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Protenas Plasmticas I y II
Dr. Jos G. Castao
Objetivos
1) Concepto de plasma y suero. Compartimentos de fludos del organismo. 2) Protenas plasmticas mayoritarias y medicin de protenas totales. 3) Tcnicas de anlisis de protenas plasmticas. 4) Principales protenas plasmticas y significacin clnica. 5) Protenas de fase aguda inflamatoria y significacin clnica 6) Malnutricin proteca: causas, deteccin y seguimiento
92% 7% 1%
Otros solutos
Electrolitos y Gases Nutrientes orgnicos: glucosa, FA, AA, etc Desechos orgnicos: urea, bilirubina, etc
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Albmina:
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Protena Total :
Metodo de Kjedahl: Mide N total en forma de NH4 y conversin a NH3 en alcali. Mtodo histrico, no se utiliza
Mtodo de Biuret : Cu reacciona en solucin alcalina con los enlaces pptidicos y produce un complejo con color violeta, necesita al menos 2 enlaces peptdicos, por lo que no detecta aminocidos. Es el ms utilizado en anlisis clnicos
Mtodo de Lowry: en medio alcalino con una solucin de Cu, seguido de la adicin del reactivo de Folin Ciocalteau con fenol, se da color por reduccin del los cidos fosfotungstitico y fosfomolbdico. Muy sensible, pero solo til para solucciones de protenas diluidas.
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Crnica: subida alfa2, y gamma (ancha) Cirrosis: Bajada de Alb, subida alfa 1, aumento de (puente )
Gammapatia policlonal
Inflamacin crnica
Cirrosis
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Suero y LCR se ajustan a la misma concentracin de protenas totales Suero y LCR se colocan en pocillos contiguos en el gel; y se permiten que difundan en el gel Se aaden los anfolitos y se inicia la corriente Se crea gradiente de isoelectroenfoque con los anfolitos y las protenas migran hasta su punto isoelctrico. Tincin de las protenas
Suero del paciente LCR del paciente Bandas oligoclonales ANORMAL Control normal Regiones Alb
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INMUNONEFELOMETRIA
Ag + Ab AgAb complejos AgAb microscpicos Microcomplejos provoca que la luz que atraviesa la muestra en suspensin se disperse (SCATTERING) Nefelometro detecta la luz dispersada a un ngulo de 90o La cantidad de luz dispersada en un angulo de 90o es proporcional a la cantidad de complejo Ag/Ab formado Sensible y cuantitativo se utiliza para medir muchas proteinas de suero
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BN ProSpec
BN II
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Inmunoelectroforesis (IEP)
Equivalente electrofortico de Ouchterlony 2 pasos Protenas separadas por electroforesis Antisuero se colocan en un pocillo paralelo a las protenas separadas, todos los reactivos difunden en todas las direcciones in trough parallel to separated proteins; all reactants diffuse in all directions
Inmunoelectroforesis
Electroforesis del suero y aplicar anticuerpo al pocillo horizontal Pocillo horizontal continuo para anticuerpo (+)
(-)
Pocillo aplicacin suero
Anticuerpo y portenas del suero difunden libremente Frentes de difusin interactuan (+)
(-)
Formacion de los arcos de precipitacin Arcos de precipitacin
Se forman lneas de precipitacin de los complejos antgeno-anticuerpo en los lugares donde se alcanza el punto de equivalencia
El pocillo longitudinal se puede rellenar con un solo anticuerpo o con una mezcla de anticuerpos para detectar una protena en concreto o varias
(+)
(-)
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Inmunoelectroforesis
Albumina 1 2 PREALBUMINA ALBUMINA 1-LIPOPROTEINA 1-ANTITRIPSINA Gc-GLOBULINS CERULOPLASMINA HAPTOGLOBINA 2-MACROGLOBULINA -LIPOPROTEINA C4 HEMOPEXINA TRANSFERRINA C3 IgA IgM IgG
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Utilizando anticuerpos especficos para cada protena del suero que queramos estudiar. Obtenemos bandas de precipitacin en la regin correspondiente y podemos cuantificar cada una de las protenas de forma cualitativa a semicuantitativa
Se puede analizar cualquier fluido (Suero, orina, LCR) Util para detectar: protenas que faltan (deficiencias) protenas anormales protenas normales con concentracin anormal
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Estructura de la albmina
Funciones de la albmina
Reserva de protenas en la deprivacin nutricional Transporte de cidos grasos de cadena larga y esteroles Transporte de Bilirubina Unin y solubilizacin de drogas
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Las interaciones con farmacos es dbil y fcilmente desplazable. Esta unin puede determinar la concentracin de droga libre en plasma y por tanto la forma farmacolgicamente activa de la droga.
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[Como la vida media de la albmina es larga (20 das),una dismunicn significativa de albmina en plasma aparece muy lentamente por reduccin de la sntesis.] Distribucin anormal o dilucin
A. Sobrehidratacin B. Aumento de permeabilidad capilar como en septicemia, quemados
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HEMOSIDERINA
Se encuentra en las clulas del sistema reticuloendotelial (hgado,bazo y mdula osea) Almacenamiento de exceso de hierro Insoluble en soluciones acuosas Forma agregados que pueden liberar hierro de forma lenta en situaciones de deficiencia de hierro
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Regin Beta: C3 y C4
C3 y C4 (185 a 417 kDa) Funcin: Protenas del complemento Producida por hgado Disminuida: enfermedades autoinmunes: lupus, anemia hemoltica
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Esta regin contiene la mayor parte de las Inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgA, IgD, e IgE
Producidas: por linfocitos B-- plasmticas. Aumentada: Hipergammaglobulinemia, enfermedad heptica, infeccin crnica, lupus, mieloma, linfomas Disminuida: Envejecimiento, drogas, leucemia linfocitica crnica, agammaglobulinemias, etc
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Plasma (g/L)
Inflamacin (g/L)
0,4 2,5 3.0 7.0 3.0 6.0 10
Reacciones de aglutinacin y precipitacin Se une a fosfocolina, un componente comn de las membranas plmaticas celulares y de microorganismos Opsonizacin (se une a los receptores de las clulas fagocticas facilitando la fagocitosis) Activa Complemento (va clsica )
Se une a ribonucleoprotenas pequeas (prevencin de la respuesta autoinmune?)
0.001-0.03
48-72h
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Malnutricin
1) Trmino general que incluye sndromes clnicos tanto de sobre como de baja nutricin debido a:
1) Inadecuado/ aumento excesivo de ingesta (Ayuno/Obesidad) 2) Inadecuada digestin 3) Inadecuada absorcin 4) Inadecuada utilizacin 5) Aumento requerimientos (crecimiento, embarazo) 6) Excrecin excesiva / catabolismo (infeccin, inflamacin,
tumores, quemaduras y grandes traumatismos, fallo de organos)
Malnutricin en Hospitales
Cientos de trabajos desde 1974 Hasta un 55% de los pacientes hospitalarios estn malnutridos
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Consecuencias de la malnutricin
Consecuencias:
1)Cicatrizacin lenta 2)Mas complicaciones 3)Estancias ms largas
Consecuencias de la malnutricin
Consecuencias
4) Alta mortalidad 5) Altos costos sanitarios
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Valoracin de la nutricin
Historia Hallazgos fsicos Mediciones antropomtricas
Mediciones Antropomtricas
Altura-edad (retraso crecimiento en nios) Indice de masa corporal: peso (kg)/ Altura2 (m2) Excreccin de Creatinina/indice de altura (adecuacin de la masa proteca muscular) Circunferencia del brazo en su regin media pliegue de piel Triceps, biceps, sub-escapular y supra-ilaco y medir su grosor: grosor indica el % de grasa corporal
Test de Laboratorio
1) Tests para deteccin temprana 2) Tests para monitorizacin
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Balance de Nitrgeno
Balance N2 = N2 In - N2 Out 1 g de N2 = 6.25 gm Proteina N2 In = Protena In/ 6.25 N2 Out = N2 Nitrgeno total en orina (TUN) + N2 en Heces. Balance N2 = Protena In/6.25 - (TUN + N2 en heces) N2 en heces= 2-4 gm en adultos; 75 mg/kg en nios
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En consecuencia
Albmina Indicador lento de malnutricin proteca
Kwasiorkor y Marasmus
Malnutricin proteca y energtica afecta a 1 de cada cuatro nios en el mundo. 150 millones (27%) con poco peso y 182 millones ( 33%) estn con deficiencia extrema Geogrficamente: 70% viven en Asia, 26% en Africa y 4% en Amrica Latina y el Caribe
Punto de decisin
3.0 g/dl
Transferrina
200 400 mg/dl 150 mg/dl 16 35 mg/dl 2.6 7.6 mg/dl 11 mg/dl 1.6 mg/dl Indicadores rpidos de RBP y TTR (prealbmina) estado nutricional
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Marasmus y Kwashiorkor
Marasmus Marasmos: Griego Que se muere No edema; albmina normal poca grasa subcutanea Gran prdida de masa muscular cara de viejos Urea en la orina mantenida Kwashiorkor
Ga lenguaje de Ghana: enfermedad de los nios mayores cuando nace un nuevo nio Edema: albmina baja Bajada en la relaccin de a.a. Esenciales/ no-esenciales Presencia frecuente de grasa subcutnea Perdida de masa muscular variable Cara de luna Urea en Orina muy baja Hepatomegalia palpable usualmente
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