Ferrera-Cerrato et al Procesos de biorremediacin de suelo y agua contaminados por hidrocarburos del petrleo Rev Latinoam Microbiol 2006; 48 (2):

179-187 183 e d g i r a p h c i c . o m Los reactores de suelos activados (RSA) son una tcnicade biorrestauracin ad situ o ex situ que se lleva a cabo ensistemas ingenieriles que consisten en biorreactores, instalaciones de acondicionamiento del suelo contaminado, e ins-talaciones de tratamiento y acondicionamiento de emisio -nes. 10,39,40 Los reactores de suelos activados se utilizan paratratar zonas contaminadas donde el suelo presenta alto con-tenido de arcilla ( 20%) y materia orgnica ( 4%), o cuan-do los compuestos txicos son muy recalcitrantes y se en cuentran en concentraciones muy altas, o bien cuando eltratamiento se quiera terminar en un lapso relativamente corto. En el reactor de suelos activados el tratamiento de losmateriales contaminados se realiza en fase acuosa y es man-tenido en suspensin mediante agitacin, lo cual per mitemayor transferencia de masa, y tiempos de tratamiento rela-tivamente menores. Los parmetros ambientales pueden serbien controlados y se puede utilizar la bioestimulacin y labioaumentacin, adems se consigue aumentar la disponi -bilidad del contaminante con la adicin de solventes y ten-soactivos o por la produccin de biotensoactivos en elmismo reactor.Las desventajas ms notorias de los RSA estn relaciona-das con los relativamente mayores costos de la tecnologa,mismos que dependen del manejo y acondicionamiento delsuelo, con la construccin y operacin de los biorreactores, ycon el eventual tratamiento de emisiones gaseosas. 10 Comoen todo proceso de biorremediacin, los microorganismosson el corazn del proceso de RSA. Los RSA mayoritaria-mente funcionan con consorcios microbianos, muchos prove-nientes de la propia microflora nativa, y otros enriquecidos oinoculados con consorcios especializados en la biodegrada-cin de los contaminantes de inters (bioaumentacin). Losgrupos microbianos importantes identificados en RSA inclu-yen bacterias del grupo de las pseudomonadales, actinomice-tos, bacterias metantrofas y deshalorrespiradoras, algunas ar-queas como las metanognicas, y ms recientemente aunqueno en escala comercial, hongos ligninolticos.Respecto al problema de la disponibilidad de contami-nantes adsorbidos al suelo, el Grupo de Biotecnologa Am-biental (CINVESTAV) ha hecho contribuciones en la caracterizacin de la histresis contaminante-suelo, por medio deconceptos y protocolos de coeficiente de histresis (CH) yfactor de disponibilidad (FD) que ayudan a seleccionar RSAcomo tcnica de restauracin de suelos. 33,34,39

Cuando la his-tresis es muy grande (CHe 6), el tratamiento del suelo con-taminado en RSA es recomendable puesto que las tcnicas insitu resultaran inefectivas o muy lentas. Cuando CHe 6 serecomienda utilizar tensoactivos o solventes para facilitar ladesorcin de contaminantes. Por otro lado, el FD provee uncriterio cuantitativo para elegir entre tratamientos de desor-cin de un determinado sistema suelo-contaminante. CuandoFDe 1.5, el tratamiento de desorcin de inters es ms venta- joso que el tratamiento de referencia.Con base en lo anterior, se han identificado varias reasprometedoras de investigacin sobre RSA en el futuro: 40 i)desarrollo de procesos basados en la utilizacin de aceptoresde electrones secuenciales o combinados para aumentar ladegradacin de contaminantes recalcitrantes y txicos (pla-guicidas y compuestos organoclorados, explosivos, etc.), ii)estudios ms profundos sobre la disponibilidad de contami-nantes y su cometabolismo microbiano en presencia de otrasfuentes de carbono, iii) seguimiento e identificacin por me-dio de tcnicas de biologa molecular (PCR-DGGE, PCRTGGE, ARDRA, etc.) de las comunidades microbianas exis-tentes en el sistema; de esta manera se podr hacer elseguimiento y profundizar en el estudio de los efectos de bio-estimulacin, enriquecimiento y bioaumentacin sobre eldesempeo microbiolgico y su relacin con el desempeopurificador de los RSA, y iv) desarrollo de ensayos de eco-toxicidad multiespecies para complementar la evaluacin dela efectividad del proceso de biorremediacin empleado.El Grupo de Biotecnologa Ambiental ha realizado ex -perimentos con RSA a escala-laboratorio, aplicados a la res-tauracin de un suelo pesado contaminado con 300 mg 2,4-D kg -1 de suelo. Se evalu el efecto del aceptor deelectrones (RSA aerobio y RSA sulfato-reductor) y de laadicin de s acarosa como fuente de carbono degradable;cada tipo de RSA fue inoculado con consorcios aclimata -dos previamente a 2,4-D. 37,38 En este estudio, el reactor desuelos activados aerobio (RSA-A) mostr mayor eficienciade remocin del 2,4-D (>95%) en comparacin con el reac-tor de suelos activados sulfato-reductor (RSA-SR) que tuvo25% de remocin, en 14 das de tratamiento. Sin embargo,la velocidad de remocin especfica del RSA-SR fue 4 vecesmayor que en el RSA-A. El efecto de la sacarosa en la remo-cin del 2,4-D dependi del aceptor de electrones utiliza -do: la remocin aerobia no se vio afectada por la presenciade sacarosa, sin embargo en el RSA-SR increment signifi-cativamente. Los microorganismos degradadores de 2,4 -Destuvieron presentes en los reactores durante el tratamientoen el orden de Log UFC de 6 a 8 en el RSA-A, y Log UFC 5a 7 en el RSA-SR. Slo en el RSA-SR se detectaron metabo-litos producto de la transformacin del 2,4 -D como el 2,4-diclorofenol, 4clorofenol, y fenol. 38

Factibilidad de reactores de suelos activados para labiorrestauracin de suelos pesados

Rev Latinoam Microbiol 2006; 48 (2): 179-187 184 Ferrera-Cerrato et al Procesos de biorremediacin de suelo y agua contaminados por hidrocarburos del petrleo e d g i r a p h c i c . o m SUSTRADODE-M.E.D.I.G.R.A.P.H.I.C:ROP ODAROBALE FDPVCEDAS, CIDEMIHPARGA R A P ACIDMOIBARUTARETIL:CIHPARGIDEM La ubicuidad de las microalgas en aguas residuales mu -nicipales, agropecuarias e industriales, as como su papelen el suplemento de oxgeno fotosinttico para los micro-o r g a n i s m o s h e t e r t r o f o s q u e d e g r a d a n l o s r e s i d u o s , d i o origen primero, a las lagunas algales de oxidacin y esta-bilizacin y despus, al desarrollo del concepto de lagunaalgal de alta tasa (HRAP, por sus siglas en ingls) propues-to por Oswald y su grupo en la Universidad de Californiae n B e r k e l e y , p a r a e l t r a t a m i e n t o d e d e s e c h o s o r g n i c o s , con la produccin de algas para alimentacin animal. 26-28 La aplicacin del concepto de HRAP se generaliz en losa os setentas en pases como Israel, India, Tailandia y pos -teriormente, fue retomada en los Estados Unidos de Nor-teamrica. Las lagunas se utilizaron por primera vez parae v i t a r q u e l a s a g u a s r e s i d u a l e s i n v a d i e r a n l u g a r e s n o d e seados. El papel de las algas en el tratamiento de aguas re-siduales empez a investigarse en Texas y California des -p u s d e l a S e g u n d a G u e r r a M u n d i a l . L a e c o n o m a d e l o s sistemas HRAP pareca muy prometedora, porque los nu-trientes y la fuente de carbono eran proporcionados por lasaguas residuales, mientras que los gastos de construccin y o p e r a c i n del sistema, se compensaban con los benefi -cios del tratamiento d e l a s a g u a s y s u r e c u p e r a c i n , a d e - ms de la produccin de biomasa.L a s i n v e s t i g a c i o n e s i n i c i a d a s e n 1 9 6 8 e n l a U n i v e r s i - d a d H e b r e a d e J e r u s a l n f u e r o n c o n t i n u a d a s e n e l T e c h - nion de Haifa desde 1970 y constituyen uno de los traba - jos ms extensos sobre el tratamiento de aguas residualesde tipo municipal en lagunas de alta tasa. 45-47

En ellos, sei n c l u y e r o n t a n t o e s t u d i o s d e l a b o r a t o r i o c o m o e n i n t e m perie, con operacin continua en lagunas de diferente ta -mao, para el tratamiento de desechos animales, desechoslcteos y desechos industriales nitrogenados. 46 En relacin con los procesos que utilizan desechos ani -males se pueden distinguir dos tipos de enfoque, uno queconsiste en tratar los efluentes de las explotaciones pecua-rias intensivas en lagunas de alta tasa, controlando las es-pecies de algas dominantes. Otro consiste en cultivar de-terminadas especies de algas en estanqu es fertilizados condesechos animales, ya sea frescos o despus de haber sido d i g e r i d o s a e r o b i a - o a n a e r o b i a m e n t e . D e n t r o d e l p r i m e r enfoque destaca el tratamiento terciario de residuales por-c i n o s , e l c u a l n o o b s t a n t e q u e s e h a v e n i d o e s t u d i a n d o desde la dca da de los aos 70s, contina vigente debidoal creciente consumo de carne de cerdo con el consecuen -t e aumento de los desechos generados por esta actividadpecuaria. 5,13 O t r o s e s t u d i o s h a n u t i l i z a d o d i f e r e n t e s r e s i - duos animales, as como clulas inmovilizadas en diferen-tes soportes para eliminar nitrgeno y fsforo de residua-les agropecuarios. 6,11,12,21,23 Las microalgas ms utilizadas en dichos estudios perte-n e c e n a l o s gneros Chlorella y Scenedesmus , a u n q u e tambin se reporta el uso de Nannochloris sp., as como dec i a n o b a c t e r i a s f i l a m e n t o s a s Fischerella , Phormidium y Spirulina . L o s e s t u d i o s a n i v e l p i l o t o s o b r e e l b i o t r a t a - miento de residuales agropecuarios se han hecho casi ex -c l u s i v a m e n t e e n l a g u n a s H R A P , 45,55 e n t a n t o q u e a n i v e l laboratorio se emplean biorreactores de diversos diseos,e n t r e l o s q u e s e e n c u e n t r a n l o s c i l n d r i c o s , 41 t r i a n g u l a - res 18 y los de tipo carrusel. 6,7 El Grupo de Biotecnologa de Microalgas (CINVES -TAV) ha tenido algunas contribuciones relacionadas con eltratamiento terciario de aguas residuales porcinas, en losque ha explotado el potencial de las cianobacterias Phormi-dium sp. y Spirulina

maxima . Previo a su utilizacin, los re-siduales porcinos fueron sometidos a procesos de estabiliza-cin aerobia y digestin an aerobia. Para el cultivo de los organismos se emplearon reactores prototipo, modelo carru-sel de 30 L de capacidad total, fabricados en fibra de vidrio.Los resultados obtenidos indicaron que el crecimiento delas cianobacterias disminuy la demanda qumica de oxge-no (DQO) de los residuales dando como resultado un efluen-te terciario cuya calidad hace posible su vertimiento a cuer-pos de agua o su utilizacin en actividades de regado y delimpieza. Para Phormidium sp., los mejores resultados de re-mocin de nutrientes se obtuvieron utilizando residualanaerobio diluido al 25% y residual aerobio diluido al 50%y resultaron superiores (~ 30%) en cultivo por lote que en lote cclico. En tanto que el mayor crecimiento de Spirulinamaxima se obtuvo en residual aerobio diluido al 50% convalores promedio de remocin en cultivo por lote similaresa los de Phormidium sp.Algunos autores han propuesto un sistema integral a ni -v e l i n d u s t r i a l para el tratamiento terciario de aguas resi -duales utilizando m i c r o a l g a s , d o n d e l a b i o m a s a o b t e n i d a sirva como alimento de peces. 9 En los ltimos 10 aos, seh a v e n i d o i n v e s t i g a n d o l a c a p a c i d a d d e l a s m i c r o a l g a s para biotransformar y biodegradar contaminantes orgni -cos como hidrocarburos, plaguicidas, etc., que resultan dealta peligrosidad para los seres vivos. 22 Los contaminantesorgnicos en el medio acutico son biodegradados por di-versos microorganismos, incluyendo algas, las cuales handemostrado que son capaces de biotransformar y biodegra-d a r c o n t a m i n a n t e s aromticos comnmente encontrados El papel de las microalgas en la biorremediacin de aguasc o n t a m i n a d a s

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2006; 48 (2): 179-187 185 e d g i r a p h c i c . o m en aguas naturales y residuales. 43 Las microalgas y ciano-b a c t e r i a s p r o v e e n c a r b o n o r e d u c i d o y n i t r g e n o a l a m i - crobiota presente en los ecosistemas acuticos, lo que in-c r e m e n t a e l p o t e n c i a l d e d e g r a d a c i n y e l i m i n a c i n d e contaminantes. En adicin, ciertas algas, cianobacterias yb a c t e r i a s f o t o s i n t t i c a s s o n t i l e s c o m o i n d i c a d o r e s d e contaminacin ambiental y por lo tanto, tienen aplicacinen pruebas de toxicidad. 43 La utilizacin de organismos fotosintticos para la oxida-cin de compuestos orgnicos incluyendo los HPA, ha sidodemostrada. Microalgas como Prototheca zopfii , Selenastrumcapricornutum , Scenedesmus acutus y Ankistrodesmusbraunii , Chlamydomonas ulvaensis , Chlorella pyrenoidosa y Scenedesmus brasiliensis , el fitoflagelado Euglena gracilis y las cianobacterias Anabaena cylindrica , P h o r m i d i u m foveolarum , Oscillatoria sp. (cepa JCM) y Agmenellum qua-druplicatum PR-6, han mostrado ser eficientes para degradardiversos compuestos orgnicos incluyendo derivados del pe-trleo y HPA. 8,14,24,35,57,58 Respecto al problema de la contaminacin por HPA, elGrupo de Biotecnologa de Microalgas (CINVESTAV) tie -ne experiencias relacionadas con la capacidad de la ciano -b a c t e r i a Spirulina maxima para remover HPA utilizandofenantreno como modelo, ya que es un compuesto alta-mente txico para los organismos acuticos. C u a n d o l a concentracin de fenantreno fue de 100 ppm, se logr unaremocin de 4.72% a las 72 horas de exposicin, mientr asq u e a 2 0 0 ppm la remocin fue de 4.34% en el mismotiempo de incubacin. La presencia del contaminante noafect de manera directa el

c o n t e n i d o d e p r o t e n a n i e l crecimiento de la cianobacteria, no obstante, la clorofila a result ser un factor de respuesta importante en el compor-tamiento del cultivo expuesto a fenantreno.Las tendencias de investigacin sobre biorremediacind e a g u a s c o n t a m i n a d a s c o n h i d r o c a r b u r o s u t i l i z a n d o m i - croalgas y cianobacterias, se enfocan principalmente a: i)aislamiento in situ de microalgas degradadoras, ii) uso de p i g m e n t o s d e m i c r o a l g a s c o m o b i o m a r c a d o r e s d e c o n t a - minacin, iii) anlisis de las enzimas involucradas en pro -cesos de remocin de contaminantes, y iv) diseo de reac-t o r e s p a r a e l t r a t a m i e n t o d e a g u a s c o n t a m i n a d a s c o n hidrocarburos. Actualmente existe escasa aportacin sobre e l d i s e o d e e q u i p o p a r a r e m o v e r c o m p u e s t o s o r g n i c o s de aguas residuales industriales en base a condiciones de c u l t i v o a p r o p i a d a s p a r a e l c r e c i m i e n t o y a c t i v i d a d d e l a s microalgas.CONCLUSIONESPara lograr la limpieza de un suelo contaminado con re-siduos de perforacin con alto contenido de hidrocarburos r e c a l c i t r a n t e s d e l p e t r l e o ( s u p e r i o r e s a 50,000 mg/kg -1 ),a l t o c o n t e n i d o d e m a t e r i a o r g n i c a y a r c i l l a s , u s a n d o lametodologa de composteo en biopilas , se deben realizarlos estudios de tratabilidad necesarios para seleccionaraquellas v a r i a b l e s s i g n i f i c a t i v a s c o m o s o n e l t i p o , c a n t i - dad de residuo agroindustrial, cantidad de nutrientes y unvalor ptimo de humedad. Lo anterior permitir estimulary mantene r la actividad microbiana con capacidad de de-gradacin y por tanto, la remocin de hidrocarburos.D u r a n t e l a f i t o r r e m e d i a c i n d e s u e l o s c o n t a m i n a d o s con hidrocarburos del petrleo, los microorganismos aso ciados a la rizsfera y aqullos denominados como si m-biticos o b l i g a d o s , r e p r e s e n t a n u n a a l t e r n a t i v a b i o l g i c a para incrementar el potencial de remediacin de los com -puestos contaminantes. El aislamiento y seleccin, y pos-t e r i o r i n o c u l a c i n d e l o s e c o t i p o s m i c r o b i a n o s m e j o r adaptados (bioaumentacin) a con taminantes orgnicos esu n a e x c e l e n t e a l t e r n a t i v a c o n b a j o c o s t o y n u l o s e f e c t o s ambientales. El entendimiento de la aplicacin de fuentesinorgnicas u orgnicas de nutrimentos en la fitorremedia-cin (bioestimulacin), requiere de mayor estudio para po-der crear protocolos de manejo que sean compatibles conaquellos protocolos de inoculacin en plantas, con la fina -lidad de incrementar la eficiencia de la degradacin de hi-drocarburos del petrleo en el suelo.Con respecto a los RSA, estos sistemas constituyen unaalternativa recomendable para la biorrestauracin de sue -l o s c o n t a m i n a d o s c o n a g r o q u m i c o s y o t r o s c o m p u e s t o s que presenten adsorcin irreversible sobre la matriz slida o c u a n d o l o s s u e l o s t i e n e n altos contenidos de arcilla ymateria orgnica (suelos pes ados) impidiendo la aplica-cin de tcnicas in situ o c u a n d o l a r e s t a u r a c i n d e b e efectuarse en tiempos cortos.E n e l c a s o d e a g u a s c o n t a m i n a d a s , e l b i o t r a t a m i e n t o con microalgas constituye

una realidad y es til como tra -tamiento terciario de aguas residuales. En los estudios queutilizan lagunas (HARP), se observa en general una depen dencia entre los tiempos de retencin y la remocin de nu-trientes, adems de una tendencia al aprovechamiento delas aguas tratadas y de la biomasa producida, es decir, unag e s t i n i n t e g r a l d e l o s r e s i d u o s . N o o b s t a n t e , e n i n v e s t i - gaciones recientes se concluy que el biotratamiento conmicroalgas a escala piloto no es funcional, debido a que elflujo de influente que se utiliza es muy bajo, lo que limi -t a r a s u aplicacin industrial. Asimismo, se observa unatendencia a utilizar agua residual diluida, lo que generaproblemas con la r e p r o d u c i b i l i d a d y e s c a l a m i e n t o d e l o s procesos a base de microalgas. Por lo anterior, es necesariod e s t a c a r l a i m p o r t a n c i a d e l l e v a r a c a b o e s t u d i o s q u e d e - muestren la aplicacin del biotratamiento con microalgasa n i v e l i n d u s t r i a l y q u e i n v o l u c r e n u n a g e s t i n s u s t e n t a ble de residuos, garantizando la seguridad de los subpro -ductos.

La biorremediacin es un proceso estratgico de la biologa, que se realiza mediante la utilizacin de organismos vivos para reparar ambientes en estado de contaminacin. En el caso de que las sustancias contaminantes se degraden en forma completa, entonces se produce una mineralizacin. En algunos casos las sustancias son transformadas y no degradadas, lo que se conocecomo proceso de biotransformacin.

Este ltimo conlleva serios riesgos, ya que la nueva sustancia formada puede ser tan nociva como la que se intentaba degradar. Pero en el caso de que la

transforme positivamente, entonces lograr que se modifiquen sustancias txicas en otras de menor toxicidad, como en el caso de algunos metales pesados como el mercurio, el arsenio, el zinc o el cobre. Si las sustancias no logran ser degradadas se las conoce como recalcitrantes y tienen la particularidad de acumularse durante largos perodos de tiempo en el ambiente, especialmente si resisten a los rayos ultravioletas. Los seres vivos que actan en la biorremediacin pueden ser componentes celulares, bacterias, hongos, enzimas libres y otro tipo de seres vivos como los nemtodos. En el caso de las bacterias, stas tienen un alto poder de degradacin y pueden degradar cualquier tipo de materia orgnica. Las bacterias tienen la capacidad de combatir contaminantes en ecosistemas donde hay oxgenos, y es cuando se denominan aerbicas, pero en caso de que lo hagan en ambientes donde no hay presencia de oxgeno, entonces se llaman bacterias anaerbicas, dado a que tiene el poder de respirar otros componentes distintos del oxgeno como lo son el nitrato, el hierro o el selenio, entre otros.

Los primeros aportes de la historia en la biorremediacin fueron conocidos como compostaje, el cual constitua una forma precaria de biorremediacin, en la que los derivados de los residuos domiciliarios, orgnicos, inorgnicos e industriales, eran recolectados en contenedores para su posterior biodegradacin mediante microorganismos. Un tipo de biorremediacin frecuente es cuando dentro de un hbitat determinado o un ecosistema sucede un hecho que provoca un desequilibrio. Uno de los ejemplos clsicos es la tala de rboles, ya que el hecho hace posible que se genere un incremento considerable de materia orgnica en el suelo. Entonces ocurre que los factores fsicos y biticos intentan reparar los daos y aumentan los organismos saprfitos, los que causan una mineralizacin abundante de la materia que se encuentra en el suelo. Algunas tcticas que se practican para colaborar con la remediacin de un ecosistema consisten en aadir elementos nutrientes para estimular a las comunidades que pueblan la naturaleza y de esta manera se aumente su actividad. Otra estrategia, en la que es posible aplicar nuevas tcnicas de ingeniera gentica para mejorar la eficacia de la biorremediacin, es meter microorganismos exgenos en el interior del ecosistema o hbitat a manera de biorremediacin. Las sustancias contaminantes que pueden degradarse son aquellas que son sensibles a eliminarse a travs de la biorremediacin. Los componentes orgnicos pueden ser eliminados o degradados totalmente del ecosistema, como es el caso del tolueno o el fenol.

La transformacin gentica de las bacterias usadas para la biorremediacin es estudiada para mejorar las metodologas implementadas en dichos procesos de biorremediacin.

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