Sunteți pe pagina 1din 37

Care este numele oficial al genei ABL1?

Numele oficial al acestei gene este "C-ABL oncogene 1, non-receptorilor tirozin kinaza." ABL1 este simbolul oficial al genei.Gena ABL1 este, de asemenea, cunoscut sub alte nume, enumerate mai jos. ABL BCR / ABL c-ABL JTK 7 P150 V-ABL Care este functia normala a genei ABL1? Protooncogenei ABL1 codific o citoplasmatic i nuclear tirozin kinaza proteina care a fost implicata in procesele de diferentiere celulara, diviziunea celulara, adeziunea celulara, i rspunsul la stres. Activitatea de c-Abl de proteine este negativ reglementat de domeniul su SH3, i tergerea domeniului SH3 se transform ntr-o oncogena ABL1.T (9; 22) Rezultatele translocare n fuziune cap-lacoada de BCR (MIM: 151410) i ABL1 gene prezente n multe cazuri de leucemie cronica. MyelogeneousActivitatea ADN-legare a ubiquitously i-a exprimat ABL1 tirozinkinazei este reglementat de CDC2-mediat de fosforilare, sugernd o funcie ciclului celular pentru ABL1.Gena ABL1 este exprimat fie ca un 6 - sau 7-kb transcriere ARNm, cu exonilor alternativ imbinate prima imbinate cu exonilor comune 2-11 ABL1 obiective pentru a mitocondriile, ca raspuns la stresul oxidativ i, prin urmare, mediaz disfuncii mitocondriale i moartea celulelor. ABL1 este, de asemenea, translocat n nucleul n cazul n care aceasta are caracter obligatoriu ADN-activitate i este implicat n ADN-daune de raspuns si apoptoza. Cum sunt schimbri n gena ABL1 referitoare la condiiile de sntate? furnizeaz urmtoarele informaii despre gena ABL1 este implicarea cunoscut sau anticipat n boala la om. Not = O aberaie cromozomial care implic ABL1 este o cauza de leucemie mieloida cronica. Translocatie t (9; 22) (Q34; Q11) cu BCR.Translocaie produce un BCR-ABL, de asemenea, gsite n leucemia acut mieloid (LAM) i leucemie limfoblastic acut (ALL). n cazul n care este gena ABL1 situat? Citogenetic Locul de amplasare: 9q34.1 Locul de amplasare molecular de pe cromozomul 9: perechi de baze 133589267 133763061 la

Gena ABL1 este situat pe lung (q) al cromozomului 9 braul n poziia 34.1. Mai precis, gena ABL1 este situat la pereche de baz 133589267 la pereche de baz 133763061 pe cromozomul 9.

GENA ABL Leucemia mielocitar cronic ( C M L ) , u n t i p s p e c i f i c d e c a n c e r u m a n , b o a l mieloproliferativ clonal se caracterizeaz prin acumularea c e l u l e l o r m i e l o i d e i a precursorilor lor. n stadiul avansat al bolii - criza blastic -, acestea sunt blocate i nu se maidifereniaz, i n consecin boala fiind invariabil fatal. CML este caracterizat de o translocaie specific t(9; 22) (q34; q11) a genei c-abl de pe braul lung al cromosomului 9 lapunctul de rupere din regiunea bcr de pe cromosomul 22. Translocaia duce la formareaunei oncogene himerice de fuziune - bcr-abl - care produce alternativ oncoproteinele de fuziune de 210kD i respectiv de 190kD, proteinkinaze anormale. Aceast translocaie esteprezent la 95% pacieni cu CML i la un subset semnificativ de leucemii acute n speciallimfoide. Deci, aceast rearanjare cromosomial conduce la fuziunea genelor bcr cu abl, care codific mRNA bcrabl specific leucemiei n care apare cromosomul Ph+(1,2).Gena ABL a fost descoperit de Abelson n virusul Ab-MuLV care produce la oarecilimfomul celulelor pre-B i plasmocitom. n acest caz boala este declanat de gena v-abl(care se considera gena c- abl transdus n genomul viral) n asociere cu un rest din gena gag. Gena hibrid gag-abl codific o protein de 136,6kD, fiind o tirozin kinaz specific cucapacitatea de a se autofosforila, dar i de a fosforila cteva proteine celulare (3).Pentru determinarea secvenelor codificante ale protooncogenelor c-abl de la om ioareci s-au investigat clone de DNA celular obinute din liniile celulare leucemice T umane,C C R F - C E M i d i n l i n i a c e l u l a r p r e B d e o a r e c i 7 0 Z / 3 . S e c v e n i e r e a D N A l a o m evideniaz un ORF D N A c a r e c o d i f i c 9 0 6 a m i n o a c i z i i a r l a o a r e c e c o d i f i c 8 9 6 aminoaciz i. Secvenierea relev c v-abl este o form trunchiat a c-abl murin. Secvenelenucleotide v-abl sunt identice cu cele ale lui c-abl murin, iar secvenele de la om arat numaic i n c i s c h i m b r i n a m i n o a c i z i i l u i v - a b l . C e l e m a i m u l t e s e c v e n e c a r e s - a u p i e r d u t n procesul generrii lui v-abl sunt cele de la captul C-terminal(4).A-MuLV este un retrovirus transformant acut care vizeaz att in vivo ct i in vitrolinia B timpurie. Proteina sa transformant, v-Abl, este o tirozin kinaz nrudit cu v-src ic o n i n e u n d o m e n i u C t e r m i n a l e x t i n s . M u t a n t e n p o r i u n e a C - t e r m i n a l a m o l e c u l e i , blocheaz transformarea n stadiul pre-B, fr ns a afecta transformarea

fibroblastelor.P r o t e i n a v - A b l t r u n c h i a t l a C - t e r m i n a l ( p 9 0 ) t i p s l b a t i c a r e a b i l i t a t e a d e a tr ansforma celulele de oarece p53 ( -/-). Absena p53 crete susceptibilitatea celulelor m d u v e i o s o a s e d e a f i t r a n s f o r m a t e d e v - A b l . o a r e c i i c u d e f i c i e n e p 5 3 a u t u m o r i (limfoame pre-B) care apartimpuriu iar timpul de supravieuire scade dup infectarea cu A-MuLV.Astfel, cile dependente de p53 inhib transformarea de ctre v-Abl dar nu intervin ntransformarea potenial a pre-B. v-Abl (p90) transform ns foarte eficient limfocitelepre-Bla oarecii lipsii de p53, de unde concluzia c C -terminal al v-Abl nu determin tropism pentru celulele preB (5).T r a n s f o r m a r e a c e l u l e l o r p r e - B d e c t r e A b M u L V i m p l i c u n e c h i l i b r u n t r e semnalele pozitive care stimuleaz creterea indus de o ncoproteina v- Abl i reglarea n e g a t i v a g e n e l o r c e l u l a r e . A c e s t e p r o c e s e a p a r p r i n s e l e c i a c l o n a l d i n t i m p u l transformrii mediate in vitro i in vivo de Ab MuLV. Aproximativ 50% din celulele pre -Btransformate de Ab-MuLV exprim forme mutante ale p53 sugernd c aceasta poate jucaun rol important n procesul transformrii. 9q34.12 Leucemie, cromozom Philadelphia pozitiv 189980 Abelson murine LEUCEMIE omologul oncogenei VIRAL 1; ABL1

Titluri alternative; simboluri GENE TRANSFORMARE: ABL oncogene STRAIN DE Abelson virusul leucemiei murine; ABL

Alte entiti reprezentate n aceast intrare: ABL1/BCR genei de fuziune, INCLUS ABL1/NUP214 genei de fuziune, INCLUS

HGNC aprobat Simbol Gene: ABL1

Citogenetic locatie: 9q34.12 Coordonate genomice (GRCh37): 9:133,589,267 - 133763061 (de la NCBI)

Fenotip Gene Relaii

Locul de amplasare Fenotip Fenotip MIM numr 9q34.12 Leucemie, cromozom Philadelphia pozitiv, rezistente la imatinib

TEXT Descriere Protooncogenei ABL1 codific o citoplasmatic i nuclear tirozin kinaza proteina care a fost implicata in procesele de diferentiere celulara, diviziunea celulara, adeziunea celulara, i rspunsul la stres. Modificri ale ABL1 prin rearanjarea cromozomiale sau plumb transducia virale la transformarea maligna, la fel ca n leucemia mieloid cronic (LMC; 608232) (rezumat prin Barila i Superti-Furga, 1998).

Clonarea 145-kD proteine ABL este o tirozin kinaz nonreceptor. Gena ABL este exprimat fie ca un 6 sau 7-kb transcript mARN bazat pe exonilor alternativ imbinate primul. Cnd regiunea Nterminal a proteinei ABL este codificat de exonul 1a (ABL1A), proteina este considerat a fi localizate n nucleu, n timp ce atunci cnd codificata de exon 1b (ABL1B), rezult N -terminal de glicin ar fi myristylated i astfel postulat pentru a direciona c de proteine pentru a membranei plasmatice (a se vedea comentariul de Chissoe et al, 1995.).

Gene Structura Gena ABL conine 2 exonilor, alternativ, imbinate, exonilor 1A i 1B, imbinate cu exonilor comune 2-11. 1b exon este de aproximativ 200 KB 5-prim de exon 1a (Shtivelman et al., 1986).

Chissoe et al. (1995) esalonate gena BCR complete i mai mare de 80% din genei ABL. Au fost incluse exonilor comune ABL 2-11 i exonilor alternative ABL prima, precum si o gena roman pentru a 5-prim exon ABL prima i a unui cadru de citire deschis cu omologie cu o EST n cadrul intron patra BCR. Una dintre observaiile cele mai izbitoare din analiza BCR i regiunile ABL gena a fost densitatea lor extrem de mare, 38.83 i 39.35%, respectiv, de Alu omoloage regiunilor. Acest rezultat a contrastat cu nivelul de 4% calculat anterior, care a fost bazat pe estimri ale aproximativ 500.000 de elemente Alu in genomul uman.

Maparea

Heisterkamp et al. (1982) atribuit omologul uman celulare din tulpina de virus Abelson leucemiei murine la cromozomul 9. Goff et al. (1982) cartografiat omologul mouse-ului pe cromozomul 2, care poart omologie a altor synteny la nivelul cromozomului 9. (Strict vorbind, "murin" se refer la Muridae familie de roztoare, care include att la obolani i oareci Prin practic obinuit, cu toate acestea, termenul este folosit aproape exclusiv pentru soareci.). Prin hibridizare in situ, Trakhtenbrot et al. (1990) au artat c murine c -abl oncogena pe cromozomul 2 se afl mai aproape de centromere dect de obicei eliminat n regiunea radiatii induse de leucemii mieloide murine.

Prin hibridizare in situ, Jhanwar et al. (1984) atribuit genei ABL la 9q34.1, care se afl la punct de ntrerupere pe cromozomul 9, care d natere la cromozomul Philadelphia.

Gene Funcia Activitatea ADN-legare a ABL este reglementat de CDC2-mediat de fosforilare (116940), sugernd o funcie ciclului celular pentru ABL (Kipreos i Wang, (1990, 1992)).

Welch i Wang (1993) au artat c activitatea tirozin kinaza al ABL nucleare este reglementat n ciclul celular, printr-o interaciune specific cu RB1 (614041). Un domeniu n terminus C din RB1 se leag de lobul legare a ATP-a tirozin kinaza ABL, rezultnd n inhibarea kinazei. Interaciunea RB1-ABL nu este afectat de oncoproteins virale care se leaga de RB1. Hyperphosphorylation de RB1 coreleaza cu eliberare de ABL i activarea tirozin kinaza in celulele faz S. Kinaza nuclear tirozin ABL poate mbunti transcriere, iar aceast activitate este inhibat de RB1. Astfel, nucleare ABL este o faza S-activat tirozin kinaza care ar putea participa direct la reglarea transcrierii.

Feller et al. (1994) a descris domeniile omologie SRC SH2 SH3 i ca adezivi moleculare pe multe proteine implicate n transducia semnalului. Acetia au examinat interaciunile ABL i CRK (164762), ca un model de SH2 SH3 i interaciune. Barila i Superti-Furga (1998) a prezentat dovezi privind o interaciune inhibitorie intramoleculara a domeniului SH3 cu domeniu catalitic i cu linker ntre domeniul SH2 i catalitic. Site-regizat mutatii in fiecare din aceste 3 elemente activate c-Abl. Mutatiile in linker-ul a determinat o schimbare conformationala a moleculei i a crescut de legare a domeniului SH3 a liganzilor peptide. Mutaie individual a 2 reziduurilor practicate n domeniul SH3 i catalitic activat c-Abl, n timp ce inhibarea a fost restaurat n mutant reciproc dublu. Barila i Superti-Furga (1998) a propus ca autoritile de reglementare ale c-Abl va avea efecte opuse asupra activitii sale, n funcie de capacitatea lor de a favoriza sau perturba aceste interaciuni intramoleculare.

Utilizarea experimente de concuren, Han et al. (1997) a demonstrat legarea specific a regiunii prolin-bogat de RIN1 (605965), un inhibitor RAS, pentru domeniul SH3 al ABL. Prin coimmunoprecipitations i testele kinazei, au demonstrat c la sfritul N-terminal al RIN1 este fosforilat de ctre ABL in vitro.

Gong et al. (1999) a demonstrat c valoarea P73 proteine (601990) este n mod normal crescut n celulele tratate cu cisplatin agentul chimioterapic de cancer. Cu toate acestea, aceast inducerea p73 nu a fost vzut n celulele incapabile s efectueze reparaii nepotrivire i n care enzima nuclear, c-Abl tirozinkinazei nu a fost activat de cisplatin. Timpul de njumtire al P73 a fost prelungit cu cisplatin i prin coexpresia cu c-Abl kinazei tirozina. Funcia apoptozainductoare de P73 a fost, de asemenea, mbuntit prin kinazei c -Abl. Fibroblaste de embrioni de oarece cu deficit de reparaii sau n neconcordan c-Abl nu a upregulate p73 si au fost mult mai rezistente la uciderea de cisplatin. Gong et al. (1999) a concluzionat c c -Abl i P73 sunt componente ale unei nepotriviri cale apoptoza reparare-dependente, care contribuie la cisplatin induse de citotoxicitate. Agami et al. (1999) a demonstrat c activitatea apoptotic al p73-alfa necesit prezena funcionale, kinaza-C-ABL competent. n plus, P73 i c-Abl de asociere este mediat de un motiv PxxP n P73 i domeniul SH3 al c-Abl. Agami et al. (1999) a constatat c P73 este un substrat al kinazei c-Abl i c abilitatea de c-Abl a fosforila P73 este semnificativ crescut de gamma-iradiere. Mai mult dect att, p73 a fost fosforilat in vivo ca rspuns la radiaii ionizante. Aceste constatari definesc o cale de semnalizare proapoptotici implic p73 i c-ABL. Yuan et al. (1999) a demonstrat c c-Abl se leaga de p73 n celulele, care interacioneaz prin intermediul domeniul su SH3 cu domeniul homooligomerization C terminal al P73. c-Abl fosforilate P73 pe un reziduu de tirozin la poziia 99, att in vitro ct i n celulele care au fost expuse la radiatii ionizante. Yuan et al. (1999) a concluzionat c c -Abl stimuleaza P73-mediate transactivation si apoptoza. Acest regulament a p73 de c-Abl, ca raspuns la deteriorarea ADN-ului a fost, de asemenea, demonstrat de un eec de radiaii ionizante-induse de apoptoza dup ntreruperea c-Abl-P73 interaciune.

Folosind o drojdie 2-hibrid ecran, Cong et al. (2000) a identificat PSTPIP1 (606347), ca o proteina ABL-interactie. PSTPIP1 au fost identificate iniial ca o proteina din fosfatazele PEST -tip tirozin proteine (PTA, de exemplu, PTP-PEST; 600079) de ctre Spencer et al. (1997). Cong et al. (2000) a artat c a fost PSTPIP1 fosforilate de ctre ABL. Factorul de cretere indus de fosforilare PSTPIP1 a fost diminuat n fibroblastele ABL nule. PSTPIP1 a fost capabil s elimine ABL la PTA PEST-tip. Mai multe experimente sugerat c PTA PEST-tip reglementa negativ activitatea ABL: ABL a fost hyperphosphorylated n PTP-PEST-deficit de celule, perturbarea complexului ABL-PSTPIP1-PEST-tip ternar PTP prin exces de mutanti a crescut ABL coninut fosfotirozinei i PDGF ( a se vedea 190040) induse de activare ABL kinazei a fost prelungit n PTP-PEST-deficit de celule. Autorii au concluzionat ca defosforilarea de ABL de PSTPIP1-regizat PEST-tip PTA reprezinta un mecanism nou prin care activitatea este reglementat ABL.

Pluk et al. (2002) a raportat inhibarea activitii catalitice a purificat ABL in vitro, care s demonstreze c reglementarea este o proprietate intrinsec a moleculei. Ei au aratat ca interactiunea N-terminale 80 reziduuri, cu restul de autoreglare proteine mediaz. "Capac" Aceast N-terminal este necesar pentru a atinge i menine inhibarea, iar pierderea ei se transform ntr-o proteina ABL oncogene i contribuie la dereglementarea al BCR-ABL.

n musculare mouse-ul i cultura de celule myotube, Finn et al. (2003) au artat c Abl1 i Abl2 (164690) sunt concentrate la nivelul jonciunii neuromusculare postsinaptic i sunt mediatori de receptori acetilcolina postsinaptic (AChR) n aval de grupare a agrin (103320) i mosc (601296) de semnalizare. Autorii au sugerat c kinaze Abl influena molecule de citoscheletice reglementare important pentru asamblarea synapse si remodelare.

Schindler et al. (2000) a raportat structura de cristal a domeniului catalitica a ABL, complexat la o variant de STI571, un inhibitor mic-molecula de ABL, care este eficace n tratamentul de leucemie mieloida cronica. Critice la legarea STI571 este adoptarea de ctre kinazei unei conformaie inactiv, n care o "bucl de activare" central nu este fosforilat. Conformaie de aceast bucl este diferit de cea din proteinkinaze active, precum i n form inactiv de kinaze SRC strns legate. Schindler et al. (2000) a concluzionat c compusi care exploateaz mecanismele de inactivare distinctive ale proteinkinaze individuale pot realiza att afinitate i specificitate mare de mare.

Hantschel et al. (2003) a constatat c varianta ABL1B este activat de liganzi fosfotirozinei. Ligand-activat ABL a fost deosebit de sensibil la inhibitor de tirozin kinaza STI571 (imatinib). Autorii au aratat ca SH2 domeniu-fosforilate interaciune coada n kinaze SRC, fun ctional, este nlocuit n ABL cu un angajament intramoleculara a modificrii N-terminal myristoyl cu domeniul kinazei. Studiile functionale cuplate cu analiza structural a definit un comutator myristoyl / fosfotirozinei ABL care reglementeaza andocare i accesibilitatea domeniului SH2. Hantschel et al. (2003) a concluzionat c acest mecanism ofer o explicaie pentru activarea celulare observate de ABL de proteine fosforilate-tyrosine i pentru mobilitatea intracelular al ABL, i ofer perspective n mecanismul de aciune al STI571.

Nagar et al. (2003) a studiat structurile cristaline ale ABL care au artat c N -terminal modificarea myristoyl de ABL1B se leag de domeniul kinazei i induce modificri conformaionale care permit SH2 SH3 i domenii pentru a andoca pe ea. Autoinhibited ABL format o adunare care a fost similar cu cea a kinaze SRC inactive, dar cu diferente specifice, care explica capacitatea difereniat a STI571 de a inhiba activitatea catalitic a ABL, dar nu c a SRC.

Prin analiza coimmunoprecipitation a spermei umane normale, Musset et al. (2012) a detectat un complex de proteine format din NADPH oxidazei-5 (NOX5, 606572), forma activat de ABL, precum i canalul de protoni HV1 (HVCN1; 611227). Analiza imunohistochimica a relevat localizarea exact a 3 proteinele din sperma flagel, gt, i regiunile Acrozom. Mobilizarea de calciu sau expunerea de spermatozoizi la esteri phorbol sau H2O2 a dus la producerea anionului superoxid, care a fost blocat de adugarea de superoxid dismutaza (SOD1 , 147450), inhibarea farmacologice de NOX, sau Ca (2 +) de chelare. H2O2 expunere mbuntit, de asemenea, motilitatea spermatozoizilor ntr-un mod dependent de NOX5. n NOX5-exprimarea celule K562, doborare a HV1 produciei abrogat superoxid H2O2-dependente. Musset et al. (2012) a concluzionat c complexul NOX5-ABL-HV1 are un rol major n producerea de specii reactive de oxigen necesare pentru motilitatea spermatozoizilor n.

Caracteristici biochimice

Hantschel et al. (2005) determinat rezonan magnetic nuclear (RMN), structura domeniului F-actina-legare (FABD) din ABL. FABD formeaz un pachet compact de 4 helices alfa antiparalel, care sunt aranjate ntr-o topologie stngaci n soluie. Semnalul presupuse de export nucleare gsit n aceast regiune face parte din nucleul hidrofob i este nefunctional in proteine intacte. Helix alfa-III conine reziduuri critice responsabile pentru F-actin asociere obligatorii, i cytoskeletal. Hantschel et al. (2005) a concluzionat c aceste interaciuni reprezint un factor determinant major att pentru BCR-ABL i c-ABL localizare.

ABL / BCR Fusion Gene

A t (9; 22) translocatie apare la mai mult de 90% de leucemie myelogeneous cronic (LMC, 608232), 25 la 30% din aduli i 2 la 10% din copilrie leucemie limfoblastic acut (ALL, 613065), precum i cazuri rare de acut mieloid leucemie. Rezultatele translocare n fuziune cap-la-coada de BCR (151410) i genele ABL (a se vedea comentariul de Chissoe et al, 1995.).

De Klein et al. (1982) a demonstrat ca gena ABL este translocat din cromozomul 9 la cromozomul 22 n formarea cromozom Philadelphia. Acest lucru a indicat faptul c este translocaie reciproc i a sugerat un rol pentru gena ABL n generarea de LMC. Collins i Groudine (1983) a artat amplificarea secvenelor ABL cu aproximativ 4 - a 8-ori in K-562, un cromozom Philadelphia pozitiv-celule derivate de la un pacient cu LMC n criz de sablare. n plus, lambda lan genele imunoglobulinei uoare s-au amplificat n K-562, dar genele kappa nu au aratat nici amplificare. ntruct n limfomul Burkitt de t (8; 22) tastai genele lambda lan de lumin sunt translocat la cromozomul 8, ele rmn pe cromozomul 22 (de exemplu, pe

cromozomul Philadelphia), n LGC (Selden et al, 1983.). Heisterkamp et al. (1983) a const atat c, n breakpoint 9q n LMC este la numai 14 kb amonte de la nceputul oncogenei ABL. Konopka et al. (1985) a prezentat dovezi c translocarea oncogenei ABL n Ph1-pozitive LMC n crearea unei gene care conduce la producerea himeric al unei proteine anormale cu Abl de activitatea tirozin kinaza. Konopka et al. (1985) a sugerat ca aceasta proteina joaca, probabil, un rol-cheie n transformarea maligna. Leucemie acuta nonlimfocitara asociate cu T (6; 9) (P23, Q34) nu este nsoit de alterarea oncogenei ABL (Westbrook et al, 1985.), n ciuda aceeai locaie de punct de control la 9q34 i asocierea frecvent cu bazofilie ca n LMC.

n aproximativ 10% dintre pacienii cu leucemie limfocitar acut, pacienii transporta un 9, 22 translocaie citogenetic imposibil de distins de cromozomul Philadelphia a LMC. Clark et al. (1986) a demonstrat, totui, c cromozom Philadelphia pozitiv toate celulele exprima unice ABL-derivate kinazici tirozin de 185 i 180 kD, care sunt diferite de BCR, ABL-P210 derivate de proteine de LMC. Kurzrock et al. (1987) a gsit un nou produs Abl de proteine n cromozom Philadelphia pozitiv-leucemie acuta limfoblastica. Ei au sugerat c mecanismele alternative de activare a Abl exist i c un mecanism diferit poate fi aplicat n u mane leucemie limfoida acuta, spre deosebire de mieloide.

Saint Bernard et al. (1987) au artat prin electroforez n impulsuri gel de cmp (PFGE) c un exon 5-prim al genei ABL se afl cel puin 300 kb amonte a exonilor ABL rmase. INTRON foarte lung este o int pentru translocations n leucemia mieloid cronic. ntruct n leucemie mieloida cronica gena ABL este translocat din cromozomul 9 la centrul genei BCR de pe cromozomul 22 pentru a produce un himeric BCR-ABL ARN traduse intr-o proteina de greutate molecular 210 kD, Fainstein et al. (1987) a constatat c, n leucemie limfocitara acuta, ABL este translocat n regiunea 5-prim al genei BCR. Consecin a acestui fapt este expresia unei transcriere topit n care exon prima BCR este legat de exon ABL secunde. Aceasta transcriere codifica o kinazei 190-kD proteine.

Prin RT / PCR, Melo et al. (1993) a detectat ABL-BCR ARNm in celulele de la 31 din 44 pacieni BCR-ABL pozitive LMC i n 3 din 5 linii de celule LMC. Astfel, la multi pacienti cu LMC, 2 gene de fuziune reciproce sunt exprimate. Din cele 34 de probe pozitive, 31 au avut clasic t (9; 22) (Q34; Q11) translocaii; n 3 probe, nu s-au Philadelphia i / sau cromozomi 9Q +.

Melo et al. (1994) a concluzionat c gena normala ABL nu este imprimat i a citat dovezi rezolvarea problemei imprimarea a genei BCR in favoarea nonimprinting. Ei au simit c datele lor ABL i a datelor publicate BCR exclus posibilitatea unei prtinire pentru creterea copilului n originea Philadelphia (Ph) cromozomilor i observaiile menionate sugereaz c exist, de fapt, nici o implicare preferenial al BCR materne sau paterne alele ABL n formarea genei de fuziune

BCR-ABL cu pH-pozitive pacientii cu LMC, n contradicie aparent a probelor citogenetic raportate (Haas et al., 1992).

Chissoe et al. (1995) au analizat 4 noi puncte de ntrerupere Philadelphia cromozomiale translocare de la pacienti cronice leucemie mieloida i mai multe puncte de ntrerupere a altor anterior esalonate, dar nu s-au gsit caracteristici consistente breakpoint. Nici un mecanism clar pentru translocatie cromozomiale Philadelphia a fost evident.

Arico et al. (2000) a analizat dosarele medicale a 326 copii si adulti tineri, cu LLA Ph-pozitiv, toate la varste cuprinse 0.4 - 19.9 ani (mediana 8.1,). Spre deosebire de tipul obinuit de ALL, Ph-pozitiv de cazuri au un prognostic saraci. Autorii au constatat ca transplantul de maduva osoasa de la un donator inrudit HLA-potrivire este superior altor tipuri de transplant i de la chimioterapie intensiva singur n prelungirea remisii iniiale complete.

Zhao et al. (2009) a demonstrat c pierderea de netezite (SMO, 601500), o component esenial a calea de arici (a se vedea 600725), afecteaza hematopoietice rennoirea celulelor stem i scade inducerea LMC de BCR-ABL1 oncoprotein. Pierderea de SMO cauzeaz epuizare a celulelor stem LMC, care propag leucemie, ntruct constitutiv activ SMO mareste numarul de celule stem LMC si accelereaza boala. Ca un posibil mecanism de aciune SMO, Zhao et al. (2009) au artat c soarta determinant celula Numb (603728), care epuizeaza CML celule stem, este crescut n absena activitii SMO. n plus, inhibarea farmacologice de arici de semnalizare afecteaza nu numai de propagare a LMC condus de wildtype BCR-ABL1, dar, de asemenea, o cretere de imatinib rezistente la mouse-ul si umane LMC. Zhao et al. (2009) a concluzionat c activitatea de arici cale este necesar pentru ntreinerea celulelor stem normale i neoplazice ale sistemului hematopoietic i a ridicat posibilitatea ca rezistenta la medicamente i recurena bolii asociate cu tratamentul cu imatinib a LMC ar putea fi evitate prin orientarea aceast esenial de ntreinere de celule stem cale .

Rezistena de Bcr-Abl pozitive celule stem leucemice (LSCs) la tratamentul cu imatinib la pacienii cu leucemie mieloid cronic (LMC; 608232) poate provoca recidiva a bolii i ar putea fi de origine pentru emergente de droguri rezistente clone. Dierks et al. (2008) a identificat SMO ca o tinta de droguri in Bcr-Abl pozitive LSCs. Ei au aratat ca Hedgehog de semnalizare este activat in LSCs prin upregulation de SMO. n timp ce nulitatea pentru SMO nu afecteaz pe termen lung reconstituirea hematopoiesis regulate, dezvoltarea de retransplantable Bcr-Abl pozitive leucemii a fost abolit n absena SMO de exprimare. Farmacologic inhibarea SMO redus LSCs n timp vivo i consolidat pentru a recadere dupa terminarea tratamentului. Dierks et al. (2008) a postulat c inhibarea SMO ar putea fi o strategie de tratament eficient pentru reducerea piscina LSC n LMC.

Utilizarea xenografting i ADN-ul copie numrul de alterare (CNA) de profile de om BCR-ABL1 leucemie limfoblastic, Notta et al. (2011) a demonstrat c diversitatea genetic se produce n funcional definite de leucemie-initierea celule i c multe probe de diagnostic pacient conine mai multe genetic distincte leucemie-iniiatoare subclonele celule. Reconstruirea strmoi subclonal genetice din mai multe probe de profilare CNA a demonstrat un model de ramificare evolutia cifrei de multiclonal leukemogenesis, mai degrab dect o succesiune liniar. Pentru unele probe pacient, de xenogrefe predominante clona de diagnostic repopulat, n timp ce n altele a fost outcompeted de subclonele minore. Reconstituire cu clona diagnosticul predominant a fost asociat cu proprieti de cretere mult mai agresive n xenogrefe, tergerea CDKN2A (600160) i CDKN2B (600431), i o tendin de rezultatul pacient mai sarace. Notta et al. (2011) a concluzionat ca descoperirile lor legate diversitate clonal cu leucemie-initierea functiei celulelor i a subliniat importana dezvoltrii de terapii care eradica toate subclonele intratumorale.

Inhibitori de tirozin kinazei

Deoarece activitatea tirozin kinaza este esenial pentru funcia de transformar e a BCR-ABL, Druker et al. (2001) au motivat ca un inhibitor al kinazei poate fi un tratament eficient pentru LMC. Ei au descoperit c tirozin kinaza inhibitor de STI571 a fost bine tolerat i a avut o activitate semnificativ antileucemice la pacienii cu LMC n care tratamentul cu chimioterapia standard au euat. Aceast experien a demonstrat potential pentru dezvoltarea de medicamente anticanceroase pe baza prezentei moleculare specifice anomalie ntr-un cancer uman.

Druker et al. (2001) a constatat c STI571 a fost bine tolerat i a avut o activitate substanial n crizele explozie de LMC i n cromozom Philadelphia pozitiv-leucemie acuta limfoblastica. Rspunsul a fost mai puin satisfctoare n grupul ALL. Goldman i Melo (2001), de asemenea, ilustrat modul probabil de aciune al STI571.

Imatinib (Gleevec, Novartis, Basel, Elveia), denumite anterior ca STI571, a fost aprobat de Food and Drug Administration mai 2001 pentru tratamentul LMC, care este refractar la terapia cu interferon i n februarie 2002 pentru tratamentul tumorilor stromale gastro-intestinale (606764), care pot fi cauzate de mutatii ale genei KIT (164,920) (Savage i Antman, 2002). n ambele cazuri, agentul funcioneaz ca un inhibitor de tirozin kinaze specifice de proteine.

ABL/NUP214 Fusion Gene

n T-celule leucemie limfoblastic acut (ALL-T; a se vedea 613065), factori de transcriere sunt cunoscute a fi liberalizat de translocations cromozomiale, dar mutatii in kinazici tirozin proteine au doar rareori fost identificate. Graux et al. (2004) a descris extracromozomial (episomal) amplificarea ABL1 n 5 din 90 (5,6%), persoanelor fizice cu T-ALL. Aberaie nu a fost detectabil de citogenetica convenionale, episomes astfel de elemente fiind submicroscopic extracromozomial (Maurer, et al., 1987). Amplificarea extracromozomial de oncogene, de asemenea, a fost observat la dublu minute (Demin) cromozomi, care sunt vizibile de citogenetica standard (Hahn, 1993). Analizele moleculare delimitate ampliconului ca o regiune de 500 kb de la 9q34 band, care conine oncogene ABL1 i NUP214 (114350). Graux et al. (2004) a raportat un mecanism anterior undescribed pentru activarea kinazici tirozin in cancerul: formarea de episomes care rezult ntr-o fuziune ntre ABL1 i NUP214. Ei au detectat-verbal ABL1/NUP214 n 5 indivizi cu amplificare ABL1, n 5 din 85 (5,8%), alte persoane cu T-ALL, i n 3 din 22 T-ALL linii celulare. Constitutiv fosforilate tirozin-kinaz ABL1/NUP214 sa dovedit a fi sensibil la imatinib inhibitor de tirozin kinaz. Recurente criptic ABL1/NUP214 de reorganizare a fost considerat a fi asociat cu expresia crescut de HOX11 (186770) i HOX11L2 (604,640) i de tergere a CDKN2A (600160), n concordan cu o patogeneza mai multe etape de T-ALL.

Citogenetic Eliminri mari de pe cromozomul derivat 9 (9q +) au fost gsite n cazuri de translocaie Philadelphia. Huntly et al. (2001) realizat studii pentru a determina dac eliminrile apar n timpul progresia bolii sau la momentul de translocaie originale. Fluorescen n anal iza hibridizare in situ a fost utilizat pentru a evalua starea eliminarea de 253 pacieni cu LMC. Ei au descoperit c frecvena de tergeri a fost similar la diagnostic i dup progresia bolii, dar a fost semnificativ crescut la pacienii cu varianta translocations Ph. La pacienii cu un text eliminat, toate cromozom Philadelphia pozitiv metafaze efectuate tergerea. Starea Eliminarea preau s aib o semnificaie prognostic deoarece supravieuirea median a pacienilor cu i fr eliminri a fost de 38 luni si 88 luni, respectiv (p = 0,0001).

Genetica Moleculara Rezistena la inhibitori de tirozin kinazei

Studiile clinice cu inhibitor de tirozin kinaza ABL in LMC STI571 demonstrat c muli pacieni cu boal n stadiu avansat rspund iniial, dar apoi recidiva. Prin analize biochimice i moleculare a materialului clinic, Gorre et al. (2001) a constatat c rezistenta la medicamente a fost asociat

cu o reactivare a transductie de semnal BCR-ABL, n toate cazurile examinate. n 6 din 9 pacieni, rezistena a fost asociat cu o substituie unic de aminoacizi intr-un reziduu treonin a domeniului kinazei ABL cunoscut pentru a forma o legtur de hidrogen critic cu droguri (T315I; 189980.0001). Aceast substituire a fost suficient pentru a conferi rezistenta STI571 ntr-un experiment de reconstituire. n 3 pacieni, rezistena a fost asociat cu amplificarea progresiv gena BCR-ABL. Gorre et al. (2001) a concluzionat c studiile lor, cu condiia dovezi c cancer genetic complexe pstra dependena de un eveniment oncogen iniial i propune o strategie pentru identificarea inhibitori de STI571 rezisten.

Von Bubnoff et al. (2002) a identificat 5 mutatii punctiforme distincte n domeniul kinazei BCRABL (a se vedea, de exemplu, 189980.0002-189980.0004), n 7 din 8 pacieni rezistente la STI571 care au fost Ph-pozitiv si au avut fie LMC sau ALL. n acest studiu prospectiv, analiza a fost efectuat nainte de tratamentul cu STI571 i n momentul de recidiv.

Roche-Lestienne et al. (2002) au artat c, n unele cazuri de rezisten STI571, mutatii ABL (a se vedea, de exemplu, 189980.0005; 189980.0006) a luat natere nainte de tratamentul medicamentos, probabil ca evenimentele secundare mutaii n timpul cursului de LMC. Terapia de droguri poate avea ca rezultat, n selecia clonal.

Azam et al. (2003) a declarat c a etapelor genei BCR-ABL la pacienii care au recidivat dup chimioterapie STI571 dezvluit un set limitat de mutatii domeniu kinazei care mediaza rezistenta la medicamente. Pentru a obine un studiu mult mai cuprinztoare a substituiilor de aminoacizi, care confer rezisten STI571, au efectuat un ecran n mod aleatoriu in vitro a mutagenized BCR-ABL i a recuperat toate mutaii majore identificate anterior la pacienii i multe altele, care iluminate mecanisme noi de rezistenta la medicamente achiziionate. Modelarea structural a sugerat c o clasa noua de variante acioneaz allosterically s destabilizeze conformaie autoinhibited de kinaza ABL, la care STI571 preferential se leaga. Autorii au concluzionat c aceast strategie de screening este o paradigm aplicabil la o list tot mai mare de int-ndreptate mpotriva cancerului ageni i ofer un mijloc de a anticipa substituiilor rezistente la medicamente de aminoacizi, care sunt susceptibile de a fi punct de vedere clinic problematic.

Goldman i Melo (2003) intabulat 19 mutatii care au fost gsite n asociere cu rezisten la imatinib la pacienii cu LMC si cromozom Philadelphia pozitiv-leucemie acuta limfoblastica. Ei au dat, de asemenea, mecanismul propus de rezisten, n cazul fiecrui mutaie (a se vedea, de exemplu, 189980.0004-189980.0005).

Transformarea LMC la ALL

Cromozom Philadelphia este definitorie a leziunii leucemie mieloid cronic i un subset de leucemie acuta limfoblastica. Pentru a defini leziuni oncogene care coopereaz cu BCR-ABL1 a induce ALL, Mullighan et al. (2008) a efectuat o analiz genomewide de probe de diagnostic leucemie de la 304 persoane fizice cu toi, inclusiv 43 BCR-ABL 1 B-progenitoare Alls i 23 de cazuri de LGC. IKZF1, codificarea Ikaros factor de transcriere (603023), a fost eliminat n 83,7% din BCR-ABL1 ALL, dar nu i n LMC n faz cronic. Eliminarea IKZF1 a fost, de asemenea, identificat ca fiind o leziune dobndite la momentul de transformare a LMC la ALL (criz blastic limfoid). Cele IKZF1 stergeri a dus la haploinsufficiency, expresie a unei dominante-negativ Ikaros izoenzimei, sau pierderea completa a expresiei Ikaros. Valorile critice a etapelor de tergere IKZF1 sugerat c aberante LAR-mediate de recombinare (a se vedea 179615) este responsabil pentru tergeri. Mullighan et al. (2008) a concluzionat c leziunile genetice care rezult n pierderea functiei Ikaros este un eveniment important n dezvoltarea BCR -ABL1 ALL.

Model de animal Scott et al. (1991) au artat c la soareci gena ABL poate provoca o malignitate hematologic similar, dar cu diferene de la care a cauzat de BCR / ABL gena de fuziune.

Tybulewicz et al. (1991) i Schwartzberg et al. (1991) a constatat ca la soareci transgenici o perturbate c-ABL gena, atunci cnd homozigot, a dus la moartea runting i 1 sau 2 saptamani dupa nastere. Muli au aratat atrofia timusului i splenic i un limfopenie T -i B-celule. Muli au artat deschiderea prematur a ochilor, care au fost lezate i progresiv opacifiat, iar capul a fost scurtate (Schwartzberg et al., 1991).

ABL tirozin-kinaz nonreceptor este implicat n multe aspecte ale dezvoltrii mamifere. Acesta este larg exprimat, i niveluri ridicate se gsesc n cartilaj hialin n esut osos adult, la soareci nou-nascuti, si osteoblastilor si neovaselor asociate la site-uri de osificare endochondral la ft. Mouse-uri homozigote pentru mutatii in gena ABL ecran creterea mortalitii perinatale, reducerea fertilitii, scurtate, cranii, i defecte n maturare a celulelor B n mduva osoas (Schwartzberg et al, 1991;.. Tybulewicz et al, 1991). Li et al. (2000) a demonstrat c Abl - / soareci sunt, de asemenea, osteoporotica. Oasele lungi ale soareci mutante conin os mai subtire cortical i volumul redus osos trabecular. Fenotipul osteoporotice nu a fost cauzat de cifra de afaceri osos accelerat - att numrul i activitatea osteoclastelor au fost similare cu cele de la puii de control -, ci mai degrab s osteoblastilor disfuncionale. n plus, rata de apoziie minerale la animalele mutante a fost redus. Osteoblastilor din explante att stromale i a artat calvarial maturare intarziata in vitro, msurat prin expresie a fosfatazei alcaline, inducerea de codificare osteocalcinei mRNA (112260), si depunerea minerale.

Istorie Heisterkamp i Groffen (2002) a oferit o perspectiv personal asupra istoriei geneticii moleculare ale cromozomului Philadelphia. Ei au descris n special de modul n care Klein et al. (1982) a scris primul capitol al povetii de baza moleculara a cromozomului Ph-prin raportarea faptul c gena ABL a fost translocat din cromozomul 9 la cromozomul 22.

VARIANTE alelice (exemple selectate): Tabelul Vezi

0.0001 leucemie, cromozom Philadelphia pozitiv, rezisteni la imatinib ABL1, THR315ILE

Gorre et al. (2001) a raportat o tranziie 944C-T n regiunea de codificare pentru site-ul ATPlegare a domeniului kinazei ABL a produsului de fuziune BCR-ABL, n 6 din 9 oameni cu leucemie n stadiu avansat, care au fost Ph-pozitiv i imatinib-refractar . Acest lucru a dus la o mutatie thr315-la-Ile (T315I) substituie. **
GENA ABL Leucemia mielocitar cronic (CML), un tip specific de cancer uman, boal mieloproliferativ clonal se caracterizeaz prin acumularea celulelor mieloide i a precursorilor lor. n stadiul avansat al bolii - criza blastic -, acestea sunt blocate i nu se mai difereniaz, i n consecin boala fiind invariabil fatal. CML este caracterizat de o translocaie specific t(9; 22) (q34; q11) a genei c -abl de pe braul lung al cromosomului 9 la punctul de rupere din regiunea bcr de pe cromosomul 22. Translocaia duce la formarea unei oncogene himerice de fuziune - bcr-abl - care produce alternativ oncoproteinele de fuziune de 210kD i respectiv de 190kD, proteinkinaze anormale. Aceast translocaie este prezent la 95% pacieni cu CML i la un subset semnificativ de leucemii acute n special limfoide. Deci, aceast rearanjare cromosomial conduce la fuziunea genelor bcr cu abl, care codific mRNA bcr -abl specific leucemiei n care apare cromosomul Ph+(1,2). Gena ABL a fost descoperit de Abelson n virusul Ab-MuLV care produce la oareci limfomul celulelor pre-B i plasmocitom. n acest caz boala este declanat de gena v -abl (care se considera gena c-abl transdus n genomul viral) n asociere cu un rest din gena gag. Gena hibrid gag-abl codific o protein de 136,6kD, fiind o tirozin kinaz specific cu capacitatea de a se autofosforila, dar i de a fosforila cteva proteine celulare (3). Pentru determinarea secvenelor codificante ale protooncogenelor c -abl de la om i oareci s-au investigat clone de DNA celular obinute din liniile celulare leucemice T umane, CCRF -CEM i din linia celular pre-B de oareci 70Z/3. Secvenierea DNA la om evideniaz un ORF-DNA care codific 906 aminoacizi iar la oarece codific 896 aminoacizi. Secvenierea relev c v-abl este o form trunchiat a c-abl murin. Secvenele nucleotide v-abl sunt identice cu cele ale lui c-abl murin, iar secvenele de la om

arat numai cinci schimbri n aminoacizii lui v-abl. Cele mai multe secvene care s-au pierdut n procesul generrii lui v-abl sunt cele de la captul C-terminal(4). A-MuLV este un retrovirus transformant acut care vizeaz att in vivo ct i in vitro linia B timpurie. Proteina sa transformant, v-Abl, este o tirozin kinaz nrudit cu v-src i conine un domeniu C-terminal extins. Mutante n poriunea C-terminal a moleculei, blocheaz transformarea n stadiul pre-B, fr ns a afecta transformarea fibroblastelor. Proteina v-Abl trunchiat la C-terminal (p90) tip-slbatic are abilitatea de a transforma celulele de oarece p53 (-/-). Absena p53 crete susceptibilitatea celulelor mduvei osoase de a fi transformate de v-Abl. oarecii cu deficiene p53 au tumori (limfoame pre -B) care apartimpuriu iar timpul de supravieuire scade dup infectarea cu A-MuLV.Astfel, cile dependente de p53 inhib transformarea de ctre v-Abl dar nu intervin n transformarea potenial a pre -B. v-Abl (p90) transform ns foarte eficient limfocitelepre-Bla oarecii lipsii de p53, de unde concluzia c C-terminal al v-Abl nu determin tropism pentru celulele pre-B (5). Transformarea celulelor pre-B de ctre Ab-MuLV implic un echilibru ntre semnalele pozitive care stimuleaz creterea indus de oncoproteina v-Abl i reglarea negativ a genelor celulare. Aceste procese apar prin selecia clonal din timpul transformrii mediate in vitro i in vivo de Ab -MuLV. Aproximativ 50% din celulele pre-B transformate de Ab-MuLV exprim forme mutante ale p53 sugernd c aceasta poate juca un rol important n procesul transformrii. Pentru a testa rolul p53 n transformarea direct a celulelor pre -B, s-a urmrit rspunsul oarecilor Trp 53 (-/-) la aciunea Ab-MuLV. Absena p53 scurteaz latena induciei bolii Abelson., dar nu afecteaz celulele susceptibile la transformarea indus de A b-MuLV. Totui, transformatele primare derivate din multe animale care depesc criza apoptotic, caracterizeaz tranziia din transformatul primar n linia malign deplin (6). Deci, geneza tumoral este un proces n multe trepte, care implic activarea oncogenelor i inactivarea genelor supresoare de tumori. Este cunoscut activitatea transformant a oncogenei v -abl din A-MuLV n linii imortalizate dar efectele lui v-abl asupra fibroblastelor primare sunt nc neclare. V-Abl oprete ciclul celular n fibroblastele primare de embrioni de oarece (MEF). MEF p53 ( -/-) sau p19 Arf(-/) sunt rezistente la activitatea transformant a proteinei v-Abl i la oprirea ciclului celular. Celulele MEF tip-slbatic sunt rezistente la activitatea transformant a v-Abl, iar celulele MEF p53(-/-) sau pArf (-/-) sunt susceptibile. Prin urmare, pierderea funciei p19 Arf i p53 joac un rol important n timpul transformrii celulelor primare de ctre v-Abl (7). Proteina TK c-abl este implicat n calea semnalizrii, n trnscriere, repararea DNA, apoptoz i n cteva alte proprieti biologice vitale, eseniale pentru proliferarea i diferenie rea celulelor. Interaciunea c-abl cu DNA este important pentru unele din aceste funcii. Locul de cuplare consens este 5'-AA/CAACAAA/C. Tripletul central cel mai nalt conservat-AAC- reprezint elementul crucial n secvenele cuplate ale proteinei c-abl. Interaciunea implic contactul cu un dublu helix cu canelare minor. Proteina poteneaz activitatea de relaxare DNA de ctre topoizomeraza I. Deci, interaciunea proteinei abl cu DNA este att secvenial-specific, ct i dependent de structur (8,9). Kinaza abl codificat de genaabl inhib apoptoza, fr a afecta proliferarea celulelor. Analize imunohistochimice cu anticorp policlonal anti-oncoproteina c-Abl/Bcr-Abl indic imunoreactivitate slab pentru abl n multe esuturi adulte i moderat (n citoplasm i nucleu) n cartilaj, adipocite i epiteliile ciliate. n esuturile fetale, p-abl se exprim n toate tipurile de muchi i ocazional, n celulele endoteliale. Cea mai intens colorare s-a constatat n locurile de osificare encondral i n stroma cordonului ombilical. Imunoreactivitate negativ s-a observat n epiderm, epiteliul scvamos, ganglionii limfatici, tonsila, splin, hepatocite i glanda adrenal. Tumorile reactive pentru abl sunt condrosarcomul, liposarcomul i adenocarcinomul gastric difuz. Se sugereaz ca p -abl nu este numai inhibitor al apoptozei, ci are, de asemenea, un rol n maturarea i difereniarea diferitelor tipuri de esuturi conjunctive , n creterea tumorilor i n angiogenez (10).

S-a demonstrat c c-abl este exprimat n testiculele de oarece i obolan predominnd n spermatociteleale meiozei I. C-Abl interacioneaz direct cu cromosomii meiotici i n contrast cu oarecii tip-slabatic testiculele celor fr abl (-/-), arat defeciuni n spermatogenez. Pentru prima oar se demonstreaz c c-ablintervine funcional n meioz (11). Protooncogenaabl-1, codific o TK citoplasmatic i nuclear, care este implicat i n procesele dediviziune, adeziune celular i rspuns la stres. Alterrile abl-1 de ctre rearanjrile cromosomiale sau transducia viral pot duce la transformri maligne. Activitatea proteinei c-abl este reglat negativ de domeniul su SH3 printr-un mecanism nc necunoscut, alterarea acestui domeniu determinndtransformarea p-Abl-1 ntr-o oncoprotein. Mutaiile sunt direcionate n cele trei domenii activatoare a c-Abl, iar mutaiile n "linker" induc o schimbare conformaional a moleculei i cresc cuplarea domeniului SH3 la liganzii peptidici. De asemenea, mutaii individule a dou reziduuri care arjeaz SH3 i domeniul catalitic (SH2-CD-linker) activeaz c-abl. Reglatorii c-abl au efecte opuse asupra activitii protooncogenei n funcie de abilitatea lor de a favoriza sau disturba aceast interaciune intramolecular (12). Activitatea PTK c-abl este strns reglat n celulele vertebratelor, cteva mutante putnd activa c abl i astfel convertind-o ntr-o oncogen. n formele virale ale abl (v-abl) secvenele gag sunt fuzionate la poriunile abl rezultnd o deleie a secvenei N-terminal fa de c-abl. Mutaii n domeniul SH2 sau n locul fosforilrii reduc dramatic abilitatea abl de a conferii fenotipul cu cretere stopat i de a fosforila proteine endogene, sugernd un rol fundamental al acestei structuri. Domeniul mutant de deleie SH3-1 este la fel de activ ca c-abl din drojdii, indicnd faptul c nu exist o reglare intrinsec a c -abl aprut via domeniul SH3 i sugernd c efectul acestui domeniu observat n celulele de origine ale vertebratelor este mediat de un factor(13). Carboxil-terminal al proteinei v-Abl poate crete funcia domeniul SH2. Ab-MuLV transform celulele NIH 3T3 i pre-B via expresiei v-Abl TK. Dei activitatea enzimatic a acestei molecule este indispensabil pentru transformare, i alte regiuni ale proteinei sunt reclamate pentru acest rspuns. Printre acestea este domeniul SH2 implicat n interaciunea protein-protein dependent de fosfotirozin i de terminusul lung carboxil care joac un rol important n transformarea celulelor hematopoietice. Semnale importante sunt trimise din fiecare din aceaste regiuni i transformarea este dirijat de aciunea concertat a acestor diferite pri ale proteinei. S-a comparat abilitatea domeniului v-src SH2 de a substitui pe cel al v-Abl-protein de lungime deplin p120 v-Abl i proteina p70 v-Abl, o protein care nu are terminusul COOH caracteristic membrilor familiei Abelson. Astfel, tulpinile Ab-MuLV care exprim p70/S2 nu transform celulele NIH 3T3 i arat o capacitate considerabil redus de a media evenimentele de semnalizare asociate cucalea proteinei MAP-kinazei activat de mitogen dependent de Ras. Tulpina Ab-MuLV care exprim p120/S2, nu se deosebetesub aceste aspecte de p120. Mutantele adiionale arat c, cel puin 162 aminoacizi ai terminusului COOH sunt suficieni pentru a restaura transformarea. Deci, un domeniu SH2 cu specificitate de substratv-Abl este reclamat pentru transformarea celulelor NIH3T3, n absena terminusului COOH i sugereaz c, cooperarea ntre terminusul carboxil i domeniul SH2 faciliteaz transmiterea semnalelor transformante via cii MAP kinazei. (14). Transformarea fibroblastelor 3T3 de ctre tirozink inaza v-Abl nlocuiete semnalele mitogenice i de adeziune reclamate n mod normal de progresia ciclului celular. Prin transformarea liniei 3T3 de ctre v-Abl s-a stabilit c oncogena induce sinteza E2F reclamat pentru ciclul celular i a mRNA pentru cic lina D1 i D2, iar inhibitorul CDK p27 scade n urma aciunii v-Abl (15). Forma oncogenic a TK c-abl induce transcrierea genei c-myc a crei funcie este necesar, ntro anumit msur, n programul de transformare cu v-abl. Locul E2F din promotorul c-myc este un element de rspuns v-Abl, iar v-Abl induce c-myc prin iniierea cascadei fosforilrii care n final activeaz proteinele ce cupleaz locusul E2F. Urmrindu-se calea semnalizrii dintre TK v-abl i proteinele E2F activate, s-a demonstrat c ras (GTP-az) i kinaza Raf 1 serin/treonin sunt necesare n aceast cale. Pe de alt parte, n contrast cu alte aspecte ale semnalizrii ale v -abl, inducia transcrierii c-myc este independent de Rac (GTP-az). De asemenea, necesarul de kinaze activate, dependente de cicline (cdk), inducia c-myc este nsoit de activarea cdk2 i cdk4. Inducia c -myc dependent de v-abl este nsoit de hiperexpresia pRb, p107 i p130. Se apreciaz c acest cale de semnalizare v-Abl induce transcrierea c-myc (16).

Oncogenele leucemogenice precum PTK (Protein Tirozin Kinaze) disturb reglarea normal a supravieuirii, proliferrii i diferenierii progenitorilor hematopoietici. n absena citokinelor, progenitorii celulari mor prin apoptoz. PTK Abl mediaz supresia rspunsului apoptotic ducnd la supravieuire aberant . S-a folosit linia de mastocite murine dependente de IL3 (factori de crestere hematopoietic) care 0 exprim o form sensibil la temperatur a PTK v-abl, activ la temperatura permisiv de 32 C i 0 inactiv la 39 C. La temperatur permisiv, celulele sunt rezistente la apoptoza indus prin absena IL -3 i adiia drogurilor citotoxice. Se arat c v-Abl se asociaz cu activarea fosfatidil-inozitol 3-kinazei pe care o stimuleaz, activare care duce la amplificarea nivelului celular al masei de mesageri secunzi PI 3,4,5-trifosfat. Activarea PI3-K duce la activitatea amplificat a PKB i la nivele crescute ale proteinei antiapoptotice Bcl-x (L). Transfectarea celulelor cu PKB dominant negativ reduce activitatea PKB stimulat de Abl i efectul de supravieuire conferit de activarea acestei oncogene. Astfel, PI3 -K i PKB sunt reclam ate pentru efectele aniapoptotice ale PTK Abl. (17)

Un nou membru al familiei DOK care leag i modeleaz semnalizarea Abl

Proteina P62 DOK numit i DOK-L conine structuri ale moleculei de semnalizare intracelular, respectiv, un domeniu N-terminal PH (omolog cu pleckstrin), un domeniu central PTB (Phosphat-Tirozin Binding), un domeniu C-terminal cu multiple locuri poteniale de fosforilare a tirozinei i regiuni bogate n prolin care ar putea servii ca locuri doking pentru proteina ce conine SH2 i SH3. Gena DOK-L se exprim predominant n mduva osoas, splin i plmni, dei o exprimare de nivel sczut a mRNA poate fi detectat i n alte esuturi. DOK- L se cupleaz n manier dependent de kinaz prin domeniul lor PTB, la TK Abelson. n celulele de drojdii i n cele mamaliene dependent de kinaz in vivo DOK-L este fosforilat de TK Abl. Dimpotriv, fa de p62 (DOK), DOK-L nu are locusurile YxxP la terminusul C i nu cupleaz la proteina ce activeaz dup fosforilarea GTP-az Ras (Ras GAP). Hiperexprimarea DOK-L, dar nu a p62(DOK) supreseaz activarea MAP kinazei (Proteina Activatoare de Mitogen) indus de v-Abl, dar nu are efect pe activarea kinazei constitutiv activat d e Ras i EGF. Efectul inhibitor reclam domeniul PTB al DOK-L. Hiperexpresia DOK-L n celulele NIH 3T3 inhib activitatea transformant a v-Abl. Se sugereaz astfel c, DOK-L poate modela funcia Abl (18).

Factorii care activeaz c-Abl

Activarea macrofagelor indus de endotoxina LPS este important n imunitatea nespecific i n represia indus de endotoxin n condiiile stimulrii excesive a macrofagelor. Reducerea c-Abl n macrofage previne oprirea creterii indus de LPS, producia de NO i secreia TNF-alfa de ctre macrofagele ANA-1 care continu s creasc dar ulterior sufer apoptoza. Reducerea c-Abl din celule, duce la activitatea redus a kinazei-Abl asociat cu Ran care recent este declarat ca fiind produs de o gen ce rspunde la LPS. Se sugereaz c tirozin kinaza c -Abl este un intermediar aval de semnalul iniial de transducere a semnalului de activare a macrofagelor de ctre LPS ( 19). Produsul genei Pag sau proteina MSP23 (Macrofage Stress Protein 23kD) induce proteine cu activitate antioxidant, implicate n rspunsul celulelor la stresul oxidativ i n controlul proliferrii i diferenierii celulare. Pag se asociaz cu c -Abl in vivo i inhib tirozin fosforilarea indus de hiperexpresia

c-Abl. Inhibarea reclam Abl SH3 i domeniul kinazei. Expresia Pag inhib, de asemenea, in vitro, activitarea kinazei c-Abl dar nu a Abl SH3 mutant sau a v-Abl. Se sugereaz astfel c in vivo Pag este un inhibitor fiziologic al c-Abl, deci manifest efect de citostatic indus de c-Abl. (20) Expresia genei Pag crete n celulele sincronizate ce intr n faza S, ceea ce indic posibilitat ea ca nivele nalte de Pag s contracareze activitatea citostatic a Abl. Tratarea celulelor cu ageni oxidativi dietilmalat i arsenat de sodiu, care stopeaz creterea celulelor, induce hiperexpresia genei Pag, independent de proliferarea celulelor. Deci, expresia amplificat a genei Pag apare n proliferarea celulelor ca rspuns la stresul oxidativ ( 21). TK c-abl este activat de radiaiile ionizante (IR) i de ali factori printre care unii care lezeaz DNA. S-a constatat c c-Abl se asociaz constitutiv cu PKC-delta, domeniul SH3 al su interacionnd direct cu aceasta. De asemenea, c-Abl fosforileaz i activeaz in vitro PKC-delta. Iradierea celulelor induce fosforilarea PKC delta dependent de c-Abl ca i translocaia acestei kinaze n nucleu. Se subliniaz astfel existena unei interaciuni funcionale ntre c -Abl i PKC-delta n rspunsul celulelor la stres genotoxic. (22)

Influena ABL asupra altor factori

Proteina Rad 51, un omolog al RecA bacterian, intervine n repararea dublei catene DNA rupte. Cum menionam, TK c-Abl este activat de iradiaii ionizante i de ali civa ageni care lezeaz DNA. Se tie c c-Abl interacioneaz constitutiv cu Rad 51, pe care o fosforileaz in vitro la Tyr -54. Iradierea celulelor induce fosforilarea Rad 51 de ctre c-Abl proces care inhib cuplarea proteinei Rad 51 la DNA i deci inhib funcia acesteia n reaciile schimbrii catenei DNA dependent de ATP. n premier s-a semnalatfaptul c Rad51 este reglat prin fosforilare i suport aciunea c -Abl n reglarea recombinrii dependente de Rad 51 ca rspuns la lezarea DNA (23). Gena uman ST5 codific 3 proteine cu masamolecular predicat a fi de 126, 82 i respectiv 70kD. S-a urmrit activitatea acestei gene n cile de transducie a semnalelor. Astfel in vitro, p126 cupleaz preferenial la c-Abl SH3 competitiv cu alte domenii SH3, inter-activitate mediat de secvenele PR-2 (p126 conine dou secvene bogate n prolin-PR-1 i PR-2). In vivo expresia p126, dar nu a p82 sau p70, activeaz n celulele COS7 MAPK (Mitogen - Activated- Protein- Kinase) ERK2 (Extracelular Signal Regulated Kinase -2) ca rspuns la EGF. Expresia c-Abl cu p126 amplific enorm aceast activitate. Deleia PR-1 blocheaz abilitate p126 de a activa ERK-2, iar deleia PR-2 nu-i afecteaz activitatea bazal dar blocheaz efectul stimulator al c-Abl.Se sugereaz c ST5 poate funciona ca o protein de semnalizare i poate oferi o legtur ntre c-Abl i ERK-2(24). Activitatea de TK a proteinei de fuziune BCR/ABL joac un rol important n patogeneza leucemiilor. Proteina abl interacioneaz specific cu proteinaretinoblastomului Rb n timpul ciclului celular. S-a analizat posibila interaciune a BCR/ABL n linia celular Ph+. P145 c -abl ca i proteinele p190 i p210 BCR/ABL interacioneaz cu pRb. Proteinele c-Abl i BCR-ABL se asociaz att cu formele fosforilate ct i cu cele nefosforilate ale pRb. Se apreciaz c BCR/ABL interfer cu funcia pRb i astfel regleaz creterea celular ( 25). Familia factorilor de transcriere E2F regleaz progresia ciclului celular, iar expresia dereglat a acestora poate conduce la transformare malign. Introducerea i expresia virusului Abelson n celulele mieloide determin in depen-den fa de factorii de cretere, deoarece p120 v-Abl activeaz transcrierea mediat de E2F-1 printr-o interaciune

fizic cu acesta. BCR/ABL i c-ABL, de asemenea, stimuleaz transcrierea mediat E2F-1. Se sugereaz un mecanism prin carec-abl determin proliferarea celulelor mieloide independent de factorii de activare transcripional mediat de E2F-1. (26) S-a urmrit dac Bcr care este tirozin fosforilat n celule de ctre c-Abl activat ar putea cupla Grb-2 i dac fosfotirozina Y177 este locul major de cuplare. S -au analizat complexele Bcr i Abl ntr-o linie celular hematopoietic i n celulele COS-1 constatndu-secoexprimarea att n proteina Bcr, ct i n Abl. Se relev c Bcr tirozin-fosforilat este capabil s cupleze Grb-2, dar Bcr tirozin fosforilat Y177 este deficient n cuplare. Complexul Grb-2 -Bcr poate fi considerat un potenial activator al cii ras. ( 27)

BCR/ABL

Aa cum s-a menionat, BCR/ABL este o oncogen himeric generat de translocaia secvenei din gena protein-tirozin kinazic c-Abl de pe cromozomul 9, lng gena BCR de pe cromozomul 22 constituindu-se astfel cromozomul Philadelphia ce caracterizeaz unele leucemii umane . Sunt dou tipuri majore de fuziune BCR/ABL. Fuziunea amino acidului 426-N-terminal-BCR genereaz proteina p190 (BCR-ABL) care abund n LLA (Leucemia Limfocitic Acut), pe cnd fuziunea N -terminal aminoacidul 902 sau 927 BCR genereaz proteina p210 (BCR/ABL) ntlnit mai frecvent n CML (Leucemia Mielogen Cronic). n cteva linii de CML se constat o expansiune clonal a celulelor stem hematopoietice. Pacienii cu CML n faze stabile au, de obicei, n sngeun numr crescut de leucocite i celule imature ale liniei granulocitare. Faza stbil de CML tipic ntre 3,5 -5 ani este similar ca agresivitate cu leucemia acut n momentul cnd este blocat diferenierea celulelor. Tranziia CML din faza stabil n cea blastic este reflectat prin pierderea necesitii de factori de cretere pentru celule CML i se coreleaz cu alterrile citogenetice adiionale. Unele efecte biologice ale celulelor CML primare includ apoptoza redus i adeziunea alterat la fibronectin. Totui, celulele sunt dependente de factorii de cretere hematopoietici. Amplificarea activitii TK -Abl n BCR/ABL este crucial pentru transformare; astfel, TK conduce la activarea ctorva ci de transducie a semnalului, care, de asemenea, sunt utilizate de factori de cretere hematopoietici printre care trombopoietina, IL-3, GM-CSF i factorul Steel. n cteva sisteme model, BCR/ABL ridic problema efectelor biologice ale factorilor de cretere hematopoietici presupunnd c aceste sisteme sunt dependente de ei ( 28). Efectul tumorogenic al oncogenei BCR/ABL este mediat de Bcl-2, o protein esenial pentru transformare. S-a stabilitn celulele transformate c gena Bcl-2 este o gen int aval de calea de semnalizare ras i de asemenea c, activarea constitutiv a lui ras conduce laexpresia constitutiv a genei BCR/ABL. O form trunchiat a acesteia, creia i lipsete o regiune critic BCR reclamat pentru activarea cii de semnalizare ras, nu induce expresia Bcl-2. Astfel, gena BCR/ABL, previne apoptoza indus de Bcl-2 printr-o cale de semnalizare care implic ras i leag activarea constitutiv a lui ras cu reglarea genei Bcl-2. De aici ideea c ras ar fi implicat att n semnalizarea mitogenic, ct i n calea de supravieuire a celulelor (29). n p190 ct i n p210 sunt prezente capetele N-terminal ale BCR (aminoacizii 1-63) care funcional pot fi nlocuii cu leucine ZIPPER al factorului de transcriere GCN4 din drojdii. Proteina ZIPP BCR/ABL care transform celule Rat-1/myc este autofosforilat pe tirozin i localizat predominant pe filamentele de actin. Astfel, homooligomerii pot activa TK i funcia lui ABL de a cupla pe F -actin, fie prin BCR fie prin GCN4. S-a stabilit c fuziunea BCR/ABL care conine numai aminoacizii lui BCR (1 191), poate, de asemenea, transforma eficient celule Rat-1/myc. Fuziunea secvenelor adiionale ale BCR(aminoacizii 192-23) nu are efect transformant pe aceste celule, dar reduce progresiv ruperea citoscheletului de actin.

n particular, domeniul omolog Dbl prezent n p210 (BCR/ABL), dar nu n p190 (BCR/ABL) contibuie la stabilizarea fibrelor de actin. Efectul modulator al secvenei BCR asupra structurii actinei subliniaz variaiile aparent partogene dintre diferitele proteine de fuziune BCR/ABL ( 30). Proteina Abl i oncoproteinele v-Abl i BCR/ABL pot activa membrii familiei proteinelor STAT (de semnalizare, transducie i activare a transcrierii) n celule transformate de v -Abl, tirozinkinazele Janus (JAK) sunt activate constitutiv. n aceste celule, oncoproteina v-Abl i kinazele JAK sunt asociate fizic. Cartarea domeniillor de interaciune dintre oncoprotein i JAK arat c aminoacizii din regiunea COOH terminasl a v-Abl cupleaz direct kinazele JAK. O mutant a v-Abl, care exclude aceast regiune nu cupleaz i nu activeazJAK -1 in vivo, nu activeaz proteina STAT i nu induce proliferarea celulelor. Mutantele din molecula JAK -1 inhib abilitatea v-Abl de a activa STAT i de a induce proliferarea celuleleor transformate n mduva osoas. Aceste efecte se coreleaz cu defectele n activarea de ctre v-Abl a ctorva ci inclusiv Akt, PI3 kinaza, STAT i Ras. Astfel, JAK kinaza poate juca un rol important n transformarea celular indus de v-Abl (31). Mutantele TK BCR/ABL sensibile la temperatur sunt folosite pentru studierea mecanismelor transformrii celulare i transduciei semnalelor. In vivo, activitatea tirozinkinazic a p210, p190 BCR/ABL i v-Abl sensibil la temperatur, exprimat n celulele hematopoietice, declin cnd temperatura crete cu 2C peste nivelul normal. In vitro, activitile tirozinkinazice ale Abl recombinat purificat i p210 BCR/ABL sunt, de asemenea, sensibile la temperaturi crescute. Dup 16 ore la 39C fosforilarea tirozinei proteinelor celulare este marcat redus n celulele transformate de BCR/ABL, n timp ce expresia acesteia rmne neschimbat. Reglarea redus a activitii kinazei BCR/ABL indus de temperatur este reversibil cnd celulele sunt aduse la 37C. Scderea acestei activiti nu este influenat de mutaii sau de deleia domeniilor SH2 sau SH3, sau de mutaia locului de cuplare GRB2. Scderea activitii TK indus de temperatur se coreleaz cu declinul n fosfotirozinaz asociat cu PI3-kinaza i nu apar schimbri n independena factorilor de cretere a celulelor hematopoietice transformate. Deci TK Abl deine sensibilitatea intrinsec la temperatur, iar activitatea BCR/ABL exprimat n celulele hemat opoietice scade odat cu creterea temperaturii cu 2C (32). n ideea nelegerii mecanismelor moleculare ale transformrii celulare mediat de Bcr/Abl s -au clonat i desemnat dou cDNA pariale-Shd i She, care codific proteine ce conin domeniul SH2. Ambele DNA au omologii cu proteina Shb care conine, de asemenea, domeniul SH2. DNA She se exprim n inim, plmni, creier i muchii scheletici, iar DNA Shd este restrictat n creier. Secvenele de aminoacizi deduse din cDNA Shd de lungime deplin de la oareci conin o regiune amino-terminal bogat n prolin i un domeniu carboxi-terminal SH2. Domeniul Shd exprimat n bacterii cupleaz multiple proteine tirozin-fosforilate cu g.m. de 200, 170, 130, 100, 90, 78, 72 i 32kDlizate de celule K562. Acest domeniu conine 5 motive YXXP - secven substrat preferat de TKAbl. De asemenea, este tirozin fosforilat n celulele COS-7 cotransfectate cu Shd i Abl sau cu Bcr-Abl. Se sugereaz c domeniul Shd poate fi un substrat fiziologic al c-Abl i poate funciona ca o protein adaptor n sistemul nervos central (33).

Rolul proteinei adaptor CRKL n transducia semnalului n celulele hematopoietice normale i n cele transformate de BCR/ABL

CRKL este o protein adaptor de 39kD, a crei gen a fost originar clonat n proximitatea genei BCR pe cromosomul 22, avnd rol reglator cheie n celulele hematopoietice. Deine un domeniu SH2 i dou domenii SH3 cu 60% omologii cu CRKII. n leucemia cronic mieloid CRKL este un substrat al oncoproteinei BCR/ABL i cupleaz la aceasta dar i la ABL. Ca rspuns la re ceptorii factorilor de cretere hematopoietici normal, CRKL este tirozin fosforilat semnaliznd liganzi precum trombopoietin, eritropoietin sau factorul Steel. Este, de asemenea, implicat n semnalizarea iniiat de cuplarea ncruciat a integrinei beta, cu receptorii limfocitelor B i T. Structural, domeniul SH3 -amino-terminal al

CRKL cupleaz proteinele C3G, SOS, P13, c-ABL sau BCR/ABL. Domeniul su SH2 poate cupla la proteinele tirozin-fosforilate CBL, HEF1, CAS sau paxillin (34). n linia transformat de BCR/ABL, CKRL este tirozin-fosforilat dar CRK nu. Urmrindu-se schimbarea n proteinele care cupleaz CRK i CRKL n linia hematopoietic Ba/F3 transformat de BCR/ABL s-a constatat c proteina care cupleaz domeniul SH3 CRKL nu se schimb cu excepia faptului c BCR/ABL coprecipit cu CRKL. n celulele hematopoietice netransformate exist trei proteine majore care coprecipit cu CRKL: C3G, SOS i c-Abl, fiecare interacionnd cu domeniul CRKL-SH3 dar nu cu domeniul CRKL-SH2. Comparativ cu CRKL foarte puin proteincoprecipit cu CRKII n celulele netransformate inactive. Dup transformarea BCR/ABL domeniile CRKl i CRK-SH2 cupleaz la un complex de proteine cu g.m. de 105120kD. n acest complex proteina major este p120 CBL. Astfel c, n acest linie hematopoietic CRKL este implicat n cile de semnalizare normale mult mai mult dect CRKII care implic cele trei proteine majore. n celulele transformate de BCR/ABL, CRKL i nu CRKII formeaz complexe care leag potenial proteinele BCR/ABL, C-ABL, C3G i SOS cu protooncoproteina p120 CBL (35) n concluzie CRKL este o protein adaptor SH2-SH3-SH3, substrat major al oncoproteineiBCR/ABL, ns funcia ei n celulele normale nu este cunoscut. n celulele transformate de BCR/ABL ea se asociaz cu proteinele de adeziune focal, tensina i paxilin, ceea ce sugereaz c ar putea fi implicat n semnalizareaintegrinei. n liniile hematopoietice MO7e i H9, CRKL se asociaz rapid cu o protein tirozin-fosforilat, ulterior cuplrii ncruciate a integrinei beta cu fibronectina sau cu anticorpul monoclonal anti-integrina beta1. n celulele MO7e proteina major pe care o cupleaz CRKL este p120 (CBL), omologul celular al oncoproteinei v-CBL. n linia limfoid H9, proteina tirozin-fosforilat cuplat de CRKL este p110 (HEF1). n ambele cazuri, aceast cuplare este mediat de domeniul SH2 al CRKL. n cele dou tipuri celulare, CRKL este constitutiv complexat de C3G, SOS i c -ABL, prin domeniul su SH3. Stoichiometria acestor complexe nu se schimb dup legtura cu integrina. Astfel c, n diferite tipuri celulare, CRKL i proteinele sale asociate cu SH3 poate forma diferite com plexe multimerice n funcie de ligaia integrinei cu p120 (CBL) sau cu p110 (HEF1) tirozin -fosforilate. nfuncie de aceste reacii are loc i semnalizarea integrinei n diferite celule ( 36). Bhat i colab. (37) confirm c CRKL este o protein adaptor care conine domeniile SH2 i SH3, domenii care cupleaz direct la BCR/ABL i la c-CBL tirozin-fosforilat.

Abl n diverse patii

Gena mutant n ataxia telangiectazic (AT), boal autosomal recisiv desemnat ATM (pentru gena din AT mutant) este membru al unei familii de enzime fosfatidil inozitol -3-kinaz-like, implicat n controlul ciclului celular, recombinarea meiotic, monitorizarea lungimii telomerelor i n rspunsul la lezarea DNA. Celulele din AT sunt hipersensibile la radiaii ionozante i sunt defective n stoparea fazelor G1/S ale ciclurilor celulare, dup lezarea DNA prin iradiere. Deoarece celulele care nu conin proteina TK-c-Abl sunt, de asemenea, defective n stoparea fazei G1 indus de radiaii, s-a urmrit posibilitatea ca ATM ar putea interaciona cu c -Abl n rspunsul la acest tip de lezare a DNA. S-a demonstrat astfel c, ATM cupleaz constitutiv c-Abl n controlul celulor. Domeniul SH3 al c-Abl interactioneaz cu motivul DPAPNPPHEP (reziduul 1,373 -1,382) al ATM, de asemenea activitatea TKc-Abl indus de radiaii este diminuat n celulele din AT. Astfel, ATM este implicat n activarea c-Abl prin lezarea DNA, aceast interaciune putnd media, n parte, stoparea fazei G1 indus de radiaii.

Radio sensibilitatea este un marker major al dezordinii genetice din AT uman, demonstrat in vivo dup expunerea pacienilor la doze terapeutice de radiaii, dar i n culturi celulare. Pacienii cu acest sindrom sunt predispui la apariia unor leucemii i limfoame, ceea ce explic interesul pentru legtura dintre radio-sensibilitate i predispoziia la cancer. Ataxia telangiectazic este o afeciune uman rar, recesiv autosomal cu fenotipuri pleiotrope precum degenerarea neuronal, disfuncia imunitar, senescena prematur i riscul crescut de cancer. Produsul modificat al genei ATM conduce in vitro la activarea c-Abl, prin fosforilarea TK-c-abl la serina 465. O mutant cu serina 465 nlocuit de alanina 465 nu se mai activeaz in vivo la iradiere sau cu ATM-kinaz. TK-c-Abl este astfel o int n avalul fosforilrii i activrii de ctre aceast kinaz, n rspunsul celulelelor la radiaii ionozante (40). Proteina 60 gaga virusului MAIDS murin (AIDS murin) defectiv, promoteaz proliferarea celular i induce imunodeficien sever infectnd i limfocitele B. Domeniul SH3 a p -Abl interacioneaz cu domeniul bogat n prolin, p12, al p60gag. n celulel B infectate cu virusul MAIDS cele dou proteine se asociaz att in vitro ct i in vivo. Hiperexpresia p60gag n aceste celule duce la creterea nivelelor proteinei ABL i la translocarea acesteia pe membran. Se sugereaz c acest protein viral servete ca loc de aciune pentru moleculele de semnalizare i c de asemenea, Abl poate fi implicat n proliferarea limfocitelor B infectate (41). Proliferarea excesiv a esutului mieloid n mduva osoas a pacienilor cu leucemii acute sau cronice cu cromosomul Ph+ este atribuit unei TK BCR/ABL, hibrid hiperactiv produs al fuziunii dintre exonul secund al protooncogenei c-ABL de pe cromosomul 9 i poriunile 5'ale genei BCR de pe cromosomul 22.Acest eveniment molecular (translocaie) este influenat de drogul inhibitor al tirozinkinazei-CGP-57148, n celulele mamaliene transfectate cu gena BCR/ABL de lungime deplin celule care exprim proteina de lungime deplin p210 BCR/ABL ca i n celulele leucemice primare care exprim acest protein. Investigaiile s-au efectuat pe pacieni ale cror celule exprimau p190 BCR -ABL i pe cei ale cror celule exprimau p210 BCR/ABL, ca i pe celule b laste infectate. In vitro n interval de 24-48 ore CGP-57148 induce apoptoz extins n celulele care exprim BCR/ABL dar nu i n cele BCR/ABL negative. Se constat, de asemenea, efect supresiv temporar asupra celulelor clonogenice KBM-5 comparabil cu efectul expuneriila CGP-57148. Pentru diferitele tipuri celulare, doza i timpul de expunere sunt variabile; astfel c, pentru celulele lipsite de proteina BCR/ABL dozele efective sunt inofensive. Deci, expunerea continu a celulelor int poate fi variant important n stabilirea terapie (42). Celulele blasticeK562 sunt independente de factorii de cretere. TK -bcr-Abl exprimat constitutiv ar putea fi responsabile de meninerea strii de blas t n celulele din CML. Celulele K-562 tratate timp de 72 ore cu inhibitori ai TK-quercetin i genistein- au fost analizate pentru expresia apoptotozei. Cele tratate cu quercetin nu se difereniaz i sufer apoptoza n proporie de 68% comparativ cu 7% de celulele de control. Celulele tratate cu genistein relev 16% apoptoz i 15% difereniere eritroid. Quercetin reduce cu 74% nivelul p210 iar fosfotirozina acesteia este 67,6%. Genisteinul reduce p210 cu 77,8% iar fosfotirozina era 16%. Se conclude c, ambii ageni pot scdea activitatea tirozinkinazic a p210avnd diferite efecte; quercetinul produce apoptoz n timp ce genisteinul produce att difereniere ct i apoptoz (43). Cum s-a menionat, activitatea tirozinkinazic a oncogenei BCR/ABL este reclamat pentru transformarea celulelor hematopoietice. Inhibitorul tirozinkinazic STI571 (numit iniial CGP57148B) inhib activitatea kinazic a BCR/ABL, TEL/ABL i v-ABL, icreterea i viabilitatea celulelor transformate de oricare din aceste oncogene ABL. S-au generat dou linii celulare BCR/ABL care au rezisten parial la inhibitorul STI571, respectiv, celulele hematopoietice Ba/F3 transformate de BCR/Abl i celulele umane K562 Ph+, ca re au fost cultivate cteva luni cu concentraii gradat crescute de inhibitor, n ideea generrii de linii rezistente. Celulele rezistente BaF3.p210 arat mRNA BCR/ABL crescut, amplificarea transgenei BCR/ABL i creterea de peste 10 ori a nivelului proteinei BCR/ABL. Dimpotriv, celulele K562 rezistente la drog nu

sufer amplificare detectabil a genei BCR/ABL, dei arat o cretere de 2 -3 ori a proteinei p210BCR/ABL. Adausul de inhibitor la ambele tipuri celulare conduce la o rapid scdere a fosforilrii tirozin-proteinei celulare, similar cu cea observat la celulele nerezistente. Totui, inhibarea activitii kinazice este tranzitorie, parial i nu este nsoit de apoptoz. ( 44)

Gena ARG

Genele ARG i c-ABL sunt membrii ai familiei Abelson de PTK (Protein Tirozin Kinaz) mamaliene. SH2 i domeniul kinazei Arg arat identitate de 90%, cu cele ale c -Abl. Toui, aceste dou proteine dein n regiunile C-terminal numai 29% identitate. Fosforilarea RNA polimerazei 2 de ctre c-abl reclam prezenaTK, domeniul SH2 i un domeniu care interacioneaz cu CTD (domeniul C-terminal repetat) din proteina Abl. CTD se ntlnete i n regiunea C-terminal a Arg. Se sugereaz c, tirozin fosforilarea RNA polimerazei II CTD ar putea fi catalizat fie de kinaza c-abl, fie de kinaza Arg. S-a izolat o nou protein-Arg BP-2- care conine trei domenii Arg COOH terminal, omoloage cu COOH terminal src, un domeniu bogat n serin/treonin i cteva poteniale locuri de fosforilare a abl. Aceast nou protein este frecvent exprimat n esuturi umane fiind extrem de abundent n inim. n celulele epiteliale este prezent n citoplasm i nucleu similar cu repartizarea p -abl. n celulele cardiace proteina Arg BP-2 este localizat la nivelul discurilor Z ale sarcomerelor. Se sugereaz c, aceast protein funcioneaz ca o protein adaptor pentru asamblarea complexelor semnaldin fibre i ca o potenial legtur ntre kinazele familiei abl i actina citoscheletului. n plus, localizarea ei n discurile Z sugereaz c poate influena proprietile contractile sau eleastice ale sarcomerelor cardiace, discurile Z fiind inte ale cascadelor transduciei semnalelor

V-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1 also known as ABL1 is a protein that, in [1] humans, is encoded by the ABL1 gene located on chromosome 9.
Contents
[hide]

1 Function 2 Clinical significance 3 Interactions 4 Regulation 5 See also 6 References 7 Further reading 8 External links

[edit]Function The ABL1 proto-oncogene encodes a cytoplasmic and nuclear protein tyrosine kinase that has been implicated in processes of cell differentiation, cell division, cell adhesion, and stress response. Activity of

ABL1 protein is negatively regulated by its SH3 domain, and deletion of the SH3 domain turns ABL1 into an oncogene. The t(9;22) translocation results in the head-to-tail fusion of the BCR and ABL1 genes, leading to a fusion gene present in many cases of chronic myelogenous leukemia. The DNA-binding activity of the ubiquitously expressed ABL1 tyrosine kinase is regulated by CDC2mediatedphosphorylation, suggesting a cell cycle function for ABL1. The ABL1 gene is expressed as either a 6- or a 7-kb mRNA transcript, with alternatively spliced first exons spliced to the common exons [2] 2-11. [edit]Clinical

significance

ABL1 kinase domain (blue) in complex with the second-generation Bcr-Abl tyrosine-kinase inhibitor nilotinib (red)

Mutations in the ABL1 gene are associated with chronic myelogenous leukemia (CML). In CML, the gene is activated by being translocated within the BCR (breakpoint cluster region) gene on chromosome 22. This new fusion gene, BCR-ABL, encodes an unregulated, cytoplasm-targeted tyrosine kinase that allows the cells to proliferate without being regulated by cytokines. This, in turn, allows the cell to becomecancerous. This gene is a partner in a fusion gene with the BCR gene in the Philadelphia chromosome, a characteristic abnormality in chronic myelogenous leukemia (CML) and rarely in some other leukemiaforms. The BCR-ABL transcript encodes a tyrosine kinase, which activates mediators of the cell cycleregulation system, leading to a clonal myeloproliferative disorder. The BCR-ABL protein can be inhibited by various small molecules. One such inhibitor is imatinib mesylate, which occupies the tyrosine kinase domain and inhibits BCR-ABL's influence on the cell cycle. Second generation BCR-ABL tyrosine-kinase inhibitors are also under development to inhibit BCR-ABL mutants resistant to imatinib. [edit]Interactions Abl gene has been shown to interact with: ABI1, ABI2,
[3][4][5] [6][7] [6]

ABL2, ATM,

[8][9][10] [11][12]

BCAR1, BCR,

[13][14][15] [16]

BRCA1, CAT,
[17]

CBL,

[18][19] [20][21][22] [23][24] [25]

CRKL,

DOK1,

EPHB2, GPX1,

[26] [27][28]

GRB10, MTOR, GRB2,

[29]

[20][30] [31]

MDM2, NCK1,

[18][20] [32][33]

NEDD9, NTRK1, P73,

[34][35]

[36][37] [38]

PAG1, PAK2,

[39] [40]

PSTPIP1, RAD9A, RAD51, RB1,

[41]

[8]

[42][43] [44] [45]

RFX1,

RYBP, SHC1,

[46][13] [47][19]

SORBS2, SPTA1,

[48] [48]

SPTAN1, TERF1, VAV1,

[10]

[49]

and
[50]

YTHDC1.

[edit]Regulation

C-abl oncogene 1, non-receptor tyrosine kinase

PDB rendering based on 1ab2. Available structures PDB Ortholog search: PDBe, RCSB [show]List of PDB id codes

Identifiers

Symbols

ABL1; ABL; JTK7; bcr/abl; c-ABL; p150; v-abl

External IDs

OMIM: 189980 MGI: 87859 HomoloGene: 3783ChEMBL: 1862 GeneCards: ABL1 Gene

EC number

2.7.10.2

[show]Gene Ontology

RNA expression pattern

Info test: BCR-ABL1 Detectia si cuantificarea transcriptului de fuziune BCR/ABL


1. Ce reprezinta testul
Testul permite detectia moleculara cantitativa a nivelului de transcript fuzionat BCR-ABL prin tehnologia Real Time PCR (RQ-PCR), pentru analiza raspunsului terapeutic la pacientii cu Leucemie Mieloida Cronica (LMC). Acest transcript fuzionat BCR-ABL este o oncogen himeric generat de translocaia secvenei din gena protein-tirozin kinazic c-Abl de pe cromozomul 9 in vecinatatea genei BCR de pe cromozomul 22, constituindu-se astfel cromozomul fuzionat cunoscut sub denumirea de cromozomul Philadelphia sau t(9;22). Sunt dou tipuri majore de fuziune BCR/ABL: fuziunea amino acidului 426-N-terminal-BCR ce genereaz proteina p190 (BCR-ABL) care abund n LLA (Leucemia Limfocitic Acut); fuziunea N-terminal a aminoacidului 902 sau 927 BCR ce genereaz proteina p210 (BCR/ABL) ntlnit mai frecvent n CML (Leucemia Mieloida Cronic).

2. Ce presupune prezena
Mecanismul prin care (p210) BCR-ABL induce transformarea oncogen nu este in ntregime cunoscut. Atasarea segmentului bcr de segmentul abl rezult in stimularea proliferrii, inhibarea diferentierii si blocarea apoptozei celulei stem hematopoietice. Prezenta si respectiv cresterea nivelului de transcript fuzionat BCR-ABL este un indicator precoce al pierderii raspunsului terapeutic si astfel, se impune in cazul pacientilor purtatori ai acestei translocatii modificarea strategiei de tratament.Din acest motiv este importanta monitorizarea moleculara regulata a pacientilor cu LMC.

3. Date statistice
LMC reprezint 15-20% din leucemiile adultului. Incidenta maxim a LMC este intre 45-55 ani. Incidenta anual este estimata la 1-2 cazuri la 100.000 locuitori. In Romnia aceast incident se traduce prin aproximativ 200 cazuri noi aparute anual.

4. Date clinice
Leucemia cronica mieloida (LCM) este o proliferare monoclonal a celulelor stem hematopoietice. LMC evolueaz in trei faze succesive caracterizate prin o evolutie natural din ce in ce mai scurt: cronic, accelerat si acut sau blastic. 1/3 din cazuri progreseaz din faza cronic direct in cea terminal, blastic. Durata median a evoluiei este de aprox. 3-5 ani.

5. Proba de laborator
Proba: snge integral recoltat in vacutainer cu EDTA (anticoagulant).

30% -- t(9;22) . , , - p190BCR-ABL1 p210KRABL1 . - 9- 22- , Bcr-AbL1). , t(9;22) , BCRABL1 . 1- ABL1 5'-

BCR. Bcr-Abl ( - p210BCR-ABL1) N- Bcr - Abl1. in vitro. p210BCR-ABL1 , . , BCR-ABL1 , , . p210BCR-ABL1 , BCR-ABL1 . , , . BCR ABL1 , Abl1 , , . .
ABL1 (v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1)

Identity Other names HGNC (Hugo) LocusID (NCBI) Location ABL ABL1 25 9q34.12

Location_base_pair Starts at 133710831 and ends at 133763062 bp from pter ( according to hg19-Feb_2009) [Mapping] Local_order DNA/RNA CAN is more telomeric, TAN1 even more in 9q34.3.

DNA diagram

Description 12 exons; 230 kb. Transcription Alternate splicing: 1a and 1b are 5' alternative exons; mRNA of 6 and 7 kb (with 1a and 1b respectively), giving rise to 2 protein of 145 kDa. Protein

Protein diagram

Description 1130-1143 amino acids; 4 domains: of which are SH (SRC homology) domains; NH2-term -- domain 1: SH3 (where can bind the binding protein BP1, to inhibit SH1 activation) and SH2 (with high affinity towards BCR first exon) -- domain 2: SH1 (with a self-phosphorylable tyrosine) -- 'domain' 3: nuclear localization domain (DNA binding, but not during mitosis) -- domain 4: actin binding (cytoskeleton) --COOHterm; note: 1b (but not the 1a alternative) myristylable allowing anchorage to the membrane. Normal ABL has a tri-dimensional structure which is tightly preserved in a closed, inactive conformation order to prevent oncogenic activation. The maintenance of this inactive conformation is possible by: 1- the "latching" of the myristilated NH2-terminal sequence which is directly linked to a myristilation recognition sequence on the c-lobe of the SH1 kinase domain; 2-The close contact between SH3 and SH2 domain

3- The interactions between SH3 domain and the C-lobe of the kinase domain. These interactions clamp the structure and prevent the kinase to switch to an active conformation, a process which requires the phosphorylation of Tyr 412 residue and the "unlatching" of the myristoyl group from the C-Lobe of the kinase domain. The attachment of proline-rich SH2 and SH3 ligands leads to the complete switch of the protein to an open, active conformation of the kinase. The NH2terminal myristilation (autoregulatory role) is deleted during the t(9;22) translocation. Expression Ubiquitously expressed, c-ABL K/O phenotype is lethal. Localisation c-abl is localized to the nucleus, plasma membrane and actin cytoskeleton. Function c-ABL exhibit a permanent nuclear and cytoplasmic shuttling activity, driven by 3 nuclear localisation signals (NLS) and a single nuclear export signal (NES) close to the C-terminal region. Recent data suggest that nuclear and cytoplasmic ABL may have different functions. 1- Nuclear c-ABL plays a major role in the regulation of cell death after DNA damage. All DNA damage inducing agents activate nuclear cABL kinase in a ATM-dependent manner and in the presence of the p53homolog p73 protein. The latter is physically associated with c-ABL after DNA damage through the SH3 domain of c-ABL. DNA damage also activates simultanously p53pathway, leading to the activation of Rb which induces growth arrest and protects cells from apoptosis. The exacts mechanisms of apoptosis induced by c-ABL are unknown. The translocation of cytoplasmic c-ABL to the nucleus has been shown to be due to its release from 14-3-3 proteins to which c-ABL is associated in the cytoplasm. JNK-dependent phosphorylation of 14-3-3 upon an oxidative stress, allows this release process and translocation of c-ABL to the nucleus. The oncoprotein MUC has also been shown to block nuclear translocation of c-ABL after apoptotic stimuli.The nuclear entrapment of BCR-ABL has also been shown to induce apoptosis in leukemic cells. 2- Cytoplasmic c-ABL : possible function in adhesion signalling as an efflux of c-ABL from nucleus to the cytoplasm is found in fibroblasts after adhesion. Regulation: Experiments using purified c-abl in vitro

allowed to elucidate the mechanism of c-abl regulation which is mediated by an intrinsic property of the molecule. This is the 80 aminoacid N terminal "cap" of the protein is able and sufficient its tyrosine kinase activity and the loss of this cap portion activates the oncogenic potential of c-abl. From the structural point of view, this inhibition is generated by the docking of the myristilated N-terminal of c-abl into the kinase domain. The current view is the fact that c-abl localized in the nucleus, plasma membrane and the actin cytoskeleton undergo different types of regulation. In the membrane-associated c-abl, the myristilated N-terminal end of membrane form can not interact with the kinase c-lobe and it has been suggested that phosphadytilinositol 45 bi-phosphate could play an inhibitory role. The autoregulatory mechanism remains functional in the cytoplasmic and nuclear form of cabl. The latter is also negatively regulated by Rb in the G-phase of the cell cycle. Beside the structural auto-inhibition, several cellular proteins have been shown to inhibit c-ABL: Pag (or Peroxiredoxin-I), Rb and F(actin). Regulation of ABL could therefore be due to a dual mechanism, involving an autoinhibition in the presence of co-inhibitors, which can be active on normal ABL-kinase activity but inactive against increased TK activity of BCR-ABL proteins. Recent data suggest that pharmacological inhibition of endogenous ABL could lead to a genetic instability, potentially by inhibition of mismatch repair mechanisms. Long-term inhibition of c-ABL by TKI therapies could therefore be responsible of the occurrence of a mutator phenotypes. Activation of ABL can also be detected in solid malignant tumors (lung and breast). Similarly , it has been shown that tumor suppression induced by Ephrin receptor EphB4 requires the presence of an active ABL and phosphorylation of the downstream target CRK by ABL. Homology SRC homology; like SRC, ABL is one of the tyrosine kinases which are not membrane receptors.

Implicated in Entity Disease t(9;12)(q34;p12)/acute lymphoblastic leukemia (ALL) --> ETV6-ABL Common ALL; yet poorly known.

Hybrid/Mutate 5' ETV6/TEL from 12p12 - 3' ABL from 9q34.

d Gene Abnormal Protein Oncogenesis NH2-term Helix Loop Helix from ETV6(TEL) fused to Tyr Kinase from ABL COOH-term; localised in the cytoskeleton. Forms HLH-dependent oligomers, which may be critical for Tyr kinase activation; oncogenesis may be comparable to that induced by BCR/ABL.

Entity Disease

t(9;22)(q34;q11)/chronic myelogenous leukemia (CML) --> BCR/ABL All CML have a t(9;22), at least at the molecular level (BCR/ABL); phenotype and stem cell origin: multipotent progenitor: t(9;22) is found in all myeloid and B- lineage progenitors. The prognosis of CML has changed radically over the last 10 years, due to the development of novel drugs able to target the enhanced tyrosine kinase activity of BCR-ABL. The first of these therapies is Imatinib Mesylate (Gleevec) which has become the first line therapy for all patients with CML (See CML). In the first cohort trial of patients treated with Imatinib mesylate, the rates of complete cytogenetics responses (CCR) were exceptionally high (82 %) as compared to standard IFN-alpha - ARA-C therapy. At the most recent 6-year update, the overall survival is 90 % and most interestingly, the rates of progression towards more aggressive phases have been found to be progressively decreasing in all patients with major molecular responses (MMR). (For definition of MMR see CML). In IM-resistant or relapsing Ph1+ CML patients, second generation tyrosine kinase inhibitor (TKI) therapies such as Dasatinib (a dual SRC and ABL inhibitor) and Nilotinib have also recently become available. Anomalies additional to the t(9;22) may be found either at diagnosis or during course of the disease, or at the time of acute transformation; mainly: +der(22), +8, i(17q), +19; +21, -Y, -7, -17, +17; variant translocations: t(9;22;V) and apparent t(V;22) or t(9;V), where V is a variable chromosome, karyotypes with apparently

Prognosis

Cytogenetics

normal chromosomes 9 and 22, may be found.

Probe 1132H12 on a case of CML with t(9/22). Note the splitting of the probe, evident also on interphase nuclei - Courtesy Mariano Rocchi, Resources for Molecular Cytogenetics

Hybrid/Mutate see below d Gene Abnormal Protein Oncogenesis see below see below

Entity Disease Prognosis

t(9;22)(q34;q11)/ALL --> BCR/ABL Most often CD 10+ B-ALL; frequent CNS involvement. The prognosis of Ph1+ ALL has changed since the introduction of tyrosine-kinase inhibitor therapies, especially imatinib mesylate which is currently used as a first line therapy associated with either high dose chemotherapy or classical ALL-type induction (steroids+ vincristine) and maintenance. Allogeneic stem cell transplantation is indicated in Ph1+ ALL patients relapsing after Imatinib-based regimens. In IM-resistant or relapsing Ph1+ ALL patients, second generation tyrosine kinase inhibitor (TKI) therapies such as Dasatinib (a dual SRC and ABL inhibitor) and Nilotinib have also recently become available. The chromosome anomaly t(9;22) disappear during remission, in contrast with BC-CML cases (CML in blast crisis); additional anomalies: +der(22), -7, del(7q) most often, +8, but not an i(17q), in contrast with CML and AML cases; complex karyotypes, often

Cytogenetics

hyperploid; variants and complex translocations may be found as in CML. Hybrid/Mutate see below. In Both CML and Ph1+ ALL, detection and quantification of p210 BCR-ABL and p190 BCR-ABL have become the cornerstones d Gene of monitoring targeted therapies. Abnormal Protein Oncogenesis see below see below

Entity Disease Prognosis

t(9;22)(q34;q11)/acute myeloid leukemia (AML) --> BCR/ABL AML mostly M1 or M2 AML. High rates of hematologic , cytogenetic and molecular responses have been reported in de novo PH1+ AML, which is a rare entity. The chromosome anomaly t(9;22) disappear during remission, in contrast with BC-CML cases (CML in blast crisis); additional anomalies: similar to what is found in CML.

Cytogenetics

Hybrid/Mutate see below d Gene Abnormal Protein Oncogenesis see below see below

Hybrid/Mutate BCR/ABL the crucial event lies on der(22), id est 5' BCR - 3' ABL hybrid gene is the crucial one, while ABL/BCR may or may not be d Gene expressed; breakpoint in ABL is variable over a region of 200 kb, often between the two alternative exons 1b and 1a, sometimes 5' of 1b or 3' of 1a, but always 5' of exon 2; breakpoint in BCR is either: 1- in a region called M-bcr (for major breakpoint cluster region), a

cluster of 5.8 kb, between exons 12 and 16, also called b1 to b5 of M-bcr; most breakpoints being either between b2 and b3, or between b3 and b4; transcript is 8.5 kb long; this results in a 210 KDa chimeric protein (P210); this is found in (most cases of) CML, and in half cases of ALL or AML. 2- in a 35 kb region between exons 1 and 2, called m-bcr (minor breakpoint cluster region), -> 7 kb mRNA, resulting in a 190 KDa protein (P190); this is found in half of the cases of ALL or AML. 3- A breakpoint in the exon 19 of BCR (designed as micro-bcr) with fusion to abl sequences (a2) has been in neutrophilic CML, with presence of a larger protein (P230). Abnormal Protein BCR/ABL P210 comprises the first 902 or 927 amino acids from BCR, P190 only the 427 N-term from BCR; BCR/ABL has a cytoplasmic localization, in contrast with ABL, mostly nuclear. BCR/ABL has a cytoplasmic localization role and all three BCR-ABL fusion proteins have been shown to exhibit oncogenic potential. All three hybrid proteins have increased protein kinase activity compared to ABL: 3BP1 (binding protein) binds normal ABL on SH3 domain,which prevents SH1 activation; with BCR/ABL, the first (Nterminal) exon of BCR binds to SH2, hidding SH3 which, as a consequence, cannot be bound to 3BP1; thereof, SH1 is activated; oncogenesis 1- proliferation is induced through activation by BCR/ABL of RAS signal transduction pathway, PI3-K (phosphatidyl inositol 3' kinase) pathway, and MYC; 2- BCR/ABL inhibits apoptosis (via activation of STAT5 and BclXL) 3- BCR/ABL provokes cell adhesive abnormalities (via CRK-L, FAK) as well as abnormalities of cell migration (via CXCR-4 whose expression is downregulated in CML cells expressing high levels of BCR-ABL). In experimental settings CD44 has been shown to play a major role in homing of BCR-ABL expressing cells. 4- BCR-ABL induces a major genetic instability: Molecular pathways involved in this phenomenon have recently been elucidated (See BCR-ABL). 5-BCR-ABL and endogenous ABL have been shown to be the target

Oncogenesis

of miR 203 which is heavily methylated in CML cell lines expressing BCR-ABL. Restoration of miR 203 expression leads to reduction of BCR-ABL levels, suggesting a potential use of this strategy for therapeutic purposes.

Breakpoints

External links