto, levando-se em conta os seguintes fatores: (a) Os analitos representativos devem: (i) Possuir uma variedade grande suficiente de propriedades fsico qumicas para incluir os analitos representados; (ii) Seja detectado regularmente nas amostras avaliadas, ou seja crticos no processo de avaliao de risco (b) Caso praticvel, todos os analitos includos no processo inicial de validao devem ser utilizados nas verificaes de performance regularmente e devem ser determinados simultaneamente pelo sistema de determinao utilizado. (c) A concentrao de analitos usados para caracterizar um mtodo deve ser selecionada para cobrir os limites aceitveis de todo analitos previstos em todas as commodities. Sendo assim, os analitos selecionados que possuem altos e baixos limites de aceitao devem ser includos na anlise. Conseqentemente, os nveis de fortificao dos analitos/ commodities representativos utilizados nos testes de performance podem no necessariamente corresponder aos limites aceitveis atuais. Uma listagem dos principais grupos de pesticidas est presente no anexo 2. A classificao dos analitos representativos encontra-se no anexo 3. Onde dados apropriados estejam disponveis, pode ser desnecessria a realizao de todos os testes de performance. Entretanto, toda informao necessria deve estar inclusa ou referenciada nos dados de validao. O Anexo 4 fornece uma viso geral do parmetros que devem ser avaliados pela validao metodolgica de acordo com o status do mtodo a ser validado. Parmetros e critrios especficos que devem ser avaliados esto listados na tabela 1. Os parmetros avaliados devem restringir-se queles que sejam apropriados tanto para o mtodo quanto ao objetivo ao qual que ele se prope. Testes onde diferentes fatores so alterados ao mesmo tempo podem contribuir para minimizar os recursos necessrios. Mtodos individuais de determinao de agrotxicos (monoresduos) devem ser validados completamente, podendo ser utilizado neste processo matrizes representativas. Mtodos de grupos especficos devem ser validados devem ser validados com um ou mais commodities representativos e um mnimo de 2 analitos selecionados do grupo. Mtodos multiresduos representativos. devem ser validados valendo-se de commodities e analitos
6.6.2.1 Mtodos para a determinao de alimentos gordurosos ou desidratados Onde os resultados so expressos baseando-se no peso seco ou no contedo lipdico (gorduroso), o mtodo utilizado para determinar o peso seco ou o contedo lipdico deve ser
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consistente. Em uma situao ideal, este deve ser validado em comparao com um mtodo amplamente reconhecido. 6.6.2.2 Verificao de performance Os objetivos principais da verificao da performance so: Monitorar o desempenho do mtodo sob as condies utilizadas; Levar em conta os efeitos das variaes inevitveis causadas por exemplo, pela composio das amostras, desempenho do equipamento, qualidade dos reagentes, variaes ligadas ao analista e condies ambientais do laboratrio; Demonstrar que o desempenho do mtodo prximo daquele estabelecido durante a validao metodolgica, demonstrando que o mtodo estatisticamente consistente (principalmente a preciso e a incerteza) com a performance esperada para o mtodo. Os dados obtidos durante a validao devem ser atualizados e comparados com aqueles obtidos durante a verificao de desempenho. Os resultados dos controles de qualidade interno fornecem informaes essenciais para uma avaliao de longo prazo da reprodutibilidade e outras caractersticas do mtodo incluindo os analitos e matrizes incorporados durante a extenso do mtodo. As caractersticas bsicas apropriadas que devem ser testadas esto descritas no anexo 4 (TABELA 1 ). Para a efetiva verificao da performance, as amostras devem ser concomitantemente analisadas com controles de qualidade apropriados (brancos e determinaes de recuperao, materiais de referncia, etc.). Cartas controle podem ser utilizadas para verificar tendncias no desempenho do mtodo e para assegurar que o controle estatstico mantido. 6.7 Determinao rotineira da recuperao Caso seja aplicvel, a recuperao de todos os analitos deve ser determinada em cada grupo de anlises realizadas. Caso isso resulte em um nmero desproporcionalmente grande de anlises, os requisitos preconizados na tabela 1 devem ser seguidos. A anlise de materiais de referncia certificados aceitvel, apesar de raramente ser prtico, isto ocorre somente no caso destes materiais conterem analitos relevantes e em nveis de concentrao apropriados. A determinao da recuperao do analito normalmente feita a partir de fortificaes que tenham uma faixa de 1 a10 vezes o MMC, o LMR, ou algum nvel de relevncia especial para as anlises avaliadas. O nvel de fortificao deve ser trocado alternadamente ou regularmente, a fim de fornecer dados relativos performance analtica da faixa de concentraes. Nveis de recuperao que correspondem ao MMC ou ao LMR so particularmente importantes. Nos casos onde no existe disponibilidade de amostra em branco (ex: determinao de nveis trao de brometos inorgnicos), ou quando a nica amostra branco disponvel contm um composto interferente em um nvel (baixo) aceitvel, o nvel de fortificao deve ser 3 vezes o nvel do interferente na amostra branco. A concentrao (aparente ou no) do analito deve ser determinada a partir de pores analticas mltiplas. Caso necessrio, a recuperao deve ser corrigida pelos valores encontrados na amostra branco. Os valores do branco e das recuperaes no corrigidas devem ser reportados. Estes devem ser determinados a partir da matriz usada nos experimentos de fortificao e o valor da amostra em branco no deve ser maior do que 30% do valor de MMC. At onde seja praticvel, a recuperao de todos os componentes definidos pelo LMR devem ser determinados rotineiramente. Onde um resduo a ser determinado componente de um meio com mltiplos componentes (ex.: ismeros passveis de determinao; resduos com mltiplos produtos de degradao), a recuperao deve ser determinada ou por um componente predominante nestes resduos ou utilizando-se aquele que possua menor taxa de recuperao.
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6.7.1 Aceitabilidade da performance analtica das determinaes da recuperao de rotina Os limites aceitveis de uma recuperao de rotina deve estar em uma faixa de 60 a 140% e deve ser ajustada valendo-se dos dados da repetitividade (validao) e da reprodutibilidade intra laboratorial. Recuperaes que estejam fora desta faixa geralmente necessitam de nova avaliao do grupo de anlise, entretanto, em alguns casos (devidamente justificados), esta faixa pode ser aceitvel. Em casos em que esta rotina seja numericamente alta e nenhum resduos tenha sido detectado, a re-anlise no necessria para provar a inexistncia de resduos. Recuperaes elevadas e consistentes devem ser investigadas. Se uma tendncia ocorre na recuperao ou resultados potencialmente inaceitveis ( acima do valor de % RSD dado na tabela 2) so obtidos, as causas devem ser rigorosamente investigadas. Dados insatisfatrios de resduos devem tabela 2, pelo menos para as anlises de alcanada, as sanes no devem ser preciso deve ser informada ao solicitante ser corroborados pela faixa de recuperao dada na confirmao. Caso a recuperao nesta faixa no seja necessariamente eliminadas, entretanto, esta baixa da amostra.
6.8 Ensaios de proficincia e a anlise de materiais de referncia O laboratrio deve participar regularmente de ensaios de proficincia de provedores relevantes. Casos resultados questionveis ou inaceitveis sejam obtidos, as causas raiz do(s) problema(s) devem ser investigadas e, particularmente nos resultados inaceitveis, os procedimentos devem ser retificados antes da realizao de novas anlises pelo laboratrio. Anlises intralaboratoriais com materiais de referncia devem ser regularmente analisadas a fim de conferir evidncias da performance analtica. Onde praticvel, intercambio destes materiais entre os laboratrios fornece verificao de preciso adicional e independente. 6.9 Confirmao dos resultados 6.9.1 Princpios da confirmao Resultados negativos (resduos abaixo do LMR) devem ser considerados confirmados no caso de em que as recuperaes e os valores de MNC medidos para o grupo de anlises seja aceitvel. Resultados negativos de analitos representados (por inferncia) baseiam-se somente em medidas indiretas de recuperao e MNC (a partir dos dados obtidos de analitos representativos), logo devem ser interpretados com cautela. Resultados positivos (resduos acima do LMR) geralmente necessitam de confirmao adicional. Em adio aos requerimentos listados abaixo para anlise confirmatria dos resultados, a confirmao de analitos representados (i. e. aqueles que no possuem calibrao e recuperao especfica) deve ser apoiada por calibrao e determinao da recuperao. A anlise confirmatria no obrigatria para todos os casos, esta deve ser decidida pelo laboratrio, conforme o caso (obviamente seguida das devidas justificativas). Resultados acima do LMR suspeitos ou de resduos pouco comuns devem ser identificados por pelo menos uma tcnica, ou combinao destas, disponveis, e os parmetros quantitativos devem ser confirmados por anlises adicionais. Diferentes combinaes de clean-up, derivatizao, separao e tcnicas de deteco podem ser usadas para subsidiar a confirmao. O uso de sistemas de deteco altamente especfico, como a espectrometria de massas, recomendado.
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Detectores seletivos empregados na CG ou CL, como ECD7, FPD8, NPD9, DAD10 e fluorescncia, possuem especificidade limitada. O uso destes, mesmo com o uso de colunas com diferentes polaridades, podem dar somente evidncias limitadas da confirmao. Estas limitaes podem ser aceitveis para resduos que freqentemente sejam encontrados nos alimentos, especialmente, no caso de existir evidncias de confirmaes anteriores por tcnicas mais especficas. Estas informaes devem estar especificadas nos relatrios de ensaios. 6.9.2 Separao cromatogrfica Determinaes de espectrometria de massas dos resduos normalmente so utilizadas em conjugao com a tcnica de separao cromatogrfica para fornecer simultaneamente: i) Tempo de reteno; ii) Razo da massa/carga inica; iii) Riqueza dos dados. Para procedimentos que se utilizem de GC-MS CG-MS, a separao cromatogrfica deve ser conduzida utilizando-se de colunas capilares. Para procedimentos de CL-MS a separao cromatogrfica deve ser feita valendo-se de qualquer coluna de CL adequada. Em cada um dos casos, o tempo de reteno mnimo aceitvel deve corresponder a pelo menos a duas vezes o tempo de esvaziamento do volume da coluna. O tempo de reteno (tempo de reteno relativo) de um analito na amostra deve ser compatvel com o tempo obtido com o padro de calibrao (pode ser necessria calibrao combinada com a matriz) dentro de uma janela de tempo especificada, que deve ser feita levando-se em considerao o poder resoluo do sistema cromatogrfico. A razo do tempo de reteno cromatogrfica de um analito e um padro interno adequado, i. e., tempo de reteno relativo do analito, deve corresponder ao encontrado na soluo padro com uma tolerncia de 0,5% para CG e 2,5% para CL. 6.9.3 Confirmao por Espectrometria de Massas (MS11) O termo confirmao por espectrofotometria de massas geralmente refere-se evidncia decisiva que a amostra contm o analito, ou seja, uma prova de identidade. A determinao quantitativa deste analito somente pode ser realizada por uma segunda anlise no equipamento de leitura original (ex.:Organoclorados por CG-ECD). O espectro de referncia de uma analito deve ser feito utilizando-se dos instrumentos e tcnicas empregadas para as amostras rotineiras. Em casos que existam diferenas evidentes entre o espectro publicado e o gerado pelo laboratrio, o ultimo deve ter comprovao de ser vlido. A fim de se evitar as distores das razes inicas, a quantidade empregada de analito no deve sobrecarregar o detector. Diagnsticos de cromatogramas de ons deve possuir picos (um mnimo de 3 pontos, superando a relao S/N 3:1) com tempo de reteno, formato e razo da resposta obtido de um padro de calibrao analisado no mesmo grupo. Onde cromatogramas de ons no relacionados demonstram picos com tempo de reteno e forma semelhantes ou onde o cromatograma inico no disponvel, anlises confirmatrias adicionais podem ser necessrias. Onde um cromatograma inico demonstra evidencia de significante interferncia, este no deve ser utilizado para quantificar ou identificar resduos.
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Electron Capture Detector Flame Photometric Detector 9 Nitrogen Phosphorous Detector 10 Diode Array Detector 11 Espectrometria de Massa
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Cuidadosa subtrao do espetro de fundo (background spectra) pode ser exigida para assegurar que o espectro resultante do pico cromatogrfico seja representativo. Quando a correo do espectro de fundo for aplicada, esta deve ser realizada de maneira uniforme por todo grupo de anlises e devem ser claramente indicados. O espectro poder ser uma evidncia de identidade, onde os ons no relacionados ao analito em um espectro no excedam 25% do valor da intensidade do pico base do espectro de eletro-inozao, ou 10% de todos os outros mtodos de ionizao. Onde ons no relatados excedam estes limites, e estes sejam derivados de espcies cromatograficamente sobrepostas, evidncias adicionais devem ser exigidas. A ausncia de ons no relacionados no espectro de eletro-ionizao pode ser usada como evidncia de identificao no caso em que o analito seja muito simples. A razo da intensidade dos principais ons devem estar de acordo com os limites estabelecidos na tabela 3. Onde um cromatograma inico demonstra significativa interferncia, este no deve ser utilizado para determinar a razo da intensidade. O ons que evidenciar a melhor razo sinal/rudo e nenhuma evidncia de interferncia cromatogrfica significativa deve ser utilizado para os procedimentos de quantificao. A obteno de espectros por EI-MS12 ou MS/MS13 pode dar boas evidncias da identidade e quantidade do analito em muitos casos. Em outros casos, como os espectros de massas produzidos por outros processos (ex: CI14, API15) podem no ser suficientes para uma confirmao absoluta da identidade, podendo ser exigido obteno de evidncias mais concisas. Estas evidncias podem ser dadas em situaes em que a razo isotpica do(s) on(s), ou o perfil cromatogrfico dos ismeros do analito seja muito caractersticos. Caso no seja desta maneira, a evidncias podem ser obtidas atravs de: (i) (ii) (iii) (iv) (v) um sistema de separao cromatogrfica diferente; uma tcnica de ionizao diferente; MS/MS MS de mdia/alta resoluo; ou Induzindo fragmentao na fonte (in-source) na ou LC-MS CL-MS16
Onde, atravs da varredura de uma escala limitada de massas ou pela SIM (Secondary Ion Mass Spectrometry), o aumento da sensibilidade essencial, o requisito geral mnimo para os dados obtidos de 2 ons so m/z >200 ou para 3 ons so de m/z >100, preferencialmente o on molecular deve ser includo. Para alguns poucos analitos estes requisitos talvez no possam ser aceitos, ons com m/z <100 podem tambm fornecer evidncias adicionais. Entretanto, ons originados de maneira ordinria podem ser de pouca serventia, como algumas molculas com cargas positivas (ctions) ou adutos, como por exemplo o [M+NH ] , formado no LC-MS. As razes de intensidade obtidas de ons isotpicos mais caractersticos (ex.: aqueles que contm Cl ou Br) podem ser particularmente teis. Os ons selecionados para o diagnstico no devem ser originados exclusivamente da mesma parte da molcula me. Para uma varredura completa e SIM a intensidade relativa dos ons encontrados, expressos como a percentagem da intensidade do on ou transio mais intenso (abundantes), deve corresponder
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Electron impact-mass spectrometry Seqencial mass detector 14 Chemical ionization 15 Atmospheric Pressure Ionization 16 Cromatgrafo lquido acoplado com detector de massas
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a aquela obtida com o padro de calibrao, em concentraes comparveis e medidas nas mesmas condies. As solues para a calibrao combinada com a matriz podem ser necessrias. A tabela 3 indica as tolerncias mximas Tabela 3. Tolerncias mximas permitidas para intensidades inicas relativas usando diversas tcnicas espectromtricas. Intensidade relativa (% do pico da base) > 50 % > 20 % a 50 % > 10 % a 20 % 10% EI-GC-MS (relativo) CI-GC-MS, LC-MS, LC-MS , GC-MS (relativo) 20 % 25 % 30 % 50 %
n n
10 % 15 % 20 % 50 %
Faixas de tolerncia grande podem levar mais provavelmente a um grande nmero de resultados falso positivos. Da mesma forma, se as faixas de tolerncia forem reduzidas, o nmero de falsos negativos aumenta. A intensidade relativa dos ons diagnosticados e/ou pares inico de precursores/produtos devem ser identificados pela comparao do espectro ou pela integrao dos sinais nicos dos traos de massa. Quando toda a varredura do espectro gravada e, um nico espectro de massa, um mnimo de 4 ons deve estar presente com uma intensidade relativa 10% do valor do pico da base. O on molecular deve ser includo, caso esteja presente no espectro de referencia com uma intensidade relativa 10%. Pelo menos 4 ons devem estar dentro dos limites permitidos de tolerncia de intensidade inica (tabela 3). Bibliotecas eletrnicas (computador) podem ser utilizadas. Neste caso, a comparao dos dados do espectro de massa das amostras analisadas, quando comparadas com os dados da soluo de calibrao tem sido um fator de combinao crtico. Este fator deve ser determinado durante a validao metodolgica para cada analito, Variaes do espectro causadas pela matriz e pela performance do detector devem ser verificadas. 6.9.4 Confirmao por um laboratrio independente Onde for praticvel, os resultados confirmatrios oriundo de outro laboratrio, com conhecida capacidade analtica, fornece importante subsidio relativo quantificao do analito.Caso diferentes tcnicas de determinao so utilizadas, esses dados fornecem importantes subsdios relativos identificao do analito. 6.10 Elaborao dos relatrios de ensaio 6.10.1 Expresso dos resultados Os resultados devem ser expressos com o nome qumico ao qual foi registrado na ANVISA. A unidade de expresso mg/kg. O complemento do valor numrico dos resultados deve estar conforme a tabela 4. Os dados relativos aos LMR podem ser obtidos no seguinte endereo: http://www.anvisa.gov.br/toxicologia/monografias/index.htm
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Tabela 4 Complemento do valor numrico dos resultados de acordo com seu status na ANVISA. Resduos Limite de deteco Limite de quantificao R < LQ satisfatrio R < LQ insatisfatrio LMR
Autorizados No autorizados
R < LD satisfatrio R < LD satisfatrio R > LD insatisfatrio
R < LMR satisfatrio
R > LMR insatisfatrio
No se aplica
1 - Recomenda-se reportar os resduos de agrotxicos no autorizados apenas como = resduos > LQ 6.10.2 Clculos dos resultados Geralmente, resultados da anlise de resduos de pesticidas no so corrigidas pelo valor de recuperao. Caso estes valores sejam corrigidos, este procedimento deve estar declarado no relatrio. Nesta situao a correo deve-se basear na mdia de 3 recuperaes preparadas em uma mesma matriz e analisada em no mesmo grupo de amostras. Onde o resultado tem origem em uma nica poro de anlises (ex: no caso de resduos que no ultrapassaram o LMR), o resultado deve ser originado da tcnica de deteco considerada mais precisa. Onde os resultados so provenientes de duas ou mais tcnicas eqitativamente precisas, a mdia dos valores encontrados deve ser relatada. Onde duas ou mais pores analticas foram analisadas (ex: resduos que ultrapassaram o LMR), a mdia aritmtica dos resultados mais precisos obtidos de cada poro deve ser relatada. Onde uma boa homogeneizao das amostras conseguida, o desvio padro relativo (RSD) do resultado do laboratrio (reprodutibilidade) entre as pores testadas no pode ultrapassar 30% para resduos significantemente encontrados acima do limite de quantificao (LQ). Em valores prximos a LQ, a variao de RSD poder ser maior e extremo cuidado deve ser tomado na deciso se o LMR foi ultrapassado ou no. 6.10.3 Arredondamento de resultados essencial a manuteno da uniformidade dos resultados relatados. De maneira geral resultados 0,01 e <10 mg/kg devem ser arredondados para dois algarismos significativos, valores 10 mg/kg devem ser arredondados para trs algarismos significativos ou para um nmero inteiro. A expresso dos LMR deve ser arredondada para um algarismo significativo, no caso de valores <10 mg/kg e para dois algarismos significativos quando o LMR 10 mg/kg. Estes requisitos no necessariamente refletem a incerteza associada com os dados. Algarismos significativos adicionais podem ser registrados para fins estatsticos. Em alguns casos os procedimentos de arredondamento podem ser especificados pela ANVISA.
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6.10.4 Incerteza de medio Um dos requisitos da norma ISO/IEC 17025 que os laboratrios determinem e disponibilizem o valor da incerteza associada aos resultados. Para isto o laboratrio deve utilizar-se de dados, os quais sero aplicados para a determinao da incerteza associada, oriundos da validao/ verificao metodolgica, ensaios de proficincia e outros estudos interlaboratoriais e controle interno da qualidade analtica. A medida da incerteza um indicador quantitativo da confiabilidade dos dados analticos e descreve o resultado de uma avaliao com o propsito de determinar o intervalo dentro do qual estima-se que esteja o valor verdadeiro, geralmente associado a um nvel de confiana. Os dados da incerteza de medio devem ser aplicados cautelosamente para que se evite a falsa sensao de certeza sobre o valor verdadeiro da medio. Estimativas de incerteza tpicas so baseadas em dados prvios e podem no refletir a incerteza associada anlise da amostra corrente. A incerteza tpica pode ser estimada usando-se o Guia para Expresso da Incerteza de Medio ou o guia EURACHEM/ CITAC Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement (disponvel em http://www.measurementuncertainty.org/mu/guide/index.html). Os valores utilizados podem ser originados ma validao metodolgica, da anlise de materiais de referncia ou de outras anlises de controle interno. Reprodutibilidade pode ser utilizada como base, entretanto a contribuio de fontes adicionais de incerteza (ex: heterogeneidade da amostra para cada poro analtica [devido a diferenas intrnsecas, na preparao, processamento e subamostragem da amostra], eficincia da extrao e diferenas nas concentraes dos padres) tambm deve ser includa. Os valores de RSD podem ser originados dos procedimentos de recuperao realizado em materiais de referncias. Dados de incerteza encontrados primariamente para um analito e uma matriz, geralmente so utilizados para gerar dados para a extrapolao dos valores de incerteza para outros analitos e matrizes, contudo, esta ao deve ser tomada com extrema cautela. A incerteza tende a ser grande em valores de concentrao baixos, especialmente quando prximos ao valor de LQ. Isto pode ento tornar necessria calculo da incerteza para uma faixa de valores de concentrao, caso a incerteza seja usada para uma ampla gama de resduos. Uma alternativa prtica para a determinao da incerteza atravs da utilizao dos resultados obtidos em ensaios de proficincia. Os resultados dos ensaios de da proficincia podem fornecer uma indicao importante sobre a contribuio da influencia interlaboratorial incerteza da medio de um laboratrio individual e de uma justificativa indireta da incerteza de medio utilizada. A anlise em replicatas de uma amostra especfica, concomitantemente com a determinao da recuperao, pode melhor demonstrar a exatido do resultado de um laboratrio e justificar o uso de valores de incerteza de medio refinados. Neste caso, cuidados sempre devem ser tomados em relao influncia interlaboratorial. Este dado de incerteza inclui a repetibilidade da sub amostragem e anlise. Esta prtica poder ser utilizada que os resultados analticos so extremamente importantes (ex: valores duvidosos prximos ao LMR e interesses econmicos). Relatrios baseados no MMC eliminam a necessidade de se considerar a incerteza associada com resduos encontrados em nveis abaixo dos abaixo do LQ.
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6.10.5 Interpretao dos resultados A avaliao de se um resduos em uma amostra violou ou no o LMR estabelecido, somente um problema quando o nvel deste resduos e relativamente prximo do LMR. Nestes casos a deciso deve levar a em conta a opinio da ANVISA, os dados do controle de qualidade analtico. Sugerimos o estabelecimento de critrios. E os resultados das replicadas das pores teste. A possibilidade de perda de resduos ou contaminao cruzada tambm deve ser levada em conta. Considerando os resultados dos ensaios de proficincia europeus (para frutas e vegetais, utilizando mtodos multiresduos), Um valor padro de incerteza de medio de 50% (nvel de confiana de 95%) este valor cobre as variabilidades interlaboratoriais. Recomenda-se o uso destes valores pela ANVISA e pelas Vigilncia Sanitrias Estaduais e Municipais para a tomada de deciso. Este valor esta de acordo com o descrito pelo Codex Committee on Pesticide Residues (CCPR 2005, ALINORM 05/28/24). Um pr-requisito para o uso do valor de incerteza expandida de 50% que o laboratrio tenha calculado a sua prpria incerteza e que esta seja abaixo de 50%. Em casos que um LMR excedido ao mesmo tempo de que a dose aguda de referencia, uma incerteza expandida com um nvel menor deve ser utilizado como medida de precauo. Caso o laboratrio experimente, em casos extremamente particulares, valores inaceitveis de repetitividade e reprodutibilidade (ex: concentraes extremamente baixas dos analitos), zscores no satisfatrios durante ensaios de proficincia, o uso de um valor de incerteza maior deve ser considerado (caso a caso). Para resultados obtidos em mtodos monoresduos (em particular, se padres internos isotopicamente marcados so utilizados), uma incerteza de medio expandida de menor valor pode ser usada, sendo necessria as devidas evidncias de que a RSD seja <25%. Normalmente os resultados da anlise de agrotxicos no so corrigidos pela taxa de recuperao, entretanto, este procedimento deve ser tomado quando a valor de recuperao for significativamente diferente de 100% (tipicamente <70%, com boa preciso). Neste caso a incerteza associada recuperao deve ser levada em conta. O resultado preferencialmente deve ser relatado junto com a incerteza expandida (U), de acordo com o exemplo que segue: como segue: x U (unidade), onde x o resultado encontrado e U a incerteza de medio expandida. 7. INTERPRETAO E EMISSO DOS RELATRIOS DE ENSAIOS 7.1 Consideraes Os relatrios de ensaio devem conter, alm das informaes legalmente exigidas, informaes sobre a cultura analisada, os agrotxicos encontrados, quais destes apresentam nveis satisfatrios (i.a. autorizado para a cultura, e abaixo do LMR), quais destes no apresentam nveis satisfatrios (i.a. autorizado para a cultura, mas acima do LMR), i.a.s no autorizados para a cultura, a concentrao dos mesmos, mtodos utilizados, limites de deteco e quantificao (ou determinao), LMRs, data de recebimento, de realizao e emisso do laudo da amostra. Os relatrios de anlise devero ser emitidos em at 30 dias aps o recebimento das amostras pelo laboratrio. Caso o prazo seja ultrapassado, o laboratrio dever informar vigilncia sanitria (remetente da amostra) e coordenao de amostragem do PARA, qual foi o motivo do atraso.
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7.2 Ingredientes ativos de uso no autorizado Neste caso, o resultado do laudo de anlise ser considerado insatisfatrio quando os valores encontrados forem maiores ao limite de deteco do ingrediente ativo determinado pelo laboratrio. 7.3 Ingredientes ativos de uso autorizado para a cultura Quando forem detectados agrotxicos de uso autorizado, o resultado do laudo de anlise somente ser considerado insatisfatrio quando os valores encontrados ultrapassarem os Limites Mximos de Resduos (LMR) determinados pela ANVISA. 8. DOCUMENTOS RELACIONADOS POP AMOST PROC 1 - Planos de Amostragem e Documentao POP AMOST PROC 2 - Procedimentos para Amostragem no Local POP AMOST PROC - 3 - Acondicionamento e Expedio de Amostras POP AMOST PROC 4 - Cadeia de Custdia para Amostras Fichas de envio das amostras
ATENO: Somente as verses eletrnicas e as respectivas cpias fsicas aprovadas, revisadas, carimbadas com a estampa cpia controlada e assinadas so documentos controlados. Qualquer documentao fora destas especificaes no um documento controlado. Verifique o status da ultima reviso no site da GGLAS\ANVISA: http://www.anvisa.gov.br/reblas/index.htm
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ANEXO 1 COMMODITIES /AMOSTRAS REPRESENTATIVAS PARA A VALIDAO DE PROCEDIMENTOS ANALTICOS PARA A DETERMINAO DE RESDUOS DE PESTICIDAS.
GRUPO DA COMMODITY Produtos vegetais I
PROPRIEDADES COMUNS Alta taxa clorofila de gua e
CLASSE DE PRODUTOS
ESPCIES REPRESENTATIVAS Alface, espinafre Brcolis, repolho, couve crespa Vagem Ma, pra Pssego, cereja Morango Uvas Tomate, melo, pimento Cogumelos Laranja, limo Uva passa, tmara Abacate, semente de girassol Nozes, Noz pecam, pistache Trigo, arroz, milho Farelo de milho, farinha de trigo Ex.: Alho, lpulo, ch, especiarias, amora Bovina, frango Rim, fgado Gordura ou carne Leite bovino Ovos de galinceos
II
Alta taxa de gua e pouca ou nenhuma taxa de clorofila
III IV V V
Alta acidez Alta taxa de acar Alta taxa de leo gordura Materiais desidratados
Folhosos brassicas, Folhosos leguminosas Pomos Drupas Bagas Frutas pequenas Hortalias\Frutos Fungos Ctricos Sementes oleosas Castanhas Cereais Cereais processados
ou
Produtos que necessitam de anlises individuais Produtos de origem animal Carnes Vsceras Gorduras Leite Ovos
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ANEXO 2 PRINCIPAIS GRUPOS DE PESTICIDAS GRUPO 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) 11) 12) 13) 14) 15) 16) 17) 18) 19) 20) 21) 22) 23) 24) 25) DESCRIO Ftalamidas Grupos nitrila/ciano ligados pos dupla ligao Halogenados aromticos Conazis e metaboltos Clorados (ciclo\ciclodienos) Carbamaldeidos Dinitroanilinas Piretrides e metablitos Triazinas Fenil pirris Organofosforados e metablitos Carbamatos and metablitos Tiocarbamatos Urea\ uracilas Heterocclicos nitrogenados Metoxi-acetamidAs ImidazolinonAs Fenxi cido Oxihidrocarbonos Estrobilurinas Neonicotinils Diacildrazinas cido ethanosulfonico (ESA) e cido oxanilico (AO) e metablitos Sulfonil urias cido tetrnico
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ANEXO 3 GRUPOS DE MULTIRESDUOS PARA FRUTAS, LEGUMES E VERDURAS

NOME DO COMPOSTO 1-naphthol 1,2,4-triazole 2,4-DB 2,4-D 2,4,5-T 3-hydroxycarbofuran 5-hydroxythiabendazole Acephate Acetamiprid Acetochlor Acetochlor ethanesulfonic Acid Acetochlor oxanilic acid Acibenzolar-S-methyl Acifluorfen Alachlor Alachlor ethanesulfonic Alachlor oxanilic acid Aldicarb Aldicarb sulfone Aldicarb sulfoxide Aldrin Allethrin Ametryn Amitraz Anilazine Atrazine Azinphos methyl Azinphos methyl O-analog Azoxystrobin Bendiocarb Benfluralin Benomyl Benoxacor Bensulfuron methyl Bensulide Bentazon BHC alpha BHC beta Bifenazate Bifenthrin Boscalid Bromacil Bromoxynil Bromuconazole-46 Bromuconazole-47 Buprofezin Butachlor Butylate Cadusafos Captafol FORMULA MOLECULAR. C10H8O C2H3N3 C10H10Cl2O3 C8H6Cl2O3 C8H5Cl3O3 C12H15NO4 C10H8N3OS C4H10NO3PS C10H11ClN4 C14H20ClNO2 C8H21NO5S C14H19NO4 C8H6N2OS2 C14H21NO5S C14H20ClNO2 C8H21NO5S C14H19NO4 C7H14N2O2S C7H14N2O4S C7H14N2O3S C12H8Cl6 C19H26O3 C9H17N5S C19H23N3 C9H5Cl3N4 C8H14ClN5 C10H12N3O3PS2 C10H8O C10H12N3O4PS C22H17N3O5 C11H13NO4 C13H16F3N3O4 C14H18N4O3 C11H11Cl2NO2 C16H18N4O7S C14H24NO4PS3 C10H12N2O3S C6H6Cl6 C6H6Cl6 C17H20N2O3 C23H22ClF3O2 C18H12Cl2N2O C9H13BrN2O2 C7H3Br2NO C13H12BrCl2N3O C13H12BrCl2N3O C16H23N3OS C17H26ClNO2 C11H23NOS C10HOPS2 C10H9Cl4NO2S FAMLIA QUIMICA carbamate metabolite triazole metabolite phenoxy acid phenoxy acid phenoxy acid carbamate metabolite carbamate phosphoramidothioic neonicotinyls chloroacetanilide chloroacetanilide metabolite chloroacetanilide metabolite thiadiazole diphenyl ether acetamide chloroacetanilide metabolite chloroacetanilide metabolite carbamate carbamate carbamate cyclodiene pyrethroid triazine amidine oxon strobilurin carbamate dinitroaniline benzimidazole benzoxazine sulfonyl urea organophosphate thiadiazinone dioxide hexane ring hexane ring hydrazine carboxylate pyrethroid anilide/pyridine uracil phenol conazole conazole thiadiazinone chloroacetanilide thiocarbamate phosphorodithionate phthalimide GRUPO* 14 4 20 20 20 14 4 11 23 6 25 25 4 3 6 25 25 14 14 14 5 8 9 2 9 9 11 14 11 22 14 7 Single 6 26 11 17 5 5 14 8 6 16 20 4 4 17 6 14 11 1
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Captan Carbaryl Carbendazim Carbofuran Carbophenothion Carboxin Carfentrazone ethyl Chloramben Chlordane cis Chlordane trans Chlorethoxyfos Chlorfenapyr Chlorfenvinphos total Chlorimuron ethyl Chloroneb Chlorothalonil Chlorpropham Chlorpyrifos Chlorpyrifos methyl Chlorpyrifos O-analog Clofentezine Clomazone Clopyralid Clothianidin Coumaphos Coumaphos O-analog Cyanazine Cyazofamid Cycloate Cyfluthrin Cyhalothrin (lambda) Cyhalothrin (lambda epimer R157836) Cyhalothrin total (Lcyhalothrin + R157836 epimer) Cymoxanil Cyprodinil Cyromazine DCPA DCPA mono acid DDD o,p' DDD p,p' DDE o,p' DDE p,p' DDT o,p' DDT p,p' DEF (Tribufos) Deltamethrin Demeton Desethyl atrazine Desethyl-desisopropyl atrazine Desisopropyl atrazine
C9H8Cl3NO2S C12H11NO2 C9H9N3O2 C12H15NO3 C11H16ClO2PS3 C12H13NO2S C15H14Cl2F3N3O3 C7H5Cl2NO2 C10H6Cl8 C10H6Cl8 C6H11Cl4O3PS C15H11BrClF3N2O C12H14Cl3O4P C15H15ClN4O6S C8H8Cl2O2 C8Cl4N2 C10H12ClNO2 C9H11Cl3NO3PS C7H7Cl3NO3PS C9H11Cl3NO4P C14H8Cl2N4 C12H14ClNO2 C6H3Cl2NO2 C6H8ClN5O2S C14H16ClO5PS C14H16ClO6P C9H13ClN6 C13H13ClN4O2S C11H21NOS C22H18Cl2FNO3 C23H19ClF3NO3 C23H19ClF3NO3 C23H19ClF3NO3 C7H10N4O3 C22H19Cl2NO3 C24H25NO3 C15H18ClN3O C14H15N3 C6H10N6 C10H6Cl4O4 C9H4Cl4O4 C14H10Cl4 C14H10Cl4 C14H8Cl4 C14H8Cl4 C14H9Cl5 C14H9Cl5 C12H27OPS3 C22H19Br2NO3 C8H19O3PS2 C6H10ClN5 C3H4ClN5 C5H8ClN5 C16H16N2O4
phthalimide carbamate benzimidazole carbamate organophosphate carboxamide fluorophenyl triazole benzoic acid cyclodiene cyclodiene phosphorothioate pyrrole organophosphate sulfonyl urea chlorobenzene phthalimide carbamate phosphorothionic acid phosphorothionic oxon tetrazine pyridazone pyridinecarboxylic neonicotinyl posphorothioate oxon triazine imidazole thiocarbamate pyrethroid pyrethroid pyrethroid pyrethroid cyanoacetamide pyrethroid pyrethroid conazole anilinopyrimidine triazine phthalic acid dicarboxylic acid bridged biphenyl bridged biphenyl bridged biphenyl bridged biphenyl bridged biphenyl bridged biphenyl organophosphate pyrethroid phosphorothioate triazine metabolite triazine metabolite triazine metabolite carbamate
1 14 Single 14 11 6 4 20 5 5 11 10 11 26 3 2 14 11 11 11 Single 17 20 23 11 11 9 4 15 8 8 8 8 2 8 8 4 17 9 3 20 3 3 3 3 3 3 11 8 11 9 9 9 14
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Desmedipham Diazinon Diazinon O-analog Dicamba Dichlobenil Dichlorprop Dichlorvos (DDVP) Dicloran Dicofol o,p' Dicofol p,p' Dicrotophos Dieldrin Difenoconazole Dimethenamid Dimethenamid ethanesulfonic acid Dimethenamid oxanilic acid Dimethenamid P Dimethoate Dimethomorph Dinoseb Dinotefuran Diphenamid Diphenylamine (DPA) Disulfoton Disulfoton sulfone Diuron Endosulfan I Endosulfan II Endosulfan sulfate Endrin Epoxiconazole EPTC Esfenvalerate Ethalfluralin Ethiofencarb Ethion Ethion di oxon Ethion mono oxon Ethoprop Ethoxyquin Etoxazole Famoxadone Fenamidone Fenamiphos Fenamiphos sulfone Fenamiphos sulfoxide Fenarimol Fenbuconazole Fenhexamid Fenitrothion Fenitrothion O-analog Fenpropathrin Fenpyroximate
C12H21N2O3PS C12H21N2O4P C8H6Cl2O3 C7H3Cl2N C9H8Cl2O3 C4H7Cl2O4P C6H4Cl2N2O2 C14H9Cl5O C14H9Cl5O C8H16NO5P C12H8Cl6O C19H17Cl2N3O3 C14H9ClF2N2O2 C12H18ClNO2S C12H19NO5S2 C12H17NO4S C12H18ClNO2S C5H12NO3PS2 C21H22ClNO4 C10H12N2O5 C7H14N4O3 C16H17NO C12H11N C8H19O2PS3 C8H19O4PS C9H10Cl2N2O C9H6Cl6O3S C9H6Cl6O3S C9H6Cl6O4S C12H8Cl6O C17H13ClFN3O C9H19NOS C25H22ClNO3 C13H14F3N3O4 C11H15NO2S C9H22O4P2S4 C9H22O6P2S2 C9H22O5P2S3 C8H19O2PS2 C14H19NO C21H23F2NO2 C5H5Cl3N2OS C22H18N2O4 C17H17N3OS C13H22NO3PS C13H22NO5PS C13H22NO4PS C17H12Cl2N2O C19H17ClN4 C14H17Cl2NO2 C9H12NO5PS C9H12NO6P C22H23NO3 C24H27N3O4
phosphorothioate oxon benzoic acid nitrile phenoxy acid phosphoric acid nitroaniline bridged biphenyl bridged biphenyl organophosphate cyclodiene triazole urea acetamide acetamide metabolite acetamide metabolite amide phosphorodithionic acid chlorophenyl morpholine phenol neonicotinyl acetamide amine phosphorodithioate sulfone urea cyclodiene cyclodiene cyclodiene cyclodiene conazole thiocarbamate pyrethroid dinitroaniline carbamate phosphorodithioic acid oxon oxon dipropyl phosphorodithioate quinoline oxazole dicarboximide/oxazole imidazole phosphoramidate sulfone sulfoxide pyrimidine conazole chlorocarboximide phosphorothioate oxon pyrethroid phenoxypyrazol
11 11 20 2 20 11 7 3 3 11 5 4 16 6 25 25 6 11 3 20 23 6 3 11 11 16 5 5 5 5 4 14 8 7 14 11 11 11 11 Single 18 4 18 4 11 11 11 3 4 6 11 11 8 10
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Fenthion Fenthion O-analog Fenuron Fenvalerate Fipronil Fluazifop butyl Fluazinam Fludioxonil Flufenacet Flufenacet ethanesulfonic acid Flufenacet oxanilic acid Flumioxazin Flumetsulam Fluometuron Fluridone Fluvalinate Folpet Fonofos O-analog Forchlorfenuron Formetanate Halosulfuron Halosulfuron methyl Heptachlor Heptachlor epoxide Hexachlorobenzene (HCB) Hexaconazole Hexazinone Hexythiazox Hydroprene Hydroxy atrazine Imazalil Imazamethabenz acid Imazamethabenz methyl Imazamox Imazapic Imazapyr Imazaquin Imazethapyr Imidacloprid Indoxacarb Iprodione Iprodione metabolite isomer Isofenphos Isofenphos O-analog Kresoxim methyl Lactofen Lindane (BHC gamma) Linuron Malathion Malathion O-analog MCPA MCPB Mecoprop (MCPP)
C10H15O3PS2 C10H15O4PS C9H12N2O C25H22ClNO3 C12H4Cl2F6N4OS C15H12F3NO4 C13H4Cl2F6N4O4 C12H6F2N2O2 C14H13F4N3O2S C11H14FNO4S C11H12FNO3 C19H15FN2O2 C12H9F2N5O2S C10H11F3N2O C19H14F3NO C26H22ClF3N2O3 C9H4Cl3NO2S C10H15OPS2 C10H15O2PS C12H10ClN3O C11H15N3O2 C12H13ClN6O7S C12H13ClN6O7S C10H5Cl7 C10H5Cl7O C6Cl6 C14H17Cl2N3O C12H20N4O2 C17H21ClN2O2S C17H30O2 C8H15N5O C14H14Cl2N2O C15H18N2O3 C16H20N2O3 C15H19N3O4 C14H17N3O3 C13H15N3O3 C17H17N3O3 C15H19N3O3 C9H10ClN5O2 C22H17ClF3N3O7 C13H13Cl2N3O3 C13H13Cl2N3O3 C15H24NO4PS C15H24NO5P C18H19NO4 C19H15ClF3NO7 C6H6Cl6 C9H10Cl2N2O2 C10H19O6PS2 C10H19O7PS C9H9ClO3 C11H13ClO3 C10H11ClO3
phosphorothioate oxon urea pyrethroid phenyl pyrazole pyridine pyridine phenyl pyrrole anilide anilide metabolite anilide metabolite N-phenylphthalimide pyrimidine urea pyridine pyrethroid phthalimide phosphorodithioic acid oxon phenyl urea formamidine sulfonyl urea sulfonyl urea cyclodiene cyclodiene benzene ring conazole triazine thiazolidine carboxamide oxyhydrocarbon triazine metabolite conazole imidazolinone imidazolinone imidazolinone imidazolinone imidazolinone imidazolinone imidazolinone neonicotinyl carbamate dicarboximide dicarboximide organophosphate oxon strobilurin flurodiphenyl ether hexane ring urea phosphorodithioate oxon phenoxy phenoxy acid phenoxy acid
11 11 16 8 10 17 17 10 6 25 25 1 10 16 17 8 1 11 11 16 Single 26 26 5 5 3 4 9 6 21 9 4 19 19 19 19 19 19 19 23 14 6 6 11 11 22 3 5 16 11 11 20 20 20
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Mepanipyrim Metalaxyl Methamidophos Methidathion Methidathion O-analog Methiocarb Methomyl Methoprene Methoxychlor olefin Methoxychlor p,p' Methoxychlor Total Methoxyfenozide Methyl pentachlorophenyl sulfide (MPCPS, metabolite of PCNB) Metolachlor Metolachlor ethanesulfonic acid Metolachlor oxanilic acid Metribuzin Metsulfuron methyl Mevinphos E/Z Myclobutanil Napropamide Naptalam (Alanap) Neburon Nicosulfuron Nitrapyrin Norflurazon Norflurazon desmethyl Omethoate o-Phenylphenol Oryzalin Oxadiazinon Oxadixyl Oxamyl Oxamyl oxime Oxychlordane Oxydemeton methyl Oxydemeton methyl sulfone Oxyfluorfen Parathion ethyl Parathion methyl Parathion methyl O-analog Parathion O-analog Pebulate Pendimethalin Pentachloroaniline (PCA) Pentachlorobenzene (PCB) Permethrin cis Permethrin total Permethrin trans Phenmedipham Phenothrin
C14H13N3 C15H21NO4 C2H8NO2PS C6H11N2O4PS3 C6H11N2O5PS2 C11H15NO2S C5H10N2O2S C19H34O3 C16H14Cl2O2 C16H15Cl3O2 C16H15Cl3O2 C22H28N2O3 C7H3Cl5S C15H22ClNO2 C15H23NO5S C15H21NO4 C8H14N4OS C14H15N5O6S C7H13O6P C9H17NO5 C7H14NO5P C9H11ClN2O C15H17ClN4 C17H21NO2 C18H13NO3 C12H16Cl2N2O C15H18N6O6S C6H3Cl4N C12H9ClF3N3O C11H7ClF3N3O C5H12NO4PS C12H10O C12H18N4O6S C15H18Cl2N2O3 C14H18N2O4 C7H13N3O3S C10H4Cl8O C6H15O4PS2 C6H15O5PS2 C15H11ClF3NO4 C10H14NO5PS C8H10NO5PS C8H10NO6P C10H14NO6P C10H21NOS C13H19N3O4 C6H2Cl5N C6HCl5 C21H20Cl2O3 C21H20Cl2O3 C21H20Cl2O3 C16H16N2O4 C15H17ClN4 C23H26O3
pyrimidine acylalanine phosphoramidothioic acid phosphorodithioate oxon carbamate carbamate oxyhydrocarbon bridged biphenyl bridged biphenyl bridged biphenyl diacylhydrazine benzene ring acetamide chloroacetanilide metabolite chloroacetanilide metabolite triazines sulfonyl urea butenoic acid thiocarbamate triazole amide amide urea sulfonyl urea pyridine pyridazinone pyridazinone phosphorothioate biphenyl dinitroaniline oxadiazon oxazolidine carbamate carbamate cyclodiene organophosphate phosphorothioate diphenyl ether phosphorothionic acid phosphorothionic acid oxon oxon thiocarbamate dinitroaniline aniline benzene ring pyrethroid pyrethroid pyrethroid carbamate pyrethroid
17 18 11 11 11 14 14 21 3 3 3 24 3 6 25 25 9 26 11 15 11 16 4 6 6 16 26 17 17 17 11 3 7 18 18 14 14 5 11 11 3 11 11 11 11 15 7 3 3 8 8 8 14 8
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Julho de 2007
Phenthoate Phorate Phorate O-analog Phorate sulfone Phorate sulfoxide Phosalone Phosalone O-analog Phosmet Phosphamidon Picloram Piperonyl butoxide Pirimicarb Pirimiphos methyl Prallethrin Prochloraz Procymidone Profenofos Prometon Prometryn Pronamide (propyzamide) Propamocarb HCl Propachlor Propachlor oxanilic acid Propanil Propargite Propazine Propetamphos Propham Propiconazole Propoxur Pymetrozine Pyraclostrobin Pyrazon (Chloridazon) Pyridaben Pyrimethanil Pyriproxyfen Quinoxyfen Quintozene (PCNB) Resmethrin S-(2-hydroxy)propyl EPTC Sethoxydim Siduron Simazine Spinosad Spirodiclofen Spiromesifen Sulfentrazone Sulfometuron methyl Sulfotep Sulprofos Sulprofos O-analog Tebuconazole Tebufenozide Tebupirimfos
C12H17O4PS2 C7H17O2PS3 C7H17O3PS2 C7H17O4PS3 C7H17O3PS2 C12H15ClNO4PS2 C12H15ClNO5PS C11H12NO4PS2 C10H19ClNO5P C6H3Cl3N2O2 C19H30O5 C11H18N4O2 C11H20N3O3PS C19H24O3 C15H16Cl3N3O2 C13H11Cl2NO2 C11H15BrClO3PS C10H19N5O C10H19N5S C12H11Cl2NO C9H20N2O2 C11H14ClNO C11H13NO3 C9H9Cl2NO C19H26O4S C9H16ClN5 C10H20NO4PS C10H13NO2 C15H17Cl2N3O2 C11H15NO3 C10H11N5O C19H18ClN3O4 C10H8ClN3O C19H25ClN2OS C12H13N3 C20H19NO3 C15H8Cl2FNO C6Cl5NO2 C22H26O3 C9H19NOS C17H29NO3S C14H20N2O C7H12ClN5 C41H65NO10 C42H67NO10 C21H24Cl2O4 C23H30O4 C11H10Cl2F2N4O3S C15H16N4O5S C8H20O5P2S2 C12H19O2PS3 C12H19O3PS2 C16H23ClN3O C22H28N2O2
organophosphate phosphorodithionic acid oxon sulfone sulfoxide phosphorodithionic acid oxon phosphorodithionic acid dimethyl phosphate carboxylic acid benzodioxole carbamate phosphorothioate pyrethroid imidazole dicarboximide phosphorothioate triazine triazine amide carbamate chloroacetanilide chloroacetanilide metabolite anilide sulfite triazine phosphorothioate carbamate carbamate azomethine strobilurin pyridazinone pyridazinone pyrimidine pyridine pyridine benzene ring pyrethroid thiocarbamate cyclohexene oxime urea triazine antibiotic insecticide tetronic acid tetronic acid triazole sulfonamide sulfonyl urea organophosphate organophosphate oxon conazole diacylhydrazine organophosphate
11 11 11 11 11 11 11 11 11 20 Single 14 11 8 9 6 11 9 9 6 14 6 25 6 Single 9 11 14 4 14 9 22 17 17 17 17 17 3 8 14 Single 16 9 Single 27 27 4 26 11 11 11 4 24 11
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Tebupirimfos O-analog Tebuthiuron Tecnazene Tefluthrin TEPP Terbacil Terbufos Terbufos O-analog Terbufos sulfone Tetrachlorvinphos Tetraconazole Tetradifon Tetrahydrophthalimide (THPI)2 Tetramethrin Thiacloprid Thiabendazole Thiamethoxam Thiazopyr Thifensulfuron Thiobencarb Thiodicarb Thiophanate methyl Tolclofos methyl Tolyfluanid Tralomethrin Triadimefon Triadimenol Triallate Triasulfuron Triazole acetic acid Triazole alanine Trichlorfon (as dichlorvos) Triclopyr Trifloxystrobin Triflumizole Trifluralin Triforine Triticonazole Vernolate Vinclozolin Zoxamide
C13H23N2O3PS C13H23N2O4P C9H16N4OS C6HCl4NO2 C17H14ClF7O2 C9H13ClN2O2 C9H21O2PS3 C9H21O3PS2 C9H21O4PS3 C10H9Cl4O4P C13H11Cl2F4N3O C12H6Cl4O2S C8H9NO2 C19H25NO4 C10H9ClN4S C10H7N3S C8H10ClN5O3S C16H17F5N2O2S C11H11N5O6S2 C12H16ClNOS C10H18N4O4S3 C12H14N4O4S2 C9H11Cl2O3PS C10H13Cl2FN2O2S2 C22H19Br4NO3 C14H16ClN3O2 C14H18ClN3O2 C10H16Cl3NOS C14H16ClN5O5S C4H6N3O2 C5H8N4O2 C4H8Cl3O4P C7H4Cl3NO3 C9H13ClN2O2 C20H19F3N2O4 C15H15ClF3N3O C13H16F3N3O4 C10H14Cl6N4O2 C17H20ClN3O C10H21NOS C12H9Cl2NO3 C14H16Cl3NO2
oxon urea nitrobenzene pyrethroid organophosphate uracil phosphorothioate oxon sulfone chlorethylene phosphate conazole bridged biphenyl phthalimide pyrethroid neonicotinyl benzimidazole neonicotinyl pyridine sulfonyl urea thiocarbamate carbamate carbamate organophosphate phenylsulfamide pyrethroid conazole conazole thiocarbamate sulfonyl urea triazole metabolite triazole metabolite phosphate acetic acid uracil strobilurin conazole dinitroaniline formamide conazole thiocarbamate dichloroanilide benzamide
11 16 3 8 11 16 11 11 11 11 4 3 1 8 23 4 23 17 26 14 14 14 11 Single 8 4 4 14 26 4 4 11 20 16 22 4 7 6 4 14 6 6
* Vide anexo 2
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Julho de 2007 ANEXO 4 PARMETROS QUE DEVEM SER AVALIADOS NO PROCESSO DE VALIDAO METODOLGICA EM DIVERSAS CIRCUNSTNCIAS. (Extrado de: GUIDELINES ON GOOD LABORATORY PRACTICE IN RESIDUE ANALYSIS CAC/GL 40-1993, Rev.1-2003)
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Freqncia Mnima de Calibrao

Freqncia Mnima de recuperao (Ver item 6.7)

R < LD satisfatrio R < LD satisfatrio R > LD insatisfatrio

R < LMR satisfatrio

R > LMR insatisfatrio

GRUPO DA COMMODITY Produtos vegetais I

PROPRIEDADES COMUNS Alta taxa clorofila de gua e

Alta taxa de gua e pouca ou nenhuma taxa de clorofila

ANEXO 3 GRUPOS DE MULTIRESDUOS PARA FRUTAS, LEGUMES E VERDURAS

11 11 11 11 11 11 11 11 11 20 Single 14 11 8 9 6 11 9 9 6 14 6 25 6 Single 9 11 14 4 14 9 22 17 17 17 17 17 3 8 14 Single 16 9 Single 27 27 4 26 11 11 11 4 24 11

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