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artigo de reviso / review article / discusin crtica

Ilhas de patogenicidade
Pathogenicity islands Islas de patogenicidad
Mnica Aparecida Midolli Vieira*

Resumo: Ilhas de patogenicidade constituem segmentos de DNA inseridos no cromossomo bacteriano, que atribuem uma variedade de caracteristicas de virulncia aos microorganismos que a possuem. Dentre as propriedades conferidas pelas PAIs destacam-se a capacidade de aderir e invadir o epitlio da clula hospedeira, produzir toxinas, captar ferro do meio ambiente e sintetizar o sitema de secreo tipo III, dispositivo molecular que permitem a translocao de molculas efetoras para o interior da clula hospedeira. A capacidade de adquirir propriedades patognicas em um unico evento gentico permite a evoluo, bem como o surgimento de microorganismos patognicos. Palavras-chave: Patogenicidade bacteriana. Ilhas genmicas. Evoluo. Abstract: Pathogenicity island are inserted DNA fragments in the bacterial chromosome that confer a variety of virulence traits to the microorganisms. Among this variety of virulence properties we can SEE/: the ability of adhering and invading the host cells, toxins production, iron uptake and the synthesis of Type Three Secretion System, a molecular device that allows the effectors molecules translocation inside the host cells. The feature of acquiring virulence traits in one genetic event allows the formation of new pathogens, as well the pathogenic microorganisms evolution. Keywords: Bacterial pathogenicity. Genomic island. Evolution. Resumen: Las islas de patogenicidad (PAI) son segmentos de DNA insertados en el cromosoma bacteriano, las cuales atribuyen una variedad de caractersticas de virulencia a los microorganismos que las poseen. Entre las caractersticas atribuidas por las PAI se distinguen la capacidad de adhesin e invasin del epitelio de la clula hospedera, de produccin de toxinas, de captacin del hierro del medio ambiente y de sintetizar el sistema de secrecin tipo III, el dispositivo molecular que permite la translocacin de las molculas de efectoras para el interior de las clulas hospederas. La capacidad de adquirir caractersticas patgenas en un nico acontecimiento gentico permite la evolucin, as bien la emergencia de microorganismos patgenos. Palabras llave: Patogenicidad bacteriana. Islas genmicas. Evolucin.

Patogenicidade
Patogenicidade definida como a capacidade de um microorganismo de causar doena. Os microrganismos patognicos se distinguem de outros da mesma espcie pelo fato de possuirem e expressarem genes que codificam fatores de virulncia, isto , fatores que propiciam a colonizao e ocorrncia de diversos eventos que subvertem a fisiologia hospedeira, ocasionando o aparecimento de sinais e sintomas anormais, que iro, finalmente, definir o estado de doena.

Entre os fatores de virulncia mais importantes encontram-se as adesinas, que possibilitam aos microorganismos a colonizao dos tecidos; as toxinas, as invasinas, os sistemas de captao de ferro, e os fatores que abolem as defesas do hospedeiro. Alm disso, a aquisio de genes que permitem a resistncia a drogas antimicrobianas tornou-se um elemento adicional no arsenal de virulncia das bactrias. Eventos mutacionais podem levar aquisio de novos fentipos pelas bactrias. Nestes eventos, sequncias genticas so modificadas

podendo conferir vantagens ao microorganismo, tornando-o algumas vezes patognico, sendo que essa caracterstica perpetuada em sua prognie. Neste artigo, no sero abordados tais eventos. Outra forma de aquisio de genes envolvidos com virulncia se d por meio de processos de transferncia de material gentico entre as bactrias. Neste caso, as bactrias no patognicas adquirem DNA exgeno e podem evoluir tornando-se patgenos. Conhecem-se trs formas bsicas de transferncia de material gentico entre bactrias:

* Biomdica. Ps-doutoranda em Cincias pela Universidade Federal de So Paulo. Disciplina de Microbiologia Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, Universidade Federal de So Paulo. E-mail: monica.vieira@unifesp.br

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I. por meio de um fenmeno denominado conjugao, onde o contato com outras bactrias vivas possibilita a transferncia de genes de virulncia presentes em uma molcula de DNA extra-cromossmica denominada plasmdeo; II. captando DNA livre no meio ambiente em um processo denominado transformao e, finalmente, III. por um fenmeno denominado transduo ou converso lisognica, onde, virus que infectam bactrias (bacterifagos) transferem genes de virulncia para as mesmas. Nos anos 90, a descrio, pela primeira vez, de uma enorme regio de DNA exgeno incorporada ao genoma de uma amostra de Escherichia coli causadora de infeco urinria, originou pesquisas que culminaram com a descoberta das ilhas genmicas (IG) e, dentre elas, as ilhas de patogenicidade.

Ilhas de patogenicidade (PAI)


O conceito de ilha de patogenicidade (pathogenicity islands, PAI) foi introduzido por Hacker e col.1 em 1990. ao estudar a virulncia de amostras de Escherichia coli causadoras de infeco urinria (Uropathogenic E. coli, UPEC), esses autores observaram uma ligao entre os genes que codificavam fatores de colonizao que permitem s UPECs aderirem s clulas de vias urinrias e o gene responsvel pela produo de hemolisina (fator de virulncia das UPECs). Esses genes estavam presentes em grandes regies cromossmicas, que apresentavam caractersticas prprias e grande instabilidade. A partir dessa nova viso, a presena de PAIs foi descrita em diversos microorganismos causadores

de doenas em humanos, como tambm em patgenos de animais e plantas. Descritas como grandes elementos genticos, que apresentam propriedades diferentes do restante do genoma bacteriano e apresentando pelo menos um gene associado patogenicidade, as PAIs podem tambm codificar vrios fatores de virulncia, bem como podem codificar parte ou todo arsenal molecular para que esses fatores consigam alcanar o alvo na clula hospedeira. Um exemplo o sistema de secreo que comumente encontrado em enteropatgenos. Sistemas de secreo so dispositivos moleculares que permitem s bactrias exportar para o interior das clulas hospedeiras, protenas denominadas efetoras. Um dos sistemas muito bem descrito e encontrado em bactrias que infectam o trato gastrointestinal o sistema de secreo tipo III (SSTT), onde protenas so introduzidas na clula hospedeira por meio de uma seringa molecular (Figura 1). Uma vez no interior da clula, as protenas efetoras interagem com domnios de protenas do hospedeiro, por meio da fosforilao ou transferncia de resduos, que, em geral, resulta em uma cascata de reaes que promovem modificaes no citoesqueleto, escape de sistema de defesa no interior de fagossomos, morte e outras alteraes celulares2. Embora os sistemas de secreo sejam extremamente semelhantes entre as diversas espcies patognicas, a funo ou o alvo da molcula efetora que translocada por esses sistemas que vai determinar a estratgia de virulncia de um microrganismo em particular. Em geral, no caso dos sistemas de secreo codificados em ilhas de patogenicidade, as protenas exportadas causam ou ajudam a causar danos s clulas hospedeiras, em favor da sobrevivncia e multipli-

cao bacteriana. Neste sentido, os sistemas de secreo so essenciais para a patogenicidade de diversos microorganismos. Embora possuam genes de virulncia diversos, conforme os microorganismos que as possuem, as PAIs apresentam vrias caractersticas em comum.

Caractersticas das PAIs


As PAIs so segmentos relativamente grandes de DNA (normalmente possuem entre 10.000 a 200.000 pares de bases), que codificam fatores de virulncia, como invasinas, adesinas, toxinas, ou componentes que possibilitem a ao dos fatores citados. As PAIs apresentam contedo de guanidina e citosina (G+C) diferente do restante do cromossomo, geralmente esto localizadas em regies especificas no genoma bacteriano, associadas a genes que codificam RNA transportador (RNAt), como pheU, pheV, selC e leuX 5, entre outros (Figura 2). Outra caracterstica interessante encontrada nas PAIs a presena de fagos temperados, sequncias de insero e integrases (elementos envolvidos na mobilidade gentica) nas extremidades da ilha, indicando a presena de hot spots (pontos quentes), e significando um local no genoma onde a insero ou deleo facilitada. Essa caracterstica tambm fornece pistas de que a transferncia horizontal de grandes fragmentos de DNA seja, provavelmente, a explicao para a aquisio de novos fatores de virulncia pelas bactrias. A Figura 2 apresenta um esquema hipottico de como as PAIs colaboram na evoluo de um patgeno. A ausncia das PAIs em microorganismos no patognicos da mesma espcie permitiu que estudos de sequenciamento de DNA e posterior comparao com o DNA de espcies patognicas levasse

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Figura 1. A. Esquema do sIstema de secreo tipo III, aqui apresentado com dois anis atravessando a membrana e a agulha surgindo da superficie da bactria. As proteinas efetoras e translocadoras esto estocadas. B. Esquema do SSTT em operao. As proteinas translocadoras formam um poro na membrana da clula alvo e as proteinas efetoras so translocadas para o citosol da clula alvo. C. Microscopia eletrnica da superficie de bactria com agulhas do SSTT. Baseado, com modificaes, em Troisfontaines P. and Cornelis G. R., Physiology, 20:326-339, 2005

descoberta de novas ilhas, denominadas ilhas genmicas (Genomic Islands, GI)3. Quando estas ilhas apresentam genes comprovadamente ligados virulncia so denominadas de PAI.

tgenos humanos e de animais. Descreveremos abaixo alguns exemplos de PAIs em bactrias que so importantes causadoras de doenas em humanos.

PAIs em patgenos humanos


A Tabela 1 resume as caracteristicas de PAIs estudadas em pa-

Escherichia coli enteropatognica (EPEC)


As EPECs so uma subclasse das Escherichia coli causadora de diarria

infantil, principalmente no primeiro ano de vida, sendo, em diversos pases em desenvolvimento, um dos agentes responsveis por significativa morbidade e mortalidade infantil nessa faixa etria. O principal fator de virulncia das EPECs a sua capacidade de causar leses nas clulas epiteliais do intestino humano (entercitos), conhecidas como leses AE (atta-

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ching and effacing). A leso AE caracterizada pela aderncia ntima da bactria ao entercito, formao de um pedestal na regio de aderncia, e destruio das microvilosidades das clulas do hospedeiro, aspectos que podem ser visualizados por microscopia eletrnica4. Aps a descrio do fenmeno AE, MacDaniel e col5 demonstraram que todos os genes necessrios para provocar essa leso estavam localizados em uma PAI, que foi denominada LEE (locus of enterocyte effacement). LEE apresenta cerca de 40.000 pares de bases organizados em genes necessrios formao da leso. Alm disso, possui contedo G+C diferente do restante do genoma hospedeiro e, na amostra primeiramente estudada, est associada regio de genes que codificam o RNAt selC, isto , todas as propriedades que definem uma PAI. LEE de EPEC codifica a adesina que ir se ligar membrana do entercito, (denominada intimina), uma srie de protenas efetoras que causam modificaes no citoesqueleto e na maquinaria da clula hospedeira e o sistema de secreo que possibilitar a transferncia das mesmas. Alm de todos esses fatores, LEE codifica uma protena nica pela sua funo, a protena receptora da intimina (denominada Tir), que passa atravs do sistema de secreo e se insere na membrana do hospedeiro, servindo de receptor para a intimina. Uma informao extremamente interessante, obtida em experimentos de laboratrio, o fato de que, quando LEE foi transferido, por meio de tcnicas moleculares, para uma Escherichia coli no patognica, a mesma passou a causar a leso AE6. Essa informao deu aos pesquisadores a noo de que a evoluo dos microrganismos pode se dar em grandes passos7, contrastando, neste caso, com a teoria de Darwin onde a evoluo

Figura 2. Estrutura geral de uma PAI. (A) PAIs esto normalmente inseridas no core genmico da amostra hospedeira (barra cinza escuro) em sitios especificos que so com frequncia genes tRNA or tRNA-like (barra cinza com listas).Genes de mobilidade, como as integrases (int), quase sempre se encontram no inicio da ilha perto tRNA. As PAIs apresentam um ou mais genes ligados virulncia (V1 to V4) e esto comumente intercaladas por outros elementos de mobilidade como sequncias IS (ISc) ou elementos IS (ISd). Os sitios de ligao DRs (tringulos),so usados nos processos de insero ou deleo. (B) Uma das caracteristicas das PAIS um conteudo G+C diferente do genoma. Essa caracterisitica comumente usada na identificao de uma nova PAI. (Baseado em Schmidt H. & Hensel M. (19), com modificaes)

se daria lentamente, em pequenos passos8.

Escherichia coli enterohemorrgica (EHEC)


As EHECs so descritas como enterobactrias que produzem citotoxinas especificas e que so capazes de causar diarria aquosa, s vezes sanguinolenta, e que pode evoluir para sndrome urmica hemoltica (SHU). A SHU se caracteriza por um conjunto de sintomas que engloba: anemia hemoltica, trombocitopenia e insuficincia renal. A SHU pode ser fatal e uma das preocupaes dos servios de sade pblica de vrios pases, como EUA, Inglaterra e Argentina, entre outros, onde a transmisso deste patgeno ocorre

principalmente pela ingesto de carne bovina9. Estudos genticos de amostras isoladas de surtos de diarria mostraram que alm de possuir genes que codificam a produo de citotoxinas, as EHECs apresentam LEE em seu genoma (o que as capacita a formar leso AE no epitlio intestinal), alm de vrias outras PAIs. Para surpresa dos pesquisadores, LEE de EHEC no confere a propriedade de causar leso AE quando transferido para uma Escherichia coli no patognica, indicando que em EHEC, diferentemente de EPEC, so necessrios outros elementos que no so codificados em LEE para provocar a leso AE10 (Figura 3). Recentemente foi descrita uma protena codificada fora da regio LEE, que necessria para fazer alteraes bioqumicas no re-

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Tabela 1. Caractersticas moleculares e de virulncia de PAIs de patogenos bacterianos causadores de doenas em humanos e animaisa. (Baseado em Schmidt H. & Hensel M. (19), com modificaes
Espcieb (patotipo) E. coli (UPEC) 536 PAI I
536

Amostra

PAI

Tamanho (pb)

Sitio de insero

Estabilidade

% G+Cc

Caracteristicas e determinantes de virulncia codificados na PAI Alfa hemolisina, fimbrias, adesinas Alfa hemolisina, fimbria P, adesina Hek, adesinas semelhantes a hemaglutinina Fimbria S, sideroforo iro, adesina Sap, protease TSH-like hemoglobina, HmuR-like heme receptor Sintese de sideroforo, captao de ferro, Alfa hemolisina, Alfa hemolisina, Prs, (CNF1), hemaglutinina Alfa hemolisina, fimbria P, aerobactina Fimbria P, sideroforos Translocao deTir, T3SS Iha (adesina), TlpA-D (teluritoR) Toxina para macrofago, ClpB-like chaperone RTX-like exotoxina, sistema de transporte Urease gene cluster Adesina Urease gene cluster spa-inv, determinantes de invaso PagC-like factor LEE eae, translocao de Tir, T3SS EspC, ORF3 InvA, OrgA, SptP, SipA, SipB, SipC, SopE (T3SS, invaso e enteropatogenicidade) SsaJ, SseABC, SpiC (proliferao intracelular; T3SS) MgtC, B, MarT, MisL (proliferao intracelular, captao de magnsio)

76,843

tRNA selC

Baixa

46.0

(UPEC)

536

PAI II

536

102,200

tRNA leuX

Baixa

46.0

(UPEC)

536

PAI III

536

68,124

tRNA thrW

Baixa

47.0

(UPEC) (UPEC) (UPEC) (UPEC) (UPEC) (EHEC)

536 J96 J96 CFT073 CFT073 EDL933 68-24 EDL933

PAI IV PAI I

536

30,200 >170,000 >110,000 57,988 >71,684 43,590 >8,040 35,140 25,164 87,620 31,726 87,547 16,947 23,454 43,417 35,624 15,195 40,000

tRNA asnT tRNA pheV tRNA pheU tRNA pheV tRNA pheU tRNA selC NP tRNA aspV ybaT clp ycdT ycdU Z4179 pheV tRNA selC tRNA selC ssrA fhlA

Baixa NPd NP NP NP Alta NP NP NP NP NP NP NP NP NP Alta NP Mdia

57.0 NP NP 42.9 48.8 40.91 NP NP NP NP NP NP NP NP NP 38.36 40.5 42.0

J96

PAI II PAI I

J96

CFT073

PAI II

CFT073

LEE TAI OI#7 OI#28 OI#43 OI#47 OI#48 OI#115 OI#122 OI#148

(EPEC)

E2348/69 E2348/69

LEE EspC SPI-1

S. enterica

sv. Typhimurium sv. Typhimurium sv. Typhimurium

SPI-2

40,000

tRNA valV

Alta

44.355.5 47.5

SPI-3

17,000

tRNA selC

NP

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Tabela 1. Caractersticas moleculares e de virulncia de PAIs de patogenos bacterianos causadores de doenas em humanos e animaisa. (Baseado em Schmidt H. & Hensel M.19, com modificaes (continuao)
Espcieb (patotipo) Sitio de insero ssb/soxSR tRNA serT % G+Cc 37-54 43.6 Caracteristicas e determinantes de virulncia codificados na PAI T1SS, secreo de toxinas, morte celular SopB (SigD), PipB (proteinas efetoras para SPI-1 e SPI-2) Antigeno Vi, SopE, pili tipo IV T1SS, RTX-like protein Resistncia multipla a antibioticos, ampicilinaR (Pse-1), cloranfenicolR (FloR, Cat), estreptomicinaR (AadA2), sulfonamidasR (Sul I), and tetraciclinaR (TetR, TetG) FyuA, Irp1, 2, Ybt, YchF (sintese de sideroforos) Translocao de CagA, T4SS, estimulao da sintese de IL-8 SigA, Pic (She), Shet1A and Shet1B, Sap (enterotoxinas, proteases) IucA, IucB, IucC, IucD, IutA aerobactina, imunidade a colicina V Operon da aerobactina (captao de ferro) GtrA, GtrB, Gtr (biossintese de lipopolissacarideo) estreptomicinaR, ampicilinaR, tetraciclinaR, captao de ferro

Amostra sv. Typhimurium sv. Typhimurium sv. Typhi sv. Typhi CT18

PAI

Tamanho (pb)

Estabilidade

SPI-4 SPI-5 PAI principal/ SPI-7 SPI-9

25,000 7,000

NP NP

134,000-146,900 16,000

tRNA pheU ssrA

NP NP

NP NP

(DT104)

SGI

152,415

thdF

NP

41-58n

ssp. III, IV H. pylori S. flexneri

HPI cag

NP 37,000-40,000

tRNA asnT glr

NP Baixa

NP 35.0

YSH6000T

SHI-1

46,603

tRNA pheV

Baixa

49.0

SA100/M90T S. boydii S. flexneri O1392 Y53

SHI-2 SHI-3 SHI-O

23,800 21,000 10,600

tRNA selC tRNA pheU tRNA thrW

NP NP NP

48.6 51.0 40.0

YSH6000

SRL

66,257

tRNA serX

Baixa

49.8

a tRNA indica a presena do locus gentico para tRNA que so adjacentes a PAI. Baixa mdia e alta instabilidade indica se a PAI apresenta alta frequncia de deleo ou est estavelmente inserida no genoma. b Amostra usada para caracterizao e identificao da PAI. c O conteudo G+C do background inteiro do cromossomo (core) so os seguintes : E. coli, 50.5%; S. enterica, 52 a 53%; H. pylori, 39%; d NP, no publicado

ceptor de intimina nessa classe de E. coli 1. Essa modificao importante para que o mesmo desempenhe sua funo na interao com a intimina e desencadeie todo processo inicial para formao da leso AE.

Escherichia coli uropatognica (UPEC)


A E. coli o agente causador mais comumente isolado em infeces do trato urinrio. Utilizando-

se de adesinas especficas, as UPECs podem colonizar diferentes tipos celulares do epitlio urinrio e provocar leses por meio da produo de hemolisina e de uma citotoxina denominada fator necrotizante cito-

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txico (cytotoxic necrotizing factor, CNF). A hemolisina pode romper hemcias, clulas endoteliais e clulas do trato urinrio, enquanto que o CNF causa profundas modificaes do citoesqueleto, quando no interior das clulas hospedeiras, culminando em morte celular. As primeiras descries desses fatores como pertencentes a PAIs em UPEC foram feitas por Hacker e cols. 1 em uma amostra de UPEC isolada de um caso de pielonefrite. Essa amostra (denominada 536) demonstrou, a princpio, apresentar duas ilhas (PAI I e PAI II ), a primeira continha genes para hemolisina e a segunda genes para hemolisina e fmbria P. A PAI I possui mais de 70.000 pares de bases e est associada ao gene selC, enquanto a PAI II est associada ao gene leuX e apresenta um pouco mais de 100.000 pares de bases. Posteriormente foram detectadas pelo menos mais duas PAIs nessa amostra. Outros autores12, estudando a amostra J96, tambm isolada de pielonefrite, descreveram duas novas PAIs: a PAI I contendo os genes codificadores para hemolisina e fimbria P, est associada a pheV e apresenta mais de 170.000 pares de bases; e a PAI II , com110.000 pares de bases, que se encontra integrada a pheU e codifica para hemolisina e para CNF. At o momento j foram descritas sete PAIs em uma outra amostra de UPEC isolada de pielonefrite (amostra CFT073)13,14. Do mesmo modo foram identificadas algumas GIs, cujo papel na patogenicidade dessa amostra est sendo atualmente investigado14.
536 536 536 536 J96 J96

Figura 3. Modelo de desenvolvimento de PAI em E. coli patognica. Neste modelo bsico, DNA externo adquirido por uma E. coli ancestral, por exemplo uma amostra habitante normal do intestino dos vertebrados , A, em EHEC, um plasmidio associado virulncia, pelo menos um bacteriofago portando genes para toxina stx e vrias ilhas genmicas foram adquiridos e mantidos devido a adaptao especifica em determinados ambientes. As Ilhas genmicas podem estar envolvidas no desenvolvimento de doenas como : diarria e sindrome urmica hemolitica, apos colonizao do intestino grosso (A), diarria aquosa apos colonizao do intestino delgado (B), infeco do trato urinrio apos colonizao e produo de hemolisinas (C). Esses eventos provavelmente levaram ao desenvolvimento dos patotipos especificos de E. coli, exemplos de EHEC (A), EPEC (B), and UPEC (C). Genes de tRNA e sitios de incorporao de bacteriofagos esto indicados por retngulos cinza claro com pontos e retngulos cinza escuro, respectivamente. stx, Shiga toxin gene; OI, O-island; espC, E. coli secreted protease gene. (Baseado em Schmidt H. & Hensel M.19, com modificaes)

Salmonella enterica
Salmonella enterica compreende vrias subespcies (sorotipos), sendo a maioria isolada de casos clnicos, como a Salmonella Typhimurium. A

salmonelose uma infeco do trato intestinal, causada principalmente por alimentos ou pelo contato com pessoas contaminadas, os sintomas da salmonelose so dor abdominal e diarria com muco, que pode se estender por vrios dias devido capacidade da Salmonella de invadir o epitlio intestinal. A maioria dos fatores de virulncia da Salmonella est codificada em genes agrupados em vrias PAIs no cromossomo bacteriano denominadas SPI (Salmonella Pathogenicity Islands). A capacidade de invaso da Salmonella Typhi-

murium est codificada em genes localizados em uma PAI denominada SPI-1. Alm de codificar protenas que capacitam a invaso de clulas do hospedeiro, existem na SPI-1, genes que codificam uma srie de protenas para o sistema de secreo. Atravs desse sistema de secreo passam protenas efetoras que, uma vez dentro da clula intestinal, atuam na clula hospedeira, causando modificaes no citoesqueleto e, consequentemente no arcabouo celular, possibilitando desse modo a entrada da bactria15.

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Alm da invaso do epitlio, a Salmonella Typhimurium capaz de causar infeces sistmicas, por meio da proliferao dentro do organismo do hospedeiro. Essa capacidade se deve a protenas codificadas em outra PAI, denominada SPI-2. Essas protenas protegem a bactria dos mecanismos de defesa desencadeados pelos fagcitos, quando esta fagocitada. Dessa maneira a Salmonella Typhimurium consegue sobreviver e se multiplicar nas clulas destinadas defesa dos tecidos e destruio dos microorganismos. Essa segunda ilha de patogenicidade ,SPI-2, tambm codifica seu prprio sistema de secreo. A SPI-1 apresenta, aproximadamente, 40.000 pares de bases e, fugindo regra, no est associada a genes de RNAt, enquanto que a SPI-2, de tamanho semelhante, est associada a genes de RNAt avalV. Uma outra ilha, SPI-3, embora menor (17.000 pares de bases), tambm codifica elementos que permitem a sobrevivncia da Salmonella no meio intracelular. Foram descritas outras PAIs em Salmonella que no possuem seu prprio sistema de secreo e realizam suas funes por meio de um verdadeiro consrcio, utilizando os sistemas codificados em SPI-1 e SPI-2. A identificao de genes de virulncia por meio de estudos em modelo animal permitiu a descrio da sexta PAI em Salmonella Typhimurium16. Atualmente se conhecem mais de onze PAIs nesse gnero bacteriano. Esse intrincado sistema de protenas que fazem uma conexo entre si, torna a Salmonella um enteropatgeno extremamente complexo, que consegue atravessar a barreira gastrointestinal e sobreviver dentro de clulas fagocitrias.

Helicobacter pylori
O H. pylori uma bactria que infecta a mucosa estomacal tornan-

do-se o agente causador da maioria dos quadros de gastrite. Esse microorganismo capaz de viver no meio hostil do estmago devido ao fato de possuir uma via nica de adaptao ao meio cido do estmago. Essa capacidade se deve a produo de uma enzima, denominada urea se, que converte a uria em bicarbonato e amnia, a qual neutraliza o cido do meio gstrico. O fato da mucosa estomacal ser protegida de seu prprio cido pela existncia de uma fina camada de muco, permite que o H. pylori se multiplique nessa camada e fique protegido da resposta imune do hospedeiro. Na maioria dos indivduos infectados pelo H. pylori o quadro assintomtico, mas algumas pessoas podem desenvolver lcera gstrica ou duodenal. O principal fator de virulncia do H. pylori a produo da protena CagA que, de maneira semelhante intimina de EPEC, interage com diversas protenas aps sua translocao, atuando no citoesqueleto da clula hospedeira e provocando a formao de pedestais, alm de causar proliferao das clulas da mucosa gstrica17. O gene para produo de CagA (cytotoxin associated gene), est localizado na PAI cagA, de cerca de 40.000 pares de base, que, diferentemente de outras PAIs, no est associada a genes de RNAt, mas sim ao gene da enzima glutamato racemase. A presena de genes codificadores das protenas do sistema de secreo na PAI cagA tambm demonstrou ser essencial para a patogense do H. pylori18. A PAI cagA tambm apresenta sequncias genticas que so necessrias para o estmulo da sntese de interleucina 8 (IL-8) pela clula hospedeira, essa interleucina responsvel pela resposta inflamatria observada na mucosa gstrica18. Anlises moleculares dessa PAI em

amostras isoladas de pacientes mostraram que existe uma correlao entre a integridade gentica da ilha e a severidade da doena.

Consideraes finais
As recentes tecnologias de anlise de sequncias genticas revelaram que as PAIs, na verdade, so um mosaico de genes, e no uma sequncia contnua de genes enfileirados. Esse mosaico se formou por meio da aquisio de genes obtidos pela transferncia horizontal de DNA (entre clulas no parentais), durante a evoluo da bactria. Esse fato corroborado pela constatao da existncia de diversas sequncias de insero observadas nas PAIs. Algumas PAIs so geneticamente instveis, como as das UPECs e a do H. pylori, enquanto que as PAIs de EPEC, EHEC e Salmonella so extremamente estveis. A explicao da estabilidade nestas ltimas,pode ser devido a perda ou inativao de genes que permitiriam mobilidade gentica nesses patgenos. A grande quantidade de sequncias de insero e de genes de fagos apresentadas pelas PAIs sugere que os bacterifagos seriam os principais responsveis pela sua formao. A compreenso sobre a estrutura peculiar das PAIS que inclui a associao a genes de RNAt e contedo G+C diferente do restante do genoma hospedeiro, aliada ao desenvolvimento da bioinformtica, tem possibilitado a deteco de novas ilhas genmicas. Esses conhecimentos permitem avanos no estudo da patogenicidade e evoluo microbiana, bem como na deteco de patgenos emergentes. Como j foi mencionado anteriormente neste artigo, essas regies de DNA organizadas que compem as ilhas genmicas e, dentre elas, as

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PAIs aqui comentadas, constituem um mecanismo utilizado pela natureza para promover variabilidade gentica de uma forma muito mais

agressiva que aquela divisada por Darwin. Neste caso, a transferncia de operons completos de uma clula para outra, muito frequentemente

sem o limite de barreiras de gnero e espcie, tem o potencial de modificar rapidamente a capacidade adaptativa dos microorganismos.

Referncias
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Recebido em 25 de agosto de 2009 Aprovado em 28 de setembro de 2009

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O Mundo

da

Sade, So Paulo: 2009;33(4):406-414.

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