Sunteți pe pagina 1din 119

Lorentz JNTSCHI Mihaela Ligia UNGUREAN

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Editura Amici Cluj-Napoca 2002

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Lorentz JNTSCHI
Nscut la 8 Ianuarie 1973 n Fgra, Braov. Absolvent n anul 1991 al Liceului Teoretic Radu Negru Fgra al seciei cu profil Mecanic, Liceniat n Informatic (1995), Chimie i Fizic (1997), Doctor n tiine Exacte, Specializarea Chimie Organic i Computaional (2000) la Universitatea Babe-Bolyai Cluj-Napoca, Master n Ameliorarea Plantelor i Controlul Calitii Seminelor i Materialului Sditor la Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar din Cluj-Napoca (2002). ef de lucrri la Universitatea Tehnic Cluj-Napoca. http://lori.east.utcluj.ro, jlorentz@clujnapoca.ro

Mihaela Ligia UNGUREAN


Nscut la 17 Iunie 1972 n Gilu, Cluj. Absolvent n anul 1990 al Liceului de Matematic i Fizic Lucian Blaga Cluj-Napoca, Liceniat n Chimie i Fizic (1995), Master n Electrochimie Aplicat (1996), doctorand n tiine Exacte, specializarea Cinetic Chimic (2000) a Universitii Babe-Bolyai Cluj-Napoca. ef Lucrri la Universitatea Tehnic ClujNapoca. mihaela.unguresan@clujnapoca.ro
Descrierea CIP a Bibliotecii Naionale a Romniei JNTSCHI, LORENTZ Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental / Lorentz Jntschi, Mihaela Ligia Ungurean. Cluj-Napoca: Amici, 2002 p. 120; 18.2 25.7 cm. Bibliogr. ISBN 973-85727-0-3 I. Ungurean Mihaela Ligia 544

Editura Amici
Aleea Micu nr. 15 3400 Cluj-Napoca Tel. 0264 166548, Fax 0264 166548 Director: Prof. dr. Alexandru LASZLO Redactor ef: Dr. Lorentz JNTSCHI

Colecia TECHNICAE

Copyright 2002 dr. Lorentz JNTSCHI


Toate drepturile asupra lucrrii aparin primului autor. Reproducerea integral sau parial a textului sau ilustraiilor este posibil numai cu acordul prealabil scris al primului autor. Tiparul executat la Atelerul de multiplicare al UTC-N.

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

CUPRINS
1. Introducere ............................................................................................... 5 2. Prelevarea probelor gazoase..................................................................... 8 3. Prelevarea probelor solide i lichide. Prepararea soluiilor.................... 12 4. Determinarea densitii materialelor...................................................... 21 5. Analiza de sedimentare .......................................................................... 28 6. Concentraie micelar ............................................................................ 34 7. Determinarea pH-ului cu electrodul de chinhidron .............................. 40 8. Gravimetria i volumetria cuprului ........................................................ 45 9. Complexare ............................................................................................ 50 10. Cromatografie ........................................................................................ 54 11. Metoda cinetic de determinare a izotermelor de desorbie .................. 64 12. Analiza spectrelor n infrarou............................................................... 70 13. Analiza spectrofotometric a Cobaltului................................................ 79 14. RMN i simetria molecular .................................................................. 83 15. Voltametrie ciclic ................................................................................. 96 16. Tensiunea de descompunere i curba de pasivare................................ 104 17. Electroforez ........................................................................................ 111 18. Referine............................................................................................... 118

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Introducere

Lucrarea Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental cuprinde un numr de 16 experimente cu caracter didactic din domeniul analizei fizico-chimice a materialelor i a apelor uzate din industrie. Prelevarea probelor, operaia premergtoare oricrei analize este tratat pe parcursul a dou lucrri practice, de prelevare a probelor gazoase i de prelevare a probelor lichide i solide. Determinarea densitii, dizolvarea probelor i prepararea soluiilor, analiza de sedimentare i concentraia micelar sunt dezvoltate pe parcursul a 4 lucrri. Determinarea pH-ului, gravimetria, volumetria, complexarea i adsorbia ncheie setul de experimente de analiz chimic n faz lichid. Analizele electrochimice n faz lichid sunt reprezentate prin voltametrie, electroforez i studiul tensiunii de descompunere i pasivare. Analizele chimice instrumentale sunt desfurate pe parcursul a 4 lucrri: cromatografie, analiza spectrelor n infrarou i analiza spectrofotometric a Cobaltului i studiul spectrelor de rezonan magnetic nuclear n corelaie cu simetria molecular. Introducerea experimentelor de simulare (cum este cazul la instrumentaia complex de analiz) face ca timpul necesar asimilrii conceptelor i noiunilor specifice de analiz i costurile de exploatare aferente fiecrei metode s fie scurtate mult. De asemenea, numrul mare de posibiliti i parametrii oferii de programele utilizate face ca utilizatorii acestor programe s dobndeasc flexibilitatea necesar unei analize pe probe cu compoziie necunoscut sau de concentraii necunoscute. Analiza literaturii de specialitate din domeniu a reprezentat punctul de pornire n alctuirea coninutului. Astfel, lucrarea 1 trateaz schimbrile din 5

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

sol datorit climei n depozitele glaciale. Aici se remarc c cronofunciile solului sunt adesea cvasiliniare, dar aceste relaii sunt adesea valabile doar grosier, generalizri fortuite care ignor schimbrile n soluri datorate climei i altor cicluri externe, influene care guverneaz formarea i degradarea solului. Lucrarea prezint aspecte legate de aceste influene asupra munilor Rocky (U.S.A.) i aici analiza solului a permis estimarea anilor de sedimentare. ntr-un detaliat studiu al solurilor din Wind River Range i Wind River Basin s-au relevat caracteristici ale straturilor de suprafa care nu urmeaz trendul anual. Oricum, urmrind compoziia n carbonai a straturilor se obin caracteristici corelate anual. Se observ astfel importana analizelor de sol n studiul de mediu. Numeroase studii i cercetri, finalizate prin conferine tiinifice i articole se fac relativ la influenele pesticidelor i altor tratamente chimice asupra ecosistemului. Astfel, lucrrile conferinei 2 trateaz aspectele legate de efectele asupra sntii umane n ecosistemele din vecintatea Marilor Lacuri i bazinului St. Louis Lawrence River (U.S.A.). S-a relevat o impresionant cantitate de noi cunotine i instrumente de aplicare a acestor cunotine doar n anii 1994-1996, de cnd o ntlnire similar a avut loc n Detroit (U.S.A.). Se poate spune c n domeniul expunerii sunt informaii linititoare aa cum o dovedesc studiile nivelelor pentru poluanii toxici persisteni care au deczut dramatic, cu precdere din anii 1970 ctre anii 1980, care arat c trendul n timp al acestor poluani a sczut. Acest declin n nivelele de contaminare n U.S.A. reprezint un succes n prevenirea primar, care se coreleaz ns cu aciunile n parteneriat ale ageniilor de mediu, ageniilor de reglementare, care au fcut ca industria s-i adapteze tehnologiile pentru a reduce emisiile n mediu. S-a artat c datele msurate dovedesc c nu este nici o diferen semnificativ n ceea ce privete concentraia poluanilor n bazinul Marilor Lacuri dect n alt parte. 3

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Pentru apariia acestei lucrri trebuie aduse mulumiri Ministerului Educaiei i Cercetrii, care prin finanarea cercetrii dr. Lorentz JNTSCHI prin Granturile de Cercetare ctigate n competiie: B25/6113/MCT/ANSTI, "T"/2000, B52/6113/MCT/ANSTI, "L"/2000, B20/34970/MEC/CNCSIS, "S"/2001, 2576/34970/MEC/ANSTI, "C"/2001, 48/1217/MEC/CNCSIS, "A"/2001, 281/MEC/CNCSIS "A"/2002, 468/MEC/CNCSIS "A"/2002 a fcut posibil studiul aferent realizrii acestei lucrri. Modelul de conduit i profesionalismul Prof. Dr. Ing. Gheorghe LAZEA, rectorul Universitii Tehnice i Prof. Dr. Horea NACU, eful Catedrei de Chimie au constituit un exemplu deosebit de motivant n realizarea i redactarea materialului, i pe aceast cale dorim s le adresm mulumiri. Lucrarea se adreseaz ndeosebi studenilor Facultii de tiina i Ingineria Materialelor din Universitatea Tehnic Cluj-Napoca, seciilor de tiina Materialelor, Turnarea Metalelor, Deformri Plastice i Tratamente Termice i Ingineria i Protecia Mediului n Industrie, a cror pregtire presupune cunoaterea metodelor de analiz chimic i instrumental. Cluj-Napoca, 11.11.2002 Autorii

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Prelevarea probelor gazoase

1. Consideraii teoretice Exist 3 metode de baz pentru colectarea gazelor. Acestea sunt: prin expansiune ntr-un container ce poate fi ulterior evacuat; prin splare; prin nlocuire cu un lichid. n toate cazurile, trebuie s se cunoasc volumele vaselor de colectare, temperatura i presiunea. n mod obinuit, vasele de colectare sunt confecionate din sticl i trebuie prevzute cu un orificiu de intrare i unul de ieire ce pot fi nchise i deschise, n mod convenabil. Pentru a elimina contaminarea probelor, se recomand splarea exterioar a containerului cu gazul din care se preleveaz proba. Concepia dispozitivului de prelevare a probei trebuie s permit ca acest procedeu s se execute cu uurin. Aerul este un amestec complex de diferite gaze. Compoziia sa real este dependent de mediul nconjurtor i de locul de unde se ia proba. n prezent, datorit polurii, multe eforturi sunt ndreptate pentru studiul i supravegherea calitii aerului. Se pot determina din aer prezena diferiilor compui care dau reacii de culoare specifice, cantitatea de anioni din aer (prin reacia acestora cu o soluie bazic) sau cantitatea de cationi din aer (reacia cu o soluie acid). 2. Aparatura experimental Pentru colectarea unei probe de aer este necesar un colector pentru prob, pentru a msura volumul probei de aer. Se va determina concentraia

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

de anioni din aer, prin titrarea acestora cu o baz (NaOH). Instalaia experimental este reprezentat n fig. 1.

manson de cauciuc

apa

apa aer

Fig. 1. Instalaie pentru colectarea probelor de aer 3. Algoritmul de lucru 1. Se msoar temperatura ambiant T cu termometrul; 2. Se msoar presiunea ambiant p cu barometrul; 3. Se adaug soluia de captare V (20 ml. sol. CaCl2 0.1M i 20 ml. sol. NaOH 0.1M) i se completeaz cu ap distilat pn peste nivelul tubului inferior; 4. Se adaug un indicator cu domeniul de viraj n apropierea lui pH = 7 (albastru de bromtimol); 5. Se msoar diametrul tubului de admisie a aerului din vecintatea manometrului; fie acesta d; 6. Se pornete trompa de ap astfel nct debitul s fie constant, vizibil i mic;

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

7. Se pornete cronometrul; se cronometreaz timpul pn la care se observ virajul culorii soluiei de captare; fie acesta t. 4. Interpretarea rezultatelor Din egalarea presiunii dinamice a curentului de aer cu presiunea determinat de denivelarea coloanei de lichid n manometru, rezult viteza de curgere a aerului prin tub: v = 2gh l , aer (1)

unde g acceleraia gravitaional (g = 9.8065 ms-2), h denivelarea coloanei de lichid (m), l este densitatea lichidului din manometru (ap, l = 1000 kg/m3), aer este densitatea aerului n condiiile de temperatur i presiune din laborator, care se obine din formula:

aer =

pM , R T

(2)

unde p presiunea atmosferic (n N/m2), M masa molar a aerului (M = 28.910-3 kg/mol), R constanta gazelor (R = 8.31 J/molK), T temperatura absolut (K). Volumul de aer care a consumat ntreaga cantitate de NaOH este dat de relaia: V = vtS, seciunea tubului: S = d2/4 (4) Cantitatea de anioni care a neutralizat soluia rezult din pasul 3 de la algoritmul de lucru, i se obine din cantitatea de NaOH neutralizat. Aceasta este: nNaOH = 2010-310-1 l(mol/l) = 210-3 mol = 210-3 Eg; Concentraia normal a anionilor din aer este: cN,aer = nNaOH/V. 10 (5) (3) unde v este viteza (vezi relaia 1), t timpul de neutralizare (s) iar S (m2) este

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Se efectueaz calculele (relaiile 1-5). 5. ntrebri i probleme 1. Care este semnificaia unei analize raportate pe baza probei primit ca atare; 2. Analiza unei probe de gaz arat astfel: m(N2) = 20g; m(O2) = 4g; m(NO) = 2g; m(CO2) = 2g; m(CO) = 3g; Calculai raportul molar al elementelor prezente n prob i raportul volumelor de gaze.

11

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Prelevarea probelor lichide i solide. Prepararea soluiilor

1. Consideraii teoretice Luarea probelor din lichide pure sau omogene este direct i n mod uzual, se poate folosi orice dispozitiv care nu distruge puritatea sau omogenitatea. Prelevarea probelor din amestecurile lichide eterogene ridic unele probleme mai dificile. Procedeul ntrebuinat se selecioneaz n funcie de amestecul supus analizei, dac este o suspensie, o emulsie, o mixtur de faze lichide nemiscibile sau un lichid coninnd reziduuri solide. Cnd amestecul lichid este instabil (de exemplu o emulsie), dac conine componeni volatili, sau dac conine gaze dizolvate, intervin dificulti suplimentare. n general, prile alicote1 sunt prelevate la ntmplare de la diferite adncimi i din toate locurile din proba de lichid. Acestea pot fi analizate n mod separat sau pot fi combinate pentru a da o prob cu compoziie, n mod static, reprezentativ pentru proba original. Amestecurile de lichide nemiscibile sunt destul de frecvente n tehnic. Cele mai cunoscute sunt amestecurile de ulei + ap i benzine + ap. Deversrile de produse petroliere accidentale sunt evenimente foarte neplcute pentru ecosisteme. Pentru aceste amestecuri separarea fazelor, msurarea raportului de amestecare i apoi analiza cantitativ a fraciilor separate sunt metode uzuale n analiza instrumental a lichidelor. Pe lng miscibilitate (exprimat n procente de mas n mod uzual) o alt mrime caracterizeaz amestecurile de lichide: coeficientul de distribuie,
1

alicot adjectiv feminin, termen matematic, din francezul aliquote; parte alicot = parte a unui tot, coninut n el de un anumit numr ntreg de ori; alicuante adjectiv, feminin, termen matematic, din francezul aliquante; parte alicuant = parte care nu intr de un numr exact de ori ntr-un tot;

12

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

care este definit pentru repartiia unui compus prezent n amestec ntre cele dou faze, exprimat n raport de mase. n tabelul urmtor sunt redate cteva valori de miscibilitate i coeficieni de distribuie solvent/ap:2
Tabelul 1. Valori ale coeficientului de distribuie la repartiia acidului acetic i miscibilitatea cu ap pentru civa solveni la 20C

Solvent n-Butanol Acetat de etil MBIK Toluen n-Hexan

Coeficient de distribuie 1.6 0.9 0.7 0.06 0.01

Miscibilitate cu ap (% de mas) >10 10 2.0 0.05 0.015

Amestecurile de separat pot avea compoziii foarte variate. n tabelele 2 i 3 sunt redate compoziiile pentru dou tipuri de uleiuri: 2
Tabelul 2. Compoziia unui ulei sintetic Tabelul 3. Compoziia unui ulei de rezervor

Component Procente molare Metan 35 Etan 3 Propan 4 n-Butan 6 n-Pentan 4 n-Hexan 3 n-Heptan 5 n-Octan 5 n-Decan 30 n-Tetradecan 5

Component Procente molare Metan 32.54 Etan 9.09 Propan 7.73 i-Butan 1.36 n-Butan 4.28 i-Pentan 1.67 n-Pentan 2.30 Hexan 38.41 Azot 1.19 Dioxid de carbon 0.63

Diagramele de miscibilitate redau regiunile de concentraie la care 2 sau mai multe lichide sunt amestecate complet (complect miscibile). Cele mai cunoscute sunt diagramele de miscibilitate ternare. n acestea, curbele de miscibilitate reprezint frontierele de la care amestecurile nu mai sunt amestecate complect. n figurile 1 i 2 sunt redate 2 astfel de diagrame.3

2 3

http://www.cheresources.com/extraction.shtml SPE19809, Predicting Retrograde Phenomena and Miscibility Using Equation of State, G. A. Mansoori, J. L. Savidge, 1989, Society of Petroleum Engineers, USA.

13

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

CO2 (100%)

n-C10H22 (50%)

n-C4H10 (50%)

Fig. 1. Amestecul ternar CO2+C10H22+C4H10 la T = 71 C i p = 102 atm.

CH4 (100%)

C3H8 (100%)

C2H6 (100%)

Fig. 2. Amestecul ternar CH4+C2H6+C3H8 la T = 10 C i p = 75 atm. Analiza solidelor se poate face direct n faz solid prin metode de emisie sau absorbie de radiaie n arc sau n flacr sau prin trecerea materialului solid sub form de soluie prin dizolvare cu sau fr schimbarea 14

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

strii de oxidare a elementelor constituente, urmnd ca determinarea compoziiei s se fac apoi n faz lichid prin metode specifice. Dac solidul este omogen, orice poriune poate fi selectat ca fiind reprezentativ. Pentru un solid eterogen, trebuie pregtit un plan care s permit prelevarea statistic a tuturor seciunilor solidului. Luarea probelor se poate face manual sau n mod mecanic, cnd materialul de analizat are o mas mare. Nu este ntotdeauna posibil s se obin, n mod statistic, o prob reprezentativ. De exemplu, este evident o sarcin dificil s se determine compoziia suprafeei lunii. Pornind de la o cantitate limitat de roci i praf, luarea probelor s-a bazat parial pe mrimea particulelor i parial pe starea lor fizic. Mrimea particulei este un parametru important la prelevarea probelor dintr-o substan solid, deoarece compoziia particulelor de diferite mrimi poate varia. n general, transformarea unei probe mari ntr-o prob de mrime convenabil pentru analiz cere mai nti, reducerea probei la o mrime de particule uniform i n al doilea rnd, reducerea masei probei. O mrime de particule uniform se obine trecnd proba prin concasoare, pulverizatoare, mori sau mojare. Poate fi utilizat de asemenea i sitarea pentru granule, sau pilirea pentru metale. Oricare ar fi procedeul ales, este necesar s se asigure ca prin aceste operaiuni s nu se contamineze proba. 2. Aparatura experimental Practic, se va realiza un amestec de lichide nemiscibile, dup care, cu ajutorul unei plnii de separare se vor separa cele dou faze (fig. 3). La sistemele de lichide azeotrope bicomponente separarea celor dou faze nu este total la care unul din componeni este apa, iar cellalt este un lichid parial miscibil cu apa, aa cum reiese din tabelul 1. Pentru amestecurile considerate se va determina i miscibilitatea acestora n ap. 15

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Fig. 3. Instalaie de separare la lichide nemiscibile De asemenea, se va preleva o prob de la un metal prin metode specifice (achiere, mrunire, pilire) i se va trece n faz lichid prin reacie cu un acid. n analiza metalelor, trecerea n faz lichid a metalului n soluia sa ionic este urmat de analiza cantitativ a cantitii de metal din soluie. Pentru aceasta se utilizeaz soluii cu concentraii cunoscute i exacte, numite soluii etalon. Cel mai uzual mijloc de determinare a cantitii de metal este prin titrare. Prepararea unei soluii etalon de concentraie cunoscut este operaiunea care precede titrarea propriu zis. Se va lua o prob solid, se va cntri dup care se va dizolva ntr-un solvent potrivit. 3. Algoritmul de lucru 1. Se efectueaz analiza unui amestec de lichide astfel: 1.1. Se introduce o cantitate volumetric cunoscut (se folosete un cilindru gradat sau o biuret) din primul lichid (ap) n plnia de separare pn la aproximativ din volumul plniei; fie V1 acest volum; 1.2. Se introduce o cantitate volumetric cunoscut (se folosete un cilindru gradat sau o biuret) din al doilea lichid (benzen, benzin, 16

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

ulei, aceton) n plnia de separare pn la aproximativ din volumul plniei; fie V2 acest volum; 1.3. Se pune dopul la plnie; 1.4. Se omogenizeaz amestecul prin agitare continu aproximativ 3 minute; 1.5. Se las plnia pe stativ pentru separarea fazelor aproximativ 10 minute; 1.6. Se scoate dopul de la plnie; 1.7. Se recolteaz ntr-un vas prima faz a amestecului bicomponent; 1.8. Se recolteaz ntr-un vas a doua faz a amestecului bicomponent; 1.9. Se msoar volumul fazei apoase (cu ajutorul unui cilindru gradat sau a unei biurete); fie acesta V3; 1.10. Se msoar volumul fazei apoase (cu ajutorul unui cilindru gradat sau a unei biurete); fie acesta V4; 1.11. Se recupereaz al doilea lichid iar faza apoas (apa) se arunc la chiuvet; 1.12. Se exprim n procente compoziia iniial a amestecului, folosind formulele: cV1[%] = V1 V2 100 , cV2[%] = 100 V1 + V2 V1 + V2

1.13. Se exprim n procente compoziia final a amestecului, folosind formulele: cV3[%] = V3 V4 100 , cV4[%] = 100 V3 + V4 V3 + V4

1.14. Se exprim miscibilitatea n ap a celei de-a doua faze a amestecului n procente de volum folosind formula: MH2O[%] = V2 V4 100 V1

2. Se efectueaz analiza unei probe solide astfel: 2.1. Se fixeaz proba solid n menghin; 17

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

2.2. Se pilete proba pentru a obine o mostr de aproximativ 10 mg; fie m1 (n grame) masa acesteia; 2.3. Se cntrete mostra cu ajutorul balanei analitice; fie masa ei m; 2.4. Se introduce proba ntr-o eprubet i se trateaz cu un volum cunoscut V5 de acid clorhidric de normalitate cunoscut (30 ml HCl 0.1N); 2.5. Se las pe stativ h s reacioneze; 2.6. Se urmrete dac mostra a reacionat cu HCl. Dac a reacionat complet, se recupereaz soluia pentru a fi analizat cantitativ; 2.7. Se titreaz soluia cu o soluie volumetric de NaOH (NaOH 0.1N) pn la virajul culorii indicatorului (pH = 7); fie V6 volumul de NaOH adugat. 2.8. Volumul de acid necesar pentru a neutraliza acidul este V5-V6; se calculeaz echivalent-gramul metalului cu formula: Eg(Me) = m1/(V5-V6)0.136.5 2.9. Pentru probe de metale cunoscute se calculeaz starea de oxidare a ionului metalic n clorura acestuia din masa sa molecular M(Me) cu formula: N.O.(Me) = Eg(Me)/M(Me) 2.10. Acesta poate fi unul dintre metalele situate n faa hidrogenului n seria activitilor chimice (care sunt aceste metale?). Dac proba nu a reacionat, se recupereaz acidul iar mostra conine un metal situat dup hidrogen n seria activitilor chimice (care sunt aceste metale?) i proba se va trata n mod analog (paii 2.4-2.9) cu o soluie de oxiacid (H2SO4 sau HNO3). 3. Se va prepara o soluie volumetric a unei sri metalice solubile i i se va calcula concentraia obinut astfel: 3.1. Se alege proba solid; aceasta va fi un sulfat solid al unui metal (MeSO4nH2O, n0); 3.2. Se ia o mostr, de aproximativ 1g; 18

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

3.3. Se cntrete mostra; fie masa acesteia m2; 3.4. Se introduce ntr-un balon cotat; se noteaz volumul balonului; fie acesta V7; 3.5. Se adaug ap distilat pn la cot; 3.6. Se dizolv proba prin agitare, pn la dizolvarea complet; 3.7. innd seama de specia metalic (Me = Cu sau Me = Mg) i folosind formulele de mai jos se calculeaz concentraia molar a ionilor de metal din soluie, Me 2+ : M(MeSO4nH2O) = M(Me) + 96 + 18n; Me 2+ = m/M(MeSO4nH2O); [Me2+] = Me 2+ /V. 4. Se prezint rezultatele. 4. ntrebri i probleme 1. S se explice de ce materialele eterogene necesit un procedeu statistic pentru luarea probelor, n timp ce pentru materialele omogene nu este nevoie. 2. S se sugereze un procedeu adecvat pentru obinerea unei probe reprezentative dintr-o suspensie de MgO n ap. 3. S se explice de ce se prefer reducerea unei probe eterogene solide la o mrime uniform de particule. 4. Care este semnificaia unei analize raportate pe baza probei primit ca atare. 5. S se propun un procedeu pentru dizolvarea fiecreia din urmtoarele substane: a. Fe(NO3)3; b. Na2CO3; c. CaCO3; d. BaSO4; 19

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

e. Silicat de sodiu; f. Minereu de fier; g. Zn; h. Alam (Cu-Zn-Pb-Sn). 6. Se prepar un solvent organic ce conine: a. 4g ester benzilic (M = 392.6 g/mol, = 1.036 g/cm3), b. 5g 2-brom-propen-(1) (M = 120.98 g/mol, = 1.396 g/cm3), c. 6g 1,2-dibrom-benzen (M = 235.92 g/mol, = 1.965 g/cm3). Calculai compoziia procentual n procente de volum a solventului. 7. La analiza cantitativ a unei soluii feroase (Fe2+) se consum pentru trecerea la ionul feric (Fe3+) 10ml de soluie de Ce4+ 0.1M care trece n Ce3+. Care este cantitatea de fier prezent n prob?

20

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Determinarea densitii materialelor

1. Consideraii teoretice Materialele solide granulare sunt deseori utilizate n industria chimic ca materiale prime, produse sau catalizatori. Caracteristicile tehnice de baz pentru materialele solide care determin n mare msur proprietile i calitatea acestora sunt: dispersia (compoziia granulometric); densitatea (real, aparent i n grmad sau n vrac); suprafaa specific; structura porilor. Dac aceste caracteristici nu sunt cunoscute este imposibil s se determine parametrii unui proces, s se ating randamentul scontat sau s se asigure calitatea necesar a produselor. Densitatea materialelor este un parametru fizic important, fiind n strns interdependen cu principalii parametri mecanici ai materialelor (solide). Ea se definete ca fiind masa unitii de volum: = m (g/cm3, kg/m3) V (1)

n cazul materialelor solide, se pot exprima mai multe densiti, n funcie de natura volumului la care se raporteaz masa materialului. n funcie de structura lor, toate materialele solide pot fi mprite n dou categorii: materiale compacte; materiale poroase.

21

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Majoritatea materialelor, naturale sau artificiale, sunt poroase. Practic, pot fi considerate ca materiale perfect compacte urmtoarele: metalele, sticla i unele materiale din polimeri. La materialele compacte se poate exprima un singur fel de densitate densitatea real (sau densitatea absolut), deoarece volumul materialului compact reprezint volumul real (absolut) al solidului. La materialele poroase se poate exprima densitatea real, definit ca masa raportat la volumul real al materialului i densitatea aparent, definit ca masa raportat la volumul aparent al materialului: reala = m m ; aparenta = Vreal Vaparent (2)

Volumul real reprezint volumul ocupat numai de substana solid din material (fr pori). Volumul aparent reprezint volumul sub care apare corpul, deci cu pori cu tot. Acesta, evident este mai mare dect volumul real deci exist relaiile: Va >V i a < Unele materiale apar sub form de granule sau pulberi (nisip, pietri, ciment, ipsos, etc.). Volumul acestor materiale se determin de obicei n vrac i se numete volum n grmad. Densitatea n vrac (grmad) se definete ca fiind masa unitii de volum a unui material solid granular, lund n considerare i volumul total al spaiilor libere (respectiv golurile de aer dintre granule). Volumul n grmad este compus din volumul aparent al granulelor de materiale i volumul golurilor de aer dintre granule: Vg = Va + Vgol (3) Volumul interspaiilor (golurilor) dintre granule depinde de starea de tasare a materialului, lundu-se n considerare situaiile externe la tasarea materialului i anume: volumul n grmad n stare afnat (Vga);

22

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

volumul n grmad n stare ndesat (Vgi). La materialele granulare, se pot exprima densitatea n grmad n

stare afnat (ga) i densitatea n grmad n stare ndesat (gi): ga = m m ; gi = Vga Vgi (4)

Compactitatea este gradul de umplere al unui corp cu material solid. Ea se exprim ca raportul dintre volumul real i volumul aparent al materialului. C= Vr m m ; Vr = ; Va = ; C= a Va r a r (5)

Porozitatea este dat de totalitatea volumului porilor coninui ntr-un material. Aceasta reprezint porozitatea total. Ea este dat de raportul ntre volumul total de pori i volumul aparent al materialului. P= P= Vp Va ; Vp = Va - Vr;

Va Vr V = 1 r = 1 a = 1 C ; Va Va r (6)

P+C=1 calcula att compactitatea ct i porozitatea acestuia.

Deci, cunoscnd densitatea real i aparent a unui material, se pot Se mai definete porozitatea aparent ca totalitatea volumului porilor deschii (apareni) ai materialului. Aceasta poate fi determinat practic prin determinarea absorbiei de ap a materialului (prin saturare cu ap). m 1 V1 V2 = = m V1 2 V2

23

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

2. Aparatura experimental Se vor folosi: piese metalice din pulbere sinterizat, de diferite forme geometrice regulate; silice; cilindri gradai; pahar Berzelius; exsicator de vid; clete metalic; baie de parafin; rigl metalic; plnie; nisip, diferite pulberi fin mcinate; piston din sticl. 3. Algoritmul de lucru 1. Se determin densitatea real pentru materiale compacte cu forme geometrice regulate (ex.: o bil de rulment): 1.1. se cntrete obiectul; 1.2. se msoar obiectul (cu rigla, ubler sau micrometru); 1.3. se calculeaz volumul; 1.4. se exprim densitatea (relaia 1); 2. Se determin densitatea real pentru materiale compacte cu forme geometrice neregulate (ex.: o piatr): 2.1. se cntrete obiectul; 2.2. se folosete un cilindru gradat cu ap; 2.3. se noteaz volumul de ap V1; 2.4. se scufund obiectul; 2.5. se noteaz noul volum V2 al obiectului + ap; 24

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

2.6. se calculeaz volumul obiectului (V2-V1); 2.7. se exprim densitatea (relaia 1); 3. Se determin densitatea aparent pentru materiale poroase cu forme geometrice regulate (ex.: o pies metalic din pulbere sinterizat): 3.1. se cntrete proba; 3.2. se msoar dimensiunile corpului; 3.3. se calculeaz volumul; 3.4. se exprim densitatea aparent (relaia 2); 4. Se determin densitatea aparent pentru materiale poroase cu forme geometrice neregulate prin msurarea volumului de lichid dezlocuit de material (ex.: o achie de lemn cu alcool): 4.1. se cntrete materialul; 4.2. se introduce ntr-un pahar cu alcool; 4.3. paharul se introduce ntr-un exicator de vid, se pornete apa de la trompa de vid, iar dup 30 minute se scoate; 4.4. se recntrete materialul; 4.5. se folosete un cilindru gradat cu alcool pentru a determina volumul dezlocuit de material; 4.6. se exprim densitatea real i densitatea aparent; 5. Se determin densitatea aparent pentru materiale poroase cu forme geometrice neregulate prin metoda parafinrii (ex.: un dop de plut): 5.1. se cntrete proba perfect uscat (m1); 5.2. se prinde proba cu un clete i se cufund ntr-o baie de parafin topit timp de 1-2 secunde; 5.3. se prinde cu cletele din alt loc; se cufund din nou n parafin (se urmrete acoperirea perfect cu parafin); 5.4. pelicula de parafin obinut dup rcirea probei va mpiedica ptrunderea lichidelor n pori; 5.5. se cntrete proba parafinat (m2); 5.6. se calculeaz masa peliculei de parafin (m2-m1); 25

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

5.7. folosind densitatea parafinei (p = 0,9g/cm3) se calculeaz volumul peliculei de parafin (Vp); 5.8. se determin volumul aparent al probei ca la pasul 4; se calculeaz densitatea aparent; 5.9. se calculeaz compactitatea i porozitatea (relaiile 5 i 6); 6. Se determin densitatea n stare afnat (ex.: nisip, pulberi, gru): 6.1. se cntrete un cilindru gradat; 6.2. se introduce n cilindru pn la o nlime cunoscut (ex.: 10 cm) granule din prob fr a se tasa; 6.3. se niveleaz cu o rigl metalic; 6.4. se cntrete i prin diferen cu masa vasului gol se obine masa de prob; 6.5. se calculeaz densitatea n stare afnat (relaia 4); 7. Se determin densitatea n stare ndesat (ex.: nisip, pulberi, gru): 7.1. se cntrete un cilindru gradat; 7.2. se introduce n cilindru pn la o nlime cunoscut (ex.: 10 cm) granule din prob n 3 reprize; dup fiecare repriz materialul se compacteaz prin baterea vasului de mas, prin vibrare i prin ndesare cu un piston de sticl; 7.3. se niveleaz cu o rigl metalic; 7.4. se cntrete i prin diferen cu masa vasului gol se obine masa de prob; 7.5. se calculeaz densitatea n stare ndesat (relaia 4). 4. Interpretarea rezultatelor Se exprim datele n uniti S. I. (kg/m3) i se introduc ntr-un tabel de forma: Nr Material real aparent afnat ndesat Observaii

26

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

5. ntrebri 1. Care sunt caracteristicile de baz a materialelor solide care determin proprietile i calitate a acestora? 2. Ce se nelege prin densitate n vrac a unui material solid? 3. Care este diferena ntre densitatea n vrac afnat i densitatea n vrac compact a unui material solid? 4. Cum se determin porozitatea unui material?

27

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Analiza de sedimentare

1. Consideraii teoretice Analiza de sedimentare servete la determinarea dimensiunilor particulelor dintr-o emulsie sau suspensie, ca i la stabilirea distribuiei particulelor de diferite dimensiuni ntr-un sistem poli-dispers. Metoda urmrete viteza de depunere n cmp gravitaional a particulelor fazei disperse, prin msurarea timpului de depunere, a nlimii stratului de suspensie din care are loc depunerea, a greutii sedimentului depus. Asupra unei particule considerate sferice care se depune acioneaz fora gravitaional F i fora de rezisten vscoas a mediului, Fs, care i se opune, ea fiind dat de legea lui Stokes: 4r 3 (2 1 )g F= 3 unde: r - raza particulei; 1 - densitatea mediului de dispersie; 2 = densitatea fazei disperse; g = acceleraia gravitaional; Fs = 6rv unde: - coeficientul de vscozitate al mediului; v - viteza particulei. La nceput F > Fs i micarea particulei este accelerat; datorit creterii vitezei, Fs crete pn ce egaleaz fora gravitaional, dup care micarea particulei devine uniform, cu viteza constant dedus din relaiile de mai sus: 28 (2) (1)

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

v=

2 2 1 2 gr 9

(3)

Dac timpul de depunere a unei particule este t, iar nlimea de la care se depune este H, viteza se poate aproxima prin H/t, astfel nct putem scrie: r= H Ct (4)

unde C este constant pentru un sistem dat, este numit constant de sedimentare i este dat de expresia: C= 2 2 1 g 9 (5)

ntr-un sistem poli-dispers, msurnd viteza de sedimentare a fiecrei fraciuni, se pot calcula razele diferitelor fraciuni. n metoda gravimetric, se msoar viteza de depunere a sedimentului pe talerul unei balane hidrostatice. Notnd greutatea sedimentului (q) n funcie de timp (t) se obine o curb de sedimentare q = q(t), de forma dat n Fig. 1. q (g) &n q

0 t1 t2 ti-1 ti

t (s)

Fig.1. Curba de sedimentare n poriunea iniial, graficul este liniar (depunerea fraciunii de particule cu raz maxim), apoi panta scade pn la un palier orizontal, la sfritul sedimentrii. Greutatea fraciunilor se obine ducnd tangente n diferite puncte (la timpul t0, t1, ..., tn) la curba de sedimentare; fie interseciile lor cu axa ordonatelor: q1, q2, ..., qn. Fraciunea care sedimenteaz n intervalul de timp ti (ntre ti-1 i ti) va avea razele particulelor n intervalul 29

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

ri ( ntre ri-1 i ri), razele calculate din relaia de mai sus i greutatea qi = qi qi-1, dat de segmentul de pe axa ordonatelor limitat de cele dou tangente duse n punctele corespunztoare lui ti-1 i ti. Numrul tangentelor se alege n funcie de numrul de fraciuni n care dorim s mprim sistemul. De obicei valorile q se exprim n procente din greutatea total a sedimentului. Pentru a obine curba diferenial de repartiie se raporteaz greutatea fiecrei fraciuni la intervalul de raze al particulelor sale: F(r )i =

(q )i (r )i

(6)

Reprezentnd grafic aceast funcie se obine o diagram n trepte, ce poate avea forma din figura 2. D(r)

F(ri) r (m) rn rn-1 ri-1 ri r2 r1 Fig. 2. Curba de distribuie a fraciunilor Unind mijloacele laturilor superioare ale dreptunghiurilor, rezult curba diferenial de repartiie, ea poate avea un maxim, ce corespunde fraciunii predominante din sistem, sau mai multe maxime. F(r) este funcia de repartiie n greutate; din aceasta se pot obine i alte funcii de repartiie: n numr relativ de particule din diferite fraciuni, N(r); n suprafa relativ a particulelor din diferite fraciuni, S(r).

30

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Ele se pot calcula innd seama c masa relativ a fractiunii cu particule avnd raze n intervalul r este F(r)r, iar numrul de particule din aceeai fraciune este N(r)r. Atunci vom avea: F(r )r = 3 4r 3 F(r ) 2 N(r )r , N(r ) = 3 4r 3 2 3 F(r ) r 2 (7)

Suprafaa particulelor din fraciune fiind S(r) r rezult: S(r ) = 4r 2 N(r ) = (8)

2. Aparatura experimental O balan Figurovski (fig. 3) compus dintr-un balansoar de sticl sau oel inoxidabil B, de care se leag printr-un fir un taler T pe care se va aduna sedimentul (carbonat de calciu sau praf de cret). Talerul se introduce ntr-un cilindru cu ap distilat i suspensia de analizat. Ocularul O permite citirea deplasrii D n diviziuni a captului balansoarului B. nlimea H a coloanei de suspensie deasupra talerului (se citete cu o rigl gradat) trebuie s fie de 30-60 cm pentru suspensii grosiere (r 10-3 cm) i de 3-4 cm la cele fine (r 10-4 cm). Se lucreaz cu suspensii diluate (0.5-0.0001%), cci la concentraii mai mari se produce coagularea ortocinetic, prin care se depun simultan particule de diferite mrimi. A D (div) O H (cm) T B

Fig. 3. Balana Figurovski

31

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

3. Algoritmul de lucru 1. Se amestec bine suspensia de analizat (carbonat de calciu) cu ajutorul agitatorului A; 2. Se introduce n suspensie talerul T, aezat ntr-o poziie ct mai central n cilindru i se aga firul acestuia de crligul balansoarului B; imaginea reperului se va fixa la nceput n partea inferioar a scrii, cci se va fixa la nceputul (imaginea rsturnat) scrii de diviziuni; 3. Se pornete cronometrul i se noteaz timpul la care oscilaiile balansoarului nceteaz; 4. Se noteaz poziia reperului citit la micrometrul ocular O; 5. Se va citi diviziunea de pe ocular la intervale de 20-30 s pn cnd balansoarul B nu se mai deplaseaz la citiri repetate timp de 15 min; 6. Se msoar nlimea H cu o rigl gradat. 4. Interpretarea rezultatelor Greutatea fraciunilor se va da n procente din greutatea total a fazei disperse. Numrul total de diviziuni (citite la micrometru ocular) cu care s-a deplasat reperul n cursul determinrii fiind proporional cu greutatea ntregului sediment, care se ia egal cu 100, se calculeaz greutatea procentual (q%) a sedimentului depus pn la fiecare moment t. Datele se nscriu ntr-un tabel de forma tabelului 1 i pe baza lor se traseaz curba de sedimentare q = q(t):
Tabelul 1.

Timpul (s) Diviziuni din ocular q (%)

Pe curb se iau cel puin 6 puncte, mai ales n regiunea de curbur maxim; primul se plaseaz la sfritul poriunii liniare iniiale, iar ultimul acolo unde ncepe palierul orizontal. Prin puncte se duc tangente la curb,

32

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

interseciile lor cu axa ordonatelor dnd segmentele q1, q2, ..., qn egale cu greutile procentuale ale diferitelor fraciuni. Se calculeaz constanta C folosind valorile i pentru mediul de dispersie (apa) luate din tabele, pentru temperatura de lucru. Densitatea fazei disperse este: CaCO3 (precipitat) 2.7 g/cm3 Cret 2.4 g/cm3

Se calculeaz apoi razele particulelor r0, r1, ..., rn folosind ecuaia (4) i (5) care se nscriu ntr-un tabel de forma: Timp (s) r (cm) q (%) r (cm) q (%) F(r) Pentru aceste valori se calculeaz F(r) (ecuaia 6) i se reprezint curba diferenial de repartiie. De asemenea se vor trasa curbele N(r) i S(r), trgndu-se concluzii cu privire la sistemul dispers analizat.
Tabelul 2. Vscozitatea apei la diferite temperaturi (10-3 kgm-1s-1)

0C

20C

100C 0.283

1.786 1.002

5. ntrebri 1. Ce este curba de sedimentare? 2. Cum se obine i ce reprezint curba diferenial de repartiie? 3. Cum se calculeaz razele fraciunilor sedimentate? 4. Ce este raza cea mai probabil? 5. Ce concluzie se poate trage dac curba de repartiie prezint dou maxime?

33

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Determinarea concentraiei critice micelare a unei substane tensioactive

1. Consideraii teoretice Substanele tensioactive (ageni activi de suprafa, surfactani) sunt substane larg folosite n tehnic i gospodrie, ca detergeni, emulgatori (dispersani, spumani), ageni de umectare sau de solubilizare. Ele sunt de obicei substane organice sintetice, capabile datorit structurii lor s micoreze tensiunea superficial a lichidelor, de obicei a apei. Aciunea lor se datoreaz structurii difile a moleculei, care conine o caten de hidrocarbur hidrofob (lipofil) i o grup funcional, ionizat sau polar, hidrofil. Lauril sulfatul de sodiu (dodecil sulfatul de sodiu) este o astfel de combinaie, avnd formula:
CH 3 (CH 2 )10 CH 2 O SO 3 Na +

El se obine prin esterificarea alcoolului lauric: CH 3 (CH 2 )11 OH cu acid sulfuric i reacia sulfatului acid de lauril astfel obinut cu NaOH. Substanele tensioactive se pot caracteriza prin valoarea H.L.B. calculat dup formula : H.L.B. = unde:

a + nb + 7

(1)

este numrul de grup al prii hidrofile a moleculei;

b numrul de grup al radicalilor CH2 sau CH3; n numrul atomilor de carbon din molecul. Substanele cu valoare HLB mai mic dect 10 caracterizeaz 34

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

substane cu caracter predominant lipofil, mai uor solubile n lichide nepolare (uleiuri), iar valori peste 10 indic un caracter hidrofil al substanei,
Na + este care va fi mai uor solubil n ap. Numrul de grup pentru -O-SO 3

38.7 iar b are valoarea 0.475, astfel c HLB este 40 pentru laurisulfat de sodiu (LSS), o valoare foarte ridicat, indicnd un puternic caracter hidrofil al substanei. Pe msur ce crete concentraia soluiei unei substane tensioactive, moleculele (ionii) substanei, care la nceput se concentreaz la interfaa soluie/aer, ncep s se orienteze i n catenele de hidrocarbur i suprafaa exterioar din grupele hidrofile ionizate. La concentraii mai mari predomin micele lamelare (fig. 1). Micelele seamn prin structur, dimensiuni i proprieti cu particulele coloidale, astfel de sisteme fiind numite uneori coloizi de asociaie. n fig. 1 grupele hidrofile sunt reprezentate prin sfere iar lanurile hidrocarbonate liofobe sunt reprezentate prin bastonae. Aceste bastonae sunt mobile: 1 2 3

4 Fig. 1. Asociaii micelare Legend: 1. micele sferice; 2. micele peliculare; 3. micele lamelare; 4. sistem coloidal sub concentraia micelar critic (CMC). 35

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Concentraia la care ncepe formarea micelelor este numit concentraie critic micelar, CCM. Formarea micelelor poate fi pus n eviden prin urmrirea unor proprieti fizice ale soluiilor, care au o variaie caracteristic la CCM. CCM este mai mic atunci cnd radicalul lipofil este mai lung, cci atunci cresc n intensitate forele Van der Waals care cauzeaz asocierea moleculelor n micele. Ea poate fi apreciat din formule de tipul: lg CCM = B nA unde B i A sunt constante; pentru alchilsulfai A = 0.275 i B = 1.26. Cunoaterea CCM este important n practic, deoarece eficiena soluiilor de substane tensioactive ncepe cnd concentraia lor depete CCM. Emulsiile cele mai stabile se obin n preajma CCM. 2. Aparatura experimental Se va msura tensiunea superficial a unor soluii apoase de LSS, urmrind variaia acestei mrimi cu concentraia. Concentraia critic micelar corespunde minimului acestei curbe. (2)

a 1 b

2 Fig. 2. Stalagmometru Pentru msurarea tensiunii superficiale se va folosi metoda stalagmometric. Stalagmometrul (fig. 2) este un tub de sticl ndoit de dou ori n unghi drept, care are pe poriunea mai lung o umfltur sferic 1, cu 36

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

capacitatea de civa ml, i care este prevzut la captul inferior 2, lefuit plan, cu o mic deschidere. Cnd lichidul se scurge din stalagmometru prin deschiderea 2, se formeaz o pictur, care se mrete treptat i care de desprinde numai cnd greutatea ei depete tensiunea superficial. Aceast tensiune este aproximativ proporional cu greutatea picturilor. Pentru dou lichide diferite, studiate la acelai stalagmometru, se poate deci scrie : 1 G 1 = 2 G 2 adic raportul tensiunilor superficiale este egal cu raportul greutilor picturilor. Notnd cu V volumul cuprins ntre reperele a i b i 1, respectiv 2 densitile celor dou lichide, iar cu n1 i n2 numrul de picturi de lichid din volumul V ( g fiind acceleraia gravitaional, putem scrie: 1 V1g V 2 g 1 n 2 = ; = 2 n1 n2 2 n1 de unde se poate calcula tensiunea superficial a unuia dintre aceste lichide, dac se cunoate cea a celuilalt. De obicei se msoar tensiunea superficial relativ, lundu-se ca etalon ( n special pentru soluii apoase) apa: 2 = 1 cu 1 fiind notat apa. Tensiunea superficial a apei pentru cteva temperaturi apropiate de cea a camerei este redat n graficul din fig. 3. Pentru cazul n care ntre reperele a i b volumul de lichid scurs nu cuprinde un numr ntreg de picturi, exist gradaii care permit aprecierea fraciunilor de pictur. 2 n1 1 n 2 (3)

37

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

74 (mN/m) 73.5 73 72.5 72 71.5 71 15 t (C) 17 19 21 23 25

Fig. 3. Dependena tensiunii superficiale a apei de temperatur 3. Algoritmul de lucru 1. Se prepar o soluie (S1) de LSS 0.01 M prin dizolvarea cantitii calculate de substan (cntrit la balana analitic) n 100 ml ap; 2. Folosind soluia (S1) de la pasul 1 se prepar soluiile S2-S5 folosind reeta din urmtorul tabel: Amestec Soluie S1 (ml) Ap distilat (ml) S2 S3 S4 S5 8 2 6 4 4 6 2 8

3. Se calculeaz concentraiile soluiilor S2-S5; 4. Se consider i soluia S6, o prob de ap distilat; 5. Pentru fiecare soluie de la S6 la S1 (ncepnd cu S6) se repet paii: 5.1. Se cltete stalagmometrul cu soluie; 5.2. Se introduce soluia n stalagmometru pn la partea superioar a acestuia; 5.3. Se ateapt ca nivelul superior s ajung n dreptul reperului a al stalagmometrului; 5.4. Se numr picturile care cad la scurgerea volumului cuprins ntre reperele a i b;

38

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

3. Interpretarea rezultatelor Rezultatele experimentale se prelucreaz i se trec ntr-un tabel de forma: c (mol/l) n (picturi) (mN/m) CCMexp (mol/l) CCMteor (mol/l) Se reprezint grafic curba = f(c) i se determin CCM. Se compar valoarea obinut cu cea calculat din formula (2). 4. ntrebri 1. Cum se clasific coloizii? 2. Cum se prepar coloizii? 3. Care este originea stabilitii coloizilor? 4. Cum se formeaz micelele coloidale? 5. Dai exemplu de o proprietate de soluie care este afectat de coloizii prezeni n aceasta.

39

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Determinarea pH-ului cu electrodul de chinhidron

1. Consideraii teoretice Valoarea pH-ului reprezint o caracteristic important a soluiilor, fiind o msur a caracterului lor acid sau bazic. El se definete prin relaia: pH = -lg [H+] (1) pH-ul poate fi determinat prin metode colorimetrice (cu ajutorul indicatorilor de pH) sau poteniometrice. O serie de electrozi pot fi folosii la astfel de determinri, ntruct potenialul lor depinde de pH-ul soluiei n care sunt introdui (electrodul de hidrogen, de stibiu, de sticl, de chinhidron). Aceasta din urm prezint anumite avantaje: este uor de realizat, are un potenial reproductibil i care se stabilete rapid. Electrodul de chinhidron const dintr-o lam de platin lucioas (un fir sau o plac), care se scufund n soluia de cercetat, la care se adaug un vrf de spatul de chinhidron (obinut prin amestecare echimolecular a chinonei i hidrochinonei). Lama de platin ia foarte repede potenialul sistemului redox care apare datorit procesului electrochimic: O chinona Acest potenial este dat de expresia: RT [C6 H8O 2 ] H + ch = o + ln = o + 0.058 lg H + 2F [C6H 4 (OH )2 ]
2

O + 2H+ +2e-

HO hidrochinona

OH

[ ]

[ ]

(2)

deoarece [C6H4O2] = [C6H4( OH)2] n chinhidron. n expresia (2), o este potenialul standard al electrodului de chinhidron, ntr-o soluie normal de ioni de hidrogen; acasta depinde de temperatur; ntre 0 i 37C, aceast variaie este dat de relaia: 40

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

o = 0.7175 0.00074 T [V] atunci: pH = o ch 0.058

(3)

n care T este temperatura de lucru n C. Pentru valoarea pH-ului rezult

(4)

n vederea determinrii potenialului, electrodul de chinhidron se asociaz cu un electrod de calomel, prin intermediul unui sifon umplut cu soluie de KCl saturat. n pila astfel format, electrodul de chinhidron reprezint polul pozitiv, iar electrodul de calomel, polul negativ. Fora electromotoare a acestei pile este: E = ch cal Astfel, pentru pH obinem expresia: pH = 0 E cal 0.058 (6) (5)

2. Aparatura experimental Se folosete un montaj de msurare a forei electromotoare prin metoda compensaiei (Poggendorf, Du Bois, Raymond), adic n condiii n care pila studiat nu genereaz nici un curent. Schema de principiu a instalaiei de msur se red n fig. 1. Pe rezistena poteniometric AB, care poate fi un fir calibrat de lungime L (de ex. 1m), ntins pe planeta gradat n mm, se stabilete o diferen de potenial constant i bine determinat, cu ajutorul unei surse auxiliare cu tensiune la borne V. Pila a crei fore electromotoare EX dorim s o determinm se leag n opoziie, mpreun cu un instrument de zero (galvanometru sau electrometru capilar). Prin deplasarea cursorului C de-a lungul firului calibrat, se va gsi o poziie CX pentru care prin galvanometrul G nu trece curent. n acest moment, fora electromotoare a pilei de studiat este compensat de cderea de potenial de pe poriunea de fir ACX = LX; rezistena firului fiind

41

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

proporional cu lungimea sa: EX = V LX L (7)

Tensiunea exterioar provine de la un acumulator sau un redresor i nu este riguros constant. De aceea, firul poteniometric se calibreaz cu ajutorul unui element etalon, de obicei pila Weston. Introducnd n circuit aceast pil n locul lui EX, n momentul compensrii: EW = V LW L (8)

indicele W referindu-se la pila Weston. Comparnd (7) i (8), rezult: E X LX = EW LW (9)

2 G 1 1 ~ Scc +/2 W

Fig. 1. Montajul experimental pentru msurarea forei electromotoare 3. Algoritmul de lucru 1. Se poziioneaz comutatorul 1-2 pe poziia 1; 2. Se calibreaz cu ajutorul unei pile Weston firul potenionetric (se mic cursorul pe firul poteniometric astfel nct acul miliampermetrului legat la puntea Weston s indice 0); 42

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

3. Se citete valoarea poziiei cursorului pe firul poteniometric (LW); 4. n paharul cu electrodul de Pt se introduce soluia de CH3COONa la care se adaug un vrf de spatul de chinhidron; 5. Se poziioneaz comutatorul 1-2 pe poziia 2; 6. Se mic cursorul pe firul poteniometric astfel nct acul miliampermetrului s indice 0; 7. Se citete valoarea poziiei cursorului pe firul poteniometric (L1); 8. Se nlocuiete soluia de CH3COONa cu soluie de H2SO4 la care se adaug un vrf de spatul de chinhidron; 9. Se citete valoarea poziiei cursorului pe firul poteniometric (L2); 4. Interpretarea rezultatelor Din valorile L i LW msurate se calculeaz fora electromotoare a pilei: electrod de chinhidron - electrod de calomel, E: E = EW L LW (8)

Se calculeaz de aici potenialul electrodului de chinhidron, ch i pH-ul soluiei, pe baza valorii pH obinute, se va indica ce caracter are soluia cercetat. La 20C, electrodul saturat de calomel are potenialul: cal = 0,2488 V iar fora electromotoare a elementului etalon Weston este: EW = 1.0183 V Datele experimentale i rezultatele calculelor se introduc ntr-un tabel de forma: Soluia LW (cm) L (cm) E (V) ch (V) pH Caracterul soluiei Se va evalua eroarea n determinarea pH-ului.

43

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

4. ntrebri de control 1. Cum se definete pH-ul? 2. Prin ce valori ale pH-ului, [H+] i [OH-] se caracterizeaz soluiile acide, bazice i neutre? 3. Ce este un electrod i cum se calculeaz potenialul de electrod? 4. Din ce este format electrodul de chinhidron? 5. Cum depinde potenialul electrodului de chinhidron de pH? 6. Ce montaj se folosete pentru determinarea potenialului electrdului de chinhidron? 7. Care este principiul metodei compensaiei?

44

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Gravimetria i volumetria cuprului

1. Consideraii teoretice Gravimetria este o metod chimic de determinare a cantitii dintrun anumit element sau compus bazat pe reacia stoechiometric a acestuia cu un reactiv de precipitare. n tabelul 1 sunt date cteva exemple de condiii de precipitare anorganice tipice:
Tabelul 1. Cteva condiii de precipitare anorganice

Element Ag Al Ba Bi Br, Cl, I Ca F Fe Hg K K Mg P Pb S Sn Zr, Hf, ...

Precipitant HCl NH3 H2SO4 KCl AgNO3 (NH4)2C2O4 Pb(NO3)2+HCl NH3 H2S H2PtCl6 HClO4 NH4H2PO4 MgSO4+ (NH4)2SO4 H2SO4 BaCl2 HNO3 H2C2O4

Precipitat AgCl Al(OH)3 BaSO4 BiOCl AgBr, Cl, I CaC2O4H2O PbClF Fe(OH)3 HgS K2PtCl6 KClO4

Agent T (C) Forma splare calcinare calcinat HNO3 150 AgCl NH4Cl H2O H2O HNO3 H2O Alcool NH3 H2O Alcool Ac-Et 1200 800 110 110 950 130 1000 <100 <270 <650 1050 1050 600 800 1100 1000 1000 Al2O3 BaSO4 BiOCl AgBr, Cl, I CaO PbClF Fe2O3 HgS K2PtCl6 KClO4 Mg2P2O7 Mg2P2O7 PbSO4 BaSO4 SnO2 M2P2O7 MO2; M2O3

MgNH4PO46H2O NH4NO3 MgNH4PO4 PbSO4 BaSO4 SnO2nH2O MHPO4 Mx(C2O4)y 45 NH4NO3 H2O H2O H2O NH4NO3 H2O

M. Trnaz., (NH4)2HPO4

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

n tabelul 2 sunt redai civa precipitani organici tipici:


Tabelul 2. Precipitani organici

Element Al, Bi, Cd, Co, Cu, Ga, Hf, Fe, In, Hg, Mo, Ni, Nb, Pd, Ag, Ta, Ti, Th, W, U, Zn, Zr Al, Be, Bi, Cd, Cu, Ga, Hf, Fe, In, Mg, Mn, Hg, Nb, Pd, Se, Ta, Ti, Th, U, Zn, Zr, Met. rare Ni Pd Co Fe, Hg, Nb, Ta, W, Zr Sb, Bi, Ga, Fe, Mo, Pd, Sn, Ta, Ti, V, W, Zr, Met. rare Al Zn, Co, Pb Cu, Cd, Ni Cu Cs, K, Rb, Ag, Tl Cr2O72-, MnO4-

Mediu

Precipitant

Precipitat

T (C)

Forma

calcinare calcinat

pH=4.5 130 >1000 ML4,3,2 MxOy

8-Hidroxichinolin ML4,3,2

NH3

Dimetilglioxim Acid Puternic Acid Slab acid Cupferon 1-Nitrozo-2-naftol

ML2 ML2

150 900

ML2

ML3

>1000

MxOy

Neutru HAc NH3 A-B Acide Acid antranilic Benzoxidioxim TF-Borat de Na Clorur de TFA ML ML2 <225 <1000 <250 <225 ML ML2

46

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Iodometria este o metod de determinare gravimetric comun pentru mai multe metale (Ag, Bi, Cu, Hg, Pb) i se bazeaz pe solubilitatea redus a acestora. n tabelul 3 sunt redate valorile produselor de solubilitate:
Tabelul 3. Produsele de solubilitate pentru cteva ioduri

Substana Ps

AgI

BiI3

CuI

Hg2I2

PbI2

8.310-17 8.110-19 1.410-12 4.710-29 6.710-9

Solubilitatea acestor precipitate este influenat de echilibrul I2/2I-; echilibrul se poate deplasa n sensul formrii de I2 prin adugarea de KI. Aceasta formeaz i un complex cu I2 conform reaciei: KI + I2 ioduri metalice. Potenialul normal redox al sistemului iod-iodur (I2/2I-) este 0 = +0.62V i nu depinde de pH. Toate sistemele redox cu potenial mai pozitiv vor elibera iod elementar (de culoare galben) din soluiile de iodur, iar cele cu potenial mai negativ vor reduce iodul la ioni I-. Prin determinare cantitii de iod elementar aprut sau disprut din soluie, se poate determina cantitatea de oxidant sau reductor care a participat la reacia cu sistemul I2/2I-. Iodul elementar, greu solubil n ap, este meninut n soluie cu ajutorul unui exces de iodur de potasiu, KI, cu care formeaz un complexul din relaia (1). Titrarea care se bazeaz pe reacia iod-iodur se numete titrare iodometric. Punctul de echivalen (sfritul titrrii) n titrarea iodometric se pune n eviden prin adugarea unei soluii de amidon cu care iodul elementar formeaz un compus de adiie (clatrat) puternic colorat n albastru. Reacia cu amidonul este foarte sensibil. Amidonul se adaug numai spre sfritul titrrii, cnd concentraia iodului este sczut i soluia a ajuns la culoarea galben deschis, deoarece la concentraii mai mari de iod, KI3 (1) Prezena acestui complex duce la mrirea solubilitii precipitatelor de

47

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

amidonul poate precipita incluznd o cantitate de iod, ceea ce face ca virajul culorii s nu mai fie suficient de net. 2. Aparatura experimental Se va determina cantitatea de cupru aflat n soluie prin metoda iodometric. Ionii de Cu2+ din soluie se trateaz cu KI, cnd se formeaz iodura de cupru greu solubil, conform reaciei: 2Cu2+ + 4I2CuI + I2 (2) Cu ajutorul unei biurete se efectueaz titrarea iodului elementar rezultat n urma reaciei (volumetrie), conform reaciei: I2 + 2Na2S2O3 (gravimetrie). Se compar cele dou valori obinute i se calculeaz eroarea de determinare. 3. Algoritmul de lucru 1. Se cntrete o prob ce conine ioni de cupru (aproximativ 1 g sulfat de cupru sau echivalentul); 2. Se dizolv proba ntr-o cantitate corespunztoare de ap (25 ml); 3. Se prepar o soluie de KI de concentraie 0.2 M (3.3 g KI n 100 ml H2O); 4. La soluia de Cu2+ se adaug o cantitate de soluie de KI volumetric suficient pentru a forma precipitatul de CuI i a elibera iodul; s se calculeze aceast cantitate pe baza reaciei stoechiometrice (2); 5. Se prepar soluia de Na2S2O3 de normalitate i titru cunoscute (0.1 N); 6. Se titreaz iodul din amestecul de reacie (2) cu Na2S2O3; coloraie galben deschis; se adaug ~1 cm3 soluie de amidon, obinndu-se o coloraie 2NaI + Na2S4O6 (3) Se filtreaz precipitatul de CuI din ecuaia (2) i se cntrete

48

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

albastr; se continu titrare pn la decolorarea complet a soluiei; se noteaz volumul de titrant; se calculeaz cantitatea de titrat; 7. Se filtreaz soluia obinut (la trompa de ap); 8. Se usuc precipitatul (n etuv); 9. Se cntrete precipitatul uscat rezultat i se cntrete o hrtie de filtru identic cu cea folosit la filtrare; se obine astfel masa de precipitat (CuI); fie aceasta mCuI. 4. Interpretarea rezultatelor Fie V1 volumul de titrant Na2S2O3 de concentraie molar CM1. Cantitatea de iod (n moli) titrat este dat de formula: nI2 = V1CM1/2 forma iodul elementar este dat de relaia: nCu2+ = V1CM Cantitatea de cupru din iodura de cupru se obine din relaia: nCu = mCuI/MCuI, MCuI masa molar a CuI 398 g/mol. 5. Probleme 1. Se trateaz 100 ml soluie de CuCl2 cu hidrogen sulfurat i se obin, dup filtrare i uscare 5.5 g CuS. Care a fost concentraia soluiei n g CuCl2/l? R: 78.4 g CuCl2/l. 2. Se d o soluie 20% H2SO4 cu d = 1.2 g/cm3. Ci ml din aceast soluie sunt necesari pentru a prepara 100 ml soluie 0.1 N? R = 2.04 ml. (6) Se d masa molar a tiosulfatului de sodiu (Na2S2O35H2O), MNa2S2O35H2O = (5) (4) Cantitatea de cupru (n moli) care a reacionat conform reaciei (2) pentru a

49

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Complexare

1. Consideraii teoretice Complexometria (sau chelatometria) se bazeaz pe formarea unor compleci ai metalelor cu acizi policarboxilici sau poliamine i este o metod pus la punct dup 1940. n timpul adugrii titrantului n soluia de prob se formeaz un complex stoechiometric solubil i nedisociat. Tehnicile prin care se realizeaz aceast operaie sunt tipice pentru procedeele de titrare volumetric. Metoda general are 3 puncte principale: alegerea unui agent de chelatizare adecvat; alegerea condiiilor experimentale care confer o titrare optim: o controlul pH-ului; o prezena liganzilor competitivi; alegerea unei metode adecvate pentru detectarea punctului de echivalen. Titrrile de complexare mbin avantajele i dezavantajele pe care le au metodele de titrare n general i formarea complecilor: produsul reaciei (un complex) este nedisociat; complexul nu d erori de coprecipitare (ca la titrrile de precipitare); selectivitate: agentul de complexare coordineaz numai anumii ioni metalici; stoechiometria nu este la fel de bine definit ca la titrrile de precipitare, neutralizare sau redox; dac agentul de complexare este un solvent organic, trebuie s se dea atenie solubilitii sale. Dintre acetia cel mai utilizat este acidul etilendiaminotetraacetic EDTA, notat simbolic H4Y (mai precis sarea disodic a acestui acid, care 50

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

este solubil n ap), notat H2YNa2, cu formula structural n fig. 1a. n tabelul urmtor sunt prezentai logaritmii constantelor de solubilitate pentru complecii cu EDTA ai unor ioni metalici:
Tabelul 1. Solubiliti ale complecilor cu EDTA (exprimate n uniti pKa)

Grupa 1 Mg 8.69 Mn Ca Sr Ba 10.7 Fe 7.76 Co Ni Cu Zn Cd Al Pb TiO V VO

Grupa 2 13.58 14.33 16.21 18.56 18.79 16.5 16.59 16.13 18.3 17.3 12.7 18.77

Grupa 3 Hg 21.8 Bi Cr Fe In Sc Sn Ti Tl V 23 23 25.1 24.95 23.1 22 17.7 23.2 25.9

8.63 Met. rare 15.3-19.8 Co 36

Ga 20.27

Aceast combinaie este cunoscut i sub numele de Complexon III. Ea are proprietatea de a forma compleci stabili, numii complexonai, cu un mare numr de metale (Ca, Mg, Zn, Cd, Pb, Cu, Ni, Fe, etc). cu structura reprezentat n fig. 1b: CH2 COO (Na ) N CH2 CH2 CH2 COOH CH2 CH2
+ +

CH2 COO (Na ) N CH2 COO M

CH2 COO CH2 COOH N N + + CH2 COO (Na ) CH2 COO (Na ) Fig. 1. H2YNa2 (sarea disodic a EDTA) i MYNa2 51

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Aceti compleci care nchid cicluri, n acest caz de 5 atomi da carbon, se numesc compleci chelatici i sunt foarte stabili. Combinaiile ns nu sunt colorate. Complexonul III se folosete foarte mult n chimia analitic, pentru determinarea volumetric a multor metale, prin titrare complexometric. Pentru indicarea punctului de echivalen n titrarea complexometric, se utilizeaz indicatori complexometrici. Acetia sunt substane organice care formeaz cu ionii metalici compleci colorai, ceva mai puin stabili dect cei ai metalelor respective cu Complexonul III. Culoarea complexului pe care l formeaz metalul cu indicatorul este diferit de culoarea indicatorului n stare liber, n soluie. nainte de titrare, soluia are culoarea complexului metalului cu indicatorul. n timpul titrrii cu soluia de EDTA, acesta scoate ionii metalici din complexul cu indicatorul, formnd complexonatul respectiv, care este mai stabil. La sfritul titrrii, adic la punctul de echivalen, ntreaga cantitate de metal existent n prob este legat sub form de complexonat (incolor), iar n soluie va aprea culoarea indicatorului liber. Cei mai utilizai indicatori complexometrici sunt Eriocromul Negru T i Murexidul. ntruct EDTA este un acid, stabilitatea complecilor si depinde de pH. Astfel, n soluii puternic acide, complexul are tendin de descompunere, cu eliberarea ionului metalic i reformarea acidului EDTA. De aceea titrrile complexometrice se efectueaz n mediu bazic (n prezena unei soluii tampon bazice). 2. Aparatura experimental Practic se va determina cuprul divalent (Cu2+) din soluie prin titrare cu EDTA n prezen de Murexid ca indicator. pH-ul soluiei trebuie s fie meninut la valoarea 8, prin adugarea unei soluii tampon corespunztoare. n aceste condiii, virajul la punctul de echivalen va fi de la culoarea galben-verzui la violet.

52

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Se folosesc 2 flacoane conice de 100 cm3, o soluie de Cu2+ pentru analiz, o pipet de 10 cm3, o soluie tampon (cu pH = 8), o biuret, o soluie de NH4OH 1:1, o soluie de EDTA 0.1N i murexid (cristale, 1:300 n NaCl). 3. Algoritmul de lucru 1. Se iau cu o pipet 4 probe de cte 10 cm3 din soluia de analizat (Cu2+) i se introduc n dou flacoane Erlenmeyer (conice); 2. Se dilueaz cu ap distilat la ~ 50 cm3; 3. Se adaug un vrf de spatul de Murexid, apoi 5 cm3 soluie tampon cu pH = 8 i 5 cm3 soluie de NH4OH 1:1; 4. Se va obine o coloraie galben-verzuie; se titreaz cu soluie de EDTA 0.1N pn la virajul culorii n violet. 4. Interpretarea rezultatelor Cantitatea de cupru din prob se calculeaz innd cont de faptul c un mol de Cu (63.54 g) reacioneaz cu un mol de EDTA (332.21 g): mCu = VF332.2110-463.5/332.21 g rezultatele n uniti S.I. 5. Probleme 1. Se titreaz o soluie de sulfat de cupru (50 ml) cu EDTA 0,1 N, folosinduse la titrare 4,5 ml soluie de EDTA. Care este concentraia de Cu2+ i de CuSO4 n aceast soluie (exprimat n g/l) ? R: 0.571 g/l Cu; 1.434 g/l CuSO4. 2. Se dizolv 150 g CuSO45H2O n 0.5 l ap. Care este concentraia procentual a soluiei, dac d = 1? Cu ce volum de soluie de EDTA 0.1 N vor reaciona 10.0 ml din aceast soluie? R: c[%] = 23% ; V = 144.3 ml EDTA. (1) Se consider F = 1 (factorul soluiei de EDTA). Se exprim

53

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Cromatografie

1. Consideraii teoretice Separarea diferitelor substane dintr-un amestec constituie una dintre cele mai importante probleme ale chimiei analitice i preparative. Metoda cromatografic se bazeaz pe repetarea echilibrului de repartiie a componentelor unui amestec ntre o faz mobil i una staionar. Datorit diferenelor n repartiie are loc deplasarea, cu vitez diferit, a componentelor purtate de faza mobil de-a lungul fazei staionare. n funcie de natura fazelor se disting urmtoarele tipuri de cromatografie: Faza mobil Faza staionar Denumirea tipului de cromatografie Lichid-lichid (LL) Lichid Lichid Lichid-solid (LS) Solid Lichid Gaz-solid (GS) Solid Gaz Gaz-lichid (GL) Lichid Gaz n general, metodele de separare cromatografice se mpart n dou categorii: n prima intr cele care se bazeaz pe interaciunea diferit a componenilor cu faza staionar (repartiie, adsorbie, schimb ionic i afinitate), iar n a doua cele care se bazeaz pe mrimea diferit a componenilor (excluziunea steric). Schema de principiu a unui cromatograf (LL sau LS) este reprezentat n fig.1. El se compune din: surs de eluent, dispozitiv de introducere al probei, coloan i un detector la care se adaug urmtoarele anexe: sursa de eluent, dispozitiv de msurare i reglare a debitului, dispozitiv de introducere a probei, instrument de nregistrare a semnalului furnizat de detector.

54

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Fig. 1. Cromatografie de lichide Principiul cromatografiei este urmtorul: eluentul trece prin dispozitivul de introducere a probei, preia proba de analizat i o introduce n coloana cromatografic. Coloana cromatografic este sediul procesului de separare. Din cauza interaciunii moleculelor cu faza staionar, componentele din amestecul de analizat rmn n urma eluentului, n funcie de diferenele care exist ntre constantele echilibrului de repartiie ntre cele dou faze. Semnal

Timp

Fig. 2. Picul cromatografic

55

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Componentele amestecului separat vor iei din coloan la timpuri diferite, dup care sunt introduse de eluent n detector. Acesta transform diferena unei proprieti fizice ntre component i eluent, ntr-un semnal electric, proporional cu concentraia componentului din eluent. nregistrarea grafic a semnalului detectorului n funcie de timp se numete cromatogram (fig. 2). Timpul tR la care apare maximul unui pic, msurat din momentul introducerii probei se numete timp de reinere sau retenie i este o caracteristic calitativ a componentului respectiv. nlimea picului h sau aria lui, A, sunt caracteristici cantitative, proporionale cu cantitatea componentului din prob. Se noteaz cu tM (timp mort) timpul n care eluentul i componentele care nu interacioneaz cu faza staionar parcurg distana pn la detector. Astfel putem exprima viteza zonei componentului (v) i a eluentului (u) prin urmtoarele ecuaii: v = L/tR, u = L/tM unde L este lungimea coloanei. Coeficientul de partiie K reprezint raportul dintre concentraia molar (cS) a substanei n faza staionar i concentraia substanei n faza mobil (cM). K = cS/cM mobil (2) Fraciunea din timpul de reinere n care o molecul se gsete n faza se noteaz cu R i reprezint probabilitatea ca molecula s se gseasc n faza mobil, respectiv fraciunea din totalul moleculelor care se afl n faza mobil. 1 - R reprezint restul moleculelor care se gsesc n faza staionar. La echilibru reiese c: c V VM R = m M ,R= = VM + KVS 1 R c S VS 1 V 1+ K S VM = 1 1+ k (3) (1)

unde VM i VS reprezint volumul fazei mobile, respectiv staionare iar k = KVS/VM reprezint raportul dintre cantitatea total de substan aflat n faz 56

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

staionar i cantitatea total de substan aflat n faza mobil i se numete factor de capacitate. Din ecuaia (3b) este clar c componentele amestecului de separat vor iei din coloan cu viteze diferite, deci rezult: R = v/u = tM/tR, v = u V 1+ K S VM (4)

Pentru o specie oarecare A aflat n amestec, factorul de capacitate kA va fi: kA = K A VS t R t M = VM tM (5)

Factorul de capacitate k este o funcie de parametri de solubilitate, n cazul cromatografiei de separaie lichid-lichid. Practic, n vederea obinerii unei rezoluii maxime pe unitatea de timp, trebuie ca valoarea lui k s fie cuprins ntre 2 i 5. Factorul de separare pentru o anumit coloan de separare este un parametru utilizat pentru descrierea diferenelor ce apar ntre vitezele de migrare a componenilor. Se definete ca fiind raportul dintre factorii de capacitate kA i kB, ai componentului B (care trece mai greu prin coloan) i A (componentul care se elueaz mai repede) aflai n amestec. = k B K B t R ( B) t M = = k A K A t R (A) t M (6)

Una dintre cele mai importante caracteristici ale unui sistem cromatografic este eficiena sau numrul de talere teoretice. Cu ct o coloan va avea mai multe talere pe unitatea de lungime cu att eficacitatea ei de separare va fi mai bun. Numrul de talere N poate fi definit din cromatograma unui singur pic (Fig. 2) astfel: tR N= t tR tR = 16 W = 5,54 W 1/ 2
2 2 2

(7)

57

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

unde: tR este timpul de retenie, 2 t este dispersia aceleiai benzi n uniti de timp, iar W este valoarea segmentului pe abscis rezultat din intersecia celor dou tangente prin punctele de inflexiune ale picului. N este un numr adimensional. Aceeai valoare a lui N poate fi obinut din volumul de retenie VR i dispersia 2 V exprimat n uniti de volum. Numrul de talere N este o msur a eficienei ntregului suport al coloanei. O alt msur a eficienei coloanei, folosit curent n cromatografie este dat de nlimea unui taler H (nlimea echivalent a unui taler teoretic): VR N= V L L 2 LW 2 ,H= , H= = = N L 16 t 2 R
2 2

(8)

unde L este lungimea coloanei cu umplutur. Pentru caracterizarea separabilitii a doi componeni s-a introdus noiunea de rezoluie, notat RS. n expresia rezoluiei s-a cutat s se lege mrimile care caracterizeaz proprietile termodinamice ale fazelor i componenilor precum i mrimile care caracterizeaz dinamica proceselor din coloan. Rezoluia este o noiune mai cuprinztoare, coninnd i mrimile care caracterizeaz eficacitatea coloanei precum i selectivitatea ei. R= 2t R ( B) 2t R ( A ) WA + WB (9)

2. Aparatura experimental Pentru simularea unei cromatografii de lichide se va folosi produsul software Chemland produs de o echip format din programatori, designeri i animatori de la Universitatea Massachusetts din Armhest, U.S.A. (http://soulcatcher.chem.umass.edu). Pe lng programul de simulare propriu zis, pachetul software conine i un tutorial bine documentat i ilustrat cu desene i animaii. Simularea unor experimente reale de laborator, care se bazeaz pe probe, faze mobile i faze 58

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

staionare reale, poate fi utilizat pe lng calitatea de material de nvare, formare priceperi i deprinderi i ca i o baz de date cu informaii reale despre cromatografia de lichide care poate fi utilizat oricnd ca preambul la experiment. Pe ntreg parcursul pachetului software, se pot observa cuvinte rezervate colorate n verde deschis. Apsnd aceste cuvinte, se vor afia definiii sau informaii adiionale despre subiectul n discuie. Acestea se nchid apoi prin simpla apsare asupra lor. Acionnd asupra textului albastru se va produce o legtur ctre informaii adiionale, animaii i simulri. Textul albastru se transform n rou dup acionare. Pentru ntoarcerea la textul original, se acioneaz asupra texului colorat n rou. 3. Algoritmul de lucru 1. Se utilizeaz programul pentru formarea deprinderilor de simulare astfel: 1.1. Se lanseaz programul n execuie ( Start/Programs/LC); 1.2. Se intr n meniul aplicaiei (click pe fereastra Chemland); 1.3. Se intr n seciunea 2 (se apas tasta mouse-ului cu cursorul pus pe butonul din dreapta jos al ferestrei), unde apare o descriere general a cromatografiei i este simulat o coloan de separare n care se introduce un amestec format din doi componeni A i B n diferite concentraii molare; 1.4. Se ruleaz programul de simulare, injectnd amestecul lichid n coloan (click pe butonul Elute) i se obine n final, rspunsul = f(timp) sub form de picuri, separnd cei doi compui existeni n amestec; se obine o cromatogram; modificnd concentraia componenilor A i B se obine o alt cromatogram. 1.5. Se acceseaz seciunea 8 (butonul din dreapta jos al ferestrei) unde se va simula un experiment al cror rezultate se noteaz pas cu pas n caiet; 59

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

1.6. Se selecteaz categoria de compui (componeni ai acizilor nucleici, aminoacizi sau tyrosine i tyronine); 1.7. Se selecteaz doi componeni aflai n amestec (de exemplu, din categoria aminoacizilor se selecteaz lizina i glicina); 1.8. Se selecteaz apoi faza mobil (mobile phase), tipul coloanei (column type), debitul (flow rate), temperatura de lucru i tipul de detecie (detection); este necesar de precizat c nu toate opiunile apar la fiecare amestec n parte; 1.9. Se ruleaz modulul de simulare (click pe butonul Elute); 1.10. Modificnd parametrii mai nainte enumerai, pentru acelai amestec ales, se observ c cromatograma se modific odat cu schimbrile fcute; 1.11. Se noteaz concluziile referitoare la modelul ales (valorile lui K i ); 1.12. Se ruleaz modulul de simulare pentru alt categorie de compui (compound categories), repetnd paii 1.9-1.11; 1.13. n final se compar datele experimentale obinute alegnd valorile optime pentru dimensiunile coloanei, tipul de coloan (column type), faza mobil (mobile phase), debitul (flow rate), temperatura folosit, detecie (detection), astfel nct s rezulte un factor de separare cel mai bun. 2. Pentru separarea unor componeni necunoscui dintr-un amestec se acceseaz seciunea 9 a programului (butonul din dreapta jos al ferestrei) i se procedeaz astfel: 2.1. Se alege un compus din lista de compui cunoscui; 2.2. Se selecteaz faza mobil (mobile phase) (de exemplu: apa) i condiiile experimentale: tipul de coloan (Sephadex 625, medium particule size, L = 35cm, D = 2.5cm), debitul (25mL/h - flow-rate), temperatura detection); 60 (room temperature), detecie (U.V. absorption

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

2.3. Se ruleaz modulul de simulare (click pe butonul Elute) i se noteaz rspunsul n timp al fiecrei substane cunoscute (vezi tabelul 2), pentru ca ulterior, aceste valori s poat fi comparate cu rspunsurile substanelor aflate n amestecurile necunoscute i pentru a identifica componenii respectivi; 2.4. Se modific faza mobil i se noteaz rezultatele simulrilor acu aceasta; 2.5. n continuare, se alege de la amestecul 1 din lista de compui necunoscui aflai n amestec ( 1 9); 2.6. Se alege faza mobil (ex: apa) i condiiile experimentale de lucru; 2.7. Se ruleaz programul de simulare (click pe butonul Elute); 2.8. Se identific componenii din amestecul 1, conform cromatogramei obinute i listei de rspunsuri n funcie de timp a componenilor cunoscui, list care a fost alctuit anterior; 2.9. Se repet succesiunea de pai 2.1-2.8 pentru celelalte 8 amestecuri necunoscute, iar datele obinute se trec ntr-un tabel similar cu Tabelul 3.
Tabelul 2. Rezultate cromatografice (exemplu de simulare)

Substane cunoscute Faza mobil Hidrochinon Fenol o-Nitrofenol Catechol o-Clorofenol Acid clorogenic Guaiacol Acid vanilic H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2 O

Rspuns 22.1 min. 23.7 min. 22.9 min. 24.1 min. 26.6 min. 23.3 min. 24.5 min. 21.7 min.

61

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental Tabelul 3. Rezultate cromatografice pentru cromatografia de amestecuri

Amestec Faza mobil 1 2 3 4 5 6 7 8 9 H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O

Rspuns

Substane identificate ........

24.2 + 26.4 min. 2

22.1 + 24.1 min. 1 Hidrochinon+Catechol 21.7 + 26.6 min. 3.2 A. vanilic+o-Clorofenol 22.1 + 24.5 min. 2.2 Hidrochinon+Guaiacol 23 min. 23.9 min. 1.4 2 ........ A. vanilic+...... ......... Hidrochinon+Fenol A. vanilic + ...... 21.7 + 23.2 min. 1.6 22.1 + 23.7 min. 1 21.7 + 22.7 min. 1.4

4. Interpretarea rezultatelor Datele obinute se trec ntr-un tabele similare cu tabelele 2 i 3. Se urmrete corectitudinea nregistrrilor n tabel cu ajutorul schematizrii din tabelul 4:
Tabelul 4. Recapitularea noiunilor de cromatografie

Nume Timp de migrare a speciilor nereinute, faza mobil Timp de retenie a speciilor A i B Ajustarea timpului de retenie Lrgimea picurilor Lungimea coloanei Debit Volumul fazei staionare Concentraia n faz mobil, respectiv n faz staionar

Simbol tM tR(A) i tR(B) tR(A) , tR(B)

Sursa cromatogram cromatogram tR(A) = tR(A) - tM tR(B) = tR(B) - tM cromatogram msurare direct msurare direct pregtirea coloanei pregtirea analizei

WA, WB L F VS cM, cS

62

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

5. ntrebri 1. Cum se obine o cromatogram? 2. Cum se realizeaz cromatografia lichid-lichid i care este aparatura necesar pentru separarea cromatografic a unui amestec de substane? 3. Ce este rezoluia? 4. Ce se nelege prin factor de separare? 5. Enumerai cele mai importani pai care trebuie parcuri spre a obine o cromatogram.

63

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Metoda cinetic de determinare a izotermelor de desorbie

1. Consideraii teoretice n procesul de formare a materialelor, particulele se aranjeaz n diferite moduri, de unde rezult o mare varietate de structuri poroase ce caracterizeaz textura fiecrui solid. Parametri texturali ce definesc o structur poroas a unui material solid sunt: volumul de pori, porozitatea, suprafaa specific, forma i distribuia mrimii porilor dup raz. Mijloacele de investigare ale texturii materialelor solide sunt adsorbia i desorbia fizic a gazelor i vaporilor. Pentru trasarea izotermelor de adsorbie desorbie se folosesc gaze (N2, Ar, Kr, O2, CO2, CH4) la temperatura de fierbere i vapori (butan, butanol, etanol, metanol, benzen, tetraclorur de carbon) care la temperatura de lucru au presiuni de vapori mari i reacioneaz cu solidul studiat. Izoterma de desorbie este reprezentarea lui a = f(x) unde a este cantitatea de substan adsorbit pe gram de adsorbant, iar x = p/p0, adic presiunea relativ a vaporilor, p reprezentnd presiunea vaporilor n echilibru cu substana adsorbit i p0 fiind tensiunea de vapori a substanei lichide.
a a adsorbie desorbie

adsorbie p/p0

desorbie t (s)

Fig. 1. Izoterme de adsorbie/desorbie (a coeficient de adsorbie) Coordonatele unui punct de pe izoterm sunt:

64

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

cantitatea de substan adsorbit respectiv desorbit a (n g/g) care se determin direct; presiunea relativ a vaporilor p/p0, care se determin din legea lui Fick. Metoda cinetic const n determinarea valorilor a i x cu ajutorul

balanei analitice. Avem un strat subire de adsorbant ntr-o fiol cu capac gurit i introducem lichidul de adsorbit (benzen, etanol, metanol, butan, tetraclorur de carbon) pn la mbibarea adsorbantului. Tensiunea de vapori a lichidului n interiorul fiolei fiind p0 iar n exterior fiind nul, apare o difuzie a vaporilor cu o vitez controlat de legea lui Fick:

dm 0 & 0 = D' p 0 = m dt

(1)

& 0 este viteza constant de scdere a greutii vasului ct timp mai este unde m lichid deasupra adsorbantului, ntruct p0 este constant la temperatur constant. Dup aceea se evapor lichidul din capilarele adsorbantului. Cantitatea de substan ce prsete fiola n unitatea de timp e proporional cu diferena de presiune: dm & = D' p = m dt (2)

unde p este presiunea parial de echilibru. Din ecuaiile (1) i (2) rezult: x= & t 0 m p m = = & 0 m 0 t p0 m (3)

Scriind variaiile finite, avem: Ecuaia (3) poate servi fcnd msurtorile de lichid m i m0 la timpi egali t = t0, cnd ecuaia (3) devine: x= m , la t = t0 m 0 (4)

65

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

sau, mai convenabil, determinnd timpii t i t0 la mase egale m = m0, cnd ecuaia (3) devine: x= t 0 , la m = m0 t (5)

S-a presupus c temperatura este constant tot timpul determinrilor, ceea ce nu este ntru totul valabil, evaporarea fiind un proces endoterm. Dar dup un timp, cldura pierdut prin evaporare este acoperit de cea primit de la mediu i se stabilete o temperatur staionar. 2. Aparatur experimental Se folosesc urmtoarele instrumente:

fiol de cntrit (cutie metalic cu capac perforat); balan analitic (fig. 2); cronometru; adsorbant (crbune activat granule cu diametrul mai mic de 1mm uscat n etuv la temperatura de 150C timp de 5 minute); cristalizor (sau o sticl Petri) cu 100 g crbune activ introdus n cutia balanei pentru a menine atmosfera liber de vaporii substanei adsorbite; eter etilic, benzen sau metanol;

Fig. 2. Balana analitic automat

66

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

3. Algoritmul de lucru 1. Se cntrete fiola; se noteaz valoarea masei, m1 (g); mc = m1; 2. Se adaug n fiol aproximativ 0,5g 1g adsorbant; 3. Se cntrete din nou fiola; se noteaz valoarea masei, m2 (g); ma = m2 m1; 4. Se adaug cu o pipet eter, benzen sau metanol pn la necarea materialului poros (crbune); 5. Lsnd fiola pe talerul balanei se citete timpul t n care masa scade cu 2mg, din 10 n 10 miligrame; 6. ntr-o rubric a tabelului se trece anticipat masa descresctoare cu cte 10mg iar n cealalt, timpul t n care masa scade cu 2mg (de exemplu de la 3,451g la 3,449g pentru masa de 3,45g); 7. Se noteaz datele ntr-un tabel de forma: nr. mc+ma+mm (g) t (s) t0 (s) mm (g) a (g/g) t ( ) n & = 2mg / t m 4. Interpretarea rezultatelor a) Valoarea lui t0 se calculeaz ca o medie a determinrilor t pentru perioada n care mai exist suprafa lichid care acoper adsorbantul, adic n care t este relativ constant, neavnd o tendin de scdere. Dac nu s-a stabilit temperatura staionar, ceea ce se manifest prin scderea valorilor t de la nceputul determinrii, se face media aritmetic fr a le lua pe acestea n considerare. b) Coeficientul de adsorbie: a= mm (g/g) ma (7) x y (mm/ma) (t0/t) x/a(1-x)

& dup formula: 8. Se calculeaz viteza de consum m


(6)

67

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Se calculeaz conform ecuaiei (4) valorile lui x i a, se trec n tabel i se traseaz izoterma de desorbie: a = f(x) (fig.1). c) Calculul suprafeei specifice se face conform ecuaiei lui BET a adsorbiei n straturi polimoleculare: x 1 c 1 = + x (1 x )a a mc a mc acoperit, iar c este o constant dependent de cldura de adsorbie. Notnd: y= c 1 x 1 , n= , m= (1 x )a a mc a mc y = mx + n Se poate astfel calcula: am = am exprimat n moli devine: 1 m+n i c = m+n n (8)

unde am este capacitatea adsorbit n stratul monomolecular presupus

ecuaia (8) se poate scrie astfel:

a 'm =

am , M

unde M este masa molecular a substanei ce se evapor. Datele calculate se vor trece n tabel. Se traseaz graficul y = f(x), panta dreptei fiind m iar ordonata la origine fiind n (vezi fig. 3). Astfel se poate calcula am. y tg() = m n

Fig. 3. Dependena liniar y = f(x)

68

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Presupunnd c suprafaa ocupat de o molecul de metanol este s = 28,52, atunci suprafaa unui mol de metanol va fi: SM = sNA = 28.510-206.0231023 = 171.65103 cm2/mol= 17.165m2/mol. Dup ce s-a determinat valoarea lui am, se calculeaz am cunoscnd masa molecular M i suprafaa specific S dup ecuaia: S= a m NA s = am SM (m2/g) M (9)

Dac se utilizeaz benzen, s = 492, SM = 295.13107 cm2 = 295.13103 m2. 5. ntrebri 1. Ce este o izoterm de desorbie? 2. Ce legi i care sunt expresiile lor guverneaz fenomenul de desorbie? 3. Cum se poate msura viteza de desorbie? 4. Care este ecuaia de calcul a suprafeei specifice a crbunelui i cum depinde aceasta de suprafaa util? 5. Enunai parametrii texturali ce definesc o structur poroas a unui material solid.

69

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Analiza spectrelor n infrarou

1. Consideraii teoretice Dac un fascicul de lumin solar este trecut printr-o prism de sticl, el este descompus n radiaii componente monocromatice , formnd un spectru continuu. Formarea spectrului se datoreaz faptului c lumina alb este compus din radiaii de culori diferite, fiecare de anumite lungimi de und, , respectiv anumite frecvene . Strbtnd prisma de sticl, ele sunt refractate n mod diferit (fig. 1).

Fig. 1. Descompunerea luminii solare printr-o prism de sticl O molecul poate suferi, prin absorbia unui foton i n funcie de energia acestuia, trei feluri de schimbri sau variaii ale energiei ei: o variaie a energiei de rotaie, o variaie a energiei de vibraie i o variaie a energiei electronice. Fiecare molecul posed deci niveluri energetice de rotaie, de vibraie i electronice proprii, caracterizate prin numere cuantice. Fiecare tranziie ntre dou niveluri energetice, diferite prin numerele lor cuantice, determin apariia unei linii, n spectrul de absorbie al moleculei. Liniile spectrale se contopesc aprnd n spectru benzi de absorbie. O tranziie de vibraie nu poate fi realizat niciodat singur, ci este totdeauna nsoit de tranziii de rotaie, manifestndu-se fiecare printr-o linie 70

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

spectral. Din cauza numrului lor mare i a apropierii lor n spectru ele se contopesc sub forma benzilor caracteristice ale spectrelor n infrarou, aceste spectre fiind spectre de vibraie rotaie. Aparatele cu care se studiaz spectrele sunt de diferite tipuri: spectroscopul are o scar gradat cu ajutorul creia se pot identifica i msura diferite lungimi de und ale radiaiilor luminoase (fig. 2a), spectrograful nregistreaz fotografic; spectrofotometrul nregistreaz electronic intensitile componentelor spectrale (fig. 2b).

Fig. 2. Aparate pentru studierea spectrelor Spectrofotometrele (Fig. 3) sunt de diferite tipuri dar se compun, n principiu, din urmtoarele dispozitive eseniale: o surs luminoas, un monocromator, un recipient cu perei transpareni, numit celul de absorbie, un detector i un dispozitiv pentru msurat i nregistrat efectele detectate. Pentru determinarea spectrelor n infrarou servesc drept surse luminoase, vergelele de oxizi greu fuzibili (Zr, Th, Ce) sau de carbur de siliciu, nclzite, prin trecerea unui curent electric, la cca. 1500C. Ferestrele celulelor de absorbie trebuie confecionate din materiale transparente pentru radiaiile din regiunea spectral respectiv, n cazul infraroului, se utilizeaz clorur de sodiu sau alte sruri. Spectrele n infrarou se determin la soluii ale substanelor n solveni transpareni pentru radiaiile respective sau la gaze aflate la presiune normal. se utilizeaz amestecuri de substane cu KBr, presate sub form de pastile (KBr este transparent pentru infrarou). 71

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Monocromatorul are scopul de a separa radiaiile emise de sursa luminoas n fascicule de raze monocromatice, pe care le dirijeaz apoi succesiv, printr-o fant, asupra celulei de absorbie. Detectorul are rolul de a transforma radiaia transmis, neabsorbit n alt form de energie. n spectroscopia n infrarou servesc drept detectoare termoelemente. Curentul produs de detector este nregistrat, obinndu-se curbe de absorbie.

Fig. 3. Schema unui spectrofotometru n molecule biatomice, ca HCl, HBr, etc., este posibil o vibraie de un singur fel, aceea prin care atomii se apropie i se ndeprteaz unul de altul, oscilnd n jurul unei poziii de echilibru.

Fig. 4. Curba de energie potenial a moleculei de H2 72

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

O asemenea oscilaie este prezentat printr-o curb de energie potenial n funcie de distana interatomic (fig. 4). La scurtarea legturii interatomice, energia crete mult mai repede cu scderea distanei (din cauza respingerii dintre electronii straturilor interioare ale atomilor) dect la alungirea legturii. Orice deplasare a atomilor fa de distana de energie minim, mrete energia potenial a moleculei i determin apariia unei fore elastice de revenire (P) care tinde s readuc atomii n poziia de echilibru sau poziia de energie minim, ntocmai ca ntr-un pendul mecanic. Dup legea oscilatorului armonic, P este proporional cu deplasarea x (cm) a atomilor, de la poziia de echilibru: P = kx (1) Ecuaia (1) corespunde unui oscilator armonic, reprezentat printr-o curb simetric i anume o parabol (Fig. 5). ntr-un astfel de sistem nivelurile de energie sunt situate, conform ecuaiei 4 la distane egale.

Fig. 5. Curba oscilatorului armonic Frecvena de vibraie fundamental , a unui asemenea oscilator armonic, rezult din expresia urmtoare: = 1 k 2 m (2)

73

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

unde k este constanta de for i reprezint fora de revenire raportat la unitatea de lungime a deplasrii; m este masa redus a celor doi atomi de mase m1 i m2: m= m1 m 2 m1 + m 2

Se observ c este cu att mai mic cu ct masa atomilor este mai mare i cu att mai mare cu ct constanta de for k a legturii chimice este mai mare. Energia total de vibraie a moleculelor va fi: E= 1 2 kx max 2 (3)

Spre deosebire de vibraiile sistemelor macroscopice, vibraiile atomilor n molecule sunt cuantificate. Energia de vibraie a unui oscilator molecular armonic nu poate adopta dect anumite valori proprii, ce satisfac relaia: En = (n + ) h , n = 0, 1, 2, 3, unde h este constanta lui Planck, h = 6,626 cuantice de vibraie. Vibraia fundamental corespunde tranziiei de la nivelul de energie n = 0 la nivelul n = 1. Tranziiile de vibraie ale moleculelor uzuale corespund unor energii variind ntre cca. 1 i 10 kcal/mol. Interpretarea riguroas a spectrelor IR este posibil la structuri simple, considernd molecula ca o mpreunare de mai muli oscilatori compui fiecare din doi atomi legai covalent ntre ei. Moleculele biatomice compuse din doi atomi identici, ca H2, O2, N2, etc., nu prezint frecvene n spectrul de infrarou, deoarece vibraiile atomilor n aceste molecule nu produc o variaie a momentului electric (care n cazul acestor molecule este zero). Molecula CCl4 are forma unui tetraedru n care atomii de Cl ocup colurile, iar atomul de C, centrul. Dei fiecare dintre legturile C - Cl sunt polare, molecula CCl4 nu are moment electric, 74
.

(4) 10-34 J.s ; n sunt numerele

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

cele patru momente ale legturilor compensndu-se din cauza simetriei. Totui molecula CCl4 absoarbe n infrarou pentru c n cursul anumitor vibraii suma variaiilor momentelor de legtur pe ntreaga molecul este diferit de zero. Pe baza anumitor consideraii mecanice se prevede c o molecul compus din n atomi, poate efectua 3n - 6 vibraii (sau 3n - 5, adic o frecven n plus, dac molecula este liniar). Fiecare din aceste vibraii are o frecven proprie i deci poate fi excitat de radiaii infraroii de o frecven determinat. Fiecrei frecvene observate i se atribuie n spectru o anumit vibraie a moleculei. Exist vibraii de ntindere, simetric i antisimetric i vibraii de deformaie (fig. 6). Spectroscopia n infrarou servete curent pentru identificarea substanelor i verificarea puritii lor. Fiecare substan posed un spectru caracteristic deosebit de al oricrei alte substane, cu ajutorul creia poate fi uor recunoscut. Prin msurarea intensitii unei benzi din spectrul unei substane se poate determina concentraia ei n amestecuri cu alte substane. Prin compararea spectrelor unui numr mare de substane s-a stabilit c fiecare tip de legtur se manifest prin una sau mai multe benzi, ce nu sunt dect puin influenate de ceilali atomi sau celelalte legturi din molecul. Spectrele n infrarou pot deci servi pentru a recunoate prezena anumitor atomi i a naturii legturilor dintre ei ntr-o molecul. 2. Aparatura experimental Pentru simularea unei spectrograme se va folosi produsul software IR Tutor produs de o echip condus de Charles B. Abrams i format din programatori, designeri i animatori de la Universitatea Columbia n colaborare cu firma Perkin Elmer. Pachetul software conine un tutorial bine documentat i ilustrat cu desene i animaii. Simularea unor spectrograme pentru diferite substane, poate fi utilizat pe lng calitatea de material de nvare, formare priceperi i 75

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

deprinderi i ca i o baz de date cu informaii reale despre spectrofotometrie care poate fi utilizat oricnd ca preambul la experiment. Se lanseaz n execuie n execuie programul (IRTutor.exe). Partea introductiv a acestui program (Introduction) conine un rezumat al principiilor spectroscopiei. Teoria (Theory of IR Spectroscopy) descrie cum lumina este absorbit de molecule. Interpretarea (Interpretation of Spectra) este esena acestui program de simulare. Sunt prezentate 13 spectre IR, care sunt apoi analizate n detaliu. Orice buton se acceseaz prin click stnga. Sgeata dreapt va accesa urmtoarea fereastr informativ iar sgeata stnga va accesa anterioara fereastr informativ. 3. Algoritmul de lucru 1. Se intr n meniul aplicaiei; 2. Se studiaz noiunile introductive acordndu-se atenie simulrilor grafice; 3. Se studiaz noiunile introductive acordndu-se atenie modelrilor moleculare i influenei acestora asupra datelor spectrale; 4. Se acceseaz din meniul aplicaiei opiunea Spectral Interpretation; 5. Se acceseaz pe rnd fiecare dintre spectrele moleculelor, reprezentate mai jos:

Hexan:

Toluen: Hexena: Dimetilbutan: 76

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

O acetat de etil Heptin: Heptilcianid: Hexanol: Heptaldehid Hexilamin: O Heptanon: O Acid heptanoic: O O Anhidrid butanoic: i pentru fiecare molecul se execut: 5.1. Se examineaz spectrul; 5.2. Se noteaz valorile lungimilor de und la care apar semnale n spectru (abscisa) i intensitile acestor semnale (ordonata); 5.3. Se trece la urmtoarea fereastr informativ i se noteaz condiiile de lucru; 5.4. Se parcurge tutorialul pentru fiecare grup de picuri n parte i se urmrete semnificaia acestora; 5.5. Se noteaz concluzia privitoare la interpretarea spectrului, i anume apariia semnalelor corespunztoare fiecrei grupri n spectru. O O N O O N O

77

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

6. ntrebri 1. Care sunt factorii care produc apariia picurilor n spectru? 2. Cte tipuri de spectre IR cunoatei? 3. Pe ce se bazeaz obinerea unui spectru de emisie? 4. Pe ce se bazeaz obinerea unui spectru de absorbie? 5. Care sunt prile funcionale ale unui spectrofotometru? 6. Care este semnificaia unui pic?

78

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Analiza spectrofotometric a cobaltului

1. Consideraii teoretice Analiza spectrofotometric const n msurarea intensitii radiaiei absorbite/transmise la traversarea unei soluii de ctre un fascicul de lumin monocromatic. n prezenta lucrare se urmrete absorbia i transmitana unui fascicul de lumin cu lungime de und variabil pentru soluii de sulfat de cupru cu diferite concentraii. Absorbia luminii monocromatice de ctre soluii urmeaz legea Boguert-Lambert-Beer: It = I0 10 - b c unde: It: intensitatea luminii transmise (emergente); I0: intensitatea luminii incidente (asociat cu valoarea maxim a intensitii transmise, corespunztoare apei distilate); : coeficient de extincie (absortivitate) - independent de concentraie; b: grosimea stratului de soluie; c: concentraia componentului care absoarbe radiaia (pentru soluii cu un singur dizolvat reprezint concentraia soluiei); Dac se consider concentraia i grosimea unitar c = 1, b = 1, atunci 0 dat de relaia 0 = lg(I0/It) se numete coeficient de absorban i reprezint o mrime ce depinde doar de natura substanei dizolvate, de lungimea de und a luminii i de temperatur. Valoarea lui caracterizeaz sensibilitatea determinrii: cu ct este mai mare, cu att sensibilitatea este mai mare; se numete transmitan (1)

79

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

raportul It/I0 i se noteaz cu T; mrimea -lg(T) se notez cu A i se numete absorban; absorbana este proporional cu concentraia soluiei. Reprezentnd grafic absorbana n funcie de concentraia soluiei, se obine o reprezentare de forma: 1 2 Absorban

3'

3 3''

Concentraie (mol/l)

Fig. 1. Dependena adsorbanei unui mediu omogen de concentraie Coeficientul molar de extincie se poate obine din panta dreptei n graficul Absorban = Absorban (concentraie): E = -lg(T) = lg(I0/It); E = b c; (1) Abaterile de la linearitate pot fi cauzate de fenomene concurente cu fenomenul observat de natur chimic (reacii de descompunere), fizic (evaporare), instrumental (instabilitatea cromatic). Un exemplu de abatere este ilustrat n figura de mai sus prin curbele 3' i 3''. 2. Aparatura experimental Se folosete un spectrofotometru de absorbie ca n fig. 2. Pentru etalonarea spectrofotometrului se folosete o soluie de sulfat dublu de cobalt i amoniu: Co(NH4)2(SO4)2 sau azotat de cobalt Co(NO3)2. Pentru etalonarea spectrofotometrului n cazul determinrii cu sulfat de Co se prepar o soluie 0.2M dizolvndu-se 5.831 g n ap i aducndu-se la cot ntr-un balon cotat 80

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

de 100 ml. Din aceast soluie se prepar prin diluare soluii 0.04M, 0.08M, 0.12M, 0.16M n baloane de 25ml. Schema bloc a spectrofotometrului este redat n figura urmtoare:

4 4

3 1 2 3 4 6 5 mA 4

2 7 8 9 2 10 Fig. 2. Schema Bloc a Spectrofotometrului (vezi legenda) Legend: 1 sursa de radiaie cromatic; 2 lentile; 3 fante (de intrare i ieire); 4 oglinzi; 5 prism (reea de difracie); 6 ocular; 7 sistem monocromator; 8 proba; 9 oglind rabatabil; 10 sistem de detecie i msur; 3. Algoritmul de lucru 1. Se conecteaz aparatul la reea; 2. Se alege lungimea de und prin rsucirea butonului ce comand lungimea de und la valoarea 425 nm; 3. Se alege deschiderea fantei; se recomand deschiderea cea mai mic; 4. Se regleaz punctul 0 transmitan (1 extincie) prin deplasarea comutatorului n poziia 0; n acest caz se obtureaz complet fasciculul luminos; se regleaz punctul 0 folosind butonul 0 de calibrare;

81

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

5. Se regleaz punctul de 100 transmitan (0 extincie) folosind proba martor cu ap distilat; menionm n cazul soluiilor cu mai muli ioni, se folosete o prob martor care s conin toi ionii soluiei de analizat, mai puin cei ai Co; se rotete butonul 1 de reglare pn cnd acul se deplaseaz la valoarea 100 transmitan (0 extincie); 6. Se consider soluia cu concentraia de 0.2M. Se introduce n cuva spectrofotometrului cu ajutorul unei pipete de 2ml i se introduce n spectrofotometru; se noteaz valoarea absorbanei; 7. Se repet paii 1-6 pentru valorile lungimii de und de la pasul 2 urmtoare: 440nm, 455 nm, 470 nm, 480 nm, 490 nm, 500 nm, 510 nm, 520 nm, 530 nm, 550 nm, 565 nm, 580 nm; 8. Se reprezint grafic n coordonate Extincie = f(); se stabilete maximul curbei; din desen se extrage valoarea corespunztoare a lungimii de und; 9. Se fixeaz lungimea de und la aparat la valoarea gsit pentru maxim; 10. Se regleaz din nou punctul de 0 i 100 (paii 4 i 5); 11. Pentru fiecare din soluiile 0.04 M, 0.08 M, 0.12 M, 0.16 M, 0.2 M se citete valoarea extinciei pentru lungimea de und fixat; 12. Se reprezint grafic Extincie = Extincie(concentraie); 13. Se interpoleaz liniar; aceasta constituie dreapta de etalonare a spectrofotometrului pentru ionii de cobalt; 14. Folosind dreapta de etalonare determinai concentraia unei probe necunoscute. 4. ntrebri 1. Care este rolul sursei de lumin (becul B)? 2. Ce reprezint lumina monocromatic? 3. Ce rol are monocromatorul? 4. Ce msoar detectorul D? 5. Ce semnific punctul de 0? 6. Ce valoare are extincia la punctul de 100 transmitan? 82

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

RMN i simetria molecular

1. Consideraii teoretice Sinteza organic permite obinerea de molecule cu structur complicat, ns de cele mai multe ori ceea ce se obine este un amestec de compui sau este un compus a crei structur trebuie validat de o metod de analiz. Pe de alt parte analizele materialelor plastice, ceramice i analizele de mediu presupun identificarea structurii compuilor prezeni n prob. De obicei, validarea sau stabilirea structurii compuilor organici i la o mare parte a compuilor anorganici se face cu ajutorul spectroscopiei. Sunt mai multe tipuri de spectroscopie: de rezonan magnetic nuclear (RMN);

Magnet Sond cu prob Calculator

Semnal RF Amplificator RF

Receptor RF

Detector

Radiaie RF

Traductor

nregistrator

Fig. 1. Schema bloc a unui spectrometru RMN de infrarou (IR); de ultraviolet (UV); de mas (MS); 83

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

de rezonan electronic (RES); Spectroscopia de rezonan magnetic se bazeaz de absorbia urmat

de emisia de energie sub form de radiaie electromagnetic de lungime de und cunoscut a nucleului atomilor probei. Schema de principiu a unui spectrometru este redat n figura 1. Frecvent se folosesc magnei supraconductori care opereaz la temperatura heliului lichid (4 K). Acetia asigur cmpuri magnetice intense, care asigur cteva avantaje: simplific forma spectrelor i permite interpretarea lor mai uoar (vezi Structura fin); viteza de preluare a energiei este mai mare ntr-un cmp mai intens datorit a doi factori: o la cmpuri mari este mai mare diferena mai mare de populaie ntre strile de spin (proporional cu B); o energia fiecrui foton absorbit este mai mare (proporional cu B); 2. Aparatura experimental Se consider structurile moleculare pentru o clas de hidrocarburi saturate (metan, etan, n-propan, i-propan), o clas de alcooli (metanol, etanol, 1-propanol i i-propanol) i o clas de amine (CH3-NH2, CH3-CH2-NH2, CH3-CH2-CH2-NH2 i CH3-CH(NH2)-CH3). Se vor modela cu ajutorul programului HyperChem produs de firma HyperCube (http://www.hyper.com). Se optimizeaz geometria acestor structuri folosind modulele de mecanic cuantic ale programului. Se salveaz n fiiere independente moleculele i se vor nota ordinele de simetrie. Programul HyperChem se pornete pe scurttura:

84

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Meniul acestuia se prezint n modul urmtor:

Desenare Rotire n afara atomi planului

Rotire n plan

Meniul Build este folosit pentru construcia moleculelor:

Opiunea Default Element permite alegerea tipului de atom curent n desenare:

Setup (vezi figura) permite setarea metodei de calculare pentru comenzile din meniul Compute:

Molecular Mechanics trateaz atomii ca particule Newtoniene n interaciune alturi de energia de potenial. Energia de potenial depinde de lungimea legturilor, unghiul de torsiune dintre legturi, i interaciunile intermoleculare (Van der Waals, electrostatice, puni de hidrogen). Forele sunt dependente de poziia spaial a atomilor. Fiecare dintre metodele 85

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

mecanicii moleculare (cmpurile de for) au un set extins de reguli pentru determinate de tipul atomilor. Utiliznd ferestrele de dialog se pot alege cmpurile de fore, care vor fi utilizate la calcul.

MM+ este cea mai general metod de calcul a mecanicii moleculare, funcional n principal pentru moleculele organice ca extensie a modelului MM2. Amber este o metod de mecanic molecular bazat pe un cmp de for i calcule chimice. Este conceput n principal pentru proteine i acizi nucleici. Bio+ este o metod de mecanic molecular bazat pe un cmp de for i calcule chimice, conceput n principal pentru proteine care corespund modelului CHARMM i pot fi atribuii parametrii CHARMM. OPLS este conceput pentru proteine i acizi nucleici, este similar cu AMBER-ul dar nu este o metod cu acuratee ridicat pentru interaciunile intermoleculare. Semi-empirical Methods se bazeaz pe rezolvarea ecuaiei lui Schrdinger folosind metode numerice aproximative i descriind proprietile electronilor, atomilor i moleculelor. Calculeaz doar electrovalena utiliznd parametrii derivai din experimente i bazndu-se pe funciile orbitalilor electronici:

86

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Extended Hkel este o metod simpl i aproximativ pentru cuantumul semiempiric al calculelor mecanicii cuantice. Metoda E. H. utilizat de programul HC se bazeaz pe calcule cuantice ntr-un singur punct i nu face optimizri de geometrie molecular i nici de dinamic molecular. CNDO i INDO sunt metode specifice utilizate pentru calcularea proprietilor n aproximaia de stare staionar i deschide i respectiv nchide sistemul optimiznd geometria i energia total a particulelor. MINDO3 este utilizat pentru molecule organice, cationi i polinitrocompui. MNDO este folosit pentru molecule organice care conin elemente din perioada 1 i 2 a sistemului elementelor dar nu i metale tranziionale. AM1 este folosit pentru molecule care conin elemente din perioada 1 i 2 a sistemului elementelor dar nu i metale tranziionale. PM3 a fost parametrizat pentru mai multe categorii de elemente dar nu pentru cele tranziionale. ZINDO/1 i ZINDO/S calculeaz energia moleculelor ce conin metale tranziionale. Ab Initio este caracterizat de introducerea arbitrar a unui set de sisteme de referin arbitrare pentru extinderea orbitalilor moleculari i apoi calculul explicit al tuturor integralelor se bazeaz pe acest set de sisteme de referin. Alegerea setului de baz poate schimba multiplicitatea de spin, limita de convergen i interaciune.

Metodele de calcul se gsesc grupate n meniul Compute:

87

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Metoda Single Point determin energia total a sistemului molecular. Pentru aceasta folosete modulul de calcul MM+: Geometry Optimization calculeaz structura moleculei i alege acea structur cu energie minim i fore atomice minimale:

Molecular Dynamics simuleaz micarea molecular i se pot observa de aici proprietile la echilibru i cinetica moleculei. Langevin Dynamics calculeaz modul de micare a atomilor pentru toi atomii moleculei ntr-un interval de timp de ordinul picosecundelor.

88

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Monte Carlo nglobreaz mediile atomilor selectai sau a tuturor atomilor din molecul i efectueaz calculele conform modelelor de mecanic molecular, semiempirice i ab initio. Se salveaz fiierele ntr-un format recunoscut de aplicaii RasMol i gNMR (vezi aceste aplicaii):

Se va folosi programul RasMol pentru vizualizarea spaial a geometriei (http://www.umass.edu/microbio/rasmol/) creat de un grup de cercettori din domeniul microbiologiei din Morrill IV North, Univ Massachusetts, Amherst, USA. Se ncarc aplicaia folosind scurttura acesteia dup care apare meniul aplicaiei:

Cu ajutorul meniului File se deschid fiierele create cu HyperChem:

Se folosesc meniurile de mai jos pentru selectarea formei dorite de prezentare i export:

89

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Se vor importa moleculele optimizate geometric n programul gNMR (http://www.adeptscience.co.uk/products/lab/gnmr/) creat de un grup de cercettori din Anglia, Germania i Danemarca, care simuleaz spectrele RMN de unde se vor nota deplasrile semnalelor (n ppm). Se ncarc aplicaia de pe scurttura:

Se import molecula (File/Import Molecule):

n urma importrii se activeaz o fereastr de forma:

90

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Se pot modifica opiunile de simulare de pe aceast fereastr de dialog, funcie de specificul simulrii. Se accept apoi opiunile (Ok). Molecula se import i va fi vizualizat n forma:

Pentru generarea spectrului RMN se acioneaz butonul Recalculate. Se obine spectrul:

Se coreleaz spectrul cu structura i se efectueaz identificarea picurilor pe baza considerentelor prezentate n seciunea de interpretare a rezultatelor.

91

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

3. Algoritmul de lucru 1. Se ncarc aplicaia HyperChem; 2. Se deseneaz molecula de CH4 (simbolizat printr-un singur atom de carbon n modul de vizualizare fr atomii de hidrogen; 3. Se optimizeaz modelul i se adaug atomii de hidrogen (Add H & Model build); 4. Se construiete geometria cu unul din modelele de mecanic cuantic (Setup i Compute); 5. Se pornete modelarea i se ateapt pn cnd algoritmul gsete soluia (optimul geometric) pe modelul considerat; 6. Se noteaz energia de legtur i simetria molecular; 7. Se salveaz molecula ntr-un fiier compatibil cu celelalte aplicaii (de exemplu MDL MOL); 8. Se ncarc aplicaia RasMol; 9. Se import molecula de CH4; 10. Se alege convenabil modul de vizualizare; 11. Se rotete spaial molecula astfel nct s fie pus n eviden clasa de simetrie; programul permite vizualizarea spaial a moleculei; 12. Se ncarc aplicaia gNMR; 13. Se import molecula de CH4 n gNMR; 14. Se genereaz spectrul; 15. Se noteaz deplasrile chimice; 16. Se efectueaz corelaia cu structura asociindu-se fiecrui pic semnificaia (vezi Aparatura Experimental); 17. Se repet paii 2-16 pentru celelalte molecule. 4. Interpretarea rezultatelor Electronii atomilor prezint un spin electronic. Acesta interacioneaz la rndul lui cu cmpul B aplicat pentru a da momentul unghiular electronic,

92

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

notat B. Acest cmp suplimentar, manifestat local pe fiecare nucleu se exprim prin: B = - B (1) unde se numete constant de ecranare pentru nucleul studiat. De obicei este pozitiv, dar poate fi i negativ. Ceea ce se manifest asupra nucleului Bloc este diferena dintre cmpul aplicat i cmpul magnetic suplimentar: Bloc = B + B = (1-)B n prezena cmpului Bloc frecvena Larmor corespunztoare este: L = (1-) B 2 (3) (2)

ceea ce face ca frecvena Larmor L s fie diferit pentru acelai tip de nuclee situate n nconjurri diferite (dup cum se tie distribuia sarcinii electronice a atomului considerat depinde puternic de electronegativitile elementelor i gruprilor direct nvecinate. Aceste frecvene de rezonan diferite se exprim uzual prin mrimea numit deplasare chimic. Se definete deplasarea chimic ca diferena dintre frecvena de rezonan a nucleului studiat i un standard de referin. Standardul de referin pentru protoni 1H este rezonana protonilor din tetrametilsilan, Si(CH3)4, notat TMS. Motivul acestei alegeri este c TMS se dizolv fr reacie n multe lichide.4-6 Pentru alte nuclee se folosesc alte standarde de referin.7-10 Pentru 13C se folosete ca standard frecvena de rezonan a 13C din TMS,11 iar pentru 31P frecvena de rezonan a 31P din H3PO4 85% soluie apoas.12 Diferena ntre frecvena de rezonan a standardului i frecvena de rezonana a unui anumit nucleu crete cu intensitatea B a cmpului magnetic aplicat. Deplasrile chimice sunt redate pe o scar relativ adimensional, numit scara , definit astfel: = 0 106 0 (4)

unde 0 este frecvena de rezonan a standardului. 93

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Din perspectiv experimental este important de tiut la ce deplasare relativ fa de referin va rezona un nucleu cu o deplasare chimic cunoscut. Cum frecvena de rezonan nu depinde numai de imediata vecintate a atomului, domeniul tuturor valorilor posibile de deplasare chimic ale unui nucleu dintr-o grupare formeaz un interval de deplasri chimice posibile. Fig. 2. Domeniul de deplasri chimice ale 1H n diferite grupri funcionale n fig. 2 sunt redate aceste intervale de deplasare chimic posibil ale nucleului de hidrogen 1H pentru cteva grupri, iar n fig. 3 sunt redate intervalele de deplasare chimic posibil ale nucleului de carbon cteva grupri frecvent ntlnite.
13

C pentru

Fig. 3. Domeniul de deplasri chimice ale 13C n diferite grupri funcionale Un exemplu de spectru este redat n fig. 4, pentru etanol. Existena deplasrii chimice justific apariia semnalelor n spectru. Atomii de 94

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

hidrogen, avnd diferite ecranri electronice pentru diferite poziii n molecul, furnizeaz semnale diferite. Nici protonii aceleiai grupri nu sunt scutii de discriminare, dup cum se vede din spectru. n acest caz fiecare atom d cel puin o linie n spectru, unii atomi producnd chiar dou linii. CH3CH2OH CH3CH2OH CH3CH2OH

4 3 2 1 1 Fig. 4. Spectrul H-RMN al etanolului Atomii ngroai sunt cei care produc liniile n spectru. Integrarea numeric a spectrului permite determinarea cantitativ a gruprilor n molecul. Din acest punct pn la identificarea structurii moleculare nu mai este dect o problem de reconstrucie grupare cu grupare a ansamblului molecular.13 5. ntrebri 1. Care este scopul modelrii moleculare? 2. Pe ce instrumente se bazeaz modelarea molecular? 3. Care sunt paii unei modelri moleculare? 4. Ce se obine n urma unei modelri moleculare? 5. Care este diferena ntre diferiii algoritmi de modelare molecular? 6. Ce structuri se preteaz la modelare molecular? 7. Care este utilitatea programului RasMol? 8. Ce informaii se pot obine cu programul gNMR? 9. Cum se pot exploata informaiile furnizate de programul gNMR? 10. Ce avantaje i dezavantaje ofer simularea n contrapartid cu analiza propriu zis? 95

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Voltametrie ciclic

1. Consideraii teoretice ntr-un experiment de voltametrie ciclic, tensiunea aplicat la bornele circuitului variaz ntre dou poteniale, unul maxim pozitiv i altul maxim negativ, cu un gradient de variaie constant. O variaie tipic de acest tip este ilustrat n fig. 1: U(V) 2 t(s) t(s)

-2

-2

U(V)

Fig. 1. Potenialul n funcie de timp ntr-o voltametrie ciclic Aa cum se poate obseva i din figura 1, este posibil ca variaia potenialului ntre valorile extreme ale acestuia s se fac n mai mult de un ciclu (dou sau mai multe cicluri). Acest lucru est util atunci cnd se aplic acest procedeu de voltametrie ciclic pentru a determina prezena speciilor chimice n reacii ireversibile. Celulele electrochimice folosite n voltametria ciclic (CV) au trei electrozi: electrodul de lucru, electrodul de referin i electrodul auxiliar. Speciile electroactive reacioneaz la suprafaa electrodului de lucru. O seam de electrozi pot fi folosii pentru CV. De exemplu, un electrochimist va folosi un electrod de platin sau un electrod sticlos de carbon ntr-o soluie apoas. Electrozii cu film de mercur nu sunt utilizai prea mult, datorit inconvenientului c foarte uor se oxideaz mercurul. Cei mai frecvent utilizai electrozi sunt electrodul 96

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

standard de calomel i electrodul de Ag/AgCl. Firul de platin este cel mai utilizat electrod auxiliar. Electrodul auxiliar furnizeaz suficient curent pentru electroliz. Admisie gaz inert Electrod de referin Electrod auxiliar Cma de ap Electrod de lucru

Soluia de electrolit

Fig. 2. Schema unei instalaii de voltametrie ciclic Un experiment de voltametrie ciclic necesit o soluie liber de oxigen dac potenialul folosit coboar sub potenialul de reducere al oxigenului. Aceasta se realizeaz prin barbotarea unui gaz inert n interiorul soluiei cu cteva minute nainte de efectuarea experimentului. Uneori este de asemenea necesar ca s se regleze temperatura celulei de sticl prin circulaia unui flux de ap prin cmaa exterioar vasului cu soluia de analizat. Cteva CV-uri necesit mai puin de 3 ml de soluie de electrolit. Un generator de oscilaii produce semnalul de potenial aplicat. Semnalul intr n poteniostat, care aplic tensiunea ntre electrodul de lucru i electrodul de referin. Poteniostatul previne ca curenii mari s treac prin electrodul de referin. Aceasta este foarte important, deoarece curenii mari produc o diferen ntre valoarea msurat i valoarea real a electrodului de lucru. Electrozii auxiliar i de referin sunt conectai la poteniostat n timp ce electrodul de lucru este conectat la convertorul de tensiune. Convertorul de tensiune convertete curentul msurat ce trece prin electrodul de lucru transformndu-l n tensiune, ce poate fi nregistrat. n fig. 3 este redat schema unui astfel de circuit exterior celulei de voltametrie ciclic.

97

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Celul electrochimic Electrod de lucru Electrod de referin

Electrod auxiliar Convertor curent - tensiune Poteniostat Generator de variaii de potenial

nregistrator Fig. 3. Schema circuitului exterior n voltametria ciclic t(s) H E B 2 Curent D -2 U(V)

B H

E Potenial

G Fig. 4. Forma unei voltamograme ciclice

98

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Fig. 4 arat reprezentarea unei voltamograme ciclice pentru o reacie reversibil de forma: A + eA(1) Din punctul de potenial iniial B n punctul C, este un curent nul de rspuns, deoarece tensiunea aplicat nu este suficient de negativ pentru a reduce reactantul A. Curentul crete rapid dup punctul C, punct n care ncepe reducerea lui A. Picul curentului atinge apoi valoarea sa maxim n punctul D, cunoscut sub numele de pic catodic. Curentul descrete ntre D i E deoarece transportul speciilor electroactive ctre electrodul de difuziune de ctre fenomenul de difuzie a golit de specii chimice de reactant A vecintatea electrodului. Dup ce aplicarea potenialului i atinge valoarea maxim negativ, nc se mai reduc molecule de reactant. Punctele de pe graficul tensiunii aplicate corespund cu punctele de pe graficul voltamogramei ciclice. Difuzia este procesul de transfer al materiei de la un potenial chimic ridicat la un potenial chimic sczut datorit forei cunoscut sub numele de entropie. Deplasarea (difuzia) moleculelor n soluie este cauzat de coliziunea speciilor reduse cu moleculele de solvent. Un gradient de concentraie apare atunci cnd concentraia speciilor variaz cu distana. Dac un potenial se aplic la suprafaa electrodului pentru a face ca sarcina electrodului s fie negativ, atunci orice specie oxidat de interes (A) poate fi redus pentru a forma (A) dac aceasta intr n contact cu suprafaa electrodului, conform reaciei (1). Totdeauna va fi o concentraie ridicat a speciei reduse n vecintatea suprafeei electrodului. Odat cu scurgerea timpului, concentraia speciei reduse de pe suprafaa electrodului crete. n fig. 5 cu numere de la 1 la 7 sunt marcate traseele curent tensiune ntr-o voltametrie ciclic. Acestea au urmtoarele semnificaii: (1): concentraia speciei A este maxim datorit faptului c tensiunea nu este suficient de negativ pentru a se produce reacia de reducere. Produsul A este la concentraie 0; 99

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Curent

3 4 5 F E Potenial 6

2 B H 7 C

G Fig. 5. Trasee curent - tensiune n diagrama unei CV (2): pe acest palier reducerea are loc deoarece tensiunea este suficient de negativ pentru a produce reducerea speciei A la A; de reinut c concentraia speciei A descrete n vecintatea suprafeei electrodului deoarece este A este convertit n A; produsul A este generat la suprafaa electrodului i concentraia sa rmne mic departe de electrod; (3): specia A descrete n concentraie ctre suprafaa electrodului; de aceea, viitoare reduceri necesit difuzia lui A din masa de soluie ctre suprafaa electrodului; (4): specia A este deja consumat n vecintatea suprafeei electrodului; zona lipsit de A crete n grosime ct timp potenialul electrodului este suficient de negativ pentru a converti A la A; (5): n acest punct nu mai este curent anodic; tensiunea nu este destul de mare pentru a cauza oxidarea speciei A; curentul catodic provine de la difuzia lui A ctre electrod din masa de soluie i reducerea sa; (6): de notat c concentraia speciei A crete la suprafaa electrodului i apoi descrete din nou nainte ca s ajung napoi la valoarea sa maxim din masa de soluie; reacia de oxidare convertete pe A napoi la A, deoarece

100

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

conversia lui A la A abia a nceput, doar o poriune din zona srcit n A i mrete concentraia; (7): este poriunea pe care concentraiile speciilor A i A ncep s revin la valorile iniiale; acest fapt se petrece deoarece moleculele de produs sunt convertite napoi n molecule de reactant la poteniale pozitive mult mai mari dect potenialele iniiale pentru aceast reacie. O reacie electrochimic poate fi ireversibil la diferite viteze de variaie a potenialului aplicat. Dac viteza este mare, ea poate intra n competiie cu o reacie chimic omogen i astfel s se previn consumarea speciei A- pentru formarea de B: A+e
-

komogen

(2)

n fig. 6a este prezentat o voltamogram ciclic pentru o astfel de reacie, la o vitez de variaie mic (0.1V/s) iar n fig. 6b este prezentat aceeai reacie supus voltametriei ciclice la o vitez mare (3.6V/s). Din alura curbelor se poate observa la viteza mare inhibarea procesului secundar nedorit A B cu constanta de vitez de reacie komogen = 1: Sunt situaii n care procesul cinetic controlat de potenialul aplicat la electrozi poate fi influenat i de ali factori.

Fig. 6. CV la diferite viteze de variaie a potenialului pentru (2) i (3) Relaia care leag curentul de sarcini de curentul de lucru i viteza de variaie a potenialului aplicat este dat de relaia (3): 101

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

ic 5 , i 10 c

(3)

unde ic este curentul de sarcini la descrcarea pe electrod, i curentul de lucru, = V/t viteza de variaie a potenialului iar c concentraia speciei care se descarc la electrod. Cnd concentraia substanei de analizat este mic, un parametru foarte important de luat n considerare este contribuia curentului de fond. Acest fond este compus dintr-un curent faradaic provocat de impuritile din soluie i un curent nonfaradaic. Acesta din urm nu poate fi eliminat din experiment i rezult din curentul de sarcini stabilit ntre electrolit i electrod. n fig. 6 a fost reprezentat aceast influen. Curentul faradaic produs de impuritile din soluie este ilustrat calitativ n fig. 8, pentru o vitez = 0.1V/s.

Fig. 8. Influena impuritilor asupra unei CV: (a) cu, (b) fr impuriti 2. Aparatura experimental Pentru simularea unei voltamograme ciclice se va folosi un program software conceput n 1998 de un grup de cercettori de la Universitatea Carolinei de Nord (pentru partea de algoritmic) i de la Universitatea din Massachusetts (pentru partea de implementare n Visual Basic). Programul conine rutine pentru simularea reaciilor chimice reversibile de tipurile (4a) i (4b):

102

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

2-

(4)

i a reaciilor chimice ireversibile de tipurile (5): A B


+

AB A A
-

, A
2+

A A A

,
2-

A A

B C
2-

2-

(5)

3. Algoritmul de lucru 1. Se lanseaz programul n execuie (Start/Programs/CyclicVoltSim); 2. Se acceseaz rutinele de simulare (Enter Cyclic VoltSim); 3. Pentru fiecare model (ecuaiile 4-9) se execut: 3.1. Se alege modelul (click pe icon-ul reaciei); se repet: 3.1.1. Se aleg parametrii de semnal (fereastra de dialog implicit); 3.1.2. Se aleg parametrii celulei (click pe icon-ul signal options); 3.1.3. Se ruleaz experimentul (click pe icon-ul Run Experiment); 3.1.4. Se noteaz influena parametrilor asupra CV; 3.2. Se noteaz concluziile referitoare la modelul ales; 4. Se noteaz concluziile generale asupra simulrii voltametriei ciclice. 4. ntrebri 1. Din ce sunt compuse celulele electrochimice folosite n CV? 2. Care este forma unei voltamograme ciclice? 3. Precizai dac curentul de fond, respectiv impuritile din soluie influeneaz aspectul unei voltamograme. 103

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Tensiunea de descompunere i curba de pasivare

1. Consideraii teoretice Fenomenul electrolizei se poate aplica pentru a determina tensiunea electric la care procesul de depunere electrolitic de pe suprafaa unui metal este inhibat de procesul de oxidare a metalului de ctre oxigenul din ap, fenomen care face ca metalul s se acopere cu o pelicul de oxid metalic care este un izolator electric, astfel scznd suprafaa de electrodepunere, i odat cu aceasta intensitatea curentului ntre electrozi, adic numrul de ioni de metal transportai prin soluie ctre electrod. Aceasta este tensiunea de pasivare i este punctul de maxim de pe graficul de dependen intensitatetensiune. De asemenea, din aceeai dependen se obine i tensiunea de descompunere, care este tensiunea ipotetic corespunztoare dependenei liniare curent-tensiune de electroliz pentru intensitate nul a curentului aplicat, i care se obine prin extrapolarea poriunii liniare a acestei dependene pn la curent nul. Dac d este tensiunea de descompunere, iar R rezistena celulei, punnd intensitatea curentului de electroliz egal cu zero:

I=
gsim:

U d =0 R

(1)

U = d + R I = d , deoarece RI = 0.

(2)

Aceast mrime este egal cu diferena de potenial dintre cei doi electrozi ce iau natere n urma separrii produilor de electroliz. De exemplu, la electroliza unei soluii de Me2(SO4)n ntre electrozi de platin (ineri), cnd la polul negativ se depune metalul, iar la cel pozitiv se degaj 104

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

oxigen: d = Me / Me n + OH / O
2

(3)

Potenialul fiecrui electrod n parte este dat de formula lui Nernst: = 0 + unde: este potenialul electrodului n condiiile de mediu i temperatur din laborator (V); este potenialul standard al electrodului (condiii normale de presiune i temperatur, V); R este constanta universal a gazelor perfecte (R = 8.31 J/molK); T este temperatura de lucru (K); F este numrul lui Faraday (F = 96500 C); z este numrul de electroni schimbai n procesul de reducere a unui ion; c este concentraia ionului care se reduce (mol/l). Pentru oxigen, potenialul electrodului de gaz, la care se produce reacia: O2 + H2O + 2eva fi dat de expresia: = 0 RT [OH ] 2 RT [OH ] = ln ln 1 / 4 0 /2 2F F p1 p O2 O2 (6) 2 HO(5) RT ln c zF (4)

unde p O 2 este presiunea parial a oxigenului. Tensiunea de descompunere se poate determina din graficul tensiune curent, obinut reprezentnd pe abscis tensiunea aplicat, iar pe ordonat intensitatea curentului ce trece prin celula de electroliz. Tensiunea de descompunere va fi acea tensiune la care intensitatea curentului ncepe s creasc brusc (unde legea lui Ohm devine aplicabil i pentru soluia de electrolit). n realitate, intensitatea curentului nu este egal cu zero nici sub 105

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

tensiunea de descompunere: la aplicarea unei tensiuni orict de mici, acul ampermetrului deviaz, dar n curnd revine pn aproape de zero. Nu revine chiar la zero, cci urmele de produi care se separ prin electroliz pot s reacioneze din nou cu mediul sau s dispar prin difuziune, iar pentru completarea lor apare un curent foarte slab, numit curent rezidual. Curba reprezentativ va fi de forma celei din figura 1, iar d se determin prin extrapolarea prii liniare AB pentru I = 0, adic pn la intersecia prelungirii acestei drepte cu axa absciselor. n realitate, electroliza nu ncepe la valoarea teoretic a tensiunii de descompunere, ci la o tensiune mai ridicat. Surplusul de tensiune se datoreaz nclzirii prin efect Joule, pierderilor la contacte i fenomenelor de polarizare, inclusiv supratensiunii n special la separarea substanelor gazoase. Tensiunea de descompunere este caracteristic fiecrui electrolit. ntrun amestec de mai muli electrolii, se va descompune mai nti cel cu tensiunea de descompunere mai redus. La fiecare electrod se va descrca acel ion care atinge mai iute potenialul de descrcare. n soluii apoase, unde sunt prezeni ntotdeauna ionii H+ i OH-, acetia se pot descrca adesea naintea ionilor electrolitului dizolvat. La unele metale, mai ales din grupa fierului (fier, cobalt, nichel) i aliaje ale lor (de ex. fiercrom), la creterea tensiunii apare fenomenul de pasivare, ca o rezisten la dizolvarea anodic, curentul reducndu-se brusc la valori foarte mici, pentru o anumit tensiune, numit tensiune de pasivare, p (fig. 1). Alturi de aceast pasivare electrochimic, se poate produce o pasivare chimic n prezena unor oxidani (de ex. fierul se pasiveaz n acid sulfuric concentrat). Pe fenomenul de pasivare se bazeaz elaborarea unor aliaje antiacide, rezistente la coroziune, funcionarea unor redresori electrolitici.

106

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

U (V) p d Fig1. Forma unei curbe Intensitate Tensiune la pasivarea unui conductor 2. Aparatura experimental Se va studia electroliza soluiei apoase de acid sulfuric ntre electrozi de fier, urmrindu-se variaia curentului de electroliz n funcie de tensiunea aplicat. Tensiunea variabil necesar se realizeaz cu ajutorul unui fir poteniometric de 1m, fixat pe o planet gradat n mm, la capetele cruia se aplic o diferen de potenial de 3.0-3.5V cu ajutorul unui redresor. Intensitatea se citete cu ajutorul unui miliampermetru cu mai multe scri (fig.2).

Fig. 2. Miliampermetru

107

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Celula de electroliz este format dintr-un pahar, n care se introduc electrozii din srm de fier, parial izolat. Celula de electroliz este pus n legtur cu firul poteniometric prin intermediul unui comutator dublu. n poziia 2 a acestui comutator, firul poteniometric este pus n legtur cu un circuit care conine un element etalon Weston (W), un galvanometru i un ntreruptor, circuit care servete la calibrarea cderii de potenial de-a lungul firului.

1 W ~ Scc +/2 2 1

mA

mA

Fig. 3. Montajul experimental la pasivarea Fe 3. Algoritmul de lucru 1. Se alctuiete montajul din fig. 3; se verific conexiunile; 2. Se introduc electrozii n vasul de electroliz; 3. Se introduce n vasul de electroliz o soluie de H2SO4 1N; 4. Se efectueaz experimentul: 4.1. Se fixeaz cursorul mobil al planetei cu fir la diviziunea 5cm; 4.2. Se nchide circuitul cu ajutorul ntreruptorului; 4.3. Se introduce celula de electroliz n circuit, manevrnd comutatorul n poziia 1; pentru a evita polarizarea de concentraie, soluia se agit din cnd n cnd; 4.4. Se cronometreaz 2 minute; 4.5. Se citete intensitatea la miliampermetru; 108

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

5. Se mut cursorul cu 5 cm (la diviziunile 10, 15, 20, cm); pentru fiecare nou diviziune se repet paii 4.2-4.5 pentru timpul de la pasul 4.4 de 5 minute; dac valorile de curent indicate cresc semnificativ cursorul se deplaseaz numai cu cte 2 cm, sau chiar 1 cm, pentru a surprinde ct mai exact tensiunea de pasivare. 6. Se trece comutatorul pe poziia 2; 7. Se determin cu ajutorul elementului Weston cderea de potenial pe fiecare cm de fir prin metoda compensaiei; 8. Se calculeaz pe baza cderilor de potenial de la pasul 7 tensiunile ce corespund lungimilor de fir ntrebuinate ; 9. Se traseaz graficul experimental I = f(U); 10. Se citesc din grafic potenialul de pasivare (p) i potenialul de descompunere (d). 4. Interpretarea rezultatelor Din lungimea de fir Lw, la care se face compensarea elementului Weston se calculeaz tensiunile aplicate pentru fiecare lungime de fir L: U = EW L ; EW = 1,0183 V. LW
Tabelul 1.

Rezultatele se introduc n tabelul 1. Nr. L ( cm ) LW ( cm ) I ( mA ) U ( V ) d ( V ) p ( V ) 1 2 3 4 5 5 10 15 20 25

Se va calcula eroarea absolut i relativ n determinarea valorilor V.

109

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

5. ntrebri 1. Ce este tensiunea de descompunere? 2. Cum variaz curentul de electroliz n funcie de tensiunea aplicat? 3. Care sunt reaciile la catod i anod pentru electroliza soluiei apoase de acid sulfuric cu electrozi de fier? Dar la electroliza soluiei apoase de azotat de argint cu electrozi ineri? 4. n ce const fenomenul de pasivare? 5. Cum se calculeaz un potenial de electrod? 6. De ce depinde ordinea de descrcare a ionilor la electroliz?

110

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

Electroforez

1. Consideraii teoretice Musculia vinului (drosophila melanogaster) s-a utilizat n studii genetice de aproximativ 8 ani ncoace. Unul din motive este c este uor de recoltat pstrat i nmulit. Se poate pstra ntr-un amestec de past de cartofi i zahr introduse ntr-o cutie de plastic. n acest mediu, musculiele cresc i se dezvolt. Se poate folosi cu succes ca mediu de cultur fructele alterate i zdrobite, borhotul de vin sau alte reziduuri alimentare. Populaia astfel obinut sau crescut este un model excelent pentru dezvoltarea teoriei genetice i de asemenea pentru testri. Datele obinute se pot folosi cu succes n practic. Se examineaz musculiele din cultur pe baza principiilor genetice. Scopul acestei lucrri practice este determinarea amprentei genetice a populaiei de cultur, mai exact, determinarea amprentei de aminoacizi pe care aceasta o posed. Din aceasta se pot obine informaii preioase, cum ar fi diferenele de polimorfism ale diferitor populaii. Electroforeza, devenit metod analitic dup 1960, a fost prima metod practic pentru analiza variaiei genetice i biochimice la scar larg. Principiul electroforezei este de selectare a enzimei int prin migrare de-a lungul unei matrice de gel sub influena unui cmp electric. Viteza de migrare depinde de sarcina specific (sarcina net / masa net) a proteinei, care la rndul ei depinde de sarcina aminoacizilor prezeni pe suprafaa proteinei. La un anumit pH trei aminoacizi migreaz ctre polul pozitiv (lizina, arginina, histidina) iar ali doi aminoacizi (acidul aspartic i acidul glutamic) migreaz ctre polul negativ.

111

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

n timp, toate secvenele de cod ale proteinelor sunt supuse mutaiilor genetice. Substituiile de baz n mutaii sunt tolerate dac ele nu cauzeaz o schimbare n secvena de aminoacid din codul redundant al proteinei sau substituia aminoacidului este fcut fr a cauza schimbri semnificative ale funciilor proteinei. Totodat i suprafaa proteinei se schimb n urma mutaiei, iar aceast schimbare poate fi detectat prin schimbri ce au loc n vitezele de migrare ale proteinelor, dac se urmrete acest proces repetnd electroforeza pe populaia test n timp. Se estimeaz c 30% din substituiile de baz n mutaii se observ prin schimbri vizibile n electroforez. Schimbrile n codul proteinelor difer de la o grupare activ la alta, i acest lucru se observ la electroforez prin schimbarea mobilitii proteinei. n gelul de electroforez se introduc enzime, care au ca rol selectarea din masa proteic a probei a proteinelor care sunt mai active biologic, astfel nct purificarea probei nu mai este necesar ca metod premergtoare analizei prin electroforez. Proteinele migreaz i se fixeaz n locaiile permise de enzima din gel. Proteinele plasmatice pot fi separate prin electroforez datorit ncrcrii electrice diferite. La pH = 8.5 (>pHi) proteinele plasmatice (cu excepia -globulinelor) se comport ca anioni. Ca urmare vor migra ctre anod, cu viteze care depind exclusiv de mrimea sarcinii, mrimea i forma moleculei. Fraciunea globulinelor fiind neutr, migreaz puin spre catod, datorit electroendosmozei. n mod curent, proteinele plasmatice se separ n 5 benzi: albuminele (banda cea mai apropiat de anod) 1-globulinele, 2-globulinele, globulinele i -globulinele. n vederea determinrii cantitative a fraciunilor separate electroforetic este necesar parcurgerea etapelor de fixare i colorare. n acest fel se obine proteinograma. Prin integrarea proteinogramei se obine o densitogram. Prin compararea densitogramei cu o densitogram standard 112

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

(obinut cu ser normal) se poate confirma sau infirma diagnosticul prezumtiv al unor boli, cum ar fi sindromul nefrotic, inflamaia acut sau cronic, ciroza, deficiena de 1-antitripsin etc. 2. Aparatura experimental Se vor analiza dou probe ce provin din dou culturi diferite. Se vor folosi dou enzime: -esteraza i PGM (E.C. 2.7.5.1). Aceste enzime sunt active biologic la un pH = 8.5 n mediu de triglicin (TG). Se prepar gelul imersnd enzima n TG. Se ntinde gelul pe o folie de plastic transparent. DC +

Fig. 1. Electroforeza Pentru electroforeza pe hrtie de ser, pe lng camera de electroforez i redresor (fig. 1) mai sunt necesare i benzi de hrtie de filtru Whatman (25 cm 2 cm), soluie de tampon concentrat (66 g 5,5'-dietilbarbiturat de sodiu (medinal), 35.1 g acetat de sodiu hidratat cu 3 molecule de ap, 0.2 g mertiolat de sodiu, care se dizolv ntr-un balon cotat de 1000 ml cu ap distilat i se corecteaz pH-ul la pH = 9 cu acid acetic glacial), soluie de tampon de lucru (obinut prin dizolvarea 1/10 a soluiei tampon concentrate cu ap distilat), soluie de colorare (10 g amidoshwartz 10B, 900 ml alcool metilic, 100 ml acid acetic glacial) i soluie de splare (100 ml acid acetic glacial, 400 ml metanol, 500 ml ap distilat) i soluie de eluare (4 g hidroxid de sodiu, 1000 ml ap distilat).

113

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

3. Algoritmul de lucru 1. Se prepar gelul de -esteraz n mediu de TG la pH = 8; fie acesta G1; 2. Se prepar gelul de PGM n mediu de TG la pH = 8; fie acesta G2; 3. Prelevai 10 probe din 2 populaii diferite (n stadii diferite de dezvoltare); 4. n 10 eprubete cu dop se pun cte 2 ml de ap distilat i se aeaz pe un strat de ghea; 5. Se introduce cte o musculi n fiecare eprubet i se strivete (se macin) cu ajutorul unei vergele metalice pn cnd ntreg esutul este pulverizat; 6. Se aeaz din nou tuburile pe ghea; 7. Se eticheteaz tuburile dup coninut pentru a evita confuzia; 8. Se aeaz pe gelul G1 cte 1 ml din fiecare prob ncepnd cu tubul nr. 1 pn la tubul nr. 10 i se aeaz nc o prob de 1 ml din proba nr. 1 la captul irului (pentru a servi la comparaii la sfrit); 9. Se conecteaz sursa i se regleaz un curent de 2-3 mA; se cronometreaz 20 min.; 10. Se deconecteaz curentul; 11. Se imerseaz gelul G1 ntr-un vas cu ap de robinet; 12. Se scoate vasul cu gel de sub stratul de ap; 13. Se aeaz pe gelul G2 cte 1 ml din fiecare prob ncepnd cu tubul nr. 1 pn la tubul nr. 10 i se aeaz nc o prob de 1 ml din proba nr. 1 la captul irului (pentru a servi la comparaii la sfrit); 14. Se conecteaz sursa i se regleaz un curent de 2-3 mA; se cronometreaz 20 min.; 15. Se deconecteaz curentul; 16. Se imerseaz gelul G2 ntr-un vas cu soluie de acid acetic 7%; 17. Se scoate vasul cu gel de sub stratul de soluie. 18. Se folosete o lamp UV pentru a citi deplasrile pentru fiecare prob de pe gelul G1; se noteaz aceste deplasri ntr-un tabel de forma: 114

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN Tabel. Deplasri n cmp electric ale aminoacizilor eseniali

Gelul Proba Deplasri fa de punctul iniial (mm) P1 P2 P3 P4 P5 G1 P6 P7 P8 P9 P10 P11 P1 P2 P3 P4 P5 G2 P6 P7 P8 P9 P10 P11 19. Se folosete o lamp UV pentru a citi deplasrile pentru fiecare prob de pe gelul G2; se noteaz aceste deplasri n acelai tabel; 20. Se interpreteaz rezultatele.

115

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

4. Etapele separrii n electroforeza pe hrtie 1. Se fixeaz benzile de hrtie n camera cromatografic; 2. Se impregneaz fiecare band cu tamponul de electroforez i se fixeaz orizontal (prin adeziune de rame) astfel ca cel puin 1 cm din cele dou capete s fie n soluia tampon; 3. Se efectueaz preelectroforeza pentru echilibrarea sistemului: 3.1. Se conecteaz redresorul la sursa de tensiune, se fixeaz amperajul la 0.2 mA/cm de lime; 3.2. Se las n funciune timp de 30 min.; 3.3. Se ntrerupe curentul electric; 4. Se aplic proba: 4.1. Se aplic 5-10 l ser sub forma unei benzi; 4.2. Se ateapt 10 min.; 5. Se efectueaz migrarea electroforetic: 5.1. Se stabilete legtura la sursa de curent; 5.2. Pentru migrare rapid (4-5 ore) se regleaz tensiunea la borne de 320-350 V i amperajul la 0.3-0.5 mA/ cm de lime de band; 5.3. Se deconecteaz sursa de tensiune. 6. Se efectueaz determinrile: 6.1. Se scot benzile de hrtie din camera cromatografic; 6.2. Se pun n etuv la 100C timp de 10-15 min. pentru uscare; 6.3. Se introduc n soluia de colorare timp de 15 min.; 6.4. Se ndeprteaz excesul de colorant prin trecerea proteinogramei prin 3 bi de splare (pn la decolorarea benzii); 6.5. Se tamponeaz cu hrtie de filtru uscat; 6.6. Se introduc n etuv la 80C timp de 10-15 min.; 6.7. Se pregtesc 5 eprubete; 6.8. Se decupeaz fiecare band ncepnd cu banda corespunztoare albuminei;

116

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

6.9. Se mrunete fiecare band i se introduce n eprubeta corespunztoare; 6.10. Se pipeteaz n fiecare eprubet cte 5 ml soluie de eluare; 6.11. Se agit energic; 6.12. Pentru o bun eluare se las 30 min.; 6.13. Se citete extincia fiecrei fraciuni fa de ap distilat la = 590 nm folosind un spectrofotometru; 6.14. Se calculeaz ponderea fiecrei fraciuni n amestec prin raportarea extinciei sale la suma extinciilor (5 fraciuni): ci[%] = 100Ei/Ej. 5. Interpretarea rezultatelor Pe baza observaiilor experimentale folosind noiuni de biologie genetic se identific homozigoii i heterozigoii (homozigoii sunt rezultai din ncruciri repetate ale aceluiai genotip i nu prezint perechi de gene n timp ce heterozigoii datorai prin ncruciri de genotipuri diferite prezint perechi de gene ce au ca efect perechi de amprente genetice pe gelul supus electroforezei). Prin comparaia ntre probe este posibil determinarea numrului de alelele prezente n fiecare dintre populaii; se determin astfel frecvena genelor (alelelor) i frecvena genotipurilor (un genotip se deosebete de alt genotip prin prezena unei alele i absena alteia). 6. ntrebri 1. Care este principiul metodei de electroforez? 2. Ce se observ la aplicarea diferenei de potenial pentru o prob coninnd aminoacizi eseniali? 3. Ce se poate determina cu ajutorul electroforezei? 4. Cum se interpreteaz o electroforezogram? 5. Este necesar repetarea experimentului pe aceeai populaie pentru a obine un rezultat concludent? De ce (explicai)? 117

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Referine

Robert D. Hall, Effects of Climate Change on Soils in Glacial Deposits, Wind River Z. A. Rosemond, C. T. De Rosa, W. Cibulas, and H. E. Hicks, Proceedings of the

Basin, Wyoming, Quaternary Research, Vol. 51, No. 3, p. 248-261, May 1999.
2

Great Lakes Human Health Effects Research Symposium, Toxicol. Ind. Health, 12(3/4), 814-823, 1996.
3

M. J. DeVito, L. S. Birnbaum, W. H. Farland, and T. A. Gaslewicz, Comparisons

of estimated human body burdens of dioxin-like chemicals and TCDD body burdens in experimentally exposed animals, Environ. Health Perspect, 103(9), 820831, 1995.
4

Gerritz Samuel W., Andrea M. Sefler, 2,5-Dimethylfuran (DMFu): An Internal

Standard for the "Traceless" Quantitation of Unknown Samples via 1H NMR, Journal of Combinatorial Chemistry, p. 39-41, Volume 2, Issue 1, January 11, 2000.
5

Shapiro Yury E., 1H NMR Self-Diffusion Study of Morphology and Structure of

Polyvinyl Alcohol Cryogels; American Society, JCIS, p. 453-465, Volume 212, Issue 2.
6

Wild J. M.; Artifacts Introduced by Zero Order Phase Correction in Proton NMR

Spectroscopy and a Method of Elimination by Phase Filtering, American Society, JMRE, p. 430-436, Volume 137, Issue 2.
7

Shao Chaoying, Miyazaki Yoshinobu, Matsuoka Shiro, Yoshimura Kazuhisa,

Sakashita Hirofumi, Complexation of Borate with Cross-Linked Polysaccharide Anion Exchanger: 11B NMR and Adsorption Properties Studies, Macromolecules, p. 19-25., Volume 33, Issue 1, January 11, 2000.
8

Sham Simon, Wu Gang, Solid-State

25

Mg NMR Study of Inner-Sphere Mg2+

Binding Complexes, Inorganic Chemistry, p. 4-5, Volume 39, Issue 1, January 10, 2000.
9

Drew Mark, Orton Edward, Krolikowski Paul, Salvino Joseph M., Kumar N.
19

Vasant, A Method for Quantitation of Solid-Phase Synthesis Using January 11, 2000.

F NMR

Spectroscopy; Journal of Combinatorial Chemistry, p. 8-9, Volume 2, Issue 1,

118

Lorentz JNTSCHI, Mihaela Ligia UNGUREAN

10

Gaare Kristin, Effects of La Exchange on NaY and NaX Zeolites As Characterized

by 29Si NMR, The Journal of Physical Chemistry B, p. 48-54, Volume 101, Issue 1, January 2, 1997.
11

Orendt Anita M., Facelli Julio C., Bai Shi, Rai Amarjit, Gossett Michele, Scott

Lawrence T., Boerio-Goates Juliana, Pugmire Ronald J., Grant David M., Carbon13 Shift Tensors in Polycyclic Aromatic Compounds. 8. A Low-Temperature NMR Study of Coronene and Corannulene, The Journal of Physical Chemistry A, p. 149155, Volume 104, Issue 1, January 13, 2000.
12

Osegovic John P., Drago Russell S., Measurement of the Global Acidity of Solid
31

Acids by
13

P MAS NMR of Chemisorbed Triethylphosphine Oxide, The Journal of

Physical Chemistry B, p. 147-154, Volume 104, Issue 1, January 13, 2000. Pfrommer Bernd G., Mauri Francesco, and Louie Steven G., NMR Chemical Shifts of Ice and Liquid Water: The Effects of Condensation, Journal of the American Chemical Society, p. 123-129, Volume 122, Issue 1, January 12, 2000.

119

Chimie Fizic. Experimente de Analiz Chimic i Instrumental

Editura Amici Colecia TECHNICAE ISBN 973-85727-0-3

Design: Lorentz JNTSCHI

120