PROYECTO DE TESIS 1. GENERALIDADES 1.1.

Ttulo: Efecto de cuatro proporciones (A, B, C, D) de sanguaza/agua de mar en la produccin de biomasa de Tetraselmis suecica 1.2. Personal investigador: 1.2.1. Investigador: - Apellidos y Nombres - Departamento - Facultad - Categora - Cdigo 1.2.2. Asesor: Apellidos y Nombres 1.3. Tipo de investigacin 1.3.1. De acuerdo a la Orientacin : Aplicada 1.3.2. De acuerdo a la Tcnica de Contrastacin: Experimental 1.4. Rgimen de investigacin Libre 1.5. Institucin a la que Pertenece el Proyecto: Universidad Nacional de Trujillo: Escuela de Ingeniera Agroindustrial de la Facultad de Ciencias Agropecuarias. Ciudad Universitaria, Av. Juan Pablo II s/n Trujillo. : Dr. Vsquez Villalobos, Vctor Javier. : Silva Benites Juan Carlos : Ingeniera Agroindustrial : Ciencias Agropecuarias : Bachiller : 024115399

1.6. Localidad e institucin donde se ejecutar el proyecto: Instituciones: Laboratorio de Ingeniera Agroindustrial de la Facultad de Ciencias Agropecuarias, de la Universidad Nacional de Trujillo. Laboratorio de operaciones agroindustriales de la Universidad Nacional de Trujillo 1.7. Cronograma de ejecucin del proyecto: Cuadro 1. Cronograma en Meses de Ejecucin del Proyecto Actividades / Etapas Mes 1 Mes 2 Mes 3 Mes 4 Mes 5 Mes 6

Revisin Bibliogrfica Elaboracin y sustentacin del Proyecto Experimentacin Anlisis de Resultados Redaccin del Informe Presentacin

1.8. Duracin total del proyecto: -Fecha de Inicio : Junio 2009

-Fecha de Trmino : Noviembre 2009 1.9. Horas semanales dedicadas al proyecto: 40 horas semanales

1.10. Recursos disponibles: 1.10.1. Personal: -Autor -Asesor : Br. Silva Benites, Juan Carlos : Dr. Vsquez Villalobos, Vctor Javier.

1.10.2. Materiales y equipos: Material de vidrio: bioreactores de vidrio, cmara neubauer, vasos de precipitacin, termmetro, matraces, probetas, buretas, pipetas, micropipetas, mechero. Reactivos de laboratorio: medio Guilard, agar-agar. Material de escritorio: papel, lapiceros, perforador, engrapador, lpices, calculadora, etc. Material bibliogrfico: Libros, revistas, boletines, tesis. Otros materiales: mangueras, Ts de plstico, agujas calibradas. Equipos: espectrofotmetro, microscopio, balanza analtica, baln de CO2, manmetro, pH metro, agitador magntico, compresora, centrifuga.

1.10.3. Locales: - Laboratorio de Ingeniera Agroindustrial de la Facultad de Ciencias

Agropecuarias de la Universidad Nacional de Trujillo. - Laboratorio Multifuncional de la Universidad Nacional de Trujillo. - Bibliotecas de la Universidad Nacional de Trujillo (Sede Central).

1.11. Recursos No Disponibles: Cuadro 2: Relacin de Recursos No Disponibles Recursos No Disponibles Materia Prima: Alga (Tetraselmis suecica) Sub Total Reactivos: Cantidad Costo

Sub Total Material de Escritorio: Memoria USB 1GB Impresiones y Scaneados Sub Total Gastos de Trabajo de Campo: Pasajes y Gastos de Global Campo Bsqueda Bibliogrfica Sub Total Otros Servicios : Internet Asesora Estadstica Copias fotostticas Encuadernacin y Empastado Otros Sub Total Total General Global Global 1 unidad

1.12. Financiamiento: -Autofinanciamiento 2. PLAN DE INVESTIGACIN. 2.1. Antecedentes.Cultivos Semicontinuos de la Microalga Tetraselmis Suecica Segun (Droop, 1.969; I-Jkelcs, 1973; Guillard, 1972). El mantenimiento de esta serie de cultivos, que comprenden mltiples unidades intermedias, trae consigo toda una serie de problemas tcnicos que los convierten en una parte muy vulnerable del centro de produccin de semilla. Los progresos realizados en los ltimos aos, en las tcnicas de cultivo de fitoplancton, estn en el sentido de la automatizacin, por el uso de los cultivos continuos (dilucin constante con medio nutritivo) y semicontinuos (dilucin a intervalos de tiempos definidos) (Dustan y Menzel, 1971; Canzonier y Brunetti, 1975; Droop, 1975; Trota, 1981; Laing y Helm, 1981). El desarrollo de sistemas de cultivo para microalgas de este tipo, bajo condiciones rudimentarias, tales que puedan reproducirse a bajo costo, son alternativas apropiadas para el desarrollo de unidades de cultivo a nivel masivo (el mtodo de cultivo y sus resultados se muestran en el anexo N1). Crecimiento Poblacional de Chaetoceros gracilis y Tetraselmis suecica con dos Medios de Cultivo y Suministro de CO2 en Condiciones de Laboratorio El cultivo de microalgas: Chaetoceros gracilis y Tetraselmis suecica, se realiz en frascos de plstico y vidrio de 4 y 6 litros de capacidad respectivamente, utilizando dos medios de cultivo y con suministro de CO2;

con la finalidad de determinar el medio ptimo y el efecto del suministro de CO2 que permita obtener la mayor concentracin celular. La experiencia se realiz en el laboratorio de Acuicultura I, Facultad de Ingeniera Pesquera, de la Universidad Nacional de Tumbes; ubicada en la localidad de Puerto Pizarro, departamento de Tumbes a 03 30 L.S. y 80 23L.W. El cultivo Chaetoceros gracilis con CO2 dur 10 das y 11 das sin CO2, para Tetraselmis suecica con CO2 ,duro 7 das y 8 das sin CO2.. Los medios de cultivo que se utilizaron fueron Guillard completo (testigo), Guillard F/2 modificado y Walne y el suministro de CO2 fue al 5 % del volumen total del cultivo. Por otro lado los parmetros fsicos y qumicos del agua variaron de la siguiente manera: temperatura fluctu de 28 C a 30 C para Chaetoceros gracilis y 27 C a 30 C para Tetraselmis suecica, en el mismo orden el pH fluctu de 7,2 a 8,2 y 7,0 a 7,9 y la salinidad para ambas microalgas fue de 35g/L. Revisin de literatura. 2.2.1. Microalga.

Tetraselmis suecica (Kylin) Butcher es un alga de la Clase Prasinophyceae que se caracteriza por ser unicelular y mvil. Es de color verde, de 7 a 9 micrones de dimetro, con una membrana celular delgada, sin cubierta de slice o carbonato de calcio (BOROWITZKA y BOROWITZKA, 1989). Posee cuatro flagelos isodinmicos. La reproduccin vegetativa ocurre por fisin longitudinal de las clulas que adoptan el estado inmvil. En condiciones adversas ocurre formacin de cistos. Los flagelos nacen de una hendidura apical que se observa en la parte anterior de la clula y que est ubicada en la misma direccin en que el organismo avanza.

Tetraselmis suecica es un alga eurihalina que posee la capacidad de formar esporas y cuyos lmites de tolerancia a las variables fsicas son amplios. Es comn observarla en aguas costeras y estuarinas. Su cultivo a gran escala es relativamente fcil, constituyndose como una buena fuente de alimento en la acuicultura (BOROWITZKA y BOROWITZKA, op. cit.) Tetraselmis suecica es una microalga que en cultivos autotrficos puede utilizar diferentes fuentes nitrogenadas tradicionales (urea, fosfato diamnico, nitratos, nitritos, etc.); sin embargo en cultivos heterotrficos como el ensilado, puede metabolizar diversos aminocidos y vitaminas produciendo cambios importantes en su crecimiento y composicin bioqumica (Merino com. per., 2008). Barday et. al.(1994 in Fernndez & Paredes, 2006) menciona que Tetraselmis suecica es un alga marina capacitada para sintetizar cidos grasos poliinsaturados , debido a su capacidad de metabolizar y acumular los nutrientes provenientes del extracto de ensilado de pescado en condiciones heterotrficas.

Figura 1. Tetraselmis suecica

Tetraselmis suecica es un alga eurihalina que posee la capacidad de formar esporas y cuyos lmites de tolerancia a las variables fsicas son amplios. En los receptculos empleados para su cultivo en el laboratorio alcanza densidades mayores a las 200 000 clulas por ml. Su tamao la encuadra en la fraccin fitoplanctnica denominada nanoplancton y su principal importancia est en que posee las dimensiones que le permite ser consumida por las fases larvales de los bivalvos filtradores. Constituye adems un alimento adecuado para los microherbvoros adultos tanto suspensvoros como sedimentivoros (Veneridae, Mytilidae, Pectinidae, etc.). La importancia de los integrantes del nanoplancton como Tetraselmis suecica fue comprendida mejor despus de las experiencias de Cole (1936), quien demostr que las larvas de Ostrea edulis no pueden ingerir partculas mayores a los 10 micrones, de lo cual se desprende que los estados larvales de algunos moluscos bivalvos dependen de este tipo de organismos para su alimentacin y desarrollo. Una vez que esto fue apreciado en su total dimensin, varios investigadores simularon las proliferaciones Fitoplanctnicas explosivas de primavera (Spring blooms) y crearon en el laboratorio las condiciones que favorecen el crecimiento del nanoplancton. As se pudieron cultivar los organismos que a fines de primavera y a principios de verano constituyen densas colonias en las frtiles y temperadas pozas que se forman en las depresiones de las rocas litorales. De este nanoplancton litoral, formado fundamentalmente por Chlorophyceas, es de donde se han aislado la mayora de las cepas que en la actualidad se emplean para la alimentacin de los estados larvales de los moluscos.

2.2.2 Medio de cultivo La produccin de microalgas se convierte en un campo muy atractivo para la investigacin en biotecnologa y acuicultura, posibilitando el desarrollo de sistemas de cultivo bajo condiciones bsicas que permita su produccin a

bajo costo como una apropiada alternativa para el desarrollo de unidades de cultivo a nivel masivo. En tal sentido, se han desarrollado una serie de medios de cultivo, destacando aquellos que utilizan agua de mar fertilizada y existe las posibilidades de realizar cultivos heterotrficos, los que segn Borowitzka (1997) son una buena alternativa para la produccin intensiva de microalgas. Asi mismo, Fabregas et. al. (1997), destacan que la actual tendencia de realizar cultivos heterotrficos posibilita la utilizacin de diversos aminocidos y vitaminas de sustancias orgnicas de desechos o residuos industriales, produciendo cambios importantes en el crecimiento y composicin bioqumica de las microalgas. Se han desarrollado diferentes medios para el cultivo de microalgas que van desde las frmulas para enriquecer el agua de mar natural, hasta el uso de medios artificiales que permitan resultados constantes en contraste con los resultados tan variables que brinda el uso del agua de mar natural que entre otros factores depende del lugar donde se colecta sta, y el tiempo de almacenamiento de la misma. Los medios artificiales se usan principalmente para fines experimentales, ya que como se ha mencionado, brinda resultados constantes, aunque existen algunas especies que no crecen en medios artificiales por factores desconocidos que afectan su crecimiento, las principales frmulas utilizadas van desde el agua de Miguel, que data de 1910, desarrollada por AllenNelson; el medio de End-Schereiber de 1934, hasta frmulas especficas para familias como la frmula del Laboratorio Haskins de Nueva York para diatomeas, 1975; Matthiesen & Thorner, 1966; Guillard F., 1973; Droop, 1975, 1979; Schoene, 1982, etc. Las principales formulaciones de los medios de cultivo, tanto de mantenimiento de cepas como de produccin masiva (minerales, enriquecidos y orgnicos).

Para la produccin de microalgas a nivel comercial se usa el agua de mar enriquecida con fertilizantes agrcolas (Urea, Fosfato triple, Nitrato de Amonio, etc.) (Chu, 1942, y Tamiya, 1957; SISFFA, 1964a) y tradicionalmente la fertilizacin de estanques con abonos orgnicos, en cultivos de especies herbvoras como las carpas. El fitoplancton se desarrolla y multiplica en relacin de las condiciones fisicoqumicas del medio. En trminos generales son los macronutrientes o factores limitantes del crecimiento el carbono, Nitrgeno, Fsforo, Silicio, Magnesio, Potasio y Calcio, que se requieren en cantidades relativamente grandes, mientras que los llamados micronutrientes (Fierro, Manganeso, Cobre, Zinc, Sodio, Molibdeno, Cloro y Cobalto) se necesitan en menores cantidades. Existen otros medios que incluyen en su composicin sustancias orgnicas (vitaminas, aminocidos) necesarios para aquellas especies de microalgas Auxtrofas, es decir que no sintetizan por medio de la fotosntesis este tipo de compuestos y resultan factores que pueden limitar su crecimiento; tal es el caso de Platimonas, Chrysophytas y algunas Bacillariophyceas. 2.2.3 Tipos de Cultivo 1. Cultivo Esttico

Desarrollo del cultivo hasta fase de crecimiento exponencial y la utilizacin del volumen total del mismo. Generalmente el uso de estos cultivos es para fines de bioensayo o bien para transferencia a volmenes mayores. 2. Cultivo Continuo

De acuerdo a Kubitschek (1970), un cultivo continuo es un sistema de flujo en el cual las clulas individuales estn suspendidas en un volumen constante en un estado de equilibrio dinmico, establecido por una remocin de cultivo y adicin de medio nutritivo por unidad de tiempo con tendencia al infinito. Se

habla de una diferencia entre un cultivo semicontinuo y un cultivo continuo. Al parecer sto es incorrecto, ya que la diferencia estriba en el nmero de perodos de remocin del cultivo y adicin del medio nutritivo y en los sistemas continuos este perodo de remocin y adicin es generalmente automtico en aparatos llamados turbidostatos y Quimiostatos. Cuando se requiere de grandes cantidades de clulas a intervalos frecuentes para alimentar especies en cultivo (peces, crustceos, moluscos), los cultivos semicontinuos o continuos proveen un gran nmero con mayor consistencia en forma uniforme y constante. En estos cultivos es importante determinar la concentracin ptima de los nutrientes por unidad de tiempo en relacin a la tasa de dilucin o cosecha del cultivo. Cuando se establece el estadio de equilibrio del sistema, la produccin es mxima. 3. Cultivo Masivo

Se considera cultivo masivo a aquellos que se utilizan como alimento vivo de peces crustceos y moluscos y cuya produccin es a gran escala en tanques u otros recipientes de volumen no controlado. Existen muchas alternativas para la produccin de microalgas en cultivo masivo, desde la utilizacin de tanques de plstico, madera, concreto hasta los estanques rsticos, as como la utilizacin de fertilizantes minerales de tipo agrcola hasta una gran variedad de escretas de ganado como fuentes de nutrientes. En relacin a la utilizacin de luz artificial o natural, sta depender del tipo de infraestructura con que se cuente. El control de la temperatura ser necesario en relacin del tipo de microalga en cultivo y de la regin climtica en donde se establezca el mismo.

2.2.3

Caractersticas principales de cultivo (pH, fuente de carbono,

micronutrientes) En cultivos masivos la aireacin es un factor muy importante para la homogenizacin de los nutrientes y para evitar la sedimentacin de las microalgas. Por ejemplo: las diatomeas suelen acumularse en lugares donde el agua no se mezcla, esto tambin depende de la forma del recipiente de cultivo que cuando no es adecuado retarda el crecimiento. Otro factor importante es la penetracin de la luz en el cultivo; en los cultivos masivos la profundidad es tan grande que la intensidad de la luz insidente no es suficiente para la fotosntesis, hasta el fondo del tanque. En los cultivos masivos a la intemperie la penetracin de la luz es ms efectiva, pero se debe reducir la intensidad de la luz fuerte, cubriendo estos estanques con una malla. En cultivos a gran escala es recomendable la inyeccin de CO 2 (0.5%) para contribuir al proceso fotosinttico. El crecimiento y la divisin celular son afectados por la intensidad de la luz y el fotoperiodo (horas de iluminacin y obscuridad) en relacin tambin a la temperatura, por ejemplo en Diatomeas a 20C y 1,000 lux se obtiene un crecimiento favorable.

Cuadro 3. Caractersticas de algunas de las especies de algas unicelulares utilizadas en acuacultura (Coll-Morales., 1983)

GENERO

CICLO

TEMPERATURA OPTIMA

DIAMETRO MEDIO

Phaeodactylum (diatomea) Skeletonema (diatomea)

10 h

25C

10.4

13.1 h

18C

>20

Dunaliella (cloroficea)

24 h

16C

17.8

Chlorella (cloroficea)

7.7 h

25C

Tetraselmis (cloroficea) Monochrysis (crisoficea)

18 h

18C

18.4

15.3 h

2025C

10

Isochrysis (crisoficea)

30.2 h

20C

10.2

Estas especies se han utilizado en acuicultura marina dados su valor nutritivo y digestibilidad, adems de su capacidad para crecer en cultivos masivos. La duracin del ciclo celular como los requerimientos de temperatura son susceptibles de variacin mediante seleccin de variedades.

Cuadro 4. Requerimientos principales de los cultivos de microalgas

REQUERIMIENTOS Fsicos Luz Temperatura Salinidad pH Redox Nutritivos C O, H N P S Na, K, Ca, Mg Fe, Zn, Mn, B, Br, Si Cu, Co, Cl, I, Sr, Rb, Al, et Vitaminas

COMPUESTOS QUIMICOS

VALORES 2,000 4,000 lux 15 22C 0.37 79

CO2CO3 O2H2O N2NH4+ NO3 PO4 SO4 Sales Sales Sales B12, tiamina, biotina

g/100 ml g/100 ml g/100 ml g/100 ml g/100 ml g/100 ml mg/100 ml g/100 ml g/100 ml

En esta tabla se exponen los requerimientos principales de los cultivos de microalgas y sus valores aproximados. En cada caso habr que estudiar los requerimientos particulares de la especie y de la variedad que se vaya a cultivar en las condiciones concretas de cultivo que se van a utilizar, por lo que estos datos son slo orientacin (Kinne, 1979). 2.3 JUSTIFICACIN.

Uno de los problemas ms graves en la acuacultura de moluscos, es el aprovisionamiento de microalgas. En la medida que se desarrollen tcnicas simples para su cultivo masivo, los problemas de produccin de larvas de moluscos se vern disminuidos grandemente. Actualmente en los centros de productores de semilla de moluscos, las microalgas son cultivadas en forma

discontinua. Su produccin se realiza en forma calendarizada, en donde la vida del cultivo es generalmente corta. Por otro lado la produccin de biodiesel a partir del aceite de cultivos de algas va saliendo poco a poco de los laboratorios para llegar a ser una realidad en plantas industriales. Las ventajas de esta tecnologa parecen contundentes: las algas tienen un alto rendimiento por superficie cultivada, bajos costes de produccin y no compiten con productos alimentarios como otros cultivos energticos. Adems algunas experiencias aprovechan las emisiones de CO2 de centrales trmicas o de otro tipo de industrias para el cultivo de las algas, convirtiendo un problema ambiental en materia prima para la produccin de combustible. En qu consiste la tcnica? Las algas necesitan tres componentes esenciales para su desarrollo: luz, anhdrido carbnico y agua. Algunas especies contienen un alto contenido en grasas, que resultan esenciales para la produccin de aceite o biodiesel. Se cultivan en balsas, tubos o canales de escasa profundidad, para permitir una mayor iluminacin. En su interior se mantiene un flujo y temperaturas constantes, y se inyecta CO 2 y nutrientes. Una vez desarrolladas, se extraen de su medio de crecimiento mediante un adecuado proceso de separacin y se extrae el aceite sin necesidad de secarlas de antemano. Los factores que controlan su crecimiento, como nutrientes o temperatura, deben estar monitoreados en todo momento y el enriquecimiento con CO2 posibilita la produccin de aceites y acelera el desarrollo. Se ha avanzado en la intensificacin de estos cultivos mediante la produccin en invernaderos, o en los llamados fotobiorreactores, sistemas cerrados que permiten el control y monitoreo de los distintos factores de crecimiento. Las algas han recibido considerable atencin como una promesa de gran fuente de petrleo de biocarburantes para aliviar la escasez de suministro y los precios elevados de las fuentes tradicionales de materia prima como soja, palma, colza, grasas animales, residuos de grasas, etc. Dado que la materia

prima puede contribuir aproximadamente el 80% del costo de produccin de biocombustibles, de mantenimiento de la materia prima de bajo costo y de fcil acceso es fundamental para el crecimiento continuo de la industria de los biocarburantes. Las algas se ha demostrado que producen un 25 - 100X ms petrleo y que requieren mucho menos agua para crecer por unidad de superficie en comparacin con otros cultivos como los biocombustibles soja. Adems, la falta de los componentes de los aceites (es decir, los hidratos de carbono y protenas) despus de la extraccin de petrleo pueden ser utilizados para una multitud de efectos - como insumos en la alimentacin animal, la alimentacin de los peces, fertilizantes, colorantes, etc. o utilizados para producir combustibles / energa a travs de la fermentacin, la gasificacin o la digestin anaerbica. Las algas consumen los insumos como la luz del sol, el agua, CO2 y nutrientes, y pueden generalmente ser cultivada en tierras no aptas para otros fines. La capacidad de ingerir el CO2 y producir oxgeno a travs de la fotosntesis es particularmente atractivo como un medio para reducir las emisiones de carbono. Es por este motivo que pretendemos cultivar nuestra alga con la finalidad de obtener niveles adecuados de biomasa para su posterior anlisis y de ser posible la aplicacin en obtencin de biocombustibles.

2.4. PROBLEMA. Cul ser el efecto de 4 concentraciones (A, B, C, D) de sanguaza en la produccin de biomasa de la microalga (Tetraselmis Suecica)? 2.5. HIPOTESIS. La concentracin C de sanguaza ser la que presente la mayor produccin de biomasa de la microalga (Tetraselmis suecica).

2.6 OBJETIVOS. 2.6.1. Objetivo General: -Evaluar la concentracin de sanguaza en la produccin de biomasa de la microalga de variedad (Tetraselmis suecica). 2.6.2. Objetivos Especficos: -Determinar la concentracin de sanguaza que permita obtener la mayor produccin de biomasa de la microalga (Tetraselmis suecica). 2.7 MATERIALES Y METODOS 2.7.1 MATERIAL: Material Biolgico y/o qumico Microalga Tetraselmis Suecica. Agua destilada Alcohol. Cloruro de Sodio al 30 % Hidrxido de sodio 0.1 N Acido actico Sanguaza CO2 y Oxigeno Lugol.

Material de Laboratorio Termmetro pH-metro Refrigerador Microscopio Electrnico Matraces Vaso de precipitacin Buretas Pipetas Soporte universal Laminas porta y cubre objetos Botellas de vidrio esterilizadas Tubos de ensayo Rejilla

Equipos Agitador magntico. Autoclave Mufla Centrifuga Compresora

Otros: Agujas Algodn Guantes quirrgicos Mangueras Mechero Micropipeta

2.7.2 METODOLOGIA Esquema experimental

Sanguaza

Determinacin proximal de la sanguaza

P1

P2

P3

P4

Proporcin sanguaza/agua de mar

Produccin de biomasa

Velocidad especfica de crecimiento Tiempo de generacin

Mayor crecimiento

Determinacin de composicin proximal

Leyenda: C: control con CO2 P1: proporcin sanguaza/agua de mar: 2.5/100 P2: proporcin sanguaza/agua de mar: 5/100 P3: proporcin sanguaza/agua de mar: 10/100 P3: proporcin sanguaza/agua de mar: 20/100 Figura 2. Esquema experimental para la evaluacin del efecto de cuatro

proporciones sanguaza/agua de mar en la produccin de biomasa de Tetraselmis suecica. Microalga Tetraselmis suecica La microalga T. suecica fue obtenida del laboratorio de Cultivos de Especies Auxiliares de la Facultad de Ciencias de la Universidad Nacional del Santa. El cultivo de esta microalga se realiz en botellas de plstico de 1500 ml utilizando agua de mar previamente tratada y enriquecida con medio f/2 de Guillard bajo condiciones controladas de iluminacin y aireacin.

Tratamiento del agua de mar El agua de mar empleada fue trada de la playa Buenos Aires. Inicialmente se dej sedimentar el agua por 24 horas y luego para eliminar las impurezas se filtro con una malla de 2 de dimetro, seguidamente se le agrego 1ml de hipoclorito de sodio por cada litro de agua de mar, dejndolo reposar por 12 horas. Posteriormente se neutraliz y esterilizo el agua en autoclaves. Este proceso permiti eliminar los microorganismos que pudieran interferir en el crecimiento microalgal. Tratamiento de la Sanguaza La sanguaza utilizada fue adquirida del terminal pesquero de Buenos Aires, dicha sanguaza fue debidamente esterilizada con bao Mara y luego congelada y sedimentada tomando como medio de cultivo el sobrenadante. Preparacin de unidades experimentales Control

El control fue preparado con agua de mar previamente esterilizada en una botella de vidrio (1250 ml de agua de mar) para dicha esterilizacin de utilizo el autoclave por tiempo de 1 hora a 1 bar de presin, 250 ml de inoculo y 1.25 ml de medio Guillard (1ml/L). Unidades experimentales Cuatro unidades experimentales iniciales con concentraciones de 2.5, 5, 10, 20 % de sanguaza, 250 ml de inoculo para cada una y no se utilizo medio guillard.

SEDIMENTACIN

AGUA DE MAR NATURAL

Filtrar con malla de 2 de dimetro

CLORACIN

1ml L HIPOCLORITO DE SODIO

-1

12 HORAS

ESTERILIZACION

Autoclaveado 1 Bar por 60 min.

1 HORA

AGUA DE MAR TRATADA

CULTIVO ALGAL

Fig. 3. Esquema de la secuencia para la esterilizacin del agua de mar natural segn Merino et. al., (2003). Preparacin y volumen del Inculo Antes de la ejecucin del proyecto el inculo se preparo con agua de mar tratada y medio Guillard f/2, los cuales estuvieron confinados en matraces de 500 ml con un volumen de cultivo de 250 ml., teniendo una agitacin mecnica de manera peridica.

Cuadro 5. Clulas/ml obtenidas a diferentes concentraciones de sanguaza

% Control 2.5 % 5% 10 % 20 % CC de N (cel/mL) pH T (C) Sanguaza

Diseo experimental Superficies de Respuesta. La metodologa de superficies de respuesta es un conjunto de tcnicas matematicas y estadsticas utilizadas para modelar y analizar problemas en las que una variable de inters es influenciada por otras. El objetivo es optimizar la variable de inters. Esto se logra al determinar las condiciones

ptimas de operacin del sistema. En las figuras 4, 5, 6, 7 se presentan diferentes modelos de superficie de respuesta: Figura 4. Ecuacin de tiempo mximo.

Figura 5. Curvas de nivel

Figura 6. Puntos de ensilladura

Figura 7. Puntos de ensilladura

2.2.5.

Diseo Central Compuesto Rotacional.

Este diseo consiste en un factorial o factorial fraccionado 2 k donde los factores son codificados de tal manera que el centro sea(0,0,...,0) aumentado por 2k puntos axiales (,0,0,...,0),(0, ,0,...0),(0,0, ,0),(0,0,..., ) y n puntos centrales(0,0,...,0).De acuerdo a Montgomery(1991) este modelo es probablemente el ms usado. Este diseo se convierte en rotable mediante la eleccin de , esta se calcula de la siguiente manera (Montgomery ,1991). = (2k)1/4 Algunos de estos valores de estn descritos en el Cuadro 6. Cuadro 6. Algunos valores de

2 1,4142

3 1,6818

4 2,0000

5 2,3784

6 2,8284

Otra propiedad til del diseo es que puede crecer a partir de un diseo 2 k de primer orden, agregando puntos axiales y quizs algunos puntos centrales. Con la eleccin del nmero de puntos centrales (n 0) el diseo puede hacerse ortogonal o transformarse en uno de precisin uniforme.

Figura 8. Esquema del diseo Central Compuesto Rotacional

Se trabajar con un Diseo Experimental para dos (2) variables independientes.

MATRIZ Tetraselmis suecica Cuadro 7. Valores utilizados en DCCR para dos factores

VARIABLES X1: Concen. sanguaza X2: pH -1.4142 2 7 -1 2.44 7.29

NIVELES 0 3.5 8

1 4.56 8.71

1.4142 5 9

Cuadro 8. Variables codificadas y natural en DCCR para dos factores

Variables codificadas Ensayos X1 X2 1 -1 -1 2 1 -1 3 -1 1 4 1 1 5 0 -1.4142 6 0 1.4142 7 -1.4142 0 8 1.4142 0 9 0 0 10 0 0 11 0 0 12 0 0

Variables naturales Concentracin pH 2.44 7.29 4.56 7.29 2.44 8.71 4.56 8.71 3.5 7 3.5 9 2 8 5 8 3.5 8 3.5 8 3.5 8 3.5 8

MODELO DE GOMPERTZ PARA LA PREDICCION DEL CRECIMIENTO DE BIOMASA EN EL ALGA Tetraselmis Suecica 1. 2. Usar software Statistica 7.0 Aplicar el modelo de Gompertz en cada uno de los conjuntos de

datos. Calcular los parmetros de regresin e interpretar los parmetros biolgicos. YA = a * exp (- exp (b c * TA)) 3. Analizar cualitativamente la influencia de la temperatura sobre los

parmetros biolgicos obtenidos.

4.

Donde: YA = Log (N/No) TA = Tiempo

A = a (para calculo de poblacin mxima) = (b 1)/c Umax = a*c TG = Ln(2)/Umax

Cuadro 9. Valores obtenidos del modelo de Gompertz para 12 tratamientos

tratamiento 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 a b c R

11 12

Las respuestas obtenidas del Cuadro 7 sern analizadas mediante el programa STATISTICA 7.0 para ver los efectos de cada variable.

Cuadro 10. Parmetros obtenidos de la aplicacin del modelo matemtico de Gompertz para 12 tratamientos
PH 7.29 7.29 8.71 8.71 7 9 8 8 8 8 8 8 % CONC. 2.44 4.56 2.44 4.56 3.5 3.5 2 5 3.5 3.5 3.5 3.5 max TG

T 01 T 02 T 03 T 04 T 05 T 06 T 07 T 08 T 09 T 10 T 11 T 12

Luego de obtenido estos parmetros nuevamente hacemos uso del statistic 7.0 para obtener nuestro modelo de superficie de respuesta.

Bibliografa

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